Sunteți pe pagina 1din 23

INSTITUIA PUBLIC UNIVERSITATEA DE STAT DE MEDICIN I

FARMACIE NICOLAE TESTEMIANU


FACULTATEA FARMACIE
CATEDRA CHIMIE FARMACEUTIC I TOXICOLOGIC

TEZA DE CURS LA CHIMIA MEDICAL


SPECTROMETRIA DE MASA SI APLICAIILE EI IN
PROIECTAREA MEDICAMENTULUI

A efectuat: Frunza Iulia


Gr.4505

CHIINU 2015

CUPRINS

CAPITOLUL 1
Introducere
1.1. Principii fundamentale
1.2. Utilizarea spectroscopiei de mas n chimia organic
1.3. Scurt istoric i perspective
CAPITOLUL 2
Aparatura
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
2.4.
2.5.

Introducerea probei
Surse de ioni i tehnici de ionizare
Analizoare
Detectoare
Sisteme de nregistrare
Prelucrarea datelor
CAPITOLUL 3
SPECTRUL DE MAS

3.1.
3.2.
3.3.
3.4.

Introducere
Clasificarea spectrelor de masa
Informaii analitice
Determinarea formulei moleculare cu aparate de nalt rezoluie

3.5. Determinarea formulei moleculare cu aparate de rezoluie joas. Abundene


izotopice

CAPITOLUL 4
APLICATIILE SPECTROMETRIEI DE MASA

INTRODUCERE
Spectrometria de mas este cea mai sensibil metod de analiz structural. Ea difer
fundamental de celelalte tehnici spectrale uzuale (rezonana magnetic nuclear, spectrometria n
infrarou, n ultraviolet etc) prin faptul c nu implic utilizarea radiaiilor electromagnetice.
Spectrometria de mas este inclus n tehnicile spectroscopice deoarece reprezentarea distribuiei
unor mase funcie de abundenele relative este analog cu reprezentarea intensitii unor radiaii

funcie de lungimea de und. Spre deosebire de celelalte tehnici spectrale, spectrometria de mas
transform chimic proba care devine astfel nerecuperabil.
1.1. Principii fundamentale
Spectrometria de mas este o metod fizic utilizat, n special, pentru analiza
substanelor organice ce const, n esen, n ionizarea substanei investigate, urmat de
separarea ionilor obinui n funcie de raportul dintre mas i sarcin. Spectrul de mas
reprezint nregistrarea maselor i a abundenelor relative ale ionilor obinui. Spectrul de mas
este o caracteristic a fiecrui compus, iar identificarea ionilor rezultai n cursul fragmentrii
permite, de multe ori, stabilirea complet a formulei structurale.
n cel mai simplu spectrometru de mas (figura 1.1), moleculele organice aflate n faz de
vapori sunt bombardate cu un fascicul de electroni, avnd energia cuprins ntre 10-70 eV, pentru
a fi transformate n ioni pozitivi cu energie nalt:
M + e - M 2e

Datorit coninutului energetic ridicat, ionul , denumit ion molecular sau ion-printe, va
suferi, n continuare, procese complexe de fragmentare, ce vor conduce la formarea de fragmente
ionice i neutre:


m1 m2

sau M

m1 m2

Dintre acestea, spectrometrul de mas analizeaz numai fragmentele ionice. Deoarece


ionii au de parcurs o distan considerabil pn la colector, pentru a se evita ciocnirile dintre
particulele pozitive sau dintre acestea i molecule neionizate, incinta aparatului este meninut la
o presiune foarte joas (10-6 - 10-7 mm Hg).

Figura 1.1.
Schema de principiu a unui spectrometru de mas:

1. rezervor de vapori; 2. frit; 3. catod; 4. anod; 5. zon de accelerare; 6. fante de focalizare;


7. tubul analizorului; 8. magnet; 9. detector; 10. amplificator; 11. nregistrator.

Ionii formai n sursa de ioni sunt accelerai sub aciunea unei diferene de potenial,
realizat ntre doi electrozi, i ajung apoi la analizor care are rolul de a-i separa n funcie de
raportul mas/sarcin, dup deviere ntr-un cmp magnetic variabil. n acest mod ia natere un
curent de ioni de la camera de ionizare spre detector, curent proporional cu numrul de ioni care
l-a generat. Dup detectare-amplificare acest curent este nregistrat de ctre nregistrator, care
furnizeaz astfel spectrul de mas.
Elementele principale ale unui spectrometru de mas sunt prezentate n figura 1.2.

Figura 1.2.
Schema bloc a unui spectrometru de mas

n figura 1.3. este prezentat spectrul de mas, n form normalizat, al 2-metilpentanului.


Spectrul evideniaz o serie de caracteristici ale substanei investigate, dintre care cele mai
importante sunt:
a. masa molecular este 86 u.a.m;
b. picul cel mai intens apare la m/e 43; aceasta arat c scindarea preferenial are loc

ntre C2-C3, cu formarea celor mai stabili ioni;


c. picurile de la m/e 15, 29, 57, 71 indic fragmente rezultate din scindarea, direct sau

indirect, a ionului molecular i care corespund unor ioni CH3+, C2H5+, C4H9+,
respectiv C5H11+.
Analiza detaliat a zeci de mii de spectre a permis formularea unor legi semi-empirice
referitoare la fragmentrile prefereniale suferite de moleculele organice. Aplicarea detaliat a
acestor reguli la elucidarea structurii compuilor organici va fi discutat n capitolul 5.7.

Figura 1.3.
Spectrul de mas al 2-metilpentanului

1.2. Utilizarea spectroscopiei de mas n chimia organic


Chimia organic poate utiliza spectrometria de mas pentru elucidarea urmtoarelor
aspecte principale:
1. determinarea masei moleculare. Este cea mai utilizat facilitate oferit de ctre

spectrometria de mas. Posibilitatea determinrii masei moleculare se bazeaz pe procesul


primar de formare a ionului molecular prin expulzarea unui electron din molecula
investigat. Ionul astfel format va avea, practic, aceeai mas molecular cu molecula din
care provine. Din acest motiv, identificarea ionului molecular reprezint o etap cheie n
interpretarea unui spectru de mas;
2. determinarea formulei moleculare. Formula molecular a unui ion poate fi determinat

direct dac este posibil msurarea cu o precizie de cel puin patru zecimale a masei
moleculare. Aceasta precizie necesit aparate cu o rezoluie mai mare de 10 4 (spectrometre
de mas de nalt rezoluie). Rezoluia necesar determinrii directe a formulei moleculare
crete rapid odat cu creterea masei i a numrului de elemente prezente n molecul;
3. elucidarea structurii moleculelor. Stabilirea formulei structurale poate fi realizat, n unele

cazuri, n urma interpretrii fragmentrilor suferite de ctre ionul molecular. Atribuirea


structural poate fi fcut i prin compararea datelor spectrale cu cele existente n bibliotecile
de spectre de mas;
4. stabilirea marcajelor izotopice. Spectrometria de mas este metoda standard pentru analiza

rezultatelor experimentelor de marcare izotopic, experimente de o importan deosebit


pentru evidenierea proceselor chimice ce au loc n organismele vii. Determinarea extrem de
precis a abundenelor izotopice prezint o importan deosebit pentru geo-tiine i

arheologie. Astfel, posibilitatea de a determina un raport

14

C/12C = 1/1015 a permis datarea

unui eantion de 40.000 de ani cu o precizie de 1 %. Spectrometria de mas permite stabilirea


cu uurin a prezenei izotopilor i a poziiei acestora n molecul.
1.3. Scurt istoric i perspective
1886: E. Goldstein descoper ionii pozitivi;
1898: W. Wien face primele analize prin deflexie magnetic;
1912: J.J. Thomson (premiul Nobel n 1906) nregistrez primele spectre de mas ale O 2,
N2, CO, CO2, COCl2. A observat ioni negativi i ioni cu sarcini multiple. A
1918:

descoperit ionii metastabili. A descoperit (1922) izotopii 20 i 22 ai neonului;


A.J. Dempster construiete primul spectrometru de mas cu focalizare de direcie

1919:

(magnet n form de sector);


F.W. Aston (premiul Nobel, 1922) construiete primul spectrometru de mas cu

1930:
1934:

focalizare de vitez. A msurat defectul de mas (1923);


R. Conrad utilizeaz spectrometria de mas n chimia organic;
W.R. Smythe, L.H. Rumbaug i S.S. West realizeaz prima separare preparativ a

1942:

izotopilor;
firma Consolidated Engeneering Corporation produce primul aparat comercial

1948:
1953:

pentru Atlantic Refinery Company;


A.E. Cameron descoper analiza prin msurarea timpilor de zbor ale ionilor (TOF);
W. Paul (premiul Nobel, 1989) i H.S. Steinwedel descriu analizorul quadripolar i

1957:

capcana de ioni;
firma Kratos comercializeaz primul spectrometru cu dubl focalizare dup ce J.

1958:
1966:
1967:
1972:
1975:
1980:
1981:
1982:
1985:
1988:

Beynon a artat importana analitic a determinrii exacte a maselor;


apar primele spectrometre de mas cuplate la gaz-cromatograf;
M.S.B. Munson i F.H. Field descoper ionizarea chimic;
utilizarea primelor sisteme de tratare computerizat a datelor;
J. Beynon descrie descompunerea ionilor metastabili;
apar primele aparate de rutin GC/MS cu coloane capilare;
H.L. Vestal descoper termospray-ul;
M. Barber descrie ionizarea prin bombardament cu atomi rapizi, FAB;
primul spectru complet al insulinei (5750 u.a.m.);
F.H. Hillenkamp descoper Matrix Assisted Laser Desorption Ionization (MALDI);
primele spectre ale proteinelor cu mase mai mari de 20.000 u.a.m.
Progresele tehnicilor experimentale i perfecionarea instrumentelor au condus la creteri

spectaculoase ale rezoluiei i sensibilitii:


An
1913:
1918:
1919:

Rezoluie, m/m
13
100
130

Autor
J.J. Thomson
A.J. Dempster
F.W. Aston

1937:
1991:

2.000
2*108

F.W. Aston
A.G. Marshall

Studiile efectuate de ctre Strategic Directions International (Los Angeles, California,


SUA) prevd creterea spectaculoas a vnzrilor de spectrometre de mas n urmtorii 5 ani. n
anul 1995 vnzrile de spectrometre de mas au totalizat 1,1 miliarde de dolari, comparativ cu
anul 1991 cnd vnzrile au fost de numai 597 milioane de dolari. Raportul indic, de asemenea,
apariia de noi tipuri de instrumente i tehnici; se ateapt ca spectrometrele cu timp-de-zbor s
joace un rol din ce n ce mai mare n biotehnologie. Supravegherea factorilor de mediu va
necesita utilizarea spectrometrelor de mas transportabile. Aceste date relev, o dat n plus,
importana major pe care o are spectrometria de mas n prezent.
APARATURA
Dup cum s-a precizat n capitolul 1.1, un spectrometru de mas conine cinci seciuni
principale:
1. seciunea de introducere a probei;
2. seciunea de ionizare i accelerare;
3. seciunea de separare a ionilor;
4. seciunea de colectare-detectare;
5. seciunea de amplificare-nregistrare.
2.1. Introducerea probei
Spectrometrul de mas analizeaz ioni aflai n faz gazoas. Modul de introducere a
probei n aparat depinde esenial de modul de ionizare i de proprietile fizico-chimice ale
substanei de analizat. n acest subcapitol vor fi prezentate, n principal, numai aspectele legate
de introducerea probei n cazurile n care ionizarea se realizeaz prin impact electronic. n cazul
celorlalte tehnici de ionizare, modul de introducere a probei rezult din tehnica general de
lucru.
La introducerea probei n spectrometru de mas trebuie s se in seama de urmtoarele
aspecte:

puritatea probei. Deoarece spectrometria de mas este o metod de analiz deosebit de


sensibil, puritatea probei trebuie s fie extrem de mare. Prezena unor impuriti, chiar n
cantitate mic, poate afecta foarte mult interpretarea spectrului, mai ales atunci cnd

volatilitatea impuritii este mult mai mare dect a substanei analizate (n cazul extrem se
nregistreaz numai spectrul impuritii);

volatilitatea probei. Iniial, una dintre dificultile majore ntlnite la nregistrarea spectrelor
de mas era determinat de necesitatea ca substana de analizat s fie adus n stare de
vapori. Compuii organici stabili i care prezint presiuni de vapori moderate la temperaturi
de pn la 300 0C, la presiunea de circa 10-5 mm Hg din aparat, sunt introdui indirect (aanumita introducere indirect), prin intermediul unei camere de vaporizare din care vaporii
difuzeaz lent, printr-o frit, n camera de ionizare. Probele cu presiuni de vapori sczute (n
general solidele) precum i cele care se descompun, se introduc direct n camera de ionizare
(introducere direct). Volatilizarea lor se realizeaz n urma unei nclziri controlate.
Substanele cu volatilitate extrem de sczut (cum ar fi aminoacizii, zaharurile etc) pot fi
analizate dup derivatizare (transformare chimic n derivai mai puin polari). Tehnicile
moderne de ionizare au permis i nregistrarea spectrelor unor compui tradiional nevolatili:
polimeri, peptide i proteine etc;

cantitatea de prob. Dei, n principiu, aceasta depinde de modul de introducere a probei, de


tipul de aparat, de timpul necesar nregistrrii spectrului etc., cantitatea necesar nu depete
1 mg, fiind mult mai mic dect cantitile necesitate de celelalte tehnici spectrale. Aparatele
moderne au permis nregistrarea de spectre de mas prin utilizarea unor cantiti de
substan de ordinul a 10-12 g. Utilizarea unor cantiti extrem de mici de subsatn este
extrem de avantajoas, printre altele, i datorit faptului c proba este nerecuperabil
(spectrul de mas este ultimul tip de nregistrare spectral atunci cnd se dispune de cantiti
limitate de substan).

2.2. Surse de ioni i tehnici de ionizare


Sursa de ioni (denumit frecvent i camer de ionizare) are rolul de a realiza ionizarea
substanelor ce urmeaz a fi analizate i reprezint una dintre cele mai importante componente a
spectrometrului de mas.
Principalele tipuri de surse de ioni sunt clasificate, funcie de modul de realizare a
ionizrii, dup cum urmeaz:
surse de ionizare prin bombardament electronic (impact electronic, electronic impact, EI);

surse de ionizare prin coliziunea probei cu ioni furnizai de surs (ionizare chimic, chemical
ionization, CI);
surse de ionizare prin bombardament cu un fascicul de ioni sau molecule neutre (Liquid
Secondary Ion Mass Spectrometry, LSIMS i Fast Atom Bombardment, FAB);
surse de ionizare cu ajutorul laserului (Laser Ionization Mass Analysis, LIMA i Matrix
Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI);
ionizare prin dispersarea unor soluii sub form de picturi fine (termospray, TSP i
electrospray, ESI);
2.3. Analizoare

Ionii produi de ctre sursa de ioni sunt dirijai ctre analizor, care, pentru a permite
identificarea lor, are rolul s-i separe funcie de raportul mas/sarcin. Tipul de analizor utilizat
depinde, n multe cazuri, de sursa de ioni folosit.
n prezent, au devenit din ce n ce mai rspndite aparatele care utilizeaz mai multe
tipuri de analizoare. Aceste aparate permit, de exemplu, selectarea i nregistrarea spectrului de
mas a unui singur ion, izolat dintre cei rezultai la fragmentarea unei substane.
Principalele caliti ale unui analizor sunt legate de:

limita de detecie - reprezint valoarea limit msurabil a raportului m/e;

transmisia - este dat de raportul ntre numrul de ioni ce ajung la detector i cel produs de
ctre surs;

rezoluia - reprezint capacitatea detectorului de a distinge ntre doi ioni de mase vecine.
Rezoluia unui spectrometru de mas este una dintre cele mai importante caracteristici.
Astfel, pentru stabilirea formulei moleculare posibile cu ajutorul intensitii picurilor
izotopice este necesar ca picurile adiacente s fie net separate. Arbitrar, se consider c
rezoluia este corespunztoare dac "valea" dintre dou picuri adiacente nu reprezint mai
mult de 10 % din intensitatea picului mai proeminent. Pentru a determina rezoluia unui
instrument, se aleg dou picuri adiacente de intensitate aproximativ egal, ntre care exist o
vale ce nu depete 10 % din intensitatea picului mai proeminent (figura 2.16). Rezoluia
(R) este definit de relaia:
R

Mn
Mn Mm

unde Mn i Mn sunt numerele de mas ale celor dou picuri i Mn = Mm+1


Funcie de puterea de rezoluie exist dou tipuri de spectrometre de mas:

a. spectrometre de rezoluie joas - pot fi definite ca aparate capabile s detecteze ioni ale cror
mase difer cu cel puin o unitate de mas (aparate cu rezoluie unitar - unit resolution),
valoarea maxim a raportului m/e ce poate fi msurat fiind de circa 2000. Un asemenea
aparat este capabil, de exemplu, s separe un ion de mas 2.000 de unul cu mas 1999: [R =
2.000/(2.000-1.999) = 2000];

Figura 2.16.
Determinarea rezoluiei unui spectrometru de mas.

2. spectrometre de nalt rezoluie - sunt aparate capabile s separe doi ioni a cror mas difer

cel puin prin 0,05 u.a.m. Un asemenea aparat este, de exemplu, capabil s separe un ion de
mas 500 de unul cu masa 499,5 [R = 500/(500-499,5) = 10.000].
2.4. Detectoare
Dup traversarea analizorului de mas, fasciculul de ioni trebuie detectat i transformat
ntr-un semnal utilizabil. n acest scop exist diferite tipuri de detectoare, capabile s transforme
un curent ionic slab (10-9 A) ntr-un curent electric. Acesta trebuie apoi amplificat i nregistrat.
Primele spectrometre de mas au utilizat ca detectoare plci fotografice i cilindri
Faraday ce au permis msurarea direct a sarcinilor sosite la detector. n prezent se utilizeaz
detectoarele multiplicatoare de electroni sau de fotoni i detectoarele cu microcanale ce permit
creterea intensitii semnalului detectat. Aceste ultime detectoare prezint o sensibilitate extrem
de ridicat (pot detecta chiar i prezena unui singur ion sosit la detector); utilizarea lor este
limitat ns numai la analizele calitative deorece curentul format n urma emisiei de electroni
secundari nu este strict proporional cu numrul de ioni sosit la detector.
a. plci fotografice. Plcile fotografice au fost utilizate de ctre primele spectrometre de
mas i se pretau i pentru msurtori de nalt rezoluie. Plcile sunt plasate dup analizor, iar

spectrele apar sub form de linii ce prezint grade de negru diferite, ce se coreleaz cu
intensitatea ionilor respectivi.
b. cilindri Faraday. Acest tip de detector este format dintr-un cilindru alungit n care
ptrund ionii. Acetia se ciocnesc de perei i se descarc. Curentul este apoi amplificat i
msurat de ctre un electrometru. Diferite dispozitive previn sau suprim emisiile de electroni
secundari.
c. detectoare multiplicatoare de electroni. Detectoarele multiplicatoare de electroni
utilizate n prezent sunt tuburi de sticl dopat cu plumb, avnd form de corn, i care prezint
intense emisii secundare de electroni i o rezisten electric uniform (figura 2.26.). ntre cele
dou extremiti ale tubului este aplicat o tensiune. Fiecare particul care lovete suprafaa
intern a detectorului provoac o emisie secundar de electoni, ce sunt accelerai de ctre cmpul
interior; electronii ajung s loveasc din nou peretele interior, provocnd o nou emisie, mai
intens. Procesul se repet de cteva ori, n final rezultnd un semnal amplificat ce este detectat
de ctre o plac colectoare aflat la ieirea din tub. Detectorul este plasat ntr-un dispozitiv ce
mai conine dou dinode de conversie, una pentru ioni pozitivi, aflat la un

Figura 2.26.
Detector de ioni (pozitivi sau negativi) cu dinode de conversie i multiplicator de electroni
potenial negativ, iar cealalt pentru ioni negativi, aflat la un potenial pozitiv. Un ion ce ajunge
la dinoda de conversie produce o emisie de electroni, ce sunt apoi amplificai

de ctre

multiplicatorul de electroni. n ansamblu, un amplificator de electroni transform un fascicul


ionic ntr-un fascicul electronic amplificat, printr-un efect tip cascad, cu un factor de conversie
cuprins ntre 105 i 107. Factorul de conversie dintre curentul ionic i curentul electronic depinde
de natura (mas, sarcin i structur) i vitezele ionilor detectai. Din acest motiv, acest tip de

detectori este mai puin precis dect cilindrii Faraday; sensibilitatea lor superioar permite ns
realizarea unor baleiaje rapide.
d. detectoare cu microcanale (array detectors). Detectorul cu microcanale este format
dintr-o plac strbtut de canale cilindrice paralele (figura 2.27).

b
Figura 2.27

Detector cu microcanale: a. seciune transversal; b. multiplicarea electronilor ntr-un canal


Fiecare canal poate avea un diametru cuprins ntre 4 i 25 m, distanele dintre axele
canalelor fiind ntre 6 i 32 m. Faa de intrare a ionilor este meninut la o tensiune negativ de
circa 1 kV n raport cu cea de ieire. Multiplicarea electronilor se realizeaz prin acoperirea
suprafeei fiecrui canal cu un material semiconductor ce emite electroni secundari. Evitarea
accelerrii ionilor pozitivi spre faa de intrare a plcii se realizeaz prin practicarea de canale
curbe n plac sau prin asocierea mai multor plci, astfel nct canalele asociate s formeze trasee
n form de V sau Z. Efectele de avalan dintr-un canal pot s amplifice numrul de electroni de
pn la 108 ori. La ieirea din fiecare canal, un anod metalic primete fluxul de electroni
secundari i semnal este dirijat spre un electrometru.
Geometria plcii este analog celei a unei plci fotografice: ioni cu diferite valori m/e
sosesc n zone diferite ale plcii i pot fi detectai simultan n cursul baleiajului cmpului
magnetic al analizorului.
e. detectoare multiplicatoare de fotoni. Acest tip de detector este format din dou
dinode de conversie, un ecran fosforescent i un fotomultiplicator (figura 2. 28).

Figura 2.28.
Multiplicator de fotoni
Dispozitivul permite detectarea ionilor pozitivi sau negativi. n cazul detectrii ionilor
pozitivi, ionii sunt accelerai spre dinoda aflat la un potenial negativ, n timp ce, n cazul
decelrii ionilor negativi, ionii sunt accelerai spre dinoda pozitiv. Electronii secundari emii de
aceste dinode sunt apoi accelerai spre ecranul fosforescent unde sunt convertii n fotoni. Fotonii
rezultai sunt detectai de fotomultiplicator. Valoarea factorului de amplificare este de ordinul
104-105.
2.4. Sisteme de nregistrare
Sistemul de nregistrare a unui spectrometru de mas trebuie s ndeplineasc dou
cerine fundamentale:
a. rapiditate. Rspunsul nregistratorului fa de semnalele primite de la sistemul de
amplificare trebuie s fie extrem de rapid, astfel nct s poat fi posibil scanarea ctorva sute
de picuri pe secund (o substan cu masa molecular 300 poate prezenta ntre 150 i 300 de
picuri);
b. sensibilitate. Aparatul trebuie s fie capabil s nregistreze intensiti ale unor picuri
care difer ntre ele cu un factor mai mare de 10 3. Aceast problem a fost rezolvat prin
utilizarea unei serii de 3-5 galvanometre cu oglind cu sensibiliti diferite (de obicei
sensibilitile galvanometrelor sunt n raport 1:3:10:30:100).
2.5. Prelucrarea datelor

Semanlul analogic furnizat de ctre detector este transformat n semnal digital cu ajutorul
unui ADC (analog-to-digital convertor) iar datele sunt stocate n memoria unui computer.
Computerul asociat unui spectrometru de mas nregistreaz datele provenind de la aparat
i le transform, dup caz, n valori de mas, intensiti ale picurilor, curent ionic total, potenial
de accelerare etc. Datele spectrale sunt prezentate n diverse forme: list a fragmentelor ionice,
spectru de mas normalizat etc. Computerul asociat spectrometrului de mas poate facilita, de
asemenea, interpretarea spectrului ajutnd la calculul compoziiei posibile a unor ioni de mas
dat, calculnd i comparnd abundenele izotopice pentru o formul dat cu datele
experimentale sau comparnd spectrele obinute cu cele existente n biblioteca de spectre (exist
numeroase biblioteci de spectre de mas, coninnd spectrele a peste 100.000 de compui).

SPECTRUL DE MAS
3.1. Introducere
Informaiile eseniale furnizate de ctre spectrometrul de mas se refer la masele i
abundenele relative ale ionilor rezultai din substana investigat. De obicei, aceste informaii
sunt sumarizate n dou moduri:
1. forma grafic. Semnalele ionilor sunt prezentate sub form de linii verticale aflate la
valorile m/e corespunztoare i a cror nlime este proporional cu intensitile
(abundenele) ionilor. Din motive practice, aceste abundene sunt recalculate funcie de
semnalul cel mai intens (numit i pic de baz, base peak), cruia i se atribuie valoarea de 100
%. Operaia se numete normalizarea spectrului; abundenele nregistrate ale celorlali ioni
se amplific cu factorul:

100
abundenta picului de baza

Dei reprezentarea grafic este deosebit de util pentru realizarea de comparaii rapide cu alte
spectre, ea prezint dezavantajul imposibilitii de a prezenta, la aceeai scar, abundenele
exacte ale ionilor cu intensitate mic (i n special cele ale picurilor izotopice);

2. forma tabelar. Prezint sub form de tabel lista ionilor i a abundenelor lor relative fa
de ionul de baz, considerat ca avnd abundena de 100 %. Din considerente practice, i
aceast list poate s exclud ionii cu abundene extrem de sczute. n cazul nregistrrii
spectrului pe un aparat cu rezoluie joas este util s se normalizeze abundenele picurilor
izotopice din zona ionului molecular funcie de acesta din urm.
n figura 5.1. este prezentat, n cele dou variante, spectrul de mas al etil-dimetil-aminei.
Utilizarea computerelor pentru stocarea i prelucrarea datelor furnizate de ctre
spectrometrul de mas permite actualmente selectarea i analiza complex a informaiilor,
funcie de scopurile urmrite.
Ca i n cazul celorlalte tipuri de investigaii spectrale, la analiza i, mai ales, la
compararea spectrelor de mas este necesar precizarea condiiilor de nregistrare a spectrului.

a
m/

m/e

m/e

m/

e
15
27

1,3
10,

39
40

1,2
2,1

45
56

1,8
7,3

e
72
73

17,0
23,0

28

0
11,

41

4,5

57

5,0

74

1,1

29

0
8,1

42

28,

58

10

59

0
3,9

M+1

71

1,0

100

4,78

30

13,

43

0
7,2

31

0
0,2

44

25,

0
Figura 5.1.

Spectrul de mas al etildimetilaminei: a. reprezentare grafic; b. reprezentare tabelar (n colul


din dreapta jos este prezentat normalizarea picului izotopic al ionului molecular)

3.2. Clasificarea spectrometrelor de mas


Spectrometrele de mas utilizate pentru determinarea structurii compuilor organici sunt
clasificate funcie de metoda de separare a ionilor utilizat de ctre analizorul de mas.
Analizoarele de mas realizeaz separarea particulelor cu sarcin (ale ionilor) pe baza
raportului mas/sarcin sau a unor proprieti ce depind de acest raport.
n prezent sunt utilizate patru tipuri principale de analizoare de mas bazate pe:
1. cmpuri magnetice i electrice;
2. timp de zbor;
3. filtre quadripolare;

rezonan ciclotronic.

3.3. Informaii analitice


Deducerea structurii compuilor investigai de ctre spectrometria de mas se realizeaz
prin parcurgerea mai multor etape.
ntr-o prim etap, se ncearc identificarea, manual sau computerizat, a spectrului
nregistrat printre spectrele aflate n diverse colecii. Trebuie ns s se in cont de faptul c, de
multe ori, izomerii ce fac parte din aceeai clas de compui prezint spectre similare; de
asemenea, spectre asemntoare pot s aparin unor substane foarte diferite. Dei poate fi
extrem de util, simpla comparare nu poate fi o metod infailibil de atribuire structural.
n prezent exist trei mari colecii de spectre de mas:
1. colecia NBS/EPA/NIH (Mass spectral date base, Heller, S.R. and Milne, G.W.A.,
National Bureau of Standards, Washinton, 1978, 1983). Colecia conine peste 45.000 de spectre,
prezentate n form grafic i clasificate n funcie de masa molecular. ncepnd cu anul 1988,
colecia exist i pe suport magnetic;
2. colecia eight peak index, publicat de ctre Mass Spectrometry Data Center de la
Royal Society, Cambridge (1991) cuprinde aproximativ 81.000 spectre de mas, prezentate sub
forma unor liste ce cuprind, fiecare, cte opt picuri principale;
3. colecia publicat de ctre editura John Wiley (The Wiley/NBS Registry of mass
spectra data, Palissade Corporation, N-Y, 1989) conine spectrele a aproximativ 112.000 de
compui (colecia este prezentat i pe suport magnetic).
Alturi de aceste colecii de cuprindere general, exist colecii specializate pe domenii
relativ nguste: poluani, droguri, metabolii, produse farmaceutice etc.

n cazul n care structura substanei investigate nu poate fi dedus cu ajutorul coleciilor, se face
apel la informaiile oferite de ctre spectrul nregistrat.
Principalele tipuri de informaii analitice furnizate de ctre spectrul de mas sunt:
1. masa molecular;
2. compoziia elemental;
3. formula structural.

Dac primele dou informaii pot fi obinute cu certitudine n multe cazuri, stabilirea
formulei structurale pornind numai de la procesele de fragmentare este mult mai dificil i nu
ntotdeauna posibil. De cele mai multe ori se recurge i la ajutorul celorlalte tehnici spectrale
uzuale: rezonana magnetic nuclear, spectrometria n IR i UV-VIS.
3.4. Determinarea formulei moleculare cu aparate de nalt rezoluie
Spectrometrele de mas de nalt rezoluie permit, n principiu, determinarea direct a
compoziiei elementale. Din pcate, rezoluia necesar crete rapid cu creterea masei
moleculare. Datorit creterii numrului de atomi, crete numrul de combinaii posibile iar
diferenele ntre masele moleculare ale diverselor combinaii de atomi scad. De exemplu, pentru
a face distincie ntre C24H19N i C21H23NS, ale cror mase sunt 321,1517 i, respectiv, 321,1551,
este necesar o rezoluie de 321/(321,1551-321,1517) = 94.400. Exist puine aparate comerciale
capabile s ating o asemenea rezoluie.
La utilizarea aparatelor cu rezoluie ridicat, compoziia elemental a unei molecule poate
fi stabilit cu certitudine dac masa molecular se situeaz n jurul valorii de 100 u.a.m. n
acelai timp, utilzarea unor astfel de aparate permite i stabilirea compoziiei elementale a
fragmentelor rezultate, ceea ce ajut considerabil la elucidarea structurii i la nelegerea
mecanismelor de fragmentare.
De reinut c n spectrul de mas al unei molecule organice fiecare pic corespunde unui
ion cu o anumit compoziie izotopic i c valoarea m/e se calculeaz cu masele izotopice din
tabelul 5.1. i nu cu masele atomice relative ale elementelor.
3.5. Determinarea formulei moleculare cu aparate de rezoluie joas.
Abundene izotopice
Cea mai mare parte a elementelor apar n natur sub forma unor amestecuri de izotopi.
De exemplu, carbonul, elementul fundamental al chimiei organice, este un amestec format din

doi izotopi: 12C (98,89 %) i 13C (1,10 %). n tabelul 5.1. sunt prezentate abundenele izotopilor
celor mai importante elemente ntlnite n chimia organic iar n Anexa nr. 2 abundenele
izotopice ale tuturor elementelor.
Faptul c unele elemente prezint mai muli izotopi are drept rezultat existena unor ioni
cu compoziii elementale identice dar cu mase diferite. n consecin, ionii respectivi vor apare la
valori m/e diferite. n majoritatea cazurilor, unul dintre izotopi se afl ntr-o proporie dominant.
Acest fapt are drept consecin apariia unor picuri suplimentare, n general puin intense i aflate
la valori m/e imediat superioare. Aceste picuri se numesc picuri izotopice. Intensitatea lor,
raportat la intensitatea (abundena) picului ionului format de izotopii majoritari, este extrem de
caracteristic i servete, n condiiile utilizrii spectrometrelor de mas de joas rezoluie, la
stabilirea formulei moleculare.
De exemplu, la nregistrarea spectrului de mas al etil-metil-cetonei (C4H8O) pe un aparat
cu rezoluie joas, picul ionului molecular, aflat la m/e 72, este nsoit de dou picuri, aflate la
m/e 73 i m/e 74, a cror intensitate relativ fa de intensitatea ionului molecular este de 4,7 %
i, respectiv 0,3 %. Apariia celor dou picuri suplimentare este determinat, evident, de prezena
izotopilor n molecul. Abundenele relative ale celor doi izotopi ai carbonului se afl n raport
de 98,89/1,11. Rezult c, n medie, unul dintr-o sut de atomi de carbon este un
compusul C4H8O, una din douzeci i cinci de molecule conine trei atomi

13

C. Pentru

12

C i unul

13

C.

Aceast molecul are masa unitar 73 i va forma primul pic izotopic. Prezena unui al doilea 13C
(sau a unui 2H, sau numai a unui 18O) va conduce la formarea celui de al doilea pic izotopic.
Abundenele acestor picuri sunt, evident, proporionale cu abundenele izotopilor respectivi.
Tabelul 3.1. Abundenele izotopilor celor importante elemente ntlnite n chimia organic.
Izotop
1

H
H
12
C
13
C
14
N
15
N
16
O
17
O
18
O
19
F
23
Na
28
Si
29
Si
2

Abunden natural

Masa izotopic

(%)
99,985
0,015
98,90
1,10
99,64
0,36
99,76
0,04
0,20
100,00
100,00
92,20
4,70

(u.a.m.)
1,007825
2,014102
12,000000
13,003354
14,003074
15,000108
15,994915
16,999133
17,999160
18.998405
22,989767
27,976927
28,976491

30

Si
P
32
S
33
S
34
S
36
S
35
Cl
37
Cl
79
Br
81
Br
127
I

3,10
100,00
95,02
0,75
4,21
0,02
75,80
24,20
50,50
49,50
100,00

31

29,973761
30,973763
31,972074
32,971461
33,967865
35,967080
34,968855
36,965896
78,918348
80,916334
126,904352

Valoarea acestei intensiti poate fi calculat teoretic cu relaia (5.1):

zo1
wc
xh
yn

100 c 100 h 100 n 100 o 1 o 2

I M 1 I M

(5.1)

unde:
IM = intensitatea relativ procentual a picului molecular corespunztor moleculei care nu
conine nici un izotop greu;
IM+1 = intensitatea relativ procentual a picului molecular pentru moleculele care conin
unul din izotopii 2H, 13C, 15N, 17O;
w, x, y, z = numrul atomilor de C, H, N, respectiv O, prezeni n molecul;
c, h, n, o1, o2 = rspndirea procentual a 13C, 2H, 15N, 17O respectiv 18O.
Utiliznd aceast relaie, Beynon a calculat valorile I M+1, IM+2 precum i a raportului
IM+1/IM+2 pentru mase moleculare de pn la 250 u.a.m., ce corespund unor formule brute de
tipul CxHyNzOt i a ntocmit tabele ce sunt utilizate pentru stabilirea formulei moleculare a
substanelor (Anexa nr. 1). O variant mai comod o reprezint utilizarea unui computer.
n tabelul 3.2 sunt prezentate abundenele relative calculate ale primului i celui de al
doilea pic izotopic (raportate la abundena ionului molecular) pentru diverse combinaii de atomi
de C, H, N i O avnd masa molecular de 72 u.a.m.
Tabelul 3.2. Abundenele relative ale primului i celui de al doilea pic izotopic, calculate pentru
diverse combinaii de C, H, N i O corespunznd lui m/e 72.
M = 72
C4H8O
C2H4N2O
C3H4O2
C3H6NO
C3H8N2
C5H12

M,

M + 1,

M + 2,

(%)
100
100
100
100
100
100

(%)
4,49
3,03
3,38
3,76
4,13
5,59

(%)
0,28
0,23
0,44
0,25
0,07
0,13

Compararea datelor experimentale obinute la nregistrarea spectrului etil-metil-cetonei


(M+1 = 4,7 % , M+2 = 0,3 %) cu cele din tabelul 5.2. permite selectarea formulei moleculare.
Utilizarea abundenelor picurilor izotopice M+1 i M+2 trebuie fcut cu mult
circumspecie deoarece, n unele situaii, abundenele acestor picuri sunt afectate de prezena
ionilor (M+H)+ rezultai prin protonarea ionului molecular.
Izotopii mai grei ai atomilor de clor, brom, sulf apar n proporie mult mai mare
comparativ cu celelalte elemente organogene. n consecin, picurile izotopice ale ionilor
moleculari sunt puternic afectate i devin extrem de caracteristice.
De exemplu, n cazul unei molecule care conine un atom de brom, picul (M+2) trebuie
s reprezinte circa 98 % din picul molecular deoarece abundenele relative ale celor doi izotopi ai
bromului se afl n raport de 79Br:81Br = 50,52:49,48. n prezena a doi atomi de brom, n spectru
vor apare picuri la (M), (M+2) i (M+4), avnd intensitile relative 100:195:96 datorit
existenei moleculelor cu compoziia izotopic 79Br2, 79Br81Br i 81Br81Br.
Sulful prezint trei izotopi frecvent ntlnii,

32

S, 33S i 34S, avnd abundenele 95,02 :

0,75 : 4,23 % (intensiti relative: 100 : 0,8 : 4,4). Astfel, la un compus cu un atom de sulf, M+2
este mai mare cu circa 4,5 % dect ar fi de ateptat dac sulful nu ar fi prezent. 35S contribuie i el
la nlimea picului M+1, fiind necesar s se scad 0,8 % din valoarea lui M+1 pentru a se obine
contribuia real a izotopilor mai grei ai carbonului, hidrogenului, oxigenului i azotului.
Din acest motiv, aspectul spectrului n zona ionului molecular al unor astfel de molecule
poate fi utilizat pentru identificarea acestor heteroelemente.
Urmtorul exemplu este ilustrativ: un compus prezint urmtoarele intensiti relative ale
picurilor din zona ionului molecular: m/e 152 (100 %, M), 153 (9,4 %, M+1) i 154 (4,9 %,
M+2); se cere formula molecular.
Etapele determinrii formulei sunt urmtoarele:
a. se compar valorile experimentale ale abundenelor relative ale picurilor (M+1) i (M+2)

cu cele tabelate (v. Anexa nr. 1). ntruct pentru compuii cu formula general CxHyNzOt
intensitatea picului M+2 poate fi maximum 0,9 % pentru o mas molecular de 152, se
poate presupune i prezena unui unui alt element (n cazul de fa un atom de sulf) (ca
urmare a prezenei izotopului 34S, picul (M+2) este cu circa 4,5 % mai intens la compuii
ce conin un atom de sulf);
b. se recalculeaz masa celorlalte elemente din molecul: 152-32=120 u.a.m.;
c. se recalculeaz intensitatea relativ a abundenelor picurilor M+1 i M+2 innd cont de

contribuiile izotopilor heteroelementelor. Izotopul

33

S contribuie cu circa 0,8 % la

valoarea abundenei relative a picului (M+1); valoarea recalculat va fi: 9,4-0,8=8,6 %;

d. innd cont de masa molecular i de contribuia picurilor izotopice, cu ajutorul tabelelor,

se determin formula molecular de tip C xHyNzOt. Din Anexa 1, pentru o mas de 120
u.a.m. i un pic (M+1) de 8,6 % rezult un fragment C7H8N2;
e. la formula molecular rezultat se adaug heteroatomii identificai. Formula molecular

final a compusului investigat este : C7H8N2S.

APLICATIILE SPECTROMETRIEI DE MASA


Spectrometrie de mas are att utilizri calitative, cit i cantitative. Acestea includ:

identificarea compuilor necunoscui,


determinarea compoziiei izotopice a elementelor ntr-o molecul,
determinarea structurii unui compus prin observarea fragmentarea acesteia.
cuantificarea cantitatatii de compus ntr-o proba,
studierea fundamentala a chimiei ionilor n faz gazoas

Ca o tehnic analitic, ea posed avantaje distincte, cum ar fi:


1. Sensibilitatea crescut
2. specificitatea
3. Informaii despre greutate molecular.
4. Informaii despre abundena izotopic a elementelor.
5. Datele chimice temporal rezolvate.
Spectrometrie de mas joac un rol deosebit n descoperirea i dezvoltarea de noi medicamente,
in bio- si nanotehnologie.

BIBLIOGRAFIE
1. Bacaloglu R., Csunderlik C., Cotarc L. i Glatt H.H., Structura i proprietile compuilor
organici, Editura Tehnic, Bucureti, 1985
2. Balaban A.T., Banciu M. i Pogany I., Aplicaii ale metodelor fizice n chimia organic,
Editura tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1983
3. Cornu A. i colab., Prcis de spectromtrie de mass analytique, Presses universitaires de
Grenoble, Grenoble, 1975
4. Cort L.A., An Introduction to Spectroscopic Methods for the Identification of Organic
Compounds, vol II. Editat de Scheinmann F., Pergamon Press, Oxford, 1973
5. Hesse M., Meier H. i Zeeh B., Spektroskopische Methoden in der Organischen Chemie,
Georg Thieme Verlag, Stuttgart, New York, 1987
6. Hoffmann E., Charette J., i Stroobant V., Spectromtrie de masse, Masson, Paris, 1994
7. Kemp W., Organic Spectroscopy, Ediia a 3-a, W.H. Freeman and Company, New York, 1991
8. Lambert J.B., Shurvell H.F., Lightner D. i Cooks G., Introduction to Organic Spectroscopy.
Macmillan Publishing Company, New York, 1987
9. Mager S., Analiz structural organic, Editura tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1979
10. McLafferty F.W., Spectrographie de masse, Ediscience, Paris 1969
11. Neniescu C.D., Chimie organic. Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti 1980

12. Oprean I., Spectrometria de mas a compuilor organic,. Editura Dacia, Cluj, 1972
13. Pogany I. i Banciu M., Metode fizice n chimia organic, Editura tiinific, Bucureti, 1972
14. Pretsch E., Simon W., Seibl J. i Clerc T., Tables Data for Structure Determination of
Organic Compounds, Ediia a 2-a, Springer Verlag, Berlin, 1989
15. Purdelea D i colab., Nomenclatura Chimiei Organice, Editura Academiei RSR, Bucureti
1986
16. Silverstein R.M., Bassler G.C. i. Morril T.C. Spectrometric Identification of Organic
compounds,. Ediia a 5-a, John Wiley and Sons, New York, 1991