Determinarea fosfatazei

acide

STUDENT:
Gaspar Jozsef
 Fosfataza Acidă (ACP).

 În funcţie de intervalul de pH a activităţii

lor se diferenţieză fosfataza acidă şi cea
alcalină

 ACP este o enzimă de diagnostic, care

preponderent se găseşte în prostată
(Fosfataza Acidă Prostatică, PAP)
 Importanţa
Nivelul abnormal al ACP-lui poate indica:
• cancer de prostată care s-a răspândit în afara
prostatei
• scăderea fluxului de sânge înspre glanda prostatei
• boala Paget
• anemie
• prostatită, care este o inflamaţie a glandei prostatei
• tromboflebită,(formarea cheagurilor de sânge mici
într-o venă)
• boala Gaucher, care este o tulburare a
metabolismului lipidic
• hiperparatiroidism, care este o afecţiune cauzată
de activitate crescută a glandei paratiroide
• atac de cord
• boli de rinichi
 Metoda de determinare
Se determină fotometric:
1. Cantitatea totală a ACP-lui:
- pe substrat de 4-nitrofenil-fosfat

2. PAP-lui:
- pe substrat de 4-nitrofenil-fosfat
- inhibitor tartrate chimice (inhibă activitatea
PAP-lui)
 Principiul
• Reacţia care stă la baza determinării:

• Reacţia este oprită prin adăugare de NaOH

• 4-nitrofenolul se converteşte în anioni galbeni, al
cărei absorbanţă este determinată (metoda end-
point)
• Semnalul măsurat este direct proporţional cu
concentraţia fosfatazei
• PAP-ul se determină prin adăugare de tartrate
chimice
 Prepararea probei
• ACP este foarte labil la temperatura
camerei
• Sângele trebuie centrifugat imediat după
coagulare
• Serul se răceşte
• În cazul utilizării ulterioare a probei pH-ul
trebuie ajustat la valoarea 5-6 (cu
NaHSO4•H2O)
 Reactanţi

1. Soluţia tampon
2. Soluţia de substrat
3. Soluţia tartrat de sodiu
4. Soluţia hidroxid de sodiu
5. Soluţia standard
 Soluţia standard
• Se foloseşte pentru calibrare
• Se reprezintă grafic absorbanţa în funcţie de
activitatea enzimei

Activitate
Solutie 0.02 M
a enzimei
standarda NaOH
[U/L]
1 mL 9 mL 5
2 mL 8 mL 10
3 mL 7 mL 15
6 mL 4 mL 30
10 mL - 50
 Mod de lucru
• Se amestecă soluţia tampon cu o soluţie 4-
nitrofenil-fosfat
• Se adaugă proba
• Soluţia rezultată se incubează 10-15 min la
temperatura 37 C°
• Se adaugă soluţie NaOH si se incubează înca
5 min
• Se măsoară absorbanţa probei faţă de proba
martor
• dacă absorbanţa>1 se diluează proba cu o
soluţie izonică
 Prelucrarea rezultatelor
• Concentraţia ACP-lui în proba:
Ae=As*101, [U/L]

• Concentraţia PAP-lui în proba:

Ae=(As-Aswt)*101, [U/L]

Ae: concentraţia în unităţi de fosfatază/L de

probă
As: absorbanţa probei
Aswt: absorbanţa probei cu tartrat
 Bibliografie
• http://en.wikipedia.org/wiki/Prostatic_acid_phosphatase
• http://www.medicineonline.com/articles/a/2/Acid-
Phosphatase-Test.html
• http://biovision.com/updated/newkits/Acid%20phosphota
se%20assay.html?gclid=CICPg4eggJ8CFYGDzAodZyvh
NQ
• www.acidphosphatasetest.com
• http://health.discovery.com/encyclopedias/illnesses.html
?article=1016
• http://medical-
dictionary.thefreedictionary.com/acid+phosphatase+test
• nsm1.nsm.iup.edu/.../POBLAB%20AP%20F08.doc -
Statele Unite ale Americii
MULŢUMESC