Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.

Cemortan

TRANSLAIA
Dup transcripie, processing i transferul ARNm pe ribozomi, secvena nucleotidelor din
ARNm este convertit ntr-o secven specific de aminoacizi n protein - procesul este definit
ca translaie, ntruct limbajul nucleotidelor este tradus n limbajul celor 20 de aminoacizi
ce alctuiesc proteinele. Catenele polipeptidice sunt sintetizate prin aranjarea riguroas a
aminoacizilor ntr-o anumit ordine, asigurat de ctre codul genetic un sistem de
corespondene dintr-o anumit secven de trei nucleotide (codon) din ARNm i fiecare din cei
20 de aminoacizi.
n procesul transcrierii, ARNm a preluat mesajul genetic din molecula de ADN despre
succesiunea aminoacizilor din lanul polipeptidic. Sistemul prin care succesiunea nucleotidelor
din molecula de ADN (sau ARN) determin ordinea aminoacizilor n protein poart denumirea
de cod genetic.
Proprietile codului genetic
Este triplet, fiecare triplet formeaz un codon. Exist 64 de codoni, dintre care 61 codific
pentru anumii aminoacizi, iar trei - sunt codoni de STOP informaional.
Este universal - la toate organismele exist acelai cod genetic, cu unele excepii la
procariote, protozoare i n mitocondrii.
Este specific - fiecare codon codific un singur aminoacid.

Este degenerat. Acelai aminoacid poate fi codificat de mai multe triplete (triplete sinonime)
- astfel serinei i corespund 6 codoni, prolinei 4, etc.
Este colinear - ordinea tripletelor n molecula de ARN corespunde ordinii aminoacizilor n
lanul polipeptidic.
Nu este suprapus - tripletele vecine nu conin nucleotide comune.
Este fr virgule - codonii urmeaz unul dup altul, fr spaii.
Exist un triplet universal de iniiere - AUG. La procariote i la unele plante n calitate de
codon de iniiere poate fi GUG.
Exist trei codoni STOP - UAA, UAG, UGA.

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Ordinea codonilor n molecula de ARNm se numete faz de lectur. n fiecare molecul

de ARNm exist trei faze de lectur. Faza de lectur care ncepe cu AUG se numete faz de
lectur deschis (fig. 10.1).
Procesul de decodificare a informaiei cifrate n molecula de ARNm se realizeaz pe
ribozomi cu ajutorul ARNt. Aparatul de translaie include numeroi factori proteici ce
catalizeaz traducerea corect a codului genetic, polimerizarea aminoacizilor, asamblarea
ribozomilor, controlul duratei de via a ARNm, controlul numrului de polipeptide sintetizate
de pe aceeai matri.

Figura 1. Proprietile codului genetic

Procesul de translaie este similar la procariote i eucariote. Sunt diferii factorii proteici
de translaie, tipurile de ribozomi implicai i modul de iniiere a translaiei. De asemenea, difer
i structura moleculelor de ARNm. La procariote ARNm, de obicei, este policistronic - conine
informaia despre sinteza mai multor proteine, iar la eucariote conine informaia despre sinteza
unui singur polipeptid. La procariote procesele de transcripie i translaie pot decurge
concomitent. Aceasta este posibil deoarece ambele procese decurg direct n citoplasm, iar viteza
de sintez a proteinelor (10 aa/sec) este comparabil cu viteza de sintez a ARN (30 b/sec). La
eucariote aceste procese decurg separat: transcrierea - n nucleu, iar translaia - n citoplasm.
Realizarea mesajului genetic n mitocondrii i plastide are loc integral n organitele respective.

Aparatul de translaie
Aparatul de sintez a proteinelor este constituit din urmtoarele componente:
ARNm matri pentru sinteza proteinei;
ribozomi sediu pentru asamblarea polipeptidului;
ARNt translator al codului genetic de pe ARNm i transportator de aminoacizi
corespunztori;
aminoacilARNt sintetaze adaptori penru aminoacizi la ARNt caracteristic;
aminoacizi monomerii proteinei;
ATP i GTP surse de energie;
Mg2+, Ca2+ - cofactori ai enzimelor;
factori proteici reglatori specifici ai procesului de decodificare a codului genetic i
sintezei proteinei:
o eIF factori de iniiere a translaiei;
o eEF factori de elongare a translaiei;
o eRF factori de terminare.

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

ARNm la eucariote conine mesajul genetic pentru sinteza unui polipeptid, este monocistronic.
Se sintetizeaz i proceseaz n nucleu, apoi se transport n citoplasm.

Figura 2. Etapele generale ale expresiei unei gene nucleare codificatoare de protein. (1) Gena este transcris ntrun ARN precursor . (2) preARNm este supus processing-ului, care asigur stabilizarea capetelor ARNului i
splicing-ul. (3) ARNm este transferat din nucleu n citoplasm pe ribosomi, unde cu ajutorul moleculelor de ARNt
este translat ntr-o secven polipeptidic de aminoacizi de la AUG pn la un codon STOP. (5) Polipeptidul
sintetizat este preluat de chaperone, maturizat i transferat la locul de destinaie.

Structura ARNm:

Figura 3. ARNm cu situsurile sale reglatoare

CAPul (7meG5'ppp5'), care protejeaz 5' al ARNm i servete ca semnal de recunoatere pentru ribozom n
iniierea translaiei;
5'-UTR regiunea netranslat cu secvena lider care conine secvena consens KozaK (GGCACCAUGGCG) situs de legare a ARNm de ribozom; 5'-UTR poate conine:

IRE iron-responsive elements (IRE) cu o structur palindromic de circa 30 nucleotide ce

formeaz o bucl specific recunoscut de factori de iniiere a translaiei;

uORF (upstream open reading frame) secvena ce, probabil, regleaz rata de translaie a
ARNm;

IRES (internal ribosomal entry sequences) cu secvena KozaK;

Regiunea codificatoare, translat controleaz structura polipeptidului, ordinea asamblrii aminoacizilor:

AUG codonul START al translaiei;

UAA, UGA sau UAG codoni STOP ai translaiei;

3'-UTR regiunea netranlat - poate conine:

ARE (A+U-rich element) controleaz stabilitatea ARNm i eficiena translaiei;

Zipcode controleaz localizarea citoplasmatica a ARNm.

PAS poly(A)signal situsul de polyAdenilare.

poly(A) pn la 200 de Adenine care protejez captul 3' al ARNm;

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

ARNt. n procesul de sintez a proteinei sunt implicai 20 de aminoacizi. Ei sunt

transportai la locul de sintez cu ajutorul moleculelor de ARNt. Astfel, ARNt servete ca
translator (traductor) al codului genetic de pe ARNm i adaptor pentru aminoacizii
corespunztori.

Regiunile funcionale ale ARNt:

braul acceptor de care se unete aminoacidul (aa);

bucla care asigur recunoaterea ribozomului;
bucla D care este centrul de recunoatere de ctre aminoacil-ARNt-sintetaz;
bucla anticodon care conine un triplet anticodon ce determin tipul aminoacidului,
transportat ulterior de ARNt i are proprietatea de a se mperechea cu cele trei nucleotide ale
codonului din ARNm.

Figura 4. Structura moleculelor de ARNt

Teoretic, n total pentru cei 61 de codoni ar trebui s existe 61 tipuri de ARNt. Dup
datele Genomic tRNA Database n celul funcioneaz circa 500 de molecule de ARNt de 45
clase pentru cei 61 de codoni. Tabelul 1. Corelaia codon ARNm i anticodon ARNt
a.a.

Caodon/anticodon

ARNt

Caodon/anticodon

ARNt

UUU

AAA

a.a.

UCU

AGA

11

UUC

GAA

12

UCC

GGA

Phe

a.a.

Caodon/anticodon

ARNt

UAU

AUA

UAC

GUA

14

Tyr

a.a.

Caodon/anticodon

ARNt

UGU

ACA

UGC

GCA

30

Cys

Ser
UUA

UAA

UCA

UGA

STOP

UAA

UGA

STOP

UGA

UCA

UUG

CAA

UCG

CGA

STOP

UAG

CUA

Trp

UGG

CCA

CUU

AAG

12

CCU

AGG

10

CAU

AUG

CGU

ACG

Leu

His
CUC

GAG

CCC

GGG

CAC

GUG

11

CGC

GCC

CUA

UAG

CCA

UGG

CAA

UUG

11

CGA

UCA

CUG

CAG

10

CCG

CGG

CAG

CUG

20

CGG

CCG

AUU

AAU

14

ACU

AGU

10

AAU

AUU

AGU

ACU

AUC

GAU

ACC

GGU

AAC

GUU

32

AGC

GCU

AUA

UAU

ACA

UGU

AAA

UUU

16

AGA

UCU

AUG

CAU

20

ACG

CGU

AAG

CUU

17

AGG

CCU

GUU

AAC

11

GCU

AGC

29

GAU

AUC

GGU

ACC

GUC

GAC

GCC

GGC

GAC

GUC

19

GGC

GCC

15

GUA

UAC

GCA

UGC

GAA

UUC

13

GGA

UCC

GAG

CUC

13

GGG

CCC

Leu

Pro

Arg
Gln

Asn
Ile

Ser

Thr
Lys
Met

Arg

Asp
Val

Ala

Gly
Glu

GUG

CAC

16

GCG

CGC

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Analiznd tabelul codului genetic se pot scoate n eviden urmtoarele:

-

n codonii sinonimi (ex: GUU) primele dou baze azotate au sarcina codificatoare;
GUC
GUA
GUG
n codonii sinonimi a treia baza azotat poate varia, iar semnificaia codonului nu se
schimb;
Astfel, codul genetic este de regul triplet, dar n codonii sinonimi - cvazidublet.

Principiul codului cvazidublet poate fi urmrit i la decodificarea codonilor din ARNm

(pentru 61 de codoni sunt 45 de anticodoni n moleculele de ARNt citoplasmatic i 22 de
anticodoni n ARNt mitocondrieni). Conform Ipotezei de ezitare (wobble hypothesis) a regulei
de imperechere complementar a bazelor azotate la inreraciunea anticodon ARNt cu codon din
ARNm:

Primele dou baze azotate din codonul ARNt se mperecheaz cu bazele 2 i 3 ale
anticodonului dup principiul Watson-Crick (A cu U, Ucu A, G cu C i C cu G);
A treia baz azotat din codon poate fi ezitat de anticodon dup principiul prezentat n
figura 5.

Figura 5. Ipoteza de ezitare n mperecherea anticodon - codon

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Aminoacil-ARNt-sintetaza. Selecia corect i legarea aminoacidului la molecula

respectiv de ARNt se realizeaz cu ajutorul enzimei aminoacil-ARNt-sintetaza. Aceast enzim
are specificitate pentru fiecare dintre aminoacizi, de aceea n total exist 20 tipuri (fig. 10.4).
Aminoacidul se unete la grupa OH din poziia C2' sau C3' de la captul 3' al moleculei de
ARNt. Adiionarea se realizeaz n 2 etape:
2

g
Enzima-aminoacil-AMP + P~P
I) Enzima + aminoacid + ATP M
II) Enzima-aminoacil-AMP + ARNt
Aminoacil-ARNt + AMP + enzima.

Figura 6. Formarea a.a.-ARNt

Ribozomii. Ribozomii reprezint sediul de traducere a ARNm i polimerizare a

aminoacizilor. Ei constituie complexe ribonucleoproteice i sunt formai din dou subuniti de
mrime inegal. n citoplasm, dac ribozomii nu sunt implicai n procesul de translaie,
subunitile ribozomale sunt disociate. Formarea ribozomului are loc doar la unirea cu ARNm.
Structura ribozomilor, la fel ca i structura ARNr este similar, ns nu identic, la toate speciile.
Ribozomii eucariotici. Subunitatea 40S conine o molecul de ARNr 18S i ~33
proteine. Subunitatea 60S conine la rndul su, trei molecule de ARNr (5S, 5,8S, 28S) i circa
49 proteine. ARNr i subunitile ribozomale 40S i 60S se formeaz n nucleol.
Figura 7. Ribozomul sediul translaiei
- Situsul R de interaciune cu
ARNm;
- Situsul A de primire a ARNt cu
aminoacid;
- Situsul T peptidil transferazei;
- Situsul P al polipeptidului;
- Situsul E de eire a ARNt fr
aminoacid;

Legtura dintre ribozom, molecula de ARNt i molecula de ARNm se realizeaz prin

intermediul ARNr. Molecula ARNr din subunitatea mic este responsabil de recunoaterea i
unirea la ARNm. Moleculele de ARNr din subunitatea mare sunt responsabile de unirea celor
dou subuniti ribozomale, interaciunea ARNt cu subunitatea mare i cu molecula de ARNm.
Reaciile ce se desfoar pe ribozom sunt catalizate de proteinele ribozomale.

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Factori proteici de translaie. Fiecare etap a translaiei este controlat de un complex

de factori proteici specifici: eIF factori de iniiere; eEF factori de elongare; eRF factori de
terminare.
Principiile translaiei
Translaia se desfoar doar pe ribozomi respectnd urmatoarele principii:
Matricial ARNm reprezint model
dup care se asambleaz lanul polipeptidic;
Complementar codonii din
ARNm ce specific ordinea aminoacizilor n
polipeptid sunt identificai i translai de
ctre anticodonii complementari ai ARNt;
Unidirecionat ARNm ce citete i
se decodific n direcia 5 '3';
AUG este codon universal de
iniiere a translaiei;
UGA, UAA, UAG
STOP a translaiei;
Polipeptidul sintetizat crete n direcia +NH3-Met1..COO-;
De novo i nonreparativ.
Figura 8. Translaia

sunt codoni

Mecanismul translaiei
Sinteza proteinelor se face prin aezarea secvenial a aminoacizilor n ordinea impus de
mesajul genetic preluat de ARNm, n procesul sintezei sale pe matri de ADN. Descifrarea
mesajului se face n sensul 5'3' al moleculei de ARNm, deci n aceeai ordine n care a fost
copiat de ARNm n procesul de transcripie.
Procesul de biosintez a proteinelor decurge n trei etape: iniierea, elongarea i
terminarea. Fiecare etap este controlat de factori proteici specifici, care difer la procariote i
eucariote.

Figura 9. Etapele translaiei

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Iniierea include reaciile care preced formarea legturii peptidice ntre primii doi
aminoacizi din protein. Ea necesit legarea ribozomului la ARNm i formarea complexului de
iniiere care include primul aminoacil-ARNt. Aceasta este o etap relativ lent a translaiei i
determin rata cu care ARNm este tradus.
Iniierea decurge n cteva etape:
(1) formarea complexului metionil-ARNt met;
(2) activarea complexului metionil-ARNtmet prin adugarea unei molecule de GTP;
(3) formarea complexului [metionil-ARNtmet] [GTP] [subunitatea ribozomal mic].
Metionil-ARNt se situeaz n situsul P (proprietate unic doar pentru ARNt de iniiere);
(4) asocierea complexului format la ARNm: mai nti se recunoate CAP-ul, apoi
subunitatea ribozomal mic interacioneaz cu secvena lider (situsul KozaK) i
migreaz pn cnd ajunge la primul codon AUG;
(5) asocierea subunitii ribozomale mari i disocierea GTP n GDP i Pi.

Figura 10. Mecanismul iniierii translaiei

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Figura 11. Iniierea translaiei este

controlat de numeroi factori proteici cate
asigur derularea corect a evenimentelor
ce includ recunoaterea ARNm (eIF4A, E,
G), recunoaterea i activarea met-ARNt
(eIF2), Interaciunea cu subunitatea
ribozomal 40S (eIF1, 3). n paralel se
asigur stabilitatea ARNm de ctre eIF4G
in asociere cu PABP (poly(A) RNA binding
protein). PABP previne degradarea
secvenei polyA a ARNm, asigurnd
translaia lui i sinteza proteinei necesare, n
cantiti programate.

Elongarea include toate reaciile de la formarea primei legturi peptidice, pn la

adugarea ultimului aminoacid. Aminoacizii se ataeaz unul cte unul n conformitate cu
succesiunea codonilor n molecula de ARNm. Este cea mai rapid etap a translaiei.

Figura 12. Mecanismul elongrii translaiei

(1)
(2)
(3)
(4)
(5)

Elongarea se caracterizeaz prin succesiunea urmtoarelor evenimente:

activarea complexelor aminoacil-ARNt;
transportarea complexului aminoacil-ARNt la situsul A al ribozomului;
transferul lanului peptidic din situsul P n situsul A i formarea legturii peptidice ntre
aminoacizi. Procesul este catalizat de ribozima peptidil-transferaza;
eliberarea moleculei de ARNt din situsul P i asocierea unei molecule de GTP la
ribozom;
translocarea ribozomului cu un triplet. Micarea ribozomului se efectueaz n direcia
5' 3' al moleculei de ARNm:
- tripletul decodificat nimerete n afara sectorului P;
- n situsul P se va deplasa ARNt cu polipeptidul format (peptidil-ARNt);
- n sectorul A se situeaz urmtorul codon, iar n situsul A urmtorul aminoacilARNt. n calitate de energie servete GTP care se hidrolizeaz pn la GDP + Pi.
Procesul decurge pn cnd n sectorul A nimerete unul din cei trei codoni STOP.

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Terminarea cuprinde evenimentele necesare pentru eliberarea lanului polipeptidic

sintetizat i disocierea ribozomilor de la ARNm.
Cnd n situsul A se situeaz unul dintre cei trei codoni STOP (UAG, UGA, UAA), la
ribozom se unete factorul de eliberare eRF. eRF condiioneaz disocierea complexului de
translaie. Subunitile ribozomale, ARNt, ARNm, RE, factorii proteici de translaie pot fi
reutilizai:

Figura 13. Terminarea translaiei

Lanul polipeptidic sintetizat, de obicei, sufer unele modificri posttranslaionale:

fosforilarea, glocozidarea, hidroliza specific etc.

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Reglarea translaiei
Biosinteza proteinelor poate fi activat/inactivat de diveri factori de natur proteic sau
neproteic care interacioneaz cu componeni aparatului de translaie.
n tabelul 2 sunt enumerai principalii factori de translaie la procariote i eucariote,
mecanismul lor de aciune la diferite etape ale iniierii, elongrii i terminrii biosintezei
proteinei.
Tabelul 2. Factorii de translaie i mecanismul lor de aciune

Terminarea

Elongarea

Initierea

IF-1
IF-2
IF-3
eIF-2
eIF-3
eIF-4A
eIF-4B
eIF-5
eIF-6
EF-Tu
EF-Ts
EF-G
eEF-1
eEF-1
eEF-2
RF-1
RF-2
RF-3
eRF

Procariote
Se unete la subunitatea 30S i stabilizeaz complexul de iniiere pn la interaciunea cu ali
factori proteici
Se unete la ARNt de iniiere i controleaz ptrunderea lui pe ribozom
Controleaz unirea corect a subunitii 30S la ARNm
Eucariote
Activeaz complexul Met-ARNtmet
Asigur unirea subunitii 40S la CAP-ul ARNm
Recunoate CAP-ul i asigur denaturarea palindroamelor din secvena lider a ARNm
Asigur stabilitatea moleculei ARNm i previne formarea buclelor
Este o GTP-az ce asigur unirea subunitii 60S la complexul de iniiere
Previne legarea prematur a subunitii 60S la subunitatea 40S
Procariote
Mediaz ptrunderea aminoacil-ARNt n situsul A
Asigur hidroliza GTP; regenereaz EF-Tu
Asigur translocarea ribozomului
Eucariote
Asigur unirea aminoacil-ARNt la ribozom; este omologul EF-Tu
Asigur hidroliza GTP; este omologul EF-Ts
Asigur translocarea ribozomului; este omologul EF-G
Procariote
Recunoate codonii STOP UAA i UAG
Recunoate codonii STOP UGA i UAA
Asigur specificitatea RF-1 i RF-2.
Eucariote
Mecanism asemntor ca la procariote; factorii de terminare sunt nc puin studiai

Unele modificri (mutaiile) din structura ARNm pot cauza dereglri n procesul de
translaie. Mutaiile pot fi cauzate de modificrile din structura ADN transcris sau pot aprea n
ARNm sintetizat.
Modificarea secvenei-lider poate mpiedica recunoaterea i legarea ribozomilor la
ARNm.
Pierderea/adiionarea unui sau mai multor nucleotide provoac decalarea fazei de lectur
i modificarea secvenei de aminoacizi n ntregul lan, dup locul de modificare. Substituia
nucleotidelor poate provoca apariia codonilor missens sau nonsens. Mutaiile missens
determin nlocuirea unui aminoacid cu altul. n cazul formrii unor codoni STOP prematuri
(mutaie nonsens), are loc sinteza unor lanuri polipeptidice mai scurte. nlocuirea unui codon
STOP cu un codon sens duce la alungirea lanului polipeptidic.
Numrul de polipeptide sintetizate de pe aceeai matri ARNm este determinat de durata
de via a mesagerului. La eucariote exist mai multe mecanisme ce asigur stabilitatea ARNm,
care au o durat de via de la 20 min pn la 48 ore. Unul dintre ele este asociat cu lungimea
secvenei poli(A). n plus la eucariote exist particule RNP ce pstreaz ARNm. Asocierea ARN
cu proteinele previne degradarea enzimatic a mesagerului. Date recente pun n eviden
existena unor molecule de ARN-antisens, care se pot lega complementar cu moleculele de
ARNm, blocnd i, astfel, prevenind translaia mesagerilor respectivi.

Biologie moleculara Translaia S.Capcelea I.Cemortan

Rolul medical al translaiei

Numeroase preparate antibacteriene i viceversa, toxinele bacteriene pot intercala
aparatul de translaie, bloca sinteza proteinelor i bloca activitatea vital a celulei bacterine sau
celulei umane. Mai jos v prezentm unele aspecte ale acestor interaciuni i ncercai s facei
concluzii vizavi de acest subiect.
Chloramphenicolul
Inhib peptidil transferasa procariotic;
Streptomicina, Neomicina
Inhib iniierea formrii lanului peptidic la procariote, impedic citirea corect a ARNm;
Tetraciclinele
Inhib legarea aminoacil-ARNt la subunitatea ribozomal 30S;
Erythromcina, Acidul fusidic
Inhib translocarea ribozomului 70S de-a lungul ARNm;
Puromycina
Mimeaz aminoacil-ARNt, se unete la polipeptid i induce terminarea perematur a translaiei
i la procariote, i la eucariote;
Toxina difteriei
Protein produs de Corynebacterium diphtheriae (agentul patogen al difteriei); inactiveaz
eEF-2, blocnd translaia;
Ricina (gsit n boabe de ricin, reprezint un heterodimer cu catena A (267 amino acizi) i B (262
amino acizi), Toxina din Shigella dysenteriae i Toxina din E. coli
funcioneaz similar N-glicoside hidrolazei care catalizeaz clivarea ARNr 28S;
Cycloheximida
Inhib peptidil-transferaza eucariot;
Etc.