SPECTROSCOPIA UV-VIS

2017
 Spectroscopia
• Reprezinta studiul interactiunii intre
materie si radiatia electromagnetica prin
absorbtie, emisie sau imprastiere
(scatterring)
• Tehnicile spectroscopice ofera informatii
calitative si cantitative despre ioni si
molecule
• Aplicabilitate in chimie, biochimie,
farmacologie, industrie alimentara
 1. Introducere

-Unde:
ν (nu) – frecventa (Hz)
c – viteza luminii (3 x 108 m/s sau 3 x 106)
λ – lungimea de unda (A, cm)
E – energia (J)
h – constanta lui Planck (6.63 x 10-34 J/s)
λ E
Diagrama energetica a unei molecule
 Legea Lambert –Beer

A=ε·l·c
Atenuarea unui fascicul de radiație la reflexia interfeței
probei, împrăștierea de către particule și absorpția
analitului A1-n = ε1·l·c1 + ε2·l·c2 + … = l Σ ε1c1

Unde:
T – transmitanta
A – absorbanta
P0 – intensitatea radiatiei incidente (I0)
P – intensitatea radiatiei transmise (I)
ε – absorbtivitate
l – drumul optic
c - concentratia
 Spectrofotometria UV-VIS

• Se bazeza pe abilitatea electronilor de a absorbi radiatie

cu lungime de unda corespunzatoare domeniului UV
(200-400 nm) si VIS (400-800 nm)
• Absorbtia se determina cu un spectrofotometru iar
rezultatul este un spectru de absorbtie
• Spectrele de absorbtie UV-VIS sunt de obicei largi si
contin un numar redus de peak-uri (maxime)
• Spectrul de absorbtie da si informatii structurale dar
metoda e folosita mai ales pentru analiza cantitativa
 Principiul spectrofotometriei UV-VIS

Orbital 

Orbital 
n  n 
E Orbital n

Orbital 


Orbital 

• Tranzitiile σ → σ* , caracteristice moleculelor saturate, E mare, λ < 200 nm

• Tranzitiile π → π* , caracteristice moleculelor cu duble legaturi (C=C, C=O,
C=N), λ = 170 - 250 nm
• Tranzitiile n → σ* (180-260 nm) si n → π* (270-370 nm), caracteristice
moleculelor cu heteroatomi si electroni neparticipanti
• Conjugarea a doi sau mai multi cromofori determina scaderea E necesare
tranzitiilor si cresterea λ
• Prezenta structurii vibrationale (structura fina)
 Tipuri de cromofori si tranzitii
Cromofor Compus λmaz (nm) Tip de tranzitie

C-C; C-H CH4, C2H6 125; 135 σ → σ*

C=O H3C-CO-CH3 188, 279 n → σ*

H3C-CHO 293

C-OH CH3OH 210 n → σ*

C-NH2 CH3NH2 230 n → σ*

C=C C2H4 165 π → π*

C=C C2H2 173 π → π*

C=C C6H6 280 π → π*

CONH2 CH3CONH2 208 n → π* şi π → π*

CN CH3CN 160 “

N=O CH3(CH2)3NO 271 “

NO2 CH3NO2 271 “

COOH CH3COOH 204 “

Spectrul 4-metil-3-penten-2-ona
 EFECTUL CONJUGARII ASUPRA λmax

max = 255 nm max = 314nm max = 380nm max = 480 nm (yellow)

ε = 215 ε = 289 ε = 9000 ε = 12500

- Cu cat conjugarea este mai extinsa, cu atat deplasarea batocroma

este mai puternica
 Modificari ale spectrelor de absorbtie

• Deplasare batocroma (spre rosu) – deplasarea λmax spre

lungimi de unda mai mari
• Deplasare hipsocroma (spre albastru) – deplasarea λmax
spre lungimi de unda mai mari
• Efect hipercrom – cresterea absorbantei
• Efect hipocrom – scaderea absorbantei
• Auxocromi – compusi (grupari) care nu prezinta tranzitii
electronice ca atare, dar atasate cromoforilor modifica
λmax sau intensitatea absorbantei
Exemplu izomeri cis beta-carotina
 Schema de principiu a unui
spectrofotometru cu dublu fascicul

Schema de principiu a unui

spectrofotometru cu fotodioda
Conditiile de liniaritate ale legii Lambert-Beer

• Solutiile trebuie sa fie diluate

• Solutiile trebuie sa fie transparente
• Solutiile sa nu prezinte fluorescenta
• Solutiile trebuie sa fie stabile din punct de vedere fotochimic (sa nu se
degradeze la lumina)
• Solutul sa nu reactioneze cu solventul
• Domeniul optim al valorilor absorbantei: 0,2-0,9
 catena polipeptidica

His

N N
H
Hem
H H
O

CH CH2 CH3

H3C CH CH2
N N
Fe2+
N N Globina
CH3
H3C
2 catene a = 141 de aminoacizi
CH2
2 catene b = 146 de aminoacizi
CH2
CH2 CH2

COOH COOH

HN

His
18
catena polipeptidica
 Pigmentul Benzile de absorbţie caracteristice
Oxihemoglobina 578 nm (în galben) şi 542 nm (în verde)
Hemoglobina redusă 555 nm (în verde)
Hematina În mediu acid: 639 nm, puternică şi 3 benzi
foarte slabe la 584, 543 şi 504 nm
În mediu bazic: 581 nm puternică şi 2 benzi
slabe la 621 şi 542 nm
Methemoglobina 633 nm, 578 nm şi 542 nm
Carboxihemoglobina 570 nm şi 539 nm