Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Metode Spectrofotometrice de Analiza A Produselor Alimentare
Metode Spectrofotometrice de Analiza A Produselor Alimentare
Metode de analiza
3.1 Metoda de determinare a zaharului cu acid picric.................................................
3.2 Metoda de determinare a ferului in albus de ou....................................................
3.3 Metoda de determinare a fosfstilor in albus de ou................................................
Proiect de an
Mod. Coala
N.Document
A efectuat
Rata Ion
A verificat
Mija Nina.
Semnat
Data
Metode spectrofotometrice de
analiza a produselor alimentare
Litera
Coala
Consultant
Contr.norm.
Aprobat
UTM FTMIA
Gr. TAP-063
Coli
Spectroscopie electronic
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Tab.3. Lungimi de unda si pozitii ale benzii de absorbtie specifice de absorbtie pentru legaturi
cromofore si grupari functionale in domeniul spectral ultraviolet si
infrarosu
In tabelul 3 snt date lungimi de und specifice pentru maxime de absorbie a unor grupri
cromofore i grupri funcionale pentru domeniul ultraviolet i infrarou. Prezena unor absorbii
la aceste lungimi de und reprezint indiciul prezenei respectivelor grupri n substana de
analizat
Analiza spectrofotometric cantitativ . Intensitatea unui fascicul de radiaii luminoase ce cade de
o substan lichid gazoas sau solid sufer absorbii, reflecii, refracii sau provoac fluorescent
figura 7. n fotometria molecular cantitativ se determin cantitatea de radiaie :
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
- absorbit de prob la reflexia radiaiei de pe prob. fig. 7b, (fotometrie la corpuri solide
netransparente)
- emis de prob pe o lungime de und superioar lungimii de und a radiaiei incidente , fig. 7c.
(fotometrie de fluorescent i fosforescen)
- cantitatea de radiaie absorbit de prob dintr-o emisie pe aceeai lungime de und ca cea
specific specieiei chimice analizate . fig. 7d, (spectrofotometrie de absorbie atomic ).
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Fig.5. Schema de principiu a unui fotometru. 1- sursa de lumina\ 2- lentile colmatoare, 3-sistem
de fante, 4- sistem monocromator cu prisma 5-spatiu pentru cuvele cu solu(ie de analizat 6detector de radiafie luminoasa, 7- amplificator 8- sistem de afisare
monocromator (4) cu reea de difracie sau cu prism, spaiu pentru cuve cu soluie de referin i
cuve pentru soluie de analizat (5), un detector de radiaie luminoas (6). un amplificator (7) i un
sistem de afiare (8).
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
de und mult sub un nanometru. Asemenea rezoluii snt practic de neatins cu monocromatoare de
scanare n timp. Detectorul ir de fotodiode a deschis calea i spre sondele
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Fig. 8. Distributia spectrala a unei lampi cu incadescenta (a) a unei lampi de fluorescenta (b) si
distributia grafica a spectrului pentru cele doua lampi (c)
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Limea benzii spectrale. Segmentul de spectru ( puritatea spectral) care este trimis prin cuv cu
substana de analizat depinde n parte de gradul de dispersie al luminii (calitatea
monocromatorului} i in parte de dechiderea fantei din obturatorul de lumin, figura.
Fig. 10.Influenta micsorarii fantei (A,B) si a rezolutiei retelei de difractie (B;C) asupra puritatii
speclrale a luminii ce trece prin proba de analizat
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Cuve pentru soluie. Exist urmtoarele tipuri de cuve pentru soluia de analzat
cuv normal
Cuv cu absorbe umplere ca la cuva normal, gol re prin absorbie cu o pomp i o caplar
Cuva cu circularea n flux continuu a soluiei de analizat Prin diverse norme s-a ajuns la cu vele
uzuale de form parareteppedic cu grosimea stratului analizat de 1 cm. dar snt folosite i cuve
cu grosimea stratului de 0.5 i 0.6 cm (pentru determinarea soluiilor de concentraii mari) precum
i cuve cu grosmi ale stratului de 2 cm (pentru determinarea soluiilor de concentrai mici).
Volumul de umplere pentru cuve normale este situat n urmtoarele limite:
cuve macro :> 1000 ml > cuve mii: > 500 ni
cuve micro: 50 -200 ml
Materiale uzuale pentru cuv pot fi sticl de cuar natural, stel optic normali. polimetracrilat de
meri . poistren. La lungimi de und mai mici de 310 nm se folosec n exclusivitate cuve de cuart.
O atente deosebit trebuie acordat cuvelor sintetice. Materialele acestora find foarte bune
izolatoare termice, prenclzirea trebuie realizat la un timp cel puin dublu fa de cuvele din
sticl. Pereii cuvei de soluie produc o mprtiere total de cea 4% din radiaia luminoas
incidena. Extincia unei cuve goale are o valoare a extinciei de cea. 0,080, dac cuva este
umplut cu ap distilat pierderile prin reflecie se reduc la extincii situate n jurul valorii de
0.040.
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Fotometrul cu dou fascicule. La acest tip de aparate cuva cu soluia de referin i cuva cu soluia
de analizat snt iradiate paralel.n acest scop fasciculul iniial de lumin este divizat de un sistem
de oglinzi n dou fascicule paralele care iradiaz n acelai timp sau alternativ la intervale de
timpi foarte mici cuva cu soluia de referin i cuva cu soluia de analizat. Soluia aceasta este
evident mai scump dect cea folosit la fotometrele cu unsingur fascicul uminos prezint n
schimb avatajul c fluctuaii ale sursei de lumin pot fi compensate i eliminate uor. Din punct de
vedere constructiv exist fotometre cu dou fascicule decalate spaial, figura l fotometre cu dou
fascicule decalate n timp, figura .La fotometrul cu dou fascicule decalate spaial lumina
provenit de la surs este este divizat de o oglind semitransparent n dou fascicule identice ce
traverseaz cuva cu soluia de referin i cuva cu soluia etalon n acelai timp. Intensitatea
luminoas absorbit este msurat de dou detectoare identice separate ntre ele.
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Cu dou fascicule este mai ales atunci cnd se nregistreaz spectre fiind posibuil corecia
continu a msurtorii prin intermediul soluiei de referin.
Spectrofotometrul cu ir de fotodiode. Una din realizrile cele mai important n domeniul
spectrofotometriei o reprezint folosirea detectoarelor ir de fotodiode n locul detectoarelor
clasice . Acest tip de detector permite preluarea spectrului UV-VIS-NIR n acelai timp nefiind
necesar scanarea secvenial n timp a tuturor lungimilor de und. Avantajele snt legate de citirea
i transmiterea n timp real a datelor Ia sisteme de urmrire i reglare automat a concentraiilor i
parametrilor cu aplicaii deosebit n procese alimentare. Cea mai important aplicaie n chimia
analitic alimentar o reprezint folosirea spectroscopului UV-VIS-NIR cu detector ir de
fotodiode ca analizor n cromatografia HPLC. La concentraii mici din domeniul urmelor, adesea
componenta urmrit iese din coloana capilar ntr-un interval de timp n care scanarea ciclic a
spectrului n cazul spectroscoapelor clasice se gsete ntr-un domeniu de lungimi de und n care
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Parametri tehnici
Spectrofotometru
Spectrofotometru
Spectrofotometru 23RS
UV,VIS. AquaMate
UV,VIS. S22
Lungime de unda
190-1100 nm
198-1000nm
320-1100nm
Precizie lungimii
+/- 1nm
+/-2nm
+/-nm
Rezolutie
1nm
2nm
1nm
Largimea benzii
2nm
6nm
6nm
Monocromator
1200 linii/nm
1900linii/nm
1500linii/nm
Absorbanta
0,005A
0,300-1.999 A
0.5-0.004A
Zgomot
0.0001A
0.1
0.005
Interfata
RS232C
printer si calculator
printer si calculator
Alimentare
220/50 Hz
220/50 Hz
220/50 Hz
Banda spectrala
6nm
2nm
6nm
de unda
fotometric
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Spectrofotometru 23RS
Metode de analiza
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Densitatea optic D
315
340
400
0,01
440
0,053
490
0,185
540
0,492
590
0,048
670
750
870
980
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Densitatea
optic D
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
Lungimea de
und, nm
0
315 340 400 440 490 540 590 670 750 870 980
Figura.16 Diapazonul valorilor densitii optice a soluiei-model n reacia cu acid picric
Din figura dat se vede clar vrful absorbiei de lumin de ctre amestec la lungimea de ubd de
540 nm.
Pentru diferite diluri ale soluiei-model, atunci cnd concentraia zaharurilor simple variaz ntre
0,27-6,4 g/100 ml soluie au fost determinate valorile densitii optice (D) i a coeficientului de
trecere (T).
Tabelul .17. Valorile densitii optice i a coeficientului de trecere a soluiei-model la diferite
concentraii de zaharuri
Concetraia zaharurilor n
0,277
56,26
2,5
0,138
75,34
0,124
0,093
87,3
0,059
1,6
0,854
2,076
1,6
0,424
2,407
2,24
4,572
1,34
6,4
1,298
1,892
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Densitatea optic D
2.5
1.5
0.5
0
0
1
2
3
4
5
6
Concentraia de zaharide n prob, g/100 ml soluie
Figura .18. Graficul de calibrare pentru determinarea zaharidelor n reacia cu acid picric
Datele obinute:
Tabelul .19. Datele experimentale obinute pentru 5 zile de determinri
Densitatea optic D, =540 nm
Proba
Prune+ap
Ziua 1
Ziua 2
Ziua 3
Ziua 4
Ziua 5
Proba I
0,48
0,58
0,68
0,48
0,69
Proba II
0,504
0,52
0,736
0,424
0,648
0,816
0,717
0,75
0,671
0,782
Prune+alcool
n probele de prune extrase cu alcool etilic densitatea optic are valori mai mari dect n
cele extrase cu ap, ceea ce denot c extracia zaharidelor cu alcool este mai complet.
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Proba
Densitatea
Concentraia
Pierdereri la
Cantitatea de
Date de
optic,
de zaharuri,
filtrare (0,8)
zaharuri
referin din
=540 nm
g/100 ml
10 g
100 g
soluie
[26]
Prune
Proba I
0,48
0,97
1,164
1,164
11,64
+ap
Proba II
0,504
0,94
1,128
1,128
11,28
0,816
1,27
1,524
1,524
15,24
Prune+alcool
literatur
9,5
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data
Introducere
Spectrofotometria este o ramura a spectroscopiei molecular ce se ocupa cu analiza calitativa si
cantitativa a spectrelor de absorbtie in domeniul UV-VIS a substantelor organice sau anorganice
in stare lichida.din cauza ca in domeniul UV-VIS nu toate substantele sau elementele chimice au
spectre de absorbtie cu maxime clare analiza calitativa nu este atit de reprezentativa ca cea
cantitativa. Un spectrofotometru sau un colorimetru utilizeaza transmiterea luminii printr-o solutie
pentru determinarea concentratiei unui solut in solutia respectiva. Spectrofotometrul difera de
colorimetru prin modul in care lumina este separata in lungimile de unda componente.
Spectrofotometrul utilizeaza o prisma pentru separarea luminii, iar colorimetrul utilizeaza filtre.
Ambele se bazeaza pe un model simplu de trecere a luminii de lungime de unda cunoscuta printr-o
proba si masurarea cantitatii de energie luminoasa care este transmisa. Aceasta se realizeaza prin
plasarea unei fotocelule in partea opusa a probei respective. O raza de lumina este formata din
fotoni; cand un foton intalneste o molecula de analit, exista sanse ca analitul sa absoarba fotonul.
Aceasta absorbtie reduce numarul de fotoni din raza de lumina, astfel reducand intensitatea
luminoasa.Toate moleculele absorb energie radianta la anumite lungimi de unda. Cele care absorb
energie in spectrul vizibil sunt cunoscute ca pigmenti. Proteinele si acizii nucleici absorb lumina
in domeniul ultraviolet. Un spectrofotometru implica o sursa de lumina, o prisma, un suport pentru
probe si o fotocelula. Acestea sunt conectate la un sistem electric sau mecanic care controleaza
intensitatea luminii, lungimea de unda si conversia energiei primite la nivelul fotocelulei in
fluctuatii voltmetrice. Fluctuatiile voltmetrice sunt apoi proiectate pe o scala metrica/digitala si
valorile sunt inregistrate intr-un computer.
Intensitatea culorii dintr-o proba depinde de cantitatea de solut din proba respectiva. Transmisia
luminii nu este o functie liniara, ci mai degraba exponentiala. Transmitanta este procentul relativ
de lumina care a trecut prin proba. Transmitanta procentuala este transformata intr-o functie
logaritmica inversa cunoscuta ca absorbanta (sau densitate optica).
Pag.
Proiect de an
Mod Coala
N. Document
Semnat
Data