Aurelia Coroian

Cristian Ovidiu Coroian

BIVOLIA SURS IMPORTANT DE LAPTE

Editura Bioflux, Cluj-Napoca 2009 ISBN 978-606-92029-8-2

Autorii: Aurelia Coroian Cristian Ovidiu Coroian

Refereni tiinifici:

Prof. dr. ing. Gheorghe Murean Prof. dr. ing. Vioara Mirean

Director editur: Cercet. dr. IOAN VALENTIN PETRESCU-MAG Consilier editorial: Lector dr. RUXANDRA MLINA PETRESCU-MAG

ISBN 978-606-92029-8-2 Editura Bioflux,Cluj-Napoca 2009

CUPRINS
INTRODUCERE CAPITOLUL 1 EXPLOATAREA BIVOLIELOR PENTRU PRODUCIA DE LAPTE 1.1EXPLOATAREA BIVOLIELOR PENTRU PRODUCIA DE LAPTE LA FERMA TNP MESENDORF 1.1.1 HRNIREA BIVOLIELOR 1.1.2 TEHNOLOGIA DE MULS A BIVOLIELOR 1.1.3 TEHNOLOGIA DE NTREINERE 1.2 CRETEREA BUBALINELOR PENTRU PRODUCIA DE LAPTE N JUDEUL SLAJ 1.2.1 SCURT ISTORIC I AEZARE 1.2.2 NTREINEREA BIVOLIELOR CAPITOLUL 2 CALITATEA LAPTELUI I SIGURANA ALIMENTAR 2.1 ASPECTE GENERALE 2.1.1 IDENTIFICAREA RISCURILOR 2.2 LEGISLAIA EUROPEAN I INTERNAIONAL CU PRIVIRE LA SIGURANA ALIMENTAR CAPITOLUL 3 CERCETRI PRIVIND VALOAREA PARAMETRILOR FIZICO-CHIMICI AI LAPTELUI DE BIVOLI 32 22 27 28 17 19 22 6 9 11 17 6 5 6

3.1 ASPECTE GENERALE 3.1.1 NSUIRILE FIZICO-CHIMICE ALE LAPTELUI DE BIVOLI LA FERMA TNP MESENDORF 3.1.1.1 REZULTATE I DISCUII CAPITOLUL 4 CERCETRI PRIVIND PARAMETRII MICROBIOLOGICI AI LAPTELUI DE BIVOLI 4.1 ASPECTE GENERALE 4.2.1 DETERMINAREA NUMRULUI DE CELULE SOMATICE DIN LAPTELE DE BIVOLI 4.2.2 DETERMINAREA NUMRULUI TOTAL DE GERMENI 4.2.3 DETERMINAREA NUMRULUI TOTAL DE DROJDII I MUCEGAIURI 4.2.4 DETERMINAREA PREZENEI I A NUMRULUI DE STAFILOCOCI COAGULAZO POZITIVI 4.2.5 IZOLAREA I IDENTIFICAREA SALMONELLELOR 4.2.6 EVIDENIEREA BACTERIILOR COLIFORME I ESCHERICHIEI COLI 4.2.6.1 MATERIAL I METOD 4.2.6.2 MEDII DE CULTUR, REACTIVI I SOLUII DE DILUARE BIBLIOGRAFIE ANEXE

32 33

33 62

62 63

66 72

73

74 77

77 82

93 101

INTRODUCERE

n economia agricol naional, o importan deosebit o reprezint creterea i exploatarea bubalinelor, domeniu care este i va fi mereu n atenia specialitilor. Potenialul de producie al populaiilor existente variaz foarte mult de la o zon de cretere la alta, este direct influenat de valoarea biologic a animalelor, de programul de ameliorare, de direciile de exploatare i tehnologia de cretere adaptate corespunztor condiiilor social-economice specifice zonei. O retrospectiv asupra numeroaselor specii de animale domestice, relev c fiecare dintre acestea a constituit pentru omenire o surs material vital, cu importan zonal specific diferit, determinat de condiiile istorico-naturale i de particularitile caracteristice evoluiei societii n timp. n consecin, rasele i populaiile existente n prezent n cadrul fiecrei specii de bovine, poart adnc ntiprit amprenta factorilor de mediu i de asemenea, a activitii continue i dirijate a omului (Velea C., 2006). Extinderea bubalinelor n afara ariei de formare a fost determinat de nivelul de dezvoltare social-economic al teritoriilor de referin i de faptul c pn nu demult, bubalinele au fost n general considerate ca o specie care nu este foarte pretenioas fa de condiiile de exploatare. Bubalinele, datorit capacitii de valorificare a diferitelor categorii de furaje pe care alte specii nu le valorific corespunztor.

CAPITOLUL 1

EXPLOATAREA BIVOLIELOR PENTRU PRODUCIA DE LAPTE 1.1 EXPLOATAREA BIVOLIELOR PENTRU PRODUCIA DE LAPTE LA FERMA TNP MESENDORF Tehnologia de exploatare a bivolielor la ferma TNP Mesendorf, care este considerat i atestat ca avnd caracter ecologic, este orientat n direcia produciei de lapte i se au n vedere mbuntirea condiiilor de hrnire, bunstarea animalelor i mbuntirea condiiilor de producere a laptelui prin introducerea mulsului mecanizat. 1.1.1. Hrnirea bivolielor

Hrnirea bivolielor este un factor care are implicaii profunde asupra produciei de lapte. Tehnica de hrnire la ferma TNP Mesendorf este difereniat n funcie de sezon. Baza furajer este asigurat din surse proprii. Ferma TNP Mesendorf are o suprafa agricol total de 682 ha i un efectiv de bivolie aflate n lactaie de 145 de capete. Terenurile ocupate de pajiti prezint caracteristicile zonei submontane i se afl la etajul fagului. Suprafaa de teren ocupat cu pajiti asigur necesarul de nutre verde pentru perioada de var i iarna pentru nutreuri voluminoase. n perioada de stabulaie se folosesc nutreuri conservate din stoc: fn de calitate bun i ovz n cantiti mai reduse. n perioada de punat, nutreul de baz l constituie masa verde de pe pune,

suplimentat cu o cantitate de 3-4 kg ovz/cap/zi n timpul mulsului. La animalele n lactaie se administreaz minerale, magiseau care este un premix organic acceptat ntr-o ferm ecologic. Programul de hrnire este respectat cu strictee datorit faptului c bivoliele sunt animale dificile i orice schimbare poate s conduc la scderi ale produciei de lapte. Velea C., 2006 spune c la ntocmirea raiilor este necesar s avem n vedere i asigurarea unui raport favorabil ntre acizii grai volatili formai n rumen, scop n care raia trebuie s conin ntre 1822% celuloz, aceasta avnd un efect favorabil asupra coninutului laptelui n grsime.

b
Figura 1.1.1 (a, b) Hrnirea bivolielor n sezonul de iarn la ferma TNP Mesendorf

c
Figura 1.1.2 Aspecte privind punatul bivolielor i utilizarea gardului electric

1.1.2 Tehnologia de muls a bivolielor

Sistemul de muls aplicat este cel mecanizat, n sala de muls cu opt capete. La practicarea mulsului se respect normele de igien deoarece i personalul este stimulat din punct de vedere financiar n funcie de calitatea laptelui (numrul de celule somatice i numrul total de germeni). Introducerea mulsului mecanizat a avut manifestri individuale i foarte variabile: bivoliele primipare au fost obinuite uor cu mulsul mecanizat comparativ cu cele multipare la care a fost mai dificil. n cadrul fermei se urmrete creterea produciei de lapte att din punct de vedere calitativ, ct i cantitativ prin calificarea i contiinciozitatea personalului de deservire, i prin perfecionarea funcional a aparatelor de muls deoarece actuala sal de muls o s fie nlocuit cu alta mult mai performant i pentru un numr mai mare de capete, deoarece n prezent datorit numrului mic de capete care pot fi mulse odat, mulsul pentru ntreg efectivul aflat n lactaie dureaz cteva ore. n timpul verii la ferma TNP Mesendorf s-a ncercat utilizarea gardului electric. Acest procedeu a fost dificil la nceput, dar cu timpul aceste probleme au disprut (figura 1.1.2).

Figura 1.1.3 Aspecte privind mulsul mecanic la bivolie

Figura 1.1.4 Sala de muls Mulsul mecanic are la baz urmtoarele principii: pregtirea mulgtorului;

 pregtirea bivoliei pentru muls prin splarea ugerului cu ap cald i tergerea acesteia cu un prosop curat; ataarea paharelor de muls; splarea i dezinfecia instalaiilor;

1.1.3 Tehnologia de ntreinere

ntreinerea

subnelege

ansamblul

de

msuri

tehnico-

organizatorice de adpostire i deservire a materialului biologic de exploatare, n vederea asigurrii condiiilor optime de exteriorizare a potenialului su de producie. Corespunztor condiiilor zonale specifice sistemului de ntreinere a bivolielor de lapte difer n funcie de sezon, respectiv de amenajrile interioare pe care le comport diferitele tipuri de adposturi adoptate (Velea C., 2006).

Figura 1.1.5. a - Padocul de micare b,c - Aspecte privind ntreinerea bivolielor n adposturi nchise

ntreinerea bivolielor n sezonul de iarn la ferma TNP Mesendorf este relizat n adposturi nchise cu ntreinere liber, cu cuete individuale; pentru construcia lor s-a folosit lemnul de mesteacn, care este un material foarte rezistent, flexibil i sigur. Padocurile de micare sunt amplasate lng adpost i permit accesul direct al animalelor i sunt dispuse pe o singur parte a adpostului. ntreinerea bivolielor n sezonul de var este realizat n sistem mixt. Acest sistem este foarte avantajos pentru aceast ferm datorit faptului c pajitea este situat la o distan foarte mic de adposturi. Dup efectuarea mulsului de diminea bivoliele sunt scoase la pune, unde exist ap pentru adpare i mbiere i revin doar seara pentru muls i adpostire. ngrijirea bivolielor ntrunete un complex de msuri tehnicoorganizatorice deosebite, care au implicaii directe asupra sntii i nivelului de producie i care vizeaz ndeosebi regimul de odihn, de micare i de ngrijire corporal (Velea C., 2006). Pentru bivoliele productoare de lapte respectarea regimului de odihn este foarte important pentru a fi posibil derularea normal a proceselor metabolice. Alturi de regimul de odihn este necesar i micarea, care influeneaz derularea normal a proceselor biologice, stimuleaz activitatea sistemului respirator, circulator, funcia de reproducie, precum i dezvoltarea armonioas a musculaturii. Pentru bivoliele ntreinute pe pune n timpul iernii se consider c micarea efectuat este suficient, iar n timpul iernii sunt scoase pe padocul amplasat lng adpost pentru efectuarea micrii zilnice. n sezonul de var datorit temperaturilor ridicate, pe pune sunt locuri unde exist

posibilitatea mbierii, deoarece temperaturile ridicate pot produce scderea produciei de lapte, reducerea apetitului i modificri ale indicilor fiziologici. Ca urmare a particularitilor morfofuncionale ale pielii i a coeficientului mai sczut de toleran fa de cldur a bubalinelor, n sezonul de var i ndeosebi n perioadele mai calde ale acestuia, o msur important o reprezint asigurarea posibilitilor de mbiere sau de duare a bivolielor (Rhoad, Asker, Ragab, Chany citai de Velea C., 2006). Anexele adposturilor sunt: padocuri, magazie, sala de muls, platforma de gunoi, lptrie i silozuri. Grajdurile sunt construite din crmid. Condiiile de microclimat sunt asigurate la parametrii normali. Igiena adpostului este asigurat prin evacuarea dejeciilor zilnic, o dat sau de dou ori pe zi. ntreinerea tineretului se realizeaz n sistem mixt, n timpul zilei pe pune de foarte bun calitate i noaptea n adpost. Acest sistem are unele avantaje: posibilitatea de micare a animalelor, posibilitatea de a sta la soare i n aer curat. Alimentaia cu ap este asigurat la discreie cu ajutorul adptorilor automate. Principala surs de hran pentru tineretul bubalin o reprezint nutreurile voluminoase, iar concentratele sunt asigurate n cantiti mai reduse n funcie de vrsta animalelor. n sezonul de var, regimul de hrnire se realizeaz prin ntreinerea tineretului pe pune, cu posibilitatea de a consuma masa verde la discreie i administrarea de concentrate se face seara, n adpost. Punea este de calitate superioar, supransmnat, cu acces direct la sursa de ap. Trecerea de la sistemul de stabulaie la cel de

punat (sau invers) se relizeaz treptat, pentru a nu influena negativ organismul i produciile animalelor. Avnd n vedere particularitile specifice simbionilor ruminali (a micro i macrofaunei ruminale), n toate cazurile trecerea de la un regim de hrnire la altul sau la schimbarea structurii nutreurilor din raie prin introducerea unor furaje noi, se face cu o perioad obligatorie de acomodare, a crei durat depinde de natura furajului respectiv (Velea C., 2006).

Aprecierea produciei de lapte la bubaline: o importan major n realizarea unui progres n ceea ce privete performana n producie i exploatare o constituie realizarea controlului oficial al produciei. Datorit faptului c numrul total de bivolie cuprinse n controlul oficial al produciei (COP) este foarte redus la ferma luat n studiu, controlul se realizeaz lunar de ctre personalul desemnat acestei aciuni.

Figura 1.1.6 a - Padocul de micare i nsorire pentru tineretul bubalin b, c - ntreinerea tineretului n adposturi nchise n sezonul de iarn

1.2 CRETEREA BUBALINELOR PENTRU PRODUCIA DE LAPTE N JUDEUL SLAJ

1.2.1 Scurt istoric i aezare

Situndu-se n nord-vestul Romniei, la trecerea dintre Carpaii Estici i Munii Apuseni, judeul Slaj este cunoscut din vremuri strvechi ca ara Silvaniei, adic ara Pdurilor, avnd o suprafa de 3850 km i avnd ca vecini la nord judeele Satu-Mare i Maramure, la vest i sud-vest judeul Bihor i la sud-est judetul Cluj.

Municipiul Zalu, care se gsete n centrul judeului este reedina administrativ a judeului. Aceasta este una dintre primele asezri din Transilvania menionat n documente. n jude se gsesc 55 comune i 281 sate. Judeul are o populaie de 262.873 locuitori, dintre care 70932 locuitori n Zalu.

Figura 1.1.7 Judeul Slaj. Comunele de unde au fost prelevate probele de lapte de bivoli Din punct de vedere geografic, judeul Slaj este o zon cu dealuri i vi de-a lungul rurilor Alma, Agrij, Some, Slaj, Crasna i Barcu. Munii sunt reprezentai la sud-vest de dou ramificaii ale Munilor Apuseni: Vrfurile Mese i Plopi. Depresiunile ocup o parte nsemnat din teritoriul judeului, zone agricole importante cu numeroase aezri. Clima judeului Slaj este sub influena maselor de aer de la est, fiind o clim continental. Temperatura medie anual

variaz ntre 6C i 9C depinznd de zon, cea mai ridicat valoare medie a temperaturii nregistrndu-se n jude n luna iulie, variind ntre 15C i 20C. Cantitatea de precipitaii scade spre vest, unde se nregistreaz 700-800 ml/mp.

1.2.2 ntreinerea bivolielor

Adposturile pentru bubaline sunt de capacitate mic, n medie pentru 3-4 capete de vrste diferite. Caracteristicile constructive sunt diferite n funcie de posibilitile de furajare i adpare. Evacuarea dejeciilor se realizeaz manual. n asemenea condiii posibilitile de meninere a cerinelor igienice sunt reduse, iar ncrctura aerului cu microorganisme este mare datorit faptului c se execut operaiuni de furajare, aternut, curenie ntr-un spaiu foarte redus. Microclimatul n adposturi este influenat de factori fizici, chimici i biologici. Factorii fizici au cea mai mare pondere i impun reacii de adaptare din partea animalelor, cu consecine asupra nivelului produciilor i strii de sntate a bubalinelor. Att producia cantitativ ct i calitatea igienic a laptelui de bivoli este influenat de diferii factori printre care o mare importan o au condiiile de adpostire i condiiile n care se realizeaz mulsul. Parametrii de microclimat din adposturile bivolielor construite n gospodriile populaiei nu asigur ntotdeauna valorile prevzute pentru realizarea confortului termic i condiiilor de igien. n situaiile

cnd izolarea termic a adposturilor este deficitar n perioadele reci ale anului, se creeaz un disconfort termic. Umiditatea aerului i viteza de circulaie intensific transferul de cldur n ambiane reci. n adposturile tradiionale se produc pierderi de cldur datorit unor structuri constructive neetane prin transmisie termic, ventilaie i evaporare tehnologic. n unele situaii se pot atinge valori ce depesc confortul termic n cazul disproporiei dintre volumul de cldur emis i pierderile din adposturi. Prin adaptarea la aceste efecte bubalinele i-au creat reacii metabolice exotermice. Curenii de aer se formeaz ca urmare a diferenelor de temperatur i presiune ntre diferite zone ale adpostului ce au tendina de egalizare prin formarea unor micri de aer verticale, orizontale sau turbulente. n ambiane reci, datorit influenrii barierei izolatoare determin deplasarea temperaturii critice inferioare spre un nivel nalt i declaneaz mecanismele de termoreglare. Sistemul de muls aplicat este cel manual i se respect mai mult sau mai puin tehnica corect. Igiena corporal este prevzut s se realizeze zilnic, dar nu se respect ntotdeauna ca i programul de micare care este insuficient pe timpul iernii. n perioada iernii, cnd bivoliele sunt ntreinute n stabulaie, sunt prezente i unele deficiene n igiena animalelor i a microclimatului adposturilor. ntreinerea bivolielor se realizeaz n funcie de sezon: n perioada de stabulaie se realizeaz ntreinerea legat, iar n sezonul de

punat se realizeaz ntreinerea liber. Hrnirea bivolielor se realizeaz difereniat n funcie de sezon. n perioada de stabulaie se utilizeaz nutreuri diferite: fn, paie, siloz de porumb, dar i o cantitate redus de nutre concentrat. n timpul punatului, nutreul de baz este masa verde de pe pune, suplimentat cu puine concentrate.

Figura 1.1.8 Scldatul bivolielor - Bodia, judeul Slaj

CAPITOLUL 2 CALITATEA LAPTELUI I SIGURANA ALIMENTAR

2.1 ASPECTE GENERALE

n cadrul economiei naionale industria alimentar ndeplinete funcia de a valorifica produsele alimentare, fabricnd produse, care s respecte unul dintre obiectivele strategice fundamentale ale dezvoltrii economice i sociale - securitatea alimentar a populaiei. Noua abordare, denumit sigurana alimentelor, se refer la msurile de protecie a alimentelor fa de contaminri microbiene, chimice i fizice care ar putea s apar de-a lungul ntregului lan alimentar i care ar pune n pericol sntatea consumatorilor. Cu alte cuvinte, msurile de siguran alimentar protejeaz calitatea

produselor alimentare. Acest obiectiv major al industriei alimentare poate fi obinut numai prin asigurarea i mbuntirea continu a calitii produciei. Urmrirea i realizarea unui astfel de obiectiv n cadrul unor uniti de dimensiuni mari, cu o tehnologie adaptat unui sistem de organizare a nceput s ridice probleme nc din anul 1990. Unitile n cauz nu i pot menine avantajul concurenial pe pia, dect numai printr-un management competent, care s antreneze resursele umane ntr-un proces de flexibilizare i diversificare a produciei, realizate la parametri calitativi care s satisfac exigenele consumatorilor.

Orice intreprindere, pentru a putea face fa cerinelor pieei, trebuie s ofere o garanie a calitii i indiferent de dimensiune sau domeniu, i poate asigura un viitor sigur, numai prin introducerea unui sistem de management al calitii, ndreptat spre satisfacerea propriilor nevoi. Calitatea produsului alimentar este totdeauna perceput prin intermediul obiectivelor concrete pe care acesta trebuie s le ating, aa cum au fost menionate de (Multon i col., 1985). Sistemul de management a siguranei recunoscut pe plan internaional, care i-a dovedit eficiena n toate sectoarele industriei alimentare i pe tot circuitul alimentar este sistemul H.A.C.C.P.Hazard Analysis Critical Control Points. Producerea, ambalarea, transportul, depozitarea i comercializarea produselor alimentare reprezint operaii cu un grad de risc pentru santatea fiecrui consumator. Toate organizaiile care activeaz n aceste sectoare ce intr n contact direct cu sntatea consumatorilor trebuie s respecte anumite cerine, multe dintre aceastea fiind impuse de legislaia n vigoare. Integrarea rii noastre n Uniunea European a impus i mai multe cerine asupra organizaiilor din sectorul alimentar. n prezent, toate acestea sunt obligate s i implementeze un sistem de siguran a alimentului - H.A.C.C.P. H.A.C.C.P. (Hazard Analysis Critical Control Point) este o abordare sistematic, recunoscut la nivel internaional, ce dovedete c riscurile legate de sigurana produselor alimentare sunt identificate, evaluate i inute sub control. Dovada implementrii acestui sistem ntr-

o organizaie este certificarea acestuia. Exist o serie de standarde n funcie de care se face aceast certificare. H.A.C.C.P. poate fi utilizat n toate segmentele industriei alimentare i poate fi adoptat pentru orice produs individual sau linie de procesare. Acest sistem prezint avantajul controlului preventiv a siguranei alimentului n fabric ncepnd de la materie prim pn la produs finit. Este o metod tiinific, sistematic, interactiv de identificare, evaluare i control a riscurilor asociate produselor alimentare. Strategia H.A.C.C.P. este axat pe instruirea unui sistem de prevenire, eliminare sau reducere la niveluri apreciabile a riscurilor poteniale care afecteaz sigurana alimentelor. Conceptele care stau la baza sistemului H.A.C.C.P. i au originea n cercetrile de la nceputul anului 1960, efectuate de N.A.S.A., compania Pillsbury n colaborare cu laboratoarele Natick ale Armatei S.U.A, pentru obinerea de alimente caracterizate prin zero defecte destinate consumului n cadrul misiunilor spaiale. Astfel, a fost elaborat i ulterior perfecionat o metod foarte valoroas, care a schimbat modul de abordare a strategiei calitii i siguranei n domeniul produciei alimentare, realiznd trecerea de la controlul post-proces la aplicarea metodelor preventive. Recunoscut la ora actual, drept cea mai eficient modalitate de asigurare a salubritii produselor alimentare, majoritatea metoda H.A.C.C.P este promovat de internaionale (FAO, OMS, Codex

organismelor

Alimentarius), regionale (Consiliul U.E.) i naionale. Membrii Comunitii Europene au adoptat sistemul calitii, alturi de rile din America de Nord i o parte din rile din Asia.

Numeroase guverne i companii aloc n prezent resurse considerabile necesare dezvoltrii infrastructurilor pentru a fi n conformitate cu aceste standarde. n cazul rii noastre, obinerea certificrii sistemului calitii de ctre intreprinderile procesatoare reprezint un paaport care faciliteaz intrarea cu produse pe piaa Uniunii Europene. Pentru realizarea acestui deziderat trebuie s se in cont de: nivelul tehnologic existent i al culturii industriale i de specificul pieei. n concluzie, asigurarea calitii produselor sau serviciilor reprezint factorul principal pentru obinerea unor succese n competiie. Punctele critice de control pot fi localizate n orice etap a procesului de fabricaie n care se impune i este posibil inerea sub control a microorganismelor periculoase sau a riscurilor de alt natur. Ca exemple tipice de puncte critice de control se pot meniona: stabilirea reetei de fabricaie bazat pe considerente igienico-sanitare, tratamente termice, refrigerarea, congelarea, igienizarea utilajelor i spaiilor de producie. O limit critic este definit ca tolerana admis pentru un anumit parametru al punctului critic de control. Pentru un punct critic de control pot exista una sau mai multe limite critice. Dac oricare dintre aceste limite a fost depit, nseam c punctul critic respectiv a ieit de sub control i inocuitatea produsului finit este n pericol. Criteriile cele mai frecvent utilizate ca limite critice sunt valorile temperaturii, timpului, umiditii, ph-ului, aciditii. n cazul unei analize a riscurilor poteniale, se iau n consideraie cele 3 tipuri de riscuri (biologice, fizice, chimice) (Mihaiu M. i col. 1998). n S.U.A. se consider c recepia laptelui reprezint un punct de control economic, pentru conformitate cu specificaiile, deoarece

exist o serie de norme legislative care reglementeaz compoziia laptelui. n perioada pe care o parcurgem, consumatorii devin din ce n ce mai contieni de aspectele igienice ale vieii i alimentaiei lor i de aceea a devenit absolut obligatoriu ca toi productorii de alimente s respecte att exigenele tehnologice, ct i pe cele de ordin igienicosanitar. H.A.C.C.P. implic urmtoarele: descrierea produsului, identificarea utilizrii sale ateptate, descrierea procedeului, operaiilor de producie, de fabricaie, de distribuie) i patru componente. Aceste componente sunt urmtoarele: evaluarea riscurilor; definirea punctelor critice (etape, operaii, factori) i determinrile pentru prevenirea, eliminarea sau reducerea fiecrui risc (punctele critice - CCP); asigurarea msurilor necesare fiecrui CCP (criteriile de execuie sau limitele critice, interaciuni n lucru, supravegherea, nregistrarea i aciunile colective); verificarea (determinarea eficacitii sistemului aplicat) (Aran C.N., 2007). innd cont de cadrul general recomandat de organismele internaionale prin Regulamentul U.E. nr. 178/2002 i Reglementarea 852/2004 a Parlamentului European i a Consiliului U.E. privind igiena produselor alimentare care urmresc s asigure un sistem unitar de urmrire a calitii produselor alimentare rednd ncrederea

consumatorului n sigurana produselor alimentare, la nivelul rii noastre au fost stabilite o serie de reglementri n msur s diminueze aciunea unor factori de risc asupra sntii populaiei. n ara noastr ca reglementri n acest sens menionm: H.G. nr. 1198/2002 privind Normele de igien ale produselor alimentare, Legea

nr. 150/2004, privind sigurana alimentelor i H.G. 924/2005 privind aprobarea Regulilor generale pentru igiena produselor alimentare cu rolul de a crea cadrul legislativ referitor la inocuitatea produselor n circuitul alimentelor.

2.1.1 Identificarea riscurilor

Factorii ce trebuiesc luai n considerare la analiza riscurilor sunt: proprietile intrinseci ale produsului n timpul fabricaiei i dup fabricaie; procesele tehnologice; coninutul microbian n timpul i dup fabricare; proiectarea i amplasarea utilajelor; procedee de ambalare; tehnici de curenie i dezinfecie; sntatea, igiena i instruirea lucrtorilor; livrarea i pstrarea produsului; modul de preparare i consum; practicile consumatorilor; Sistemul de management al calitii are n vedere: controlul calitii: tehnicile operaionale folosite n procesul de producie pentru atingerea calitii produselor; asigurarea calitii: planificarea, managementul i adaptarea metodelor i procedurilor de furnizare a ncrederii c produsele i serviciile respect cerinele, standardele de calitate;

2.2 LEGISLAIA EUROPEAN I INTERNAIONAL CU PRIVIRE LA SIGURANA ALIMENTAR

Legislaia sanitar european i internaional privind producia de alimente prevede aplicarea n toate unitile implicate n producia, transportul, depozitarea i servirea alimentelor, a principiilor unui sistem de asigurare a calitii igienice, bazat pe evaluarea i prevenirea riscurilor, deci a unui sistem de tip H.A.C.C.P. n Marea Britanie, nc din septembrie 1995, aplicarea sistemului n unitile care prelucreaz sau comercializeaz alimente a devenit obligatorie, nerespectarea acestei condiii conducnd la nchiderea unitii respective. Specialitii au elaborat de asemenea, pe plan naional i international, o serie de ghiduri de bune practici de siguran alimentar bazate pe aplicarea metodelor H.A.C.C.P. n principal, de origine american i canadian, aceste ghiduri permit utilizatorilor aplicarea ntr-un domeniu specific a proceducerii H.A.C.C.P. (Rotaru, G., Moraru, C., 1997). Aceste documente descriu pe de o parte, sistemul i metodologia de aplicare a unei proceduri H.A.C.C.P., apoi detaliaz aplicarea acestei proceduri ntr-un domeniu industrial specific, insistnd pe etapele de analiz a riscurilor, de stpnire a punctelor critice i de supraveghere. n vederea realizrii posibilitii de aliniere i integrare a Europei Rsritene la sistemul internaional H.A.C.C.P. Organizaia Mondial a Sntii a organizat o serie de ntlniri (Larnaca Cipru 1990, Budapesta 1990, 1991, Lisabona 1991) la care au participat i

delegai oficiali ai Romniei. ara noastr este semnatar a Declaraiei Finale a Conferinei Internaionale de Nutriie F.A.O./O.M.S. (Roma, 1992) privind "securitatea alimentar" i "securitatea alimentelor". n baza recomandrilor internaionale, a experienei i literaturii de specialitate din rile cu practic n domeniu, precum i n baza specificului perioadei de tranziie din Romnia, Institutul de Igien i Sntate Public Bucureti (nominalizat de ctre O.M.S. ca "punct focal H.A.C.C.P." pentru Romnia) n colaborare cu Centrul de Inventic Bucureti a elaborat un pachet de proiecte - program privind posibilitile i perspectivele de implementare progresiv a sistemului internaional H.A.C.C.P. n ara noastr. n acest sens, Ministerul Sntii a emis Ordinul nr.1956/18 oct. 1995, publicat n Monitorul Oficial al Romniei nr.59/22 martie 1996 privind introducerea i aplicarea sistemului HACCP n activitatea de supraveghere a condiiilor de igien din sectorul alimentar. n Romnia, organizaiile i pot certifica sistemul de management H.A.C.C.P. dup urmtoarele 3 refereniale: Codex Alimentarius (Reguli generale i specifice privind bunele practici de igien - GHP i producie - GMP pentru societile ce proceseaz, transport depoziteaz sau comercializeaz produse alimentare); DS 3027E:2002 (document care introduce toate regulile din Codex Alimentarius ntr-un sistem ce poate fi documentat i ale crui performane pot fi evaluate); ISO 22000 (primul standard internaional de certificare a sistemului H.A.C.C.P.). Hotrre H.G. 1198/2002 a fost abrogat de H.G 924/11

august 2005 publicat n M.O. 804 din 05 septembrie 2005 i aprob Regulile Generale pentru igiena produselor alimentare. Hotrrea de Guvern H.G. 924/2005 ce reglementeaz condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc societile, acestea regsindu-se n Regulile Generale pentru igiena produselor alimentare aprobate de H.G. 924/2005. ISO 22000:2005, Sisteme de management ale siguranei alimentelor. Cerine pentru orice organizaie din lanul alimentar este proiectat s asigure lanuri de furnizare a alimentelor sigure la nivel mondial, prin elaborarea unui cadru de cerine armonizate la acest nivel, pentru abordarea global necesar. Standardul a fost elaborat n cadrul ISO de experii din industria alimentar, mpreun cu reprezentani ai organizaiilor internaionale de specialitate i n strns cooperare cu Comisia Codex Alimentarius, organismul nfiinat n comun de Organizaia Naiunilor Unite pentru Alimentaie i Agricultur (FAO) i de Organizaia Mondial a Muncii, pentru a elabora standarde n domeniul alimentaiei. Un avantaj major pentru organizaiile care utilizeaz ISO 22000 l constituie faptul c standardul faciliteaz implementarea sistemului HACCP (Analiza riscurilor n punctele critice de control) al Codex, pentru igiena alimentelor, ntr-un mod armonizat, i acoper cerinele standardelor celor mai importante, elaborate de diverse sindicate internaionale ale vnztorilor cu amnuntul n cadrul unui singur document care nu variaz n funcie de stat sau de produsul alimentar respectiv. n scopul continurii acestui obiectiv, specificaia tehnic a ISO-ISO/TS 22004, Sisteme de management al siguranei alimentelor.

Recomandri de aplicare pentru ISO 22000:2005, include o organigram referitoare la planificarea alimentelor sigure, care combin paii menionai n Ghidul H.A.C.C.P. al Codex cu cei specifici standardului ISO 9000. ISO 9000 reprezint un sistem de management al calitii, care are scopul de a preveni i detecta orice neconformitate cu specificaiile. Specificaiile produsului trebuie s respecte criteriul inocuitii. Implementarea impusa de seria de standarde ISO 9000, ofer posibilitatea unitilor productoare s realizeze produse i servicii corespunzatoare normativelor specificate n standarde, precum i preteniile consumatorilor, n cazul alimentelor fiind vorba n principal de: problema securitii, protecia mediului nconjurtor i conservarea energiei i materialelor utilizate. GMP (Good Manufacturing Practices) - acest sistem se refer la regulile bunelor practici de producie date de U.S. Food and Drug Administration sub autoritatea Federal Food, Drug, and Cosmetic Act. Aceste reguli i legi oblig productorii, procesatorii, ambalatorii s i i-a msuri preventive care s asigure c produsele lor sunt sigure. n S.U.A., GMP descriu condiiile i msurile pe care organizaiile trebuie s le urmeze n scopul evitrii obinerii unor produse alimentare periculoase. Utilizarea unor practici bune de lucru (GMP), cuplat cu efectuarea unor analize de laborator ale produsului finit, nu d ntotdeauna rezultatele dorite.

CAPITOLUL 3 CERCETRI PRIVIND VALOAREA PARAMETRILOR FIZICO-CHIMICI AI LAPTELUI DE BIVOLI

3.1 ASPECTE GENERALE

n contextul problemelor actuale care vizeaz condiiile specifice n care se produce i se valorific laptele de bubalin de ctre procesatori, obiectivele cercetrilor care se efectueaz sunt orientate n direcia stabilirii principalelor nsuiri a laptelui de bubalin, materie prim pentru obinerea diferitelor produse i efectul diferiilor factori asupra calitii laptelui. Materialul biologic este reprezentat de efectivul de bivolie de la ferma TNP Mesendorf, n numr de 138 de capete aflate n lactaii diferite, precum i bivolie din judeul Slaj crescute n condiii diferite de furajare n funcie de posibilitile cresctorilor. Aferent obiectivelor urmrite n cadrul acestui capitol, a materialului biologic cuprins n cercetare i a metodologiei de lucru, acestea sunt structurate astfel: un prim aspect se refer la stabilirea nsuirilor fizico-chimice a laptelui de bivoli i produselor lactate, precum i stabilirea nsuirilor microbiologice ale acestora.

3.1.1 nsuirile fizico-chimice ale laptelui de bivoli la ferma TNP Mesendorf

Calitatea laptelui de bivoli se apreciaz n funcie de caracteristicile fizice (densitate, punct de nghe, presiune osmotic sau pH), precum i de caracteristicile chimice (oxidarea i lipoliza) i cele bacteriologice. Practic, laptele de bivoli odat muls, poate avea caliti diferite, astfel, calitatea laptelui de bivoli se stabilete i n funcie de coninutul acestuia n componentele sale (proteine, grsimi, ap), celule provenite din ugerul bivolielor sau microbi provenii din grajd sau uger.

3.1.1.1 Rezultate i discuii

Studiul compoziiei chimice a laptelui de bivoli se impune din considerente tiinifice, dar i tehnologice, avnd n vedere ponderea crescut n totalul laptelui materie prim. Pentru efectuarea examenului fizico-chimic s-a folosit aparatul Lactoscan aflat n dotarea

Laboratorului pentru Tehnologia Prelucrrii Produselor Agricole din cadrul USAMV Cluj-Napoca, precum i Ekomilk din cadrul fermei luate n studiu. Alegerea acestor metode instrumentale i folosirea lor a fost preferat metodelor clasice datorit acurateii lor i obinerii rezultatului n cteva secunde.

Tabelul 3.1.1 Valorile medii i variabilitatea principalilor indici fizico-chimici ai laptelui de bivoli n funcie de sezon la ferma TNP Mesendorf Sezonul n=57 xsX V% Primvara n=46 xsX V% Vara n=32 xsX V% Toamna n=31 xsX V% Iarna Grsime Caracteristica Protein Lactoz SUT Densitate

7.880.04 4.400.03 4.650.02 18.430.03 1.040.01 3.78 5.16 3.83 1.24 0.25 7.700.03 4.390.04 4.690.02 18.430.03 1.030.01 2.58 5.51 3.17 1.21 0.25 6.960.07 4.430.02 4.760.03 17.640.05 1.030.01 5.68 2.35 3.20 1.65 0.16 7.640.06 4.560.83 4.820.02 18.580.03 1.030.01 4.53 4.53 1.88 1.04 0.81

Valorile medii n cazul principalilor parametrii fizico-chimici pentru laptele de bivoli n cazul fermei TNP Mesendorf difer n funcie de anotimp dup cum se poate observa din tabelul 3.1.1. Media pentru grsime n anotimpul iarn a fost de 7.880.04, primvara de 7.700.03, vara 6.960.07, toamna 7.640.06. Coninutul de protein (%) a fost de 4.400.03 iarna, 4.390.04 primvara, 4.430.02 vara i 4.560.83 toamna. Valoarea medie pentru lactoz (%) a fost de 4.650.02 iarna, 4.690.02 primvara, 4.760.03 vara, 4.820.02 toamna. Cu privire la coninutul mediu de SUT (%), acesta a variat ntre 17.640.05 i 18.580.03. Densitatea medie s-a meninut n jurul valorii de 1.030.01 i 1.040.01.

20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 Grsimea (%) Proteina (%) Lactoza (%) SUT Densitatea Iarna Primavara Vara Toamna

Figura 3.1.1Variabilitatea nsuirilor fizico-chimice n funcie de anotimp Conform sintezei realizate de (Boudier i col., 1981) completat de (Jouzier i col., 1986), principalele componente ale laptelui de bivoli prezint urmtoarele valori: grsimea 6.8-7.9%; proteina: 4.04.1%; lactoza: 4.8-5.0%; sruri minerale: 0.7-0.8%; S.U.: 16.6-17.5%; energie: 755-1425%. Dimitrov n urma cercetrilor realizate obine urmtoarele valori pentru compoziia chimic a laptelui de bivoli: grsimea 8.94%, proteina 5.04%, lactoza 4.70%, cenua 0.85%, aciditatea 8.60%, valoarea energetic 1200 cal/kg, S.U.T. 18.30%, i densitatea medie de 1.033. Velea C. i col., ntre anii 1978-1992, n numeroasele cercetri efectuate asupra bubalinelor, a evideniat variaia componentelor laptelui de bivoli n funcie de sezon i de regimul alimentar astfel:

regim de hrnire pe baz de nutreuri uscate i mas verde; s-au constatat urmtoarele valori pentru principalii parameri: n sezonul de iarn: S.U.T. a fost de 18.6%, grsimea 8.0%, proteina 4.6%, lactoza 4.8%, cenua 1.2%, densitatea 1.034; n sezonul de primvar: S.U.T. 17.9%, grsimea 7.5%, proteina 4.7%, lactoza 4.8%, cenua 0.9%, densitatea 1.032; n sezonul de var: S.U.T. 17.8%, grsimea 7.4%, proteina 4.6%, lactoza 4.8%, cenua 1.0%, densitatea 1.032; n sezonul de toamn: S.U.T. 18.3%, grsimea 7.8%, proteina 4.6%, lactoza 4.8%, cenua 1.1%, densitatea 1.033. Tabelul 3.1.2 Compoziia chimic a laptelui de bivoli (sintez bibliografic)
Autorul Aleksiev A., (1978) Boudier (1981) Han G. (1994) Guzan V., (1996) Desmasures N. (1997) Zhou W. (1998) Suman C.L. (1998) Banu C., (1998) Pucheanu C., (2000) Georgescu G., (2000) Fondura O. (2001) Boycheva S. (2002) Paolo B. (2003) Dimitrov (2003) Giovanni M. (2003) Grecu G., 2003 Lindmark-M. H. (2003) Amarjit N. (2003) Te Giffel M.C. (2003) Najdenova N. (2003) Zhang, B.X. (2004) Grsime (%) 7.53 7.9 7.87 7.74 8.86 7.93 7.82 7.80 6.94 7.80 8.21 7.48 7.90 8.94 7.56 7.13 7.59 8.46 8.53 8.47 7.96 Protein (%) 5.08 4.1 4.32 4.35 5.25 5.13 5.31 5.12 4.23 4.0 4.81 4.67 5.23 5.04 4.75 3.83 4.74 5.21 5.11 4.82 4.38 Lactoza (%) 4.57 5.0 5.39 4.57 4.91 4.68 4.62 4.71 5.13 5.12 5.32 5.18 4.80 4.70 4.61 4.52 5.28 4.78 4.57 4.79 5.23 SUT (%) 18.43 17.5 16.82 17.45 19.78 19.23 18.74 18.94 18.75 18.52 18.61 19.75 18.30 18.22 18.27 18.57 19.73 18.62 19.21 17.96 pH 6.57 6.83 6.65 6.94 6.59 6.70 6.38 6.68 6.65 6.56 -

Continuare tabel 3.1.2

Supino M.T. (2004) Robert Nout (2006) Bei-Zhong (2006) Bud I. i Velea C. (2006) Pece A. (2008) 8.27 6.53 6.57 7.64 7.88 4.86 4.16 4.27 4.69 4.40 5.19 4.56 5.07 4.85 4.65 18.49 17.14 16.69 18.16 18.45 6.65 6.39 6.53 6.50

Bud I. i col., n anul 1983 evidenieaz compoziia chimic a laptelui de bivoli ca fiind urmtoarea: grsimea 7.64%, proteina 4.69%, lactoza 4.85%, cenua 0.98%, aciditatea 8.32%, valoarea energetic 1155 cal/kg, S.U.T. 18.16%, i densitatea medie de 1.033. n figura 3.1.1 sunt reprezentai principalii parametri pentru laptele de bivoli n funcie de anotimp n cadrul fermei TNP Mesendorf.
10 8 6
7.64 7.7 6.96 7.88

4 2 0 Iarna Primavara Vara Toamna

Anotimpul

Figura 3.1.2 Valorile medii pentru grsime n laptele de bivoli n funcie de anotimp

Datele obinute n urma cercetrilor realizate de noi sunt destul de apropiate datelor obinute de ali cercettori: (Crea V. i col., 1979) n urma cercetrilor realizate pe bivoliele din Fgra acetia au obinut un procent de 7.03% pentru grsime. Dac comparm datele rezultate n urma cercetrilor din ara noastr cu rezultatele obinute de cercettorii strini pe bivoliele din diferite zone de cretere, se constat c procentul de grsime este superior celui obinut la bivoliele din ara noastr. Pucheanu C. n anul 2000, conform cercetrilor realizate a stabilit o medie a procentului de grsime de 6.94%, iar bivoliele exploatate la SCPCB ercaia au realizat un procent de grsime <7%. Roca A. i Rusu S. n 1958, n urma cercetrilor realizate pe bivoliele din zona Cluj au obinut valori de 7.89% pentru grsime. n cercetrile realizate de ctre diveri cercettori asupra raselor indo-pakistaneze s-au obinut valori de 8% grsime n laptele de bivoli, procent ridicat comparativ chiar i cu rasa Murrah cu 8.30% grsime. n anul 1948, Ogzizek n cercetrile realizate asupra bubalinelor din Iugoslavia a constatat c procentul de grsime se situeaz la o valoare medie de 8.45%. Cantitatea de protein obinut toamna este mai mare fa de alte sezoane (figura 3.1.3). Cele mai sczute nivele ale produciei corelate cu procente mai mici de protein i grsime s-au obinut n sezonul de var. Sezonul ftrii influeneaz nivelul produciilor obinute prin faptul c durata lactaiei este diferit, n cazul ftrilor din sezonul de iarn este cu aproximativ 50 de zile mai lung dect n cazul ftrilor n

celelalte sezoane. Dei exist unele diferene ntre populaii diferite de bivolie, totui efectul sezonal menionat este caracteristic speciei.
5 4 3
4.4 4.39 4.43 4.56

2 1 0 Iarna Primavara Vara Toamna

Anotimpul

Figura 3.1.3 Coninutul mediu de protein pentru laptele de bivoli n funcie de anotimp Lactoza este principala glucid a laptelui de bivoli, i n cantiti mai mici se gsesc celelalte glucide azotate sau acide. Ea se gsete sub 3 forme: alfa hidratat, beta anhidr i o form amorf format dintr-un amestec de alfa i beta lactoz n raport de unu la cinci. Lactoza are un rol deosebit n alimentaie mai ales pentru organismele tinere favoriznd asimilarea calciului i fosforului n organism. n cazul preparrii brnzeturilor aproximativ 90% din lactoz trece n zer (Rotaru Gabriela, 1978). n cazul nclzirii laptelui de bivoli se formeaz acid lactic ntr-o proporie de aproximativ 5% i n proporie mai mic acid butiric, acetic, propionic i piruvic. Aciditatea crete progresiv, n cazul

nclzirii laptelui, datorit interaciunii gruprilor aminice cu lactoza. Unii hidrai de carbon se afl n cantiti mici n laptele de bivoli, fiind cuprinse n aceast categorie glucidele neazotate (glucoza i galactoza), glucidele azotate (N-acetilglucozamina i N-

acetilgalactozamina) i acide (acizi sialici) care se afl n gruparea prostetic a cazeinei k. Lactoza se descompune parial la temperaturi de 70-80C cu formare de acizi organici n special, acid formic i lactic. Lactoza alfa hidratat cristalizeaz frecvent i d unele defecte ale laptelui concentrat, brnzei topite i ngheatei. Prin gruparea aldehidic lactoza poate reaciona la nclzire cu diverse substane azotoase: proteine, amoniac, aminoacizi i rezult un ansamblu de fenomene numit reacia Mailard.
6

4
4.65 4.69 4.76 4.82

0 Iarna Primavara Vara Toamna

Anotimpul

Figura 3.1.4 Coninutul mediu de lactoz pentru laptele de bivoli n funcie de anotimp

Lactoza are proprieti reductoare datorit gruprii aldehidice, pe acestea bazndu-se unele reacii de identificare i metode de dozare (Chindri V., 1998). Dup cum se poate observa din figura 3.1.4, coninutul de lactoz cel mai ridicat n cazul laptelui de bivoli este n sezonul de toamn. Lactoza reprezint componenta glucidic a laptelui, de o foarte mare valoare energetic i poate ajunge n lapte pn la procentul de 7.8%. Lactoza variaz n lapte n limite foarte largi, ntre 2.8 i 7.66% cu o medie de 4.6%. La diferite specii coninutul n lactoz este de regul invers proporional cu proteinele. Lactoza este sintetizat de ctre mamel pe baza glucozei sanguine, fiind un dizaharid care particip la formarea gustului laptelui proaspt (Rotaru i Mihaiu, 2001).

20 15 10 5 0 Iarna
18.43

Substanta uscata totala

18.43

17.64

18.58

Primavara

Vara

Toamna

Anotimpul

Figura 3.1.5 Valorile medii pentru SUT n laptele de bivoli n funcie de anotimp

SUT, dup cum se poate observa din figura 3.1.5 prezint valori maxime toamna i iarna i minime vara. Compoziia laptelui poate fi modificat att nainte ct i dup muls. Dac modificrile apar n interiorul glandei mamare, este n mod aproape sigur vorba despre o boal sau un tratament pe baz de

antibiotice sau alt tip de medicamentaie. Alimentaia poate de asemenea s altereze compoziia normal a laptelui, dar aceste modificri sunt ntlnite extrem de rar, ns la intervale oarecum regulate; sezonul poate s afecteze compoziia laptelui, datorit diferenelor de alimentaie din anumite perioade ale anului (Chindri V., 1998). n urma cercetrilor realizate de ctre (Guzan V., 1996) asupra laptelui de bivoli, grsimea a fost de 7.74%, proteina total de 4.35%, din care cazeina: 3.57%, lactoza: 4.57%, srurile minerale: 0.79% i substana uscat total: 17.45%.

1.5

Denstita tea

1.0
1.04 1.03 1.03

1.03

0.5

0.0 Iarna Primavara

Anotimpul

Vara

Toamna

Figura 3.1.6 Variabilitatea densitii n funcie de anotimp pentru laptele de bivoli

Tabelul 3.1.3 Valorile medii i variabilitatea principalilor indici fizico-chimici ai laptelui de bivoli n funcie de sezon la bivoliele din judeul Slaj Caracteristica Anotimpul Grsime Protein Lactoz SUT Densitate xsX V% Primvara xsX n=23 V% Vara xsX n=20 V% xsX Toamna n=16 V% Iarna n=23 8.520.09 4.95 7.700.05 3 7.240.07 4.23 7.940.02 1.14 4.930.04 4.07 4.700.02 2.52 4.360.02 2.43 4.500.03 2.23 4.780.02 2.06 4.840.01 1.48 4.750.02 2.29 4.660.03 2.58 18.930.04 1.13 17.770.02 0.45 17.780.02 0.47 18.440.04 0.91 1.030.01 0.12 1.040.01 1.31 1.030.01 1.14 1.030.01 1.02

Date comparative privind procentul de grsime la bivoliele de diferite proveniene i cercetate de diferii autori: (Roca R. i col., 1958) realiznd cercetri asupra bubalinelor romneti n judeul Cluj relateaz procentul de grsime ca fiind de 7.89%; (Boudier i col., 1981), procentul de grsime a fost de 6.8%; (Bud I., 1983) realiznd cercetri asupra bubalinelor romneti din Transilvania, grsimea a fost de 7.39%; (Jouzier i col., 1986) realiznd cercetri asupra bubalinelor a obinut un procent pentru grsime de 7.9%; (Velea C. i col., 1993), pe bubalinele romneti din Transilvania grsimea a fost de 8.35%; (Elisei L. i col., 1995) n urma cercetrilor realizate pe bubalinele romneti din zona Fgraului procentul de grsime a fost de 7.36%; (Banu C. i col., 1998), grsimea a fost de 7.80%; (Georgescu Gh., 2000), grsimea a fost de 7.85%; (Pucheanu C. i col., 2000) n urma cercetrilor realizate pe bubalinele romneti de la ercaia au obinut un procent de grsime de 6.94%.

Coninutul mediu de grsime i protein este mai mare iarna, toamna i primvara i n cazul bivolielor luate n studiu din judeul Slaj. Vara coninutul de grsime este de 7.240.07 i coninutul de protein de 4.360.02.
20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
U T De ns it a te a ot ei na ea La ct oz a ra sim S

Iarna Primavara Vara Toamna

Figura 3.1.7 Variabilitatea nsuirilor fizico-chimice n funcie de anotimp la bivoliele din judeul Slaj Bei-Zhong Han n 2006 studiaz nsuirile fizico-chimice la mai multe rase de bubaline: pentru rasa Murrah grsimea (%) a fost de 6.571.21, proteina de 4.270.43, lactoza de 5.070.13, pH-ul de 6.53; pentru rasa Nili-Ravi grsimea a fost de 6.531.28, proteina de 4.160.20, lactoza de 4.560.10, i pH-ul de 6.390.06. n coninutul laptelui proaspt se deosebesc dou faze distincte: una fiind dat de grsime, iar cealalt de ap, n care sunt dispersate numeroase substane coninute. Faza lipidic este format din fosfolipide, steroli, carotenoizi i vitamine liposolubile, iar cea apoas

Pr

conine sub form de soluie lactoza, vitaminele hidrosolubile i minerale. De asemenea laptele vehiculeaz n stare coloidal proteinele i o bun parte din mineralele coninute (Colcombet, 1985; Dumoulin i Leseur, 1991; Faraoult, 1988).
9 8,5 8 Grasimea 7,5 7 6,5
a rn Ia a ar av ra Va am To na

im Pr

Figura 3.1.8 Coninutul mediu de grsime n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj n figura 3.1.8 s-a reprezentat coninutul grsimii n funcie de anotimp pentru bivoliele din judeul Slaj, cu variaii cuprinse ntre 7.24 i 8.52%. Compoziia chimic a laptelui de bivoli dup (Valeria Guzan, 1996) este urmtoarea: S.U.T.: 17.45%; grsimea: 7.74%; proteina total: 4.35%; cazeina: 3.57%; lactoza: 4.57%; sruri minerale: 0.79%. Caracteristicile fizico-chimice dup (Marian M. i col., 1998) pentru laptele de bivoli sunt urmtoarele: aciditate (T, max.): 21; densitate: 1.031; grsime (%, min.): 6.5; substana uscat negras (%,

min.): 10; titru proteic, (%, min): 4.5; grad de impurificare (max.): I, temperatura (C): 14.

Toamna

4,5

Vara

4,36 Proteina

Primavara

4,7

Iarna

4,93

Figura 3.1.9 Coninutul mediu de protein n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj Prin coninutul n protein putem spune c laptele de bivoli este superior multor specii, precum i prin coninutul ridicat de cazein, albumin, globulin. Laptele de bivoli conine mai puin ap dar mai mult substan uscat total, grsime, lactoz i protein.

4,9 4,85 4,8 4,75 4,7 4,65 4,6 4,55 Iarna Primavara Vara Toamna
4,66 4,78 4,75 4,84

Lactoza

Figura 3.1.10 Coninutul mediu de lactoz n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj n figurile 3.1.9 i 3.1.10 sunt reprezentate grafic coninutul mediu de protein i lactoz n funcie de anotimp pentru bivoliele luate n studiu din judeul Slaj.
19,5 19 18,5 18 17,5 17 16,5 16 Iarna Primavara SUT Vara Toamna 17,17 17,78 18,93 18,44

Figura 3.1.11 Coninutul mediu n SUT n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj

Probele de lapte de bivoli prelevate de la cresctorii din judeul Slaj i analizate n vederea stabilirii coninutului de SUT prezint valori apropiate cu cele de la fema TNP Mesendorf, dup cum se poate observa i din figurile (3.1.5 i 3.1.11).
1,042 1,04 1,038 1,036 1,034 1,032 1,03 1,028 1,026 1,024

1,04

1,03

1,03

1,03

Iarna

Primvara

Vara

Toamna

Densitatea

Figura 3.1.12 Variabilitatea densitii n funcie de anotimp pentru laptele de bivoli Lactaia i producia laptelui depind de factori genetici i factori de mediu. Cei genetici sunt dai de specie, ras i individ. Rasa este un factor care influeneaz nu numai producia cantitativ i calitativ de lapte, dar i alte nsuiri importante cum sunt precocitatea, longevitatea, capacitatea de conversie a nutreurilor. Rasa influeneaz i coninutul n grsime i protein. Un alt factor l reprezint determinismul genetic al populaiilor; s-au stabilit relaii ntre baza ereditar i factorii mediului ambiant. Producia cantitativ i calitativ de lapte variaz de la un individ la altul.

Creterea i dezvoltarea pn la viaa productiv, cu dou perioade distincte: prenatal i postnatal, reprezint un alt factor de influen. Factorul vrst are n vedere dinamica produciei de lapte pe ntreaga via productiv a animalului i care constituie un caracter de ras (Chindri V., 1998). Grsimea este unul dintre cei mai importani componeni ai laptelui de bivoli n ceea ce privete proprietile organoleptice, dar i sub aspect nutritiv i economic; prezint valori minime n prima lun de lactaie i maxime spre sfritul acesteia, iar n comparaie cu celelalte tipuri de lapte prezint valorile cele mai mari, fiind cuprinse ntre 5.1-9.0% (Chindri V., 1998). Nardone A. i col., n anul 1993, n cercetrile complexe pe care le-au realizat asupra bubalinelor din diferite zone, au obinut urmtoarele valori medii pentru grsime: n cazul bubalinelor din Bulgaria: 5.70%; pentru bubalinele din Italia: 8.10%; bubalinele din Romnia: 7.10%; bubalinele din Egipt: 6.80% i bubalinele din Turcia: 8.70%. Calitatea laptelui este influenat de sezonul ftrii, mai ales n ceea ce privete coninutul n grsime, n sensul c valorile obinute n sezonul rece sunt superioare celor obinute n alte sezoane: cu 12.94% mai mari comparativ cu cea nregistrat primvara, cu 33.2% vara i cu 28.8% toamna (Bud I., 1990). Frecvena mulsului afecteaz att producia total de lapte, ct i cantitatea de grsime. n baza cercetrilor efectuate de (Velea C. i col. 1984) referitoare la nsuirile morfologice ale ugerului la bivoli, se poate concluziona c acesta are o bun dezvoltare i dinamic de cretere pe lactaii n strns corelaie cu nivelul de producie.

Tabelul 3.1.4 Valorile medii i variabilitatea principalilor parametrii fizico-chimici n funcie de lactaie la Ferma TNP Mesendorf Lactaia I II III IV V VI VII VIII N n=60 n=29 n=23 n=10 n=5 n=8 n=8 n=5 XSX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% Grsimea 7.310.05 4.82 7.490.06 4.08 7.610.09 5.80 7.640.13 5.20 7.960.26 7.32 8.100.09 3.19 8.340.10 3.48 8.770.07 1.81 Proteina 4.770.01 2.34 4.680.03 3.09 4.750.03 3.50 4.820.03 2.22 4.870.04 1.78 4.810.03 1.55 4.760.03 1.64 4.820.03 1.58 Lactoza 4.700.08 3.58 4.790.03 3.47 4.800.02 2.10 4.840.03 1.90 4.870.03 1.33 4.840.03 1.58 4.820.02 1.34 4.890.02 1.08 SUT 17.220.29 13.21 17.720.04 1.02 17.860.13 3.51 18.060.03 0.61 18.300.23 2.85 18.010.04 0.63 18.150.07 1.05 18.340.24 2,96 Densitatea 1.030.01 1.18 1.0340.01 1.30 1.0330.01 0.12 1,0300.01 1.09 1.0290.01 1.11 1.0340.01 1.33 1.0350.01 0.81 1.040.01 0.80

Compoziia chimic medie a laptelui de bivoli dup Inihov este urmtoarea: ap: 82.7%; substana uscat: 17.3%; grsimea: 7.7%; protein: 4.1%; lactoza: 4.8%; cenua: 0.7%. Conform cercetrilor efectuate de (Pucheanu G., 2005), procentul de protein pentru laptele obinut la bivoliele ntreinute n sistem mixt a fost n medie de 4.69%, nregistrnd o variabilitate relativ normal (9.18%). Acest procent este superior fa de procentul de protein din laptele de bivoli calculat de (Georgescu Gh., n 2000) care a fost de 4%.

Dac comparm aceste date cu cele obinute la bivoliele italiene, (Nardone A. i col., 1993) au obinut un procent mediu pentru protein de 4.65%.
10 8 6 4 2 0
I II III IV V VI I VI II VI
7.31 7.61 7.49 7.64

Grasime (%)
7.96 8.10 8.34 8.77

Lactatia

Figura 3.1.13 Grsimea n laptele de bivoli n funcie de lactaie la Ferma TNP Mesendorf
6

4.87
4

4.82 4.77 4.75

4.81 4.76

4.82

4.68

II

III

IV

VI

VII VIII

Lactatia

Figura 3.1.14 Coninutul mediu de proteine n funcie de lactaie la TNP Mesendorf

Polikhronov D. i col., 1977, n cercetrile realizate asupra bubalinelor bulgreti a obinut pentru grsime o valoare medie de 8.20%, iar n cazul rasei Murrah procentul de grsime a fost mai sczut: 8.01%. Grsimea din laptele de bivoli reprezint componenta cea mai variabil din lapte, fiind influenat de factori genetici i de specie. Media pentru laptele de vac este 3.5%, cu minima 2.8 i maxima peste 4%. Cel mai gras lapte este considerat cel de balen cu 35%, apoi laptele de ren cu 17.5%, laptele de bivoli 8.2%, de oaie 6.8%, de scroaf 6%, de pisic 5%. Cel mai srac lapte n grsime l produce mgria i iapa 1.5% (Chindri Vasile, 1998). n cazul bivolielor primipare (Pucheanu G., 2005), n urma cercetrilor efectuate au constatat c acestea au realizat cel mai redus procent de protein de 3.73% cu o variabilitate normal de 7.93%. Componentul glucidic de baz din laptele de bivoli este lactoza, care din punct de vedere chimic este un dizaharid ce elibereaz prin hidroliz o molecul de glucoz i una de galactoz. Lactoza confer laptelui de bivoli gustul dulceag i are o molecul asimetric cu putere de rotaie, existnd doi izomeri cu grad i solubilitate diferit n aceleai condiii de temperatur (Chindri V., 1998). Hidraii de carbon se gsesc n lapte sub form de lactoz, al crui precursor este glucoza circulant, nivelul acestuia influennd cantitatea de lapte produs i rata de sintez a acizilor grai cu lan scurt (Hanzen, 1996). Concetraia lactozei este n corelaie cu evoluia lactozei i scade n deficitul de aport glucidic sau n cazul infeciilor mamare.

Pucheanu C. n anul 2000, n urma cercetrilor realizate asupra bivolielor de la S.C.P.C.B ercaia au nregistrat un procent mediu de protein pentru lapte de 3.78%. Solubilitatea lactozei prezint particulariti cu importan practic n fabricarea laptelui concentrat i a ngheatei. La aceste produse se formeaz nucleii cristalini pe care se depun cristale de lactoz perceptibile gustativ datorit faptului c lactoza se gsete n soluie suprasaturat. Lactoza este sensibil la aciunea cldurii peste 100C, suferind diferite modificri de la pierderea apei pn la schimbarea culorii i chiar caramelizare. Prin reacie cu substanele azotate la temperaturi mari se formeaz produi de culoare brun cu proprieti reductoare, fenomen cunoscut sub denumirea de reacie Mailard.
6

4.89
4

4.87 4.84 4.84 4.82 4.80 4.79

2 4.80

II

III

IV

VI

VII VIII

Lactatia

Figura 3.1.15 Coninutul mediu de lactoz din lapte n funcie de lactaie la TNP Mesendorf

Una dintre proprietile cele mai importante ale lactozei este capacitatea de fermentare sub aciunea microorganismelor, obinnduse produi diferii. Fermentaia lactic este cea mai cunoscut i apreciat din punct de vedere tehnologic, cu formare de acid lactic sub aciunea bacteriilor lactice. Acidul lactic, sub aciunea bacteriilor propionice, poate fi transformat n acid propionic i dioxid de carbon, fermentaie care se produce n timpul maturrii brnzeturilor cu past tare i asigur aroma specific i desenul acestui tip de brnzeturi. O fermentaie nedorit este cea produs de bacteriile anaerobe, care transform acidul lactic n acid butiric i hidrogen, producnd balonarea trzie a brnzeturilor. Timpul de ntrerupere a lactaiei pare s fie corelat negativ cu producia de lapte. Acesta este mai scurt la nceputul i la mijlocul perioadei de lactaie, comparativ cu sfritul acesteia. O ejecie mai rapid a laptelui este observat cnd producia de lapte este mai ridicat (Chindri V., 1998). n urma cercetrilor efectuate am constatat c variaia componentelor laptelui de bivoli din zona de colectare este destul de neuniform, cauza principal o constituie existena unei populaii de bubaline heterogene, cu slabe performane n ceea ce privete producia de lapte, hrnite cu furaje de calitate inferioar i exploatate extensiv, fiind utilizate de multe ori la munca cmpului. n acest caz este necesar aplicarea unei tehnologii de exploatare optimizate pentru realizarea unui salt calitativ al produciei de lapte la specia bubalin, aceasta reprezentnd dezideratul privind calitatea materiei prime.

20 15
18 18.3 18.01 18.15

18.34

10
17.72

17.86

5
17.52

II

III

IV

VI

VII VIII

Lactatia
Figura 3.1.16 Coninutul mediu de SUT al laptelui n funcie de lactaie la TNP Mesendorf Proteinele din lapte au o valoare biologic ridicat, aproximativ 18 aminoacizi, toi aminoacizii eseniali ai organismului. Cazeina este o fosfolipid care conine fosfor sub form de acid fosforic. Laptele de bivoli datorit coninutului ridicat n grsime, din punct de vedere energetic este mult mai valoros dect laptele de vac. Grsimea din laptele de bivoli are un coninut ridicat n fosfolipide, colesterol i acizi grai saturai comparativ cu laptele de vac. Procentul de grsime este evaluat de regul invers fa de producia cantitativ. Sezonul influeneaz direct o serie de indici fiziologici la bubaline, acionnd prin diferii factori asupra temperaturii, activitii cardiace i respiraiei, iar indirect asupra produciei de lapte (Chindri V., 1998).

Compoziia chimic medie a laptelui de bivoli pe lactaii dup (Velea C. i col., 2006) este urmtoarea : lactaia I: grsimea 7.39%, proteina 4.23%, lactoza 4.68%, cenua 0.89%, aciditatea 8.28, valoarea energetic 1110 cal/kg, densitatea medie 1.032, S.U.T.17.39%; lactaia II: grsimea 7.49%, proteina 4.62%, lactoza 4.65%, cenua 0.91%, aciditatea 8.42, valoarea energetic 1150 cal/kg, densitatea medie 1.032, S.U.T., 17.67%; lactaia III: grsimea 7.81%, proteina 4.79%, lactoza 4.68%, cenua 0.94%, aciditatea 8.46, valoarea energetic 1180 cal/kg, densitatea medie 1.033 i S.U.T. 18.22%.
1,04 1,035

1,033

1,034

1,033 1,03 1,029

1,034

II

III

IV

VI

VII

VIII

Lactaia
Densitatea

Figura 3.1.17 Variabilitatea densitii laptelui n funcie de lactaie la TNP Mesendorf Procentul de grsime variaz n funcie de stadiul lactaiei i de volumul produciei de lapte. Un studiu efectuat pe rasa Nili-Ravi n Pakistan arat c procentul de grsime crete constant de la 5.5% n prima lun de lactaie la 7.5% n luna a-10-a de lactaie. Exist o

corelaie negativ ntre producia de lapte i procentul de substan uscat (S.U.). Valorile medii i variabiliatatea pentru principalii parametri fizico-chimici n funcie de lactaie la bubalinele din judeul Slaj sunt evideniate n tabelul 3.1.5. Dup cum se poate observa i din figura 3.1.13, coninutul n grsime (%) crete din lactaia I unde este de 6.950.05, pn n lactaia a X-a, n care atinge valoarea de 8.600.06. n cazul procentului de grsime n funcie de nivelul lactaiei, acesta tinde s scad de la lactaia I-a i pn la lactaia a IV-a, dup care tinde s creasc pn n lactaia a VIII-a, cnd atinge maximum de 7.73%, dup care urmeaz o uoar scdere, atingnd nivelul minim de 7.41% (aceste cercetri au fost realizate de ctre (Bud I., 1983) pe bivoliele din Nord-Vestul Transilvaniei). Banu C. i col., n anul 1998 n cercetrile realizate asupra bubalinelor din ara noastr au obinut o valoare medie pentru grsime de 7.80%, aceleai valori fiind obinute i de ctre Georgescu Gh., n anul 2000. Velea C. i col., n anul 1994, n numeroasele cercetri realizate pe bubaline, att pe bubalinele din Transilvania, ct i pe rasa Murrah, au obinut urmtoarele valorii medii pentru grsime: 7.40% - bubalinele romneti i 8.35% - pentru rasa Murrah.

Tabelul 3.1.5 Valorile medii i variabilitatea principalilor parametri fizico-chimici n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj Lactaia I II III IV V VI VII VIII IX X N n=15 n=13 n=11 n=10 n=12 n=10 n=8 n=6 n=6 n=7 XSX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% xsX V% Grsimea 6.950.05 2.86 7.140.03 1.37 7.340.02 1.04 7.490.02 0.94 7.730.02 0.89 7.920.02 0.66 7.980.03 1.02 8.210.10 3.06 8.390.04 1.17 8.600.06 1.80 Proteina 4.860.01 0.85 4.740.01 0.55 4.750.02 1.16 4.800.02 1.42 4.860.03 2.28 4.800.02 1.27 4.680.03 1.96 4.650.04 2.34 4.710.01 0.61 4.810.02 1.13 Lactoza 4.880.01 1.05 4.830.02 1.56 4.790.02 1.57 4.820.02 1.47 4.830.03 2.00 4.900.03 2.17 4.890.02 1.28 4.870.03 1.47 4.920.02 1.03 4.890.03 1.69 SUT 18.050.04 1.12 17.940.05 1.07 18.030.04 0.82 18.160.03 1.43 18.210.01 1.98 18.370.06 1.03 18.520.07 1.02 18.480.08 1.08 18.680.02 2.25 18.930.02 2.87

Valorile reprezentative ale componentelor principale din laptele de bivoli dup (Ionel I., 1999) sunt urmtoarele: greutatea specific (g/cm3): 1.029-1.031; substana uscat (g/100 g lapte): 16.7-18.5; grsimea (g/100 g lapte): 7.1-8.4; proteina (g/100 g lapte): 3.9-4.3; cazeina (g/100 g lapte): 3.2-3.5; albumina (g/100 g lapte): 0.55-0.72; lactoza (g/100 g lapte): 4.6-4.8; substane minerale (g/100 g lapte): 0.69-0.79.

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 I II III IV V VI VII VIII

6,95 7,14 7,34 7,49 7,73 7,92 7,98 8,21

8,39

8,6

IX

Lactaia

Figura 3.1.18 Coninutul mediu de grsime n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj
6 4.86 4 4.74 2 4.68 4.65 0 4.80 4.75 4.71 4.86 4.80 4.81

II

III IV V

VI VII VIII IX

Lactatia
Figura 3.1.19 Coninutul mediu de proteine n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj Proteina din laptele de bivoli variaz (%) n funcie de lactaie astfel: n lactaia I - 4.860.01, lactaia II - 7.140.03, lactaia III 7.340.02, lactaia IV - 7.490.02, lactaia V - 4.860.03, lactaia VI 4.800.02, lactaia VII - 4.680.03, lactaia VIII - 4,650.04, lactaia IX - 4.710.01, lactaia X - 4.810.02.

Georgescu Gh., n anul 2000, la bivoliele luate n studiu a constat c procentul mediu de protein n lapte a fost de 4.0%. Dac comparm aceste date cu cele obinute la bivoliele italiene, (Nardone A. i col., 1993) au obinut un procent mediu de protein de 4.65%.
6
4.92 4.89 4.87 4.89

4.88 4.83 4.79 4.82 4.83

4.90

II

III

IV

VI

VII VIII IX X

Lactatia

Figura 3.1.20 Coninutul mediu de lactoz n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj Aleksiev A. i col., 1986, n urma cercetrilor realizate asupra bubalinelor au obinut urmtoarele valori pentru grsime: n cazul bubalinelor bulgreti: 7.50%; pentru Murrah bulgresc: 7.55%; Murrah bulgresc i caucazian 8.02%. n ceea ce privete SUT din laptele de bivoli, aceasta variaz astfel: n lactaia I este de 18.05%, dup care scade puin n lactaia aII-a i crete ncepnd cu lactaia a-III-a pn n lactaia a-VII-a, dup care scade foarte puin n lactaia a-VIII-a i crete pn la 18.93% n lactaia a-X-a (figura 3.1.21).

20
18.93

15
18.37

18.52

18.68

10
18.05 18.16 18.03 17.94

18.21

18.48

5 0

II

III

IV

VI VII VIII IX

Lactatia
Figura 3.1.21 Coninutul mediu n SUT n funcie de lactaie la bivoliele din judeul Slaj

CAPITOLUL 4 CERCETRI PRIVIND VALOAREA PARAMETRILOR MICROBIOLOGICI AI LAPTELUI DE BIVOLI

4.1 ASPECTE GENERALE

Determinrile

efectuate

pentru

evidenierea

calitii

microbiologice a laptelui de bivoli s-au realizat n cadrul urmtoarelor uniti: Autoritatea de Sntate Public Cluj-Napoca, Fundaia pentru Controlul Calitii Laptelui Floreti i Laboratorul de Chimie din cadrul Facultii de Agricultur al USAMV Cluj-Napoca. Pentru realizarea obiectivului propus pentru acest subcapitol au fost determinai urmtorii parametrii: celulele somatice, numrul total de germeni, numrul de drojdii i mucegaiuri, bacteriile coliforme, numrului de Stafilococi coagulazo pozitivi, reziduurile de antibiotice, Salmonella, Escherichia coli, Bacillus cereus, NTG aerobi mezofili i evidenierea microbiotei din laptele de bivoli cu ajutorul

microscopului Axio Observer. Probele de lapte de bivoli utilizate pentru examenul microbiologic au fost recoltate de la ferma TNP Mesendorf i de la diferii cresctori privai din judeul Slaj, n condiii tehnice i igienice corespunztoare. Recipientele n care au fost prelevate probele au fost sterile i pregtite n prealabil. Primele jeturi de lapte de bivoli au fost aruncate, iar probele de lapte au fost recoltate individual. Recipientele n care au fost

recoltate probele de lapte au fost impermeabile la ap i grsimi. Toate etapele pentru examenul microbiologic s-au realizat cu ajutorul ustensilelor sterile. Probele de lapte de bivoli au fost introduse n lucru imediat cum au sosit n laborator. Materialele utilizate: lapte de bivoli; plci Petri sterile; pipete gradate sterile; mediul de cultur agar-glucoz-cartof; ser fiziologic steril; mojar steril; citrat de sodiu 2% steril, mediu nutritiv: triptonextract de drojdie-glucoz-agar, acid acetic 1%, mediul de mbogire Chapmann lichid, anse bacteriologice sterile, medii de cultur: bulion cu verde malachit i clorur de magneziu i bulion selevit cistin: bulion cu triptoz i lauril sulfat, BBLV (bulion lactozat cu bil i verde briliant). Instrumente utilizate: microscopul Axio Observer A; Bactoscan FC; Screening test BRT.

4.2.1 Determinarea numrului de celule somatice din laptele de bivoli

Codex Alimentarius i Federaia Internaional a laptelui n ultimii ani acord o importan major laptelui i produselor lactate de bivoli, inclusiv asupra calitii microbiologice (Ganguli N.C., 1997). Coninutul laptelui n celule somatice constituie un parametru att de exploatare (numrul mare de celule somatice exprim bivolie cu mamite, care determin pierderi economice), ct i igienic (laptele

mamitic are aspect anormal, gust alterat i compoziie modificat) (Pucheanu C., 2000). Contaminarea iniial i temperatura de pstrare are influen asupra calitii microbiologice a laptelui astfel: la o temperatur de 4.5C, ntr-un timp de 24 de ore poate s ajung la 4000-300.000 germeni/ml; dup 48 de ore: 4500-600.000 germeni/ml; la 10C timp de 24 de ore: 12.000-1.200.000; la 48 de ore:120000-15.000.000; la 16C: timp de 24 de: 1.500.000-27.000.000; i la 48 de ore: 2.300.00070.000.000.

1000 800 600 400 200 0

A B C D
180.71 395.41 517.13 768

Clasa de calitate
Figura 4.2.1 Valorile medii pentru celulele somatice n funcie de clasa de calitate Celulele somatice din laptele de bivoli au fost determinate conform metodei: SR EN ISO 13366-3-2001. Reprezentarea grafic a

numrului de celule somatice pentru probele analizate sunt redate n figura 4.2.1. n Sir Lanka, n laptele de la diferite rase de bubaline, (Silva S., 1994) relateaz c probele considerate normale (CMT negativ i valorii medii ale pH-ului de 6.58) au un numr total de celule somatice care variaz ntre 50.000 i 375.000 celule/ml, fiind predominante leucocitele polimorfonucleare neutrofile, cu un numr relativ de 56%, mai mare fa de laptele de vac, urmate apoi de limfocite 28%, macrofage 8%, celule epiteliale 5% i polimorfonucleare enzinofile 1%. Investigaiile fcute n ara noastr ntr-o serie de ferme, rezult c celulele somatice au variat ntre 190.000 i 410.000/ml, atestnd o situaie mai bun dect n cazul ncrcturii microbiene (Aran C.N., 2007). Conform Directivei U.E. 92/46 se prevede ca laptele s conin un numr optim de celule somatice/ml sub 250.000 i maxim 400.000 (pn n anul 1997 a fost admis ca numrul maxim s fie de 500.000 celule/ml). Consecinele prezenei unui numr mare de celule somatice are puternice repercursiuni economice asupra fermei, deoarece: se obine un pre mic pe laptele de bivoli, are loc reducerea produciei de lapte la bubaline, precum i creterea costurilor cu substanele

medicamentoase. Pragul maxim admis pentru laptele considerat sntos s-a stabilit n jurul valorii de 400.000 celule/ml. Peste aceast limit, indiferent

dac laptele prezint sau nu modificri senzoriale sau biochimice, intr automat n categoria suspect i este scos din circuitul de valorificare.

4.2.2 Determinarea numrului total de germeni

Normele internaionale i n special cele ale Uniunii Europene prevd ca laptele crud s aib un numr de germeni sub 100.000/ml, n cazul n care este mai mare genereaz dificulti de conservare i n consecin este impropriu pentru procesare, totodat intervenind i cheltuieli speciale pentru pasteurizare i sterilizare (Georgescu Gh., 2000). Primele dou clase de calitate A i B pentru lapte se achiziioneaz la preuri mai mari, iar pentru ultima clas preul oferit este mai sczut, din cauza faptului c exist pericolul s compromit calitatea produselor cerute pe piat. n funcie de coninutul n germeni, se stabilete calitatea bacteriologic a laptelui. Aadar, cele mai multe fabrici ofer preul pentru lapte n funcie de calitatea bacteriologic. Numrul total de germeni a fost determinat cu ajutorul Bactoscan FC. Rezultatele obinute n urma determinrii acestui parametru sunt prezentate n figura 4.2.2.

941.61

Clasa de calitate

C B A
0
149.15

290.48

51.61

0 20

0 40

0 60

0 80

0 00 1

Figura 4.2.2 Valorile medii pentru numrului total de germeni n funcie de clasa de calitate Cu privire la numrul total de germeni (figura 4.2.2), n cazul probelor de lapte de bivoli prelevate din diverse exploataii familiale din judeul Slaj, dup cum se poate observa au existat i probe care se ncadreaz n clase de calitate mai slabe C i D; una dintre cauzele existenei unui numr de germeni i unui numr de celule somatice mai mare este i faptul c mulsul se realizeaz manual i n condiii care nu corespund din punct de vedere igienic. Cu privire la ncadrarea principalilor parametrii de calitate ai laptelui de bivoli pe clase de calitate, cele mai importante componente i cu implicaii profunde sunt numrul total de celule somatice, precum i numrul total de germeni (tabelele 4.2.1 i 4.2.2).

Tabelul 4.2.1 Valorile medii i variabilitatea pentru principalii indici n funcie de clasa de calitate a laptelui de bivoli din judeul Slaj
N xsX Grsimea V% (%) 12 xsX V% xsX 16 V% xsX 22 V% xsX V% 8.020.02 0.94 7.920.19 9.35 7.360.34 22.02 7.530.07 5.03 Proteina (%) Clasa de calitate A Punct Lactoza SUN (%) ngh. (%) (C) 0.534 -1.70 0.530 -0.92 1.054 -1.87 -1.04 -0.96 NCS (mii/ml) NTG (mii/ml)

4.700.04 4.790.03 10.740.06 2.96 1.94 1.78 Clasa de calitate B

21822.90 63.04 411.1623.31 24.71 517.1363.06 58.48

52.144.32 49.70 149.1521.38 57.35 290.4830.34 50.09

4.620.04 4.710.03 10.700.05 3.75 4.500.18 20.45 4.550.91 5.03 2.94 2.0 Clasa de calitate C 4.630.21 10.470.06

26

21.85 2.49 Clasa de calitate D 5.650.05 10.550.05 6.02 2.53

768161.63 941.6123.28 50.03 12.61

n tabelul 4.2.2 sunt prezentate nsuirile calitative ale laptelui de bivoli i ncadrarea pe clase de calitate. n cazul fermei Mesendorf, probele recoltate au fost supuse examenului fizico-chimic i microbiologic i ncadrate n dou clase de calitate i anume un numr de 36 de probe sunt ncadrate n clasa de calitate A i un numr de 19 probe sunt ncadrate n clasa de calitate B. Sub raportul principalelor componente studiate, putem trage concluzia c n cadrul fermei Mesendorf (tabelul 4.3.2) nsuirile calitative ale laptelui de bivoli sunt superioare celor din judeul Slaj (tabelul 4.3.1), deoarece sunt ncadrate doar pe dou clase de calitate, acest fapt fiind datorat stimulrii mulgtorilor din cadrul fermei din punct de vedere

financiar, care sunt remunerai n funcie de clasa de calitate n care este ncadrat laptele. n figura 4.2.3 sunt reprezentate nsuirile fizico-chimice pentru probele de lapte care au corespuns din punct de vedere microbiologic clasei de calitate A i prezint urmtorele valori: pentru grsime (%): 8.020.02, protein (%): 4.700.04, lactoza (%): 4.790.03, S.U.N. (%): 10.740.06, punctul de nghe: -0.534C.

Substanta uscata negrasa (%) Lactoza (%) Proteina (%) Grasimea (%)

10.74

4.79

4.70

8.02

Figura 4.2.3 Variabilitatea parametrilor fizico-chimici pentru clasa de calitate A

15

10

15

10

5
7.92 4.62 4.71

10.7

0 Grasimea (%) Proteina (%) Lactoza (%) SUN (%)

Figura 4.2.4 Variabilitatea parametrilor fizico-chimici pentru clasa de calitate B Parametrii fizico-chimici pentru probele examinate i care din punct de vedere microbiologic au fost ncadrate n clasa B, ca urmare a NTG-ului i NCS-ului, prezint urmtoarele valori: grsimea (%): 7.920.19, proteina (%): 4.620.04, lactoza (%): 4.710.03, S.U.N. (%): 10.700.05, punctul de nghe: -0.530C, valori comparabile cu datele din literatur.

15

10

5
7.36 4.50 4.63

10.47

0 Grasime/Fat (%) Proteina/Protein (%) Lactoza/Lactose (%)SUN/Unfat dry substance (%)

Figura 4.2.5 Variabilitatea parametrilor fizico-chimice pentru clasa de calitate C Cercetrile realizate pe lapte de bivoli de ctre (Fundora i col., 2001 i Lindmark-Mansson i col., 2003) indic urmtoarele valori: media pentru grsime (%) este de 7.591.31, proteina (%): 4.860.44 i lactoza (%): 4.740.20.
15

10

5
7.53 4.55 5.65

10.55

0 Grasimea (%) Proteina (%) Lactoza (%) SUN (%)

Figura 4.2.6 Variabilitatea parametrilor fizico-chimice pentru clasa de calitate D

n figurile 4.2.5 i 4.2.6 sunt prezentai parametrii fizico-chimici pentru probele de lapte de bivoli ncadrate n clasele de calitate C i D pe baza examenului microbiologic. Pentru probele de lapte de bivoli provenite de la ferma TNP Mesendorf, media pentru grsime (%) a fost ntre 7.420.11 i 8.080.03, pentru protein (%) a fost ntre 4.730.01 i 4.810.03, pentru lactoz (%): 4.850.01 i 4.840.02, pentru SUN (%): 10.610.04 i 10.800.04, punctul de nghe: -0.540 i -0.530C. Tabelul 4.2.2 Valorile medii i variabilitatea principalilor indici calitativi pentru laptele de bivoli de la ferma TNP Mesendorf
N xsX V% 36 xsX V% xsX 19 V% 4.25 Grsimea Proteina 4.730.0 1 1.54 4.810.0 3 2.49 Clasa de calitate A SUN Lactoza 4.850.01 1.54 4.840.02 1.93 10.610.04 2.23 10.800.04 1.54

Punct ngh. -0.540 -1.49 -0.530 -4.39

NCS 180.7132.31 71.52 395.4143.97 44.48

NTG 51.616. 13 41.18 116.89 23.07 86.04

7.420.11 9.26 8.080.03

Clasa de calitate B

4.2.3 Determinarea numrului de drojdii i mucegaiuri

Drojdiile i mucegaiurile sunt foarte rspndite n natur, prezena lor indic condiii necorespunztoare n timpul procesului tehnologic de obinere i pe parcursul depozitrii, iar aciunea lor

asupra alimentelor modific aspectele organoleptice (Gu Camelia i col., 2005). Tehnica de lucru: nainte de a se realiza nsmnarea n mediile de cultur, probele de lapte de bivoli au fost omogenizate. Se recolteaz 1 ml care se introduce n 10 ml ser fiziologic steril i se obine o diluie de 101. Pentru probele din brnza telemea s-au cntrit 10 g care a fost uniformizat, ntr-un mojar steril, amestecat cu 90 ml soluie citrat de sodiu 2% steril ca diluant, se nclzete proba la 47C pn la realizarea unei suspensii omogene, diluie de 101. Dup realizarea diluiei, din fiecare diluie se pune cte 1 ml n cte 2 plci Petri, inclusiv din proba nediluat i se adaug mediul topit i rcit la 45C, dup care se realizeaz o rotire a plcilor. Dup solidificare se incubeaz la tempertura de 20C, la ntuneric, 5 zile. Numrarea coloniilor drojdiilor i mucegaiurilor se face pe toat suprafaa plcilor, dar sunt luate n considerare doar plcile care au ntre 10 i 100 colonii. Se calculeaz media aritmetic a numrului de colonii gsite n cutiile Petri inoculate din aceiai diluie. Numrul calculat se nmulete cu factorul de diluie, exprimarea se face n numr de colonii/ml produs.

4.2.4 Determinarea prezenei i a numrului de stafilococi coagulazo pozitivi

Stafilococii sunt bacterii Gram pozitive, de form cocoid, grupai n ciorchine. n microbiologia alimentelor interesul este axat pe

speciile Stafilococus aureus, care produc o enterotoxin termostabil i este evideniat prin testul coagulazei. Stafilococii sunt medii care prefer mediile hipersaline (7.5-15.0% NaCl) (Gu Camelia i col., 2005). Tehnica de lucru: pentru determinarea stafilococilor coagulazopozitivi, s-au inoculat dup omogenizarea produsului din fiecare diluie (101) cte 1 ml n 3 tuburi cu mediul de mbogire Chapmann lichid, de culoare roie i se incubeaz la 37C, 24 de ore. Stabilirea numrului de stafilococi se face folosind tabelele Mac-Crady. Din fiecare tub n care exist dezvoltare microbian, se face un frotiu pentru constatarea stafilococilor i se fac treceri cu ansa pe mediul turnat n plci, prin striere i apoi se incubeaz. Coloniile caracteristice de stafilococi dezvoltate de mediul selectiv se supun testului de patogenitate, testul de hemoliz. Rezultate: cu privire la stafilococi coagulazo pozitivi n probele de lapte de bivoli luate n studiu, nu a fost confirmat prezena lor.

4.2.5 Izolarea i identificarea Salmonellelor

Salmonella este o enterobacterie patogen pentru om i animale, existnd peste 2000 de serotipuri. Toxiinfeciile produse de germenii din genul Salmonella sunt mai frecvente n sezonul cald, deoarece temperatura este un factor favorizant al dezvoltrii i multiplicrii lor (Gu Camelia i col. 2005).

Modul de lucru: Pentru evidenierea salmonellelor sunt necesare urmtoarele etape: Etapa de prembogire: din proba de lapte de bivoli se cntresc 25 de ml, iar pentru brnza telemea se cntresc 25 g pentru analiz. Probele se introduc n 200-225 ml ap peptonat tamponat i se incubeaz la +35C, timp de 16 h. Etapa de mbogire: acest etap se realizeaz pe urmtoarele medii de cultur: bulion cu verde malachit i clorur de magneziu i bulion selevit cistin. Etapa de izolare selectiv: se realizeaz pe medii solide Edel i Kampelmacher. Etapa de confirmare: din plcile cu colonii prezumptive de a fi Salmonella se selecteaz 5 colonii caracteristice de Salmonella i se nsmneaz n cte o eprubet cu agar nclinat TSI i LIA. nsmnarea se face prin nepare i striere n pant, i are loc incubarea la +37C, timp de18 h. n cazul prezenei Salmonellei se observ pe mediul TSI apariia culorii roii; de-a lungul nepturii coloanei se observ sau nu prezena H2S prin prezena sau absena culorii negre. Pe mediul LIA, prezena salmonellelor se examineaz prin:coloana violet purpurie; partea superioar negricioas. Coloniile care au rspuns tipic pentru salmonella de pe mediile de izolare se supun aglutinrii.

Tabelul 4.2.3 Rezultatele obinute la examenul microbiologic al laptelui de bivoli

Bacteriile Parametrii coliforme/ml statistici Nr. total de drojdii i mucegaiuri/g NTG aerobi mezofili x 5 10 /ml Stafilococ Salmonella/25 Bacilus Coagulazo ml cereus Pozitiv/ml

23

ssx s v

4.960.47 2.04 41.17

633.4720.01 4.460.11 87.22 0.48 13.17 10.83

Absent

Absent

Absent

Escherichia coli a fost prezent n 3 probe din cele 23 de probe de lapte de bivoli analizate i a avut urmtoarele valori: 1.5 E.coli x 103/ml, 1.1 E.coli x 103/ml, respectiv 2.9 E.coli x 103/ml. n urma determinrii parametrilor microbiologici din laptele de bivoli media pentru bacteriile coliforme a fost de 4.960.47, pentru numrul total de drojdii i mucegaiuri a fost de 633.4720.01, pentru NTG aerobi mezofili a fost de 4.460.11. n ceea ce privete Salmonella, Stafilococul coagulazo pozitiv i Bacilus cereus, acetia au fost abseni. Bacteriile coliforme n laptele de bivoli la rasa Murrah au fost de 3.950.07, Escherichia coli de 1.800.23 i Streptococus aureus de 1.800.23, fungii 1.330.46; la rasa Nili-Ravi: bacteriile coliforme 2.160.30, Escherichia coli 1.800.23, Streptococus aureus 1.950.36, fungii de 1.330.46 (Bei-Zhong Han i col., 2006). Aminah M. i col., 2004, n cazul laptelui de bivoli obine o medie de 1.68 0.19 la Streptococus aureus comparativ cu media de 4.20.02 n cazul laptelui de vac (Han Sesenna i col., 2005).

Desmasures B. i col., n 1997 n urma cercetrilor efectuate asupra laptelui de bivoli au obinut o medie pentru bacteriile coliforme de 2.420.12 i 1.530.17 pentru Escherichia coli.

4.2.6 Evidenierea Bacteriilor coliforme i Escherichiei coli

4.2.6.1 Material i metod

Bacteriile coliforme: sunt bacterii care la temperatura de 30, 35, 37oC, provoac fermentarea lactozei cu producere de gaz. Bacteriile coliforme se cultiv, conform SR ISO 5541/1; SR ISO 5541/2 pe medii de mbogire selective: bulion cu triptoz i lauril sulfat (ce poate fi mediu dublu concentrat sau mediu simplu concentrat), BBLV (bulion lactozat cu bil i verde briliant) simplu i dublu concentrat, mediu ce se introduce n eprubete cu tub Durham pentru a putea urmri degajarea de gaze. Din produsul omogenizat i din diluiile acestuia se

nsmneaz cte 1 ml ntr-o eprubet ce conine unul din mediile selective enumerate mai sus. n cazul produselor solide (cnd se verific prezena n 1 g produs), din fiecare diluie (101) se inoculeaz 1 ml ntr-o eprubet cu 10 ml mediu BBLV dublu concentrat.

Dezvoltarea unei culturi bacteriene cu gaze n tubul de fermentaie, format exclusiv din bacili sau cocobacili Gram negativi (frotiu), se consider prezen de bacterii coliforme. n funcie de diluii sau de numrul de eprubete din fiecare diluie care conin bacterii coliforme, se raporteaz prezena sau absena la cantitatea de produs sau numrul de bacterii coliforme pe g/ml produs. Numrul de tuburi pozitive din fiecare diluie luat n calcul conduce la o formul care prin comparare cu scara Mac-Crady, d numrul probabil de bacterii coliforme, pe care dac este cazul o nmulim cu 10, 100, 1000, n funcie de cte diluii am neglijat pn la realizarea formaiei. Un exemplu reprezint cel prezentat mai jos. Formaia 2 2 1. n cazul nostru i corespund 3 germeni coliformi/g, pe care-i nmulim cu 100 deoarece am neglijat dou diluii (10-1, 10-2) i nc cu 10 deoarece vrem s aflm produsul nediluat. Cifra obinut se compar cu numrul de coliformi admii/g, la sortimentul de produs.

Escherichia coli. Din cultura dezvoltat cu ajutorul unei anse bacteriologice sterile, se striaz pe agarul Levine. Plcile nsmnate se incubeaz la 35-37oC, 24 h. Coloniile caracterisice pentru Escherichia coli nchise la culoare cu luciu metalic verzui sunt considerate E. coli prezumptive. Pentru confirmare din dou sau mai multe colonii caracteristice se nsmneaz o eprubet cu BBLV sau bulion EC sau bulion triptoz i lauril sulfat cu tuburi de fermentare; o eprubet cu ap triptonat i un agar nutritiv nclinat. Aceste eprubete se incubeaz la 45 oC timp de 24 h, considerndu-se confirmat Escherichia coli cnd s-a nregistrat producere de gaze n tubul Durham, reacia indolului pozitiv (dup adugarea reactivului Erlich-Kovacs n apa triptonat) i creterea de colonii specifice pe agarul nclinat (colonii mici de 2-6 mm diametru, opace, nepigmentate, de tip S). De pe mediul cu agar nclinat se face o seroaglutinare rapid pentru identificarea antigenului somatic O cu seruri polivalente i teste biochimice. Escherichia coli este specia reprezentativ a genului

Enterobacteriaceae, care este capabil s se dezvolte att n condiii anaerobe, ct i n condiii aerobe. Este capabil s utilizeze carbon i azot ca i surs de a-i satisface nevoile energetice si metabolice. Astfel, E. coli se poate multiplica, poate crete n medii care conin numai glucoz, amoniu i sruri minerale. E.coli se dezvolt pe o varietate de medii care conin combinaia de carbon cu alte substane; ns prefer mediile cu glucoz. Glucoza

este transportat de-a lungul membranei citoplasmatice (Konings, W.N., 1981). Tabelul 4.2.4 Metode de determinare a parametrilor microbiologici Parametrii Metode de determinare microbiologici Numr de bacterii coliforme Numr de Escherichia coli SR ISO 5541/1 sau SR ISO 5541/2 sau STAS 6349/4 SR ISO 11866 STAS 6349/4

Izolarea E. coli O157:H7 din alimente este mult mai dificil din cauza prezenei n numr mic. Dat fiind doza minim infectant extrem de redus, specialitii americani accept folosirea numai a metodelor foarte sensibile, capabile s detecteze bacteria i din alimentele contaminate cu 3 celule bacteriene/g produs. n acest scop sau pus la punct mai multe metode de lucru care toate includ o faz de mbogire, una de izolare selectiv i alta de identificare i confirmare (Kornberg H.L, 1966). Cercetrile au ca scop stabilirea lui Escherichia coli n laptele de bivoli, materie prim, de la ferma TNP Mesendorf, lapte care a fost meninut la o temperatur de 0-4C, pn n momentul analizei. Mod de lucru: din fiecare prob de lapte de bivoli s-au efectuat analize specifice pentru determinarea prezenei bacteriilor coliforme i ulterior a Escherichiei coli. Apoi din fiecare prob de lapte de bivoli materie prim s-au repartizat cte 10 ml lapte n eprubete;

dup care s-au nsmnat cte 1, 2 i respectiv 3 ml de Escherichia coli-cultur pur obinut n prealabil. Obinerea culturilor pure de microorganisme din specia Escherichia coli a fost pentru prima dat izolat i descris de pediatrul german (Theodor Escherich, 1885), care a demonstrat existena ei ca musafir obinuit al intestinului copilului. Pentru a marca tropismul su pentru colon, autorul a numit aceast bacterie Bacterium coli commune. n 1919, Castelani i Chalmers i dau numele definitiv de Escherichia coli, ca un omagiu adus lui Escherich. Escherichia coli: cultura pur de microorganisme (Escherichia coli), este prezent sub form liofilizat n anse microbiologice. Se procedeaz ntr-o prim etap la rehidratarea lor prin cultivarea n bulion i se incubeaz 24 h la 37oC.

Figura 4.2.7 Culturile pure nsmnate n bulion

n cele ce urmeaz se realizeaz izolarea selectiv din diferite diluii ale culturii pure pe agar Levin (diluii i incubare 24 h la 37oC). Stabilirea numrului de bacterii coliforme se face folosind tabelele Mac-Crady. Eprubetele cu mediul nsmnat se incubeaz la 37 oC, 2448 h. Dezvoltarea unei culturi bacteriene cu gaze n tubul de fermentaie, format exclusiv din bacili sau cocobacili Gram negativi (frotiu), se consider prezen de bacterii coliforme. n funcie de diluii sau numrul de eprubete din fiecare diluie care conin bacterii coliforme, se raporteaz prezena sau absena la cantitatea de produs sau numrul de bacterii coliforme pe g/ml produs. Laptele reprezint un mediu de cultur complet i foarte favorabil pentru numeroase microorganisme sau mediu convenabil de

supravieuire a altor microorganisme care nu se pot multiplica n lapte, dar care l pot polua (M. tuberculosis, M. bovis, rickettsii, virusuri) (Brzoi D., 2002).

4.2.6.2 Medii de cultur, reactivi i soluii de diluare

1. Ser fiziologic, clorur de sodiu 8.5 ml; ap distilat 1000 ml. Se ajusteaz la pH 7.2 cu NaOH 1/N (aprox.175 ml) i se aduce volumul la 1 litru cu ap distilat. Aceasta reprezint soluia de lucru, care se repartizeaz n recipiente de lucru i se sterilizeaz, la 121 oC, 15 minute.

2. Bulion - bil - lactoz - verde briliant (BBLV). Simplu concentrat: pepton 10 g, lactoza 10 g, bil uscat de bou 20 g, verde briliant 0.0133, sau 13.3 ml soluie alcoolic 1o/oo, ap distilat 1000 ml la pH de 7.3; dublu concentrat: pepton 20 g, lactoza 20 g , bil uscat de bou 40 g, verde briliant 0.0266, sau 26.6 ml soluie alcoolic 1 o/oo, ap distilat 1000 ml la pH de 7.3. Cele 20 g bil uscat de bou se pot nlocui cu 200 ml bil lichid, scznd la 800 ml cantitatea de ap. La apa distilat se adaug peptona i bila de bou. Se fierb pn la dizolvare, se ajusteaz pH-ul, se filtreaz prin vat ntr-un balon n care s-au pus lactoza i verdele briliant. Se repartizeaz n eprubete cu tuburi de fermentaie. Se autoclaveaz 20 min. la 110oC. Interpretare: fermentarea cu gaze a lactozei: apariia gazelor n tubul de fermentaie. Determinarea speciei Escherichia coli. Din eprubetele pozitive pe mediul BBLV, se striaz cu ansa pe suprafa agarul Levine turnat n placa Petri. Plcile nsmnate se incubeaz la 35-37oC, 24 h. Coloniile caracteristice pentru Escherichia coli, nchise la culoare, cu luciu metalic verzui sunt considerate E. coli prezumptive. Pentru aprecierea cantitativ a Escherichiei coli se nsmneaz n mediul Levine din fiecare diluie pozitiv pentru bacteriile coliforme i se incubeaz la 3537oC, 24 h. Se determin apoi numrul de diluii la care s-au obinut rezultate pozitive, respectiv coloniile cu irizaie metalic verzuie. Se citesc rezultatele finale cu ajutorul tabelului Mac-Crady.

Pentru confirmare, din dou sau mai multe colonii caracteristice se nsmneaz o eprubet cu BBLV sau bulion triptoz i lauril sulfat cu tuburi de fermentare; o eprubet cu ap triptonat i un agar nutritiv nclinat. Aceste 3 eprubete se incubeaz la 45oC timp de 24 h, considerndu-se confirmat Escherichia coli cnd s-a nregistrat producere de gaze n tubul Durham, reacia indolului pozitiv (dup adugarea reactivului Erlich-Kovacs n apa triptonat) i creterea de colonii specifice pe agarul nclinat (colonii mici de 2-6 mm diametru, opace, nepigmentate de tip S). Soluii de diluare, medii de cultur i reactivi: agar cu lactoz eozin - albastru de metilen (agar Levine): pepton 10 g, proteoz 10 g, fosfat dipotasic 2 g, agar 15 g, eozin yellow 0.4, albastru de metilen 0.065, ap distilat 1000 ml, pH 7.1 Se prepar mai nti mediul de baz care conine pepton, fosfat, agar i ap n cantitile din reet. Se repartizeaz cte 100-200 ml n recipiente adecvate i se autoclaveaz. Se poate pstra timp ndelungat la rece i ntuneric. Mediul de baz poate conine (dup unele formule) i lactoz. n acest caz autoclavarea se face 20 minute la 115 oC. n momentul folosiri, la 100 ml mediu de baz se adaug: 5 ml soluie 20% lactoz (sterilizat prin filtrare); 2 ml eozin galben sol. 2% i 1.3 ml albastru de metilen, soluie 0,5%. Amestecul se agit pentru omogenizare i se toarn n plci. Mediul gata de folosit are culoarea roz-rou cu reflexe violet. Interpretare: coloniile de Escherichia coli au diametrul de 2-3 mm, sunt de culoare verzuie, cu reflexe metalice i centrul mai nchis,

semitransparente sau netede de tip S, nepigmentate, cu miros amoniacal. Celelalte bacterii coliforme: colonii de culoare albastr nchis, fr luciu metalic sau colonii atipice, opace, mucoase, roze, cu centrul gri-brun. Agar TSI (triple sugar iron agar) (Kligler modificat): extract de carne 3 g, extract de drojdie 3 g, pepton bacto 15 g, proteoz pepton 5 g, lactoz 10 g, zaharoz 10 g, glucoz 1 g, sulfat feros 0.2 g, clorur de sodiu 5 g, tiosulfat de sodiu 0.3 g, agar 15-20 g, fenol rou 0.024 sau 2.4 ml din sol. 1%, ap distilat 1000 ml, pH 7.4. Se repartizeaz cte 10-15 ml n eprubete i se sterilizeaz. Mediul are culoare rocat. Se pstreaz la rece i ntuneric. n momentul folosirii, se topete i se repartizeaz aseptic, cte 3-4 ml n eprubete de reacie sterile, care se nclin imediat n aa fel nct prin solidificare, mediul s formeze coloan nalt i pant scurt. Se nsmneaz cu ansa coloana prin nepare i panta prin striere. Mediul turnat n eprubetele de reacie se va folosi n aceeai zi sau se poate pstra 2-3 zile la frigider. n acest ultim caz, eprubetele n care mediul s-a desprins de perete nu se mai folosesc. Interpretare: H2S prezent: coloana sau numai partea ei superioar de culoare neagr. Glucoza fermentat: coloana galben. Glucoza nefermentat: coloana roie. Lactoza i/sau zaharoza fermentate: panta galben. Lactoza i/sau zaharoza nefermentate: panta roie.

Mediu MILF: extract drojdie 3 g, glucoz 0.75 g, L-lizin 5, DL-triptofan 1, DL- fenilalanin 4, NaCl 5, Agar 3 g, bromcrezol purpur 1/500 (8 ml), ap distilat 1000 ml. Ingredientele se dizolv la cald i, dup ajustarea pH-ului la 6.8, mediul se repartizeaz n eprubete de 10/10 mm i se sterilizeaz 30 minute la 110oC. Dup sterilizare mediul trebuie s fie perfect limpede. Solidificarea se face n poziie vertical. nsmnarea se execut prin nepare pe toat nlimea coloanei i se incubeaz 24 h la 37 oC (Brzoi D., 1997). Exprimarea i interpretarea rezultatelor. Am constatat c n laptele materie prim sunt prezente bacteriile coliforme ntr-un procent mai mare, iar n laptele nsmnat cu Escherichia coli sunt prezente n procent mai sczut. Imaginile de mai jos prezint exemplele pozitive i negative privind numrul de bacterii coliforme i Escherichia coli, calculate conform tabelului Mac-Crady. Formaia de eprubete pozitive din cele trei diluii pentru probele studiate s-a calculat conform tabelului Mac-Crady. Aproximativ 95% din tulpinile de Escherichia coli sunt galaxolidaz i -glucuronidaz pozitive i sunt clasificate n biotipul 1, iar restul tulpinilor nu elaboreaz una sau ambele enzime menionate i astfel aparin biotipului 2. Avnd n vedere prevalena categoric a lui Escherichia coli biotipul 1 n totalul microorganismelor prezente n fecalele omului i animalelor, se consider a fi cel mai important i mai fidel pentru aprecierea contaminrii fecale a apei i alimentelor (Switzer R.L., 1977). Din aceleai motive, Comitetul American Naional pentru Criteriile Microbiologice la Alimente (NACMCF) a

introdus civa ani Escherichia coli biotip 1 (Escherichia coli generic) ca indicator igienico-sanitar i test obligatoriu pentru verificarea la nivelul abatoarelor a contaminrii fecale a carcaselor animalelor de mcelrie i ale psrilor. Acest test a fost introdus i n ara noastr i se regsete n Programul Naional al Aciunilor Strategice Sanitare-Veterinare. Proprietile biochimice cele mai generale sunt fermentarea glucozei, lactozei, trehalozei, manitei, producerea de lizin-decarboxilaz. Sunt unele excepii, astfel, tulpinile enteroinvazive sunt lactoz si lizindecarboxilaz negative, ceea ce nseamn c unele tulpini rmn nedecelabile prin metodele folosite curent n laboratoare. Majoritatea serotipurilor si tulpinilor de E. coli fermenteaz sorbitolul i produc galaxolidaz (excepie E. coli O157:H7), sunt indolpozitive, nu pot folosi citratul ca unic surs de carbon, dau recia roului de metil pozitiv i VP negativ (Baumberg, S., 1981).

Figura 4.2.8 Evidenierea lui Escherichia coli

Escherichia coli poate de asemenea s utilizeze i acizii grai, acetaii, ca i carbonul ca surs de energie (Nunn W.D., 1986). O parte din acetai, acizii grai trebuie s fie formai din catene cu mai puin de 12 atomi de carbon ca s poat carbonul fi o surs de energie. Aici este o condiie care trebuie supravegheat i coordonat de la nceperea sintezei a mai puin de cinci acizi grai, i anume enzimele oxidative (Kemp J.D., 1966). n privina posibilitii de a se dezvolta la temperatura de 4445C, mult timp s-a considerat c aceasta este una din nsuirile principale ale E. coli, care ar diferenia-o de Enterobacter, Klebsiella i alte enterobacterii (Jensen K. F., 1990). Se dezvolt bine n mediile uzuale la temperatura optim de 37C, n bulionul nutritiv produce turbiditate intens, uneori inel la suprafaa coloanei de mediu, iar n culturile mai vechi, depozit abundent, neaderent. Pe suprafaa agarului formeaz colonii cu diamnetrul de 2-6 mm, opace, nepigmentate, uor bombate, de tip S. Culturile degaj un miros amoniacal-fecaloid. Discuia rezultatelor: Am constatat c din probele analizate un procent mai mare este reprezentat de bacteriile coliforme comparativ cu specia Escherichia coli, n laptele de bivoli ca materie prim, astfel nregistrndu-se depiri ale valorii de referin din ORD. MS 975/98.

Prezena bacteriilor coliforme i a genului Escherichia coli (considerat indicator sanitar) denot deficiene igienice grave. Aceasta poate proveni din ap sau de la personalul manipulator, indicnd o contaminare fecal recent. nglobat n substraturi proteice i n grsime rezist i la temperaturi de pasteurizare. Escherichia coli este specia reprezentativ a genului

Enterobacteriaceae, care este capabil s se dezvolte att n condiii anaerobe ct i n condiii aerobe (Baumberg S., 1981). Este capabil s utilizeze carbon i azot ca i surs de a-i satisface nevoile energetice i metabolice (Kornberg, H.L., 1966). Escherichia coli se poate multiplica, poate crete n medii care conin numai glucoz, amoniu i sruri minerale (Nagatani, H., 1971). E. coli se dezvolt pe o varietate de medii care conin combinaia de carbon i alte substane; ns prefer mediile cu glucoz. Se constat c Escherichia coli se dezvolt foarte bine dac este ntr-o concentraie mare, la rece, la temperatura de refrigerare. Alte specii care aparin genului Escherichia sunt: E. adecarboxylata, E. blattae, E. fergusonni, E. hermanii i E. vulneris. E. adecarboxylata este un microorganism de culoare galben (Cole, J. A., 1968). Studiile recente au artat c E. adecarboxylata poate sa fac parte din grupul Enterobacter agglomerans-Erwinia i a fost ncadrat n noul gen Leclercia (Gyles, C. L., 1994).

81

Tabelul 4.2.5 Normele microbiologice conform OMS 975-1998 Numr StafiloBacBacterii Drojdii total de Esche- Salmonecoc BaciDenumirea terii sulfitoi 1 germeni richia lla coagullus alimentului colireduc- mucecoli 25 g cereus aerobi, lazo forme toare gaiuri mezofili pozitiv 1. Lapte crud Lapte consum 1 000000 300 000 1 000 100 abs abs 10 -

2.

10

Evidentierea microbiotei din laptele de bivoli cu ajutorul microscopului Axio Observer A

Pentru evidenierea microbiotei din laptele de bivoli s-a utilizat agar selectiv de lactabacili (7234). Acest agar inhib dezvoltarea lui Escherichia coli i Staphylococcus aureus, dar este posibil dezvoltarea lui Lactobacillus casei, Lactobacillus fermentum i Lactobacillus plantarum.

82

Figura 4.2.10 Aspectul probelor de lapte de bivoli dup nsmnare

83

Figura 4.2.11 a, b, c, d - Evidenierea microbiotei din laptele de bivoli

84

BIBLIOGRAFIE
1. Apostu, S., Mihaela Anca Rotar, 2000, Microbiologia produselor agro-alimentare, Ed. Risoprint, Cluj-Napoca. 2. Apostu, S., Mihaela Anca Rotar, 2003, Lucrri practice de Microbiologie alimentar, Ed. Risoprint, Cluj-Napoca. 3. Apostu, S., V. Stnescu, F. Chiril, Mihaela Anca Rotar, 2000, Evidenierea toxinelor de Escherichia coli prin tehnici in vitro, al VIIIlea Congres de Medicin Veterinar, Bile Felix, 431-432. 4. Aran, C.N., 2007, Analiza riscurilor i controlul punctelor critice n producerea i procesarea laptelui, Tez de doctorat, Bucureti. 5. Aurelia Pece, C. Coroian, Sanda Andrei, Adela Pintea, G. Muresan (2008). Evidence of a vitamin and total proteins from buffalo milk using high performance liquid cromatography. European Society for new Methods in Agricultural Research the XXXVIIIth Annual ESNA Meeting, Krakovia, Polonia. 6. Banu, C., Camelia Vizireanu, 1998, Procesarea industrial a laptelui, Ed. Tehnic, Bucureti. 7. Banu, C., i col., 2000, Biotehnologii n industria alimentar, Ed. Tehnic, Bucureti. 8. Banu, C., i col.,1999, Manualul inginerului din industria alimentar, Vol. II, Ed. Tehnic, Bucureti. 9. Baumberg, S., M.J. Carlile, J.F. Collins, and B.E.B. Moseley, 1981, The evolution of metabolic regulation. In: Molecular and Cellular Aspects of Microbial Evolution, Symposium of the Society for General Microbiology. Cambridge University Press, Cambridge, 229-272.
85

10. Brzoi, D., 1985, Microbiologia produselor alimentare de origine animal, Ed. Ceres Bucureti. 11. Brzoi, D., S. Apostu, 2002, Microbiologia produselor alimentare, Ed. Risoprint, Cluj-Napoca. 12. Brzoi, D., S. Meica, M. Negu, 1999, Toxiinfecii alimentare. Ed. Diacon Coresi.. 13. Brzoi, D., Sanda Lzrescu, Natalia Maier, Lidia Tulu, R. Korn, Olga Nuc, Florina Dumitrescu, 1997, Metode microbiologice pentru examenul de laborator al produselor alimentare de origine animal M.A.A. 14. Bei-Zhong, H., Y.Meag, L.Min, X. Ying-Yang, F. Zheng, Z.K.Qing, M.J.R. Nout, 2007, A survey on the microbiological and chemical composition of of buffalo milk in China. Science Direct, Food Control, 18, 742-746. 15. Bud, I., 1983, Contribuii la caracterizarea morfoproductiv a bubalinelor din nord-vestul Transilvaniei, Tez de doctorat, Cluj-Napoca. 16. Bud, I., 1984, Contribuii la caracterizarea morfoproductiv a bubalinelor din nord-vestul Transilvaniei, Rezumat al Tezei de doctorat, tipo Agronomia,, Cluj-Napoca. 17. Bud, I., C. Velea, Gh. Murean, N. Marcu, V. David, I. Baraba, 1983, Consideraii privind dinamica produciei de lapte la bubaline i influena sezonului de ftare asupra acesteia, Simpozionul Naional, Cluj-Napoca. 18. Bud, I., C. Velea, N. Marcu, Gh. Murean, 1979, Contribuii la cunoaterea exteriorului i produciei de lapte la bivolul din Transilvania, Buletin Institutul Agronomic, Cluj-Napoca, 65-68. 19. C. Heuer, H. J. Luinge, E.T.G. Lutz, Y. H. Schukken, J. H. van der Maas, H. Wilmink, and J.P.T.M. Noordhuizen, 2001, Determination of

86

Acetone in Cow Milk by Fourier Transform Infrared Spectroscopy for the Detection of Subclinical Ketosis, J. Dairy Sci. 84:575-582 20. C. Heuer, H. J. Luinge, E.T.G. Lutz, Y. H. Schukken, J. H. van der Maas, H. Wilmink, and J.P.T.M. Noordhuizen 2001, Determination of Acetone in Cow Milk by Fourier Transform Infrared Spectroscopy for the Detection of Subclinical Ketosis, J. Dairy Sci., 84:575-582. 21. Chindri, V., 1998, Calitile igienice ale laptelui de bivoli i implicaiile acestora asupra produselor lactate, Tez de doctorat, ClujNapoca. 22. Crea, V., G. Comnici, 1977, Unele probleme privind creterea i exploatarea bubalinelor, Revista de creterea animalelor, Bucureti, nr. 4. 23. Crea, V., M. Perhinschi, 1979, Cercetri privind producia de lapte la bivolie, Lucrri tiinifice, Institutul Agronomic, N. Blcescu (Zootehnie), Bucureti 20, 27-30. 24. Elisei, L., 1995, Cercetri privind nsuirile fenotipice ale populaiei de bubaline din zona Fgraului i posibilii de ameliorare, Tez de doctorat, Cluj-Napoca. 25. Elisei, L., P. Chichernea, 1991, Buffalo breeding in Brasov District, Third World Buffalo Congress, Sofia, 2, 432-435. 26. Georgescu, Gh., 1998, Calitile i defectele laptelui n concept european, Revista Agricultorul, Bucureti. 27. Georgescu, Gh., 2000, Laptele i produsele lactate, Editura Ceres, Bucureti. 28. Georgescu, Gh., 2003, Analiza laptelui si a produselor lactate, Ed. Ceres, Bucuresti. 29. Georgescu, Gh., 2005, Cartea productorului i procesatorului de lapte, Ed. Ceres, Bucureti, vol.4.

87

30. Gergescu, Gh., 1988, Laptele produs strategic, aliment complet i de nenlocuit, Revista cresctorilor de Taurine, nr. 3. 31. Guzan, Valentina, 1966, Tehnologia laptelui si produselor lactate, Tipografia central Chiinu. 32. Guzan, Valentina, G. Mustea, C. Banu, C. Vizireanu, 2001, Industrializarea laptelui, Ed. Tehnic Info Chiinu. 33. Gyles, C.L., 1994, Escherichia coli in domestic animals and humans, Departament of Veterinary Microbiology and Immunology, Ontario Veterinary College, University of Guelph, Canada, CAB International, 322. 34. Hansen, P. W., 1999, Screening of dairy cows for ketosis by use of infrared spectroscopy and multivariate calibration, J. Dairy Sci., 82:20052010. 35. Hansen, P.J., 1997, Effects of Environment on Bovine Reproduction, in Current Therapy in Company, 1, 478-480. 36. Hansen, P.W., Van Brackel, A.S., Garman, J., Norgaard, L.,1999, J. Dairy Sci. 82 1351-1360. AOAC International, 1995, Offficial Methods of Analysis, 16th ed. Arlington, VA, sec. 972.16. 37. Iurc, I.M., 1999, Produse i subproduse lactate industrializate i tradiionale, Ed. ICPIAF, Cluj-Napoca. 38. Jensen, K.F. and S. Pedersen, 1990, Metabolic growth rate control in Escherichia coli may be a consequence of subsaturation of the macromolecular biosynthetic apparatus with substrates and catalytic components, Microbiological Reviews, 54, 89-100. 39. Jensen, R.G., 2000, Fatty acids in milk and dairy products, in Fatty Acids in Food and their Health Implications, New York, 109-123. Large animal Theriogenology W.B. Saunders

88

40. Jensen, R.G., 2002, The compoyition of Bovine Milk Lipids, J. Dairy Sci., 85, 295-350. 41. Jensen, R.G., R.M. Clark, 1988, Lipid compoyition and properties, in Fundamentals of Dairy Chemistry, 3rd ed. N. Wong, ed. Van Nostrand Reinhold Company, New York, 171-213. 42. Kemp, J.D. and D.E. Atkinson, 1966, Nitrite reductase of Escherichia coli specific for reduced nicotinamide adenine dinucleotide, Journal of Bacteriology, 92, 628-634. 43. Konings, W.N., K.J. Hellingwerf, and G.T. Robillard, 1981, Transport across bacterial membranes, North Holland, 257-283. 44. Kornberg, H.L., 1966, The role and control of the glyoxylate cycle in Escherichia coli. Biochemical Journal,1-11. 45. Kornberg, H.L., 1966, The role and control of the glyoxylate cycle in Escherichia coli. Biochemical Journal,1-11. 46. Kwi-Hang, N.K., L., Hayas, J. Moxley, H. Monardes, 1986, Relationships between milk protein polimorphism and major milk constituents in Holstein-Friesian cows, J.Dairy Sci., 69: 22-26. 47. Mihaiu, M., 1995, Cercetri privind unii indici de calitate ai laptelui obinut n uniti de producie din Transilvania, Tez de doctorat, ClujNapoca. 48. Mihaiu, M., M., Romolica, 1998, Laptele si controlul calitatii sale, Editura Risoprint, Cluj-Napoca. 49. Mirean Vioara, Camelia Maria Rducu, Aurelia Pece, 2008, The variability components of the milk collected from different routs located in the country of Cluj, Jurnal Central European Agriculture, Poland, 51.

89

50. Nagatani, H., M. Shimizu, and R.C. Valentine, 1971,The mechanism of ammonia assimilation in nitrogen fixing bacteria, Archiv fr Mikrobiologie,164-175. 51. Nunn, W.D., 1986, A molecular view of fatty acid catabolism in Echerichia coli. Bacteriological Reviews 50, 179-192. 52. Pece Aurelia, Adela Pintea, Constantin Bele, Gheorghe Muresan, Cristian Coroian (2008). Determination of vitamin a in buffalo milk using HPLC method, Croatian symposium on agriculture with international participation, Opatija, Croaia, 43:763-765. 53. Pece Aurelia, C. Coroian, Ghiril Bianca, G. Muresan (2008). Study of the physico-chemical and microbiological parameters of cottage cheese obtained from buffalo milk. Simpozionul tiinific internaional

Performane i Competitivitate n Producia Animal, Iai. 54. Pece Aurelia, Coroian C., Ghiril Bianca, Murean G. (2008). Study on the separation through thin layer chromatography of the cholesterol in the buffalo milk originating in the mesendorf farm. Simpozionul tiinific internaional, Lucrri tiinifice Zootehnie i Biotehnologii, Timioara, 41(2):236-240. 55. Pece, Aurelia, Cristian, Coroian, Camelia, Rducu, Vioara, Mirean, Gheorghe, Murean, 2008, The study of the main quality parameters of the buffalo milk, Journal Central European Agriculture, Poland, 59. 56. Pucheanu, C., 2000, Cercetri privind cunoaterea unor parametri morfologici, fiziologici i productivi la bivolie, n relaie cu diferii factori de influen, Tez de doctorat, Bucureti. 57. Revista Standardizarea, 2006, Aplicarea voluntar a standardelor, treapt superioar n activitatea unei organizaii.

90

58. Rotaru, G., C. Moraru, 1997,H.A.C.C.P., Analiza riscurilor punctele critice de control, Editura Academic, Galai. 59. Rotaru, O., M. Mihaiu, 2003, Igiena veterinar a produselor alimentare, Ed. Risoprint, Cluj-Napoca, Vol. II., 116-117. 60. Switzer, R.L., 1977, The inactivation of microbial enzymes in vivo. Annual Review of Microbiology, 31, 135-157. 61. Velea C., 1990, Bubalinele in Romnia, prezent si viitor. Simpozionul actualitati si perspective in zootehnie, Buletinul U.A.S.M.V. Cluj-Napoca, pag. 345-350. 62. Velea, C, 1992, Program de ameliorare al rasei Romaneasc de bubaline, Buletinul U.S.A.C.N., pag., 219-224. 63. Velea, C. i col., 1985, ndrumtor pentru creterea i ngrijirea tineretului taurin. Ed. Ceres, Bucureti, 269. 64. Velea, C. i col., 1998, Proiectul programului naional de ameliorare a taurinelor. Simp.Realizri i perspective n zootehnie i biotehnologii agricole. USAMV Cluj-Napoca. 65. Velea, C., 1983, Tehnologia creterii bovinelor. Ed.Dacia, ClujNapoca, p. 584. 66. Velea, C., 1994, Principalele nsuiri pentru producia de lapte i de carne ale Rasei Romneasc de buabline, Buletin tiinific, U.S.A.M.V., Cluj-Napoca, 45-50. 67. Velea, C., 1999-2000, Producia, reproducia i ameliorarea taurinelor. Ed. Tehnic Agricol Bucureti, vol I , II,III. 68. Velea, C., 2003, Actualitate i perspectiv n creterea taurinelor n zona de centru i nord vest a rii. Simp. USAMV Cluj Napoca, vol. 58. 69. Velea, C., C. Cristea, V.David, M. Vomir, V. Trnc, M. Papiu, 1990, Principalele nsuiri ale produciei de lapte la o populaie valoroas de

91

bivolie din judeul Cluj. Simpozionul Actualiti i perspective n Zootehnie, USAMV Cluj-Napoca, vol. XVI. 70. Velea, C., G. Marginean, 2006, Actualitate si perspectiva in cresterea bubalinelor, Agrotehnica, Bucuresti. 71. Velea, C., Gh. Murean, I. Bud, N. Marcu, V. David, M. Vomir, M. Corleanu, A, Tplag, 1981, Stadiul i perspectivele creterii i exploatrii bubalinelor n Transilvania, Buletinul A.S.A.S. 72. Velea, C., I. Bud, A. Tplag, 1983, Creterea bivolului, Editura Ceres, Bucureti. 73. Velea, C., I. Bud, M. Corleanu, Murean Gh., Marcu N., David V., Vomir M., Tplag A., 1983, Estimarea produciei de lapte la bubaline prin metoda controlului diversificat, Buletinul I.A.C.N., Cluj-Napoca, 37. 74. Velea, C., I.Bud, M. Corleanu, Gh. Murean, N. Marcu, V. David, M.Vomir, 1983, Estimarea produciei de lapte la bubaline prin metoda controlului diversificat, Bul. I.A.C.N., Cluj-Napoca, 37, 178-180. 75. Velea, C., L. Elisei, C. Cristea, V. David, M.Vomir, V., Tranc,1990, Efectul sezonal asupra productiei de lapte la bivolite, Simpozionul Actualiti i perspective n Zootehnie, USAMV Cluj-Napoca, vol.XVI. 76. Velea, C., Mrgineanu, Gh., 2004, Producia, reproducia i ameliorarea taurinelor. Ed. Tehnic Agricol Bucureti, vol III. 77. Velea, C., V. David, V. Trnc, M. Vomir, M. Papiu, L. Elisei, G. Onaciu, Mirela Cadar, 1992, Populaii de bubaline cu nsuiri valoroase pentru producia de lapte, Simpozionul USAMV, Cluj-Napoca, vol. XVIII.
78. Velea, C. i col., 1998, Program de ameliorare a taurinelor din centrul i nord-vestul rii. Simp. Bazele tiinifice ale dezvoltrii produciilor animale. ASAS Bucureti.

92

ANEXE

93

94

95

96