Curs nr.

14
CEFALOSPORINE
Au fost izolate din mediile de cultura ale speciilor de Cephalosporum , sau obtinute prin biosinteza.
In 1948 au fost facute primele observatii referitoare la activitatea cefalosporinelor de catre
Giuseppe Brotzu , asupra Salmonellei tiphy
Studiile cele mai vechi asupra structurii chimice , potentialului antibacterian si legatura structurala
cu penicilinele au fost facute de Hou ,Poole si Van Heyningen
In 1961 E.P.Abraham si colab . au studiat structura chimica a cefalosporinelor , stabilind ca prin
biosinteza , care decurge asemanator cu a penicilinelor , rezulta mai multe tipuri de cefalosporine
care au fost notate cu P,N,C..
-Cefalosporina P1 este o cefalosporina cu structura steroidica , dar cu proprietati antibacteriene
reduse , motiv pt. care nu a fost utilizata in terapeutica.
-Cefalosporina N are o structura asemanatoare Penicilinei N (Izopenicilinei) si a fost izolata pt. prima
data din culturi de Salmosynnematum , de unde si denumirea de
Synnemantin , apoi Synnemantin B.D.p.d.v. al structurii chimice , este un sistem biciclic
format dintr-un inel tiazolidinic si un inel -lactamic .Structura este asemanatoare cu a unui derivat
acilat al acidului 6-APA si al acidului D-L-aminoadipic.Catena laterala face ca acest compus sa fie mai
activ asupra unui mare numar de bacterii gram negative , in special salmonele. Synnemantin N a fost
folosit cu succes pt.tratarea febrei tifoide.
H3N+ CH
OOC

(CH2)3

CO NH
O

CH3
CH3

COOH

Penicilina N
(Cefalosporina N,Synnematin B)

Cefalosporina C , are o structura diferita de a penicilinelor , sistemul biciclic fiind format dintr-un inel
-lactamic si un inel dihidrotiazinic numit 3-cefem.In situatia in care inelul tiazinic este saturat avem o
structura de tip cefam .
HOOC CH
NH2

(CH2)3

CO NH
N

CH2 O CO CH3

O
COOH
Cefalosporina C

Acest tip de cefalosporina , a fost mult studiata si s-a observat ca structura chimica a acesteia
permite o serie de modificari asemanatoare cu cele facute in structura penicilinelor , pt. a se ajunge
la produsi de semisinteza cu activitate antibacteriana mai mare .
Spectrul de activitate al Cefalosporinei C este asemanator cu cel al penicilinei N fiind rezistent la
actiunea penicilinazelor.
Studiile au condus la descoperirea potrivit careia catena laterala , - aminoadipoil poate suferi o
descompunere prin hidroliza , cu punerea in libertate a acidului 7-aminocefalosporanic , inactiv
terapeutic , dar util obtinerii prin semisinteza a cefalosporinelor.

HOOC CH

(CH2)3

CO NH

NH2

CH2 O CO CH3

O
COOH

Cefalosporina C
deciclizare

H2N
HOOC CH

(CH2)3 COOH

N
O

NH2

CH2

OCO

CH3

COOH
acid 7-aminocefalosporanic(7-Ac)

acid alfa-aminoadipoic

Structura Cefalosporinei C fost confirmata prin sinteza totala de Woodward si colab in 1966.
Structura celor mai utilizate cefalosporine
R3
R1

CO NH

7
8

X = S Cefalosporine

N1

4
3

X=S
R3 = OCH3 Cefamicine

R2

COOH

X= O

Oxacefeme

Relatia structura actiune terapeutica

- Radicalul R1 determina spectrul si intensitatea actiunii antibacteriene;
- Radicalul R2 determina proprietatile farmacocinetice ,influenteaza spectrul antibacterian si
absorbtia dupa administrare orala ;
- Atomul de sulf - influenteaza intensitatea actiunii antibacteriene;
- Atomul de hidrogen de la C7- influenteaza rezistenta la actiunea -lactamazei.
Cefalosporinele sunt derivati ai acidului cefalosporanic :
S
O

CH2

C CH3

COOH
Acid cefalosporanic

R3
R1

CO NH
O

7
8

S
6

N1

4
3

R2

COOH
Cefalosporine -formula generala

Proprietati fizico-chimice ale cefalosporinelor

-Se prezinta sub forma de pulberi albe amorfe uneori cristalizate.
-Au proprietati acide de intensitate medie , conferite de gruparea -COOH.
-Sunt greu solubile in apa -sub forma acida .
2

-Pot forma saruri care sunt usor solubile in apa .

Cefalosporinele pot suferi o serie de transformari chimice , care sunt de mare importanta
practica .Aceste transformari implica:
- desfacerea legaturii C-N la nivelul ciclului -lactamic si desfacerea acestuia ;
- scindarea gruparii 7-acilamino la gruparea amino;
- transformarea gruparii carboxil intr-o sare;
- oxidarea sulfului si formarea de amestecuri de sulfoxizi;
- substituirea atomului de H de la C7 cu grupari metil sau metoxi, cand rezulta compusi cu
utilitate terapeutica.
Degradarea chimica si enzimatica a cefalosporinelor
1-degradarea enzimataica produsa de acilaza cu scindarea gruparii 7-acilamino , urmata de desacetilare si
ciclizare , cu formare lactonei acidului desacetil 7-aminocefalosporanic;
2- degradarea enzimataica produsa de -lactamaza , cu scindarea legaturii C-N la nivelul ciclului lactamic , desfacerea acestuia si formarea unui compus de degradare , sau degradarea poate continua prin
desacetilare , cand se produce cel de al doilea compus de degradare.
CEFALOSPORINA
R C

NH

S
6

7
8

4
3

CH2

O C
O

COOH

H O
ACILAZA 2

CH3

- R COOH

NH2
O

R C NH

CH2 O C CH3

COOH

CH2 OH
COOH

Acid 7-aminocefalosporanic

Desacetil-cefalosporina

- CH3COOH
S

NH2
O

R C NH

beta-lactamaza

sau

Lactona acidului desacetil7-aminocefalosporanic

R C NH CH
O

C
O

HN
OH

OH-

Desacetil-cefalosporin-lactona

R CO NH CH
CH2 O C CH3

COOH

N
OH

CH2
COOH

Compusi de degradare (deciclizare)

3-degradare chimica desacetilare- cu formarea de desacetil-cefalosporina care este urmata de o ciclizare

si formeaza desacetil cefalosporin-lactona
Obtinerea cefalosporinelor
-prin biosinteza
-prin semisinteza
-prin sinteza totala
A .Obtinerea prin biosinteza
Cefalosporinele naturale se obtin din culturile unor specii de Cephalosporium. Mediile pe
care se cultiva aceste specii trebuie sa indeplineasca anumite conditii nutritive , si sa fie respectati
o serie de parametri fizici cum ar fi : o anumita temperatura , o aeratie corespunzatoare etc.
Procesul de biosinteza este monitorizat cu atentie pt. a se putea stabili cu precizie momentul
in care procesul de biosenteza este terminat , in acest moment mediul fiind epuizat in nutrienti.
Izolarea cefalosporinelor din mediul de cultura se face prin doua procedee :
-absorbtie si purificare cu ajutorul rasinilor schimbatoare de ioni , sau
-extractie in solventi organici , urmata de separare prin filtarare sau distilare azeotropa.
B.Obtinerea prin semisinteza
1.Acilarea acidului 7-aminocefalosporanic (7-ACA) cu cloruri acide
S

H2N

CH2

OCO CH3

N
+

CH2 OCO CH3

+N(C 2H5)3

+ R COCl

COOH

CO NH

COOH

- NH(C2H5)3Cl

2.Acilarea acidului 7-aminocefalosporanic (7-ACA) cu anhidride acide

S

H2N

R
N

CH2

OCO CH3

O
O

+
R C

CH2 OCO CH3

R C

COOH

CO NH

COOH

- RCOOH

3.Acilarea acidului 7-aminocefalosporanic (7-ACA) cu anhidride mixte.

R COOH

+ Cl

OR'

- HCl

R'

cloroformiat

O
C

O C
O

N
O

H2N
N

CH2OCOCH3

COOH

R C NH
- CO2
- R'OH

CH2OCOCH3
COOH

4. Acilarea acidului 7-aminocefalosporanic (7-ACA) prin intermediul NNdiciclohexilcarbodiimida.

4

R COOH +

NH

O
N,N'-diciclohexilcarbodiimida

H2N
+

C O

N
O
7-ACA

R C NH

CH2OCOCH3

N
O

COOH

CH2OCOCH3

COOH
NH

HN

Alte metode de obtinere a cefalosporinelor

1.Acilarea acidului dezacetoxi 7-aminocefalosporanic , obtinut din Cefalosporina C prin hidrogenare
catalitica (compusul obtinut fiind mai stabil chimic , cu o mai buna absorbtie in organism si mai
activ terapeutic)
S

H2N
N

CH3

O
COOH

2.Obtinere prin substituirea :-atomului de H de la atomul C7 cu grupari de tip : etil

,acetil,metil,metoxi;
-radicalului acetoxi cu radicali de tip : carbamil, tiocarbamoil
radicali aromatici sau heterocicli.
3.Obtinerea unor betaine prin tratarea cefalosporinei C cu piridina sau cu alte amine tertiare ,in
solutie apoasa , cand grupa acetoxi poate fi substituita, formandu-se betainele corespunzatoare , mai
active , dar mai toxice decat cefalosporinele obisnuite.
4.Obtinerea indirecta folosind peniciline naturale corespunzatoare , prin inlocuirea nucleului
tiazolidinic cu nucleu tiazinic prin extindere de ciclu ( de la pentaciclu la hexaciclu)
C.Sinteza totala
Cefalosporinele obtinute prin aceasta metoda au numai valoare stiintifica.
Actiune antibacteriana
-Actioneaza prin inhibarea sintezei peretelui celular
-Au un spectru de activitate comparabil cu cel al ampicilinelor.
-Sunt rezistente la actiunea -lactamazelor.
-Actioneaza asupra : -cocilor gram pozitiv :Stafilococ aureu,Streptococ -hemolitic
-bacili gram negativi :Ech.Coli ,Shigella,Salmonella
- Utilizari terapeutice : - infectii respiratorii , angina , scarlatina,amigdalita
- septicemii produse de stafilococi multirezistenti la
peniciline , gentamicina , rifampicine
Reactii adverse
-Reactii alergice mai scazute decat la peniciline ,cu manifestari usoare , de obicei sub forma de
urticarie.
5

-Cefalosporinele care contin un rest de N-metil-5-tiotetrazol in pozitia 3( Cefamandoli) sunt implicate

intr-o masura mai mare in producerea de hipoprotrombinemii , ceia ce poate duce la hemoragii
severe , daca sunt utilizate in interventii chirurgicale mari ,sau in situatii de subnutritie .
-Nu se administreaza la pacientii care urmeaza un tratament cu anticoagulante , datorita sinergismului
de actiune cu aceste substante .
-Da reactii de tip disulfiram( antabuz) la pacientii care consuma alcool.
-Pot da tulburari gastro-intestinale de tipul : greata , voma , varsaturi, dureri epigastrice ,diaree.
Clasificare
Pana in 1993 cefalosporinele au fost impartite in trei generatii ( I,II,III) incluzand
cefalosporinele descoperite pana in 1990 , atat de uz parenteral cat si de uz oral.
In ultimul deceniu (1991-2000) ca urmare a descoperirii de noi cefalosporine ( generatia IV) mai
active si rezistente la -lactamaze ,s-a impus revizuirea clasificarii cefalosporinelor .Astfel la al 18lea Congres International de Chimioterapice ( Stokholm )in iunie , 1993 s-a adoptat actuala clasificare
a betalactaminelor si implicit si a cefalosporinelor .
Cefalosporinele denumite cefeme au fost impartite astfel:
A.-Cefalosporine (CEF) de uz parenteral , cu 4 generatii ( CEF gen.I ,CEF gen.II,CEF gen.III,CEF
gen.IV).
B.-Cefalosporine de uz oral impartite in a) CEF vechi
b) CEF noi
UZ
GENERATIE
I
Spectru =
Ampicilina+
Oxacilina
II
Spectru =
Ampicilina+
Oxacilina+
Gentamicina
+Metronidaz.
III
Spectru =
Ampicilina+
Oxacilina+
Ticarcilina +
Metronidazol

PARENTERAL
FORME
I.M
FARMACEUTICE
Cefalotina
Cefalotin sodica -1g
Cefamandol
Mandol-1g
Cefazolina
Cefazolin Sandoz -1g
Lyzolin-1g
Cefapirina
Cefuroxima

Axetine , Cefuroxime,
Zinacef , Maxil, Lifurox
Cefamicine Cefoxitima
Cefotetan
Cefonicid
Monocid -1g
Ceftazidima
Ceftriaxon
Cefoperazona
Cefsulodina
Cefotiam
Cefatoxim
Moxalactam

Fortum , Ceftidim,
Ceftazidim ,Sandoz
Cefort ,Rocephin,
Lendacin
Cefozon,Lyzone,
Medocef

ORALE
Cefaclor
Cefalexina
Cefadroxil
Cefuroxim

Cefixima
Cefpodoxim
Ceftotiam
Ceftibutin

FORME
FARMACEUTICE
Ceclor,Ceclozone,
Ceclodyne, Cefaclor
Ospexim,Cephalin
Oracef,Keflex
Cexyl,Duracef,
Ceforan,Cefadroxil
Axycef, Zinnat
Cefuroxima,Ceroxim

Eficef
Proxetil
Hexetil
Cedax

Cefotax,Lyforan,Naspor

IV
Cefprozil
Cefzil
Spectru ultra Cefepima
Maxipime
larg ,
Cefpiroma
Cefrom-1g,2g
rezistenta la
-lactamaze
Spectrul antibacterian creste ( se largeste) dinspre CEF gen.I ,spre CEF gen.IV( ultra larg)
6

Rezistenta dobandita fata de CEF de tulpinile bacteriene , scade progresiv dinspre CEF de gen I ( la
care este maxim ) spre CEF de gen II si III ,la care este minima si gen. IV la care este practic
neglijabila .
Dupa MEMOMED 2008 editia 14 Ed.Minesan- Buc (Autori : Prof.Dr.Doc.Dumitru Dobrescu,
Conf.dr.farm pr.Simona Negres si altii )clasificarea Cefalosporinelor se face in acelasi mod dupa
calea de administrare si dupa generatia careia apartin .
I. CEFALOSPORINE CU ADMINISTRARE PARENTERALA
A.CEFALOSPORINE GENERATIA I
Spectrul de activitate al cefalosporinelor din aceasta generatie poate fi asemanat asocierii
ampicilinei cu oxacilina
1) CEFALOTINA SODICA
S

CH2 CO NH

CH2 O CO CH3

COONa
Este prima cefalosporina din gen.I obtinuta prin semisinteza si introdusa in terapeutica
Obtinerea s-a facut pornind de la acidul 7-aminocefalosporanic prin tratare cu clorura acidului 2tienilacetic , in 1962 de catre R.B.Morin
CH2
S

H2N

COCl
+

N
O

OCO CH3 + N(C2H5)3

- +NH(C2H5)3Cl-

CH2
COOH

CH2 CO NH
N

CH2 O CO CH3

O
COOH
cefalotina

Prezentare generala
Se utilizeaza sarea de sodiu , care se prezinta sub forma de pulbere alba , cristalina , fara miros
, foarte solubila in apa, insolubila in majoritatea solventilor organici.
Spectrul antibacterian este larg , fiind activa asupra germenilor gram pozitivi si gram
negativi.Spectrul de activitate este mai limitat decat al Penicilinei G si mai apropiat de cel al
ampicilinei , cu deosebirea ca fata de ampicilina , cefalotina prezinta rezistenta la penicilinazele
produse de Stafilococul auriu .Este insa inactivata de unii germeni producatori de cefalosporinaza .
Indicatii terapeutice : infectii severe cu germeni sensibili: septicemii , endocardita , peritonita, avort
septic,infectii respiratorii , urinare si ale tesuturilor moi.
Cefalotina este greu absorbit dupa administrare orala , de aceeia trebuie administrata parenteral ,
i.m,sau i.v. din solutie preparata in momentul utilizarii( 0,5-1g./zi la 5-6ore)
7

Antibioticul are o toxicitate minima , este rapid eliminat din organism ( 60%) prin rinichi in
interval de 6 ore de la administrare.
Reactii adverse : dupa administrare i.m durere locala ; dupa administrare i.v tromboflebita.
Forme farmaceutice ; CEFALOTINA SODICA pulbere injectabila de 1g.(Antibiotice Iasi)
2) CEFAPIRINUM (DCI)
Sinonim Cefadyl

CH2 CO NH
N

CH2 O CO CH3

O
COOH

derivat de piridin tio-aceti-7-aminocefalosporanic.

Prezentare generala
- Se utilizeaza sub forma de sare de sodiu .
- S-a obtinut pt. prima data in 1974 prin semisinteza , avand in structura sa piridina .
- Proprietatile fizico- chimice si spectrul de activitate , sunt asemanatoare Cefalotinei.
- Se leaga in proportie de 40-50% de proteinele plasmatice si este eliminata rapid din organism
prin rinichi .
- Indicatii terapeutice : infectii genito-urinare , endocardite ,abcese intraabdominale , peritonite,
septicemii , infectii respiratorii .
- Administrare parenterala -4-5g/zi la 4-6 ore
3) CEFAZOLINUM DCI)
Acid 3-(5-metil-3-tiometil-1,3,4-tiadiazol)-7-tetrazolilacetil-amino- cefalosporanic
N

N CH2 CO NH

7
8

N N
O

6 5

N1

4
3

CH2 S

COOH

3'
4'
2' 1' 5'

CH3

Este o cefalosporina de semisinteza obtinuta prin inlocuirea gruparii 3-acetoxi cu un heterociclu

continand atom de sulf ( tiadiazolic) si avand in structura sa la gruparea 6-amino si un rest
tetrazolilacetilic .
Caracterizare generala
- Se utilizeaza sub forma de sare de sodiu ;
- Se administreaza numai parenteral , cand isi pastreaza intreaga activitate antibacteriana;
- Este instabila la pH- acid din stomac , ceia ce o face improprie administrarii orale;
- Determina niveluri serice crescute si un timp de eliminare mai mare;
- Este o cefalosporina semiretard , persistand in organism la concentratii active ,aproximativ 12 ore
- Se leaga in proportie de 75% de o proteina plasmatica;
- Este activa asupra asupra bacililor gram negativi si mai putin activa asupra celor gram pozitivi;
- Actioneaza bactericid asupra tulpinilor de Pneumococus , Klebsiella , E.Coli, Haemophylus
influentzae , Stafilococ;
- Indicata in pneumonii, alergii la penicilina,profilaxie pre si post operatorie;
- Efectele secundare produse sunt in general legate de fenomenul de hipersensibilizare , dar pot da
si tulburari hepatice , renale si hematologice.Este mai putin nefrotoxica decat Cefalotina
8

Forme farmaceutice :
KEFZOL flacoane continand 1g. pulbere liofilizata pt. administrare parenterala .Solutia se prepara
in momentul administrarii.
B.CEFALOSPORINE GENERATIA A-II-A
Spectrul de actiune : Active pe bacili gram negativi ,nu sunt active pe Pioceanic
Spectrul corespunde asocierii : ampicilina +oxacilina+gentamicina +metronidazol
1)CEFUROXIMUM(DCI)
O

C C NH
N OCH3

CH2

O C NH2
O

COOH

CEFUROXIMA
Acid 3-(carbamoiloximetil-amino)-7(furil)-metoxiimino-acetil-7-amino-cefalosporanic
Caracterizare generala
- Utilizata sub forma de prodrog ( cefurotim axetil ) care se hidrolizeaza in mucoasa intestinala
si in sange , eliberand cefuroxima activa.Absorbtia este mai buna in cazul administrarii dupa
masa .Difuzeaza bine in tesuturi , mai putin in l.c.r . si se elimina pe cale urinara in forma activa
(90%).
- Spectrul bacterian ( este bactericid )este superior CEF.din gen I .Este activa pe toti bacilii
gramnegativi , pe unele tulpini de E.coli,Klebsiella,Enterobacter,Citrobacter,Proteus , Haemophilus
infl.rezistent la penicilina.Inactiva pe Pioceanic.Forma parenterala se utilizeaza in cazul
infectiilor grave sau atunci cand administrare orala nu este posibila.
- Indicat in infectii cu stafilococi , pneumonii , infectii urinare , chirurgicale.
- Reactiile adverse sunt cele caracteristice cefalosporinelor ,in plus poate da efect antabuz in
cazul asocierii cu alcool.
- Se administreaza i.m sub forma de suspensie , i.v .sub forma de solutie in doze de 500mg pana
la 1,5 si chiar 2g/zi in functie de gravitatea infectiei.
- La copii administrarea se face tinand cont de doza / kg.corp.
- In cursul tratamentului cu Cefuroxim-axetil se recomanda a se evita asocierea cu alte
medicamente.
- Forme farmaceutice:AXETIN fl.inj. de 250mg.,750mg.,1,5g.
CEFUROXIMA ANTIBIOTICE fl.inj.de 750mg.,1,5g.,
CEFUROXIME SANDOZ- fl.inj.de 750mg.,1,5g.,
LIFUROX ( Lilly,SUA)- fl.inj.de 750mg.,1,5g.,
ZINACEF ( Anglia)- fl.inj. de 250mg.,750mg.,1,5g.
2) CEFAMANDOLUM(DCI)
O
CH

C NH

O CH
O

N
O

N 4'
CH2 S

COO-Na+
9

3'

5'

1' 2'N

CH3

Este o cefalosporina obtinuta prin semisinteza , care formeaza un ester cu acidul D-mandelic la
portiunea acil si un tiol legat de un heterociclu (1-metil -5-tio-1,2,3,4-tetrazol) in locul grupei
acetoxil la atomul de carbon 3-metilenic al 7 ACA.
Obtinerea decurge in trei etape:
1) In prima etapa acidul mandelic printr-o reactie de carbonilare , urmata de acilarea produsului
carbonilic obtinut formeaza un compus acil-carbonilic ,care va fi utilizat la introducerea
radicalului D-mandeloil in portiunea acil .
CH COOH
HCOOH
OH

CH C

CH COOH
O

SOCl2

CH

O CH

Cl

Acid mandelic

2) Printr-o reactie de desacetilare a acidului 7-aminocefalosporanic in prezenta de 1-metil5-tio -1,2,3,4 tetrazol se formeaza un derivat substituit al 7-ACA.
S

H2N
N

CH2

C CH3
O

COOH

HS

- CH3COOH

CH3
S

H2N

N 4'

5'

CH2 S

3'

1' 2'N

COOH

CH3

2) Formarea cefamandolului prin reactia dintre cei doi compusi intermediari

CH C
O CH

H2N
+

Cl

CH2 S

N 4'

CH

C NH

O CH
O

N 4'
CH2 S

O
COOH

1' 2'N

- HCl

CH3

COOH
O

3'

5'

3'

5'

1' 2'N

CH3

Se utilizeaza sub forma de sare de sodiu

Caracterizare generala
- Jumatatea D-mandeloil a cefamandolului se pare ca imprima rezistenta la -lactamaze in timp ce
unele bacterii gram negative producatoare de -lactamaze ( in special Enterobacteriaceae) ,
rezistente la actiunea cefazolinei si cefalosporinelor mai vechi , sunt sensibile la cefamandol.
- Cefamandolul este activ asupra unor tulpini rezistente la ampicilina (Neisseria si Haemophilus)
- Se elimina si prin bila in forma activa ceea ce face ca cefamandolul sa poata fi utilizat in
tratamentul infectiilor de la acest nivel.
Forme farmaceutice
MANDOL fl. cu pulbere inj. 1g.( Eli Lilly- Italia)
10

3)CEFONICIDUM (DCI)
OCH3

CH CO NH

OH

CH2 S

N
N

CH2 SO3-Na+

COOH

-este un derivat metoxilat

-are un timp de injumatatire mai mare decat cefamandolul
-spectrul antimicrobian este asemanator cu al cefamandolului
-pruduse farmaceutice MONOCID flac. cu 1g.pulbere injectabila.
4)CEFAMICINE
Recent , cefalosporine si penicilina N au fost izolate din specii de Streptomices.Acestea cuprind
produsi inruditi cu cefalosporina C si 4 cefalosporine 7--metoxi substituite numite CEFAMICINE
Dintre aceste cefalosporine cea mai activa este
CEFOXITINA
S

OCH3
CH2

CO NH
N
O

S
CH2

CONH2

COO-Na+

- Activa pe bacterii gram negative ( Enterobacter, Proteus ,Bacteroides )

- Are un spectru antibacterian mai larg datorita rezistentei la -lactamaze.
- Este instabila in mediu acid
- Dupa administrare nivelurile sanguine sunt mai ridicate , iar durerea la administrare este mai
redusa.

11

12