MULTIPLICAREA VIRAL

Virusurile se multiplic strict intracelular.

Multiplicarea viral este influenat:

potenialul infectant al tulpinii virale; susceptibitatea la infecie a celulei-gazd.

1. dsorbia la peretele celulei gazd; !. "enetrarea #n celul; $. %ecapsidarea &i migrarea acidului nucleic spre locul replicrii; '. (iosinteza componentelor virale; ). samblarea virionilor progeni &i maturarea acestora; *. Eliberarea virionilor progeni #n afara celulei.

Etapele multiplicrii virale:

MULTIPLICAREA VIRAL

Adsorbia

+ legarea particulei virale de receptori specifici de la nivelul membranelor membranelor celulare. . celulare - receptorii celulari au specificitate de specie e,: acidul neuraminic - ortom.,ovirusuri; ortom.,ovirusuri; /%' - 01V. - celula gazd este permisiv sau nepermisiv fa de o specie viral #n funcie de receptorii de pe membrana sa. Ptrunderea n celul: - Endocitoza 2virope,ia3: este captarea virusului #n interiorul unei vacuole. - 4uziunea: const #n fuzionarea #nveli&ului viral cu membrana celular celular &i #nglobarea virusului #ntr-un endosom. - 5ranslocarea: const #n simpla traversare de ctre virus a membranei celulare.

MULTIPLICAREA VIRAL

Decapsidarea:

+ eliberarea acidului nucleic din capsida viral distrugerea distrugerea capsomerelor prin aciunea proteazelor celulare. - #n funcie de specia viral: - la nivelul membranei celulare 2e,.: enterovirusurile3; - #n citoplasm 2e,.: po,virusurile3; - #n zona perinuclear 2e,.: adenovirusurile3. Dup decapsidare, acidul nucleic liber se deplaseaz spre locul unde va avea loc replicarea: - #n nucleu 2v. %67 cu e,cepia po,virusurilor3; - #n citoplasm 2v. 867 cu e,cepia virusurilor gripale3.

MULTIPLICAREA VIRAL

Biosinteza componeilor virali: pe baza informaiei genetice din 6 viral 6 progen &i proteine virale. - La virusurile virusurile ADN: - replicarea este semiconservativ; semiconservativ; - transcrierea mesa9ului ctre 86m #n nucleul celular:
etapa timpurie 2#nainte de replicarea %6.3 - transcrierea genelor :timpurii;7 cu 86polimeraze ale gazdei sinteza proteinelor :timpurii; ce pregtesc replicarea viral 2 %6polimeraze7 nucleaze3; nucleaze3; etapa tardiv 2dup replicarea %63 - transcrierea genelor :tardive ;7 pentru sinteza :tardive;7 proteinelor <tardive< ce vor intra #n componena capsidei.

- biosinteza biosinteza proteinelor virale #n citoplasm 2#n ribozomi3. - La virusurile ARN: ARN: - replicarea &i transcrierea genomului c=t &i sinteza proteinelor au loc n citoplasm 2e,cepie fac virusurile gripale3.

MULTIPLICAREA VIRAL

+ asamblarea 6 progen &i a proteinelor virale nou-sintetizate. La virusurile ADN: ADN: proteinele sintetizate sunt transportate din citoplasm #n nucleu7 unde are loc asamblarea. La virusurile ARN: ARN: asamblarea se produce #n citoplasm7 unde au au loc replicarea 86 &i sinteza de proteine.

Asamblarea i maturarea viral:

- liza celular 2e,.: picornavirusuri3; - nmugurirea nmugurirea n membrana celular 2e,.: param.,ovirusuri3; - exocitoz 2e,: 2e,: v. >epatitic (3. (3.

!liberarea virionilor pro"eni:

MORFOLOGIE VIRAL

#irionul - particula viral complet cu infectivitatea intact; constituie faza extracelular a unui virus7 care nu se poate reproduce independent de o celul vie. Pro"rese mari - microscopia electronic7 difracia razelor ?7 imunologia7 biologia molecular. $orma virusurilor - mare diversitate 2sferic e - gripale &i paragripale7 01V7 2sferice 01V7 cilindrice cilindrice - bacteriofagii7 v. v. mozaicul tutunului7 tutunului7 paralelipipedice paralelipipedice - v. variolic7 variolic7 filamentoase e v. Marburg7 Ebola7 7 cristaliforme v. >epatitei 7 #n form de obuz filamentoas Ebola - r>abdovirusuri3. r>abdovirusuri3. %rimea virusurilor: - de ordinul nanometrilor; - sunt ultramicroscopice; - sunt ultrafiltrabile; - variaz de la o familie viral la alta - o celul bacterian - peste !@@@ de virusuri; o celul animal sau uman peste )@.@@@.@@@.

STRUCTURA VIRAL
&tructura virionului:

- compact; - economic; - geometric; - net diferit de a altor microorganisme.

- Aenomul Aenomul viral 2nucleoid7 miez de acid nucleic3; - /apsid a viral; /apsida viral; - Bnveli&ul Bnveli&ul viral 2anvelop 2anvelop7 peplos3; - Enzime Enzime virale.

'omponentele virale:

STRUCTURA VIRAL

(enomul viral:

- #n centrul particulei virale; - conine %6 sau 86 dispus liniar7 circular sau #ncolcit. #ncolcit. - are structur polinucleotidic; - la ma9oritatea virusurilor7 este format dintr-o singur molecul de 6 monocatenar 2 %6 sau 863; 863; e,ist e,ist unele specii cu 6 bicatenar 2e,: reovirusuri - ! lanuri 867 legate complementar3; - mrimea mrimea sa se apreciaz #n: - daltoni daltoni - uniti de mas molecular 1 %alton + unitate de mas C egal cu masa atomului de 0 - nr. de nucleotide sau nr. perec>i de nucleotide7 e,primat #n Dilobaze 1 Dilobaz + 1@@@ nucleotide la monocatenare &i 1@@@ perec>i de nucleotide la bicatenare3;

STRUCTURA VIRAL
$unciile "enomului viral:

Bn acidul nucleic sunt inserate genele capabile s codifice sinteze de tip viral #n celula-gazd; "rincipalele funcii ale genomului viral: - depozitarea informaiei genetice virale; - infectivitatea - acizii nucleici intaci au capacitatea capacitatea de a se autoreplica c>iar #n absena celorlali constituieni; constituieni; particulele virale cu acid nucleic incomplet sau absent7 sunt incapabile de replicare autonom + virusuri defective 2e,.: virusul >epatitic 3.

STRUCTURA VIRAL

- #nvele&te genomul form=nd cu acesta nucleocapsida;

'apsida 2lb. gr.: kapsa = cutie3:

- este alctuit din elemente repetitive numite capsomere - sunt uniti polipeptidice 21-*37 asamblate prin legturi noncovalente; - compoziia c>imic a capsomerelor variaz variaz #n funcie de poziia la nivelul capsidei; - dispunerea spaial a capsomerelor #n 9urul genomului variaz #n funcie de familia sau specia viral; - este antigenic; - are funcie de protecie a acidului nucleic fa de diver&i ageni nocivi din mediu 2fizici7 c>imici &i biologici3; biologici3; - #n func ie de a&ezarea spaial a capsomerelor &i poziia lor fa de nucleotidele func din genom 3 tipuri de simetrie a capsidei. capsidei.

STRUCTURA VIRAL

- mai ales la v. v. cilindrice/filamentoase &i #nvelite; - nucleocapsida formeaz o spiral 2e,: ortom.,ovirusurile3. - v. mici sau mi9locii 2e,. picornavirusurile3; picornavirusurile3; - capsomerele capsomerele se dispun #n grupuri de ) sau * #n 9urul 6 icosaedru 2poliedru 2poliedru cu !@ de fee egale7 triung>iuri ec>ilaterale7 $@ de muc>ii &i 1! v=rfuri3 v=rfuri37 nr. nr. capsomere 6 + 1@ 2n13! + !; !; poate fi '!7 E!7 1*!7 !)!. !)!.

0elicoidal:

1cosaedric:

- v. mari 2po,virusuri7 bacteriofagii: bacteriofagii: capul - structur icosaedric; icosaedric; coada contractil este >elicoidal3.

/omple,:

- #nvele&te nucleocapsida la unele virusuri 2v. #nvelite sau nude3; nude3; - la ma9oritatea virusurilor7 este alctuit dintr-un strat lipidic dublu7 derivat din membrana celulei-gazd7 de care sunt ata&ate formaiuni virale specifice: - peplomere - spiculi glicoproteici glicoproteici la suprafaa virionilor av=nd rol de adsorbie &i penetrare a virusului #n celula celula-gazd 2e,.: >emaglutinina &i neuraminidaza virusurilor gripale7 glicoproteinele 1!@ &i '1 ale virusului 01V3; - factori de fuziune - activai de proteaze7 implicai #n iniierea infeciei; - proteina M - cptu&e&te la interior stratul lipidic7 are mas molecular mare &i rol #n pstrarea integritii virale; $unciile peplosului: - asigurarea stabilitii nucleocapsidei; nucleocapsidei; - aderarea virusurilor la celula int. int.

)nveliul viral 2anvelop, peplos * manta #n lb.gr.3:

STRUCTURA VIRAL

STRUCTURA VIRAL

!nzimele virale

- sunt puine puine 2nr. redus de gene3; gene3; - prezente doar la unele virusuri; - intervin #n diverse procese bioc>imice: bioc>imice: - transcriptaza - param.,ovirusuri7 reovirusuri; reovirusuri; - reverstranscriptaza - retrovirusuri; retrovirusuri;

- proteinDinaze - >erpesvirusuri7 po,virusuri; po,virusuri; - endonucleaze - v. v. oncogene; oncogene; - >idrolaze - e,.: po,virusuri7 reovirusuri; - neuraminidaza - lic>efiaz mucusul de la nivel respirator scindarea acidului neuraminic din glicoproteine ptrunderea virusurilor #n celule 2ortom.,ovirusuri7 param.,ovirusuri3 .

COMPOZIIA CHIMIC

Acidul nucleic:

- un singur tip 2 %6 sau 863; - #n genomul viral 2Amolecular + 17*-1*@ , 1@* %3; - are structur polinucleotidic - guanin + citozin poate fi de $)-F) G #n cazul virusurilor; - se poate dispune liniar7 circular sau #ncolcit; - poate fi monocatenar sau bicatenar; - poate avea polaritate pozitiv 2genomul serve&te ca 86 mesager3 mesager3 sau negativ 2spira complementar genomului serve&te ca 86 mesager3; - este depozitarul informaiei virale &i suportul infectivitii.

COMPOZIIA CHIMIC

Proteinele:

Proteinele structurale: structurale: - pot fi intim aderente de genom 2>istone3 sau fac parte din structura capsidei &i a peplosului; - proteinele capsidale sunt organizate sub forma capsomerelor; - proteinele din peplos sunt glicozilate &i fac parte din structura peplomerelor; peplomerelor; - proteina M care cptu&e&te stratul lipidic la interior; Proteinele +uncionale: +uncionale: - sunt enzime prezente doar la unele virusuri: virusuri: transcriptaz7 reverstranscriptaz7 proteinDinaze7 endonucleaze7 >idrolaze7 etc.37

COMPOZIIA CHIMIC

- intr #n structura anvelopei virale; - provin din membrana celulei-gazd; celulei-gazd; - rezult din procesul de #nmugurire care precede eliberarea virusului progen; - sunt dispuse sub forma unui strat dublu; - la nivelul lipidelor sunt ata&ate formaiunile virale specifice: specifice: - peplomerele; peplomerele; - factorii de fuziune; fuziune; - proteina M. M.

Lipidele:

CULTIVAREA VIRUSURILOR

'ultivarea viral:

Virusurile nu pot fi cultivate pe medii acelulare deoarece sunt particule acelulare7 fr ec>ipament enzimatic propriu7 inerte metabolic &i parazite absolute.

/ultivarea virusurilor e posibil numai #n sisteme biologice vii7 ca &i protozoarele parazite &i bacteriile obligatoriu intracelulare. - Histemele biologice pentru cultivare viral: - culturile celulare; - oule embrionate; - animalele de laborator.

CULTURILE CELULARE

&copurile utilizrii: - diagnosticul de laborator al virozelor; - prepararea unor vaccinuri virale; - cercetare &tiinific biologia biologia molecular molecular a virusurilor. Alctuire: - e,plante <in vitro; de celule aflate #ntr-un mediu nutritiv; nutritiv; celulele vii provin din esuturi umane sau animale; mediile nutritive sunt soluii apoase care conin substane nutritive7 nutritive7 un sistem tampon cu p0 F7'7 un indicator de p07 p07 ser fetal de bou )-1@ G7 G7 antibiotice &i antifungice. antifungice. ,ipuri: - culturi primare 2celule 2celule animale/umane adulte3 adulte3; - culturi de celule diploide 2celule animale/umane embrionare3; embrionare3; - linii celulare continue 2celule maligne/celule diploide atipice3. atipice3. -. !+ectul citopato"en: totalitatea modificrilor pe care le sufer o cultur celular ca urmare a multiplicrii unor virusuri. /. 0emadsorbia: adsorbire eritrocitelor pe suprafaa celulelor care au multiplicat virusuri. 1. 2ncluziile virale: conglomerate formate prin acumularea unor cantiti foarte mari de material viral #n celulele infectate. '. 2nter+erena: incapacitatea celulei infectate cu un anumit virus fr efecte celulare evidente7 de a replica un al doilea virus7 cunoscut ca fiind cu certitudine citopatogen. 3. ,rans+ormarea celular: const #n multiplicarea dezordonat a celulelor din cultur care conduce la pluristratificri. . 4. Alterri cromozomiale: cromozomiale: anomalii cromozomiale7 mitoze aberante sau rupturi de cromatide.

EFECTELE MULTIPLICRII VIRALE

OULE EMBRIONATE

&copurile utilizrii: - virusuri ce cultiv preferenial pe acest sistem biologic; - Virusuri ce produc leziuni caracteristice. 5ule: - ou cu coaja al ! "#o$u%& $& '()( La)'*o#) $() lo+u#( $& "%#( SPF ,%"&c(-(c "a+*o'&) -#&&..

 %irarea oulor: - e,aminare la ovoscop pentru a vedea dac embrionul s-a dezvoltat; - pentru cultivarea virusurilor se folosesc ou de *-1' zile. 'ile de inoculare: - "e membrana c>orio-alantoidian - Bn cavitatea amniotic - Bn cavitatea alantoidian - Bn sacul vitelin. !+ectele replicrii virale: - moartea embrionului 2dup mai mult de !' ore3; - formarea de leziuni specifice; - acumularea de >emaglutinine.

OULE EMBRIONATE

ANIMALELE /E LABORATOR &copurile utilizrii:

- (0ola#&a 1(#u%u#(lo# c& )u c#&%c "& cul+u#( c&lula#&2

%+u$(ul "a+olo'(&( 1(#o0&lo#2 c&#c&+a#&a 3&ca)(%3&lo# (3u)(+4(( a)+(1(#al&2 "#o$uc&#&a $& %&#u#( %"&c(-(c& $& #&-&#()42 co)+#olul 1acc()u#(lo#.

Dezavanta6ele cultivrii pe animale de laborator:

- co%+ul c#&%cu+2 - &-(c(&)4a #&$u%2 - $(-(cul+4( 5) (0ola#&a 1(#u%u#(lo# $() %(%+&3ul %(%+&3ul (olo'(c2 - a)(3al&l& "o+ -( "u#++oa#& %)+oa%& $& '&#3&)(.

- cutanat: - epidermic; - intradermic; - subcutanat;

/ile de inoculare:

ANIMALELE /E LABORATOR

- pe mucoase; - intramuscular; - intranazal; - intravenoas; - intraperitoneal; - intracerebral; - intratra>eal; - digestiv.