UNIVERSITATEA ALEXANDRU IOAN CUZA FACULTATEA DE BIOLOGIE

REFERAT LA CULTURI CELULARE VEGETALE N BIOTEHNOLOGII

CLONAREA SPECIILOR FORESTIERE

Profesor: Conf. Dr. SmarandaVntu

Student/Specializare: Betianu Alin, Biologie, Anul I, grupa 1651(A)/ Biotehnologii microbiene i celulare

IAI 2013
1

INTRODUCERE Pdurea joaca un rol major n meninerea stabilitii climatice, conservarea apei i solului, susinerea diversitii biologice i serveste ca surs valoroas de produse din lemn. India cu distribuia ei geografica ntins este bogat in resurse forestiere i deine dou din cele 18 hotspot-uri n biodiversitate din lume. n mod tradiional, comunitile au trit n strns armonie cu pdurea, iar dependena acestora i-au nvat s fie ateni la conservarea acestei resurse. Cu toate acestea n trecutul recent situaia s-a shimbat dramatic, iar pdurile sunt supraexploatate, aceasta ducnd la reducerea suprafeei forestiere, scderea densitii plantelor, deci la erodarea diversitii florale si faunistice. Sub presiunea intens a populaiei (oameni i bovine) i dependena habitanilor de aceast resurs (pdurea le asigur necesarul zilnic), pdurile se afl ntr-o degradare continu sever. Aceast problem este complicat i nu prea se gsesc cu uurin soluii dat fiind c pdurile aparin Guvernului, iar conservarea lor reprezint responsabilitatea Guvernului, cu toate astea defriatul n multe din aceste zone reprezentnd un privilegiu pentru comunitile locale. Exist multe industrii care depind de resursele forestiere, iar n timpul independenei de aceast resurs, multe concesiuni le-au fost oferite, acestea incluznd subvenionarea lor cu lemn. Multe astfel de aciuni au cauzat daune mari pdurilor noastre. Multe din aceste pierderi nu pot fi recuperate. Aceast problema este mai departe agravata de faptul c nu exist nici un stimulent pentru industrii care s le determine s se implice n creterea/producerea materiei prime de care au nevoie. Mai departe, datorit gamei reduse de locuri de munc in zonele rurale, creterea bovinelor i colectarea non-cherestelei rmn singurele opiuni pentru ctigarea existenei. Dat fiind c bovinele sunt lsate libere la pscut, regenerarea natural a pdurilor a devenit foarte dificil. Aceasta a avut ca rezultat deertificarea numeroaselor zone din ar. Pentru a remedia problema i a interzice abuzul, Guvernul Indiei a formulat numeroase planuri si politici cu privire la mpdurirea zonelor. Dat fiind c nu este posibil creterea minii de lucru singura opiune disponibil rmne mbuntirea productivitii pdurii existente. Aceast procedur implic selectarea speciilor potrivite, folosirea de material superior pentru cultivare, managerierea corespunztoare a plantaiilor, i dezvoltarea unui program pentru cultivare de lung durat. n timp ce importana reproducerii convenionale pentru mbuntirea productivitii nu poate fi subminat, reproducerea copacilor este dificil d.p.d.v. tehnic i necesit timp. Deoarece timpul de cretere la cele mai multe specii de copaci este foarte lung, n multe cazuri un individ e posibil nici s nu vad rezultatul experimentului pe durata unei viei. Eliberarea unei varieti/clone ar dura foarte mult timp. Din fericire, cele mai multe specii de copaci sunt ncruciate i n consecin exist variabilitate genetic n natur. Pentru ctiguri imediate, merit s exploatm aceast variabilitate genetic existent n natur selectnd i clonnd genotipuri superioare din populaia lor natural.

Clonarea speciilor de copaci prin metode convenionale n comparaie cu plantele de horticultur, cercetarea speciilor de copaci a rmas n urm. A existat un interes foarte mic din partea sectorului privat cu privire la aceast arie, iar acesta s-a axat mai mult pe rotaia culturilor scurte i a rinoaselor. Interesul general n clonarea speciilor lemnoase de esen tare a nceput cu eucaliptul. Aracruz (Brazilia) au luat iniiativa n creterea plantaiilor de eucalipt prin inrdcinarea butailor. Conceptul de creterea a plantaiilor de ctre companii nu este nou, iar multe ri inclusiv USA, Australia i Noua Zeeland sunt implicate n activiti similare dar cu precdere cu pini. Eforturi sesizabile au fost facute de asemeni n Tailanda i Indonezia pe specii lemnoase de esen tare cum ar fi salcm, casuarina, eucalip, teak etc., iar creterea productivitii a fost raportat. Cu ntrziere, n India de asemeni, locuitorii pdurilor au realizat importana cultivrii materialului pentru clonare. Proiecte ample au fost lansate de ctre numeroase departamente forestiere pentru nfiinarea pepinierelor clonale. Cteva iniiative au fost luate de ctre companiile private cum ar fi ITC Bhadrachalam, JK Industries, West Coast Paper Mills i Andhra Pradesh Forest Cooperation. Cu toate astea, producia total de plantule prin utilizarea metodelor convenionale este departe de a fi adecvat. Aceasta se datoreaz faptului c pn astzi metoda nrdcinrii butailor a fost dezvoltat numai pentru cteva specii i a faptului c metoda este eficient doar cnd planta mam este n faz juvenil.

Constrngeri majore n Propagarea Vegetativ Datorit mrimii propagulelor puini butai pot deriva din genotipul dorit. La multe specii de copaci butaii ii pierd abilitatea de a nrdcina n timpul n care o anumit clon este evaluat pentru trsturile utile Plantele crescute n urma tierii (explanturile) tind s formeze rdcini adventive care spre deosebire de rdcina principal a rsadului nu pentreaz adnc n pmnt, fapt ce determin ca planta s fie rezistent la vnturi puternice. Propagarea prin tiere de asemeni prezint potenialul risc de mprtiere a unor afeciuni sistemice. Propagarea prin tiere este extrem de lent i specific unuei sezon. Depinznd de specie i de eficiena metodelor asexuate de propagare, costurile de producie a explanturilor este mult mai semnificativ n comparaie cu plantele crescute prin semine. Aceasta reprezint un factor crucial pentru pdurari dat fiind c le sunt date inte mari de mpdurire, iar fondurile sunt limitate.

Micropropagarea Cultura de esuturi este cea mai exploatat arie de biotehnologie a plantelor din punct de vedere comercial. Acoper multe din constrngerile metodelor convenionale de propagare. Din clonarea plantelor n condiii aseptice, denumit i micropropagare, result imaginea n oglind a plantelor mam selectate la scal mare ntr-un timp foarte scurt. Micropropagarea este mult mai semnificativ privind acele specii care nu pot fi regenerate sau sunt dificile de regenerat folosind metodele convenionale. Micropropagarea prezint o serie de avantaje: Multiplicare rapid: prin utilizarea unui protocol eficient un individ poate produce peste un milion de plante pornind de la el insui Economisirea spaiului: spre deosebire de explanturile convenionale care au dimensiuni de 8-12 inci i ocup mult spaiu, pot fi obinute un numr mai mare de culturi care pot fi pstrate ntr-un spaiu mult mai mic. Producerea plantelor fr afeciuni: plantele produse de culturile de esuturi sunt aproape 100% neinfectate de bacterii sau fungi. Pentru speciile la care calitatea lor este afectat de viroze, acestea pot fi eliminate prin culturi de esuturi. Uniformitate clonal: spre deosebire de rsaduri care reprezint doar jumti de rude, planta obinut prin culturi de esuturi sunt replici fidele ale plantei mam i nu exist nici o segregare a genelor sau schimbri la nivel genetic a trsturilor n timpul procesului de regenerare. Independen fa de constrngerile sezoniere: dat fiind c plantele sunt produse n condiii controlate de lumin, temperatur i umiditate, nu exist influen din mediul exterior asupra procesului regenerativ. Culturi de esuturi la copaci Culturile de esuturi de la speciile lemnoase a fost prima dat raportat de ctre Gautheret n 1933. Cu toate acestea, progresul fcut cu copacii a fost mult mai lent n comparaie cu speciile erbacee. Aceasta se datoreaz faptului ca speciile lemnoase au faze juvenile si de adult distincte, iar acetia n special, n faza adult, sunt mult mai vulnerabili la procedeele tehnologice ale culturilor de esuturi. Plus de asta, exploatarea comercial dureaz mult mai mult dect la speciile erbacee. Cu toate c procesul de micropropagare a fost utliziat decenii la rnd, n India importana comercial a acestei tehnici a fost contientizat la nceputul anilor 90, cnd numeroase companii era deja pornite. Cu toate acestea, majoritatea acestor companii erau orientate asupra exportului de plante ornamentale. Aceste companii au prezentat o repulsie general la aventurarea n culturile de esuturi a speciilor forestiere datorit urmtoarelor motive:

Fiind companii orientate spre producerea pentru export acestea au rspuns la cererea clienilor Exist numeroase probleme tehnice asociate cu culturile de esuturi a speciilor forestiere i sunt foarte puine grupuri n ar care au capabilitatea tehnic de a le rezolva Comparativ cu speciile ornamentale, cele forestiere prezint o cerere foarte redus

Pentru a nfrunta aceast provocare, Departamentul de Biotehnologie (DBT), Guvernul Indiei n 1989 a decis s pun la punct o uzin pilot pentru cultura de esuturi (TCPP) la TERI pentru propagare n mas a speciilor forestiere folosing tehnica culturilor de esuturi pentru augmentarea produciei de biomas din ar. Localizat n campusul lui TERI de 36 ha, la Gual Pahari, Gurgaon, Harayana, aici sunt gsesc toate facilitile infrastructurale, porning de la laboratoare moderne pn la pepiniere necesare pentru producere n mas a plantelor obinute prin micropropagare. n 1997, aceast TCPP a fost transformat ntr-un parc de tehnologie a micropropagrii (MTP) pentru a furniza o platform eficient pentru transferul tehnologiei privind culturile de esuturi ctre antreprenori. Astfel MTP are o capacitate anual de peste 2 milioane de plante. Obiectivele MTP: Propagarea clonelor superioare a diferitelor specii de plante pe scal larg folosind tehnologia culturilor de esuturi Multiplicarea la scal larg a speciilor care sunt dificil de regenerat prin metode convenionale de propagare Multiplicarea speciilor in vitro acolo unde metodele convenionale de propagare sunt inadecvate mbuntirea productivitii plantelor obinute in vitro folosind rhizobia i mycorrhizae Transferul tehnologiei ctre antreprenori noi sau industrii pentru comercializare Realizri ale TCPP/MTP Realizarea/creerea unui laborator modern de culturi de esuturi cu o capacitate de producie anual de 2 milioane de plate la Guargaon (Harayana) Protocoluri de micropropagare pentru un numr mare de specii i proceduri specifice pentru multe altele pentru propagarea la scal industrial. Aprovizionarea cu peste 12 milioane de plante din diferite specii a diferitelor departamente forestiere de stat, organizaii non-guvernamentale, cresctori privai etc. Demonstrarea cu succes a aplicativitii tehnologiei culturilor de esuturi n sfera agricultorilor

Producerea de plante rezistente, cu rat de cretere mai bun comparativ cu metoda convenional Transferul tehnologiei n industrie cu succes Producerea prin contract cu clieni Aducerea la cunotin de existena MTP i de tehnologia culturilor de esuturi prin seminarii, demonstraii, workshop-uri i expoziii Conducerea numeroaselor programe de training

Criterii pentru selecia speciilor cu lemn de esen tare Pentru speciile care pot fi propagate convenional prin semine, culturile de esuturi sunt de o importan deosebite dac copacii sunt multiplicai n mas. Pentru a ndeplini aceasta, selecia copacului mam trebuie facut cu foarte mare atenie. De asemeni este necesar selecia clonelor noi pentru evitarea monoculturii i degenerarea clonei. Sunt urmrite criterii precum vrsta (copacii sa fie tineri; 4-5 ani la plop i eucalipt), forma tulpinii (trunchi drept, creterea activ la nivelul mugurilor), coroana i ramurile (trebuie sa prezinte o mas dens de foliole sntoase, cicatricile s fie vindecate, ramurile ar trebui s fie mici n comparaie cu trunchiul la punctul de origine). TERI a reuit s multiplice specii de arbori precum Anogeissus ssp. (A. Pendula i A latifolia), bambus (Bambusa tulda, Bambusa arundinacea i Dendrocalamus strictus), eucalipt (E. tereticornis, E. tamaldulensis i E. citriodora), Paulownia fortunei, plopi (P. deltoides i P. euphratica), Leucaena hibrizi. Pn pe 31.03.2002 aproape 3,7 milioane de plante din diferite specii forestiere au fost expediate la diferite departamente forestiere de stat, non-guvernamentale i cresctorilor privai pentru ncercri, testri i rutine de plantare. Aceste plante ar acoperi o suprafa de peste 4000 ha.

Studiile de teren Cu toate c TERI s-a ocupat cu cultivarea speciilor forestiere folosind metoda culturilor de esuturi nc din 1991, evaluarea plantelor obinute astfel a nceput mult mai trziu deoarece este recomandat ca testarea performanei speciilor forestiere s fie facut dup finalizarea a jumtate din ciclul lor. Datele provenite din studiile de teren a diferitor specii ne indic urmtoarele aspecte: Rata mare de supravieuire a plantelor obinute prin culturi de esuturi pe teren n momente cnd solul sau alte condiii de cretere nu sunt favorabile sau facilitile de salvare sunt lips Plantele prezint grad mare de uniformitate clonal

Cele mai multe clone selectate si multiplicate la TERI au avut performan mai mare decat clonele locale sau plantele cultivate prin rsaduri d.p.d.v. al biomasei. Depinznd de natura clonei i adaptarea ei la o locaie particular, ctigurile au variat de la nesemnificativ spre semnificativ (pn la 200%) La ncercrile iniiale cu Populus deltoides a survenit o problem cu formarea unor noduri care a fost mai trziu rezolvat prin modificarea procesului de regenerare Ex:

Anogeissus ssp. o Datele existente cu sugereaz c prin utilizarea culturilor de esuturi aceste plante au supravieuit foarte bine pe in vivo. o S-au nregistrat cteva ncercri n care rata de supravieuire a fost redus datorit incompatibilitii cu factorii mediului. o Producerea plantelor cu rata de supravieuire mare prin culturi de esuturi apoi transferate in vivo justific n totalitate utilitatea tehnologiei de propagare n mas a speciilor forestiere care este aproape imposibil de regenerat prin metode convenionale Bambus o Cercettorii de la TERI au reuit s dezvolte un protocol in vitro pentru 4 specii de bambus (Bambusa tulda, Bambusa arundinacea, Dendrocalamus longispathus i Dendrocalamus strictus) o Atenia a fost orientat asupra speciei Dendrocalamus strictus pentru propagarea n mas deoarece aceast specie este mult mai rezistent la condiiile de mediu i au o tulpin foarte rezistent Eucalyptus o Aceast specie prezint o cretere foarte rapid i produce cantiti mari de biomas o Este uor de cultivat inclusiv pe soluri cu concentraii sczute de nutrieni o Poate fi recoltat de 3 ori fr a fi nevoie de o replantare i nici nu prezint o surs de hran pentru animale o Convenional propagarea eucaliptului se face prin semine, dar populaia obinut este foarte heterogen, motiv pentru care s-a utilizat propagarea clonal prin nrdcinarea de butai dar cu o rat limitat de succes. o Utiliznd tehnologia culturilor de esuturi s-a putu obine un numr mult mai mare de indivizi provenii din clone selecionate, care nu prezint afeciuni, ntr-un timp foarte scurt. Paulownia fortunei o Specie exotic de origine chinezeasc, caracterizat printr-o cretere rapid, adaptare slab la medii diferite, flori frumoase i producere de biomas. Frunzele sunt folosite ca nutre, iar florile pentru miere.
7

o Convenional Paulownia poate fi propagat prin semine i butai, dar aceste metode nu sunt adecvate dat fiind adaptarea grea a speciei la condiiile de mediu o La TERI s-a reuit dezvoltarea unui protocol complet de micropropagare a speciei Paulownia fortunei folosind esut adult, astfel specia putnd fi mai apoi testat in vivo n diferite condiii geografice. Populus ssp. o Reprezint o surs excelent de biomas i de materie prim fiind folosit la fabricarea placajelor i a chibritelor. Lemnul fiind uor i avnd o densitate mic servete ca surs bun pentru material de ambalare. o Este recomandat nmulirea prin butai, dar numrul acestora este foarte redus, iar planta tinde s moar n 2-3 ani, motiv pentru care s-a dezvoltat un protocol de micropropagare pentru Populus deltoides. o Propagarea n mas a numeroase clone de Populus deltoides folosind tehnologia culturilor de esuturi a fost iniiat la TERI, fiind apoi livrate peste 1,2 milioane de plante. o Iniial multe din plantele obinute i apoi transferate in vivo prezentau noduri/crcei la nivelul trunchiului (40% din cazuri), dar cu toate astea din butaii acestor plante au rezultat indivizi (95%) cu trunchiul drept, o parte din ei prezentnd un grad foarte redus de noduri/crcei. o Dispariia nodurilor confirm faptul c aceast problema nu a fost cauza unei mutaii cauzate de procesul in vitro.

CONCLUZII TERI este un din cele puine organizaii, nu doar din India, ci din ntreaga lume, care s-a implicat n producerea la scal larg de material vegetal de calitate superioar aparinnd diferitor specii de copaci, prin utilizarea tehnologiei culturilor de esuturi. Livrarea a peste 3,7 milioane de plante, obinute prin aceast metod, provenite de la specii de arbori demonstreaz fezabilitatea acestei tehnologii pentru producerea la scal larg, industrial, de specii forestiere. Uniformitatea clonal, i bineneles creterea productivitii, sugereaz c aceast tehnologie prezint un potenial mare cu privire la creterea productivitii i poate face fa la cererea rii n ceea ce privete necesarul de biomas.

BIBLIOGRAFIE 1. Saxena, S., Dhawan, V. (1999). Regeneration and large-scale propagation of bamboo (Dendrocalamus strictus Nees) through somatic embryogenesis. Plant Cell Reports. 18 438-443. 2. Saxena, S., Dhawan, V. (2001). Large-scale production of Anogeissus pendula and A. latifolia by micropropagation. In Vitro Cell. Devp. Biol.-Plant. 37: 586591.