LP 10.

Diagnosticul infectiilor produse de levuri si de fungii filamentosi

1. Diagnosticul de laborator in candidoza

Agentul etiologic: Candida spp.

Diagnostic direct:
Produse patologice: scuame din leziuni cutanate, raclat unghial, exsudate de la nivelul
mucoaselor, sputa, LCR, urină, sange, materii fecale.
Transportul probei: in maximum o ora de la recoltare.
Examen microscopic:
- preparat umed, lamă-lamelă (materii fecale, urină);
- preparat lama-lamela după clarificare cu solutie de KOH 20% (scuame din leziuni
cutanate sau unghiale);
- după colorare (frotiu, preparate histologice).
Se pot observa:
Levuri rotunde, cu diametrul de 2-6 μm, înmugurite
Pseudofilamente (excepţie C. glabrata)
Cultivare:
- cultivă pe mediul Sabouraud (cu/fara antibiotice), formând colonii albicioase, după 24-48 ore.
- temperatura de cultivare este de 26ºC sau 37ºC după localizarea superficială sau profundă a
infecţiei.

Candida albicans- colonii albe, cremoase, mari, cu suprafaţa mată

(Sursa: https://www.cdc.gov/fungal/diseases/candidiasis/invasive/diagnosis.html)
Identificare
- Se face pe baza caracterelor de cultura, microscopice, biochimice si genetice.

1
- Testul de filamentare (germ-tube test) este pozitiv pentru Candida albicans si Candida
dubliniensis.
Tehnica:
- ca medii se utilizeaza serul sanguin de cal, serul sanguin uman;
- se prepara suspensia levurica in ser fizziologic, densitatea acesteia ajustandu-se la 0,5 Mc
Farland (cca.105-106 celule /ml) ;
- in fiole cu capacitatea de 2 ml se pun in contact 0,5 ml suspensie levurica si 0,5 ml ser
sanguin de cal;
- fiolele se mentin apoi in baia de termostatare la 360C timp de 2h.
- ca martor al filamentarii, se utilizeaza de fiecare data o tulpina de Candida albicans;
- si alte levuri pot produce formatiuni similare de tipul pseudofilamentelor, insa ele se
diferentiaza de adevaratii tubi germinativi prin existenta unei strangulari la locul de
emergenta din blastospor.

(Sursa: https://quizlet.com/166474535/mycology-yeast-flash-cards/)

Candida albicans
Preparat nativ , 40x
Blastospori cu filamente
(Sursa: https://microbiologie.umftgm.ro/atlas/micologie/levuri/calbicans.php)

2
 Candida albicans
Colorație Gram, 100x
Blastospori Gram pozitivi
https://microbiologie.umftgm.ro/atlas/micologie/levuri/calbicans.php
- Testul ureazei negativ
- Caractere de cultură: pentru Candida albicans - colonii „S”, albe, cremoase, mari, cu suprafaţa
mată
- Izolarea pe medii cu substrat cromogen al unei enzime specifice pentru Candida albicans
- Detectarea antigenelor in infectii cu evolutie rapida (latexaglutinare)
Diagnostic indirect :
-identificarea anticorpilor serici (ELISA, IFI), in localizarile profunde
Antifungigrama:
- permite stabilirea sensibilităţii la antifungice: Fluconazol, Itraconazol, Amfotericina B,
Nistatina, Flucitozina, Ketoconazol, Miconazol, Econazol

2. Diagnosticul infectiilor produse de fungii filamentosi

Diagnosticul de laborator in aspergiloza

Agentul etiologic: Aspergillus spp.

Diagnostic direct:
Produse patologice: lavaj bronho-alveolar, LCR, fragmente de biopsie, sange, prelevate
superficiale- cutanate, sinusale, conjunctivale, unghiale, auriculare.
Transportul probei: se realizeaza imediat dupa recoltare.

3
Examen microscopic:
-direct- cu sau fara colorare (coloratie Giemsa), evidentiaza fragmente hifale, fine (3-12μm
diametru) regulate, septate, ramificate dicotomic in unghi ascutit 45 0.
-in hemoculturi filamentele speciilor de Aspergillus se intalnesc doar exceptional
-in prelevatele profunde se identifica doar fragmente hifale septate si ramificate (prezenta
conidiilor = contaminare)
-in prelevatele superficiale se pot intalni si formatiuni de fructificare cu conidii (capete
aspergilare)
Cultivare:
Aspergillus se dezvoltă pe mediu Sabouraud cu gentamicină sau cloramfenicol
Apariţia rapidă, în 2 – 3 zile, de colonii caracteristice, permite diagnosticul de gen.

Aspergillus fumigatus
(Sursa: https://mycology.adelaide.edu.au/descriptions/hyphomycetes/aspergillus/)

Incubare: 370C pentru prelevate profunde, 300C pentru prelevate superficiale

Aspergillus fumigatus: colonie albastra-verzui inchis, uneori pigment rosu , poate creste la 450C
Aspergillus flavus: colonie galben-verzuie, aspect granular
Aspergillus niger: suprafata coloniei neagra (datorita capetelor aspergilare), aspect granular
Identificarea
-identificarea speciei se face pe baza caracterelor microscopice si de cultura
-evidentierea antigenelor aspergilare circulante la pacientii cu risc crescut
Diagnostic indirect:
-detectarea anticorpilor specifici (ELISA, teste de imunodifuzie)