Biochimia stresului

oxidativ
Stresul oxidativ
 Se manifestă asupra celulelor ca o rezultanta
a 3 factori: - creșterea producerii de oxigen
- scăderea protecției cu
antioxidanti
- dificultăți în eliminarea efectelor
oxidative nocive.
 Dezechilibru între producţia

de specii reactive ale oxigenului

şi azotului şi capacitatea
antioxidantă a organismului. Antioxidanți

Prooxidanți
 Tulburările în starea de redox normală a
celulelor pot provoca efecte toxice prin
producerea de peroxizi și radicali liberi care
deteriorează toate componentele
celulei, inclusiv proteinele, lipidele
și ADN-ul.
 Radicali liberi
 Există două forme comune de radicali liberi: speciile reactive
de oxigen (ROS) și speciile reactive de nitrogen (RNS).
 Principala sursa de radicali liberi in vivo este respirația

aeroba, deși SRO sunt de asemeni produse de β-oxidarea

peroxizomală a acizilor grași, componentele xenobiotice
ale metabolismului
microsomal al citocromului
P450, timularea fagocitelor
de către agenti patogeni
sau lipopolizaharide,
metabolismul argininei și
enzime tisulare specifice.
Radicali liberi
 Sursele externe: radiațiile UV, metalele toxice, smogul,
aditivii alimentari chimici, fumul de țigară, poluanții
atmosferici și unele medicamente, solvenți industriali,
ierbicidele și pesticidele.
 În concentrații adecvate îndeplinesc funcții benefice în

corpul uman: - sunt implicate în nimicirea bacteriilor, astfel

asigurând protejarea organismului
-sunt mediatori ai fagocitozei, apoptozei,
reacțiilor de detoxifiere
-sunt implicate în căile de semnalare
hormonală necesare pentru menținerea homeostaziei celulare
în organism;
-reglează multe procese metabolice
celulare
-reglează expresia genelor
-oxidul nitric este implicat în relaxarea
musculaturii netede vasculare; în concentrații adecvate previne
Oxigenul
 În stare fundamentală are 2 electroni
nepereche (este un diradical).
 Cei 2 electroni nepereche au spini paraleli.
 Molecula de oxigen (O2) are reactivitate

minimă (chiar nereactiv) faţă de majoritatea

moleculelor organice care au electroni cu
spini opuşi.
Activarea
Absorbţia unei energii suficiente pentru a inversa
spinul unuia din electronii nepereche
Reducerea monoelectronică (univalentă)
Reducerea univalentă a oxigenului generează metaboliţi
oxigen-reactivi cu o mare toxicitate.

Schema reducerii univalente

a i formarea radicalilor liberi
ai oxigenului
Prooxidanți
Radicali liberi
 orice specie chimică liberă care conţine unul

sau mai mulţi nepereche

 o moleculă cu un nepereche într-un orbital

extern
Specii neradicalice
 specii care au un potenţial puternic oxidant
 specii care favorizează formarea unor

oxidanţi puternici
 Specii reactive ale oxigenului (ROS)
Radicals Non-Radicals
Anionul superoxid Peroxidul de hidrogen

Radicalul hidroxil Acid hipocloros

Radicalul peroxil Ozon

Radicalul alcoxil Singlet oxigen

Radicalul hidrodioxil Peroxinitril

Specii reactive ale azotului (RNS)

Radicals Non-Radicals
Oxidul nitric Peroxinitril
Dioxidul de azot
Radicalul superoxid
In vivo este produs atât enzimatic căt și nonenzimatic.
Sursele enzimatice includ:
 oxidaze NADPH situate pe membrana celulelor

polimorfonucleare, macrofagelor şi celulelor endoteliale

NAD(P)H oxidaza
NADPH + 2 2•⁻ + NADP⁺ + H⁺
 oxigenaze citocrom P450-dependente
 xantin oxidaza: conversia hipoxantină xantină acid
uric

xantin oxidaza
+ + + 2H⁺ + 2•⁻
Radicalul superoxid
Surse neenzimatice:
 un singur electron este transferat direct la oxigen de către

coenzime sau grupări prostetice reduse, sau de diverse

xenobiotice reduse în prealabil de diverse enzime
 lanţul respirator mitocondrial

dismutaze.
Cea mai mare parte din este
transformat în apă prin
intermediul complexului IV
mitocondrial şi doar o mică
parte este transformat în specii
reactive cu rol de semnalare
intracelulară, a căror acțiune
nocivă este blocată de enzimele
superoxid dismutaze.
Peroxidul de hidrogen
 Este produsă în special din radicalul superoxid prin
reducere monovalentă.
2•⁻ + 2H⁺ +
 Macrofagele şi neutrofilele produc
 Poate trece rapid prin membranele celulare.
 Este descompusă de catalază:
2 +
 Este extrem de dăunător asupra ADN-ului,
deoarece reactivitatea mai mică a peroxidului de
hidrogen oferă suficient timp pentru ca molecula să
se deplaseze în nucleul celulei, reacționând ulterior
cu macromoleculele de ADN.
Radicalul hidroxil
 Poate fi generat din reacţia peroxidului de hidrogen
cu un ion metalic redus.
+ + •OH +
 Este extrem de reactiv
 Îndepărtează imediat electronii din orice moleculă
aflată în calea sa, transformând-o într-un radical
liber și propagând astfel o reacție în lanț.
 Acesta poate deteriora practic toate tipurile de
macromolecule: carbohidrați, acizi nucleici
(mutații), lipide (peroxidare lipidică) și aminoacizi
(de exemplu conversia fenilalaninei în tirozină).
Radicalii peroxil
 sunt foarte importante în sistemele biologice,
fiind produşi fie din componenţii naturali fie
din contaminanţi externi.
 implicare în efectele radiaţiilor ionizante, în

procesele de îmbătrânire, în ischemie.

Oxidul nitric
 este generat din arginină în cataliza NO-sintazei

L-arginină + NADPH, L-cisteină + •NO + NAD

 este o moleculă lipofilă fără încărcătură electrică care
conține un singur electron pereche, care
reacționează cu radicalii superoxid și produce
peroxinitritul.
 peroxinitritul este un agent oxidant puternic care
este capabil să provoace dăune unei game largi de
molecule din celulă, inclusiv ADN și proteine.
Oxidul nitric
 Poate străbate distanţe considerabile şi trece uşor
prin membranele celulare,astfel încât este
considerat declanşatorul principal al ruperii
lanţurilor de AND.

MPO - Mieloperoxidaza
Oxidul nitric
 Acționează ca un mediator în funcția
vasculară, determinând dilatația vaselor de
sânge și relaxarea mușchilor netezi.
 În mod similar, participă la inhibarea

agregării plachetare (trombocitelor) și mai

servește ca neurotransmițător la nivelul
sistemului nervos.
Efectele ale stesului oxidativ
Leziuni ale lipidelor
 reacția radicalilor liberi cu lipidele pot avea loc la nivelul

membranelor celulare, bogate în acizi grași nesaturați.

 radicalii liberi au afinitate pentru electronii atomilor de

hidrogen din catena hidrocarbonată a acizilor grași,

determinând apariția unui radical hidrocarbonat.
 radicalul hidrocarbonat reacționează cu oxigenul

formându-se un radical peroxil.

 radicalul peroxil poate intra în reacție cu atomi de

hidrogen legați de atomii de carbon vecini, formând un

peroxid lipidic.
 peroxidul lipidic determină ruperea membranei celulare

şi distrugerea celulei.
Efectele ale stesului oxidativ
Leziuni ale proteinelor
 agregare, fragmentare, scindare, modificarea

unor grupe funcționale.

 consecințele lezării proteinelor celulare ca

răspuns la stresul oxidativ sunt pierderea

activității biologice a acestora cu alterarea
funcțiilor celulare.
 produșii oxidării proteice pot fi aldehide,

compuși ceto, compuși carbonilici, 3-

nitrotirozina etc.
Efectele ale stesului oxidativ
Leziuni ale ADN-ului
 ADN-ul poate fi lezat de către SRO prin modificări ale

bazelor, rupturi ale catenelor polinucleotidice,

pierderi ale purinelor, leziuni ale dezoxiribozei, şi, de
asemenea, prin afectarea sistemului implicat în
repararea ADN.
 radicalul hidroxil poate reacționa cu guanina,

formând un radical hidroxiguaninic.

 acesta se poate apoi transforma pe două căi:

- prin oxidare, ducând la formarea

hidroxiguaninei şi apariția de mutații genetice
- prin reducere, caz în care se formează o guanină
cu inel deschis, care blochează replicarea ADN
Antioxidanți
 Menținerea unei balanțe între oxidanți și
antioxidanți.
 Enzimatici sau nonenzimatici, antioxidanții

sunt substanțe care previn formarea

radicalilor liberi, îi caută și neutralizează sau
repară distrugerile cauzate de aceștia.
 Enzimele antioxidante: glutation peroxidaza,

catalaza, superoxid dismutaza şi altele.

 Molecule antioxidante: glutationul, vitamina E

şi C.
Sisteme antioxidante enzimatice
Superoxid dismutaza (SOD)
 este o metaloenzimă antioxidantă

2•⁻ + 2H⁺ +

Catalaza
 o enzimă a cărei activitate se desfășoară atât în celulele

plantelor, cât şi animalelor

2 +

Glutation peroxidaza și glutation reductaza

 sunt enzime selenium dependente ce asigură protecția

proteinelor, lipidelor şi a acizilor nucleici

 sunt localizate în mitocondrii şi citoplasmă

+ 2GSH GSSG +
GSSG + NADPH + H⁺ 2GSH + NAD
Exocompuşi cu acţiune antioxidantă
Vitamina C

 este efectivă împotriva radicalului superoxid,

peroxinitritului, apei oxigenate, acidului
hipocloros, oxigenului singlet, oxidanţi şi poluanţi
din aer, a oxidanţilor scăpaţi din neurofilele şi
macrofagele activate.
 are şi un rolimportant în regenerarea vitaminei E.
 protejează proteine, acizi graşi, ADN împotriva
oxidării
 în concentrații semnificative poate acționa şi ca
prooxidant, generând radicali care vor contribui la
amplificarea stresului oxidativ
Exocompuşi cu acţiune antioxidantă
Vitamina E (tocoferol)
 fiind liposolubilă, se poate insera în membrana

celulară şi poate proteja lipidele de peroxidare,

împiedicând propagarea lanţului de reacții
oxidative.
 Lucrează cuplat cu

vitamina C, SOD,
catalaza și
GSH-peroxidaza
Boli neurodegenerative
 boala Parkinson, boala Alzheimer, boala
Huntington, depresia, autismul și scleroza
multiplă.
 în Alzheimer leziunile oxidative joacă un rol

în pierderea neuronilor și progresia demenței.

 producerea B-amiloidului, un peptid toxic

regăsit adesea în creierul acestor pacienți,

este cauzat de stresul oxidativ și joacă un rol
important în procesul neuro-degenerativ.
Boli cardiovasculare
 oxidarea LDL în endotelul vascular este un
precursor al formării plăcilor.
 stresul oxidativ joacă un rol în cascada

ischemică datorată leziunii de reperfuzie a

oxigenului în urma hipoxiei.
 aceată cascadă include atât accidentele

vasculare cerebrale, cât și atacurile de cord.

Cancer
 speciile reactive produse în cadrul stresului
oxidativ pot provoca leziuni directe ale AND-
ului și, prin urmare sunt mutagene și pot să
suprime apoptoza și să favorizează
proliferarea, invazivitatea și metastazele.
 o formă frecventă de leziune este formarea

bazelor hidroxilate ale ADN, considerate un

eveniment important în carcinogeneza
chimică.
 acestea interferă cu creșterea celulară

normală prin cauzarea de mutații genetice și

alterarea transcripției normale a genelor.
Boala pulmonară
 astmul și boala pulmonară obstructivă cronică sunt
caracterizate de inflamație sistemică și locală
cronică și stres oxidativ.
 oxidanții joacă un rol și în declanșarea inflamației
prin activarea diferiților factori de transcripție
kinaze și redox.
Nefropatia
 nefrotoxicitatea anumitor medicamente precum:
ciclosporina, tacrolimus, gentamicina, bleomicina,
vinblastina este cauzată mai ales de stresul oxidativ
prin peroxidarea lipidelor.
 metalele grele și cele de tranziție care induc diferite
forme de nefropatie și carcinogenitate sunt
puternice surse de radicali liberi în corp.
Vă mulțumesc pentru atenție!