ORDIN nr.

25 din 19 martie 2008 pentru aprobarea Normei sanitare veterinare privind metodologia de prelevare, prelucrare primar , ambalare i transport al probelor destinate examenelor de laborator n domeniul s n t ii animalelor EMITENT: AUTORITATEA NA IONAL SANITAR VETERINAR ALIMENTELOR I PENTRU SIGURAN A

PUBLICAT N: MONITORUL OFICIAL nr. 341 din 2 mai 2008

V znd Referatul de aprobare nr. 18.083 din 26 februarie 2008, ntocmit de Serviciul coordonare tehnic a institutelor na ionale de referin i laboratoarelor sanitare veterinare i pentru siguran a alimentelor i Serviciul politici, strategii, programe i proceduri sanitare veterinare din cadrul Autorit ii Na ionale Sanitare Veterinare i pentru Siguran a Alimentelor, avnd n vedere prevederile art. 10 lit. b) din Ordonan a Guvernului nr. 42/2004 privind organizarea activit ii sanitarveterinare i pentru siguran a alimentelor, aprobat cu modific ri i complet ri prin Legea nr. 215/2004, cu modific rile i complet rile ulterioare, n temeiul art. 3 alin. (3) i al art. 4 alin. (3) din Hot rrea Guvernului nr. 130/2006 privind organizarea i func ionarea Autorit ii Na ionale Sanitare Veterinare i pentru Siguran a Alimentelor i a unit ilor din subordinea acesteia, cu modific rile i complet rile ulterioare, pre edintele Autorit ii Na ionale Sanitare Veterinare i pentru Siguran a Alimentelor emite urm torul ordin:

ART. 1 Se aprob Norma sanitar veterinar privind metodologia de prelevare, prelucrare primar , ambalare i transport al probelor destinate examenelor de laborator n domeniul s n t ii animalelor, prev zut n anexa care face parte integrant din prezentul ordin. ART. 2 Se abiliteaz Institutul de Diagnostic i S n tate Animal pentru stabilirea i elaborarea modulelor privind documentele de nso ire pentru probele prelevate i trimise la laborator. ART. 3

Institutul de Diagnostic i S n tate Animal i laboratoarele sanitar-veterinare i pentru siguran a alimentelor jude ene, respectiv al municipiului Bucure ti, vor duce la ndeplinire prevederile prezentului ordin. ART. 4 Autoritatea Na ional Sanitar Veterinar aplicare a prevederilor prezentului ordin. ART. 5 Prezentul ordin se public n Monitorul Oficial al Romniei, Partea I. i pentru Siguran a Alimentelor va controla modul de

Pre edintele Autorit ii Na ionale Sanitare Veterinare i pentru Siguran a Alimentelor, Radu Roati Che an

Bucure ti, 19 martie 2008. Nr. 25.

ANEX

NORM SANITAR VETERINAR privind metodologia de prelevare, prelucrare primar , ambalare i transport al probelor destinate examenelor de laborator n domeniul s n t ii animalelor CAP. I Probe destinate examin rii pentru encefalopatiile spongiforme transmisibile ale animalelor

A. Probe de creier n stare proasp t

1. Aspecte procedurale a) Pentru prelevarea, prelucrarea primar , ambalarea i etichetarea probelor de creier n stare proasp t se folosesc truse speciale de prelevare. Situsul specific de prelevare de probe l constituie trunchiul cerebral. b) Prelevarea selectiv a segmentelor de trunchi cerebral din creierul rumeg toarelor mari i mici, inclusiv al celor s lbatice, aflate n stare de libertate sau n captivitate, n vederea efectu rii testelor de diagnostic pentru encefalopatiile spongiforme transmisibile ale animalelor, se realizeaz prin tehnica foramen magnum sau prin prelevarea integral a creierului. 2. Aspecte tehnice Etichetarea, ambalarea i expedierea probelor de trunchi cerebral prelevate n laborator se realizeaz astfel: a) fragmentele de trunchi cerebral prelevate se introduc ntr-un recipient din plastic, dup care se nchide capacul recipientului; b) recipientul se eticheteaz corespunz tor, trusele sunt nso ite de etichete autocolante, precizndu-se: data t ierii, num rul din registrul de t iere, num rul de identificare a animalului respectiv, num rul carcasei, n cazul t ierilor realizate n abatoarele autorizate; c) recipientul etichetat se introduce n punga din plastic a trusei, care se nchide etan ; d) probele astfel etichetate i ambalate se introduc ntr-un container etan , corespunz tor ca volum, care asigur pe durata transportului o temperatur de refrigerare cuprins ntre 2-8C. Containerul se transport n cel mai scurt timp posibil la laboratorul sanitar-veterinar i pentru siguran a alimentelor jude ean, respectiv al municipiului Bucure ti, sau la laboratorul de diagnostic de profil din cadrul Institutului de Diagnostic i S n tate Animal , iar, ulterior, n caz de suspiciune, pentru expertiz sau pentru solu ionarea unor diferende, probele se trimit la Laboratorul Na ional de Referin pentru Encefalopatiile Spongiforme ale Animalelor din cadrul Institutului de Diagnostic i S n tate Animal ; e) documentele sanitar-veterinare care nso esc probele de creier prelevate pentru diagnosticul encefalopatiilor spongiforme transmisibile ale animalelor sunt urm toarele: (i) nota de nso ire oficial , n conformitate cu prevederile legisla iei sanitar-veterinare n vigoare; (ii) tabelul cu probele de creier trimise, completat de medicul veterinar oficial abilitat pentru prelevarea, prelucrarea primar , ambalarea i expedierea probelor de creier la laborator.

B. Probe de creier sub form de omogenat 1. Probele de creier sub form de omogenat se eticheteaz pentru a se cunoa te datele de individualizare i identitate a probei i se introduc n punga de plastic a trusei, care se nchide etan . Punga se introduce ntr-un container etan , corespunz tor ca volum, i care asigur o temperatur sc zut pe toat durata transportului, fiind necesar un contact permanent cu ghea . Dac este posibil, se pot utiliza congelatoare portabile. 2. Containerul se transport n cel mai scurt timp posibil la laboratorul sanitar-veterinar i pentru siguran a alimentelor jude ean, respectiv al municipiului Bucure ti, sau la laboratorul de diagnostic de profil din cadrul Institutului de Diagnostic i S n tate Animal , iar, ulterior, n caz de suspiciune, pentru expertiz sau pentru solu ionarea unor diferende, probele se trimit la Laboratorul Na ional de Referin pentru Encefalopatiile Spongiforme ale Animalelor din cadrul Institutului de Diagnostic i S n tate Animal . 3. Documentele sanitare veterinare care nso esc probele sunt cele prev zute la lit. A pct. 2 lit. e).

C. Probe pentru examen histologic 1. Probele pentru examenul morfopatologic, inclusiv pentru aplicarea metodelor citohistologice, histochimice si imunohistochimice, pot fi: a) cadavre ale unor specii de animale de talie mijlocie i mic ori por iuni sau esuturi prelevate de la cadavre de astfel de animale, proaspete sau refrigerate i ambalate corespunz tor; b) sec iuni histologice sub form de preparate histologice fixate, colorate/necolorate, esuturi incluse n blocuri de parafin , ambalate corespunz tor, astfel nct s se asigure integritatea preparatelor/blocurilor de parafin . 2. Documentele sanitare veterinare de nso ire a probelor sunt cele prev zute la lit. A pct. 2 lit. e).

D. Probe pentru examen necropsic 1. Probele pentru efectuarea examenului necropsic sunt reprezentate de cadavre, por iuni de cadavre, organe sau esuturi, n stare proasp t ori refrigerat . 2. Documentele sanitare veterinare de nso ire a probelor sunt cele prev zute la lit. A pct. 2 lit. e).

E. Probe pentru expertiz medico-legal

1. Probele destinate expertizei medico-legale veterinare pentru encefalopatiile spongiforme transmisibile ale animalelor sunt reprezentate de cadavre sau por iuni de cadavre i trebuie s fie sigilate. 2. n toate situa iile de litigiu, probele destinate expertizei medico-legale, rezultate n urma proces rii speciale, se p streaz la Laboratorul Na ional de Referin pentru Encefalopatiile Spongiforme ale Animalelor din cadrul Institutului de Diagnostic i S n tate Animal , conform procedurilor existente n sistemul de asigurare a calit ii. 3. Documentele sanitare veterinare de nso ire a probelor sunt cele prev zute la lit. A pct. 2 lit. e).

CAP. II Probe destinate examenului toxicologic

Tipul de prob , cantitatea i caracteristicile acesteia sunt prev zute la pct. 4 din anexa nr. 1.

A. Probe de snge 1. Prelevarea probelor de snge se face prin punc ionarea marilor vene, dup o prealabil preg tire a locului de elec ie, tundere, dezinfec ie cu vat cu alcool sau tinctur de iod, n vacutainere, ca atare i pe anticoagulant. 2. Pentru exprimarea serului, probele se las la temperatura camerei, dup care se decoleaz centrifugheaz , iar serul rezultat se p streaz pn n momentul expedierii. i se

3. Probele prelevate se depoziteaz la temperatura de 4C, pentru o perioad de 24 de ore, sau la temperatura de -20C, pentru o perioad mai lung de timp. 4. Probele prelevate pentru determinarea methemoglobinei se expediaz la laborator n maximum o or de la prelevare, la temperatura de refrigerare.

B. Probe de p r/ln /pene 1. Materialul prelevat se pune n ambalaje speciale din material plastic i nu se supune niciunui procedeu de sp lare naintea efectu rii analizelor toxicologice.

2. Probele de p r se preleveaz din zona frontal sau din zona cre tetului, cel prelevat din alte zone fiind mai pu in recomandat.

C. Probe de urin Probele de urin se prelev n recipiente cu nchidere etan , se p streaz laborator la temperatura de refrigerare. i se transport la

D. Probe de organe i de con inut gastric De la fiecare animal afectat se prelev ficat, rinichi, creier, eventual alte organe, os, precum i con inut gastric. Probele se ambaleaz n recipiente cu nchidere etan i se trimit imediat la laborator la temperatura de refrigerare. Dac probele nu pot fi transportate imediat, acestea se congeleaz pn la expediere.

E. Probe de furaje Furajele uscate suspicionate a fi produs intoxica ia se prelev i se ambaleaz n diferite recipiente sau pungi de plastic, transportndu-se la laborator la temperatura ambiental , iar furajele umede, precum borhoturile sau silozurile, se transport la temperatura de refrigerare.

F. Probe de ap 1. Probele de ap se prelev n recipiente de sticl sau de material plastic, polietilen , PTFE, PVC, PET, curate, cl tite n prealabil de cteva ori cu proba de analizat, i se expediaz imediat la laborator. 2. Transportul tuturor probelor prelevate se efectueaz astfel nct s se asigure integritatea acestora. 3. n timpul transportului, probele trebuie men inute la temperatura de refrigerare. 4. n cazul n care analiza nu poate fi efectuat la locul de prelevare, este necesar conservarea probelor, utilizndu-se agen i de conservare. Ace tia se adaug la prob imediat dup prelevare sau, n prealabil, n recipientul gol. 5. Ad ugarea agen ilor de conservare se face sub form de solu ii relativ concentrate, astfel nct s se foloseasc volume reduse, ceea ce permite s se neglijeze diluarea produs .

6. Tehnicile de conservare a probelor n func ie de parametrul care va fi determinat sunt prev zute n urm torul tabel: *T*

Nr. crt.

Parametrul

Tehnica de conservare conservare recomandat

Timpul de

1. pH

R cire la o temperatur de 2-5C

6h

2. Amoniac

Acidulare la 1<pH<2 R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C 21 de zile

Nitra i Azota i

Acidulare la 1<pH<2 cu HCl

7 zile

Nitri i Azoti i

R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C

24 h

Cloruri

30 de zile

Fosfa i

R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C

30 de zile

3. Arsen

Acidulare la 1<pH<2 cu HCl sau HNO(3)

30 de zile

4. Sulfuri

Recipient etan R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C 7 zile

Sulfa i

R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C

30 de zile

5. Cianuri

Ajustare la pH > 12 cu NaOH R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C 7 zile

6. Metale: cadmiu, cupru, plumb, zinc Acidulare la 1<pH< 2 cu HNO(3) 30 de zile

7. Pesticide: - organoclorurate - organo-

fosforice

R cire la o temperatur cuprins ntre 1-5C

5 zile

8. Substan e organice oxidabile (CCO) Acidulare la 1<pH<2 cu H(2)SO(4) 30 de zile

*ST*

7. Fiecare recipient n care s-au prelevat probe pentru examen toxicologic se eticheteaz , precizndu-se toate datele de identificare a probei: num r, tip, specie, num r matricol i altele. 8. Cantit ile de probe necesare pentru efectuarea examenului toxicologic sunt prev zute n urm torul tabel: *T*

Nr. crt. Tipul probei Cantitatea

1. Ser

5 ml

2. Snge integral

5 ml pe EDTA

3. Urin

100 ml

4. Vomisment

5. Con inut gastric

Integral sau 0,5 kg

6. Ficat, rinichi

Integral sau 0,5 kg

7. Creier

Integral

8. Os lung

Integral

9. P r/pene/ln

15-20 g

10. Furaje

0,5 kg

11. Ap

minimum 1 l

*ST*

9. n cazul unei suspiciuni de intoxica ie se recomand ca probele s fie trimise la laborator n cel mai scurt timp. 10. Toate probele expediate la laborator sunt nso ite de urm toarele documente sanitare veterinare: a) nota de nso ire oficial , n conformitate cu prevederile legisla iei sanitar-veterinare n vigoare; b) tabelul cu probele prelevate, completat de medicul veterinar oficial abilitat pentru prelevarea, prelucrarea primar , ambalarea i expedierea probelor.

CAP. III Probe destinate examenului parazitologic

A. Probe de materii fecale 1. Aspecte procedurale a) Deoarece la majoritatea helmin ilor ponta are caracter periodic, se recomand ca prelevarea s se efectueze din mai multe emisiuni de pe parcursul a 24 de ore, dintre care n final s se ob in o prob comun ; b) Pentru bovine, bubaline, ovine i caprine, prelevarea se efectueaz , pe ct posibil, individual, prin tu eu rectal, iar pentru celelalte specii prelevarea se face din emisiunile spontane din ultima parte a cantit ii de materii fecale proasp t eliminate. c) Cantitatea de materii fecale pentru speciile de animale mici - iepuri, p s ri, carnasiere, feline, porcine, ovine, caprine, altele - trebuie s fie de 25-50 g, iar pentru speciile de animale mari - bovine, bubaline, cabaline i altele - aceasta trebuie s fie de circa 100-300 g. Ca regul general , e antionul de materii fecale trebuie s fie reprezentativ att sub aspect cantitativ, ct i sub aspectul modific rilor calitative, respectiv al consisten ei i al culorii). d) n ferme, probele se prelev , de regul , prin sondaj, ntre 10-15%, de la animalele cele mai slabe. De la animalele cu valoare zootehnic deosebit , probele se prelev i se eticheteaz individual. e) Atunci cnd se elimin spontan fragmente de parazi i sau parazi i ntregi, ace tia se prelev expediaz mpreun cu e antioane de fecale de la animalele respective. 2. Ambalarea probelor i se

Ambalarea probelor de materii fecale se face n ambalaje din materiale impermeabile speciale, respectiv sticl , metal sau material plastic, bine nchise. 3. Conservarea probelor a) Conservarea probelor dup prelevare i nainte de a fi expediate la laborator se efectueaz la temperatura de 4C. b) Conservan ii reprezint o alternativ de conservare i se adaug n condi ii deosebite. c) Conservan ii chimici care pot fi utiliza i sunt urm torii: (i) lichidul fixator PAF - fenol, alcool, formol -, compus din: fenol alb cristalizat 20 g, solu ie fiziologic 825 ml, alcool etilic 95 125 ml, formol 50 ml; (ii) alt solu ie fixatoare cu urm toarea compozi ie: formol comercial 10 ml, glicerin 10 ml ap distilat 90 ml. d) Parazi ii adul i se conserv astfel: (i) nematodele n solu ie barbagallo - formol 3la mie n ser fiziologic; (ii) cestodele i trematodele, n alcool de 70. 4. Individualizarea probelor a) Individualizarea recipientelor n care sunt puse probele de fecale se realizeaz prin marcarea acestora cu litere, cifre sau cu alte semne. b) De regul , pentru individualizarea unei probe se men ioneaz identificarea animalului de la care provine aceasta, proprietarul, localitatea i data recolt rii. c) Probele sunt nso ite ntotdeauna de: (i) o not de nso ire oficial , n conformitate cu prevederile legisla iei sanitar-veterinare n vigoare; (ii) un tabel cu detaliile fiec rei probe: num r matricol, nume, sex, vrsta, alte detalii.

B. Probe de cadavre 1. Cadavrele de la care se prelev probe pentru examen parazitologic trebuie s fie proaspete, nedeschise i trebuie expediate la laborator n cel mai scurt timp. 2. Ambalarea acestora se efectueaz n saci de plastic de unic folosin , bine nchi i.

3. n cazul animalelor mici, este recomandat ca din acela i efectiv s se trimit la laborator i cadavre de animale b trne care au prezentat simptome clinice specifice.

C. Probe de organe i esuturi 1. Organele trebuie sa fie pe ct posibil ntregi, nedeschise i foarte proaspete. 2. Atunci cnd se trimit la laborator fragmente de organe, acestea trebuie s prezinte leziuni semnificative. 3. Ambalarea probelor de organe i esuturi se realizeaz n saci sau n pungi de plastic de unic folosin i nchise ermetic. Nu se adaug conservan i sau substan e antiseptice. 4. Transportul probelor la laborator se efectueaz n recipiente izoterme, la temperaturi de refrigerare, pe tot timpul transportului. 5. Pentru probele de esut muscular destinate examenului trichineloscopic se au n vedere anumite precau ii, dup cum urmeaz : prelevarea probelor se face n cantitate de 10-20 g din grupele musculare fa de care larvele de Trichinella spiralis manifest o predilec ie deosebit , respectiv din pilierii diafragmatici, psoa i, intercostali, abdominali i laringieni. 6. Probele sunt prelevate i ambalate individual, precizndu-se pe nota de nso ire provenien a acestora, astfel nct s se evite orice posibilitate de eroare. 7. Pentru diagnosticul altor parazitoze, precum sarcocistoza, cisticercoza, echinococcozahidatidoza i altele, se aleg fragmente de esuturi cu leziuni semnificative, forma iuni chistice sau alte esuturi. Acestea sunt ambalate i identificate cu aten ie, pentru a se evita orice eroare.

D. Probe de cruste, scuame, p r i pene 1. Acest tip de probe constituie material patologic pentru diagnosticul unor ectoparazitoze la mamifere i p s ri. 2. Crustele i scuamele se deta eaz de la marginea leziunilor, prin raclare cu ajutorul unui bisturiu. Raclarea este mai mult sau mai pu in profund , n func ie de localizarea agentului cauzal suspicionat. n cazul demodeciei, al riei sarcoptice la mamifere sau al riei cnemidocoptice la p s ri, raclarea este f cut profund, pn aproape de sngerare, deoarece agen ii parazitari incrimina i se localizeaz n straturile dermice profunde. 3. Produsele rezultate din raclare se ambaleaz n flacoane bine nchise care s nu permit ie irea parazi ilor n exterior i se expediaz la laborator.

4. Perii i tijele de pene se smulg din tegument cu o pens sau manual, astfel nct s fie antrena i i foliculii pilo i. Ace tia se ambaleaz n flacoane care asigur o bun nchidere i se individualizeaz prin etichetare. Astfel de probe nu necesit refrigerare.

E. Probe de secre ii patologice de la nivelul organelor genitale i de la avortoni Prelevarea unor astfel de probe se efectueaz dup tehnici i procedee adecvate segmentelor genitale vizate, secre ii vaginale, material seminal, secre ii prepu iale. 1. Prelevarea secre iilor prepu iale prin metoda sp l rii cavit ii prepu iale a) Se conten ioneaz animalul, se efectueaz toaleta regiunii genitale, se introduce tubul de cauciuc adaptat la seringa n care s-au introdus n prealabil 30-50 ml ser fiziologic n cavitatea prepu ial , se nchide manual orificiul prepu ial i se injecteaz serul fiziologic la o temperatur apropiat de cea a animalului, se maseaz regiunea prepu ial astfel nct lichidul introdus s spele faldurile mucoasei, dup care lichidul se aspir i se prelev ntr-un flacon steril. b) n cazul n care n timpul manoperei masculii urineaz , opera iunea se repet . c) Probele prelevate trebuie s ajung la laborator n cteva ore de la prelevare. d) Probele prelevate se individualizeaz prin etichetarea tubului de prelevare cu datele de identificare ale animalului i ale exploata iei i, mpreun cu nota de nso ire i cu tabelul de eviden a probelor, se trimit la laborator. 2. Prelevarea secre iilor vaginale a) Pentru prelevarea secre iilor vaginale se folose te o ans steril prev zut cu un tampon steril mbibat n prealabil n ser fiziologic steril, nc lzit la o temperatur de 37C. Aceasta se introduce profund n vagin pn la cervix, badijonndu-se bine mucoasa. Se extrage ansa, iar prin compresarea tamponului cu o pens steril se preleveaz materialul ob inut ntr-un flacon steril. b) Probele se individualizeaz printr-o etichet care se ata eaz tubului de prelevare, pe care sunt nscrise datele de identificare ale animalului i ale exploata iei i, mpreun cu nota de nso ire i cu tabelul de eviden a probelor, se trimit imediat la laborator. c) Probele de material seminal crud sunt transportate la temperatur de refrigerare n recipiente de plastic. d) Probele de material seminal congelat sunt transportate la temperatura de -196C, conservate n azot lichid, n paiete. 3. Prelevarea secre iilor patologice de la avortoni

a) Se racleaz u or membranele fetale cu ajutorul unei spatule sterile. Materialul ob inut se trece ntr-un flacon steril n care s-a pus n prealabil ser fiziologic steril. b) Lichidul amniotic, pericardic sau alte lichide cavitare se prelev cu ajutorul pipetei Pasteur, n flacoane sterile cu ser fiziologic. c) Pentru efectuarea examenelor de laborator, avortonii sunt trimi i la laborator ntregi, ambala i n saci de plastic i n condi ii de refrigerare. d) Probele sunt identificate individual i, mpreun cu nota de nso ire i cu tabelul de eviden acestora, se trimit la laborator. a

F. Probe de lichide patologice 1. Lichidele patologice destinate examenului de laborator constau n lichid cefalorahidian, pericardic, pleural, ascitic, de edem sau alte lichide. 2. Prelevarea se realizeaz n condi ii de asepsie perfect , folosindu-se instrumentar i recipiente sterile. 3. Se recomand efectuarea examenului direct, ct mai repede posibil dup prelevare. n caz contrar, se folose te conservarea la temperaturi de -10C. 4. Transportul se efectueaz n recipiente izoterme. 5. Lichidul cefalorahidian este prelevat utilizndu-se substan e anticoagulante. 6. Probele se individualizeaz printr-o etichet care se ata eaz recipientului de prelevare, pe care sunt nscrise datele de identificare ale animalului i ale exploata iei i, mpreun cu nota de nso ire i cu tabelul de eviden a probelor, se trimit la laborator.

G. Probe de secre ii patologice din cavitatea buco-faringian 1. Prelevarea se efectueaz cu ajutorul unor tampoane sterile mbibate n solu ie fiziologic c ldu i steril sau prin raclare u oar cu o spatul fin . 2. Se lucreaz aseptic, astfel nct materialul prelevat s poat fi, dup caz, cultivat pe medii specifice. 3. Ambalarea probelor prelevate se realizeaz n recipiente sterile.

H. Probe de secre ii lacrimale sau nazale 1. Secre iile lacrimare sau nazale se prelev direct n eprubete, atunci cnd sunt n cantit i mari, sau cu ajutorul unor tampoane sterile fixate pe baghete, cnd sunt n cantit i mici. Tampoanele sunt n prealabil mbibate cu solu ie fiziologic steril . 2. Recipientele de prelevare trebuie s fie sterile. 3. Prelevarea secre iilor lacrimale sau nazale din tampoane se face n recipiente curate i sterile, prin presarea acestora cu ajutorul unei pense sterile. 4. Secre iile conjunctivale pot fi ob inute att prin raclarea atent conjunctivale, ct i prin acupunctur . i delicat a mucoasei

5. Pentru prelevarea acestora se utilizeaz instrumentar i recipiente sterile. 6. Conservarea probelor prelevate se realizeaz la temperatura de 4C, pentru proba ca atare, sau se utilizeaz numai sedimentul ob inut prin centrifugare.

I. Probe de lapte i colostru 1. Probele de lapte i colostru se examineaz n caz de suspiciune a toxoplasmozei sau a prezen ei unor larve de nematode Strongyloides spp. 2. Probele se prelev n tuburi din plastic cu dop fix, sterile i individualizate, i se transport la laborator n cel mai scurt timp, la temperatura de refrigerare.

J. Probe de urin 1. Probele de urin se pot preleva n timpul emisiilor urinare spontane sau prin cateterism, folosindu-se instrumentar i recipiente sterile. Probele se pot conserva ca atare la temperatura 4C sau se utilizeaz numai sedimentul ob inut prin centrifugare 2. Probele de urin trebuie s ajung la laborator n cel mult cteva ore de la prelevare.

K. Probe de snge 1. Probele de snge sunt prelevate cantitativ, astfel: a) pe 2 ml EDTA;

b) pe 50 ml din orice substan frotiuri sau a altor preparate.

anticoagulant , n recipiente, utilizndu-se pentru efectuarea de

2. Prelevarea probelor de snge se face n func ie de parazitul suspicionat, de preferin

la amiaz .

3. Pentru cantit i mici de snge, se prelev prima pic tur ob inut prin punc ia cu acul steril al pielii dezinfectate sau prin sec ionarea u oar a acesteia, dup cum urmeaz : la nivelul urechii, pentru speciile de animale mici - cine, pisic , iepure -, la nivelul b rbi ei, crestei sau zonei axilare, pentru p s ri, la nivelul buzei, la cal, la vrful cozii, pentru oareci i obolani. 4. Pentru prelevarea unei cantit i mari de snge se recomand zonele de elec ie prev zute de urm torul tabel: *T*

Nr. crt.

Specia

Locul de elec ie

1. Cabaline

Vena jugular

2. Bovine

Vena jugular , vena mamar , excep ional vena coccigian

3. Ovine, caprine

Vena jugular , vena safen

4. Porcine

Vena cav anterioar

5. Canide

Venele safen , jugular

i/sau cefalic

6. Feline

Venele cefalic

i/sau jugular

7. P s ri

Vena subclavicular

*ST*

5. Prelevarea probelor de la obolani i oareci se poate efectua din sinusul orbital, iar de la iepuri i p s ri, prin punc ia cordului. 6. Pentru prentmpinarea hemolizei, instrumentarul i recipientele de prelevare trebuie s fie curate i uscate. 7. n momentul recolt rii, sngele trebuie s se scurg direct pe pere ii recipientului, pentru a se evita formarea spumei. 8. Pentru exprimarea serului, probele se men in la temperatura camerei. 9. Serul i plasma pot fi p strate la o temperatur de 4C, maximum 5 zile. 10. Ca substan anticoagulant se pot folosi urm toarele substan e: oxala i, citrat de sodiu, heparin , EDTA, acesta din urm fiind recomandat pentru examenul parazitologic, folosindu-se 1-2 mg pentru fiecare mililitru de snge prelevat. 11. Transportul probelor la laborator este efectuat ct mai urgent posibil, n condi ii de refrigerare. 12. Sngele prelevat pe substan temperatur de 4C. anticoagulant poate fi p strat o perioad scurt de timp, la o

13. La expedierea probelor de snge la laborator, n scopul identific rii acestora, se anexeaz la nota de nso ire tabele de identificare corespunz toare.

L. Probe de acarieni i insecte

1. Prelevarea ixodidelor a) Ixodidele se prelev direct de pe animale, pe tot parcursul anului, ndeosebi prim vara i toamna. b) Desprinderea ixodidelor de pe animale se realizeaz cu ajutorul unei pene sau folosindu-se un tampon de vat mbibat n eter, cloroform, aceton ori benzin . Utilizarea acestor substan e ajut la desprinderea complet a c pu elor de pe animale, inclusiv de la nivelul aparatului bucal. c) Conservarea ixodidelor pline cu snge se realizeaz n formol 10% n ap distilat , ap obi nuit sau n alcool 50% n ap distilat . d) Transportul ixodidelor la laborator se realizeaz n tub de sticl , cu o lungime de 10-11 cm i cu diametrul de 1,5 cm. n tub se pune ap obi nuit , mai pu in de jum tate din volumul acestuia (5-8 cmc). Se introduce apoi n tub un tampon de vat hidrofil care se mpinge cu o baghet de sticl pn la contactul cu apa, f r a se l sa s se formeze bule de aer. Cnd vata s-a umezit prin capilaritate, se introduce un al doilea tampon de vat care se mpinge pn l atinge pe primul, pentru a se mbiba i acesta prin capilaritate. Tampoanele sunt fixe pe tub, pentru a se evita scurgerea apei. Deasupra ultimului strat de vat se pune un strat de tifon, 6x6 cm, peste care se introduc c pu ele, iar tubul se astup cu un dop de vat . Se pun tuburile ntr-o cutie de carton sau de plastic i se trimit la laborator. C pu ele pot supravie ui 5 luni n aceste condi ii. e) Tuburile se eticheteaz , iar pe etichet se nscriu data, identificarea gazdei, locul de unde au fost colectate de pe gazd , localitatea i jude ul. Probele sunt nso ite de urm toarele: (i) o not n care se nscriu datele clinice i epidemiologice; (ii) un tabel cu individualizarea probelor, atunci cnd sunt prelevate mai multe probe. 2. Prelevarea culicidelor a) Prelevarea larvelor i pupelor de culicide (i) Pentru prelevarea larvelor i pupelor de culicide din mediul semiacvatic sau umed - zona de p dure - se folose te plnia Berlese. Pentru u urarea recolt rii larvelor i pupelor de culicide din mediul acvatic, se adaug n ap zah r sau sare, aceast tehnic folosindu-se de obicei doar pentru speciile de Culicoides ale c ror larve nu noat sau ale c ror pupe nu plutesc la suprafa a apei. Pentru celelalte specii prelevarea larvelor sau a pupelor de culicide se poate realiza cu pensa. (ii) Prelevarea pupelor din mediul acvatic se poate realiza urm rindu-se marginile hele teelor, lacurilor sau ale rurilor. b) Prelevarea adul ilor de culicide (i) Pentru colectarea adul ilor de culicide se folosesc capcane luminoase cu CO(2) sau plase;

(ii) Pentru capturarea insectelor cu ajutorul capcanelor trebuie s se cunoasc : zonele propice de montare a capcanelor, cum sunt: locurile cu umiditate relativ mare, situate la distan e mici de marginea unei p duri, locurile dintre zonele populate i cele nelocuite, zonele reziden iale sau zonele de recreere, situate la 2-3 m distan de o cl dire ori suspendate la 1,5-2 m deasupra p mntului, precum i zonele unde nu se monteaz capcanele, cum sunt: deasupra apei, direct pe p mnt, n apropierea zonelor cu lumin artificial , lng grajduri de animale, n zone expuse la fum ori n zone cu smog industrial; (iii) programul de func ionare a capcanelor luminoase este: instalarea acestora timp de 1-7 nop i pe s pt mn , aprinzndu-se seara i oprindu-se diminea a, iar colectarea insectelor se face timp de 4 s pt mni. c) Conservarea larvelor, pupelor i adul ilor de culicide Pentru conservarea larvelor, pupelor i adul ilor de culicide se utilizeaz alcoolul n concentra ie de 70%. Exist i alte metode mai complexe de conservare att a larvelor, pupelor, ct i a adul ilor, ns acestea se pot folosi numai n cazul n care se fac studii de taxonomie. De asemenea, larvele, pupele i adul ii de culicide se conserv foarte bine n alcool 70%, de i concentra ia poate fi m rit progresiv putnd s se ajung pn la 100% alcool etilic saturat cu fenol. Solu ia ob inut se las n repaus peste noapte sau chiar mai mult. d) Ambalarea tuburilor cu insecte pentru a fi transportate la laborator (i) Pentru ambalarea tuburilor cu insecte se pot folosi tuburi, criotuburi prev zute cu dop sau tuburi mai mari, n care s-a pus n prealabil, n jum tate din tub, solu ie conservant - alcool 70%, apoi se pun cte 4-5 larve, pupe sau adul i de culicide, iar tuburile se nchid pentru a se evita scurgerea solu iei conservante. (ii) Pe tub se lipe te o etichet cu data, localitatea i jude ul de unde au fost prelevate probele, iar pe lng nota de nso ire a probelor, eventual, se trimite un tabel, dac sunt mai multe probe, i o not , n care se specific : locul de unde au fost prelevate probele, tipul de sol din zon , temperatura mediului ambiant n momentul recolt rii, condi iile climaterice, gradul de umiditate, viteza vntului, presiunea atmosferic , dac zona este locuit sau nu, ce specii de animale populeaz zona i care este pozi ia geografic a localit ii n cadrul jude ului i al rii.

M. Probe de la gasteropode - gazde intermediare pentru geohelmin i Gasteropodele se pot preleva n toate anotimpurile. Cu toate acestea, trebuie s se in cont de biotopii regiunii n care urmeaz s se efectueze cercet rile. 1. Gasteropode acvatice

a) Gasteropodele acvatice se prelev fie cu ajutorul unui fileu folosit pentru insecte, fie cu o sit . Fileul se mi c n ap de cteva ori stnga-dreapta, la diferite adncimi de la suprafa a plantelor acvatice, pn la fundul mlos. b) Materialul colectat n fileu se spal de cteva ori, afundndu-se n ap pentru ndep rtarea mlului. Acest material se pune apoi ntr-o sit cu ochiuri mai mari i se spal bine pentru a se ndep rta toate resturile, astfel nct s r mn numai melcii. 2. Gasteropode terestre a) Gasteropodele terestre se prelev , n general, dup ploile calde de var i chiar de prim var , cnd acestea ies din locurile n care stau retrase. Alte gasteropode care stau sub frunzare sau sub bu teni se prelev tot timpul anului fie cu mna, fie cu pensa, punndu-se direct n tuburile de sticl , n cutiile de carton sau de plastic. b) Gasteropodele terestre care tr iesc pe paji ti se colecteaz cu fileul de insecte, ndeosebi diminea a. c) Transportul materialului biologic prelevat din teren se face n tuburi, cutii de carton, de plastic sau din tabl , cu posibilitate de aerisire, dar i n s cule i de pnz sau de plastic. d) De regul , limacidele i helicidele se transport n cutii cu site de aerisire. n interiorul acestora se pun frunze, iarb sau mu chi, care s men in umiditatea. e) n laborator, gasteropodele se pot men ine vii n acvarii sau terarii. f) O prob de gasteropode poate fi reprezentat fie de un exemplar, fie de mai multe exemplare care au fost colectate din acela i loc. g) Toate probele prelevate se eticheteaz imediat. Eticheta con ine data i locul de unde s-au prelevat probele. h) Probele se transport la laborator, mpreun cu nota de nso ire, la temperaturi de refrigerare.

N. Probe de oribatide, acarieni de p une - gazde intermediare pentru geohelmin i 1. Oribatidele se colecteaz n perioada aprilie-noiembrie. 2. Exemplarele de acarieni se prelev n borcane cu capac, prev zute cu un tampon de vat mbibat cu cloroform sau aceton , l sndu-se n contact cu acest tampon minimum 24 de ore. Proba con ine minimum 4-5 exemplare de oribatide. 3. Dup colectarea acarienilor, borcanul se nchide ermetic, se nscriu pe eticheta care se lipe te pe borcan data i locul prelev rii probei, dup care se transport la laborator.

4. Probele se transport la laborator, mpreun cu nota de nso ire, la temperaturi de refrigerare.

O. Probe de odonate, libelule - gazde intermediare pentru geohelmin i 1. Libelulele adulte se colecteaz cu plase special amenajate, se introduc n borcane cu dop filetat n care s-a introdus, n prealabil, un tampon de vat mbibat cu cloroform sau aceton i se las n contact cu insectele minimum 24 de ore. 2. Este recomandabil s se colecteze minimum 4-5 exemplare de libelule. 3. Pe eticheta ata at la borcan se nscriu data i locul de colectare a exemplarelor de libelule, dup care borcanul se transport la laborator. 4. Probele se transport la laborator, mpreun cu nota de nso ire, la temperaturi de refrigerare.

P. Probe de muscide - gazde intermediare pentru geohelmin i 1. Se colecteaz minimum 5 exemplare de muscide din zonele p unabile, cu ajutorul unor plase. Acestea se introduc n pahare cu dop filetat, prev zute cu un tampon de vat mbibat cu cloroform sau aceton , cu care se las n contact minimum 24 de ore. 2. Proba de muscide poate fi reprezentat de un exemplar de insect sau de mai multe insecte ce au fost prelevate din acela i loc. 3. Pe eticheta ata at la pahar se nscriu data i locul de prelevare a exemplarelor de muscide, specificndu-se speciile de animale din zon . 4. Probele etichetate i bine ambalate se transport la laborator. 5. Probele se transport la laborator, mpreun cu nota de nso ire, la temperaturi de refrigerare.

Q. Probe de formicide - gazde intermediare pentru geohelmin i 1. Furnicile se colecteaz fie direct din furnicar, fie se prelev fire de iarb pe care sunt prinse furnici. 2. Este recomandabil s se preleve minimum 10 exemplare de furnici. 3. Probele de furnici se introduc n pahare de dimensiuni corespunz toare, n care s-a introdus, n prealabil, un tampon de vat mbibat n cloroform sau aceton , l sndu-se n contact cu insectele minimum 24 de ore.

4. Eticheta ata at de pahar se completeaz , conform celor prev zute n nota de nso ire, cu data i locul de colectare a furnicilor, dup care probele se transport la laborator. 5. Probele se transport la laborator, mpreun cu nota de nso ire, la temperaturi de refrigerare.

R. Probe de coleoptere - gazde intermediare pentru geohelmin i 1. Coleopterele se colecteaz direct cu mna sau cu o plas special amenajat , din zonele pe care acestea le frecventeaz : n apropierea materiilor fecale proaspete provenite de la ovine, bovine i cabaline. 2. Se recomand prelevarea acestor insecte pe vreme umed , ntunecoas sau, n orice caz, diminea a. 3. Dup prelevare, probele se introduc n pahare cu capac filetat n care s-a introdus, n prealabil, un tampon de vat mbibat n cloroform sau aceton . Se nchide ermetic paharul i se las n contact cu insectele 24 de ore. 4. O prob poate fi reprezentat de unul sau mai multe exemplare de coleoptere care au fost prelevate din acela i loc. 5. Pe eticheta ata at la pahar se nscriu data i locul de prelevare a exemplarelor de coleoptere, dup care se transport la laborator. 6. Probele se transport la laborator, mpreun cu nota de nso ire, la temperaturi de refrigerare.

S. Probe de lumbricide - gazde intermediare pentru geohelmin i 1. Lumbricidele, rmele sau viermii tere tri se prelev prin dragare. Acestea se prelev ndeosebi din locurile cu p mnt gras, din b legar, din gr dini i de pe cmpie. 2. Timpul optim de prelevare este noaptea i mai ales dup ploaie, cnd acestea sunt n num r foarte mare. 3. Lumbricidele pot fi prelevate majoritatea anului, din toate zonele rii, dar nu iarna.

4. Dup prelevare, rmele se introduc n borcane prev zute cu dop filetat, n care s-a pus, n prealabil, fie alcool 5-10%, fie formol 5% pentru anesteziere, iar conservarea lor se poate realiza n alcool 70% sau formol 5%. 5. Rmele se introduc timp de o lun ntr-un vas plin cu ap cu cloroform, care se acoper cu o plac de sticl - o parte cloroform la 100 p r i de ap , care se amestec bine.

6. Pe eticheta ata at de borcan se nscriu data i locul de colectare a materialului biologic, iar ulterior se transport la laborator. 7. Toate probele expediate la laborator sunt nso ite de urm toarele documente de identificare: a) o not de nso ire oficial , n conformitate cu prevederile legisla iei sanitar-veterinare n vigoare; b) un tabel cu probele prelevate, completat de medicul veterinar oficial abilitat pentru prelevarea, prelucrarea primar , ambalarea i expedierea probelor.

CAP. IV Probe destinate examenelor de biologie molecular

A. Probe de organe sau esuturi 1. Prelevarea probelor de organe i esuturi a) Probele de organe i esuturi se prelev n mod steril, folosindu-se instrumentar sterilizat, echipament de protec ie, m nu i i consumabile de unic folosin - pens , bisturiu sau lame de bisturiu, foarfece. b) Se prelev probe de la nivelul organelor i esuturilor sau se prelev organe ntregi de elec ie pentru afec iunea suspicionat , din zona afectat i din zonele periferice modific rilor decelate, iar acolo unde este cazul, fragmentele de organe i esuturile sau organele ntregi sunt nso ite i de probe de secre ii/excre ii normale i patologice. c) Fragmentele de organ provenite din alte sec ii ale laboratorului se prelev n hot cu flux laminar de clasa II, n pl ci Petri sterile de unic folosin , cu instrumentar steril de unic folosin pense, foarfece, lame de bisturiu, m nu i. 2. Ambalarea probelor de organe i esuturi a) Deoarece cantit ile necesare analizelor de biologie molecular sunt reduse, se recomand prelevarea organelor sau fragmentelor de organe individual, n tuburi sterile de tip Falcon/Eppendorf, atestate prin certificate de calitate emise de produc tor, pentru a fi libere de DNaze i RN-aze, sau n pungi de biohazard, sistemul pung n pung . b) Dup ambalarea individual , toate organele provenite de la un animal se comaseaz n dou pungi de biohazard, sistemul pung n pung , iar aceste pungi se plaseaz ntr-o cutie biohazard nchis ermetic.

c) Alternativ, pentru probele provenite de la alte servicii ale laboratorului, se pot utiliza pl ci Petri sterile, ambalate individual n pungi de plastic i transportate la laborator ntr-o cutie biohazard. 3. Identificarea probelor de organe i esuturi a) Identificarea fiec rei probe se realizeaz pe baza num rului care se reg se te n nota de nso ire a probei i n tabelul nominal anexat acesteia. b) Probele provenite de la alte servicii ale laboratorului trebuie nso ite, pe lng nota de nso ire men ionat la lit. a), i de o not intern care este o nregistrare specific fiec rui serviciu. 4. Transportul probelor de organe i esuturi a) Probele de organe i de esuturi se transport c tre laborator n recipiente nchise, refrigerate sau pe ghea uscat , la temperaturi de refrigerare. b) n situa ia n care perioada de timp dintre momentul prelev rii i cel al sosirii n laborator nu dep e te 4-5 ore, probele se transport la temperatura prev zut la lit. a), iar dac perioada de timp dep e te intervalul men ionat anterior, probele se conserv i se transport la temperaturi de congelare.

B. Probe de snge integral prelevat n recipient cu substan 1. Prelevarea probelor de snge

anticoagulant (EDTA)

a) Prelevarea probelor de snge integral se face n condi ii speciale, cu sistem vacutainer ce con ine EDTA ca anticoagulant. Tubul i acul de prelevare sunt utilizate individual, pentru fiecare animal. Nu este recomandat prelevarea pe alte tipuri de substan anticoagulant - heparin , deoarece aceasta inhib reac iile enzimatice ulterioare. b) Dup prelevare, sngele se omogenizeaz foarte bine cu EDTA, pentru prevenirea coagul rii par iale sau totale. c) Se ine cont de m surile generale referitoare la prelevarea materialului biologic ce implic evitarea contamin rii probelor i a p r ii exterioare a tuburilor cu materii organice, inclusiv a sngelui animalului de la care s-a realizat prelevarea. 2. Ambalarea probelor de snge integral Ambalarea probelor de snge integral se face n suporturi dedicate - suport tuburi vacutainer, cu respectarea ordinii din tabelul de prelevare. 3. Identificarea probelor de snge integral

a) Identificarea fiec rei probe de snge integral se realizeaz cu ajutorul num rului de crotalie a animalului de la care se prelev proba, num r care se reg se te i n tabelul nominal anexat la nota de nso ire a probelor. Pentru u urin , num rul de pe tubul de prelevare poate fi cel atribuit num rului curent din tabelul nominal anexat la nota de nso ire a probelor. b) La nota de nso ire se nscriu att data, ct i ora prelev rii, pentru a se putea adopta o tehnic adecvat de extrac ie a ADN-ului genomic. 4. Transportul probelor de snge integral a) Transportul probelor de snge integral la laborator se face ntr-un timp ct mai scurt, pentru a fi posibil extrac ia n condi ii optime a ADN-ului genomic, la temperaturi de refrigerare. b) Dup prelevare, probele se p streaz n condi ii de refrigerare, la o temperatur cuprins ntre 2-8C, pentru maximum 12 ore pn la procesarea acestora. Acest interval cuprinde inclusiv timpul necesar pentru transportul probelor c tre laborator. c) Dac intervalul de timp este mai mare de 12 ore, probele se p streaz la temperaturi de congelare, pn la procesarea acestora, inclusiv intervalul de timp necesar pentru transportul probelor c tre laborator.

C. Probe de supernatant/omogenat 1. Prelevarea probelor Probele de supernatant/omogenat provenite din incinta de nalt biosecuritate se prelev n conformitate cu normele specifice de biosecuritate. Prelevarea se va face n hota cu flux laminar clasa II. 2. Ambalarea probelor a) Probele de supernatant/omogenat provenite din incinta de nalt biosecuritate se ambaleaz respectndu-se normele specifice de biosecuritate. b) Tuburile Eppendorf de 1,5 ml se ambaleaz ntr-o cutie special , prev zut cu capac i cu orificii de scurgere. c) Att tuburile, ct i cutia de transport de tip biohazard sunt sigilate cu parafilm. 3. Identificarea probelor Identificarea probelor se face pe baza notei interne, care este o nregistrare specific fiec rui serviciu.

4. Transportul probelor Probele de supernatant/omogenat provenite din incinta de nalt biosecuritate se transport respectnu-se normele de biosecuritate care se impun.

D. Probe de culturi bacteriene sau virale 1. Prelevarea probelor Culturile bacteriene sau virale se prelev n tuburi Eppendorf de 1,5 ml sterile, n hot cu flux laminar clasa II. 2. Ambalarea probelor Ambalarea tuburilor cu probe se face n suporturi dedicate, prev zute cu capac. Cutia n care se introduce suportul dedicat se sigileaz cu parafilm. 3. Identificarea probelor Identificarea probelor se face pe baza numerelor ce se reg sesc i n nota de nso ire a probei, care poate fi i not intern , atunci cnd probele provin de la alte unit i func ionale ale laboratorului. 4. Transportul probelor a) Culturile bacteriene aflate n faza exponen ial de cre tere, provenite din acela i laborator, nu necesit condi ii speciale de transport, cu condi ia prelucr rii imediate, conform procedurilor specifice. b) Dac probele nu sunt prelucrate imediat, culturile bacteriene se transport n condi ii de refrigerare sau congelare, n glicerol ori liofilizate, n recipiente biosecurizate. c) Probele reprezentnd culturi virale se transport c tre laborator n recipiente biosecurizate, refrigerate sau pe ghea uscat , n situa ia n care perioada de timp dintre momentul recolt rii i cel al sosirii n laborator nu dep e te 4-5 ore, ori se conserv /transport la o temperatur de congelare, dac intervalul de timp dep e te aceast perioad .

E. Probe de acizi nucleici - ARN i ADN 1. Prelevarea probelor a) Extrac ia acizilor nucleici se face conform procedurilor specifice. Se recomand ca tamponul de elu ie ARN s fie reprezentat de tamponul TE, 10mM Tris-Cl, 1mM EDTA, pH 8.0.

b) Pentru situa iile n care timpul necesar transportului la laborator nu dep e te 12 ore, se poate folosi ca agent de elu ie apa ultrapur . 2. Ambalarea probelor Probele de acizi nucleici se ambaleaz individual, n tuburi Eppendorf de 1,5/0,5 ml, certificate ca fiind libere de contaminan i, libere de enzime cu ac iune asupra acizilor nucleici. Se asigur etan eitatea prin sigilare cu parafilm. 3. Identificarea probelor Identificarea probelor se realizeaz prin num rul de pe tubul Eppendorf n care se g sesc acizii nucleici, care este similar cu num rul curent din tabelul nominal anexat la nota de nso ire a probelor. 4. Transportul probelor a) Transportul probelor la laborator trebuie s se fac ntr-un timp ct mai scurt posibil, pentru a limita degradarea excesiv a acizilor nucleici, n special a ARN-ului. b) n cazul n care timpul necesar transportului este mai mic de 6 ore, probele pot fi trimise n condi ii de refrigerare, dar dup aceast perioad se recomand ca probele s fie trimise n condi ii de congelare.

F. Probe de produ i de amplificare, ampliconi 1. Prelevarea probelor a) Prin termenul amplicon se n elege produsul reac iei de amplificare PCR clasic. b) Se prelev 50 l amplicon i se transfer n tuburi Eppendorf sterile de 0,2 ml sau de 0,5 ml. 2. Ambalarea probelor Probele reprezentnd ampliconi sunt ambalate individual, n tuburi Eppendorf de 0,5/0,2 ml, tuburi certificate ca fiind libere de contaminan i, libere de enzime cu ac iune aupra acizilor nucleici. Se asigur etan eitatea prin sigilare cu parafilm. 3. Identificarea probelor Identificarea probelor se realizeaz prin num rul de pe tubul Eppendorf care este similar cu num rul curent din tabelul anexat la nota de nso ire a probelor. 4. Transportul probelor

a) Transportul probelor la laborator se efectueaz ntr-un timp ct mai scurt posibil, pentru a limita degradarea excesiv a ampliconului. b) n cazul n care timpul necesar transportului nu dep e te 24 de ore, probele pot fi trimise spre analiz n condi ii de refrigerare; dup aceast perioad , se recomand ca probele s fie trimise n condi ii de congelare. c) Dac probele sunt trimise pentru secven iere, acestea sunt transportate la ntuneric.

G. Examene pentru organisme modificate genetic 1. Prelevarea probelor a) Probele pentru examene destinate organismelor modificate genetic sunt prelevate conform metodologiilor aprobate de Autoritatea Na ional Sanitar Veterinar i pentru Siguran a Alimentelor. b) Probele sunt prelevate n duplicat, una reprezentnd proba, iar cealalt , contraproba. Aceste probe vor fi sigilate separat. 2. Ambalarea probelor Probele destinate examin rii pentru organismele modificate genetic sunt ambalate n saci de plastic sau n alte tipuri de ambalaje, conform metodologiilor aprobate de Autoritatea Na ional Sanitar Veterinar i pentru Siguran a Alimentelor. 3. Identificarea probelor a) Probele destinate examin rii pentru organismele modificate genetic sunt nso ite de procesverbal de prelevare, n care se specific : data recolt rii, date despre lotul din care provine/provin proba/probele, cantitatea, identificarea operatorului economic, identificarea reprezentantului legal al operatorului economic, num rul sigiliului pentru proba/probele expediat /expediate, contraproba i num rul de sigiliu al acesteia. b) De asemenea, probele sunt nso ite i de cererea de analiz , care cuprinde: expeditorul, informa ii privind expedierea, destinatarul, informa ii privind proba, denumirea i tipul produsului, tratamentele fitosanitare efectuate, originea probei, codul de prelevare, natura probei, analizele solicitate, numele proprietarului, semn tura expeditorului, tampila unit ii, returnarea, numele i prenumele inspectorului. c) Identificarea probelor se ob ine pe baza numerelor de sigiliu. 4. Transportul probelor

a) Transportul probelor la laborator se realizeaz conform metodologiilor aprobate de Autoritatea Na ional Sanitar Veterinar i pentru Siguran a Alimentelor. b) Produsele perisabile sunt refrigerate.

CAP. V Probe destinate examenelor biochimice

A. Prelevarea probelor Pentru prelevarea probelor destinate analizelor biochimice se utilizeaz instrumentar i recipiente confec ionate din materiale care, n contact cu probele, nu trebuie s intre n combina ii chimice. 1. Prelevarea probelor de snge a) Probele de snge se prelev prin punc ionarea marilor vene, dup o prealabil preg tire a locului de elec ie. b) Se recomand ca prelevarea probelor de snge s se realizeze nainte ca animalul s i consume ra ia alimentar . c) Timpul scurs de la executarea stazei pn la prelevare este de cel mult dou minute, deoarece se produc hemoliz i o hemoconcentra ie progresiv . d) Cnd sngele se prelev n sering , nainte de golirea acesteia n tubul de centrifug sau n eprubet , se scoate acul, pentru a se evita hemoliza sngelui for at s treac prin ac, con inutul seringii fiind u or golit pe peretele tubului. e) Tot pentru a evita hemoliza, sngele este prelevat n eprubete de unic folosin . f) Se las probele de snge s coaguleze la o temperatur de 20-25C cel pu in o or , se decoleaz , se centrifugheaz la 3.000 rota ii/min. timp de 3-5 minute i se prelev serul. g) Este recomandabil s se efectueze ct mai curnd separarea plasmei, respectiv a serului, dup exprimare, pentru a se preveni hemoliza. h) Plasma, respectiv hemoserul, se preteaz la depozitare, chiar n condi iile refriger rii; imediat dup prelevare, tuburile cu snge sunt inute n pozi ie nclinat , n unghi de aproximativ 45; pentru p strarea integrit ii probelor, serul se ine p strat la frigider pn n momentul examin rii acestora. 2. Prelevarea probelor de urin

a) Prelevarea probelor de urin se recomand a se realiza prin metode care s nu permit contaminarea probelor cu secre ii, celule sau alte substan e existente pe c ile urinare. b) Este de preferat a se utiliza cateterismul vezical.

B. Ambalarea probelor 1. Pentru evitarea contamin rii probelor se utilizeaz tuburi sau fiole de unic folosin , cu dop etan . n niciun caz nu se folosesc eprubete cu dopuri de vat sau tifon. 2. Recipientele trebuie s fie nchise ermetic pentru reducerea riscului evapor rii sau contamin rii probelor.

C. Identificarea probelor 1. Sngele este individualizat prin etichetarea tubului. 2. Probele sunt identificate cu numerele care se reg sesc i pe nota de nso ire a probelor i n tabelul nso itor.

D. Transportul probelor 1. Probele sunt transportate la laborator n cel mai scurt timp. n general, nu exist restric ii speciale n aceast privin . 2. Refrigerarea probelor n timpul transportului confer o mai bun conservare a probelor de snge integral, mai ales a propriet ilor biochimice, deoarece exprimarea serului i retrac ia coagulului sunt dificil de realizat. 3. Transportul probelor de urin la laborator trebuie s dureze ct mai pu in posibil, pentru a se examina imediat dup prelevare. Dac , totu i, acest lucru nu este posibil, probele se p streaz la frigider n recipiente nchise; sedimentul urinar se examineaz n decurs de dou ore de la prelevare, iar analiza chimic , n decurs de 4 ore, f r a se ad uga vreun conservant. 4. Probele destinate doz rii glucozei serice sunt transportate la laborator n maximum 3 ore de la prelevare, la temperaturi de refrigerare.

CAP. VI

Probe destinate examenelor micologice i micotoxicologice

A. Probele destinate examenelor micologice i micotoxicologice sunt reprezentate de furaje, material patologic prelevat de la animale bolnave sau suspecte de mboln vire i de la cadavre.

B. Defini ii tehnice n sensul prezentei norme sanitare veterinare, termenii de mai jos au urm toarele semnifica ii: 1. partid - cantitatea de nutre combinat preparat dup aceea i re et , cu indici asem n tori i care reprezint obiectul unei singure livr ri; 2. lot - partea determinat dintr-o partid care nu dep e te 100 tone i care are caracteristici presupuse uniforme i permite verificarea calit ii; 3. prob elementar primar - cantitatea de furaj combinat luat dintr-un singur loc al lotului i o singur dat ; 4. prob global brut - proba realizat prin reunirea probelor elementare; 5. prob omogenizat - proba global asupra c reia s-a aplicat opera iunea de omogenizare; 6. prob final de laborator - cantitatea de furaj ob inut prin reducerea probei omogenizate i destinat examenului de laborator.

C. Prelevarea probelor elementare 1. Pentru prelevarea probelor elementare i formarea probelor de laborator din furaje se folosesc sonde i instrumente de tipul: sond cilindric , sond conic , sond special pentru saci, sond pentru produse n mi care, sond electromecanic , divizor - omogenizator, rigl n cruce pentru formarea probei de laborator. 2. Pentru prelevarea probelor de la animale se folose te trusa de necropsie. Aparatura trebuie s fie curat , neinfestat , uscat i lipsit de mirosuri str ine. 3. Num rul minim de probe elementare este 7, iar proba elementar trebuie s aib masa de minimum 0,1 kg. 4. Prelevarea probelor elementare din saci

a) Din loturile formate din maximum 100 de saci se prelev probe elementare din 5 saci ale i la ntmplare. b) Din loturile formate din mai mult de 100 de saci se prelev probe elementare din 5% din num rul sacilor, la calculul propor iei de 5% rezultatul rotunjindu-se la un num r ntreg. c) Din sacii deschi i, proba se extrage cu sonda cilindric pe diagonal , pe ntreaga lungime a sacului. n cazul folosirii sondei conice, se iau 3 probe, dup cum urmeaz : din stratul superior, respectiv la 25 cm adncime, din stratul mijlociu i din cel de la baz . d) Din sacii nchi i, proba se extrage cu sonda special pentru saci, str pungndu-se sacul n dou locuri diferite. e) Procedura de prelevare este urm toarea: sonda se introduce ncet n sac sub un unghi de circa 30 fa de orizontal , cu orificiul n jos, pn se atinge centrul sacului, se rote te apoi cu 180 i se trage cu o vitez descrescnd . Dac sonda se introduce cu orificiul pn la latura opus sacului, aceasta trebuie retras cu o vitez constant , agitnd-o u or. 5. Prelevarea probelor elementare din vrac a) Prelevarea probelor elementare din vagoane sau autocamioane (i) Partida de examinat se mparte n loturi de cte maximum 100 tone, reprezentnd nc rc tura unui num r ntreg de vehicule. (ii) Probele elementare se prelev apoi din fiecare vehicul, cu sonda cilindric sau conic , din mai multe puncte de sondare al c ror num r i a c ror distribu ie sunt n func ie de capacitatea vehiculului: din vehicule pn la 5 tone - din 3 puncte de sondare, din vehicule de la 5 pn la 15 tone - din 5 puncte de sondare, din vehicule de la 15 pn la 30 tone - din 8 puncte de sondare, din vehicule peste 30 tone - din 11 puncte de sondare. (iii) Punctele marginale de sondare sunt la 50 cm de laturi. (iv) n cazul folosirii sondei conice, din fiecare punct de sondare se prelev 3 probe: din stratul superior, respectiv la 25 cm adncime, din stratul mijlociu i din cel de la baz . (v) Dac tipul de vehicul nu permite ca probele s fie extrase conform celor de mai sus, se procedeaz ca la pct. (iv). b) Prelevarea probelor elementare din vase plutitoare i depozite (i) Probele elementare din vase plutitoare i depozite se extrag cu sonda cilindric sau cu sonda conic prelungit cu bare filetate la capete, dac n l imea stratului de rot dep e te lungimea sondei. (ii) Suprafa a partidei se niveleaz i se delimiteaz n loturi de pn la 100 tone.

(iii) Punctele marginale de sondare sunt la 50 cm de laturi. (iv) n plan orizontal, punctele de sondare se plaseaz la distan a de 2 m. (v) n plan vertical, num rul punctelor de sondare va fi n func ie de grosimea stratului: dac stratul are grosimea sub 3 m, se iau dou rnduri de probe, iar dac stratul are grosimea peste 3 m, se iau 3 rnduri de probe. 6. Prelevarea probelor elementare din celule de siloz a) Probele elementare se prelev cu sonda electromecanic introdus perpendicular spre partea inferioar a celulei, cantitatea de rot din fiecare bar considerndu-se o prob elementar . b) Sond rile celulelor de siloz se fac prin fiecare dintre gurile de nc rcare. c) Din furajele fibroase presate se desfac la ntmplare, n cazul loturilor pn la 10 tone, 3% din num rul baloturilor, dar nu mai pu in de dou baloturi, iar n cazul loturilor peste 10 tone, 1% din num rul baloturilor, dar cel pu in 6 baloturi. d) Din interiorul fiec rui balot desf cut se extrag probe par iale din diferite straturi i locuri, n cantit i suficiente pentru ob inerea unei probe globale de cel pu in 4 kg, din care apoi, prin metoda sferturilor, se separ proba final . 7. Prelevarea probelor elementare de rot n timpul desc rc rii Pentru produsele n mi care, probele elementare se extrag cu sonda, pe ntreaga sec iune a materialului i la intervale de timp depinznd de viteza de curgere, astfel nct masa total a probelor elementare extrase dintr-un lot de 100 tone s fie de 50 kg, respectiv redus propor ional la loturile mai mici de 100 tone. 8. Prelevarea probelor elementare de fn i grosiere a) Probele elementare de fn i materii furajere grosiere se prelev din ira de fn, prin smulgere, cu mna sau cu crlig special, din 12-14 locuri diferite, probele par iale se amestec , iar din amestec se prelev proba de lucru. b) Din furajele fibroase presate se desfac la ntmplare, n cazul loturilor pn la 10 tone, 3% din num rul baloturilor, dar nu mai pu in de dou baloturi, iar n cazul loturilor peste 10 tone, 1% din num rul baloturilor, dar cel pu in 6 baloturi. c) Din interiorul fiec rui balot desf cut se extrag probe par iale, din diferite straturi i locuri, n cantit i suficiente pentru ob inerea unei probe globale de cel pu in 4 kg, din care apoi, prin metoda sferturilor, se separ proba final .

d) Proba se examineaz cu aten ie i dac se constat prezen a unor cantit i mai mari de corpuri str ine, p mnt, p r i lignifiante, excremente, acestea se adun i se cnt resc separat. Proba astfel cur at se cnt re te i se mpacheteaz . 9. Prelevarea probelor elementare de nutre verde a) Probele elementare din nutre uri verzi se prelev din culturi, prin cosirea unei suprafe e de circa 1 mp, din mai multe locuri, apoi se amestec i se prelev proba de lucru. b) Probele se prelev la 2-3 ore de la r s ritul soarelui i nu pe vreme umed .

D. Formarea probei globale 1. Este nevoie de o singur prob global pentru fiecare lot, prob care nu trebuie s fie mai mic de: a) 4 kg pentru furaje ambalate vrac, furaje n ambalaje mai mari de 1 kg i furaje brichetate care cnt resc fiecare mai mult de 1 kg; b) greutatea a 4 ambalaje originale pentru furaje n ambalaje care nu dep esc 1 kg. 2. Num rul minim de probe globale prelevate din fiecare lot variaz n func ie de m rimea lotului, conform urm torului tabel: *T*

M rimea lotului

Num rul minim de probe

globale/lot

1.

<1t

2.

1-10 t

3.

10-40 t

4.

> 40 t

M rimea lotului n nr. de ambalaje

1.

1-16

2.

17-200

3.

201-800

4.

> 800

*ST*

3. Greutatea total a probelor elementare care alc tuiesc fiecare prob global nu trebuie s fie mai mic de 4 kg.

E. Formarea probei omogenizate 1. Probele elementare ale unui lot se amestec formnd proba omogenizat . Omogenizarea se ob ine cu ajutorul unui divizor-omogenizator, iar n lipsa acestuia se recurge la metoda sferturilor. 2. Dac la sondare se constat c unele por iuni ale lotului prezint semne de degradare, probele elementare respective nu se amestec cu cele scoase din por iunile s n toase i se prelucrez separat. Se noteaz lotul din care au fost extrase.

F. Prepararea probelor finale (de laborator)

1. Din proba omogenizat se prepar 3 probe identice pentru examene de laborator de minimum 500 g, fiecare cu ajutorul unui divizor omogenizator sau prin reducerea succesiv prin metoda dilu iilor. 2. Una dintre probe se expediaz la laborator pentru analiz , cealalt se p streaz n condi ii corespunz toare la ntreprinderea produc toare, n cadrul termenului de garan ie, o alt prob identic r mne la medicul veterinar care a prelevat proba. Ultimele dou probe constituie contraprobe, dac au fost prelevate n prezen a ambelor p r i interesate.

G. Ambalarea i marcarea probelor 1. Probele care se trimit la laborator se ambaleaz n pungi de hrtie sau de material plastic, n cutii ori borcane cu dop rodat i apoi sunt puse ntr-un container corespunz tor, pentru a se evita orice schimbare de compozi ie, contaminare sau alterare, care poate ap rea n timpul transportului sau al stoc rii. 2. Pentru a se evita degradarea etichetei, se interzice introducerea acesteia n interiorul ambalajului. 3. Probele din loturile care prezint semne de degradare se expediaz separat, cu men ionarea semnelor de degradare respective. 4. Containerele sunt sigilate i etichetate, iar eticheta este ncorporat n ntregime n sigiliu, astfel nct s nu poat fi deschise f r a se distruge sigiliul. 5. Se p streaz o nregistrare a fiec rei prelev ri de probe, care s permit o identificare lipsit de orice ambiguitate a fiec rui lot e antionat. 6. Pentru fiecare prelevare de probe se ncheie un procesverbal n care se vor men iona: a) data recolt rii; b) denumirea furajului i a unit ii care expediaz proba; c) modul de depozitare i de ambalare; d) cantitatea existent ; e) aspectele organoleptice; f) modul de prelevare i numele persoanei care a executat-o; g) motivele care au determinat controlul;

h) destina ia probelor; i) analizele care se solicit ; j) num rul de sigiliu al probei prelevate; k) contraproba cu num rul de sigiliu. 7. Procesul-verbal se semneaz de c tre persoana care a prelevat probele, de c tre proprietar i de alte persoane prezente n mod oficial la aceast opera iune. 8. Materialul patologic necesar pentru diagnosticul de laborator este variat. n mod obi nuit, se prelev : a) avortonii de la toate speciile de animale - n saci de plastic; b) secre ii cervico-vaginale - cu tampoane sterile sau n eprubete sterile dup toaletarea regiunii vulvare; c) secre ii auriculare, nazale, conjunctivale, exsudat faringian - cu tampoane sterile; d) probe de lapte provenite de la femele cu mamit - n eprubete sterile; f) embrioni ou - pe cofraje de ou ; g) probe de material seminal provenite de la vieri, berbeci sau tauri de reproduc ie; h) limfonoduri de la animalele reac ionate pozitiv sau dubios la tuberculinare; i) tineretul aviar, ovin, bovin, n vrst de 0-30 de zile i tineretul porcin n vrst de 0-60 de zile n pungi de plastic sau n saci de plastic; j) fire de p r, cruste, scuame - n tuburi sterile sau n alte ambalaje sterile; 9. Destina ia probelor a) Probele se expediaz ct mai repede posibil la laboratorul local autorizat, mpreun cu informa iile necesare, n vederea efectu rii analizei. b) Toate probele expediate la laborator sunt nso ite de urm toarele documente: (i) nota de nso ire oficial , n conformitate cu prevederile legisla iei sanitare veterinare n vigoare; (ii) tabelul cu probele prelevate, completat de medicul veterinar oficial abilitat pentru prelevarea, prelucrarea primar , ambalarea i expedierea probelor. 10. Transportul probelor de realizeaz la temperaturi de refrigerare.

CAP. VII Probe destinate examenului bacteriologic

A. Prelevarea i ambalarea probelor 1. Probele care se expediaz c tre laborator n vederea examenului bacteriologic sunt reprezentate de: a) probe prelevate de la animalele vii: secre ii, excre ii, lichide de punc ie, exsudat, snge, urin , fecale, material seminal, lapte, ou i altele; b) animale bolnave, pentru specii de talie mic i mijlocie; i mijlocie;

c) cadavre de animale, pentru specii de talie mic

d) probe prelevate de la cadavre - esuturi, organe, colec ii patologice, secre ii, excre ii i altele; e) furaje, f inuri proteice, nutre uri combinate, zooforturi, aditivi furajeri, premixuri; f) probe de mediu: de euri de incuba ie, a ternut din spa iile de cazare a animalelor, sol, ape reziduale; g) ou embrionate; h) frotiuri; i) tulpini bacteriene. 2. Prelevarea probelor destinate examenului bacteriologic se realizeaz naintea instituirii tratamentului antimicrobian. 3. Probele reprezentate de secre ii sau excre ii se prelev cu ajutorul tampoanelor sterile. 4. Colec iile patologice din cavit ile naturale sau de neoforma ie se prelev prin punc ie cu ajutorul unui ac adaptat la o sering steril . 5. Probele de snge se prelev prin punc ie venoas cu ajutorul unei seringi i al unui ac sau al unui ac i al unui tub de recoltare steril, utilizndu-se un anticoagulant (EDTA, heparin ). 6. Prelevarea probelor de fecale se efectueaz fie direct din rect sau cloac cu ajutorul tampoanelor sterile, fie prin prelevarea ntr-un recipient steril a unei cantit i de aproximativ 15-20 g de fecale.

7. Prelevarea probelor de urin se poate efectua prin cateterism uretral, adaptnd o sering steril la cateter sau n timpul mic iunii, n recipiente sterile. 8. Probele de lapte se prelev n cantitate de 15-20 ml, n recipiente sterile, ulterior igieniz rii mamelonului i mulgerii primului jet de lapte.

B. Prelevarea i ambalarea probelor prelevate de la cadavre 1. Se recomand ca prelevarea probelor provenite de la cadavre s se fac la ct mai scurt timp dup moarte, pentru a se evita diseminarea florei bacteriene de putrefac ie. 2. Organele destinate examenului bacteriologic se prelev naintea deschiderii tubului digestiv. Se evit contaminarea lor prin contact direct cu alte organe sau cu produse patologice adiacente. 3. Cadavrele animalelor mici i mijlocii se expediaz c tre laborator, de preferat, n totalitate, f r a fi n prealabil deschise. 4. Atunci cnd se trimit la laborator doar organe, acestea sunt ntregi, nesec ionate. 5. n cazul animalelor mari, se prelev i se expediaz c tre laborator fragmente mari de organe, precum: lobi hepatici, lobi pulmonari, ntregi i nesec iona i. 6. Masa gastro-intestinal poate fi prelevat i expediat n totalitate, n cazul animalelor mici sau sub form de fragmente din aceasta, prelevate din zonele cu leziuni, n cazul animalelor mari i mijlocii. Sec ionarea acestor fragmente se face ntre duble ligaturi, pentru a evita rev rsarea con inutului. 7. n cazul animalelor mari, oasele lungi, precum femurul, metacarpul i metatarsul, se trimit nedeschise. 8. Toate probele provenite de la cadavre se ambaleaz separat, n pungi de polietilen bine nchise i apoi n recipiente/containere nchise ermetic, care asigur condi iile de biosecuritate, respectiv evitarea posibilit ii scurgerilor de lichide. 9. Pe exteriorul recipientelor/containerelor se lipesc etichete cu nsemnele de biohazard, cu specifica ia: "Material patologic de origine animal , perisabil i fragil". 10. Necropsierea cadavrelor este contraindicat atunci cnd exist suspiciunea de antrax. n acest caz, se prelev lichide de punc ie cu ajutorul seringilor cu ac, precum i secre ii i excre ii, cu ajutorul tampoanelor sterile. 11. Probele se ambaleaz i se transport n containere nchise ermetic i etichetate cu specifica ia "Material patologic de origine animal cu risc mare de contaminare - ATEN IE ZOONOZ !".

12. n situa ia n care se suspicioneaz bacterioze ce au ca etiologie specii bacteriene anaerobe de exemplu, Clostridium chauvoei - se evit aerarea probelor, prin plasarea acestora n recipiente nchise ermetic i prin transportul ct mai rapid posibil la laborator.

C. Prelevarea i ambalarea probelor de furaje Probele de furaje se prelev ca prob medie de 50-100 g n pungi de polietilen .

D. Prelevarea i ambalarea probelor provenite din mediu Prelevarea probelor provenite din mediu se face n pungi de polietilen sau n recipiente sterile, dup caz.

E. Probele constituind frotiurile destinate examenului bacterioscopic se pot realiza din snge, secre ii, excre ii, fecale, raclat de mucoas , organe, forma iuni nodulare, alte esuturi. Acestea sunt expediate fixate, prin trecerea prin flac r .

F. Probele de tulpini bacteriene destinate identific rii i tipiz rii unor agen i patogeni sunt ns mn ate, de regul , n tuburi cu agar semisolid, incubate timp de 24 ore la temperatura de 37C, dup care sunt expediate pentru examinare. Tulpinile de Salmonella spp. sunt expediate n tuburi cu agar nutritiv nclinat.

G. Identificarea probelor Probele destinate examenului bacteriologic sunt expediate n mod obligatoriu cu o not de nso ire care cuprinde urm toarele date: 1. num rul i felul probelor; 2. specia, vrsta, categoria de produc ie i sexul animalelor de la care provin probele; 3. data recolt rii probelor; 4. provenien a probelor: proprietarul, adresa proprietarului animalelor de la care provin probele; 5. date epidemiologice, clinice, anatomopatologice;

6. date privind ac iunile imunoprofilactice, eventualele tratamente efectuate n efectivele de animale din care provin probele; 7. date referitoare la furajare, cazare, ngrijire i alte informa ii; 8. diagnostic prezumtiv.

H. Transportul probelor 1. Intervalul dintre prelevarea probelor i realizarea examenului bacteriologic trebuie s fie ct mai redus, pentru a p stra condi ia microbiologic ini ial a probelor - supravie uirea bacteriilor infectante i evitarea multiplic rii celor contaminante. 2. Dup prelevare, probele destinate examenului bacteriologic sunt expediate la laborator n cel mai scurt timp posibil din momentul recolt rii sau sunt conservate prin refrigerare ori congelare. 3. Este indicat ca transportul probelor s se fac n containere izoterme, cu ghea .

CAP. VIII Probe destinate examenelor virusologice, serologice, imunologice i hematologice

A. Prelevarea de probe de la animalele vii 1. Prelevarea probelor de snge a) Pentru examene virusologice se utilizeaz sngele integral, iar pentru examenele serologice se utilizeaz snge pe coagul sau ser sanguin, ob inut prin punc ia unui vas de snge profund ori superficial, de dimensiuni adecvate. b) Atunci cnd este necesar decelarea unor anticorpi specifici i/sau cuantificarea lor n dinamic , dup prelevare probele sunt l sate la temperatura camerei pentru exprimarea serului. Ulterior serul este separat de coagul, decantat i chiar centrifugat, dup care este ambalat n mod corespunz tor. c) Serul poate fi congelat, cu excep ia serului provenit de la p s ri. d) Toate aceste manopere vor fi executate ct mai steril posibil. e) Probele de snge pe coagul nu se congeleaz , pentru a se evita hemoliza. 2. Prelevarea probelor de snge pentru examen virusologic

a) Sngele se prelev pe anticoagulant (citrat de sodiu, EDTA), de la animale viremice. Prelevarea se face n tuburi sterile vacumate. b) Dup prelevare, tuburile de recoltare se agit u or pentru omogenizarea con inutului i se refrigereaz (2-8C).Este interzis congelarea. c) Cantitatea minim de snge ce se recolteaz pentru examene virusologice este de 20-50 ml. d) Este recomandat ca transportul probelor c tre laborator s se efectueze n ziua prelev rii, la temperatur de refrigerare. 3. Pentru probele de snge f r anticoagulant a) Din punct de vedere cantitativ, probele de snge trebuie s fie de minimum 7,5 ml, pentru animale mari, i de minimum 1 ml, pentru animale mici i p s ri. b) Din punct de vedere calitativ, probele nu trebuie s con in substan e anticoagulante sau corpi str ini i s nu fie hemolizate ori contaminate. c) Prezentarea probelor se face cu ajutorul eprubetelor de unic folosin , din material plastic sau din sticl , f r aditivi, cu dop, identificate lizibil printr-o numerotare corespunz toare similar cu cea a tabelelor nso itoare. d) n situa iile n care serul nu este exprimat sau probele sunt u or hemolizate, acestea se centrifugheaz 15 minute la 2.000 rota ii pe minut. 4. Prelevarea de probe de snge integral, recoltate pe heparina litiat sau alt substan anticoagulant Probele de snge recoltate n tuburi cu substan anticoagulant sunt prelevate pentru testele de detec ie de -IFN, cu respectarea urm toarelor condi ii: a) probele de snge sunt prelevate de la animale n monovette care con in heparin litiat ca anticoagulant, n volum de aproximativ 7,5 ml, identificate numeric n conformitate cu numerele din tabelul anexat documentelor nso itoare; b) probele de snge sunt prelevate steril, nu trebuie s con in coaguli i nu trebuie s fie hemolizate; c) stimularea probelor de snge integral este efectuat ntro perioad de timp care nu dep e te 12 ore de la momentul recolt rii, pentru a nu se denatura rezultatele, n condi iile n care probele au fost transportate i/sau stocate la o temperatur de 22C ( 5C); d) n cazul n care se are n vedere existen a unui virus limfotrop sau se ncearc izolarea viral din probe de snge, sngele este recoltat pe anticoagulant - heparin , EDTA, citrat de sodiu.

5. Prelevarea de snge pe rondele de hrtie de filtru n cazul recolt rii probelor de snge pe rondele de hrtie de filtru cu reconstituirea ulterioar n laborator a hemoserului, dup prelevare, rondelele se usuc complet la aer, apoi se nchid etan ntrun recipient i se men in la temperatura de 4C. 6. Prelevarea probelor de snge pentru examene hematologice a) Prelevarea probelor de snge pentru scopul propus se face prin punc ionarea marilor vene, dup o prealabil preg tire a locului de elec ie, prin tundere, dezinfec ie cu alcool sau tinctur de iod, de preferin nainte ca animalul s consume ra ia furajer . b) Intervalul de timp de la executarea stazei pn la prelevare nu este mai mare de dou minute, pentru evitarea efectului de hemoconcentra ie progresiv . c) Sngele se preleveaz n eprubete cu substan anticoagulant de tip K(3)EDTA, n eprubete tip vacutainer, dup care se agit u or, pentru omogenizare, prin r sturnarea eprubetei de 3-4 ori. Eprubetele sunt bine nchise, pentru evitarea evapor rii plasmei ce poate determina hemoconcentra ie care poate constitui surs de erori. d) Eprubeta este prev zut cu o etichet pe care se nscriu: (i) num rul probei; (ii) num rul matricol al animalului; (iii) data prelev rii. e) Se completeaz corect nota de nso ire a probelor, care cuprinde urm toarele: specia, categoria de vrst a animalului, starea fiziologic , date clinice. 7. P strarea probelor de snge Probele de snge prelevate n tuburi cu substan e anticoagulante se p streaz la frigider pn n momentul examin rii, la temperatura de 4C, pentru conservarea integrit ii morfologice a elementelor sanguine. 8. Transportul probelor de snge la laborator Probele de snge se transport la laborator la temperatura de refrigerare. Intervalul de timp de la prelevarea sngelui pn n momentul examin rii acestuia nu trebuie s dep easc 24 de ore. 9. Prelevarea probelor de plasm sanguin a) Probele de plasm sanguin se prelev din punct de vedere calitativ astfel nct s nu prezinte urme de contaminare, hemoliz sau hematii n suspensie.

b) Din punct de vedere cantitativ, proba de plasm sanguin trebuie s fie n volum de aproximativ 500-1.000 l. c) Microtuburile de stocare a plasmei stimulate sunt identificate cu num rul probei, n conformitate cu numerele nscrise n tabelul anexat la documentele nso itoare, i cu ini ialele: "N" pentru proba nestimulat , "B" pentru proba stimulat cu PPD bovin i "A" pentru proba stimulat cu PPD aviar i transportate la temperaturi de congelare. 10. Prelevarea probelor de lichid cefalorahidian a) Lichidul cefalorahidian se preleveaz n mod aseptic, folosindu-se ace i seringi sterile, prin punc ia canalului rahidian. ansa de izolare a unor agen i patogeni din acest tip de probe cre te atunci cnd participarea meningean este exprimat prin febr , simptome specifice i pleiocitoz . b) Probele prelevate se transport nchise etan , la temperatura de refrigerare, iar pentru izolare sunt necesare prelucrarea i inocularea ct mai rapid a produsului. c) Este recomandat ca metoda prev zut la lit. a) i b) s fie folosit pentru izolarea agen ilor etiologici ai encefalomielitelor virale. 11. Prelevarea probelor de lapte a) Probele de lapte se preleveaz n tuburi sterile prev zute cu dop etan . Anterior recolt rii, mameloanele sunt sp late, terse i dezinfectate, iar primele jeturi de lapte se elimin , pentru a se reduce riscul contamin rii bacteriene masive. b) Probele de lapte pot fi utilizate n vederea efectu rii examenelor serologice pentru febra aftoas , leucoza enzootic a bovinelor, rinotraheita infec ioas sau diareea viral a bovinelor ori alte boli, n special cu etiologie viral , iar transportul se va efectua la temperatura de refrigerare. 12. Prelevarea probelor de material seminal a) Prelevarea probelor de material seminal se poate realiza din material seminal proasp t, ca atare, sau din materialul seminal condi ionat n paiete, caz n care la laborator se expediaz sub aceast form . Prelevarea probelor de material seminal proasp t se face prin colectarea acestuia cu ajutorul vaginei artificiale. b) Metoda de prelevare descris se utilizeaz pentru izolarea virusului rinotraheitei infec ioase, al diareii virale a bovinelor i al arteritei virale a ecvinelor, precum i pentru alte boli virotice. c) Transportul probelor de material seminal proasp t se realizeaz la temperaturi de refrigerare, iar pentru materialul seminal congelat, condi ionat n paiete, transportul se realizeaz n azot lichid la temperatura de -196C. 13. Prelevarea probelor de secre ii nazale

a) Pentru prelevarea probelor de secre ii nazale n fazele acute de boal , n scopul izol rii de agen i virali, se utilizeaz tampoane sterile din vat sau tifon, care se introduc n cavit ile nazale, executndu-se mi c ri de rota ie i de transla ie, cu o presiune moderat , evitndu-se lezionarea mucoasei. b) Dup prelevare, tamponul se introduce ntr-un tub steril cu mediu de transport i se men ine la temperatur de refrigerare, expediindu-se rapid c tre laborator. c) Aceast metod se preteaz pentru izolarea herpesvirusului rinotraheitei infec ioase a bovinelor, a virusurilor parainfluen ei, a adenovirusurilor, n cazul virusului rinopneumoniei i al arteritei virale a ecvinelor sau al virusurilor influen ei ecvine, precum i pentru al i agen i etiologici virali. d) Tampoanele nazale care con in celulele descuamate de la suprafa a mucoasei nazale pot servi la ob inerea de frotiuri ca atare, pe lame de sticl sau consecutiv centrifug rii, cu depunerea sedimentului celular pe lame, n vederea detec iei de antigen prin imunofluorescen sau prin teste imunocitoenzimatice, dup uscarea la aer i fixarea n aceton a frotiurilor. e) Tehnicile prev zute la lit. a)-d) se utilizeaz pentru diagnosticul rapid al rinotraheitei infec ioase a bovinelor, al rinopneumoniei i al arteritei virale ecvine, cu specificarea c frotiurile ob inute din scurgeri nazale purulente sau hemoragice pot fi fals negative, chiar la animale cu diagnostic pozitiv de boal . 14. Prelevarea probelor de secre ie ocular a) Probele de secre ie ocular se preleveaz cu ajutorul tampoanelor sterile ce se introduc n sacul conjunctival, sub pleoapa superioar i cea inferioar , dup care se imerseaz n mediul de transport. b) Pentru detec ia direct de antigen se execut frotiuri pe lame de sticl , iar pentru izolare de virus se fac inocul ri. c) Metoda prev zut la lit. a) i b) se utilizeaz pentru izolarea virusurilor care se elimin ntr-o anumit faz a bolii pe calea mucoaselor oculo-nazale, precum virusul rinotraheitei infec ioase a bovinelor, adenovirusuri, virusul rinopneumoniei i al arteritei virale a ecvinelor, morbilivirusul maladiei Carre, i se recomand n metodologia de diagnostic al pestei bovine. d) Condi ionarea i transportul tampoanelor prelevate pentru izolarea de virus trebuie s ndeplineasc acelea i cerin e, din punctul de vedere al compozi iei i calit ii mediului de transport i al men inerii lor la o temperatur de refrigerare ntre 2-8C sau de congelare la cel pu in -80C. 15. Prelevarea probelor de secre ii prepu iale i vaginale a) n cazul leziunilor de balanopostit sau vaginit , e antioanele de secre ii prepu iale i vaginale se preleveaz cu ajutorul tampoanelor sterile introduse i men inute un scurt timp n cavit ile respective i imersate ulterior n mediul de transport sau prin lavaj prepu ial cu ser fiziologic steril.

b) n cazul existen ei leziunilor vizibile i circumscrise, se preleveaz secre ii de la nivelul acestora. c) n momentul extragerii tampoanelor din cavit i se evit atingerea acestora de piele. d) Pentru detec ie direct de antigen sau pentru cazurile prev zute la lit. a) i b), se poate recurge la raclajul acestor mucoase i la executarea de frotiuri pe lame de sticl , materialul raclat putndu-se folosi pentru izolare de virus pe suport adecvat. e) Prelevarea de probe din secre iile prepu iale este posibil a fi realizat prin lavajul cavit ii cu o solu ie salin steril , urmat apoi de colectarea acestora. f) Aceste probe pot fi supuse metodelor de izolare a herpesvirusului rinotraheitei infec ioase bovine i a morbilivirusului maladiei Carre. g) Transportul probelor se realizeaz la temperaturi de refrigerare cuprinse ntre 2-8C sau de congelare la cel pu in -80C. 16. Prelevarea probelor de epitelii cutanate sau ale mucoaselor a) Prelevarea probelor de epitelii se adreseaz aproape n exclusivitate diagnosticului n bolile veziculoase, precum febra aftoas , boala veziculoas a porcului i stomatita veziculoas . b) Prelevarea i prelucrarea acestei categorii de probe se fac cu ajutorul truselor ce con in materialele necesare, iar ambalarea i expedierea acestora se fac n condi ii speciale, conform prevederilor legale referitoare la bolile veziculoase ale animalelor, cuprinse n Ordinul pre edintelui Autorit ii Na ionale Sanitare Veterinare i pentru Siguran a Alimentelor nr. 113/2007 pentru aprobarea Normei sanitare veterinare privind m surile pentru combaterea febrei aftoase. c) Proba ideal prelevat de la orice specie afectat de boli veziculoase este cea de epiteliu al aftelor recent sparte sau proba de lichid din afte nedeschise, extras cu seringa, dup care se preleveaz cu o forfecu lamboul epitelial al respectivei afte, n cantitate de cel pu in 1-2 g pentru fiecare prob . d) Aceste fragmente de epiteliu se preleveaz din zonele predilect afectate, de la speciile susceptibile, n special din zona bucal i peribucal , din zona podal , iar de la femele este posibil i din zona mamar . e) Prelevarea probelor de epiteliu cutanat n alte cazuri dect cel de suspiciune a bolilor veziculoase se poate realiza prin biopsie cutanat , cnd, sub anestezia local , se preleveaz o zon de epiderm de form eliptic , care va cuprinde zona cu leziuni i zona adiacent nemodificat . f) Probele se ambaleaz corespunz tor i se pot utiliza pentru izolare de virus sau pentru examene electrono-microscopice. g) Metoda este recomandat pentru decelarea unor poxvirusuri, agen i cauzali ai variolei bovine sau dermatitei infec ioase a taurinelor.

h) Pentru diagnosticul ectimei contagioase se preleveaz prin raclaj cruste bucale sau peribucale. i) Diagnosticul parvovirusului canin la animalele afectate de episoade diareice se realizeaz prin imunodetec ia de antigen pe frotiuri ob inute din raclajul fe ei dorsale a limbii. j) Transportul probelor se realizeaz la temperaturi de refrigerare cuprinse ntre 2-8C, sau de congelare la cel pu in -80C. 17. Prelevarea probelor de secre ii bucofaringoesofagiene a) Prelevarea probelor de secre ii i epiteliu faringoesofagian este o metod alternativ recolt rii probelor de epitelii i lichide veziculare n suspiciunile de boli veziculoase, atunci cnd animalele sunt ntr-o faz avansat a bolii sau cnd evolu ia este subclinic . b) Aceast metod de prelevare, denumit probang, presupune utilizarea pentru bovine i ovine a unei chiurete speciale, n vederea racl rii mucoasei bucofaringiene, iar pentru porcine utilizarea unor tampoane faringiene. c) Prelucrarea probelor se realizeaz conform instruc iunilor i cu ajutorul truselor speciale pentru prelevare, iar ambalarea i expedierea probelor la laborator se realizeaz conform prevederilor legale cu privire la bolile veziculoase. d) Transportul probelor se realizeaz la temperaturi de refrigerare cuprinse ntre 2-8C sau de congelare la temperaturi de cel pu in -80C. 18. Prelevarea probelor de fecale a) Fecalele servesc ca material patologic pentru izolarea sau detec ia de antigen n cazul enterovirusurilor, adenovirusurilor, parvovirusurilor, coronavirusurilor, rotavirusurilor n diagnosticul suspiciunilor de influen aviar i pentru alte boli. b) Se preleveaz o cantitate mai mare de fecale eliminate recent, fie cu ajutorul unui instrument de prelevare, n recipiente sterile prev zute cu dop, fie cu ajutorul unor tampoane rectale sau cloacale, n cazul prelev rii de probe de la p s ri. c) Aceste tampoane se introduc dup prelevare n tuburi sterile. d) Tampoanele se transport la laborator uscate sau imersate n mediul de transport specific.

B. Prelevarea de probe de la cadavre de animale 1. Prelevarea de probe de la animale moarte sau t iate n scop de diagnostic se realizeaz consecutiv efectu rii examenului necropsic i const n prelevarea de organe interne,

parenchimatoase sau cavitare, secre ii ori excre ii, att de la animale tinere sau adulte, ct i de la avortoni. 2. Este necesar cunoa terea patogenezei virozelor suspicionate, deoarece organul afectat lezional nu este ntotdeauna locul predilect al replic rii virale, de exemplu formele nervoase de rinopneumonie ecvin , n care herpesvirusul ecvin 1 nu poate fi izolat din creier ci din ficat, pulmon i timus, iar de la animalele n via din leucocitele circulante. 3. Pentru stabilirea unui diagnostic etiologic cert este necesar uneori i expedierea de probe corespunz toare prelevate de la animale t iate n scop de diagnostic. 4. De la animalele mici, mijlocii i de la categoria tineret a speciilor de animale de talie mare se poate expedia la laborator cadavrul ntreg, iar de la animalele mari se trimit la laborator organe sau fragmente de organe, prelevate ct mai aseptic posibil. 5. Prelevarea probelor trebuie realizat ct de repede posibil, naintea invad rii cadavrului de c tre germenii saprofi i i a apari iei unor modific ri autolitice care ar interfera cu ob inerea unor rezultate corecte la investiga iile ulterioare, de exemplu, pentru izolarea biotipului citopatogen de virus al diareei virale bovine, din probe de intestin i pl ci Peyer sau prin detec ia de antigen prin imunofluorescen pe amprente de sistem nervos central, pentru rabie. 6. n eventualitatea realiz rii unui diagnostic complex de laborator - virusologic, bacteriologic i toxicologic - sunt trimise cantit i suficiente din fiecare categorie de probe. 7. Diagnosticul n bolile virale presupune uneori i decelarea prin tehnici histopatologice a leziunilor tipice, a unor incluzii specifice produse de virusul rabiei, al variolei ori de alte virusuri. 8. Pentru unele boli este necesar s se expedieze la laborator animale muribunde, iar pentru alte boli, cum ar fi cazul unor viroze enterice, rotaviroza i gastroenterita transmisibil a purceilor, trebuie trimise la laborator animale clinic s n toase din focare de boal . 9. Probele prelevate de la animale moarte sunt ambalate corespunz tor n recipiente etan e sau n saci dubli de plastic, ntre care se introduce vat sau rumegu de lemn mbibat cu substan e dezinfectante. 10. Este necesar men inerea probelor la temperatura de refrigerare pe durata transportului, n special pe durata anotimpului c lduros. 11. Organele sau probele de organe se preleveaz cu ajutorul unor instrumente adecvate i utilizate numai n acest scop, precum bisturie, cu ite, foarfeci de diferite dimensiuni, cle ti, d l i, fier straie. 12. Prosectorul, persoana care preleveaz probele i ajutoarele acestuia trebuie s fie echipate n mod corespunz tor cu echipament de protec ie.

13. n func ie de scopul urm rit, de boala suspicionat i de talia animalului se trimit la laborator organe ntregi sau por iuni de organe parenchimatoase - ficat, splin , rinichi, pulmon i saci aerieni, miocard - organe cavitare - stomac, vezic urinar , intestin, n special intestin sub ire. 14. Organele prelevate sunt nso ite ntotdeauna de esutul limforeticular aferent, al turi de tonsile sau bursa Fabricius, pulmon cu limfonodurile bronhice, intestin cu lan ul limfonodal mezenteric. 15. De la animale tinere sau de la avortoni se preleveaz i timusul.

16. n cazul expedierii la laborator a unor fragmente de organ, acestea trebuie s fie reprezentative pentru tipul de leziune existent i s con in zone de esut normal i zone afectate. 17. n cazul suspiciunii de viroze neurotrope, precum rabia, boala lui Aujeszky sau encefalite virale, trebuie prelevate probe de sistem nervos central, tot creierul la animale de talie mic i fragmente sau jum tate de emisfer cerebral de la animale mari, cuprinznd bulb, corn Ammon, pentru detec ie de antigen, izolare de virus, bioprob pe animale de laborator. 18. n cazul detec iei de antigen prin imunofluorescen pe amprente din material patologic primar pentru diagnosticul rabiei, ntre moartea animalului i prelevarea creierului nu trebuie s treac mai mult de 12 ore vara i 24 de ore iarna. 19. Dac durata este mai mare de 24 de ore, proba/cadavrul trebuie congelat /congelat. 20. Prelevarea lichidelor organice, precum transsudatele i exudatele din cavit ile virtuale ale organismului - cavitatea pleural , pericardic i peritoneal -, se realizeaz pentru izolare de virus sau examene serologice. Acestea se preleveaz de la avortoni ori de la animale tinere sau adulte. 21. n cazul n care nu se expediaz cadavrul n ntregime sau organele respective n conexiunile anatomice normale, aceste lichide se pot preleva separat i se introduc apoi n recipiente sterile i etan e. 22. n caz de suspiciune de pest porcin clasic , pentru efectuarea testelor de detec ie de antigen sau izolare de virus din m duva ro ie hematogen este necesar expedierea sternului animalelor afectate, tonsile, splin , rinichi i limfonoduri limfatice. 23. n caz de avort, pe lng avorton se trimit i fragmente placentare i lichide perifetale. 24. Dup prelevare, probele se individualizeaz cu nscris vizibil ce nu se terge n cursul manipul rilor i sunt supuse unor opera iuni de condi ionare i ambalare, pentru ndeplinirea a dou deziderate majore, i anume: conservarea satisf c toare a materialelor patologice cu men inerea viabilit ii eventualilor agen i virali i excluderea posibilit ilor de contaminare a mediului pe durata transportului c tre laborator. 25. n cursul transportului este necesar men inerea acestor probe la o temperatur optim , precum temperatura de refrigerare, de congelare pe z pad carbonic , uneori fiind posibil i

men inerea acestora pentru o perioad scurt de timp la temperatura mediului ambiant, dar constant , evitndu-se varia iile mari de temperatur , nocive pentru infectivitatea virusurilor sau inadecvate men inerii structurilor ce servesc detec iei prin teste de laborator. 26. Transportul la laborator se efectueaz n condi ii care asigur o temperatur aproape de refrigerare i ct mai rapid posibil, mai ales n cazul virusurilor cu rezisten sc zut n mediu sau al suspicion rii evolu iei unor viroze majore. 27. n cazul virusurilor cu rezisten sc zut n mediu, pe durata transportului c tre laborator probele sunt nso ite de un delegat instruit care r spunde de securitatea acestora, iar probele se transport n recipiente care s asigure condi iile de biosecuritate. 28. Probele de hemoser sunt trimise la laborator n micromixuri acoperite cu dop, care sunt bine fixate n pl cile ELISA, cu num r curent nscris pe fiecare prob , nso ite de tabele de individualizare a probelor, n ordinea prezentat n tabelul de mai jos: *T*

10

11

12

A Pr.1 Pr.9 Pr.17 Pr.25 Pr.33 Pr.41 Pr.49 Pr.57 Pr.65 Pr.73 Pr.81 Pr.89

B Pr.2 Pr.10 Pr.18 Pr.26 Pr.34 Pr.42 Pr.50 Pr.58 Pr.66 Pr.74 Pr.82 Pr.90

C Pr.3 Pr.11 Pr.19 Pr.27 Pr.35 Pr.43 Pr.51 Pr.59 Pr.67 Pr.75 Pr.83 Pr.91

D Pr.4 Pr.12 Pr.20 Pr.28 Pr.36 Pr.44 Pr.52 Pr.60 Pr.68 Pr.76 Pr.84 Pr.92

E Pr.5 Pr.13 Pr.21 Pr.29 Pr.37 Pr.45 Pr.53 Pr.61 Pr.69 Pr.77 Pr.85 Pr.93

F Pr.6 Pr.14 Pr.22 Pr.30 Pr.38 Pr.46 Pr.54 Pr.62 Pr.70 Pr.78 Pr.86 Pr.94

G Pr.7 Pr.15 Pr.23 Pr.31 Pr.39 Pr.47 Pr.55 Pr.63 Pr.71 Pr.79 Pr.87 Pr.95

H Pr.8 Pr.16 Pr.24 Pr.32 Pr.40 Pr.48 Pr.56 Pr.64 Pr.72 Pr.80 Pr.88 Pr.96

*ST*

29. Cantitatea minim de hemoser trebuie s fie de 0,5 mililitri, pentru fiecare afec iune viral . 30. Acesta trebuie s fie limpede, nehemolizat i f r contaminare bacterian . 31. Pentru probele de organe destinate izol rii de virus acestea se transport la temperaturi de congelare.

C. Reguli specifice pentru unele boli 1. Reguli de prelevare, ambalare, identificare i conservare a probelor pentru diagnosticul pestei porcine clasice a) Diagnosticul de laborator al pestei porcine clasice presupune realizarea de investiga ii pe probe prelevate n anumite faze ale bolii i din locuri de elec ie bine definite, respectiv organe sau esuturi provenind de la unul sau mai multe animale afectate i care s corespund calitativ i cantitativ scopurilor cerute. b) Prelevarea probelor se face de c tre medicul veterinar sau de c tre personalul tehnic specializat, sub supravegherea nemijlocit a unui medic veterinar. c) Probele se preleveaz i se manipuleaz cu respectarea obligatorie a m surilor speciale pentru prentmpinarea disemin rii bolii din locul de prelevare.

d) Dup prelevare, probele se individualizeaz cu nscris vizibil, care nu se terge n cursul manipul rilor, i sunt supuse unor opera iuni de condi ionare i ambalare, pentru ndeplinirea a dou deziderate majore, i anume: conservarea satisf c toare a materialelor patologice, cu men inerea viabilit ii eventualilor agen i virali, i excluderea posibilit ilor de contaminare a mediului pe durata transportului c tre laborator. e) n cursul transportului este necesar men inerea acestor probe la o temperatur optim , precum temperatura de refrigerare, uneori fiind posibil i men inerea, pentru o perioad scurt de timp, la temperatura mediului ambiant dar constant , evitndu-se varia iile mari de temperatur , nocive pentru infectivitatea virusurilor sau inadecvate men inerii structurilor care servesc detec iei prin teste de laborator. f) Toate probele sunt expediate cu o not de nso ire completat i semnat de medicul veterinar care a prelevat probele i vizat de direc ia sanitar -veterinar i pentru siguran a alimentelor jude ean , respectiv a municipiului Bucure ti. g) Nota de nso ire trebuie s cuprind urm toarele date: (i) numele i adresa proprietarului animalelor unde a ap rut boala i data expedierii probelor la laborator; (ii) boala suspectat ; (iii) probele trimise, testele solicitate, mediul de transport folosit i data recolt rii probelor; (iv) diferite specii de animale din ferm i numerele de identificare ale acestora; i num rul, vrsta i sexul fiec rui animal afectat, precum

(v) perioada de timp de cnd animalele sunt n ferm sau n gospod rie, iar dac animalele au sosit recent la ferm , locul de provenien sau origine; (vi) data primelor cazuri de mboln vire i a cazurilor sau pierderilor ulterioare; (vii) descrierea r spndirii bolii n efectiv; (viii) num rul animalelor moarte, vrsta, sexul i rasa acestora; (ix) semnele clinice i durata acestora; (x) tipul i standardul fermei agricole, inclusiv tipul de hran disponibil ; (xi) lista i descrierea probelor examinate post-mortem, data examin rii i constat rile notate; (xii) medicamente deja administrate animalelor i data administr rii acestora; (xiii) orice vaccin deja administrat animalelor i data administr rii acestuia.

h) Informa iile cuprinse n nota de nso ire prev zut la lit. f) sunt completate ntr-un proces-verbal ce nso e te nota men ionat ; procesul-verbal este vizat de direc ia sanitar-veterinar i pentru siguran a alimentelor jude ean , respectiv a municipiului Bucure ti. i) n cazul suspiciunii de pest porcin clasic , pentru efectuarea testelor de detec ie de antigen sau izolare de virus este necesar expedierea de snge i a urm toarelor organe: (i) stern de la animale afectate; (ii) tonsile; (iii) splin i rinichi;

(iv) limfonoduri limfatice, precum cele retrofaringiene, parotidiene, mandibulare sau mezenterice; (v) por iunea distal a ileonului. j) Organele sau probele de organe se preleveaz cu ajutorul unor instrumente sterile, utilizate numai n acest scop, precum bisturie, cu it, foarfeci de diferite dimensiuni, cle te, dalt , fier str u; k) Instrumentele folosite la prelevarea probelor pot fi folosite la alt animal numai dup ce au fost sterilizate, pentru a se evita contaminarea acestora cu material viral de la animalul anterior i inducerea de rezultate eronate, n cazul izol rii virusului pe culturi celulare sau efectu rii testelor de biologie molecular ; l) Instrumentele pot fi sterilizate la locul recolt rii, timp de 20 de minute, ntr-un boiler care poate fi nc lzit pe un arz tor alimentat de la o surs de gaz portabil sau folosind o surs local de combustibil; m) Dac nu exist mai multe seturi de instrumente sterile, pot fi utilizate instrumente de sterilizare n etanol 100%. Acele pentru punc ie nu trebuie s se foloseasc de la un animal la altul f r a se sp la i steriliza n prealabil. n) Substan ele dezinfectante nu sunt folosite pe sau lng esuturile care trebuie prelevate, pentru a nu se afecta infectivitatea virusului, necesar n cazul izol rii pe culturi celulare. o) Prosectorul, persoana care preleveaz probe i ajutoarele acestuia trebuie s fie echipate n mod corespunz tor cu echipament de protec ie; p) Echipamentele folosite ntr-o gospod rie sau unitate sunt decontaminate. q) Probele prelevate de la animale moarte sunt ambalate n recipiente etan e sau n saci dubli de plastic, ntre care se introduce vat sau rumegu de lemn mbibat cu substan e dezinfectante. r) Este de preferat s se foloseasc cte o pung pentru fiecare organ, urmnd ca aceasta s fie nchis foarte bine, pentru a se evita scurgerile de lichide.

s) Punga prev zut la lit. r) se plaseaz apoi ntr-o alt pung , iar ntre ele se pune o etichet care s specifice ce organ este transportat, num rul probei i proprietarul. Se atribuie un num r pentru fiecare animal. t) Este recomandabil s se evite ca toate organele de la un animal s se pun ntr-o singur pung , deoarece nc rc tura bacterian difer de la un organ la altul, iar infec iile bacteriene pot perturba ncerc rile de izolare a virusurilor pe culturi celulare, ngreunnd astfel foarte mult testele de diagnostic. ) Toate pungile cu organe prelevate de la animale supuse investiga iilor se pun ulterior ntr-o pung mai mare cu vat . Apoi se transport ct mai repede posibil la laborator, folosindu-se l zi izoterme. u) Pentru examenele virusologice efectuate pentru diagnosticul pestei porcine clasice, sngele poate fi utilizat ca snge integral, snge coagulat sau ser sanguin. Acesta se ob ine prin punc ia unui vas de dimensiuni adecvate, profund sau superficial, confluentul jugular sau auricular . v) n cazul suspiciunii de pest porcin clasic , este de preferat s se foloseasc vacutainere care mpiedic contaminarea probelor. w) Atunci cnd este urm rit decelarea de anticorpi specifici antivirusului pestei porcine clasice, probele sunt l sate la temperatura camerei dup prelevare, pn la coagulare, apoi coagulul este decolat cu o baghet , iar tuburile sunt men inute la temperatura de refrigerare pn exprim serul. x) Sngele coagulat nu trebuie s stea mai mult de dou zile pn la examinare. n aceast perioad serul este separat, decantat i uneori centrifugat, dup care este plasat n tuburi micromix de 1 ml i se congeleaz . Toate aceste manopere sunt efectuate ct mai steril posibil. y) Pentru a se evita hemoliza, probele de snge coagulat nu se congeleaz . 2. Reguli privind transportul probelor pentru diagnosticul pestei porcine clasice a) Transportul probelor la laborator se efectueaz ct mai rapid posibil i n condi ii care asigur o temperatur aproape de refrigerare, prin utilizarea de l zi izoterme ce asigur o izolare bun de mediul nconjur tor, n care se pun pungi de ghea nchise ermetic. b) n cazul n care se urm re te detec ia antigenului viral pestos sau se ncearc izolarea virusului din probe de snge considerat viremic, acesta este recoltat n tuburi cu substan anticoagulant , precum heparin , EDTA sau citrat de sodiu. c) Probele nu se congeleaz , deoarece prin congelare i decongelare se sparg celulele care con in antigene virale i nu mai pot fi folosite pentru diagnosticul prin teste rapide, precum testul de imunofluorescen direct . d) Pe durata transportului c tre laborator, probele sunt nso ite de un delegat instruit care r spunde de securitatea acestora.

e) Transportul se realizeaz n recipiente care asigur condi ii de biosecuritate i evit posibilitatea scurgerilor de lichide din recipiente i diseminarea virusului pestos n mediu. f) n cazul transportului probelor prelucrate primar de la laboratoarele jude ene la Institutul de Diagnostic i S n tate Animal , atunci cnd se recurge la serviciile unor firme specializate de transport, pe exteriorul pachetului sunt lipite etichete cu nsemnele de biohazard, specificndu-se:

"Material patologic animal, perisabil i fragil. A se deschide numai n laborator"

NOTA CTCE --------Reprezentarea grafic a Biohazard, se g se te n Monitorul Oficial al Romniei, Partea I, Nr. 339 din 01.05.2008, la pagina 19, a se vedea imaginea asociat .

3. Reguli de prelevare, prelucrare primar , ambalare, identificare, conservare i transport al probelor pentru diagnosticul rabiei a) Probele destinate examenelor de laborator n cazul suspiciunii de rabie, precum cadavre sau sistem nervos central, sunt ambalate n pungi de plastic, flacoane din plastic sau n cutii speciale, astfel nct s se evite orice scurgeri de lichide i diseminarea virusului. b) Transportul este efectuat n containere etichetate cu men iunea "PROBE BIOLOGICE CU RISC MARE DE CONTAMINARE - ATEN IE RABIE", la temperaturi de refrigerare sau congelare. c) Prospe imea probelor trebuie s se ncadreze ntr-o perioad maxim de 24 de ore n timpul iernii i de 12 ore n timpul verii. d) Proba de sistem nervos central prelevat este refrigerat la temperatura de 2-80C, iar dac au trecut peste 24 de ore de la moartea animalului, proba se congeleaz la temperatura de -8C/-22C. e) Condi iile prev zute la lit. d) exclud examenul histopatologic. f) Dac proba de sistem nervos central nu se poate preleva n timp util, se congeleaz craniul ntreg.

g) Integritatea sistemului nervos central este obligatorie, pentru a putea fi eviden iate structurile anatomice, precum bulbul, cornul lui Ammon, cerebelul i scoar a cerebral . h) Pentru prelevarea i manipularea probelor se aplic m suri stricte de protec ia muncii i de biosecuritate. n acest context, se impune purtarea unui echipament de protec ie individual, la care se adaug masc de unic folosin , ochelari de protec ie, cte dou perechi de m nu i chirurgicale la o singur utilizare. i) Sunt obligatorii dezinfec ia instrumentelor i a mesei de lucru folosite pentru necropsierea cadavrului suspectat i prelevarea probelor, conform normelor n vigoare, precum i sp larea i dezinfec ia minilor operatorului. j) Pe nota de nso ire a probelor prelevate se men ioneaz , cu exactitate, originea animalului, prin precizarea numelui i prenumelui proprietarului, a domiciliului i a telefonului acestuia, modific rile comportamentale sau ale st rii fiziologice a animalului; dac animalul investigat a agresat, a mu cat sau a zgriat diverse persoane, se nscriu datele de identificare i domiciliul acestora. k) Se aplic m suri stricte de transport, n vederea ecaris rii cadavrelor sau a probelor de sistem nervos central, a materialelor consumabile folosite la manipularea probelor, precum i a animalelor de laborator - oareci albi - folosite pentru precizarea diagnosticului. 4. Prelevarea de probe pentru diagnosticul serologic al bolilor endemice Se face n dou etape, probe perechi, pentru determinarea titrului de anticorpi n dinamic i a categoriei de anticorpi, prima serie de probe recoltndu-se n faza acut de boal i seria a doua n faza de convalescen , dup 2-3 s pt mni; uneori, eviden ierea anticorpilor de tip IgM, caracteristici r spunsului imun primar, permite diagnosticul serologic pe o singur prob de ser. 5. Probele de ser sanguin prelevate de la cai i asini destina i exportului sau exportului temporar Se solicit examene de laborator pentru supravegherea anemiei infec ioase ecvine, arteritei virale ecvine, morvei i durinei, care trebuie sigilate cu sigiliu metalic cu num r, iar notele de nso ire i tabelele trebuie s fie vizate i semnate de direc ia sanitar-veterinar i pentru siguran a alimentelor jude ean , respectiv a municipiului Bucure ti. 6. Pentru arterita viral ecvin Pentru efectuarea testului de virusneutralizare trebuie s se respecte urm toarele condi ii: a) probele de snge prelevate sunt n cantitate de 4-5 ml, prelevarea se efectueaz n vacutainere sterile f r anticoagulant, dup care se las la temperatura camerei pentru exprimarea serului; b) serul ob inut (1,5-2 ml) se prelev n condi ii de sterilitate ntr-un tub de plastic steril, nchis etan , pe care se nscriu datele de identificare ale animalului i men iunea "pentru arterita viral ecvin ";

c) tubul este p strat i transportat c tre laboratoarele de analiz , la temperatura de refrigerare; d) probele se trimit nainte cu cel pu in 10 zile lucr toare fa ar . de data de ie ire a animalului din

7. Probele de ser sanguin de pas re destinate examenului serologic n tifoz aviar micoplasmoz se conserv la temperatura de 4-8C i este interzis congelarea.

CAP. IX Probe prelevate de la animale acvatice i insecte utile destinate examin rii de laborator

A. Defini ii n sensul prezentei norme sanitare veterinare, termenii de mai jos au urm toarele semnifica ii: 1. animal acvatic - pe tii, inclusiv icrele sau game ii, molu tele i crustaceele vii din ntreprinderi de acvacultur sau animalele acvatice provenite din mediul s lbatic, n scop de cre tere sau pentru repopulare a mediului acvatic. Nu sunt inclu i amfibienii, reptilele, p s rile i mamiferele acvatice; 2. prob - un num r reprezentativ de exemplare de pe ti sau de alte animale acvatice ori de organe ale acestora, din aceea i specie sau din specii diferite, dar cu aceea i provenien i surs de alimentare cu ap , pentru care se poate efectua un diagnostic complet de laborator.

B. Prelevarea probelor de pe te 1. Materiale necesare prelev rii de probe: a) instrumentar steril: foarfece, pens ; b) tuburi sterile; c) mediu de transport, Eagle MEM/IC65, cu 2% antibiotic i 10% ser fetal; d) pungi din plastic cu sistem de etan eizare, ghea , cutii termoizolante, marker permanent, hrtie absorbant , etichete; e) echipament de protec ie: m nu i, cizme de cauciuc, halat. 2. Prelevarea probelor de pe te pentru diagnosticul bolilor virale

a) Pentru diagnosticul bolilor virale ale pe tilor, n func ie de m rimea pe tilor, se prelev urm toarele probe: (i) alevini i pe ti cu dimensiunea sub 4 cm: pe tele ntreg, f r sacul vitelin, dac este prezent; (ii) pe ti cu dimensiunea de 4-6 cm: toat masa visceral , inclusiv rinichiul i encefalul; (iii) pe ti cu dimensiunea de peste 6 cm: rinichiul, splin, i, dup caz, cordul sau encefalul; (iv) pe ti reproduc tori: se preleveaz lichid ovarian i/sau esut. b) n func ie de statusul clinic, se ndeplinesc urm toarele condi ii: (i) n cazul infec iei clinice, n raport cu m rimea pe telui, se prelev puiet de pe te ntreg sau mas visceral , iar dintre organe, rinichiul anterior, splina i, dup caz, cordul sau encefalul. O prob este format din minimum 10 exemplare de pe te cu semne clinice i/sau modific ri anatomopatologice i este mp r it n dou probe comasate de cte 5 pe ti; (ii) pentru detec ia purt torilor asimptomatici, probele constau n comas ri de cte 5 pe ti sau din organe ale acestora. Probele comasate de lichid ovarian provenite de la 5 reproduc tori nu trebuie s dep easc n volum 5 ml, adic 1 ml/pe te reproduc tor. Num rul de exemplare de pe te prelevat este n conformitate cu prevederile anexei nr. 1 la Norma sanitar veterinar privind planurile de prelevare, metodele de diagnostic, determinarea i confirmarea prezen ei septicemiei hemoragice virale - SHV - i necrozei hematopoetice infec ioase - NHI - la pe ti, aprobat prin Ordinul ministrului agriculturii, alimenta iei i p durilor nr. 471/2002. n ambele cazuri, probele comasate de organe trebuie s con in minimum 0,5 g de esut. 3. Prelevarea probelor de pe te pentru diagnosticul bolilor bacteriene i parazitare n func ie de statusul clinic, se ndeplinesc urm toarele condi ii: (i) n cazul infec iei clinice sau al unei mortalit i anormale, se prelev cel pu in 10 pe ti care prezint semne clinice i anatomopatologie i care se repartizeaz n dou probe comasate de cte 5 pe ti; (ii) n scopul detect rii purt torilor asimptomatici de germeni bacterieni patogeni se preleveaz un num r corespunz tor de exemplare, pentru a se asigura detec ia animalelor bolnave la un nivel de confiden de 95%, cu o prevalen a bolii de 2%, conform tabelului de mai jos: Num rul de exemplare de animale acvatice care trebuie prelevate n func ie de m rimea lotului, pentru a asigura o prevalen de 2%, 5% sau 10% *T*

Nr. M rimea lotului Prevalen crt.

2%,

Prevalen num r de

5%, Prevalen num r de

10%,

num r de exemplare exemplare

exemplare

1.

50

50

35

20

2.

100

75

45

23

3.

250

110

50

25

4.

500

130

55

26

5.

1000

140

55

27

6.

1500

140

55

27

7.

2000

145

60

27

8.

4000

145

60

27

9.

10.000

145

60

27

10.

100.000 sau mai mult

150

60

30

*ST* Dup Ossiander & Wedemeyer, 1973.

(iii) probele sunt constituite din exemplare cu dimensiuni de peste 4 cm. Se constituie probe comasate de 5 pe ti. 4. Prelevarea probelor de molu te bivalve a) Prelevarea probelor pentru diagnosticul bolilor declarabile (i) Prelevarea probelor de molu te se realizeaz conform cu tabelul men ionat la pct. 3, asigurndu-se detec ia agen ilor patogeni la un nivel de confiden de 95%, cu o prevalen de 2%. (ii) Probele se preleveaz de dou ori pe an, prim vara i toamna. (iii) Probele con in molu te bivalve de vrste diferite sau molu te din categoriile de vrst cele mai susceptibile, de preferat exemplare dup reproducere sau molu te tinere. (iv) Pentru fiecare zon sunt selectate mai multe puncte de prelevare, pentru a cre te ansele de detec ie a agen ilor patogeni. (v) n caz de mortalitate anormal , se recolteaz , preferen ial, molu te bivalve cu cochilii deformate, muribunde. (vi) Nu se prelev exemplare de molu te bivalve moarte. b) Prelevarea probelor pentru detectarea contaminan ilor bacterieni i virali (i) Sunt selectate mai multe puncte de prelevare, pentru fiecare zon , pentru a cre te ansele de detec ie a contaminan ilor bacterieni i virali.

a bolii

(ii) Se prelev minimum: 25 de exemplare de stridii/prob , 60 de exemplare de midii/prob , iar pentru alte specii de molu te, un num r suficient de exemplare pentru a realiza o prob de 100-200 g esut de molu te. (iii) Nu se prelev molu te bivalve moarte, muribunde sau cu cochilia spart . c) Prelevarea probelor pentru detectarea biotoxinelor marine (i) Sunt selectate mai multe puncte de prelevare, pentru fiecare zon , pentru a cre te ansele de detectare a biotoxinelor marine. (ii) Se prelev un num r suficient de exemplare de molu te pentru a se ob ine o cantitate de prob de aproximativ 450 g de esut. (iii) Prelevarea probelor de molu te bivalve se poate realiza concomitent pentru diagnosticul bolilor declarabile i pentru monitorizarea contaminan ilor bacterieni i virali, precum i a biotoxinelor marine. 5. Prelevarea probelor de crustacee n func ie de statusul clinic, se ndeplinesc urm toarele condi ii: (i) n cazul infec iei clinice se selecteaz cu aten ie exemplarele cu leziuni anatomopatologice. Se evit prelevarea exemplarelor moarte. Num rul minim de exemplare care trebuie prelevate pentru diagnostic este de 100 pentru stadiul larvar, 50 pentru stadiul postlarvar i, respectiv, 10 pentru exemplarele tinere i adul i; (ii) n scopul detect rii purt torilor asimptomatici se prelev un num r corespunz tor de exemplare, pentru a se asigura detectarea exemplarelor bolnave la un nivel de confiden de 95%, cu o prevalen a bolii de 2%, conform tabelului prev zut la pct. 3. 6. Prelevarea de probe de pe te pentru examen toxicologic a) Pentru efectuarea examenului toxicologic se prelev o cantitate de 1 kg de pe te. b) Probele sunt prelevate n recipiente nchise etan laborator. i se transport n cel mai scurt timp posibil la

c) Dac probele nu pot fi transportate imediat, acestea se congeleaz pn la expediere. d) n cazul unei intoxica ii sau al suspiciunii de intoxica ie, este recomandabil ca probele s fie transmise la laborator n cel mai scurt timp. 7. Prelevarea de probe de ap din bazinele piscicole pentru analize fizico-chimice i toxicologice

a) Probele de ap din bazinele piscicole destinate analizelor fizico-chimice i toxicologice se prelev n recipiente de sticl sau de material plastic, cum ar fi polietilen , PTFE, PVC sau PET, curate, cl tite n prealabil de cteva ori cu proba de analizat. b) Cantitatea prelevat este de minimum 1 litru. c) n cazul n care analiza de laborator nu poate fi efectuat la locul de prelevare, este necesar conservarea probelor, utilizndu-se agen i de conservare. Ace tia se adaug la prob imediat dup prelevare sau, n prealabil, n recipient, nainte de umplere. d) Ad ugarea agen ilor de conservare se face sub form de solu ii relativ concentrate, astfel nct s se foloseasc volume reduse, ceea ce permite s se neglijeze dilu ia produs . e) Tehnicile de conservare a probelor, n func ie de parametrul ce urmeaz a fi determinat, sunt prezentate n tabelul de mai jos: *T*

Nr. crt.

Parametrul

Tehnica de conservare conservare recomandat

Timpul de

1. pH

R cire la 2-5C

6h

2. Azot amoniacal, azota i, azoti i, cloruri, fosfa i R cire la 2-5C 24 h

3. Arsen

Acidulare la pH<1 cu HCl sau HNO(3) 30 de zile

4. Sulfuri

Se realizeaz la prelevare prin ad ugare de acetat de zinc n mediu alcalin 7 zile

5. Cianuri

Ajustare la pH >12 cu NaOH

7 zile

6. Metale: cadmiu, cupru, plumb, zinc

Acidulare la pH< 2 cu HNO(3)

6 luni

7. Pesticide: - organoclorurate - organofosforice R cire la 2-5C 7 zile

8. Substan e organice oxidabile (CCO)

Acidulare la pH<2 cu H(2)SO(4)

6 luni

*ST*

8. Prelevarea probelor de ap pentru analiza biologic a) Pentru analiza biologic a apei, prelevarea probelor se realizeaz de la adncimi de 10-15 cm sub oglinda apei.

b) Pentru analiza cantitativ a fitoplanctonului se prelev o cantitate de 1 litru de ap n recipiente din sticl sau din material plastic. c) Pentru analiza cantitativ a zooplanctonului se prelev un volum de 50-100 litri, prin trecere prin fileul planctonic. Volumul de ap care r mne n paharul fileului planctonic se colecteaz ntr-un recipient ermetic nchis. Se noteaz volumul ini ial care a fost trecut prin fileul planctonic. Fileul planctonic trebuie s fie confec ionat dintr-un material care s permit re inerea organismelor de 60 . d) Probele de ap sunt conservate cu aldehid formic 40%, ce se adaug probei, astfel nct concentra ia final s fie de 2-3%. 9. Ambalarea probelor de animale acvatice a) Pentru diagnosticul bolilor virale ale pe tilor, probele prelevate constnd n pe ti sub 4 cm, viscere, fragmente de organe, lichid ovarian se introduc ntr-un tub steril con innd 4 ml mediu de transport, precum mediul Eagle MEM/IC 65, 2% antibiotic, 10% ser fetal bovin. Tuburile cu probe se plaseaz ntr-un stativ i sunt etichetate pentru trasabilitate. b) Pentru diagnosticul bolilor bacteriene i parazitare ale pe tilor, exemplarele de pe te se ambaleaz n pungi de plastic, cte 5 buc i/pung , dac au greutatea sub 500 g, i individual, dac au greutatea peste 500 g/bucat . Pungile sunt strns legate i etichetate. c) Probele de molu te i de crustacee sunt ambalate pe specii i sunt mpachetate ntr-un material absorbant mbibat n apa din zona de cre tere. Probele se introduc n pungi de plastic i se eticheteaz . d) Probele sunt identificate cu num rul bazinului, specia de pe te sau molu te bivalve, ntreprinderea i locul de procesare, cursul de ap , data, ora i num rul de exemplare prelevate, informa ii ce sunt inserate i n nota de nso ire a probelor la laborator. e) Toate probele de pe te, molu te bivalve i crustacee, precum i probele de ap se introduc n l zi frigorifice al turi de pungi de ghea sau pachete de glicol congelat, pentru a fi transportate la laborator. 10. Transportul probelor de animale acvatice la laborator a) Toate probele de pe te, molu te bivalve i crustacee sunt transportate la un laborator de diagnostic ntr-un interval de 12-24 ore i sunt nso ite de formularul prev zut n anexa nr. 2 la prezenta norm sanitar veterinar . b) Probele de ap prelevate pentru examenul fizico-chimic i/sau toxicologic se transport , n func ie de solicitarea de examen, n perioada men ionat n tabelul prev zut la pct. 7 lit. e).

C. Prelevarea probelor de la insecte utile 1. Defini ii n sensul prezentei norme sanitare veterinare, termenii i expresiile de mai jos au urm toarele semnifica ii: a) albine de acoperire - categoria de albine lucr toare care ndeplinesc func ia de protec ie a puietului depus pe fagure; b) familie de albine/colonie de albine - grupul de indivizi din aceea i specie, care tr iesc mpreun , depind unii de al ii, prezint organizare social proprie i sunt specializa i pentru ndeplinirea unor anumite activit i. Familia de albine este alc tuit din urm toarele categorii de indivizi: matc , albine lucr toare i trntori; c) insecte utile - toate speciile de insecte considerate a fi de importan economic . Din aceast categorie fac parte: speciile de albine melifere, bondarii polenizatori, viermii de m tase i specii de brachicere pentru pescuit, inclusiv stadiile de dezvoltare ale acestora, precum ou le, larvele, nimfele; d) oglinda stupului - suprafa a de teren de 1 mp din fa a urdini ului stupului; e) plan eul stupului - partea inferioar a stupului; f) prelevare - activitatea de recoltare de probe; g) prob - o cantitate definit de material biologic, necesar diagnostic de laborator; i suficient pentru efectuarea unui

h) zon de cules - zona cu o raz de 3-5 km n jurul stupului, unde exist plante melifere. 2. Materiale necesare prelev rii de probe de insecte utile a) echipament apicol de protec ie: salopet din bumbac de culoare alb , masc apicol , preferabil cu inser ie de plas metalic , m nu i i cizme din cauciuc; b) trus entomologic ; c) aspirator apicol pentru prelevare de probe; d) perie apicol ; e) dalt apicol ; f) cu ti Foti - pentru probe de albine vii;

g) recipiente de sticl cu capac perforat, cu capacitate de 150 ml, pentru prelevare de probe de albine vii i de larve de pescuit; h) recipiente din material plastic, de preferat de polietilen , PTFE, PVC, PET, cu posibilitate de nchidere etan , cu capacitate maxim de 800 ml, pentru prelevare de probe de insecte utile i probe asociate acestora pentru examen toxicologic; i) cutii de carton cu dimensiuni de maximum 450 mmx310 mm, optim 150 mmx150mm, cu capac, pentru prelevare de probe de fagure cu con inut; j) pungi din hrtie de 500 g, pentru prelevare de probe de albine moarte; k) pungi de hrtie de 250 g, pentru prelevare de probe de viermi de m tase; l) pungi de plastic cu sistem de etan eizare; m) marker permanent; n) etichete de identificare; o) cutii termoizolante. 3. Prelevarea probelor a) Pelevarea de probe de la speciile de albine din genul API se realizeaz cu ndeplinirea urm toarelor condi ii: (i) pentru supraveghere sanitar-veterinar i, n caz de necesitate, pentru diagnosticul bolilor infec ioase i parazitare la albine, num rul probelor prelevate trebuie s reprezinte cel pu in 5 % din efectivul unei stupine de produc ie i 15% din efectivul unei pepiniere de m tci; (ii) perioadele din an indicate pentru realizarea supravegherii sanitar-veterinare active a familiilor de albine i pentru prelevarea de probe pentru examene de laborator sunt prev zute n urm torul tabel: *T*

BOALA notificat

IAN. FEBR. MAR. APR. MAI IUN. IUL. AUG. SEPT. OCT. NOE. DEC.

Loca american

Loca european

Acarapioza

Varrooza

Nosemoza

Tropilelapsoza

Atacul gndacului

mic de stup

Legenda

Perioada de posibil evolu ie clinic a bolii

Perioada de evolu ie subclinic a bolii

*ST*

(iii) pentru prelevarea probelor de albine se poart n mod obligatoriu echipament de protec ie specific; (iv) probele de albine vii se prelev prin m turare cu peria apicol ori acestea se aspir cu un dispozitiv special de pe rame i de la urdini ; (v) fragmentele de fagure se prelev prin decupare ntre zonele de inser ie metalic ale ramei, cu ajutorul unui bisturiu, dup ndep rtarea albinelor de acoperire; (vi) ramele ntregi cu con inut se extrag din stup i se scutur albinele de pe fagure deasupra stupului deschis; (vii) pentru prelevarea probelor se folose te numai instrumentar steril; (viii) prelevarea se poate realiza concomitent, pentru monitorizarea att a bolilor infec ioase, ct i a celor parazitare. b) Probele prelevate trebuie s fie ntr-o cantitate reprezentativ de material biologic din aceea i specie, astfel: (i) pentru boli bacteriene ale albinelor sau ale puietului se prelev o prob de 25 g albine vii, prelevate de la urdini , sau un fragment de 20 cmp de fagure cu puiet c p cit ori nec p cit, cu modific ri, sau o ram ntreag cu puiet i rezerv de hran ori miere c p cit ; (ii) pentru boli parazitare ale albinelor sau ale puietului se procedeaz astfel: 1. pentru acarapioz se prelev o prob de 15 g de albine vii din stup; 2. pentru nosemoz , amibiaz vii sau moarte de la urdini ; i alte endoparazitoze digestive se prelev o prob de 10 g de albine

3. pentru varrooz se prelev o prob de 25 g de albine vii din stup ori 25 g de albine moarte de pe plan eul stupului ori un fragment de 10/15 cm fagure cu puiet c p cit de trntor sau de albin lucr toare ori o ram ntreag cu puiet c p cit sau detritus de pe plan eul stupului;

4. pentru tropilelapsoz , atacul gndacului mic de stup, galerioz i alte ectoparazitoze ale puietului se prelev o prob de fragment de fagure cu puiet c p cit de 10/15 cmp sau o ram ntreag cu puiet c p cit ori detritusul de pe plan eul stupului; (iii) pentru boli micotice ale albinelor i puietului se prelev o prob de 10 g de albine moarte de la urdini , de pe plan eul i de pe oglinda stupului, sau un fragment de fagure cu puiet c p cit de 10x15 cmp; (iv) pentru boli virale ale albinelor i puietului se prelev o prob de 15 g de albine vii din stup sau un fragment de fagure cu puiet c p cit cu modific ri, de 20 cmp ori 10-15 botci cu modific ri, din fiecare stupin ; (v) pentru examenul toxicologic se prelev o prob de: 1. minimum 150 g de albine muribunde sau moarte de pe oglinda stupului, de la urdini stup; sau 2. o ram ntreag de fagure cu rezerv de hran (nectar, miere c p cit , p stur ); sau 3. minimum 50 g de flori sau minimum 150 g de plante melifere ntregi din zona de cules a familiei; sau 4. minimum 1 litru de ap din sursa de ap a stupinei; sau 5. minimum 100 g sol prelevat din oglinda stupului. c) Prelevarea de probe de la speciile de bondari din genul BOMBUS se realizeaz cu ndeplinirea urm toarelor condi ii: (i) pentru diagnosticul bolilor infec ioase i parazitare ale insectelor utile, probele prelevate reprezint fiecare categorie de indivizi dintr-o familie, dup cum urmeaz : puiet, albine lucr toare, trntori i m tci tinere de iernare; (ii) la prelevarea probelor de bondari se poart echipament de protec ie specific; (iii) probele de bondari vii din stupi se prelev dup congelarea cutiei stupului timp de 12 ore, la temperatura de -20C; (iv) puietul din fagure se prelev cu ajutorul unei pense, dup ndep rtarea albinelor lucr toare; (v) pentru prelevarea probelor se folose te instrumentar steril; (vi) prelevarea se poate realiza concomitent, pentru monitorizarea att a bolilor infec ioase, ct i a celor parazitare de insecte utile. i din

d) Probele prelevate de la speciile de bondari din genul BOMBUS trebuie s fie ntr-o cantitate reprezentativ de material biologic din aceea i specie; prelevarea probelor se realizeaz cu ndeplinirea urm toarelor condi ii: (i) pentru boli virale, bacteriene i micotice ale bondarilor adul i sau ale puietului se prelev o prob de minimum 10 bondari vii din stup sau de minimum 20 larve ori nimfe cu modific ri; (ii) pentru boli parazitare ale bondarilor adul i sau ale puietului se prelev o prob de minimum 10 bondari vii sau mor i din stup ori de minimum 20 de celule cu puiet c p cit; (iii) pentru examen toxicologic se prelev o prob de minimum 150 g de rezerv de hran din sursa de hran a stupului sau de minimum 150 g de bondari muribunzi ori mor i. e) Prelevarea de probe de la speciile de viermi/fluturi de m tase din genurile BOMBYX, PHYLOSAMIA i ANTHERAEA se realizeaz astfel: (i) pentru supraveghere sanitar-veterinar i, n caz de necesitate, pentru diagnosticul bolilor infec ioase i parazitare ale insectelor utile, probele se prelev pe rase i loturi de cre tere, din fiecare spa iu destinat unei etape din tehnologia de cre tere; (ii) pentru prelevarea probelor se folose te instrumentar steril i echipament corespunz tor; (iii) probele trebuie s fie n cantitate reprezentativ de material biologic din aceea i specie, astfel: 1. pentru bolile virale, bacteriene, micotice i parazitare, probele pentru examenele de laborator se constituie din larve vii, un num r de minimum 30-50 de larve mici/prob , pentru vrstele I-III, sau de minimum 15-20 larve mari/prob , pentru vrstele IV-V, ori de minimum 15-20 crisalide, fluturi vii/prob sau din 0,25 g ou /prob ; 2. pentru examenul toxicologic, probele sunt alc tuite din 150 g/prob larve muribunde sau moarte, n diferite stadii de dezvoltare, i/sau 150 g/prob frunz de dud/ricin/stejar. f) Prelevarea de probe de larve de insecte din ordinul Diptera (viermi de pescuit). Proba prelevat pentru bolile virale, bacteriene, micotice i parazitare ale insectelor utile i pentru efectuarea examenului toxicologic, precum i pentru contaminarea radioactiv const n minimum 150 g de larve vii. 4. Ambalarea probelor de insecte utile a) Probele de albine vii se prelev n cu ti "Foti" mini-stupi. n lipsa acestora, se pot folosi recipiente curate, din plastic sau din sticl , acoperite cu capace perforate. n astfel de recipiente se pot preleva i probele de bondari vii. Aceste recipiente se pot ambala n cutii de transport confec ionate din carton, prev zute cu capac perforat i orificii laterale pentru asigurarea unei ventila ii permanente.

b) Probele de albine sau de bondari mor i se prelev n pungi sau n cutii din carton. Acestea se ambaleaz n pungi de plastic, n vederea transport rii n condi ii de siguran la laborator. c) Probele de fagure cu puiet c p cit sau nec p cit ori de faguri cu rezerv de hran se ambaleaz n cutii din carton cu capac. d) Probele de ap se prelev n recipiente de sticl sau de material plastic. n cazul n care analiza nu poate fi f cut la locul de prelevare, este necesar conservarea specific a probelor pentru trimitere la laborator, utilizndu-se agen i de conservare. e) Probele de flor melifer , frunze de dud, ricin, stejar i probele de sol se ambaleaz n pungi de plastic sau n alte tipuri de recipiente nchise etan . f) Probele de ou de viermi de m tase, larve de viermi de m tase ori de fluturi se ambaleaz n pungi de hrtie sau n cutii din carton cu capac perforat, pe substrat de hrtie absorbant . g) Probele de larve pentru pescuit se ambaleaz n recipiente din plastic cu capac perforat, pe suport de material absorbant, precum tala ul. h) Probele prelevate sunt identificate prin numerotare, iar datele sunt nscrise i n nota de nso ire a probelor. i) Ambalarea probelor i etichetarea acestora se realizeaz cu respectarea reglement rilor na ionale specifice. 5. Transportul probelor de insecte utile la laborator a) Pentru materialul biologic prelevat viu, probele sunt transportate la laborator n maximum 24 de ore din momentul prelev rii, la temperatura mediului ambiant. Aceasta nu trebuie s dep easc maximum 38C. b) Pentru materialul biologic prelevat dup survenirea mor ii, probele se transport la laborator n cel mai scurt timp posibil, nu mai trziu de 72 de ore de la moartea insectelor. Transportul acestor probe se realizeaz pe ghea natural sau artificial , n recipiente izoterme care men in temperatura de refrigerare. c) Probele prelevate pentru examenul toxicologic i care nu pot fi transportate n timp util la laborator se congeleaz pn la expediere. d) Probele prelevate sunt nso ite de documente de nso ire tipizate, conform legisla iei sanitarveterinare n vigoare. Se analizeaz cererea de ofert i, n func ie de scopul prelev rii probelor, se completeaz formularele prezentate la anexele nr. 3 i 4. e) Prelevarea, ambalarea i transportul probelor sunt efectuate de direc ia sanitar-veterinar i pentru siguran a alimentelor jude ean , respectiv a municipiul Bucure ti, prin serviciile acesteia, sau de alt personal abilitat n acest scop.

f) Probele care constituie obiectul unui litigiu se sigileaz conform procedurilor legale n vigoare. g) Odat cu prelevarea probelor se completeaz formularul ce va nso i probele, al turi de adresa de nso ire, de istoricul bolii i de anexele nr. 3 i 4.

CAP. X Probe destinate examenelor de laborator pentru ecopatologie i protec ia mediului

A. Probe de ap 1. Recipientele pentru prelevarea probelor de ap trebuie s ndeplineasc urm toarele condi ii: a) s conserve compozi ia probei, evitndu-se pierderile prin absorb ie, evaporare sau contaminare cu substan e str ine; b) s reziste la temperaturi extreme; c) s reziste la ocuri mecanice; d) s aib facilitatea de nchidere etan i de redeschidere u oar .

2. Prelevarea probelor de ap pentru examenul fizico-chimic se realizeaz cu ndeplinirea urm toarelor condi ii: a) se prelev o cantitate suficient de prob , recipientele umplndu-se pn la dop i nchiznduse etan ; b) analiza probelor se face ct mai repede posibil; c) recipientul folosit nu trebuie s contamineze apa; d) recipientul de prelevare este confec ionat din materiale ce se pot cur a u or. 3. Prelevarea probelor de ap pentru examen bacteriologic se realizeaz cu ndeplinirea urm toarelor condi ii: a) se folosesc flacoane de sticl cu dop de sticl rodat sau cu capac metalic cu filet ori flacoane de plastic sterile, dopul i gtul sticlei fiind protejate cu nveli de hrtie ori de pergament sau cu folie sub ire de aluminiu; b) pentru prelevarea unei cantit i suficiente de prob de ap , recipientele se umplu pn la aproximativ 1 cm sub dop i se nchid etan ;

c) cnd se prelev mai multe probe din acela i loc, se recomand ca proba destinat examenului bacteriologic s fie prelevat prima, pentru a mpiedica contaminarea punctului de recoltare n timpul prelev rii altor probe; d) nainte de sterilizare se adaug 0,1 ml solu ie 3% de tiosulfat de sodiu cristalin la un flacon de 170 ml; e) recipientele sterile sunt p strate nedeschise pn n momentul prelev rii probei de ap ; f) n timpul prelev rii, dopul i gtul sticlei nu trebuie s ating niciun obiect, iar sticla trebuie inut aproape de partea ei inferioar ; g) n cazul probei de ap prelevate de la robinet, acesta din urm este cur at i sterilizat prin flambare, iar proba de ap se prelev dup un timp de curgere de dou minute; h) probele de ap se trimit la laborator ct mai repede posibil, astfel nct examenul bacteriologic s se efectueze n mai pu in de 6 ore de la prelevarea probelor; i) n cazul ntrzierii, probele de ap se pot filtra la locul de prelevare, iar membrana de filtrare se poate pune pe un burete absorbant saturat cu mediu de transport prev zut n SR ISO 5667-2, ntr-o plac Petri. 4. Etichetarea probelor de ap prelevate a) Probele de ap prelevate se eticheteaz clar, vizibil i durabil. b) Probele de ap prelevate sunt nso ite pe durata transportului la laborator de o not de nso ire a probelor, care cuprinde date referitoare la: (i) amplasarea locului de prelevare; (ii) punctul de prelevare; (iii) data prelev rii; (iv) metoda de prelevare folosit ; (v) scopul utiliz rii apei prelevate; (vi) scopul analizei solicitate; (vii) condi iile meteorologice; (viii) natura eventualei pretrat ri; (ix) agen ii de conservare sau stabilizare folosi i;

(x) numele persoanei care a efectuat prelevarea. 5. Conservarea probelor de ap prelevate a) Probele de ap sunt inute la o temperatur inferioar celei din momentul prelev rii. b) n vederea conserv rii pe termen scurt a probelor de ap , acestea sunt refrigerate la o temperatur de 2-5C. c) Congelarea la temperatura de -20C m re te timpul de conservare; se folosesc n acest scop recipiente de polietilen . d) O metod de conservare care poate fi utilizat este adaosul de agen i de conservare, prev zu i n SR ISO 5667-3, nainte sau dup prelevare, n cantit i mici, dar n concentra ii mari. 6. Transportul probelor de ap prelevate la laborator se realizeaz cu ndeplinirea urm toarelor condi ii: a) s fie rapid; b) s se asigure condi ii de refrigerare sau de congelare; c) s se realizeze n recipiente care sunt protejate pe durata transportului, pentru a nu se deteriora i a nu pierde din con inut; d) s se asigure c ambalajele n care se pun recipientele realizeaz protec ia acestora fa posibil contaminare, mai ales n zona nchiderii; de o

e) s se realizeze astfel nct recipientul s nu reprezinte o surs de poluare a probei prelevate.

B. Probe de sol 1. Prelevarea probelor de sol a) Prelevarea de la suprafa se efectueaz dup ndep rtarea stratului de vegeta ie sau a altor materiale depuse pe suprafa a solului, cu ajutorul unei cazmale. Probele se prelev din 30 n 30 m, astfel nct s se acopere ntreaga suprafa de teren supus examin rii. b) Prelevarea din profunzime se realizeaz prin s parea unei gropi cu pere ii verticali. Prelevarea probelor par iale se efectueaz din pere i, ncepnd cu fundul gropii spre suprafa , folosindu-se cazmaua sau lop ica. Pentru adncimi mai mari se folosesc sondele sau sfredelul Franken. c) Probele prelevate constituie probe par iale sau individuale. d) Mai multe probe par iale comasate i omogenizate constituie proba medie sau individual .

e) Probele medii sau individuale de sol sunt fie n cantitate de 2-4 kg, pentru examenul fizicochimic, fie de 200-300 g, pentru examenul bacteriologic i parazitologic. 2. Ambalarea i etichetarea probelor de sol a) Probele de sol se ambaleaz n borcane de sticl cu capac sau n pungi de polietilen sterile i apoi se eticheteaz . Pe etichet se trec urm toarele date: num rul probei de sol, cantitatea i locul de provenien a solului. b) Probele de sol se trimit la laborator cu nota de nso ire, n care se prev d: (i) unitatea de expediere i adresa acesteia, precum i numele persoanei care a efectuat prelevarea probei de sol; (ii) locul i adncimea de prelevare, data prelev rii i data expedierii probelor la laborator; (iii) scopul prelev rii i examenul solicitat - fizic, chimic, bacteriologic sau parazitologic. c) Expedierea probelor de sol la laborator se face ct mai repede posibil, pentru realizarea examenului bacteriologic i a examenului parazitologic. d) nainte de expediere, probele de sol destinate examenului fizico-chimic se ntind n t vi metalice pentru uscare la temperatura camerei i apoi se m run esc, p strndu-se structura granular . 3. Transportul i p strarea probelor de sol la laborator n timpul transportului, probele sunt protejate de ac iunea direct a razelor solare i se evit p strarea acestora mai mult de 24 de ore la frigider.

C. Probe de sanita ie 1. Probele de sanita ie sunt reprezentate de resturi de materie organica prelevate de pe diferite suprafe e decontaminate dintr-un obiectiv. 2. Prelevarea probelor de sanita ie a) Prelevarea probelor de sanita ie se execut prin tergerea suprafe ei de testat, astfel nct s se acopere o suprafa de 100 cmp (10 cm x 10 cm), folosindu-se un ablon. b) Dac suprafa a de testat este umed , tamponul nu se mai umeze te nainte de folosire. c) Dac suprafa a de testat este uscat , se umecteaz suprafa a cu ser fiziologic, se folosesc tampoane sterile i tuburi cu solu ia de cl tire.

d) Suprafa a de pe care se face prelevarea probelor trebuie s reprezinte cel pu in 1/10.000 din suprafa a total supus decontamin rii. e) 30% din suprafe ele alese pentru prelevare trebuie s fie din locurile cele mai greu accesibile opera iunilor de cur are, iar 70% trebuie s fie suprafe e cu care animalele intr frecvent n contact. f) Prelevarea probelor de sanita ie se realizeaz din minimum 10 puncte, pentru obiectivele mai mici de 1.000 mp, i se execut la cel mult 24 de ore de la aplicarea substan elor decontaminante. g) Probele se individualizeaz prin etichete i se trimit la laborator cu nota de nso ire i cu tabelul de individualizare a probelor. 3. Transportul i p strarea probelor de sanita ie n timpul transportului, probele sunt protejate de ac iunea direct a razelor solare i se evit , pe ct posibil, p strarea acestora mai mult de 24 de ore la frigider.

D. Probe pentru reproduc ie 1. Probe de material seminal Pentru materialul seminal se execut urm toarele examin ri: bacteriologic , micologic , parazitologic i virusologic . 2. Prelevarea probelor de material seminal a) Probele de material seminal sunt prelevate de la masculi de reproduc ie (taur, vier etc.) din centrele specializate tip SEMTEST i se transport la laborator n containere speciale cu azot lichid. b) Probele de material seminal congelat de taur, prezervat sub form de paiete, se prelev direct din containerul cu azot lichid. c) Identificarea probelor de material seminal se realizeaz prin: (i) numele, nr. matricol, codul taurului i data de recoltare a fiec rei arje, nscris pe paiet ; (ii) probele de material seminal de vier se prelev n flacoane sterile din material plastic, cu capacitatea de 50-100 ml, identificate ca la pct. (i). d) Probele se trimit c tre laborator cu: (i) o not de nso ire n care se nscriu unitatea i adresa expeditorului, data recolt rii, data expedierii i examenele solicitate; (ii) un tabel cu datele de identificare ale fiec rei probe.

3. Transportul probelor de material seminal a) Probele de material seminal congelat sunt transportate n containere cu azot lichid, n vederea asigur rii temperaturii optime de conservare. b) Probele de material seminal refrigerat de vier sunt transportate n recipiente care asigur o temperatur optim de 0-4C, n vederea men inerii func iilor vitale ale spermatozoizilor. 4. P strarea probelor de material seminal a) Pastrarea probelor de material seminal se realizeaz n containere cu azot lichid, n care nivelul optim al azotului este monitorizat periodic i, dup caz, se realizeaz completarea containerului cu azot. b) Probele de material seminal refrigerat se p streaz la temperatura de 0-4C, maximum 2-3 zile.

CAP. XI Dispozi ii finale i tranzitorii

Anexele nr. 1-4 fac parte integrant din prezenta norm sanitar veterinar .

ANEXA 1

la norma sanitar veterinar

CANTIT

ILE I MODUL DE PREZENTARE

A PROBELOR DE STINATE EXAMENELOR DE LABORATOR

1. Examen parazitologic

*T* *Font 8*

Nr. crt. Tipul probei

Cantitatea necesar pentru analiz

Prezentarea probei (caracteristici identificabile vizual)

1. Probe de la animale n via

a) Snge pe anticoagulant

2 ml

Tuburi cu dop filetat - probe proaspete sau

conservate la temperatura de 4C

b) Material seminal

0,5 ml

Paiete, microtuburi sterile

c) Ln , pene, p r 3 pene

5 g ln , 1-2 g p r,

Pungi de plastic etichetate - probele trebuie

s fie ntregi

d) Ectoparazi i

minimum 3 exemplare

Tuburi cu dop - probe conservate la rece

e) Endoparazi i

1-2 parazi i ntregi

Tuburi cu dop etichetate - probe conservate:

cestodele n alcool de 70%, nematodele n solu ie Barbagallo, 30 la mie formol n ser fiziologic, protozoarele n formol 5-10%

2. Probe de la cadavre de animale

a) Por iuni de intestin, cecum

10 g

Prelevate n pungi de plastic, etichetate probe n stare proasp t sau conservate la temperatura de 4C

b) Por iuni de ficat

50-100 g

Prelevate n pungi de plastic, etichetate -

probe n stare proasp t sau conservate la temperatura de 4C

c) Por iuni pulmon

10-12 g

Prelevate n pungi de plastic etichetate -

probe n stare proasp t sau conservate la temperatura de 4C

d) Splin

20 g

Prelevate n pungi de plastic etichetate -

probe n stare foarte proasp t

e) Musculatur : pilieri

20-40 g-trichineloscopie Prelevate n pungi de plastic etichetate -

diafragmatici, mu chi

direct , 100 g digestie probe n stare proasp t sau conservate la

intercostali, maseteri i ai limbii

artificial

temperatura de 4C

f) Rinichi

Proba trebuie sa con in un rinichi

Prelevate n pungi de plastic etichetate -

proba s fie foarte proasp t

3. Probe de:

a) Furaj

50-100 g

Prelevate n pungi de plastic, etichetate

b) Ap

50 ml

Tuburi cu dop etan etichetate

c) Sol

10-20 g

Pungi de plastic, etichetate

d) A ternut

50-100 g

Pungi de plastic, etichetate

Toate probele se trimit cu not de nso ire i individualizate prin etichetare

*ST*

2. Examen micologic-micotoxicologic *T* *Font 8*

Nr. crt. Tipul probei

Cantitatea necesar pentru analiz

Prezentarea probei (caracteristici identificabile vizual)

1. Furaje

1 kg

n pungi de hrtie sau material plastic, cutii sau borcane cu dop rodat, etichetate Etichetare: denumirea unit ii care expediaz proba; denumirea destinatarului, felul produsului i tipul; m rimea i num rul lotului; locul i data recolt rii probelor;

destina ia probelor; numele i semn tura persoanelor care au prelevat probele

2. Avortonii de la toate speciile de animale n saci de plastic eticheta i

3. Tineretul aviar, ovin, bovin n vrst de 0-30 de zile i tineretul porcin n vrst de 0-60 de zile

n saci de plastic eticheta i

4. Ou embrionare

n cofraje etichetate, pentru a se evita spargerea acestora

5. Secre ii i excre ii

Prelevate n eprubete sterile, cu tampoane sterile, etichetate

6. P r, cruste, scuame

Prelevate n ambalaje sterile, etichetate

Toate probele se trimit cu not de nso ire i individualizate prin etichetare

*ST*

3. Examen imunologic *T* *Font 8*

Nr. crt. Tipul probei

Cantitatea necesar pentru analiz

Prezentarea probei (caracteristici identificabile vizual)

1. Ser sanguin

Minimum 100 l pentru o a) identificare numeric individual lizibil analiz RSAR b) f r aspect de hemoliz sau de contaminare

2. Ser sanguin

Minimum 500 l pentru o a) identificare numeric individual lizibil analiz SAT, macrometod b) f r aspect de hemoliz sau de contaminare

3. Ser sanguin

Minimum 50 l pentru o analiz SAT, micrometod

a) identificare numeric individual lizibil

b) f r aspect de hemoliz sau de contaminare

4. Ser sanguin

Minimum 500 l pentru o a) identificare numeric individual lizibil

analiz RFC, macrometod

b) f r aspect de hemoliz sau de contaminare

5. Ser sanguin

Minimum 300 l pentru o a) identificare numeric individual lizibil analiz RFC, micrometod b) f r aspect de hemoliz sau de contaminare

6. Ser sanguin

Minimum 50 l pentru o analiz RMA

a) identificare numeric individual lizibil

b) f r aspect de hemoliz sau de contaminare

7. Ser sanguin

Minimum 100 l pentru o a) identificare numeric individual lizibil analiz ELISA. n func ie de trus b) f r aspect de contaminare

8. Plasma sanguin lizibil

Minimum 150x3 l pentru a) identificare numeric individual

o analiz ELISA pentru tuberculoz

b) f r aspect de hemoliz

c) plasm sanguin steril

Toate probele se trimit cu not de nso ire i individualizate prin etichetare

*ST*

NOT : 1. n cazul probelor care necesit p strarea de contraprobe, cantitatea prev zut n tabel se va dubla. 2. Cantit ile men ionate n tabel sunt necesare unei analize i unei repet ri, dac se impune.

4. Examen toxicologic-chimic *T* *Font 8*

Nr. crt. Tipul probei

Cantitatea necesar pentru analiz

Prezentarea probei (caracteristici identificabile vizual)

1. Con inut gastric

Minimum 30 g

Proasp t prelevat, ambalat n recipiente

etan e i transportat n cutii frigorifice pentru a mpiedica modific rile de pH, individualizat i etichetat

2. Organe

Minimum 30 g

Proasp t prelevate, ambalate n recipiente

etan e, proaspete sau congelate, transportate n cutii frigorifice pentru a mpiedica alterarea, individualizate prin etichetare sau altfel

3. Snge pe anticoagulant destinate,

Minimum 5 ml pentru

Probe prelevate n vacutainere

examen toxicologic

individualizate, transportate la temperatura

de 4C; pentru methemoglobin se transport la laborator n maximum 4 ore de la prelevare

4. Ser

2-3 ml pentru examen toxicologic

Prelevat n eprubete cu dop, nehemolizat,

transportat proasp t recoltat sau congelat i etichetat

5. P r

4 g pentru examen toxicologic

Prelevat n pungi de material plastic sau n

recipiente, individualizat

6. Furaje

500 g pentru examen toxicologic

Prelevate n ambalaje curate, pungi de

material plastic sau n recipiente, individualizat

7. Ap

1 l pentru examen toxicologic

Prelevat n recipiente curate, nchise

etan . Se transport la laborator n maximum 4 ore de la prelevare sau se conserv conform STAS 6329/77, specificndu-se

conservantul folosit, individualizat

8. Momeli

30 g

Nealterate, recoltate n recipiente sau pungi de plastic curate, etichetate

Toate probele se trimit cu not de nso ire i individualizate prin etichetare

*ST*

NOT : Pentru analiza probelor de creier, con inutului ingluvial i a con inutului stomacal muscular, provenite de la pui mici ori mijlocii, se trimit pentru analiz mai multe capete, pipote i stomac muscular, n vederea efectu rii de probe medii.

5. Examene pentru viroze majore *T* *Font 8*

Nr. crt. Tipul probei

Cantitatea necesar pentru analiz

Prezentarea probei (caracteristici identificabile vizual)

1. Ser pentru A 150

0,7-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

2. Ser pentru A 160

0,7-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

3. Tampoane traheale, tampoane cloacale pentru A 150, A 160 Pe mediu TFS, antibiotice, identificate

4. Organe pentru A 150

Fragmente 1 g

Proaspete, identificate

5. Ser pentru A 090

0,7-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

6. Ser pentru A 110

0,7-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

7. Ser pentru A 010

0,5-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

8. Ser pentru A 030

0,5-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

9. Ser pentru A 040

0,5-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

10. Ser pentru A 050

0,5-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

11. Ser pentru A 120

0,5-1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

12. Ser pentru A 130

1 ml identificat

Nehemolizat, nealterat - f r turbiditate,

13. Snge pe anticoagulant pentru A 130 Minimum 5 ml Identificat

14. Ser pentru A 130

Obligatoriu primele 3

Transportat n condi ii de refrigerare n i

sternebre

lad termoizolant cu pungi de ghea identificat

15. Tonsile, rinichi, splin , ileon, limfonoduri limfatice, pentru A 130

Fragmente

Proaspete, transportate n lad termoizolant ambalate individual i bine identificate

Toate probele se trimit cu not de nso ire i individualizate prin etichetare

*ST*

6. Examene pentru alte boli virale *T* *Font 9*

Nr. crt. Tipul probei

Cantitatea necesar pentru analiz

Prezentarea probei

1. Ser pentru B 108

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

2. Ser pentru B 205

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

3. Ser pentru B 257

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

4. Ser pentru B 254

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

5. Ser pentru B 052

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

6. Ser pentru B 153

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

7. Ser pentru B 161

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

8. Ser pentru B 110

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

9. Ser pentru B 206

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

10. Ser pentru B 208

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

11. Ser pentru B 211

1-2 ml

Nehemolizat, nealterat, n tuburi

sterile, identificat

12. Ser pentru B 301

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

13. Ser pentru B 309

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

14. Ser pentru B 353

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

15. Ser pentru C 652

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

16. Ser pentru SIBE

0,5-1 ml

Nehemolizat, nealterat, identificat

Toate probele se trimit cu not de nso ire i individualizate prin etichetare

*ST*

7. Examen hematologic *T*

Tipul probei

Cantitatea

Prezentarea probei (caracteristici

necesar

pentru analiz

identificabile vizual)

Snge

3 ml

Prelevat n vacutainere, pe EDTA, etichetate, avnd datele specificate complet i lizibil, nso ite n mod obligatoriu de tabel, fi de

recoltare, date anamnetice, ras , vrst , sex, stare fiziologic i semne clinice

*ST*

ANEXA 2

la norma sanitar veterinar

*T* *Font 9*

FORMULAR NREGISTRARE PROBE PENTRU SPECIILE DE ANIMALE ACVATICE

Date/informa ii de la serviciile veterinare pentru

investigarea materialului de la animalele de acvacultur

Scopul investiga iei

Supraveghere

Diagnostic

Altele

Numele unit ii

Adresa unit ii

Proprietar/Persoan responsabil

Unitatea

Ferm de pe te de Ferm de molu te ap dulce

Ferm de raci

Specia i vrsta

P str v curcubeu P str v fntnel autohtone

Ciprinide

Temperatura apei: asiatice

Ciprinide est-

Raci

Lostri

Salinitate:

Molu te bivalve (midii) (stridii)

Molu te bivalve

Alte specii*)

Investiga ia IHN/VHS/IPN

Furuncu- Yersi- BKD VPC Mixo-

Marte- Bona- Haplo-

Alte

loza nioza somiaza ilioza mioza sporidioza boli*) Repro- Producduc ie ie

Organe pe te

Pe te

Puiet

Icre, lap i

Midii/ Stridii

Altele*)

_________ *) Se vor specifica.

Cerin e speciale

Simptome clinice/autopsie

Medicul veterinar numit

Data

*ST*

ANEXA 3

la norma sanitar veterinar

*T* *Font 9*

FORMULAR NREGISTRARE PROBE PENTRU SPECIILE DE ALBINE

Date/informa ii de la serviciile veterinare pentru investigarea materialului de la albine

Scopul investiga iei

Supraveghere

Diagnostic

Altele

DSVSA

Numele unit ii

Adresa unit ii

Proprietar/Persoan responsabil

Unitatea

Ferm : cresc torie m tci

Ferm : produc ie

Specia

Apis mellifica carpatica

Alte specii

Investi- Loca

Loca

ga ia ameri- euro- Acari- Varro- Brau- Nose- Ami- Asper- AscosVPA VPC PS BBN Alte can pean oz oz loz moz bioz giloz feroz boli

Albine

Fagure cu puiet

M tci

Altele

Cerin e speciale

Simptome clinice/ Anatomopatologice

Medicul veterinar

Data

*ST*

ANEXA 4

la norma sanitar veterinar

*T*

FORMULAR NREGISTRARE PROBE PENTRU SPECIILE DE VIERMI DE M TASE

Date/informa ii de la serviciile veterinare pentru investigarea materialului de la speciile de viermi

Scopul investiga iei

Supraveghere

Diagnostic

Altele

Numele unit ii

Adresa unit ii

Proprietar/Persoan responsabil

Unitatea

Ferm :produc toare o.v.m. Ferm : produc toare gogo i

Specia

Bombyx mori

Phylosamia ricini Alte specii

Investi- Poli- Fla e- Anemia ga ia edrie rie oas

Septi- Nose- Muscar- Aspergiloz din

Alte boli

infec i- cemie moz

Larve

Fluturi

Ou (o.v.m.)

Altele

Cerin e speciale

Simptome clinice/ Anatomopatologice

Medicul veterinar

Data

*ST*

____________