UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE GR. T.

POPA IAI FACULTATEA DE FARMACIE DISCIPLINA DE TOXICOLOGIE

CURS
COALA DOCTORAL 2011
TEHNICI EXPEMENTALE N CERCETAREA TOXICOLOGIC
PROF.DR. ELENA BUTNARU

Pune-mi n inim Doamne,

iubirea de tiin i de fpturile tale
Maimonide (1135-1204)

Toxicologia poate fi definit ca tiina care studiaz: efectele duntoare ale xenobioticelor asupra organismelor, interaciunile acestora cu organismele vii, aciunea lor asupra organismului, mijloacele folosite pentru combaterea efectelor toxice, izolarea, identificarea, i cantitativ a xenobioticelor. determinarea

 Toxicitatea reprezint capacitatea unei substane de a produce efecte toxice.

Toxicitatea este o calitate intrinsec a moleculei, are o valoare relativ, deoarece intensitatea efectelor produse depinde de doz, individ, diferite condiii.

Noiunea de toxic a cunoscut diferite definiii.

Galenus (secolul II e.n.) toxic este orice lucru care poate altera organismul nostru.
Paracelsus (1993-1541) introduce noiunea de doz: Toate lucrurile sunt otrav i nimic altceva dect otrav; dar doza face ca un lucru s nu fie otrav, Goethe: Sola dosis facit venenum.

 Ogier (1853-1913): toxicul se definete ca orice substan a crei prezen n organism nu este nici normal, nici obinuit. Fabre i Truhaut: toxic este substana care, dup ptrunderea n organism n doz relativ ridicat (unic sau repetat la intervale scurte), sau n doze mici (repetate timp ndelungat) determin, imediat sau dup o perioad de laten, n mod trector sau persistent, alterarea uneia sau mai multor funcii ale organismului, putnd duce la moarte. Toxicitatea acumularea de leziuni pe perioade scurte sau lungi de timp care fac organismul incapabil s funcioneze n limite de adaptare.

Toxicul (xenobiotic) orice compus chimic strin de organism capabil s produc alterri structurale i funcionale la diferite niveluri de organizare a materiei vii, alterri care se exprim n plan clinic printr-o stare patologic, reversibil sau ireversibil . xenobiotic: xenos strin, bios - via

Intoxicaia stare patologic, reversibil sau

ireversibil, ce reprezint ansamblul de semne

i simptome care apar consecutiv ptrunderii

toxicelor

organism,

fiind

consecina

rspunsului organismului fa de aceast

agresiune.

CLASIFICAREA INTOXICAIILOR
Intoxicaia acut -toxicul este absorbit n doz relativ mare i unic, sau n doze mai mici i repetate la intervale scurte, iar manifestrile toxice apar pe neateptate, sunt violente i pot fi urmate de moarte. Intoxicaia cronic- toxicul este absorbit n doze mici i repetate, iar manifestrile, determinate de leziuni biochimice i morfofuncionale, apar lent, dar continuu.

Fabre i Truhaut nlocuiesc termenul intoxicaie cronic cu intoxicaie pe termen lung.

Intoxicaia pe termen lung prin absorbie repetat de doze mici, cnd are loc cumularea dozelor, n cazul toxicilor cumulativi (metanol, digitalice, metale grele, fluor, derivai de arsen ), sau cumularea efectelor, n cazul substanelor cancerigene. Intoxicaia pe termen lung prin absorbia unei doze unice: - paraquat (toxicitatea grav se manifest la mai multe sptmni dup ingerarea unei doze unice), - insecticide organofosforice (cu aciune neurotrop ntrziat), -nitrozaminelor (cu efecte cancerigene aprute n timp).

Testarea unei substane n experiment pe animal Intoxicaia acut: totalitatea efectelor toxice produse prin administrarea unui toxic ntr-o singur doz, putnd provoca moartea a 50% din animalele din lot n 24-48 ore (sau pn la 15 zile pentru toxicii cu efect ntrziat). Cercettorul Valette prefer intervalul de 15 zile pentru toi toxicii, motivnd c nu toate animalele intoxicate mortal cu aceeai doz mor n acelai interval de timp.

 Intoxicaia subacut: totalitatea efectelor toxice produse prin administrarea repetat a unui toxic n aceeai doz, pe o perioad corespunztoare la 1/10 din durata de via medie a speciei din experiment (de exemplu 90 de zile pentru obolan). Intoxicaia cronic: totalitatea efectelor toxice produse prin administrarea repetat a unui toxic n aceeai doz, pe o perioad corespunztoare, de obicei, la cea mai mare parte din viaa speciilor care triesc puin sau la viaa lor ntreag sau uneori (dac se urmresc efectele mutagene, cancerigene, teratogene) la mai multe generaii.

 Doza letal (DL) exprim toxicitatea acut a substanelor care ptrund oral sau parenteral. Doza letal se stabilete experimental pe loturi de animale i se noteaz DL urmat de un indice de la 1 la 100 care indic procentul de letalitate ntr-un timp dat; exprimarea este n mg/kg corp. Principalele categorii de DL sunt urmtoarele:
DL5 = doza letal minim; DL50 =doza medie letal; DL75 = doza fatal; DL100 = doza maxim letal (doza letal absolut).

Xenobioticele care ptrund respirator: Concentraia total n atmosfer (CL) doza de toxic gazos, volatil, aerosoli care produce exitus. g/v toxicul n uniti de msur, aerul n uniti de volum (mL/L) v/v uniti de volum i toxicul i aerul, procente de volum (% vol), ppm (pri per milion), pri per bilion (ppb) 1 ppm = 1000ppb. Concentraia admisibil de vrf (CAV) (industrial, comunal) reprezint concentraia substanei din aer, care cu excepia cazurilor de hipersensibilitate, nu provoac nici un semn sau simptom de boal sau de condiie fizic rea .

ANALIZA TOXICOLOGIC ARE CA SCOP :

izolarea
identificare determinarea cantitativ a substanelor toxice din : aer, ap, sol, alimente, corpuri delicte i produse biologice, n vederea prevenirii sau diagnosticrii intoxicaiilor.

TIPURI DE ANALIZE TOXICOLOGICE analize de toxicologie clinic cu scopul diagnosticrii rapide a intoxicaiilor n vederea instituirii tratamentului eficient.

analize de toxicologie medico-legal (expertize toxicologice) avnd ca scop: confirmarea sau infirmarea intoxicaiilor cu pronostic grav sau letale, pentru informarea justiiei.

analize de toxicologie sanitar (industrial i alimentar):

cu aplicabilitate n toxicologia profesional i legislativ cu scop profilactic, supravegherea nivelelor maxime admise, depistarea intoxicaiilor n faza incipient (evaluarea riscului de expuneri cronice la noxe industriale).

INTOXICAIILE

Exist dou grupe principale de intoxicaii, n funcie de informaiile existente cu privire la natura agentului toxic pot fi:
intoxicaii de origine cunoscut intoxicaii de origine necunoscut.

Intoxicaii de origine cunoscut

inhalarea de CO sau HCN n timpul unui incendiu; absorbia unor produse industriale n timpul unui accident; supradozarea unui medicament n cursul unui tratament. Intoxicaii de origine necunoscut tentative de sinucidere, intoxicaiile accidentale, dac pacientul este comatos sau se afl n imposibilitatea de a se exprima.

ANALIZELE DE TOXICOLOGIE CLINIC

probe biologice: snge, urin, lichid de spltur gastric, vomismente, saliv, pr. probele sunt recoltate de personalul medicosanitar din seciile medicale de urgen. corpuri delicte. analizate n laboratoarele de toxicologie.

TRANSPORT I CONSERVAREA PROBELOR

Probele trimise la analiz trebuie s fie etichetate, indicndu-se numele complet al pacientului, data i ora prelevrii, natura probei dac aceasta nu este evident.
In laborator se vor nota data i ora recepiei fiecrei probe, care va fi nregistrat, atribuindu-se un numr de identificare unic.

CONSERVAREA PROBELOR Recipientele care conin produse volatile (ex. solveni organici) se vor ambala separat de probele biologice, pentru a evita riscul de contaminare reciproc. Probele biologice se vor pstra, la 4C pn n momentul analizei. Probele se vor pstra la 4C nc 3-4 sptmni, n caz c este necesar repetarea analizei. n analizele medico-legale dac pacientul a decedat, toate probele se vor pstra la -20C pn la ncheierea anchetei.

PROBE ANALIZATE
Sngele total i plasma sunt probele cele mai reprezentative. Ideal este ca laboratorul s primeasc snge total, necoagulat i nehemolizat. La internarea pacienilor se recomand recoltarea:
10 mL snge heparinizat 2 mL snge pe fluorur de sodiu 10 mL snge fr conservani sau coagulani

Probe analizate
Pentru a mpiedica coagularea se pot folosi heparin sau fluorur de sodiu (5mg/mL). Fluorura de sodiu acioneaz prin sechestrarea calciului, mpiedicnd coagularea, iar n plus este un inhibitor enzimatic, ceea ce contribuie la reducerea procesului de putrefacie.

URINA

Este o matrice biologic cu care se lucreaz uor, interferenele fiind puine.

Xenobioticele se elimin prin urin:
ca atare n concentrai mici sau sub form de metabolii

Urina nu necesit adugarea de conservani.

RECOLTAREA URINEI
Urina se recolteaz, n general, o prob de 50 mL, ntrun recipient steril care se nchide ermetic. Recoltarea se face ct mai repede posibil, de preferin nainte de instituirea unui tratament medicamentos. Medicamentele ca antidepresivele triciclice (amitriptilin, imipramin) produc retenie urinar, prob recoltat poate s conin o cantitate minim de substan toxic.

Cantitatea prezent ntr-o prob recoltat dup cteva ore sau zile poate s fie foarte redus, chiar dac starea clinic a pacientului este grav (intoxicaiile acute cu paracetamol).

RECOLTAREA URINEI

La pacienii n stare de incontient, se face cu ajutorul unui cateter, existnd riscul de contaminare cu lubrifiani sau anestezice locale (lidocain).
Dac s-a ncercat provocarea vomei prin administrarea de sirop de ipeca, urina poate conine emetin.

CONINUTUL GASTRIC
Coninut gastric - vomismentele sau produsele de aspirare sau de spltur gastric. Se recolteze prima spltur, deoarece urmtoarele pot fi prea diluate. Cantitatea minima necesar pentru mai multe analize este de 20 mL. Nu se adaug conservani. Coninutul stomacal se poate omogeniza, filtra i/sau centrifuga. Mirosul poate indica prezena unor compui, i uneori pot fi identificate comprimatele sau capsulele prin simpl observare.

Probele de pr
1857 arsenul a fost pus n eviden n prul unui cadavru exhumat dup 11 ani. 1954 a fost detectat pentru prima data o substan organic n perii din blana de cobai. 1979 Baumgartner i colaboratorii au publicat o metod radioimunologic de detectare a opiaceelor n prul drogailor.

1998 n probele de pr s-au pus n eviden substane anabolizante la sportivii din Turului ciclistic al Franei.

Substanele toxice pot ajunge n pr pe trei ci:

calea endogen - prin captarea n firul de par a substanelor prezente n circulaia sistemic n timpul procesului de histogenez; calea endo-exogen - prin transferul n prul cheratinizat a substanelor absorbite i eliminate prin transpiraie, sebum sau excreie transdermic;

calea exogen - absorbie prin prul cheratinizat a substanelor din mediul extern.

Factorii care favorizeaz ncorporarea substanelor toxice n pr sunt:

Lipofilia compusului: cu ncorporarea este mai mare.

ct

este

mai

mare,

Afinitatea melaninei pentru substana toxic, ncorporarea este mai buna n prul pigmentat;

Bazicitatea compusului: compuii cu caracter bazic sunt mai bine ncorporai dect cei cu caracter acid;

Avantajele folosirii probelor de pr n analizele toxicologice : Analiza furnizeaz informaii asupra utilizrii pe termen lung a substanei, deoarece creterea prului capilar este relativ constant, fiind n jur de 1 cm / lun i se acumuleaz substane i metaboliii lor.

Informaii cu privire la modul de utilizare a unor droguri sau la severitatea abuzului. Prul poate fi recoltat sub supraveghere strict, fr ca individul s se jeneze. Se poate recolta o a doua prob, care poate fi comparat cu prima pe baza aspectului, prin examinare microscopic sau procedee de identificare a ADN-ului.

CORPURI DELICTE

Apa, resturi de alimente sau buturi Flacoane, recipiente care sunt gsite la pacient sau n apropierea lui, deoarece acestea pot avea legtur cu intoxicaia i sunt analizate dac este necesar.

CORPURI DELICTE
Comprimatele sau alte preparate farmaceutice pot fi identificate cu ajutorul unor baze de date informatizate pe baza culorii, formei, mrimii, greutii. telefonic

Rezultatele analizei trebuie comunicate serviciului de urgen, ct mai rapid.

Raportul scris poate fi trimis ulterior, ntr-o form relativ concis, coninnd probele primite spre analiz, metodele utilizate i rezultatele.

ANALIZELE DE TOXICOLOGIE MEDICO-LEGAL

Analizele de toxicologie medico-legal includ diagnosticarea cazurilor letale de intoxicaii sau a celor cu litigii . Diagnosticarea consumului de droguri.

ANALIZELE DE TOXICOLOGIE MEDICO-LEGAL corpuri delicte (ap, resturi alimentare, obiecte suspecte) produse biologice (snge, urin, stomacal, organe, pr). coninut

RECOLTAREA PROBELOR
Se face la autopsie, n cazul intoxicaiilor letale de ctre medicul legist sau procuratur, pstrndu-se contraprobe, pentru situaia n care rezultatul analizei este contestat i se solicit o contraexpertiz.

Probele sunt etichetate corespunztor i sunt nsoite

de un raport de necropsie, care conine informaii n legtur cu mprejurrile n care s-a produs intoxicaia i descrierea morfopatologic macroscopic a cazului respectiv.

ISTORICUL COMPLET AL CAZULUI

Numele victimei
Sexul Vrsta Greutatea sau nlimea Ocupaia (cu detalii cu privire la produsele care se fabric sau se folosesc la locul de munc) Rezultatele autopsiei Medicamentele sau substanele toxice la care victima a avut acces Intervalul de la constatarea primelor simptome pn la deces

Istoricul complet al cazului

Data autopsiei i cauza posibil a decesului. Alte informaii care pot fi utile laboratorului: - victima era nsrcinat, -detalii despre suspect (ocupaia i produsele utilizate la locul de munc, comentarii ale martorilor).

PROBE DE ORGANE I FLUIDE INDICATE PENTRU EXPERTIZA TOXICOLOGIC

Proba Creier Ficat Plmn Snge cardiac Snge periferic Umoare vitroas Bil Urin Coninut stomacal Cantitate 100 g 100 g | 50g 25 g 10g Tot disponibilul Tot disponibilul Tot disponibilul Tot disponibilul

COLECTAREA PROBELOR
se eticheteaz fiecare recipient, notndu-se data i ora autopsiei, numele victimei, tipul probei, un numr intern de identificare, iniialele i semntura medicului. obligatoriu ca manipularea probelor, analiza i buletinul de analiz emis s fie autentificate i documentate. formele scrise trebuie semnate i datate de anatomopatolog, i de toate persoanele care ulterior au manipulat sau transportat probele (adic acestea trebuie s aib ceea ce n termeni juridici se numete lan de custodie).

XENOBIOTICELE ANALIZATE
n snge: monoxid de carbon, etanol i ali alcooli, barbiturice, tranchilizante, alte medicamente

urina este util att pentru analiza substanelor toxice ct i a metaboliilor - se extrage ntreg coninutul vezicii urinare ficatul i bila conine frecvent cantiti mari de substane toxice i/sau metabolii (xenobiotice organice i metale)
rinichiul este esutul cel mai important pentru analiza medico-legal (intoxicaie cu metale).

creier: solveni organici, anestezice, pesticide organice i produse de curire la rece.

Observaii
n intoxicaii cu arsen, plumb, beriliu, taliu, stroniu, uraniu, fluor, se vor trimite spre analiz i probe de unghii, pr, oase. n investigarea toxicilor gazoi sau volatili este important s se evite ca flacoanele s conin aer; ele trebuie nchise ermetic i pstrate n frigider. Nu se adaug ageni conservani (pot contamina sau pot interfera n analiz), dar se menin la temperatur sczut, fr a se congela. Conservani sunt admii n: snge pentru determinarea alcoolemiei (NaF) esuturi pentru determinri histologice (formol 10%).

RECOLTAREA DE PROBE DE LA CADAVRE EXHUMATE

nhumarea a fost recent i se recunosc viscerele, acestea se recolteaz ca la o autopsie, dac nu, se recolteaz resturile vizibile sau magma existent n zone distincte.
Probele sunt nsoite de cptueala sicriului i de pmnt de sub sicriu, cnd nhumarea s-a fcut direct n sol. Toate probele se introduc n flacoane de sticl, iar cele cu pmnt trebuie s conin 100 g pmnt de deasupra sicriului i 100 g pmnt de sub sicriu.

Raportul laboratorului de toxicologie medico-legal va cuprinde:

descrierea probele primite spre analiz

toate metodele i etapele analitice, precum i rezultatele obinute

raportul trebuie s cuprind un rezumat n limbaj uzual, care s poat fi neles de avocai. partea analitic a raportului este important, deoarece partea acuzat poate ncerca, ajutat de un consultant tiinific, s obiecteze la concluziile toxicologului;

toxicologul trebuie s i poat susine rezultatele pe baza unei documentaii analitice complete, care nu trebuie neaprat inclus n raport, dar care trebuie pstrat n dosar.
toate experimentele efectuate trebuie consemnate n ordine cronologic n registrul laboratorului.

Analizele de toxicologie sanitar

Probele analizate: aer (comunal, industrial), ap, sol, alimente. Probe biologice: Urin Snge esuturi de plante i animale

Analizele se efectueaz n: Centrele de Medicin Preventiv, Laboratoarelor de toxicologie din ntreprinderi.

Se controleaz periodic i nivelele sanguine sau eliminarea renal a toxicilor i metaboliilor la persoanele expuse, i modificarea unor markeri biotoxicologici care pot permite depistarea intoxicaiilor n faza de debut.

Markeri biotoxicologici
Solveni de tip derivai clorurai ai etanului i etenei acidul tricloracetic i tricloretanului (LBT-300 mg/g creatinin) Fenoli i benzen fenoli urinari LBT: 50 mg/L Compui ai plumbului acidul 5-aminolevulinic (ALA) LBT: 0,1-5,7 mg/L Clorura de metilen: HbCO 5% din Hb total Benzen: acid S-fenilmercapturic 25micrograme/g creatinin, sulfat index >0,8 mg/L

MARKERI BIOTOXICOLOGICI Nitrobenzen: - methemoglobin 1,5% din Hb total, -p-aminofenol 5 mg/g creatinin Anilin: - methemoglobina 1,5% din Hb total, - p-aminofenol 10 micrograme/L Acid cianhidric, cianuri, cianogen: -30 mg tiocianai/L urin. Metode indirecte: Aducii oxidului de etilen cu ADN-ul i hemoglobina. Aductul acetaldehidei cu hemoglobina.

Analiza toxicologic
Analiza preliminar Izolarea substanelor toxice Purificare i concentrare Identificare
Reacii chimice Cromatografie pe strat subire (CSS) Spectrofotometrie UV, IR. Analiza cantitativ: Spectrofotometrie VIS, UV, IR Cromatografie de lichide de nalt performan(HPLC) Gaz cromatografie cuplat cu spectrofotometrie de mas (GC-MS).

Orientarea analizei toxicologice

se poate face pe baza a dou grupe de date: informaii generale informaii clinice Informaiile generale cuprind datele de anamnez:
profesia pacientului i dac manipuleaz substane chimice; tratamentul medicamentos anterior; prezena la locul de producere a intoxicaiei a unor produse chimice, medicamente sau ambalaje informaii de la familie, vecini sau nsoitori.

Informaiile clinice
informaii cu privire la starea de contien (urgena analizei), tulburrile neurologice, cardiace sau respiratorii; indici patologici: acidoz metabolic, hiperglicemie.

patologiile existente, cum ar fi o afeciune renal sau hepatic,

Informaii clinice pentru orice tratament efectuat naintea recoltrii probei:

spltur gastric

administrarea unui antidot sau a unui medicament

acestea ar putea influena toxicocinetica sau toxicodinamica substanei, i deci rezultatul analizei.

Examenul organoleptic al probelor biologice i produselor suspecte

Poate contribui toxicologice

la

orientarea

analizei

Anumite medicamente sau metaboliii lor pot da o coloraie caracteristic a urinei.

Coloraii caracteristice ale urinei, determinate de

diferite substane toxice

Coloraie Cauze posibile

brun sau negru (se intensific n timp)

galben sau portocaliu

Nitrobenzen, fenoli

Fluorescein, fenolftalein, nitrofurantoin Fenotiazine, fenitoin, fenolftalein, chinin, warfarin (hematurie) Amitriptilin, indometacin, fenoli Desferal Albastru de metilen

rou sau brun

albastru sau verde rou albastru

Examenul urinei
Substanele toxice cu miros puternic, camforul sau
salicilatul de metil, pot fi uneori recunoscute n urin deoarece se elimin parial sub forma nemodificat.

O urin tulbure poate fi consecina unei patologii asociate (snge, microorganisme, celule epiteliale) sau prezenei carbonailor, fosfailor sau urailor sub forma microcristalin sau amorf. Tratamentul cronic cu sulfamide poate conduce la formarea de cristale de culoare galben sau brun-verde ntr-o urin neutr sau alcalin.

Examenul urinei
O supradozare a fenitoinei sau a primidonei poate conduce la apariia de cristale n urin, la pH neutru, dup ingestia de etilenglicol, apar n urin cristale incolore caracteristice de oxalat de calciu.

Coninutul gastric
n coninutul gastric i n produsele suspecte, unele substane pot fi recunoscute dup mirosul lor puternic (cloroformul, salicilatul de metil, paraaldehida, fenelzinul).
Un pH foarte sczut sau foarte ridicat se poate datora ingerrii unui acid sau a unei baze Coloraie verde /albastr poate indica prezena unor sruri de fier sau cupru.

Mirosuri specifice ale unor substane toxice

Miros Migdale amare Fructe Usturoi Pere Benzin Fenol Tutun Crem de pantofi Dulceag Cianuri Alcooli (inclusiv etanol), esteri Arsen, fosfor, paration Cloral Distilate de petrol Dezinfectante, fenoli Nicotin Nitrobenzen Cloroform sau alte hidrocarburi halogenate Cauze posibile

ANALIZA PRELIMINAR

precede analiza toxicologic propriu-zis

pot fi depistai rapid, dar fr caracter de certitudine, toxici prezeni n aer, ap, alimente, corpuri delicte, medii biologice, cu ajutorul unor teste fizice, chimice i biologice.

se utilizeaz: hrtii indicatoare, tuburi indicatoare, reacii chimice pe hrtie de filtru sau chiar n eprubet pentru medii biologice, aceste probe au caracter orientativ

ANALIZA PRELIMINAR
Mirosul - se apreciaz direct sau dup nclzirea materialului poate indica prezena amoniacului, fosforului, acidului cianhidric, nitrobenzenului.
Reacia probei - este aproape ntotdeauna alcalin, din cauza formrii amoniacului prin putrefacie; cnd reacia alcalin persist i dup fierbere, acesta este un indiciu al unei intoxicaii cu o substan alcalin (hidroxid, carbonat etc.)- reacia acid este un indiciu de intoxicaie cu acizi.

. Hrtiile reactive indicatoare - dau informaii privind prezena toxicilor gazoi sau volatili (H2S, SO2, NH3, CI2, Br2, NO2 AsH3, PH3.). Teste se realizeaz asupra aerului, n atmosfera recipientului care conine materialul de analizat (viscerele). De dopul recipientului, se suspend 1-3 hrtii reactive, se nchide recipientul i se nclzete uor (la aprox. 40C) i se noteaz culorile aprute pe hrtiile respective.

Identificarea direct n proba biologic (urin, ser)

salicilaii pot fi identificai cu reactivul Trinder azotat feric violet fenotiazinele cu reactiv Forrest (F.N.P.) clorur feric, acid percloric, acid azotic rou

imipramina prin reacia Forrest-Forrest - acid sulfuric, acid azotic, bicromat de potasiu albastru imipramina reacia Bourdon-Nicaise acid percloric, azotit de sodiu rou

IZOLAREA SUBSTANEI TOXICE DIN PROBA DE ANALIZAT

Dup criteriul analitic (Ogier i Kohn-Abrest) substanele toxice sunt clasificate: toxici gazoi toxici volatili toxici minerali toxici organici nevolatili

Izolarea din medii biologice a xenobioticelor:

toxici toxici gazoi- izolare din aer toxici volatili- distilare sau antrenare cu vapori de ap toxicii metalici - mineralizare pe cale uscat sau umed pentru acizi, baze, sruri minerale - dializ

toxicii organici - extracie cu solveni organici

Izolarea din medii biologice depinde de:

Biotransformarea toxicului Distribuia n organe
Metaboliii cocainei sunt distribuii n diferite medii biologice astfel snge:

benzoilecgonin > cocain > metilecgonin;

saliva: cocaina > benzoilecgonin > metilecgonin; urin: benzoilecgonin > metilecgonin > cocaina; pr: cocaina > benzoilecgonin > metilecgonin;

Dac se testeaz prul sau saliva se caut cocaina nsi, iar dac se analizeaz sngele sau urina, se caut benzoilecgonina.

Analiz este dificil pentru mai multe motive, printre care se pot enumera:
coninutul ridicat de proteine concentraiile mici prezena mai multor compui interfereni, fie endogeni, fie exogeni, care adesea se gsesc n concentraii mai mari dect ale xenobioticelor necesitatea obinerii unor probe lichide pentru prelucrarea ulterioar riscul de infecie.

Deproteinizarea probelor biologice

Principalii interfereni sunt compui normali din organism, cei mai importani fiind proteinele, lipidele sau lecitinele. Eliminarea proteinelor se poate face prin precipitare cu diferii reactivi sau denaturare cu ajutorul enzimelor proteolitice. Prin denaturare, proteinele i pierd capacitatea de a lega substanele toxice, eliberndu-le n filtrat.

Deproteinizarea
Procedee fizice: denaturarea ultrafiltrarea, dializa; prin nclzire,

Procedee imunologice: precipitarea selectiv a proteinelor se poate efectua cu ajutorul anticorpilor precipitani, formndu-se compleci antigen-anticorpi insolubili;

Deshidratare: cu ajutorul solvenilor organici (metanol, etanol, aceton, acetonitril) sau a srurilor minerale (sulfat de sodiu, sulfat de amoniu);

Precipitare sub forma de sruri insolubile:

n mediu neutru - cu sulfat de zinc i hidroxid de sodiu sau de bariu -are dezavantajul de a conduce la adsorbia pe precipitatul de hidroxid metalic a substanelor neproteice prezente n mediu; n mediu acid - cu acizi: tricloracetic, percloric, tungstic, picric -dezavantajul principal const n posibilitatea degradrii substanei toxice la pH-ul sczut.

Denaturarea cu ajutorul enzimelor proteolitice:

tripsin, - papain are avantajul de a evita degradarea substanei toxice i este folosit mai ales pentru probele de organe, caz n care faza de purificare preced faza de extracie.

Interpretarea rezultatelor analizei

Toate rezultatele trebuie nregistrate n fie de laborator, menionndu-se data, numele analistului, numele pacientului i orice alte informaii - n special numrul i natura probelor i analizele efectuate. Este de preferat s se atribuie fiecrei probe un numr de identificare unic n momentul recepiei n laborator, acest numr urmnd a fi utilizat n toate analizele efectuate.

 Spectrele UV, curbele de etalonare i alte documente obinute n cursul analizei vor fi pstrate un anumit timp dup comunicarea rezultatelor. Dac se menioneaz c o substan nu a fost detectat n plasma, ser sau urin, trebuie s se cunoasc limita de detecie a metodei.

Rezultatele analizelor toxicologice sunt interpretate pentru:

probele de mediu (aer, ap, alimente) fa de concentraiile maxime admise (CMA) sau concentraiile medii prevzute n normele oficiale

substanele toxice din mediile biologice, fa de nivelele fiziologice maxime (dac este vorba de un component normal al organismului, ex. fier), fa de nivelele terapeutice maxime(medicament) fa de nivelele toxice sau letale menionate n literatur i care au fost determinate n cursul unor cazuri de intoxicaii.

Factori ce influeneaz rezultatele analizelor toxicologice

A. Momentul de recoltare a probei

B. Stabilitatea compusului n prob

C. Reproductibilitatea metodei analitice

A. Momentul de recoltare a probei

Cnd o persoan absoarbe o singur doz de substan toxic, concentraia acesteia n snge, urin sau viscere depinde de momentul toxicocinetic n care se recolteaz proba sau se produce decesul (pentru probele recoltate post-mortem).

Diferenele sunt mai importante pentru substanele cu timp de njumtire scurt.

Momentul de recoltare a probei

n cazul unei absorbii cronice, n special atunci cnd ne intereseaz monitorizarea unei intoxicaii, sau n domeniul toxicologiei profesionale, probele au o valoare redus atunci cnd se obin n momente care nu corespund strii staionare, sau de echilibru. Dac probele se recolteaz n faza de absorbie, att concentraiile substanei ct i valorile parametrilor farmacocinetici calculai vor fi eronate.

Starea staionar n absorbia cronic va fi mai bine reflectat de probele de snge recoltate naintea urmtoarei absorbii (administrri).

B. Stabilitatea compusului n prob

Frecvent, substana sufer modificri n prezena enzimelor plasmatice; acest inconvenient este mai redus n cazul probelor de snge total la care s-a adugat un conservant care mpiedic coagularea, cum ar fi fluorura de sodiu.

C. Reproductibilitatea metodei analitice

Metodele analitice trebuie s fie foarte sensibile, astfel nct plecnd de la probe de 2 mL s se poat detecta concentraii mai mici de 50-100 g, rezultatele s fie reproductibile ori de cte ori se analizeaz aceeai prob.