Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
GENETICA-grupat Pe Subiecte de Examen
GENETICA-grupat Pe Subiecte de Examen
GENETIC-CURS
CAPITOLUL I
Genetica tiina ereditii i variabilitii organismelor vii
1-DEFINIIE I OBIECTUL DE STUDIU AL GENETICII
Genetica este tiina biologic a crei obiect de studiu l constituie ereditatea i
variabilitatea organismelor, stabilind mecanismele care asigur conservarea informaiei
genetice precum i cele ale modificrii ereditare.
Anul apariiei geneticii ca tiin este 1865, cnd GREGOR MENDEL a emis
primele legi ale ereditii, redescoperite n 1900 de HUGO de VRIES, CORRENS i
TSCHERMACK (BOTEZ, 1991).
Denumirea de genetic a fost introdus de BATESON la Congresul de genetic din
anul 1906.
Ereditatea, ca obiect de studiu a geneticii reprezint nsuirea descendenilor de a
moteni de la prini caracteristici asemntoare. Aceast nsuire asigur stabilitatea
caracterelor de-a lungul generaiilor, continuitatea biologic a indivizilor n cadrul speciei
de la o generaie la alta. Potenialitatea realizrii acestui caracter se face prin intermediul
genelor. Gena este definit ca particula material a ereditii localizat n cromozom i
care condiioneaz formarea uneia sau mai multor caractere sau nsuiri. Totalitatea
genelor unui organism viu (cele nucleare) reprezint genotipul. Totalitatea genelor din
cadrul unui set haploid de cromozomi, transmise ca o unitate de la unul din prini
reprezint genomul.
Felul de a fi a unui individ ca mod de manifestare a genotipului, n interaciune cu
condiiile de mediu reprezint fenotipul. Noiunile de genotip i fenotip au fost introduse
de JOHANSEN n 1909 (PANFIL, 1980).
Variabilitatea ca cel de al doilea obiect de studiu a geneticii, reprezint nsuirea
organismelor vii, cu diferite grade de nrudire, de a se deosebi ntre ele. n natur nu exist
doi indivizi identici. Chiar i gemenii uniovulari nu sunt identici din punct de vedere
genetic, ei manifestnd profile imunologice diferite, constituite n primele ase luni de
via (BOTEZ, 1991).
Variabilitatea poate fi ereditar i neereditar.
a) Variabilitatea ereditar se transmite n descenden, de la prini la urmai i are
ca surs recombinarea genelor n procesul de formare a gameilor i fecundare
(variabilitate recombinativ), sau prin modificarea materialului genetic sub
aciunea unor factori mutageni (variabilitate mutaional).
b) Variabilitatea neereditar este determinat exclusiv de influena condiiilor de
mediu i cu toate c nu se transmite n descendeni, face parte din aspectul
fenotipic al unui anumit individ. Variabilitatea fenotipic, sau diferenele
constatate ntre indivizi are dou surse primare i inseparabile de variabilitate:
variabilitatea genotipic i variabilitatea indus de mediu sau ecologic. Aceast
1
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
realizeaz prin intermediul unor particule care migreaz din toate organele corpului ctre
celulele sexuale, unde se activeaz i se transmit, dup fecundare, n descendeni. Dei au
un principiu comun privind transmiterea ereditar a caracterelor, poart denumirea dat de
autorii lor:
- teoria panspermiei sau teoria pangenezei, elaborat de DARWIN
- teoria plastidulelor, elaborat de HAECKEL;
- teoria micelar, elaborat de NGELI;
- teoria pangenelor, elaborat de H. de VRIES.
n acelai secol, WOLFF i BAER au formulat teoria epigenetic, dup care noul
organism se formeaz n momentul fecundrii, iar WEISMANN teoria plasmei
germinative care a stabilit experimental c nc de la primele diviziuni ale zigotului are loc
separarea liniei germinale (care va da natere la glandele sexuale), de linia somatic (din
care se vor forma celelalte organe ale embrionului i ale adultului).
Importana acestor teorii rezid din faptul c dei speculative, au cutat s gseasc
un suport material fenomenului ereditii. Toate se caracterizeaz prin aceea c admiteau
dualitatea germen soma n sensul c organismul oricrui individ este alctuit din dou
pri distincte, independente una de alta, germenul sau plasma germinativ, rspunztoare
de pstrarea caracterelor ereditare i transmiterea lor i soma, restul corpului. Dup
fecundare, germenul se separ de som i nu poate fi influenat de condiiile de mediu,
urmnd a fi integrat n gamei (BOTEZ, 1991).
Teoria factorilor ereditari formulat de MENDEL (1865), constituie prima teorie
tiinific a ereditii, legile formulate de el fiind valabile i astzi.
Conform acestei teorii, caracterele unui organism sunt determinate de factori
ereditari grupai n perechi, care n momentul formrii gameilor se separ, fiecare gamet
cuprinznd un singur factor, factori ce se reunesc n moduri diferite n momentul
fecundrii, conducnd, ca urmare a relaiilor de dominan i recesivitate ce se stabilesc
ntre ei, la apariia segregrii (diferenierea caracterelor parentale n anumite proporii)
(BOTEZ, 1991).
n primii ani ai secolului 20, BATESON descoper c legile mendeliene au
valabilitate i n lumea animal, iar n 1908 tot el este acela care denumete noua tiin
biologic ce se ocup de studiul ereditii, genetica (dup RAICU, 1980). Ulterior,
JOHANSEN a emis noiunea de genotip, prin care se nelege baza ereditar a
organismelor care cuprinde totalitatea factorilor ereditari (gene) i fenotip, prin care se
nelege totalitatea caracterelor i nsuirilor organismului. n 1906, a introdus n tiin
noiunea de gen.
Cu toate c n urma cercetrilor efectuate de HERTWIG n 1875 i apoi de
FLEMMING (1882)i alii, au fost descoperii cromozomii, denumii astfel de
WALDEYER (1888), legtura dintre acetia i factorii mendelieni nu s-a fcut dect dup
1900 n urma cercetrilor lui SUTTON i BOVERII, care n 1902 au formulat ipoteza
conform creia factorii ereditari se regsesc n cromozomi, fiecare specie avnd un anumit
5
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
numr de cromozomi, cu o anumit form i mrime (dup RAICU, 1980). Aceast idee a
fost preluat de T. MORGAN i colaboratorii si, care n primele decenii ale secolului 20,
au pus bazele geneticii clasice elabornd teoria cromozomal a ereditii. n urma
cercetrilor fcute de BATESON i PUNNET n 1906, acetia au descoperit fenomenul de
linkage. MORGAN, fcnd o sintez a cunotinelor acumulate, consider c genele sunt
plasate n lungul cromozomului, liniar, transmindu-se mpreun cu cromozomii n
procesul formrii gameilor, iar ntre cromozomii perechi, omologi, provenii de la cei doi
prini, pot avea loc schimburi reciproce de gene (fenomenul de crossing-over).
Mai trziu, AVERY, McLEOD i McCARTY (1944) au demonstrat faptul c ADNul (acidul dezoxiribonucleic), din care sunt constituii n mare parte cromozomii, este
purttorul material al ereditii.
Dup cel de al doilea Rzboi Mondial, s-au dezvoltat considerabil cercetrile privind
materialul genetic la nivel molecular. Printre cele mai importante realizri ale geneticii
moleculare pot fi citate, descoperirea fenomenului de transformare la bacterii cu ajutorul
ADN (AVERY i colab., 1944), descoperirea structurii macromoleculei de AND,
deschiznd calea cercetrilor privind acizii nucleici (WATSON, CRICK i WILKINS,
1953), realizarea biosintezei artificiale a ARN (GRUNBERG-MANAGO i OCHOA,
1955) i ADN (KORNBERG, 1956), descoperirea faptului c la ribovirusuri ARN-ul
constituie materialul genetic n care se gsete codificat informaia genetic (FRAENKEL
i colab., 1956), descifrarea codului genetic (OCHOA, NIRENBERG i alii, 1961-1967),
descoperirea reglajului genetic (JACOB i MONOD, 1961), sinteza artificial a genei
(KHORANA, 1970) .a.
Dup 1970 s-au dezvoltat considerabil cercetrile de inginerie genetic care i
propune: izolarea i sinteza artificial a genelor, transferul intraspecific i interspecific a
genelor, de la organisme procariote la cele eucariote i invers, manipularea materialului
genetic la nivel celular prin realizarea de haploizi prin androgenez experimental la
plante, crearea de microorganisme capabile s sintetizeze aminoacizi, proteine, hormoni,
vitamine, antibiotice .a.
n 1981, BERG i GILBERT, au reuit s sintetizeze in vitro i s construiasc o
molecul de ADN-recombinant, prin care s-au demarat spectaculos cercetrile n domeniul
ingineriei genetice i ale biotehnologiilor.
Dintre realizrile spectaculoase, n acest domeniu, din ultima jumtate a secolului
20, merit menionate:
1951 - primul transfer de embrioni la o vac;
1952 - primul viel nscut prin nsmnare artificial;
1952 - prima clonare la amfibieni;
1952 - prima plant regenerat in vitro;
1970 - prima plant regenerat pornind de la protoplati;
1972 - primul hibrid interspecific obinut prin fuziune de protoplati (la tutun);
1973 - identificarea plasmidului Ti (tumor inducting);
6
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Gameii sunt, n felul acesta, puri din punct de vedere genetic. Prin unirea acestor gamei
pe baz de probabilitate n F2, n procesul fecundrii, se obin plantele generaiei a doua,
care se comport astfel:
- 25% din plante sunt pure cu bobul neted, avnd un singur tip de factori ereditari
(AA);
- 25% din plante sunt pure cu bobul zbrcit, avnd exclusiv cellalt tip de factori
ereditari (aa);
- 50% din plante cu bobul neted, poart ambii factori ereditari alturai (Aa).
MENDEL a denumit plantele, care conin un singur tip de factor ereditar
homozigote, iar cele care conin ambele tipuri, heterozigote. La indivizii heterozigoi nu se
manifest dect unul dintre factorii ereditari, cel dominant (bob neted), cellalt rmnnd
n stare ascuns (bob zbrcit). n acest fel, G. MENDEL a reuit s descopere deosebirea
dintre structura genetic a organismelor i nfiarea lor, noiune care mai trziu a fost
denumit de JOHANSEN genotip i respectiv fenotip. Genotipul reprezint totalitatea
genelor coninute de un organism. Fenotipul reprezint suma nsuirilor morfologice,
fiziologice, biochimice i de comportament a unui organism ca rezultant a interaciunii
dintre genotip i mediu. Din exemplul anterior se remarc faptul c plantele cu acelai
fenotip (75% bob neted), prezint genotipuri diferite: 25% sunt homozigote i 50% sunt
heterozigote.
Studiul comportrii n descenden a hibrizilor obinui l-a condus pe Mendel la
elaborarea primei legi a ereditii, legea puritii gameilor. Gameii sunt ntotdeauna
puri din punct de vedere genetic, adic nu conin dect unul dintre factorii ereditari.
Prin combinarea probabilistic a acestor gamei rezult n generaia a doua, n urma
fenomenului de segregare, un raport de 3 dominant : 1 recesiv.
Prin autofecundarea generaiei a doua se obine generaia a treia, la care se observ
urmtoarele:
- din plantele pure cu bobul neted se obin exclusiv plante cu bobul neted;
- din plantele pure cu bobul zbrcit se obin exclusiv plante de acest tip;
- plantele heterozigote cu bobul neted segreg n felul urmtor: 25% plante
homozigote cu bobul neted, 25% plante homozigote cu bobul zbrcit i 50%
plante heterozigote cu bobul neted.
Deci, plantele heterozigote din generaia a doua se comport n generaia a treia la
fel cum se comport hibrizii din prima generaie.
Dac florile plantelor hibride din prima generaie se polenizeaz cu polen de la
plantele genitorului cu bob neted (backcross), atunci se obin n generaia a doua numai
plante cu boabe netede, din care 50% sunt homozigote i 50% heterozigote. n caz contrar,
dac polenizarea se realizeaz cu polen de la plantele cu bobul zbrcit, se va forma n
generaia a doua jumtate plante heterozigote cu bobul neted i jumtate homozigote cu
bobul zbrcit.
9
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
conurilor de molid, n raport cu forma rotunjit sau culoarea rocat a ritidomului, la pinul
silvestru, n raport cu culoarea cenuie-nchis a ritidomului .a.
8- SUPRADOMINANA,CODOMINANA, PLEIOTROPIA
2.3.2. Supradominana
n acest caz, indivizii heterozigoi depesc n productivitate, fertilitate, viabilitate
etc., genitorii homozigoi, dominani sau recesivi, AA<Aa>aa.
Fenomenul se numete supradominan i el poate fi observat att la plante ct i la
animale. n procesul de apariie a supradominanei sunt de obicei, implicate mai multe
gene cu caracter aditiv. Fenomenul mai poart denumirea de heterozis monogenic.
La Drosophila melanogaster, heterozigoii ww+, prezint o cantitate mai mare de
pigmeni n ochi (sepiaterina), fa de genitorii homozigoi w +w+ (ochi rou-crmiziu) i
ww (ochi albi).
2.3.3. Codominana
Codominana determin apariia la indivizii heterozigoi pentru genele dominante a
unui fenotip nou, comparativ cu indivizii homozigoi.
Se tie c indivizii din populaia uman pot s aib patru grupe de snge notate cu A,
B, AB i 0. Aceste grupe de snge sunt determinate genetic de trei grupe de gene polialele
notate LA, LB i l. Genele LA i LB sunt dominante asupra genei l, iar mpreun sunt
codominante, adic determin un fenotip nou grupa de snge AB. Ca urmare, indivizii
pot fi fenotipic i genotipic de mai multe tipuri (tabelul 2.2.)
Fenotip
Genotip
ll
LL
LA l
LBLB
LB l
LALB
A
B
AB
A A
12
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Pentru realizarea unor transfuzii sangvine trebuie cunoscute grupele de snge ale
donatorului i receptorului. Cunoaterea modului cum se motenesc grupele sangvine are
importan i n stabilirea paternitii.
2.3.4. Pleiotropia
Prin fenomenul de pleiotropie se nelege efectul fenotipic multiplu a unei singure
gene.
Genele care au capacitatea de a determina la acelai organism dou sau mai multe
caractere se numesc pleiotropice.
Fenomenul a fost observat de MENDEL, care a demonstrat c mazrea cu flori albe
are boabe cu tegumentul alb, cea cu flori colorate are tegumentul cenuiu sau brun.
NILLSON-EHLE a artat c o anumit gen la ovz modific simultan forma
aristelor spicului, pilozitatea i fragilitatea tulpinilor.
Un exemplu caracteristic de pleiotropie l ofer hibridul Nicotiana
silvestrisNicotiana tabacum, la care apar ase caractere distincte, deschiderea carpelelor,
transformarea ovulelor n carpele, alungirea axei florale deasupra carpelelor, placentaia,
cantitatea de nectar i ncreirea bazal a corolei, care sunt controlate de aceiai gen.
9-GENELE LETALE
2.3.5. Genele letale
Genele letale schimb raportul mendelian de segregare, deoarece prezena lor n
stare homozigot (dominant sau recesiv) determin moartea indivizilor purttori, nainte
de maturitatea sexual.
Dup gradul de manifestare, efectul genelor letale poate fi:
- gene letale, ce cauzeaz o mortalitate de 100% a indivizilor purttori;
- gene semiletale, n acest caz 50% dintre indivizii purttori mor;
- gene subvitale, care cauzeaz moartea unui numr mai mic dect 50% dintre
indivizii purttori.
Noiunea de gen letal a fost introdus n tiin de ctre CUNOT (1911), n urma
cercetrilor intreprinse pe oareci de culoare galben. Acetia
s-au dovedit a fi
ntotdeauna heterozigoi, deoarece prin ncruciarea a doi oareci galbeni, nu se obin
niciodat numai oareci galbeni, ci un amestec cu indivizi de alt culoare. Raportul ntre
oarecii galbeni i cei de alt culoare este n general de 2:1.
Dac se noteaz gene pentru culoarea normal a blnii cu a i mutanta sa care
determin culoarea galben a blnii cu Ay (yellow = galben), prin ncruciarea ntre
organisme heterozigote ar trebui s se obin raportul de 3:1 ntre indivizii galbeni i de
alt culoare (fig. 2.6.)
AyaAya=AyAy+2Aya+aa
13
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Dac se ine seama de tipul AyAy, adic galben homozigot lipsete, s-a dedus c
gena Ay este o alel mutant letal, care n stare homozigot duce la moartea organismului.
S-a constatat c prin sacrificarea unei femele gestante, o parte a oarecilor de culoare
galben mor n stadiu embrionar.
La plante au fost identificate numeroase gene letale care n stare homozigot provoac
moartea embrionilor, sau plantelor nainte de maturitate. La porumb se cunosc 15 gene
diferite care n stare homozigot blocheaz fotosinteza i formarea clorofilei (plante
albinotice), incapabile s supravieuiasc. Acelai fenomen a fost semnalat i la Antirrhium
majus
10-COMPLEMENTARITATEA GENELOR
2.3.6. Complementaritatea genelor
Interaciunea dintre dou sau mai multe gene nealele, prezente mpreun, determin
apariia unui alt fenotip, dect fenotipul determinat de fiecare gen n parte.
A. Complementaritatea de dominan a fost evideniat de BATESON i PUNNET
(1908) la specia Lathyrus odoratus. S-a remarcat c n urma ncrucirii a dou varieti de
L. odoratus, cu flori albe, n generaia F1 s-au obinut plante cu flori roii, iar n generaia
F2, raportul de segregare a fost 9/16 plante cu flori roii, 7/16 plante cu flori albe. Pentru
formarea antocianului este necesar prezena concomitent a dou gene dominante (C i
P). Fiecare genitor prezint n stare homozigot o gen dominant i una recesiv (CCpp,
respectiv ccPP). n stare dominant ambele gene sunt ntlnite numai n F 1 (CcPp) i 9/16
din plantele obinute n F2 (C-P-). Raportul fenotipic de segregare este de 9:7 (fig. 2.8.)
B. Complementaritatea de recesivitate, a fost evideniat de SHULL n 1914, la
specia Capsella bursa pastoris (traista ciobanului). S-a remarcat c forma capsulei plantei
este determinat de interaciunea dintre dou gene nealele. n starea de recesivitate a
ambelor gene, apare tipul cu capsul ovoid. Dac una sau ambele gene se afl n stare
dominant, apare tipul cu capsul triunghiular. Raportul genotipic de segregare n F 2 este
de 9/16 A-B (capsul triunghiular):3/16 aaB (capsul triunghiular):3/16 A-bb (capsul
triunghiular):1/16 aabb (capsul ovoid), iar cel fenotipic de 15:1 (fig. 2.9).
Aciunea complementar a genelor recesive se explic prin prezena unor gene
duplicate, adic a unor gene similare ca aciune, care ns se transmit independent. Planta
Capsella bursa pastoris fiind un tetraploid, are dou perechi din fiecare cromozom omolog
i ca atare posed gene duplicate, care determin aciunea de complementaritate recesiv.
Interaciunea dintre genele nealele poate determina apariia unui fenotip nou.
Forma crestei la gini este determinat de interaciunea a dou gene nealele P i R.
n funcie de interaciunea lor, forma crestei poate s fie:
- pprr creast simpl;
- P-rr creast mzrat;
- pp-R creast trandafir;
- P-R creast nuc.
14
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
n urma ncrucirii ntre doi indivizi homozigoi, pentru ambele gene, PPrr i
ppRR, cu creast mzrat, respectiv trandafir, n F 1 se obin numai indivizi cu creasta tip
nuc RrPp, iar n F2 se obin cele patru tipuri de creast n raport de 9 nuc:3: trandafir:3
mazre:1 simpl (fig. 2.10.)
Interaciunile dintre genele nealele intervin i n formarea i transmiterea
caracterelor la arbori, numai c, pn n prezent, ele au fost puin studiate din cauza
dificultilor metodologice de care s-a amintit.
11- EPISTAZIA
Epistazia const n mascarea expresiei fenotipice a unei gene numit hipostatic, de
ctre o alt gen nealel numit epistatic.
Epistazia poate fi de dominan sau de recesivitate, dup cum gena epistatic este
dominant sau recesiv.
A. Epistazia de dominan. Culoarea glumelor i bobului la ovz este determinat de dou
gene: N, epistatic, pentru culoarea neagr i C hipostatic, pentru culoarea cenuie.
Prezena genei N, n stare dominant mpiedec manifestarea genei C. ncrucind ovzul
slbatic (Avena fatua), NNCC, cu boabe negre, cu ovzul cultivat (A. sativa), nncc, cu
boabe galbene, s-au obinut n F1 plante hibride, heterozigote pentru ambele gene NnCc, cu
boabe negre. Prin autopolenizarea generaiei F1 s-a obinut n F2 raportul de segregare
fenotipic: 12 boabe negre:3 boabe cenuii: 1 boabe galbene (fig. 2.11.). Raportul de
segregare geonotipic a fost: 9/16 N-C: 3/16 N-Cc: 3/16 nnCC: 1/16 nncc.
B. Epistazia de dominan i recesivitate a fost evideniat de BATESON i
PUNNET, n experienele lor privind transmiterea colorat a penajului la gini. Culoarea
penajului este determinat de dou gene nealele. Una dintre gene I epistatic, care
determin penajul alb (fie c este n stare homozigot dominant II, sau heterozigot Ii)
mascheaz manifestarea celeilalte gene, hipostatic C, care determin penajul colorat.
n urma ncrucirii a dou rase de gini cu pene de culoare alb, Leghorn (IICC) i
Wyandotte (iicc), n F1, s-au obinut heterozigoi IiCi, cu penaj de culoare alb. Prin
ncruciarea indivizilor F1 ntre ei, n F2 s-au obinut indivizi cu penajul alb i colorat n
raport de 13:3; cei 3/16 indivizi cu penaj colorat (negru) avnd combinaia C-ii, n care
gena C nu mai este represat de gena I, aflat n stare recesiv (fig. 2.12.).
C. Epistazia de recesivitate. Aciunea unei gene recesive n stare homozigot, gen
epistatic, inhib manifestarea altei gene nealele, n stare homozigot sau heterozigot,
gena hipostatic.
Culoarea blnii la cini este controlat de dou gene: cc (gena epistatic), determin
culoarea alb; B (gena hipostatic), care n absena cc, determin culoarea neagr; bb
(gen hipostatic), n absena cc, determin culoarea maron.
n urma ncrucirii ntre dou rase de cini, una homozigot cu blana alb, BBcc, i
alta homozigot cu blana maron, bbCC, se obin n F1 numai indivizi cu blan neagr,
15
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
e) Centrozomul, depistat n celula animal i vegetal, este format din doi centrioli
i centrosferi i are rol n formarea fusului de diviziune. Fiind purttor de ADN,
are rol ereditar.
f) Lizozomii sunt corpusculi de form ovoid, ce conin enzime digestive fiind
responsabili de digestia intracelular. Beneficiaz de enzime hidrolitice
(proteoz, ribonucleoz, fosfataz .a.) i sunt specifice celulei animale.
Formaiuni cu funcii asemntoare au fost semnalate i la plante (peroxizomi,
sferozomi i glioxizomi).
Nucleul sau carionul este partea cea mai reprezentativ a celulei sub aspect genetic,
reprezentnd 1/4-1/3 din volumul total al celulei. Nucleul ca entitate morfologic, este
alctuit din membran nuclear, cariolimf, nucleol, cromocentrul i cromatin
(cromozomi).
a) Membrana nuclear se evideniaz n interfaz. Este format din dou
membrane lipoproteice, prevzute cu pori prin care se realizeaz schimburile
dintre cariolimf i citoplasm. Membrana exterioar se racordeaz cu reticolul
endoplasmatic, prin care realizeaz legtura ntre membrana nuclear i cea
celular. Are rol important n organizarea i funcionarea cromozomilor, precum
i n procesul de replicare i transcriere de ADN.
b) Cariolimfa, nucleoplasma sau matrixul nuclear, este mediul n care sunt incluse
formaiunile nucleare, putnd exista n stare de gel sau sol.
c) Nucleolul, este prezent n nucleu ca un corp sferic, vizibil n interfaz i profaz
ataat la unii cromozomi n zona strangulaiei secundare. Numrul nucleolilor
este caracteristic fiecrei specii.
d) Cromatina reprezint starea n care se gsete materialul cromozomal n
interfaz sub forma fibrei elementare de cromatin. Prin condensarea fibrei
elementare de cromatin, n cursul diviziunii celulare se pot evidenia
cromozomii.
16CROMOZOMII
LA
ORGANISMELE
EUCARIOTEMORFOLOGIE,COMP. CHIMICA
Principalii purttori ai informaiei genetice la eucariote sunt cromozomii prezeni n
nucleul celular. Acetia sunt constituii din cromatin, ce conin aproximativ 60% proteine,
35% acid dezoxiribonucleic (ADN) i 5% acid ribonucleic (ARN).
Dup funciile lor, cromozomii sunt de dou tipuri: autozomi, ce se regsesc n
celulele somatice i variaz ca numr de la o specie la alta i heterozomi, sau cromozomi
ai sexului. Celulele somatice conin dou seturi de autozomi i doi heterozomi XX sau XY,
iar celulele sexuale conin un set de autozomi i un heterozom.
3.1.1.1. Morfologia cromozomului la eucariote
Sub aspect morfologic, cromozomul eucariot prezint urmtoarele formaiuni:
cromatidele surori, centromerul, constricia secundar, telomerii, satelitul i knobul.
21
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Cromatidele surori sunt dou uniti structurale identice genetic, unite la nivelul
centromerului.
Centromerul (strangulaia sau constricia primar) este zona cu care cromozomul se
fixeaz de fibrele fusului de diviziune celular. El mparte cromozomul n dou brae scurt,
sau proximal (p) i braul lung, sau distal (q) (fig. 3.2).
n raport cu poziia centromerului, distingem urmtoarele tipuri morfologice de
cromozomi:
- telocentrici, cu poziia centromerului terminal;
- acrocentrici, poziia centromerului fiind subterminal ;
- submetacentrici, cu poziia centromerului submedian ;
- metacentrici, poziia centromerului fiind median.
Strangulaia sau constricia secundar este asemntoare centrome-rului, ns la
nivelul ei cromatidele nu se unesc. Zona se mai numete i organizator nucleolar, la acest
nivel fiind ataat de obicei nucleolul.
Telomerii sunt formaiuni terminale ale cromozomilor ce le confer stabilitate. n
lipsa acestora apar restructurri cromozomale i modificarea morfologic.
Satelitul sau
trabantul este o formaiune facultativ, separat de restul
cromozomului prin strangulaia secundar. De regul este dispus pe braul proximal (scurt)
al cromozomului.
Knobul este o formaiune terminal sau subterminal heterocromatic, dispus pe
anumii cromozomi, cu valoare de marker citologic (fig. 3.3.).
3.1.1.2. Structura cromozomului eucariot
Elementul structural de baz al cromozomului este nucleosomul. La microscopul
electronic, nucleosomii apar ca un irag de perle, fiecare fiind alctuit dintr-un miez
histonic pe care se nfoar dou spire de ADN. ntre doi nucleosomi exist elemente de
legtur constituite din segmente scurte de ADN asociate cu o component histonic H 1
(fig. 3.4). Succesiunea mai multor nucleosomi determin formarea fibrei simple de
cromatin, care la rndul ei se spiraleaz sub form de selenoid i formeaz fibra
elementar de cromatin, care constituie elementul de baz a cromozomului. n interfaz
cromozomii se gsesc sub aceast form elementar de cromatin.
3.1.1.2. Compoziia chimic a cromozomului eucariot
Cromozomii sunt alctuii din cromatin, substan fundamental ce conine acizi
nucleici i proteine, lipide i poliglucide, ioni de calciu i magneziu.
ADN-ul nuclear reprezint aproximativ 95% din totalitatea ADN-ului celular, i
rspunde de stocarea informaiei genetice i continuitatea ei de la o generaie la alta.
Cantitatea constant de ADN din fiecare cromozom este supus unei variaiuni ciclice,
determinat de separarea cromatidelor n cadrul ciclului celular. ADN-ul din care este
constituit cromatina poate fi de dou feluri : ADN cu coresponden de codare i fr
corespondent de codare.
22
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Cu aceasta se ncheie prima diviziune meiotic. Nucleii nou formai intr ntr-un
stadiu numit interchinez. n urma meiozei I, uneori citoplasma se divide, alteori nu. n
acest ultim caz rezult celule binucleate, numite diade.
Meioza II (mitoz haploid) este asemntoare unei mitoze. Ea se petrece n celule
cu numr haploid de cromozomi.
Profaza II. n nucleul normal constituit, cromozomii se condenseaz i se
individualizeaz. La sfritul profazei II are loc dezintegrarea membranei nucleare i
formarea fusului de diviziune.
Metafaza II. Cromozomii se deplaseaz spre centrul celulei, unde se fixeaz cu
centromerul de fusul de diviziune, formnd placa metafazic (ecuatorial). Aspectul
cromozomilor este de forma literei X, configuraie determinat de prezena unui singur
centromer pentru cele dou cromatide, iar braele lor se resping.
Centromerul fiecrui cromozom, care a inut unite cromatidele surori, se dubleaz
structural i funcional.
Anafaza II. Are loc separarea centromerilor i a cromozomilor n cromatide, care
devin cromozomi independeni ce migreaz spre poli.
Telofaza II. Se formeaz patru nuclei cu numr haploid de cromozomi
monocromatidici. Membrana nuclear se reface n jurul fiecrui grup de cromozomi
haploizi i are loc apoi citokineza.
Formaiunea format din patru celule haploide ce ia natere la sfritul meiozei II se
numete tetrad celular.
Astfel, dintr-o celul diploid cu 2n cromozomi, n urma celor dou diviziuni ale
meiozei, rezult patru celule fiice haploide, cu n cromozomi. Fiecare din cele patru celule
formate, conin combinaii diferite de gene, asigurndu-se astfel variabilitatea genetic.
Ciclul celular mitotic este, de fapt, un ciclu nchis n sensul c celulele rezultate n
urma meiozei nu mai reiau ciclul ntruct, la animale, acestea nu se mai divid urmnd a
funciona ca i gamei n procesul de fecundare, iar la plante sufer un numr limitat de
diviziuni mitotice haploide n procesul de formarea gameilor.
Ciclul celular mitotic contribuie la realizarea a dou funcii biologice majore:
diversitatea lumii vii prin asigurarea variabilitii genetice a gameilor i continuitatea
genetic de la o generaie la alta n procesul de fecundare, asigurnd constana numrului
de cromozomi a descendenelor.
Variabilitatea genetic a gameilor se asigur n cadrul proceselor de recombinare
intracromozomal prin crossing-over n profaza meiozei I i intercromozomal la nivelul
setului haploid de cromozomi prin segregarea independent a perechilor de cromozomi
omologi n anafaza meiozei I .
20-CICLUL DE VIA I RECOMBINAREA GENETIC LA PLANTELE
SUPERIOARE; SEMNIFICAIA BIOLOGIC I GENETIC
27
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Din exemplul dat, dac se iau n calcul numai 10 gene, fiecare cu cte 2, 3 sau 4
alele, numrul de combinaii este de 310, respectiv 610 i 1010 etc.
n cazul plantelor superioare, Angiosperme, se produce dubla fecundare, din
contopirea oosferei cu gametul mascul, rezultnd oul sau zigotul, iar din unirea nucleului
secundar cu al doilea gamet se formeaz zigotul accesoriu (fig. 3.9.).
Dac zigotul este diploid, zigotul accesoriu are trei seturi de cromozomi, fiind
tetraploid, deoarece rezult din fuziunea nucleului secundar diploid cu gametul mascul
haploid. Faptul c n setul triploid (3n) cromozomi, un numr de 2n cromozomi provin de
la printele matern i numai n cromozomi de la cel patern are consecine n producerea
unor fenomene genetice, de tipul ereditii citoplasmatice.
Din zigot, prin diviziuni celulare succesive mitotice, ia natere embrionul, iar din
zigotul accesoriu, se formeaz endospermul secundar i albumenul.
n cazul Gymnospermelor fecundarea este simpl, un singur gamet contopindu-se cu
oosfera .
Endospermul primar al gimnospermelor, dei ndeplinete aceleai funciuni ca i la
angiosperme, are origine diferit, lund natere dintr-o celul a nucelei aflat n apropierea
micropilului i fiind haploid (n cromozomi).
n esen, diferenierea timpurie a esuturilor embrionului, ca i diferenierea
postembrionar care urmeaz, att la angiosperme ct i la gimnosperme, are ca surs
primordial informaia genetic din structurile ADN ale celulei-ou n care sunt memorizate
de la nceput toate caracterele organismului.
CAPITOLUL IV
Teoria cromozomal a ereditii
INTRODUCTIVE N TEORIA CROMOZOMIAL
21-NOIUNI
A
EREDITII
Pentru genetic, studiul celulei i a diviziunii celulare prezint o mare importan
deoarece face posibil identificarea materialului genetic, a mecanismului prin care genele
se transmit de la celula mam la celulele fiice, de la ascendeni la descendeni, a modului
29
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
transforma n gena alel recesiv a. Ca urmare, genele se gsesc de regul sub form de
pereche (alele). Genele se noteaz cu primele 1-4 litere ce desemneaz prescurtat
caracterul afectat de gena respectiv (n limba englez sau latin). De exemplu, gena
mutant recesiv ce determin ochi de culoare alb la musculia de oet se noteaz cu w
(de la engl. white = alb), iar gena alel ce determin tipul normal cu ochi roii, cu aceeai
liter avnd indicele + (w+). Gena ce determin corpul de culoare galben se noteaz cu y
(de la engl. yellow = galben), iar alela sa ce determin corpul normal gri, cu y +. Din cele de
mai sus se confirm ideea c genele alele sunt situate n aceiai pereche de cromozomi, n
loci omologi, i influeneaz aceiai nsuire a organismului, determinnd apariia unor
caractere contrastante (tabelul 4.1).
Caracterul
Genele alele
+
w ochi de culoare roie
1
Culorae ochilor
w ochi de culoare alb
y+ corp de culoare gri
Culoarea
2
y
corp de culoare
corpului
galben
vg+ aripi normale
3
Forma aripilor
vg aripi vertigiale
ncrucind indivizi normali cu diverse mutante sau diferite mutante ntre ele,
MORGAN constat c transmiterea multor caractere se abate de la cea de-a a doua lege a
lui MENDEL. Admind c diferitele caractere ale organismului sunt determinate de
genele plasate pe cromozomi, MORGAN i d seama c numrul genelor este mult mai
mare dect numrul cromozomilor unui organism. De aici concluzia c mai multe gene
sunt plasate n acelai cromozom, ntr-o succesiune liniar, n anumii loci.
MORGAN, analiznd un mare numr de indivizi de D. melanogaster, femeli i
masculi, insect ce are un numr de 8 cromozomi, constat c femelele au o pereche de
cromozomi omologi (XX), iar masculii un cromozom X de form linear i un cromozom
neomolog, Y de forma unui bastona frnt.
Aadar, prezena cromozomilor XY determin sexul mascul, iar prezena perechii
XX determin sexul femel. Aceti cromozomi au fost denumii cromozomi ai sexului,
heterozomi sau gonozomi, spre deosebire de restul cromozomilor somatici, denumii
autozomi. Aceast descoperire constituie un argument n favoarea ideii plasrii genelor pe
cromozomi, ntruct s-a pus n eviden c o anumit structur cromozomic este corelat
cu un caracter important, i anume sexul.
23-FENOMENUL DE NLNUIRE A GENELOR (LINKAGE)
Studiul celor peste 500 de mutante de D. melanogaster au dus la constatarea nu
numai c genele trebuie s fie plasate n cromozomi, dar innd seama de numrul mare al
genelor i numrul redus al cromozomilor, mai multe gene trebuie s fie plasate n acelai
31
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
cromozom. S-a ajuns la concluzia c pe fiecare cromozom exist un numr mare de gene i
c ele se transmit mpreun, nlnuite la descendeni, manifestnd fenomenul de linkage.
La Drosophila melanogaster experienele fcute de MORGAN au artat c
transmiterea caracterelor nu se face conform tipurilor de segregare cunoscute, fapt
consemnat nc din 1905 de BATESON i PUNETT. Cei doi, au constatat c prin
ncruciarea a dou varieti de Latyrus odoratus, unul cu flori purpurii i grunciori de
polen alungii, cellalt cu flori roii i grunciori de polen rotunzi, dac n prima generaie
s-au obinut hibrizi cu flori purpurii i polen alungit, conform tezei dominanei al lui
MENDEL, n generaia a doua (F2) s-au realizat raporturi de segregare diferite de cele
mendeliene.
Excedentul de flori purpurii i polen alungit, ca i de flori roii i polen rotund, care
s-au nregistrat fa de raportul de segregare 9:3:3:1 a fost pus pe seama tendinei
caracterelor respective de a se transmite mpreun, fenomen denumit de BATESON i
PUNETT, cuplajul gameilor.
La Drosophila, ncrucindu-se un individ mutant pentru dou caractere (corp negru
i aripi vertigiale) cu un individ normal slbatic (corp cenuiu i aripi normale =
caractere dominante), n F1 s-au obinut numai musculie cu fenotip slbatic corp gri i
aripi normale, din heterozigoi normali.
Acetia, masculii () se ncrucieaz cu indivizi dublu mutani homozigoi (femele
) realizndu-se aa numita retroncruciare sau backcross. n F3 reapar tipurile genitoare
n raport de 1:1 datorit faptului c genele respective fiind plasate pe acelai cromozom, se
transmit nlnuite (linkage).
Constatnd c fenomenul se repet i n cazul altor mutante, MORGAN consider
c faptul se datoreaz plasrii celor dou gene (corp gri i aripi normale) pe acelai
cromozom i transmiterea lor se face nlnuit, fenomen pe care l-a numit linkage.
Conform celei de a doua legi mendeliene, n F2 trebuia s se realizeze o segregare
independent a caracterelor i s apar urmtoarele tipuri de indivizi: (1) aripi normale i
corp gri, (2) aripi normale i corp negru, (3) aripi vertigiale i corp gri i (4) aripi vertigiale
i corp negru. n realitate, n urma ncrucirii respective, s-au obinut numai dou tipuri de
indivizi - cu aripi normale, corp gri i cu aripi vertigiale i corp negru -, identici cu formele
parentale.
ntruct numrul genelor este mult mai mare dect numrul cromozomilor i
implicit unele dintre gene fiind localizate pe acelai cromozom, este normal ca acestea s
nu se supun legii liberei combinri a genelor, ci s aib tendina de a se transmite la
descendeni mpreun, odat cu cromozomul respectiv.
Genele ale cror locui sunt situai n cromozomi omologi i care au tendina de a se
transmite mpreun, n bloc, la descendeni, aparin aceluiai grup de linkage. Numrul
grupurilor de linkage este egal cu numrul haploid de cromozomi (n) din celul. Astfel, la
Drosophila (2n=8) sunt patru grupe de linkage (n=4); la mazre (2n=14) 7 grupe de
linkage; la porumb (2n=20) 10 grupe.
32
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
caracterele normale (corp gri i aripi normale). Ulterior, o femel obinut n prima
generaie dup ncruciare a fost retroncruciat cu un mascul care prezenta ambele
mutante, aripi vestigiale i corp negru (vgvg-bb).
n F2 s-au obinut patru tipuri de musculie, adic cele dou tipuri intrate n
combinaie (vestigiale-gri i normale-negru) i dou recombinate genetic (fig. 4.2.).
Ultimele dou categorii de organisme se datorete segregrii genelor care de obicei se
transmit nlnuit. Cauza const n schimbul reciproc de gene plasate pe cromozomii
pereche n timpul diviziunii meiotice.
Analiza hibridologic arat c hibridul femel F 1 produce patru tipuri de gamei i
anume: b+vg i bvg+ i doi gamei noi cu genele bvg i b +vg+. Cei doi gamei noi apar prin
schimbul segmentelor ntre cromozomii omologi (crossing-over).
Crossing-overul este o alt tez a teoriei cromozomale a ereditii, supranumit i
teza schimbului echilibrat de gene ntre cromozomii pereche.
n loc s apar jumtate din descendeni cu aripi vestigiale i corp normal i
jumtate cu aripi normale i corp negru, se obin 41,5% indivizi cu aripi vestigiale i corp
gri, 41,5% cu aripi normale i corp negru, 8,5% cu aripi i corp normale i 8,5% cu aripi
vestigiale i corp negru.
Explicaia pe care o d MORGAN este urmtoarea: n timpul diviziunii mitotice,
cromozomii omologi se apropie foarte mult i se ating unul de altul, n unul sau mai multe
puncte de contact.. n aceste puncte de contact cromatidele se pot rupe, astfel c ntre
cromozomii pereche poate avea loc un schimb reciproc de segmente cromatidice. Dac pe
aceste segmente se afl localizate gene diferite, dar alele, schimbarea unor segmente
cromatidice duce la schimbul de gene, n urma crora apar cromozomi i gamei
recombinai.
Fenomenul de crossing-over, aa cum s-a vzut, se produce n stadiul de zigonempachinem al profazei primei diviziuni meiotice, cnd cromozomii omologi bivaleni
(fiecare cu cte dou cromatide) se apropie foarte mult unul de altul i vin n contact direct
cu unul sau mai multe puncte chiasme, n care, din cauza tensiunilor dintre cromatidele
externe i interne se pot produce rupturi i implicit, transfer reciproc de segmente (stadiul
de diplomen).
n funcie de numrul de rupturi n punctele de contact, se ajunge la crossing-over
simplu, dublu, multiplu.
n timp ce MORGAN i colab. si limitau crossing-over-ul la nivel intergenic, gena
fiind ultima unitate de recombinare, cercetrile ulterioare (dup 1950), au demonstrat i
existena crossing-over-ului intragenic.
n afara recombinrii genetice reciproce s-a mai relevat i existena recombinrii
nereciproce, unidirecional, numit conversie.
25- FACTORII CARE MODIFIC FRECVENA CROSSING-OVERULUI
n condiii normale i uniforme de via, de la o generaie la alta, valoarea crossingover ntre dou puncte rmne constant. Regularitatea manifestrii crossing-over-ului,
34
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
precum i lipsa acestui fenomen la o serie de organisme (molute, viermi), fac s se admit
c att crossing-over-ul ct i linkage-ul se gsesc sub un anumit control genetic.
Frecvena fenomenului de crossing-over este determinat de o serie de factori, dintre
care menionm:
Genotipul. La unele organisme fenomenul de crossing-over este frecvent, n timp ce
la altele este practic absent.
Constituia genetic influeneaz frecvena fenomenului de crossing-over. S-a
constatat la toate organismele c, n segmentele adiacente centromerului, frecvena
chiasmei este mai redus. Cauza principal se datorete faptului c n aceste segmente, n
general, genele sunt foarte dense i tot aici se afl principalele zone heterocromatice.
Aberaiile cromozomale structurale i numerice afecteaz frecvena crossing-overului. Inversia ntr-o cromatid suprim omologia i deci conjugarea regiunii afectate i ca
urmare nu pot aprea chiasma i implicit, nici crossing-over-ul. modificarea numrului de
cromozomi (autopoliploidia, alopoliploidia, monosomia) afecteaz n diferite moduri
producerea chiasmei i ca urmare apariia crossing-over-ului. procentul de crossing-over
crete odat cu creterea distanei dintre gene.
Sexul. La diptere i lepidoptere la sexul heterogametic (mascul XY, respectiv femela
ZW) nu apare n meioz fenomenul de crossing-over. Faptul este explicat prin lipsa de
omologie ntre cromozomii X i Y, respectiv Z i W, care nu conjug n meioz.
Vrsta. Frecvena crossing-over-ului este maxim la maturitatea sexual i scade
odat cu naintarea n vrst. La om, frecvena procesului de crossing-over este mai mare
la femeile de peste 36 de ani.
Factorii de mediu. Temperatura, lumina, nutriia pot produce perturbri n apariia
fenomenului de crossing-over. la Drosophila melanogaster s-a remarcat faptul c
temperatura sczut mrete frecvena crossing-over-ului n unele segmente i o
micoreaz n alta.
26- HRILE CROMOZOMALE
Determinarea frecvenei crossing-over-ului i a linkage-ului i, implicit a distanelor
dintre diferitele gene din acelai grup de linkage, a permis s se elaboreze hrile
cromozomale (hri genetice), adic reprezentrile grafice ale cromozomilor cu indicarea
poziiei relative a genelor linkage (a markerilor genetici), constituente. Pentru aceasta s-a
ncercat s se stabileasc distana existent ntre diferite gene, utilizndu-se ca unitate de
msur frecvena cu care se manifest fenomenul de crossing-over, deci frecvena cu care
apar organismele recombinate.
Procentul de crossing-over n cadrul unei perechi de cromozomi depinde de distana
dintre gene. Aceasta pornete de la raionamentul logic c dac genele de pe acelai
cromozom sunt plasate mai departe una de alta, posibilitatea manifestrii crossing-overului este mult mai mare dect dac sunt alturate (fig. 4.3.).
Pentru ntocmirea hrilor cromozomale se folosete deci analiza genetic, care
const n efectuarea de hibridri ntre indivizi diferii din punct de vedere genetic i
35
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
studierea descendenei la mai multe generaii. n acest fel se determin att grupele de
linkage, ct i frecvena crossing-over-elor, adic distana dintre gene.
Hrile cromozomiale constituie reprezentarea grafic a cromozomi-lor i a genelor
care alctuiesc diferite grupe de linkage, gene plasate n cromozomi la distane relative,
exprimate n procente de recombinare.
O alt metod pentru ntocmirea hrilor cromozomiale la unele diptere (D.
melanogaster) este metoda studiului citologic al cromozomilor uriai (politeni)
Cromozomii uriai sunt de 150 de ori mai lungi dect cromozomii metafazici. ei
sunt formai dintr-un mare numr de cromatide paralele, datorit unei replicri succesive
ale cromozomilor fr ca aceasta s fie urmat de separarea cromatidelor. Fenomenul
poart denumirea de politenie. Deci, celulele glandelor salivare care conin cromozomii
politeni rmn n profaz i ca urmare nu se mai divid.
Prin colorare, de-a lungul cromozomilor politenici se disting benzi (ntunecate) i
interbenzi (luminoase).
Cromozomii uriai de la D. melanogaster prezint circa 5.000 de astfel de benzi, cu
o morfologie caracteristic i o poziie constant.
Studiul comparativ a numrului, morfologiei i poziiei benzilor din cromozomii
uriai de la musculie de oet normale i diferitele mutante au artat c ntre poziia genelor
pe cromozomi i distribuia benzilor exist o corelaie direct. Cercetrile mai recente au
artat c numrul de gene de la D. melanogaster este de circa 5.000, ceea ce corespunde cu
numrul de benzi din cromozomii politenici. Aceste observaii au contribuit la alctuirea
hrii citologice la D. melanogaster. Aceasta a permis gsirea unui suport celular
localizrii genelor n cromozomi (fig. 4.4.).
Primele hri cromozomale au fost realizate de MORGAN i colab. nc din anul
1920, la Drosophila i la Zea mays, specii cu nsuiri genetice foarte adecvate acestui scop.
Rezultatele notabile n stabilirea grupelor de linkage i constituirea hrilor cromozomale
sunt cunoscute la tomate, gru, orz, gura leului i n ultimul timp i la om.
La arbori, ntocmirea hrilor cromozomale rmne o problem deschis, deoarece
identificarea genelor marker i verificarea segregrii mutantelor n descendeni prin
metoda hibridrilor sunt greu de analizat. n plus, n cazul arborilor intervin complicaii
din cauza frecvenei mari a sistemelor poligenice. Problema nu este totui de nerezolvat
dac, de exemplu, se vor putea gsi markeri fenotipici i se vor desfura studii la specii cu
forme i varieti distincte sau interhibride, cum ar fi molidul, pinul silvestru, stejarul sau,
ntr-o msur mai mic, bradul, fagul .a.
Teoria cromozomial a ereditii a avut i are importante aplicaii practice. Aceste
cunotine sunt importante n alctuirea programelor de ameliorare a soiurilor de plante i
a raselor de animale. Astfel, printr-o alegere judicioas a genitorilor se obin hibrizi la care,
36
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
27CONSIDERAII
PRIVIND
EREDITATEA
CARACTERELOR SEXUALE
Caracterele sexuale de ordin morfologic, anatomic, fiziologic, comportamental sunt
foarte bine evideniate la animale, respectiv la om.
La plantele superioare ele sunt mai puin distincte, deoarece att la speciile dioice,
ct i la cele unisexuate monoice, diferenele dintre exemplarele mascule sau femele se
limiteaz adeseori la structura aparatelor florale.
Faptul se coreleaz, de altfel, cu existena i evoluia paralel a capacitii de
regenerare, att pe cale sexuat, ct i pe cale vegetativ mai ales la Angiosperme, ca i cu
capacitatea remarcabil a celulelor de a-i pstra timp ndelungat multipotena
informaional.
La animale, caracterele sexuale determinate genetic rmn numai acelea care
asigur formarea unui anumit gen de celule sexuale i care condiioneaz deosebiri n
structura organelor interne i externe de reproducere, implicate n procesul fecundrii.
Aceste deosebiri intr n sfera caracterelor sexuale primare, n timp ce caracterele
sexuale secundare, au un anumit rol n reproducerea sexuat, dar nu particip n procesele
de gametogenez i fecundare i nu sunt supuse unui control genetic direct, formndu-se
sub influena sistemului hormonal (ex. penajul la psri, talia, pilozitatea, vocea la om .a).
Apariia i determinarea sexelor au nceput s fie explicate nc din antichitate
printr-o serie de ipoteze naive, cum ar fi aceea a lui Hipocrate privind puterea sexual a
seminei la prini sau n legtur cu funciile specifice ale testiculelor, cu direcia din
care bate vntul .a.
Primele cercetri privind mecanismul determinrii sexelor se datoresc citologului
HENKING. n anul 1906 WILSON, pe baza cercetrilor citologice la diferite insecte din
genul Protenor, clarific rolul i semnificaia cromozomului X n sexualizare i introduce
termenul de cromozomi ai sexului, numii ulterior heterocromozomi, gonozomi .a. Se
poate vorbi de un determinism cromozomal al sexelor. Asociat cu determinismul
cromozomal exist i un determinism genic al sexelor, descoperit la Drosophila de ctre
BRIDGES.
37
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
heterogametic i practic lipsit de gene ale formrii sexului mascul. ncrucirile dintre
musculie cu numr variabil de cromozomi X (diploizi i poliploizi) i seturi de autozomi
au dovedit c genele determinrii sexului se gsesc att n heterozomi, ct i n autozomi,
iar sexualizarea depinde de balana dintre genele feminitii din cromozomul X i genele
masculinitii din autozomi. Aceast teorie a echilibrului genelor n determinarea
sexului, este valabil n cazul Drosophilei, la o serie de animale i probabil, la arborii
dioici.
Tipul Abraxas. n comparaie cu tipul Drosophila, tipul Abraxas de determinism
cromozomal al sexelor se caracterizeaz prin sex femel heterogametic i sex mascul
homogametic. Astfel, femelele posed doi cromozomi ai sexului diferii (ZW sau XY) fiind
deci heterogametici. Masculii sunt homogametici avnd doi cromozomi ai sexului identici
(ZZ sau XX). Prin fecundarea gameilor femeli cu cromozomul Z sau Y, cu gameii masculi
Z sau X, vor rezulta descendeni masculi (ZZ sau XX). Dac ns fecundarea se realizeaz
ntre femele ce posed cromozomul W sau Y,cu gamei masculi cu cromozomul Z sau X,
vor rezulta n descenden femele (fig. 5.2.). Acest tip de determinare a sexelor este ntlnit
la psri, la unele specii de amfibieni i reptile, precum i la unele nevertebrate.
Adesea cromozomul W sau Y este mai mic ca dimensiuni dect perechea lui (Z sau
X), iar n unele cazuri el a disprut complet. Este vorba de subtipul fluture, la care femela
este Z0 sau X0, iar masculii ZZ sau XX.
Cele dou tipuri de determinism cromozomal al sexelor asigur totodat un raport
constant i egal ntre sexe (sex-ratio) de 1:1.
Tipul de determinism al sexelor cu haploidie masculin (femel 2n i mascul n). Se
ntlnete la diferite specii de himenoptere, ca de exemplu albina (Apis mellifera).
Femelele provin din ovule fecundate i sunt diploide (2n=32), iar masculii din ovule
nefecundate pe cale partenogenetic i sunt haploizi. Masculul genereaz ns
spermatozoizi normali cu 16 cromozomi, datorit formrii nucleilor de restituie, prin
care toi cromozomii dintr-o celul se dirijeaz ctre un singur pol. n determinismul
genetic al sexelor la albine intervin mai multe gene alele, iar femelele diploide sunt
heterozigote pentru aceste alele, n timp ce masculii, haploizi, sunt hemizigoi, incluznd o
alt alel dect femela. ncruciarea dintre o femel diploid cu un mascul haploid
heteroalelic, duce la apariia de femele diplogenotipice, motenind att caracterul mamei
ct i al tatlui, n timp ce trntorii sunt haplogenotipici, motenind numai caracterul
mamei.
29- FACTORI CARE INFLUENEAZ DETERMINISMUL GENETIC AL
SEXELOR
Determinismul genetic al sexelor i funcionarea sau nefuncuinarea genelor pentru
masculinitate sau feminitate sunt influenate de o seam de factori dintre care menionm:
cantitatea de citoplasm, modul de via, condiiile de mediu (temperatura, lumina,
umiditatea), hormonii sexuali etc.
39
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Codul genetic este nesuprapus, adic doi codoni succesivi nu au nici o nucleotid
comun i este fr virgul (citirea informaiei genetice se face continuu: ntre doi codoni
succesivi nu exist semne de punctuaie). Din totalul de 64 de codoni ai codului genetic,
un numr de 61 codific cei 20 de aminoacizi, iar 3 codoni (UAA, UAG i UGA) nu
codific aminoacizii, ci numai marcheaz sfritul unui mesaj genetic (STOP).
Codul genetic este universal. Acest fapt a fost dovedit prin studiul proteinelor
biosintetizate n sisteme celulare libere, provenite de la bacterii i de la mamifere, sub
influena unor ARN sintetizai artificial. S-a constatat c indiferent de originea sistemului
celular liber se obin aceleai proteine, fapt ce constituie argumentul c aminoacizii ce
intr n alctuirea proteinelor respective sunt codificate de aceeai codoni. inndu-se
seama de universalitatea codului genetic, s-a dedus c are o origine foarte veche, lund
natere n nsi procesul de apariie a vieii pe pmnt.
Recent, s-a demonstrat existena unor excepii de la universalitatea codului
genetic. Astfel, n genomul mitocondriilor (organite celulare de la eucariote) codul genetic
prezint mici deosebiri fa de cel universal. De pild, codonul UGA, care n nucleu are
semnificaia de STOP, n genomul mitocondrial (ADN-mt) codific aminoacidul triptofan.
Existena unor deosebiri minore n ADN-mt nu afecteaz n ansamblu, universalitatea
codului genetic, acelai la procariotele acelulare i celulare, precum i la eucariote.
O alt caracteristic a codului genetic este modalitatea n care se realizeaz
descifrarea mesajului genetic coninut ntr-o succesiune de nucleotide. S-a demonstrat c
citirea mesajului genetic se face ntr-un singur sens, astfel c, absena unei singure
nucleotide (deleia) sau adugarea unei nucleotide (adiia) face ca mesajul s fie citit
eronat, n continuare.
35-FUNCTIILE MATERIALULUI GENETIC (TRANSCRIPTIA SI
TRANSLATIA INFORMATIEI GENETICE)
Rezultatele cercetrilor privind funciile materialului genetic pot fi sintetizate n
relaia ADN ARN proteine (fig. 6.10).
Conform acesteia informaia genetic se reproduce prin replicaie i este
decodificat (transformat ntr-o protein sau enzim specific) prin transcripie i
translaie.
Transcripia constituie fenomenul prin care informaia unei catene de ADN este
transmis la ARN-mesager (ARN-m), precum i altor tipuri de ARN. Translaia nseamn
transformarea unei secvene de nucleotide i respectiv de codoni din ARN-m ntr-o
secven de aminoacizi n catena polipeptidic.
Dup cum se tie, proteinele, care au un rol extrem de important structural i
funcional, sunt foarte variate n natur. Ele reprezint, de regul, circa 50% din substana
uscat a celulelor. Unele proteine, cum este colagenul, au rol n realizarea structurilor
organismului, iar altele, cum sunt enzimele, au rol de a cataliza reaciile metabolice.
Sinteza proteinelor in vivo se realizeaz pe baza informaiei genetice din acizii
nucleici.
48
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Cele trei faze ale biosintezei proteice pot fi redate sintetic astfel:
AA~AMP+P~P
1. AA ATP a min oacil sin tetaza
In aceast faz un aminoacid oarecare AA este activat n urma reaciei cu molecula
de ATP donatoare de energie sub influena enzimelor denumite aminoacilsintetaze.
Ca urmare, aminoacidul se leag de AMP (adezinmonofosfat), iar dou grupuri
fosfat sunt puse n libertate.
AA~ARN-t+AMP
2. AA~AMP+ARN-t a min oacil sin tetaze
n aceast faz are loc transferul aminoacizilor activi la ARN-t, sub influena
acelorai enzime din etapa precedent. Cu ajutorul moleculelor de ARN-t
aminoacizii sunt transferai la locul sintezei proteice n ribozomi.
lim
eraze
AA1~AA2+ARNt1+ARN-t2
3. AA1~ARN-t1+AA2~ARN-t2 peptidpo
n aceas faz, aminoacizii, de exemplu, AA1 i AA2 se unesc ntre ei prin legturi
peptidice cu ajutorul enzimelor peptidpolimeraze. Se formeaz n acest fel catene
polipeptidice, iar moleculele de ARN-t sunt puse n libertate i sunt reciclate, adic
refolosite n procesul sintezei proteice. De asemenea i ribozomii sunt reciclai n
cursul sintezei proteice.
37GENA. STRUCTURA SI FUNCTII, TIPURI
n concepia clasic, gena era definit de ctre JOHANNSEN (1909), ca unitate a
materialului genetic, localizat n cromozomi. n organismele haploide genele se prezint
sub form simpl, iar n cele diploide sub form de alele. Tipul primar al genei (tipul
slbatic) se modific prin mutaii formnd una sau mai multe alele ce afecteaz acelai
caracter. n cazul organismelor diploide descendenii primesc numai cte un membru al
perechii respective de alele, de la fiecare genitor.
n concepia clasic, gena are trei trsturi de baz:
- uniformitatea funcional, n sensul c determin producerea unui efect
fenotipic ;
- unitate mutaional, prin care gena normal ce determin tipul slbatic se
transform prin mutaii n alela, sau alelele sale, astfel c este afectat caracterul
respectiv ;
- unitate de recombinare genetic, prin care genele se pot transfera de pe un
cromozom pe perechea sa, prin fenomenul de crossing-over.
Genele, pe baza localizrii lor pot s fie autozomale i heterozomale. Determinarea
poziiei unei gene ntr-un anumit cromozom a fcut posibil alctuirea hrilor genetice.
Sub aspectul manifestrii lor genele pot s fie recesive, dominante, codominante,
epistatice, hipostatice, complementare sau indiferente.
n timp ce genele nucleare se transmit la descendeni i segreg dup tipul
mendelian, genele extranucleare prezint un tip de motenire nemendelian. ntre cele
dou tipuri de gene de la organismele eucariote poate exista un fenomen de interaciune, n
sensul c cele nucleare pot determina funcionarea sau nefuncionarea celor extranucleare,
mpreun putnd produce un anumit fenotip.
50
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
pe care o conine fiecare gen este la un moment dat decodificat i transformat ntr-o
secven de aminoacizi, adic n catene polipeptidice.
n fiecare celul de tip procariot sau eucariot, genele se gsesc, de regul, ntr-un
singur exemplar sau form de alele, n timp ce numrul moleculelor proteice este foarte
mare, de zeci sau sute de mii. Aceasta nseamn c decodificarea informaiei genetice
coninut n moleculele de ADN se realizeaz cu o vitez foarte mare, nct celulele pot
sintetiza rapid cantiti mari de molecule proteice. Pentru aceasta exist un sistem de
amplificare, prin care genele sunt copiate n numeroase exemplare de
ARN-m prin
fenomenul de transcripie i apoi prin translaie sunt transformate n secvene de
aminoacizi, adic n catene polipeptidice.
Recent s-a descoperit c la eucariote genele cuprind secvene de nucleotide
informaionale denumite exoni i secvene non-informaionale denumite introni. Astfel,
gena este alctuit din mai multe buci, din care numai exonii sunt transcrii n ARN-m i
informaia lor genetic este decodificat i transformat n segmente de aminoacizi. n
procesul de transcripie intronii sunt eliminai.
De exemplu, gena ovalbuminei, a proteinei din albuul oulor de gin, este format
dintr-o secven de 8 exoni i 7 introni, care alterneaz. Ca urmare, genele de la eucariote
sunt mult mai mari dect cele de la procariote, deoarece au segmente de ADN noninformaional. Acest ultim tip de ADN are rol n procesul de evoluie prin duplicarea
genelor.
Genele de la eucariote au o structur discontinu sau n mozaic.
6.4.2. Gene suprapuse. La bacteriofagul phix 174, care are un genom circular, s-au
descoperit gene suprapuse. Gena A a acestui virus bacterian este mai mare, iar gena B de
dimensiuni mai reduse, fiind inclus n gene A. De asemenea genele D i E sunt suprapuse
(fig. 6.11.). Aceasta nseamn c sinteza ARN-m poate ncepe din dou puncte diferite ale
aceleai gene, astfel
c se pot sintetiza dou catene polipeptidice de mrimi diferite.
6.4.3. Pseudogene. n genomul unor eucariote au fost evideniate pseudogene, adic
nite gene relicte, care i-au pierdut funciile i care au numai rol n meninerea arhitecturii
moleculare a cromozomilor. Astfel de gene se regsesc n familia genelor hemoglobinelor,
a imunoglobinelor etc. cu care se nrudesc structural. Fiind nefuncionale, pseudogenele
acumuleaz mutaii cu o frecven mrit.
6.4.4. Elemente genetice transpozabile
Elementele genetice transpozabile sau transpozonii sunt segmente de ADN de 75040.000 perechi de baze, capabile s circule n cadrul genomului att la procariote, ct i la
eucariote i s se insere n diverse locusuri. Ele pot determina mutaii genice, restructurri
cromozomale, activarea unor gene silenioase, inactivarea unor gene etc. Traspozonii sunt
de dou tipuri :
- traspozoni simpli, mai mici ca dimensiuni i care conin numai gena traspozazei,
enzim cu ajutorul creia se realizeaz transpoziia ;
53
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Genele mitocondriale. Fiecare celul vegetal sau animal conine circa 100 de
mitocondrii, ns n unele cazuri numrul lor este mult mai mare. De exemplu, n celulele
hepatice de la mamifere exist circa 800 de mitocondrii.
n mitocondrii se gsete un tip special de ADN mitocondrial (ADNmt), n care se
gsesc n special genele ce codific enzimele necesare respiraiei celulare. n genomul
mitocondrial de la om se gsesc un numr de 37 de gene.
Genele cloroplastice. Cloroplastele sunt organite celulare n care se gsete
clorofila, pigmentul verde cu rol esenial n fotosintez. Numrul de cloroplaste per celul
vegetal variaz de la 1 la alga Spyrogira, la 30-50 n frunzele plantelor superioare.
n cloroplaste se gsete un tip special de ADN cloroplastic (ADNcp). Cantitatea de
ADNcp este de regul mai mare dect cea din mitocondrii, astfel c pot fi codificate 100150 de polipeptide diferite. ADNcp alctuiete un singur cromozom i deci, un singur grup
de linkage.
Mitocondriile i cloroplastele sunt transmise ereditar exclusiv pe linie matern.
39 EREDITATEA DE TIP MATERN
CORRENS (1902) a studiat la planta Mirabilis jalopa (barba mpra-tului) un
fenomen de apariie a unor ramuri pe care frunzele erau de culoare alb sau erau de tip
amestecat, regiuni albe alternnd cu cele verzi (mozaicate) Acest ultim tip de frunze l-a
denumit albomaculatus, i se transmite n descenden pe linie matern, fenomen care a
fost pus n eviden prin efectuarea de ncruciri ntre tipul normal de plante, albinotice i
cele albomaculatus
Se observ, c descendenii seamn cu forma matern i c numai n cazul florilor
materne de tip albomaculatus se produce o segregare. Aceast segregare se datorete
faptului c pe ramurile de tip albomaculatus exist att celule cu cloroplaste, ct i
celule lipite de cloroplaste. Plantele albinotice neavnd posibilitatea de a realiza
fotosinteza, piereau de timpuriu.
Transmiterea ereditar pe linie matern a caracterelor se datorete faptului c cloroplastele
se gsesc exclusiv n citoplasm, se reproduc independent de nucleu i zigotul motenete
tipul de plastide ale mamei. Cauza o constituie faptul c n sacul embrionar se afl
primordiile cloroplastelor n citoplasma oosferei, n timp ce nucleii spermatici care
realizeaz fecundarea sunt lipsii de astfel de primordii.
Deosebiri importante ntre hibrizii reciproci, datorit influenei materne au fost
semnalate i la animale.
De exemplu, din ncruciarea unui iepe (Equus caballus, 2n=64), cu un asin (E.
asinus, 2n=62) se obine catrul (2n=63); din ncruciarea invers dintre o mgri i un
armsar rezult bardoul (2n=63). ntre catr i bardou exist deosebiri nsemnate n ceea ce
privete talia, culoarea, puterea de munc etc. dei ambii hibrizi au 2n=63 de cromozomi.
Non-identitatea hibrizilor reciproci interspecifici ne se poate explica dect datorit
existenei unor gene extranucleare, care se transmit pe linie matern.
7.3. Merogonia
55
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
n sfrit, dac se ncrucieaz plante androsterile (S, rfrf) cu plante androfertile dar
care nu au capacitatea de restaurare a polenului (F, rfrf) se obine n F 1 o descenden
androsteril i homozigot (S, rfrf), deoarece, dup cum s-a vzut, androsterilitatea
determinat de factori din nucleu se transmite ca un caracter minor. Acest tip aparine de
fapt androsterilitii citoplasmatice.
Androsterilitatea de tipul III (nucleo-citoplasmatic) este utilizat n producerea de
hibrizi la porumb, sorg i alte plante, avnd importan economic.
7.6. Caracteristicile ereditii citoplasmatice
n general, fenomenul ereditii citoplasmatice se caracterizeaz prin :
transmitarea caracterelor n alte proporii dect cele mendeliene, i anume n mod
uniparental, adic de la printele care particip cu cea mai mare cantitate de citoplasm
- manifestarea n F1 a caracterelor genitorului matern, indiferent de constituia
genetic a organismelor respective ;
- fenomenul de linkage este absent vis--vis de grupele reprezentate de
cromozomii nucleari, fapt ce face s nu se poat ntocmi hri genetice pentru
genele necromozomiale ;
- manifestarea unor caractere fenotipice depinznd de constituia genotipic a
organismului matern, independent de genotipul propriu ;
- posibilitatea apariiei mutaiilor spontane sau induse artificial la genele
extranucleare.
O seam de cercetri relativ recente au demonstrat existena n citoplasm a unui
aparat genetic propriu, realtiv independent de cel nuclear.
Deosebirile dintre ADN nuclear i ADN din organitele celulare se manifest n
imposibilitatea obinerii de hibrizi moleculari ntre ADN nuclear i ADN din organite.
CAPITOLUL VIII
8. Reproducerea plantelor de cultur
8.1. Sistemele de reproducere i implicaiile lor genetice
O variabilitate genetic corespunztoare nu poate fi creat fr existena reproducerii
sexuate.
Majoritatea plantelor de cultur se reproduc pe cale sexuat, prin fuziunea a doi gamei
identici sau diferii din punct de vedere genetic, pentru a da natere unui zigot. n
general, suprafaa receptoare a stigmatului n acel moment este apt de a primi polen de
la planta care-l poart (autopolen), sau polenul plantelor vecine (alopolen). n aceast
situaie, n mod normal, sunt realizate autofecundri i fecundri ncruciate. n cele
mai multe cazuri reglrile biologice impun o predominan a unuia sau a celuilalt
sistem de polenizare, iar n funcie de natura genetic a gameilor vor rezulta indivizi
homozigoi sau heterozigoi (SAVATTI, 1983).
58
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Dup modul n care are loc polenizarea i fecundarea, speciile se mpart n dou grupe:
autogame i alogame. Trebuie menionat faptul c autogamia i alogamia nu este
perfect, n natur existnd specii ce manifest i un anumit grad de auto- sau
alogamie.n unele cazuri, speciile au scpat sexualitii prin adaptarea unor regimuri de
reproducere asexuat, sau chiar pe calea multiplicrii vegetative
41-BAZELE GENETICE ALE PLANTELOR AUTOGAME. TEORIA
LINIILOR PURE
Speciile autogame au n general flori hermafrodite, organele sexuale ajungnd n
acelai timp la maturitate (homogamie). Ele se reproduc prin autogamie natural, adic
prin unirea a doi gamei sexuali diferiti, dar identici genetic, formai pe acelai individ, cel
mai adesea n aceeai floare. Un mare numr de specii se reproduc prin autopolenizare.
Sunt considerate autogame speciile la care fecundarea strin nu depete n mod obinuit
4, cum sunt: grul, orzul, ovrul, orezul, inul, mazrea, soia, fasolea, tutunul, tomatele
.a. Incidena alogamiei la speciile autogame depinde de genotip, factorii de mediu i
interaciunea dintre acetia. Procentul tinde s creasc n condiiile care favorizeaz, mai
ales, perioada prelungit de nflorire i de deschidere a florilor.
Mecanismele care asigur autogamia pot fi riguros fixate la speciile cleistogame, la
care florile nu se deschid naintea polenizrii. Anterele, situate la nivelul stigmatului,
asigur polenizarea n interiorul corolei. n aceast categorie de specii, menionm
violetele i numeroasele specii floricole spontane de primvar, care emit i flori de var,
cleistogame, mai mici, destinate s produc semine.
n numeroase cazuri, florile fr a fi cleistogame, nu se deschid dect dup ce
fecundaia a fost realizat; este cazul grului unde inflorescenele sunt nchise n glume, iar
florile n glumele, a cror deschidere se realizeaz tardiv. La fel, n cazul inului, fecundaia
are loc naintea deschiderii florilor. Un alt dispozitiv floral, l prezint leguminoasele
autogame, la care, n caren este nchis pistilul, nconjurat de cele zece stamine. La
Solanaceae, la tomate, florile sunt aparent casmogame, adic floarea lor posed o corol
deschis n momentul fecundrii, ns pistilul, n cursul creterii sale, trece prin tubul
format din anterele sale (DEMARLY, 1977).
Dup cum am mai menionat, descendenii provenii de la plantele autogame
homozigote, sunt identici din punct de vedere genetic, toate variaiile sunt datorate
modificaiilor. n natur se pot ntlni rar linii pure; cultivarele autogame sunt n
majoritatea cazurilor constituite dintr-un amestec de linii pure. Datorit autogamiei, ele
prezint o omogenitate i o stabilitate mai pronunat dect cultivarele alogame.
8.2.1. Teoria liniilor pure (Structura genetic a descendenei la plantele
autogame)
Teoria a fost elaborat de botanistul danez JOHANNSEN n 1903, plecndu-se de la
supoziia c exist o variabilitate i la plantele autogame, aparinnd aceleai varietai.
Pentru a stabili acest fapt, el a aplicat metoda seleciei individuale la cultivarul de fasole
59
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
DDrr ddRR
P2
Dr dR
62
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
F1
DdRr
DDrrnn
ddRRNN
P2
DrndRN
DrRrNn
n generaia F1 plantele vor prezenta cte dou rnduri de boabe, rezisten i spic
erect. Pentru a se realiza recombinrile dorite, generaia F1 trebuie cultivat fr nici o
intervenie. Plantele F1, cu constituia genetic DdRrNn, vor produce opt tipuri de gamei:
DRN,DRn, DrN, Drn, dRN, dRn, drN, drn. Aceti gamei pe baza recombinrilor
ntmpltoare vor produce 64 combinaii n F2. Dintre acestea, 9/64 vor prezenta
63
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Dup cum s-a menionat, aciunea genelor pentru determinarea unui caracter
cantitativ sunt, de obicei, aditive, iar cnd efectele ambelor gene sunt aditive se formeaz
un fenotip care reprezint suma efectelor pozitive i negative ale genelor individuale.
Anumite gene pentru caracterele cantitative pot exercita un efect dominant. n acest
caz, valoarea medie a generaiei F1 este apropiat de valoarea medie a oricrui printe i
distribuia frecvenelor n generaia F2 nu va manifesta o variaie simetric continu, ci una
asimetric, conducnd la printele care posed genele dominante. n cazul dominanei
complete, valoarea fenotipic a generaiei F1, egaleaz valoarea unuia dintre prini
(BOROJEVI, 1990).
Cheia succesului n procesul de selecie este dat de variabilitatea genetic ce se
manifest n generaia F2. n exemplul dat, privind nlimea tulpinii, variabilitatea
generaiei F1 a fost mare. Distribuia frecvenelor a oferit posibilitatea selecionrii
genotipurilor cu o nlime a tulpinilor diferit de cea a genotipului B, pn la nlimea
tulpinii ntre 70 i 90 cm, suficient de rezistente la cdere.
Cercetrile din ultimele decenii sub aspect citogenetic i a geneticii moleculare, au
evideniat faptul c nu toate caracterele cantitative sunt controlate exclusiv de gene
minore; unele dintre ele pot fi controlate i de gene majore.
Au fost evideniate un numr de zece gene majore care sunt implicate n controlul
nlimii tulpinii la gru, caracter tipic cantitativ. Un exemplu n acest sens, l reprezint
genele Rht, gsite la soiul japonez Norin 10 i care transmite fenomenul de reducere a
taliei (ALLAN, 1970).
Studiile lui Gale i Youssefian (1985) efectuate pe plante monosomice, au evideniat
c genele Rht1 i Rht3 sunt localizate pe cromozomul 4A, Rht2 i Rht10 pe 4D i Rht8, pe
2D.
Gene majore au fost identificate ca influennd vernalizarea (Vrn), stadiul
fotoperiodic (Ppd) i rezistena la iernare (PUGSLEY, 1983; MAYSTRENKO, 1978).
Poziia frunzelor este controlat de cel puin dou gene majore, poziia orizontal fiind
dominant fa de cea erect (BOJOVI, 1990).
Din cele menionate reiese faptul c succesul n ameliorarea unor caractere
cantitative depinde nu numai de relaia genetic i cea indus de mediu, dar i de
componentele variabilitii genotipice.
43
BAZELE
GENETICE
ALE
PLANTELOR
ALOGAME.
INCOMPATIBILITATEA
Mecanismele fecundrii ncruciate duc la meninerea stadiului de heterozigoie,
deci a unei mai bune vigori hibride. n msura n care, pentru o specie, aceast vigoare
reprezint un avantaj selectiv, toate mutaiile care favorizeaz alogamia vor avea o
puternic valoare selectiv.
La speciile alogame, polenul poate fi rspndit de ctre insecte (plante entomofile),
vnt (plante anemofile), sau n unele cazuri de ap.
65
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
pin (ss)
1 pin (ss) :
thrum (Ss) x
1 pin (ss) :
thrum (Ss)
1 thrum (Ss)
pin (ss)
1 thrum (Ss)
Combinaiile pin x pin sau thrum x thrum sunt incompatibile, ceea ce nseamn c
genotipul SS nu apare. Importana acestui tip de incompati-bilitate este minor pentru
procesul de ameliorare.
8.3.1.2. Incompatibilitatea homomorfic
La angiosperme, nainte ca gametofitul mascul (polenul), s ntlneasc gametofitul
femel, acesta trebuie s ptrund prin esutul sporofit (pistilul), pentru a ajunge la acesta
din urm. Pistilul constituie seciunea unde, cu mici excepii, apare fenomenul de
67
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
incompatibilitate. Mai mult, din moment ce pistilul este un esut diploid sporifitic, reacia
de incompatibilitate este controlat genetic de genom, sau sporofitic.
Pe de alt parte, gametofitul mascul (polenul) poart cel puin cteva componente
din sporofitul pe care care s-a dezvoltat. El poart totodat i citoplasma printelui
sporofit. Astfel, reactivitatea incompatibilitii polenului poate fi controlat genetic sau de
genomul gametofitului patern.
Modificarea genetic, n declanarea reaciilor de incompatibilitate sunt legate de
procesele reglrii morfogenezei grunciorilor de polen. Se distinge o condiie numit
gametofitic, n care specificitatea fiecrui gruncior de polen este determinat de alela S x,
pe care o conine. Din contra, se consider condiia sporofitic, cazul n care toi
grunciorii de polen ale aceleai plante, au aceeai specificitate, determinat de genotipul
SxSy ale acesteia.
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
se pot obine plante homozigote pentru o alel S 1, fie prin frngerea barierei de
autoincompatibilitate fie prin pseudoautoincom-patibilitate.
Mecanismul acestui tip de incompatibilitate se explic prin aceea c dac o plant
posed genotipul S1S2 i S1 este dominant fa de S2, ntreaga cantitate de polen va
funciona ca i cnd ar fi S1; att grunciorii de polen cu alelele S1, ct i cu cele S2, vor fi
imcompatibile pe un stigmat S1 i compatibil pe un stigmat S2. Combinaiile genetice din
cadrul unui sistem sporofitic sunt multiple i complexe ( vezi tabelul 8.5.).
70
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Sistemul sporofitic a fost pus n eviden la floarea soarelui, varz i alte specii
dicotiledonate.
La diferite specii de Brassica s-au utilizat numeroase metode de ngrngere a
barierelor incompatibilitii, de la suprafaa stigmatului. Aceste metode include
polenizarea timpurie, ndeprtarea suprafeei stigmatului, ocuri electrice, creterea
concentraiei de CO2, altoirea .a. n cazul polenizrii bobocilor florali, impedimentul
autoincompatibilitii este depit prin aceea c se depune polen pe stigmate imature, care
nu au avut timpul s-i dezvolte barierele de incompatibilitate.
8.3.2. Semnificaia biologic a heterozigoiei
8.3.2.1. Consangvinizarea. Noiuni introductive
Prin consangvinizare se nelege reproducerea prin autofecundare fora a plantelor
alogame hermafrodite, sau monoice, sau ncruciarea ntre indivizii nrudii n cazul
plantelor dioice.
n mod normal, speciile alogame care nu sunt autoincompatibile pot fi
consangvinizate prin autopolenizare controlat. Unde sexele sunt separate pe plante
diferite, sau sunt controlate de sisteme ale incompatibilitii, se utilizeaz
ncruciarea frate-sor (SIB). Eficiena comparativ a celor dou sisteme de mperechere
este ilustrat n.
Din figur se desprinde faptul c trei generaii de autopolenizare aproape c
egaleaz efectele a zece generaii de mperechere SIB n ceea ce privete homozigotizarea
(BRIGGS i KNOWLES, 1967).
Structura mai mult sau mai puin heterozigot a unui individ, determin un efect
global, extrem de important, n urma consangvinizrii. La cea mai mare parte a
organismelor sexuate fecundarea consangvin antreneaz o cretere a nivelului mediu de
homozigoie, nsoit de diminuarea general a vigorii, fenomen semnalat ca efect al
consangvinizrii.
ntr-o situaie invers, creterea heterozigoiei este legat de fenomenul de vigoare
hibrid, sau heterozis.
Aceste particulariti au fost evideniate nc din 1760, de ctre KELREUTER, iar
noiunea de heterozis a fost propus de SHULL n 1914, dup studiile privind vigoarea
hibrid a liniilor de porumb, ncepute n 1909.
Heterozisul este considerat ca o stare de heterozigoie maxim, care este mai uor de
realizat prin hibridarea liniilor genetic diferite, consangvi-nizate.
Vigoarea hibrid, sau heterozisul, se manifest n toat plenitudinea n F1.
Prin heterozis se nelege fenomenul de superioritate a organismelor hibride fa de
formele parentale, sub aspectul vigorii generale, a adaptabili-tii, capacitii de producie,
a calitii etc.
46- SEMINIFICATIA GENETICA A CONSANGVINIZARII
71
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Banat s-au creat prin selecie natural, mecanisme speciale de echilibru genetic, care
mpiedic manifestarea depresiei de consangvinizare (STNESCU, 1982).
Depresia de consangvinizare face ca la plantele alogame autopolenizarea s nu
faciliteze obinerea de genotipuri utilizate direct n producie, ca n cazul plantelor
autogame. Cu toate acestea, consangvinizarea ofer avantajul de a facilita izolarea de
genotipuri homozigote, deci stabile, care pot fi utilizate n producerea de hibrizi.
ntradevr, homozigotizarea ce apare n urma consangvinizrii duce la pariia, datorit
segregrii i recombinrii, a unor noi genotipuri. ntre acetia, alturi de numeroase tipuri
aberante ca efect a trecerii n stare homozigot a unei gene recesive duntoare, se
ntlnesc i genotipuri care concentreaz un numr mare de gene favorabile. ncruciarea
unor asemenea linii a cror zestre genetic valoroas se completeaz reciproc, ntrun model echilibrat, vor da natere la hibrizi valoroi, dect populaia iniial din care au
fost extrase liniile. ca un efect pozitiv, menionm i uniformizarea liniilor ca urmare a
autofecundrii repetate, mai multe generaii succesive. Homozigoie complet apare dup
un mare numr de consangvinizri repetate, n funcie de gradul de heterozigoie a
materialului iniial, i are ca urmare eliminarea genelor letale sau subletale (SAVATTI,
1983). genotipurile care apar pot s fie homozigot recesive, sau homozigot dominante.
Majoritatea genotipurilor homozigot recesive prezint fenomenul de nanism, defecte
clorofiliene, malformaii, sterilitate parial sau total, dar i unele nsuiri valoroase, cum
sunt : tulpini scurte i rezistente la cdere (porumb i sorg), tulpini erecte i bogate n
frunze (trifoiul rou), coninut sczut de alcaloizi la lupin i rapi, rezisten la stresurile
climatice, boli i duntori .a. Formele homozigote receseve pot fi uor recunoscute,
eliminate sau reinute, din prima sau a doua generaie consangvinizat (PAMFIL i colab.,
1978, 1981).
Deosebit de valoroase sunt genotipurile homozigote dominante, deoarece prin
ncruciarea lor, nsuirile i caracterele valoroase ale acestora se transmit dominant.
47- BAZELE GENETICE SI TIPURILE DE HETEROZIS
Fenomenul de heterozis reprezint vitalitatea maxim a hibrizilor din prima
generaie hibrid, F1. Se exteriorizeaz prin vigoare mrit, reflectat prin cantitatea mare
de rpoducie. Afecteaz toate caracterele i nsuirile biologice i economice ale plantelor,
ndeosebi producia de semine sau fructe. Hibrizii heterotici (F 1) prezint cel mai nalt
nivel de heterozigoie, fiind reversul consangvinizrii.
Cercetrile genetice privind heterozisul, efectuate de LERNER n 1954 i MATHER
n 1955 (dup MUREAN i CRCIUN, 1972), explic acest fenomen genetic pe baza
faptului c hibridul F1 prezint n acelai locus dou alele diferite care determin vigoarea
hibridului respectiv. Aceast vigoare hibrid este mai accentuat la hibrizii plantelor
alogame, obinui pe baza ncrucirii liniilor consangvinizate i mai puin accentuat la
hibrizii plantelor autogame.
Se presupune de asemenea, c hibrizii F 1 manifest o modificare pozitiv a
metabolismului, datorit genelor nealel (POTLOG i colab., 1989).
73
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
CAPITOLUL IX
9. Mutaiile i mecanismul lor molecular
48- DEFINITIA MUTATIEI SI TIPURI DE MUTATII
Noiunea de mutaie a fost elaborat n anul 1901 de H. de VRIES, cel ce a elaborat
teoria mutaionist.
Mutaia poate fi definit ca fenomenul prin care se produc modificri ereditare n
materialul genetic, modificri ce nu sunt provocate de recombinri genetice sau de
segregare. Ele pot s apar n mod spontan i atunci sunt denumite mutaii naturale, sau
pot fi induse experimental, denumite mutaii artificiale. ntre cele dou tipuri de mutaii
sunt deosebiri de ordin calitativ. Mutaiile naturale sunt produse de numeroi ageni
mutageni din natur (radiaii, schimbri de temperatur etc.).
Mutaia poate fi definit i ca modificri discontinue cu efect genetic (MAYR,
1963). Ele pot afecta diferite uniti ale materialului genetic. Sub acest aspect mutaiile pot
fi clasificate n :
- mutaii genice, cnd afecteaz genele ;
- mutaii cromozomiale, cnd afecteaz cromozomii ;
- mutaii genomice, n cazul cnd ntregul genom este afectat.
Dup modul de exprimare fenotipic ele pot fi clasificate n mutaii dominante sau
masive.
n funcie de locul unde sunt plasate genele, mutaiile pot fi autozomale, plasate pe
autozomi i heterozomale, plasate pe heterozomi. Acest tip de mutaii manifest sexlinkage. De asemenea, exist i mutaii extranucleare ale genelor din citoplasm.
O alt categorie o constituie mutaiile letale i semiletale, care afecteaz gene de
importan major n organism, prin a cror blocare se realizeaz moartea individului
nainte de maturitatea sexual.
Mutaiile pot afecta genele de diferite tipuri (structurale, operatoare, reglatoare),
care iau parte la realizarea reglajului genetic. De asemenea ele pot afecta regiuni mai mici
sau mai mari de-a lungul genei, determinnd mutaii punctiforme fiind mutaii
intragenice. Referitor la frecvena mutaiilor, pot fi evideniate gene mutabile, care sunt
mai instabile i prezint o frecven mai mare a mutaiilor comparativ cu celelalte gene din
organism.
O alt categorie sunt genele mutatoare care mresc frecvena mutaiilor altor gene.
Dac mutaiile afecteaz celulele liniei germinate, atunci ele pot fi transmise ereditar
prin gamei la noua generaie. n cazul cnd avem de a face cu mutaii somatice, acestea nu
se transmit n descenden dect n cazul n care esutul sau organul respectiv se obine
prin nmulire vegetativ, indivizi care au apoi posibilitatea s se reproduc vegetativ.
49- FRECVENA MUTAIILOR I NATURA LOR
77
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Apariia brusc a unor indivizi avnd caractere schimbate (mutante) i care transmit
modificarea n descenden a fost observat de mult timp i apar la ntmplare sub
influena condiiilor de mediu.
La plante, dup ce SPRENGER din Heidelberg a descris mutanta cu frunze
lacrimate la Chelidonium majus (sec XIV), DUCHESNE a descris fragul monofil, cu
frunze indivizate. O mutaie asemntoare a fost gsit la Robinia pseudoacacia n anul
1855 i ea a dat natere salcmului monofil. Variatile pendula la numeroase specii de
arbori, cum sunt Saphora japonica, Ulmus glabra, Quecus robur, Prunus padus .a. se
datoresc, de asemenea, unor mutaii spontane. DARWIN a descris numeroase mutaii la
piersici i la animale (oile de Ancona, cini buldogi .a. SENBUCH (1942) a gsit o
mutaie spontan la lupinul alb (Lupinus luteus) care nu coninea n seminele sale
alcaloizi. La pomii fructiferi i al hamei s-au observat un mare numr de mutaii spontane,
acestea fiind utilizate direct ca soiuri noi, sau n programele de ameliorare. Un mare numr
de mutante s-au semnalat la plantele ornamentale (ex. laleaua Murillo). Cea mai cunoscut
mutant spontan din natur este gena opaque, la porumb, care influeneaz coninutul n
lizin.
O mutaie accidental de tipul celei genice, poate avea loc dup afectarea
tautomeric a atomului de hidrogen care mpiedic mperecherea bazelor complementare
la nivelul acidului dezoxiribonucleic (ADN).
Schimbrile care pot avea loc la nivelul nucleotidelor ADN-ului provoac schimbri
de cod, care la rndul lor produc schimbri n codonii ARN-m (ARN-mesager). n aceast
situaie, diferiii aminoacizi pot fi eliminai rezultnd sinteza unor proteine diferite, ce pot
s se manifeste prin apariia unor mutaii spontane naturale, ca de exemplu mutaiile de
culoare, de talie .a.
WATSON (1974), consider c mutaiile spontane rezultate numai din modificri
tautomerice pot s apar cu o frecven de 10 -9 la nivelul nucleotidelor i de 10 -6 la nivelul
genelor/generaie.
n afara acestui mecanism, mutaiile pot fi cauzate de aberaii cromozomiale
(deleia, duplicaia, inversia, translocaia) i de multiplicrile de genom (poliploidia).
La microorganisme, care au o extraordinar capacitate de multiplicare, numrul
mutaiilor care apar ntr-un ciclu de reproducie este foarte mare. De exemplu, numrul
uredosporilor de rugin a frunzelor de gru (Puccinia recondita ssp. tritici), n condiiile n
care infecteaz numai 1% din suprafaa foliar/1 mp de teren este de 300 spori/1 mmp/zi,
respectiv 1011 spori/zi/ha (PARLEVLIET i ZADOKS, 1977). Dac frecvena estimat a
mutaiilor este de 10-8 vor aprea 1.000 mutante/locus/zi/ha.
Dac se ia n considerare c fiecare organism conine cteva mii de gene, putem
afirma c fenomenul mutaional este practic continuu.
WRIGHIT (1931) menioneaz c mutaiile spontane sunt ntotdeauna mai
numeroase dect necesitile evolutive ale speciei.
78
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Rata mutaiilor depinde de genele afectate, de condiiile ecologice .a.. Unele gene
i schimb uor structura, dovedindu-se labile i genernd un mare numr de mutaii.
Asemenea gene, dup cum s-a amintit se numesc mutabile sau instabile i apar ndeosebi
n celulele somatice ale plantelor condiionnd variaiile n culoarea frunzelor, petalelor
.a. Alte gene sunt stabile i sufer foarte rar modificri structurale. Dac se accept c
mutaiile au jucat un rol decisiv n evoluia speciilor, atunci la genul Picea i Abies cele
dou tipuri de gene i-au pus amprenta. De exemplu, genele care condiioneaz forma
bazei acelor i ale persistenei sau caducitii solzilor la conuri trebuie s fi fost foarte
stabile, aprnd prea puine modificri sub acest aspect, n comparaie cu genele ce
afecteaz forma general i dimensiunea acelor sau a formei solzilor i bracteelor la
conuri, care au fost afectate probabil, n msur mult mai mare de diverse mutaii
(STNESCU, 1982).
Cnd MLLER (dup BOROJEVI, 1990) a reuit s induc mutaii la Drosophila
melanogaster, prin iradiere cu raze X, aceasta a marcat nceputul unei noi ere a geneticii
aplicate, mutaiile induse devenind o important surs de variabilitate. De la acest
eveniment s-au descoperit i utilizat, pe parcursul anilor, un numr impresionant de factori
mutageni fizici i chimici.
Primele studii privind inducerea mutaiilor la plante se datoresc italianului
PIROVANO i americanului STADLER.
Frecvena mutaiilor induse este mai mare dect a celor sponatne, oscilnd ntre 10 -310-5/gen/generaie. Unele gene muteaz cu o frecven mai mare dect altele.
S-a constatat c spectrul mutaiilor sponatne i a celor induse sunt similare i c
mutaiile induse, s-au gsit sau se vor gsi n natur.
n funcie de utilitatea lor mutaiile pot fi folositoare, nefolositoare, sau neutre
pentru organism. Deoarece procesul mutaional este aparent ntmpltor i necontrolabil,
majoritatea mutaiilor sunt cosiderate neutre, neafectnd n mod pozitiv sau negativ
individul purttor.
Asemenea mutaii pot s se menin ntr-o populaie timp ndelungat, att timp ct
genele respective se gsesc n stare heterozigot. Cnd genele devin homozigote mutaiile
pot s se exteriorizeze, putnd aduce chiar un avataj purttorului, n condiii de mediu
schimbat.din moment ce mutaiile rezult nu numai printr-o schimbare genetic faa de
tipul slbatic, dar i prin deleia uneia sau mai multor baze n ADN i n urma aberaiilor
cromozomale numeroase mutaii pot s manifeste un efect negativ. Asemenea mutaii sunt
eliminate n procesul seleciei naturale sau artificiale.
Selecia natural favorizeaz mutaiile care sunt avatajoase purttorilor lor. Aceste
mutaii sunt surse poteniale a tot ce este nou, ele jucnd un rol important n evoluia
speciilor, iar pe de alt parte pot constitui o inepuizabil surs de variabiltate genetic.
50-MTAIILE STRUCTURAL CROMOZOMALE, numite i aberaii
cromozomale, se coreleaz cu schimbri n poziia i numrul genelor i se datoresc
79
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
triploizi (2n 3n), tetraploizi (2n 4n), pentaploizi (2n 5n), hexaploizi (2n
6n) etc. i haploizi sau monoploizi (2x x).
Poliploidia a jucat un rol important n evoluia plantelor. Determinnd apariia unor
plante mai viguroase, datorit creterii volumului celular n urma multiplicrii garniturii
cromozomale i favoriznd fixarea unor hibrizi interspecifici sub form de amfiploizi,
poliploidia a dat natere la noi specii care s-au extins dincolo de arealul de existen a
speciilor diploide.
Speciile angiosperme sunt poliploide n proporie de 30-35%, iar dintre cele 652 de
genuri care constituie 80% din flora Europei Centrale, 233 genuri (cu 421 specii) sunt
diploide i 419 genuri (cu 1803 specii) sunt poliploide, adic 64,2% din total (STEBBINS,
dup STNESCU, 1982).
Numrul speciilor poliploide este mai mare n regiunile cu climat aspru, cum ar fi
cele nordice, de altitudine mare, sau zonele deertice, ca i consecin a vitalitii lor
sporite i a rezistenei mai mari fa de stresurile climatice.
La plantele lemnoase printre primii poliploizi semnalai sunt tetraploizii Alnus
glutinosa i A. japonica. NILSON-EHLE descoper n Suedia plopul tremurtor triploid,
Populus tremula f. gigans, cu cretere mult mai viguroas dect a formei diploide.
La rinoase speciile poliploide sunt foarte puine (4,6% din total), putndu-se
semnala Sequoia sempervirens (6n=66 cromozomi), Pseudolarix amabiils (4n=44
cromozomi), Juniperus chinensis f. phitzeriana (4n=44).
La foioase, exist numeroase specii i biotipuri poliploide la genurile Alnus, Betula,
Salix, Acacia, Acer, Tilia, Fraxinus .a.
Odat cu descoperirea factorilor poliploidizani, ameliorarea plantelor a putu s
utilizeze avantajele pe care le poate oferi multiplicarea numrului de cromozomi.
Inducerea artificial a poliploizilor se realizeaz uor i sigur prin utilizarea
tratamentelor cu soluie apoas de colchicin.
Colchicina este un alcaloid obinut din brndua de toamn (Colchicum autumnale).
n stare pur are formula brut C22H25O6N i se prezint sub form de cristale fine, ce se
dizolv n alcool, cloroform sau ap rece. Sub influena luminii i a cldurii se degradeaz
uor.
Metoda colchicinizrii s-a rspndit rapid deoarece se aplic uor, iar soluia are o
bun capacitate de difuziune n celule.
S-a constatat c tratamentul apexului vegetativ al plantelor, sau imersarea seminelor
n colchicin, sau alte substane chimice poliploidizante, duce la dublarea numrului de
cromozomi n celulele somatice. Colchicina mpiedic formarea fusului de diviziune n
mitoz, cromozomii nu se deplaseaz spre placa ecuatorial ci se disperseaz n celul.
Dup diviziunea centromerilor, cromozomii se divid, nu se deplaseaz spre polii opui ai
celulei, rmnnd ntr-o singur celul. O asemenea celul va avea un numr dublu de
cromozomi (2n=4n), n loc de numrul diploid (2n=2x), iar n diviziunile mitotice se vor
forma celule cu 2n=4x cromozomi.
83
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
84
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Primele soiuri tetraploide de raigras peren (L. perenne) i raigras italian (L.
multiflorum) au fost create n Olanda, prin tratarea seminelor ncolite sau a plntuelor
nfrite n diferite stadii, cu soluie de colchicin 0,2% concentraie, timp de 2-4 ore.
Soiurile tetraploide cultivate au un MMB mai mare cu 72-82% dect soiurile
diploide, un spor de producie de mas verde de 8-18% comparativ cu soiurile diploide,
dar aproximativ egal sub aspectul S.U. S-a constatat c dei animalele prefer s pasc
plantele tetraploide, acestea nu prezint rezisten la clcare, comparativ cu cele diploide
(BOGOERT, 1975).
n general, plantele tetraploide, comparativ cu cele diploide au culoarea verde
nchis, mai puin lstarii vegetativi, dar au frunze i lstari cu limea, respectiv cu
grosimea mai mare (SCHITEA, 1998).
Dup MARIA SCHITEA (1998) selecia plantelor tetraploide se face prin analiza
mitozei, metod ce a fost completat cu determinarea numrului i msurarea lungimii
stomatelor, ceea ce permite o difereniere expeditiv a plantelor 2n de cele 4n, cu o mare
marje de siguran.
Soiurile tetraploide, de raigras aristat ct i cel de raigras peren au fost create i
extinse n cultur fiind superioare formelor diploide, sub aspectul produciei de mas verde
i a calitii acesteia.
Soiurile tetraploide sunt stabile din punct de vedere genetic, nu se ncrucieaz cu
cele diploide.
Cercetrile recente, n domeniul utilizrii euploidiei la raigras au vizat selecia unor
genotipuri cu coninut ridicat de substan uscat pornindu-se de la un soi diploid valoros
sub acest aspect (REHEUL i BAERT, 1993; BAERT, 1994).
Secara tetraploid (2n=4n =28). Utilizarea ocurilor de temperatur i-au permis lui
DORSEY (1936) s obin primul soi tetraploid de secar. Amplificarea lucrrilor s-a
realizat dup 1941, odat cu utilizarea curent a colchicinei n lucrrile de ameliorarea
plantelor.
Comparativ cu diploizii, autotetraploizii se caracterizeaz prin mrimea prilor
vegetative, rezultant a unui numr mai mare de cromozomi i a unui volum mai mare a
celulelelor. Cultivarele tetraploide au paiul mai tare i mai nalt, frunze mai mari, spice mai
lungi, iar seminele sunt de aproape dou ori mai grele dect n cazul diploizilor. Aceast
ultim modificare a adus schimbri n raportul dintre hidraii de carbon i proteine, secara
tetraploid avnd cu cca. 2% mai mult protein i de aici proprieti panificabile
superioare.
Un neajuns a secarei tetraploide este proporia ridicat a sterilitii, cu cca. 20% mai
mare dect la secara diploid, cultivat n condiii de producie. Sterilitatea rezult din
formarea trivalenilor i univalenilor, ca i a lipsei balansului necesar ntre cromozomi i
citoplasm. Aceste cauze au fcut ca secara tetraploid s fie timid acceptat de cultivatori.
Un alt dezavantaj este acela c dac este cultivat n vecintatea unui lot cu secar diploid
87
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Organismele la care n genomul complet fiecare cromozom este prezent de trei ori,
se numesc triploizi (3x).
Organismele triploide sunt mai viguroase dect echivalenii lor diploizi sau chiar
tetraploizi, utilizndu-se cu succes n cultur (exemplu, sfecla de zahr, sfecla furajer
.a.).
Din cauza numrului impar de cromozomi meioza la triploizi este neregulat,
rezultnd organisme sterile. Acest fenomen prezint un evident avantaj n cazul soiurilor
comerciale triploide, neavnd semine (struguri, pepene verde, banane .a.). La speciile cu
multiplicare vegetativ cum ar fi ierburile, pomii fructiferi i plantele decorative, triploizii
sunt foarte frecveni.
Ei pot s apar i n cazul n care o ovul cu un numr neredus de cromozomi
(n=2x) este fecundat de polen cu numr redus de cromozomi (n=x). Obinerea frecvent a
triploizilor se realizeaz i prin ncruciarea formelor tetraploide cu cele diploide.
Sfecla de zahr (2n=2x=18; 3x=27; 2n=4x=36), triploid este un produs
indiscutabil a ingineriei cromozomale.
n 1938, SCHWANITZ a obinut sfecla de zahr tetraploid, care prin ncruciarea
cu sfecla diploid a dus la crearea sfeclei triploide, mai productiv dect ambele forme
parentale (dup HENDRICKSEN, 1979).
Crearea soiurilor poliploide de sfecl necesit urmtoarele etape:
- inducerea artificial a tetraploizilor i selecia acestora;
- obinerea formelor tetraploide valoroase, cu capacitate combina-tiv ridicat;
- gsirea celor mai favorabile combinaii hibride ntre formele tetraploide i
diploide.
Soiurile poliploide conin indivizi care aparin la diferite grade de ploidie, de obicei
di-, tri- i tetraploizi, din care cauz au fost denumite anizoploide, spre deosebire de cele
diploide i tetraploide, care prezint un singur grad de ploidie, fiind denumite izoploide.
Componena soiurilor anizoploide este diferit, n sensul c proporia triploizilor se ridic
n general la peste 40%, de obicei 40-60%. La soiurile create pe baz de androsterilitate ea
poate depi 90%. Proporia diploizilor, care variaz n limite mari, nu trebuie s
depeasc 40%.
n sensul strict al cuvntului, este considerat soi poliploid numai acela care este
format din plante triploide i tetraploide, iar soi triploid, n care predomin plantele
triploide, avnd o proporie redus de plante cu alte grade de ploidie ale genomului.
Componena soiurilor anizoploide este condiionat de raportul dintre plantele
soiurilor parentale, de gradul de fecundare selectiv a celor dou forme parentale, de
procedeul de recoltare, de sterilitatea polenului unuia dintre cele dou soiuri componente
.a. (STNESCU i RIZESCU, 1976).
Cel mai bun raport ntre formele parentale este de 1:3 sau 1:2, n favoarea formelor
tetraploide, cnd se folosesc butai. Utilizarea butailor cu grad diferit de ploidie face ca
89
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
plantarea s se fac alternnd trei rnduri ale soiului tetraploid cu un rnd a soiului diploid,
sau 6:2.
n cazul n care amestecul este format din smn (baz), raportul poate fi de 1:5;
1:8, deoarece smna tetraploid are o germinaie mai sczut i dimensiuni mai mari.
S-a constatat c nu apar diferene marcante ntre proporia tetraploizilor obinui din
smna realizat de la semincerii plantai n rnduri alternative i smna rezultat din
recoltarea n amestec a formelor parentale. Apar diferene evidente n cazul n care cele
dou forme parentale se planteaz alternativ i se recolteaz smna numai de la
componentul tetraploid.
Efectul heterozis ce se manifest la formele poliploide de sfecl de zahr se
datoreaz fenomenului de selectivitate n procesul fecundrii. ncruciarea liber a
formelor 4n i 2n ar trebui teoretic, s duc la realizarea unei semine hibride n proporie
de 50%. n realitate proporia plantelor triploide poate fi de 60-80% n cazul utilizrii
soiului tetraploid ca mam i de 10-20% cnd soiul diploid este utilizat n aceast calitate.
Avantajele oferite de sfecla de zahr triploid au fost evideniate mai ales dup
descoperirea fenomenului de androsteriltate de ctre OWEN n 1942. Aceasta, a fcut
posibil producerea pe scar larg, a hibrizilor triploizi monogermi. n acest scop se
utilizeaz ca form mam linii androsterile, diploide sau tetraploide.
FISCHER (dup STNESCU i colab., 1976), rezumnd avantajele uneia sau altei
forme materne, consider ca neproductiv utilizarea formei tetraploide din cauza slabei
capaciti de germinare a seminelor acestei forme.
Pentru a crea soiuri comerciale triploide apare necesitatea, naintea obinerii
hibrizilor, de a realiza o selecie la nivelul liniilor androsterile diploide i realizarea de
smn diploid prin utilizarea liniei diploide menintoare. La nivel tetraploid apare
necesitatea verificrii gradului de ploidie i capacitatea genitorului patern de a realiza un
polen fertil.
Pepenii verzi fr smn (3x=33). Geneticianul KIHARA a obinut n 1951
pepeni verzi fr smn, prin ncruciarea pepenilor diploizi (2n=2x=22), cu cei
tetraploizi (2n=4x=44). Din cauza meiozei complet neregulate, plantele triploide (3x=33)
nu formeaz semine, situaie ce avantajeaz comecializarea acestora.
Via de vie triploid i tetraploid (3x=57; 2n=4x=76).
Soiurile triploide i tetraploide de vi de vie au fost realizate de asemenea, prin
colchicinizare. Cele tetraploide au boabe mari i un numr redus de semine, cu avantaje
comerciale. Aspectele negative sunt condiionate de producia relativ sczut.
Soiurile triploide sunt complet lipsite de smn fiind ideale pentru obinerea
stafidelor (soiuri apirene).
La speciile forestiere din genurile Populus, Alnus, Betula, Robinia, stadiul triploid
pare s reprezinte numrul optim de cromozomi, cruia i corespunde potenialul biologic
maxim. Triploidul rezultat prin ncruciarea laricelui european cu laricele occidental (Larix
occidentalis) s-a dovedit de asemenea, deosebit de viguros.
90
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Triploidul natural a plopului tremurtor crete mai viguros dect diploizii (tabelul
10.1)
Volumul tulpinilor la diploizi i triploizi de plop treurtor (diploizi=100%)
(dup Institut of Paperehemistry, din J.W.WRIGHT, 1964)
Diploizi
Triploizi
Prini
(%)
(%)
100
92
P. tremuloids P.
tremula
100
129
P. tremula P. tremula
Mai repede dect diploizii cresc i triploizii de Alnus glutinosa i Ulmus glabra. n
schimb, la Betula verrucosa i B. verrucosa
B. mandshurica var. japonica,
viteza de cretere a triploizilor este uor diminuat.
56-ALOPOLIPLOIDIA
Alopoliploizii sau amfiploizii rezult n urma hibridrii naturale sau artificiale a
dou sau mai multe specii sau genuri, urmate de dublarea sau multiplicarea seturilor de
cromozomi. Duplicarea apare dup fuzionarea a doi gamei cu numr neredus de
cromozomi. O metod mai eficient pentru obinerea alopoliploizilor s-a dovedit tratarea
generaiei F1 cu colchicin. O alt cale este backcrosarea generaiei F 1 cu printele ce
posed un numr mai mare de cromozomi.
Alopoliploizii, datorit prezenei n stare dubl a seturilor originare de cromozomi,
fixeaz i manifest caracteristicile ambelor specii genitoare. Ei sunt fertili deoarece n
meioz mperecherea cromozomilor este la fel de regulat ca i la diploizii originari. Spre
deosebire de autotetraploizi la care n meioz, din cauza homologiei cromozomilor se
formeaz multivaleni, n meioza alopoliploizilor (n lipsa homologiei dintre seturile de
cromozomi) se formeaz numai bivaleni. Datorit acestui fapt, n sporogenez se vor
forma gamei normali.
Pentru a nelege procesul formrii alopoliploizilor aceasta poate fi exemplificat
prin intermediul unor specii sintetice, ca de exemplu, Triticale.
n urma ncrucirii ntre gru i secar apar plante F 1 cu 28 de cromozomi, a cror
caractere sunt intermediare. Plantele F1 sunt complet sterile deoarece toi cromozomii sunt
univaleni i gametogeneza este neregulat. Cnd plantele F1 sunt backcrosate cu grul,
descendenii rezultai posed 42 de cromozomi derivai de la gru i 7 de la secar.
Deoarece cromozomii de gru formeaz bivaleni n meioz, univalenii de secar nu
prezint un efect negativ puternic asupra procesului meiotic a plantelor primului
backcross, fiind parial fertile. Gameii diferii apar n cursul gametogenezei la plantele
primului backcross. Cromozomii grului fiind bivaleni se distribuie regulat la polii
celulei, cte 21 cromozomi la fiecare, n timp ce cromozomii secarei fiind univaleni se
distribuie neregulat. Dac un ovul va avea 21+7 cromozomi i va fi fecundat de un
gruncior de polen cu 21+7 cromozomi, plantele rezultate vor avea cromozomii de la gru
91
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
92
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
apar n mod natural, cu o frecven redus, sunt utilizai prin redublarea numrului de
cromozomi la obinerea de linii absolut homozigote. Odat izolat secvena urmrit, se
recurge la dublarea numrului de cromozomi prin colchicinizare, pentru a reveni la
numrul normal de cromozomi.
Frecvena haploizilor naturali este sczut, de aproximativ 1/1.000 n cazul
partenogenezei i cca. 0,1/1.000 n cazul androgenezei. La plantele superioare, incidena
haploidiei naturale este de 0,05% la Zea mays, 0,5% la Triticum monococcum, 0,025% la
T. aestivum, 0,025-0,037% la Gossypium barbadense etc.
Ca o regul general, plantele haploide sunt mai scunde dect cele diploide, mai
puin viguroase, tardive i complet sterile din cauza cromozomilor univaleni.
Pentru a se corecta aceste deficiene, haploizii se dubleaz cu ajutorul colchicinei
pentru a se obine organisme diploide, aa numiii dihaploizi sau dubli haploizi.
Oragnismele dihaploide sunt complet homozigote pentru toate genele alelice,
situaie ce nu se realizeaz n totalitate n cazul liniilor consangvinizate, sau a organismelor
autogame. Importana lor pentru studiile de genetic ca i n ameliorare au dus la
aprofundarea metodelor de obinerea lor in vivo i in vitro, cu o frecven sporit
59 - METODE DE INDUCERE A HAPLOIZILOR I DUBLU
HAPLOIZILOR
Dei are o valoare teoretic i potenialiti largi de aplicare, haploidia, pn n
ultimele decenii a ocupat un loc nesemnificativ n programele de cercetare genetic i de
ameliorare a plantelor de cultur. Aceasta s-a datorat incidenei reduse a haploidiei
spontane, dar mai ales lipsei unor metode experimentale eficiente pentru izolarea de
haploizi cu frecven ridicat i de obinerea de linii dublu haploide homozigote.
Dintre metodele experimentale, actuale, de inducere a haploizilor, cele mai utilizate
sunt:
a. Poliembrionia, respectiv apariia de embrioni gemeni sau mai muli embrioni, este
destul de frecvent la plante. Embrionii gemeni pot avea o constituie cromozomal
identic: diploid-diploid, haploid-haploid sau diferit, diploid-haploid, diploid-tetraploid,
haploid-triploid etc.
Poliembrionia ca surs de haploizi se utilizeaz frecvent la speciile de Linum
usitatissimum, Caspicum annuum, Beta vulgaris .a. (NITZSCHE i WENZEL, dup
SAVATTI, 1983).
Frecvena poliembrioniei variaz n funcie de specie i de genotip. Existena unui
control genetic a acestui fenomen permite selecia de genotipuri cu capacitate mrit de
formare de poliembrioni, dei ntre incidena poliembrioniei i frecvena haploizilor nu s-a
gsit nici o corelaie stabil.
La ICCPT Fundulea s-a utilizat cu succes aceast metod pentru obinerea de
haploizi i linii dublu haploide homozigote la in (DOUCET, 1970).
97
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
98
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
d. Cultura in vitro. Metoda culturii de antere a devenit cea mai important metod in vitro
de obinere a haploizilor, din polen. S-au obinut haploizi, prin aceast metod la peste 60
de specii, 90% din familiile Solanacee i Gramineae (SUNDERLAND, 1983; JENSEN,
1986). Regenerarea cu succes a plantelor ntregi din calusul anterelor a fost realizat numai
la un numr limitat de specii de plante, tutun, cartof, varz, tomate, orez, gru, petunia,
porumb etc. (JENSEN, 1986).
Perspectivele utilizrii androgenezei ale crei potenialiti au fost insuficient
valorificate depinde de elucidarea unor aspecte de biologie celular privind modificrile
ce au loc n antere n cursul meiozei i diferenierii polenului, ca i de mbuntirea
metodologiei de lucru, la nivelul tuturor etapelor (SAVATTI, 1989).
Deaorece haploizii pot aprea n mod natural dintr-un ovul nefecundat sau alte
celule din ovar, s-a ncercat obinerea de haploizi din culturile in vitro din ovare i ovule.
n general, prin ginogenez experimental s-au obinut unele succese la sfecla de zahr i
gerbera, dar mai puin spectaculoase la alte specii, ca de exemplu la gru (BOROJEVI,
1990).
O metod laborioas a obinerii de haploizi in vitro const n eliminarea
preferenial a cromozomilor, metod denumit bulbosum i a fost elaborat de
cercettorii canadieni KASHA i KAO (1970).
Cnd orzul cultivat (Hordeum vulgare) este ncruciat cu orzul slbatic (H.
bulbosum) seminele rezultate au endospermul nedezvoltat. Este posibil obinerea de
plantule din astfel de semine, prin culturi de embrioni. Embrionii derivai din H.
bulbosum sunt eliminai n stadiile timpurii de dezvoltare a plantulelor, iar cele care au
supravieuit sunt de fapt plante haploide de H. vulgare (SIMPSON i SNAPE, 1981) (fig.
10.2.). n aceast ncruciare are loc n mod normal fecundarea, formndu-se zigoi n
proporie de 65%, iar n stadiul timpuriu al dezvoltrii embrionare (12-14 zile dup
polenizare), are loc eliminarea preferenial treptat a cromozomilor bulbosum. Plntuele
formate din aceti embrioni conin numai genomul vulgare n stare haploid. Eliminarea
difereniat a cromozomilor are loc indiferent de specia folosit ca genitor femel sau
mascul. Metoda a fost extins i la gru, polenizator fiind folosit porumbul.
Tehnica culturilor in vitro a fost pus la punct i este folosit pe scar tot mai larg i
n cazul speciilor forestiere. Realizarea n mas, chiar n F 1, a unor populaii de linii
complet homozigote la arbori, prin utilizarea metodei menionate, deschide largi
perspective n analiza genetic privind structura cromozomilor, localizarea mutaiilor,
transformarea genelor prin recombinare, ca i n selecie i extinderea n cultur a
genotipurilor superioare. Haploizii avnd o structur genetic unitar, pun n eviden,
pregnant, intensitatea de impact a mediului, n diferite condiii ecologice de cultur
forestier comparat (STNESCU, 1982).
60- PARTICULARITILE CITOLOGICE ALE POLIPLOIZILOR
Autopoliploizii se formeaz prin dublarea genomurilor proprii, n meioz sau
mitoz. Astfel, diviziuni meiotice anormale conduc la apariia de celule sexuale nereduse,
99
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
diploide (2x) i dup fecundarea acestora, la organisme tetraploide (4x). Diviziuni mitotice
anormale ale celulelor zigotului, prin nesepararea i nedeplasarea cromozomilor n
anafaz, cauzeaz, de asemenea, formare de organisme tetraploide (4x).
La plantele autotetraploide, meiozele relativ anormale cauzeaz scderea fertilitii
i apariia de forme aneuploide, cu vitalitate diminuat (fig. 10.3). Se consider, de aceea,
c derivaii autotetraploizi ai diploizilor fertili au tendina de a fi sterili, aa cum se
ntmpl n cazul autotetraploizilor de Larix europaea i Cryptomeria japonica.
n natur exist totui numeroase specii autotetraploide cu fertilitate normal, care,
avnd nsuiri superioare diploizilor, probabil s-au meninut la nceput prin nmulire
vegetativ, pentru ca, ulterior, prin selecia natural, s se elimine treptat formele cu
meioz anormal, precum i cele aneuploide, puin viguroase.
Alopoliploizii sunt adeseori sterili, deoarec pot rezulta fie prin ncruciarea unor
genitori cu genomuri complet diferite i, ca urmare, mperecherea cromozomilor provenii
de la cei doi prini nu este posibil, fie prin ncruciarea unor forme cu genomuri
omoloage, caz n care n meioz apar tetravaleni, trivaleni i univaleni, cu aceleai efecte
nefuncio-nale ca la autopoliploizi.
Alotetraploizii provenii din hibrizi diploizi sterili sunt ns susceptibili de a fi fertili
i fixai. Hibrizii diploizi, coninnd dou serii diferite de cromozomi, de exemplu, A i B,
relev aceleai dezechilibre n repartizarea cromozomilor n gamei, menionate mai sus.
Alotetraploizii i amfiploizii derivai din acetia include cte dou seturi genomice de la
cei doi prini (AABB), aa nct, la formarea celulelor sexuale, n meioz, fiecare gamet
primete n total 2n cromozomi, i anume de la fiecare genitor cte n cromozomi. Ca
urmare fertilitatea polenului se restaureaz i fructificaia se normalizeaz.
CAPITOLUL XI
61INGINERIA GENETICA (TRANSFERUL DE GENE)
Metodele i tehnicile discutate se ncadreaz n sens larg n domeniul ingineriei
genetice, cu toate c ele nu au de-a face cu transferul genelor individuale, ci doar cu
manipularea celulelor plantelor n care sunt ncorporate genoame nucleare sau
citoplasmatice, sau fuziunea acestora.
Transferul unei gene particulare de la un organism la altul prin tehnicile ADN-ului
recombinant, este considerat ca fiind domeniul ingineriei genetice pure. Cu alte cuvinte,
ingineria genetic const din manipularea direct a materialului genetic i transferul
genelor dorite, de la un organism la altul ca i transferul unor gene obinute prin sintez
chimic (DARBESHWAR ROY, 2000).
Descoperirea enzimelor de restricie a permis segmentarea moleculelor de ADN n
anumite puncte, fiecare fragment fiind n majoritatea cazurilor o gen individual i
recombinarea acestor fragmente ntr-un nou lan de ADN recombinant (WATSON i
colab., 1983).
Ingineria genetic implic urmtoarele proceduri :
100
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
NPT, capabil s detoxifice kanamicina. Cele lipsite de gena bacterial rmn albe,
deoarece kanamicina distruge cloroplastele (dup TEMPE i SCHELL, 1987) (fig. 11.2).
Cea mai simpl metod de transformare a plantelor prin intermediul plasmidului Ti
este metoda discului (HORSCH i colab., 1985). Discurile foliare, cu un diametru de 6
mm, se infecteaz cu Agrobacterium tumefaciens care conine un plasmid himeric cu gena
dorit. Prin aceast metod s-a reuit s se transfere gene rezistente la antibiotice,
kanamicin i carbamicin (HORSCH i colab., 1985).
Transferul de gene prin ncorporarea direct a unui plasmid Ti n protoplast apare ca
o posibilitate eficient n cazul petuniei i a altor dicotiledonate (COCKING i DAVEY,
1987). Primele rezultate ale transferului direct de gene pentru rezistena la kanamicin au
fost obinute cu protoplati de Triticum monoccum i Lolium multiflorum (POTRYCUS i
colab., 1985).
Microinjectarea de ADN n nucleii protoplatilor sau n inflorescene constituie o
metod nou de transfer a genelor (SCHELL, 1987), demonstrat cu imprimarea
rezistenei la kanamicin i ncorporarea genelor de rezisten n mugurii floriferi de
secar.
Transferul de gene pentru rezistena la antibiotice n plante se utilizeaz numai ca
marker pentru alte transferuri folositoare n ameliorarea plantelor. Un exemplu l constituie
transferul genelor pentru rezisten la ierbicide, realizare deosebit de important pentru
agricultur.
Ierbicidul glyphosphat este un inhibitor al enzimei 5-enolpiruvilshikimate-3fosfataz (EPSP) sintetizat de plant. COMAI i colab. (1985) au izolat gena mutant aro
A pentru EPSP din bacteria Salmonella typhirium i l-au transferat n plasmidul Ti la A.
tumefaciens cu care au infectat plante de tutun. Plantele transformate au manifestat o
anumit rezisten la ierbicide.
SHAH i colab. (1986) au izolat o clon de ADN complementar care cuprinde
sinteze de EPSP dintr-o linie de petunia, tolerant la glyphosphat. O gen himer EPSP a
fost realizat cu ajutorul virusului conopidei 35 S, n calitate de promotor, indus n
celulele de petunia. Plantele transformate au artat toleran la ierbicid.
Unele ierbicide comerciale conin fosfinotricin (PPT) care este un inhibitor al
glutaminei i al sintezei acestuia n plante, fiind utilizat ca un ierbicid neselectiv. DE
BLOCK i colab. (1987) au folosit gena bar care confer rezisten la Streptomyces
hygroscopicus la bialaphos (o tripeptid care conine PPT) i include fosfinotricinacetiltransferaza (PAT) capabil s converteasc PPT-ul ntr-o acetilat netoxic. Prin
intermediul vectorului Agrobacterium, s-a reuit transferul genei bar n tutun, tomate i
cartofi. Plantele transgenice au manifestat o cretere a enzimei PAT, fiind complet
rezistente la dozele ridicate din produsele comerciale de fosfinotricin i bialaphos.
Exemplul reprezint un succes n obinerea plantelor rezistente la ierbicide.
POWEL-ABEL i colab. (1986) au evideniat posibilitatea obinerii de plante
transgenice pentru bolile virotice. O gen himeric avnd un ADN clonat pentru proteina
102
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
protectoare (CP) i gena acestuia la virusul mozaicului tutunului (TMV) a fost ncorporat
n celule de tutun prin intermediul unui plasmid TI. Plantele regenerate au manifestat
rezisten la TMV ca pe un caracter nuclear.
Tehnica ADN recombinant ofer multe alte posibiliti. JAMES i colab. (1986) au
urmrit s mbunteasc compoziia proteic a plantelor. Ei au sintetizat un fragment de
ADN care codific coninutul ridicat de aminoacizi eseniali. Fragmentul denumit gen de
introducere a acizilor eseniali (HEAAE-gene) a fost clonat i introdus ntr-o bacterie.
n acest fel gena a fost introdus n cartof prin intermediul lui Agrobacterium rhizogenes
(plasmid Ri), obinndu-se plante transformate.
Un rezultat interesant l-a obinut OW i colab. (1986) care au reuit transferul genei
luciferaza de la licurici (Photinus pyralis), prin intermediul virusului mozaicului conopidei
35 S n protoplatii de Daucus carota prin electroporaie i la Nicotiana tabacum prin
folosirea plasmidului Ti de la A. tumefaciens. Dei fr importan practic deosebit,
realizarea menionat poate fi de larg interes pentru unele plante horticole, dar poate servi
i la realizarea de markeri pentru manipularea altor gene.
Utilizarea lui Agrobacterium n procesul de transformare genetic a plantelor este
destul de complicat. Datorit acestui fapt au fost ncercate i alte metode. Una dintre
acestea este un transfer direct de gene n celulele plantelor cultivate in vitro. Metoda
injectrii de ADN a ridicat cteva probleme legate de dificultile de penetrare a peretelui
celular, daune produse celulelor injectate (SCHWEIGER i colab., 1987). Injectarea
direct n plante, semine, embrioni sau polen nu au dovedit c gena introdus este
integrat i motenit stabil (SCHELL, 1987). De dat mai recent s-a demonstrat reuita
transformrii prin injecie direct, a ADN-ului plasmidial n mugurii florali de secar,
reuindu-se obinerea a trei plante transgenice de secar (BOROJEVI, 1990).
Tehnica ADN recombinant este fr ndoial o realizare fascinant a gndirii umane,
dar de la care nu trebuiete s se atepte miracole. Trebuiesc aprofundate n continuare
procesele metabolice la nivel molecular, procese de difereniere celular i organogenez,
bariarele de integrare i funcionare a genelor strine transferate i nu n ultimul rnd dac
plantele transgenice nu pot fi duntoare regnului animal.
O plant transformat genetic pentru rezisten la un ierbicid sau o boal poate s-i
piard rezistena ca rezultat al apariiei de noi rase patogene sau noi ierbicide, n mod
asemntor ca i n cazul genelor ncorporate prin metodele convenionale de recombinare.
Transferul uneia sau mai multor gene de la un organism la altul este numai o parte a
procesului de ameliorare, unde recombinrile genetice pentru caractere multiple rmn
absolut necesare.
Obinerea de noi genotipuri valoroase trebuie considerat ca un sistem integrat bazat
pe legi genetice, selecie natural i artificial i diferite metode de creare i utilizare a
variabilitii genetice obinut prin recombinare genetic, mutaii i transfer. Metodele
neconvenionale biotehnologice, trebuiesc considerate ca o parte integrant a sistemului de
ameliorare i nicidecum un nlocuitor a ameliorrii convenionale.
103
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
CAPITOLUL XII
Elemente de genetic a populaiilor
63- FRECVENA GENELOR I A GENOTIPURILOR
Populaiile alogame, datorit sistemului lor de reproducere sunt conduse de legi
diferite, comparativ cu plantele autogame. Sistemul polenizrii libere se bazeaz pe
ncruciri ntmpltoare care ofer posibiliti constante de unire a gameilor genetic
diferii.
Alogamia este cel mai frecvent mod de reproducere i cel mai apropiat de panmixie
(sistem de mperechiere ntmpltoare, liber i nediscriminatorie ntre indivizii unei
populaii alogame). n acest fel, la reproducerea prin panmixie se menine neschimbat
frecvena genelor i structura populaiei (PANFIL, 1974).
n cadrul unei populaii formate din numeroase biotipuri i cnd nu intervin restricii
n procesul polenizrii i fecundrii (cazuri de selectivitate n procesul fecundrii sau de
incompatibilitate), plantele alogame sunt heterozigote pentru aproape toate genele care le
conin.
Sistemul polenizrii libere menine n mod constant heterozigoia, pe cnd prin
autopolenizare, odat cu creterea numrului de generaii se ajunge la o homozigoie
complet. Datorit acestui fapt, efectul seleciei n populaiile cu polenizare liber este
diferit de cel pe care-l are asupra unei populaii cu autopolenizare, motiv pentru care i
metodele de ameliorare vor diferi inevitabil.
O populaie a unei specii alogame, conine genotipuri homozigote (AA i aa) i
genotipuri heterozigote (Aa). Proporia dintre genotipuri se poate schimba depinznd de
frecvena lui A i a. Datorit acestui fapt, populaiile alogame prezint o anumit frecven
de genotipuri i gene. HARDY (1908) n Anglia i WEINBERG (1908) n Germania au
descoperit c n populaiile mari se atinge un echilibru ntre gene i genotipuri, fapt
cunoscut sub denumirea de legea Hardy-Weinberg.
Echilibrul poate fi meninut de la o generaie la alta n condiii de ncruciare liber
i fertilitate constant a tuturor genotipurilor prezente n populaie. Frecvena genotipurilor
ntr-o populaie depinde de frecvena genelor din generaia precedent. Dup prima
generaie de polenizare liber, frecvena genotipurilor se stabilizeaz, se atinge un
echilibru pentru orice frecven iniial de gene, n cazul unui singur locus. Echilibrul este
meninut pn cnd se schimb frecvena genelor n populaie.
Meninerea neschimbat a frecvenei genelor ntr-o populaie panmictic diploid,
nelimitat, este determinat de legea hazardului i poate fi uor exemplificat, considernd
o pereche de alele Aa, A cu frecvena iniial p i a cu frecven iniial q, astfel nct
p+q=1. Prin unirea gameilor care cuprind genele A i a, gameii ce se ntlnesc la ambele
sexe din populaie, n frecvenele menionate p i q, vor da urmtoarele genotipuri:
Gamei femeli
104
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
Gamei
masculi
A/(p)
a/(q)
A/(p)
a/(q)
2
AA/(p ) Aa/(pq) Frecvena
Aa/(pq) aa/(q2) genotipului
PANMIXIE
Cu toate c o populaie alogam mare este relativ stabil, starea de echilibru
constituie mai mult o excepie dect o regul, deoarece factorii ce tind s dezechilibreze
structura genetic a unei populaii acioneaz continuu. Factorii cei mai importani care
tind s schimbe frecvena genelor i a genotipurilor sunt migraia, mutaia i selecia .a.
Aciunea lor poate fi individual, cu toate c de cele mai multe ori este combinat.
a. Abaterile de la panmixie se ntlnesc, n principal, la plantele la care se manifest
mai mult sau mai puin predominant autogamia. n prezena autogamiei, frecvena
genotipurilor din populaie nu mai rmne constant, aprnd tendina de eliminare
treptat a genotipurilor heterozigote. De exemplu, dac n urma unei ncruciri apare un
organism heterozigot pentru o pereche de gene, prin autopolenizare timp de cteva
generaii procentul heterozigoilor se reduce foarte mult. Acelai efect de cretere a
105
........................................................................................................................................................................
.........................................................................................................................................................................
n
. Dac mutaia invers nu se produce (v = 0), atunci echilibrul populaiei
nv
.........................................................................................................................................................................
q0
107
........................................................................................................................................................................