1

Analiza chimico-toxicologic a preparatelor ce se izoleaz din materialul biologic cu solveni polari

Lucrare de laborator N 2

Subiectul: Izolarea i identificarea preparatelor medicamentoase cu caracter acid. Scopul lucrrii : A nsui metodica de izolare i identificare a toxicilor cu caracter acid. Planul 1. Controlul cunotinelor teoretice. 2. Lucrul de sinestttor asupra izolrii i identificrii toxicilor cu caracter acid din materialul biologic. 3. Concluziile lucrrii i controlul deprinderilor practice. 4. Oformarea proceselor verbale.

MATERIAL INFORMATIV n ultimii ani intoxicaiile cu derivaii acidului barbituric sunt pe primul loc - Cu nsemntate toxicologic, medico-judicar i chimico-toxicologic sau evideniat urmtoarele preparate : barbitalul (veronalul), barbitalul de sodiu (medinal), fenobarbital (luminal), hexenal, barbamil, etaminal de sodiu (nembutal), butobarbital, benzonal. Izolarea barbiturailor din materialul biologic se efectuaz cu alcool ori ap acidulat. Acidul barbituric dup structura sa chimic aparine ureidelor i este derivatul acidului malonic. acidul barbituric
O O H C H O C OC2 H5 NH2 O C OC2 H5 NH2 H C O H C N H C C NH C O

Acidul barbituric i ntr-o msur mai mic derivaii si posed proprieti acide. Aceasta se lmurete prin aceea, c soluiile apoase ale acidului barbituric exist n cteva forme tautomere :
O C H C H O C N H NH H C O O C N H H C OH C NH C O

ceto
O
1 1

enol
OH R NH
11

OH
1

R C
11

C C N

R C
11

C N C N OH

R C O N H C O

R C O N H C O

R C O

forma amid

imidol

diimidol

Prezena formelor tautomere depinde de pH mediului: la pH 1 tot barbituricii n soluii apoase sunt n form ceto; la pH 9,8-10,5 n form monoimidol, iar la pH 13-14 n form diimidol. n condiii anumite toate 3 grupe carbonile ale acidului barbituric pot fi transformate n enole.
O C H C H O C N H NH C O HO H C C N N C OH OH C

Proprietatea lor de a participa la tautomeria ceto-enol, i posibilitatea de a fi extrai din mediul acid i nu din cel bazic se folosete n practic la purificarea extraciilor cloroformice acide.
O H5C2 H5C2 O C C N H C NH C O NaOH H2SO4 H5C2 H5C2 O C C N H ONa C N C O

Forma ceto (extras cu solvent organic) Insemntatea toxicologic. Metabolismul

forma enola (care nu se extrage cu solvent organic)

Aciunea farmacologic a barbituricelor se bazeaz pe proprietatea lor de a duce la starea somnului fiziologic. Acidul barbituric are proprieti narcotice ori somnifere. Asestea din urm apar prin nlocuirea atomilor de hidrogen n poziia 5 cu diferii radicali - Datorit acestor proprieti ei se administreaz la tratarea epilepsiei, aterosclerozei coronare, se folosesc pentru anestezia local i general. Durata somnului n urma administrrii e coordonat de stabilitatea lor n organism. Aa dar, barbitalul, barbitalul de sodiu i fenobarbitalul provocnd un somn ndelungat, se absorb ncet din tractul digestiv, puin se schimb n organism i se elimin prin rinichi n form neschimbat. Barbitalul se elimin prin urin 65-85%foarte ncet se elimin din organism fenobarbitalul. Eliminare abarbituricilor decurge timp de cteva zile. Administrarea frecvent a barbituricelor duce la cunulare, prin urmare - la intoxicaie. Barbitalul, butobarbital sunt barbiturice cu aciune medie, ei ofer un somn de scurt durat, se descompun complet n ficat i se elimin prin rinici numai 10%.

Hexenal i tiopental de sodium sunt barbiturice cu aciune de scurt durat (20 30 min) i se descompun repede n ficat. n doze mari barbituricii duc la deces. Pentru barbital doza toxic e de 3-4 g, barbamilul 1-3 g,fenobarbital 0,1-1g, iar letale - 6-10; 4-6 i 4-10 g respectiv. n prezent e cunoscut proprietatea lor de sinergizm n combinaie cu alcoolul, opiile, alcaloizii beladonei, tranchilizantele. Barbituricii ptrunznd n organism timp de 30 minute se repartizeaz n cea mai mare cantitate n ficat, rinici, splin, snge, creier. Se elimin prin urin. n organismul omului i animalelor barbituricii se supun unui ir de transformri : - oxidare pn la alcooli - oxidare pn la acizi, cetone - desulfurare SUBIECTELE CE STAU LA BAZ PREGTIRII TEMEI : 1. Izolarea preparatelor medicamentoase din material biologic de origine animal. Momentele principiale ale metodei. 2. Caracteristica preparatelor izolate din material biologic cu ajutorul solvenilor polari 3. Proprietile fizico-chimice ale acidului barbituric i derivailor si. 4. Metodele specifice de izolare a barbituricelor. 5. Reaciile generale de identificare . 6. Reacile microcristaloscopice de identificare ale barbituricelor. 7. Principiul metodei CSS i aplicarea ei n identificarea barbituricelor. 8. Aciunea toxicologic a barbituricelor, biotransformarea i distribuia n organism.

Rspundei argumentat la urmtoarele ntrebri : Sarcina 1. Caracterizai metodele de izolare ale barbituricelor cu ajutorul solvenilor polari rspunznd la urmtoarele ntrebri : - Prin ce se explic caracterul acid al acidului barbituric? - Care sunt solvenii cu ajutorul crora se izoleaz din materialul biologic preparatele cu coninut de azot teriar? - Ce factori acioneaz la extragerea complet a barbiturailor din mediul apos i din materialul biologic? Sarcina 2. - Care sunt formele tautomere ale barbituricelor? Scriei formulele. - Ce reacii caracteristice cunoatei pentru barbiturai? - Cu ce reactiv se developeaz barbituraii prin metoda CSS? - Care barbiturai se descompun nensemnat n organism i provoac somn ndelungat? - Durata conservrii barbiturailor n materialul cadaveric i lichidele biologice. Sarcina 3. Lucrul practic al studenilor n laborator Fiecare student primete obiectul de cercetare i descrie aspectul extrerior. Structura coninutului temei Izolarea i identificarea preparat elor medicamentoase cu caracter acid. I etap : Izolarea cu ap acidulat ori alcool acidulat a) controlul pH 2,0-2,5 b) filtrarea c) centrifugarea II etap : Extragerea toxicului din centrifugat : a) la pH 2,0-2,5 cu cloroform, eter b) centrifugarea III etap : 1) Cercetarea centrifugatului asupra barbituricelor. 2) Aplicarea metodelor chimice i fizico-chimice pentru identificare.

Schema izolrii mercurului prin metoda destructiv

N d/ 1

Etapa aciunii Pregtirea materialului biologic pentru izolare

Mijloacele i condiiile

Formele de autocontrol

Balonul

cu

materialul

biologic,

baghet de sticl acid sulfuric 10%, plnie, centrifug, hrtia indicator universal.

nceputul izolrii

La 10 g materialul biologic din balon Dac material biologic e se adaug soluie acid sulfuric 10% de consisten dens, mai pn la pH 2,0-2,5, se las pe 2 ore, nti se adaug ap i se apoi se filtreaz. Reziduul din nou se amestec pH 2,0-2,5 i se repet aceia procedur de 3 ori. Filtratele se unesc i se centrifugheaz timp de 10 min (5000 rot/min), apoi se filtreaz. Se precizeaz pH soluiei Din filtratul obinut la pH-ul 2,0-2,5 (pH= 2,0-2,5). se extrage cu cloroform de 3 ori (10; n caz de formare a 10; 10 ml). Extraciile cloroformice opalescenei extractul se se reunesc i se supun analizei supune centrifugrii. chimico-toxicologice de identificare. cu bagheta, aciduleaz cu acela solvent pn la apoi se adaug acidul.

Procesul 3 extragerii

Metodele de identificare I. Cercetarea barbituricelor prin metoda cromatografiei pe strat subire. CSS. Faza staionar : sorbent silicagel,(pe plci de sticl ori silufol. Faza mobil : (sistema de solveni) cloroform : aceton ( 9 : 1), ori cloroform butanol -amoniac (70 : 40 : 5). Se pregtete cte 20-30 ml sistem de solveni i se introduce n camera de cromatografiere. Timp de 10-15 minute se las pentru saturarea camerei cu vapori. Tehnica de lucru : Pe plac se depune n 4 puncte (1,2,3,4) barbiturice pure n cloroform. n p.5 se depune punctul de control profesorului. Placa se ntroduce n camera cu sistema de solveni. Dup ce frontul mobil (sistema de solveni s-a ridicat la nivelul 3/4, din nlimea plcii, placa se scoate din camer, se usuc i se prelucreaz cu soluie de difenilcarbazid 0,02% n cloroform, apoi cu soluie de sulfat de mercur de 5% n acid sulfuric. Barbituricii se disting n form de spoturi de culoare albastru-violet. Se calculeaz valoarea Rf : distana parcurs de preparat Rf = -------------------------------------distana parcurs de solveni Se compar Rf-ul soluiei de control i a soluiei de analizat. II. Efectuarea reaciilor generale asupra barbituricelor : adaug 2 pic de alcool metilic absolut. Soluia se absoarbe pe o hrtie de filtru (preventiv umestat cu soluie nitrat de cobalt 1% i uscat). n prezena barbituricelor apare culoare violet; - n caz de cantitii minime a substanelor de analizat dup nlturarea cloroformului n ceaa de porelan se adaug o pictur soluie amoniacal de nitrat de cobalt. n prezena barbituricelor apare culoarea roz-violet; - reacia cu srurile de cobalt : extractul cloroformic se evapor i la reziduu se oarecare barbiturat la indicaia

- proba murexid : n ceaa de porelanse depun 1-2 ml soluie alcoolic de substan de analizat, se evapor i la reziduu se adaug 0,1 ml soluie NH 4Cl (cu coninut de sarea Mor) i 0,1 ml soluie peroxid de hidrogen 30%. Se amestec i ceaa se nclzete la lampa de gaz. Peste 5 minute la periferiile reziduului apare culoare roz ori roie. Sensibilitatea reaciei 3-5 mg barbiturat n prob; - forma acid a barbituricelor : pe o lamel de sticl se depune o pictur extras cloroformic, nlturnd cloroformul la temperatura camerei. Reziduul se dizolv ntr-o pictur de acid sulfuric concentrat. Peste 3-5 minute lng pictura precedent se depune o pictur de ap distilat i se unete cu ajutorul capilarului. Peste 20 minute se observ formarea microcristalelor caracteristice pentru fiecare barbiturat. III. Efectuarea reaciilor specifice asupra barbituricelor : cloroformului) se depune o pictur soluie de clorzinciod. Peste 10-15 minute la microscop se observ formarea cristalelor; - reacia cu cupru piridin : la reziduul uscat pe lamela de sticl se adaug 2 picturi soluie amoniac 10% i 1-2 picturi reactiv cupru piridin. Peste 10 minute la microscop se observ cristale violete caracteristice barbituratului i - reacia cu clorzinciod : pe lamela de sticl la reziduul format (n urma nlturrii

butobarbituratului; - reacia cu complexul cupru-iod : la reziduu format dup nlturarea cloroformului pe lamela de sticl se adaug 1 pictur de reactiv. n prezena barbamilului i etaminalului de sodiu se observ formarea cristalelor specifice; - reacia cu soluie alcoolic de iodur de potasiu : pe lamela de sticl la reziduu format se adaug soluie alcoolic de iodur de potasiu n prezena acidului sulfuric. Peste 5-10 minute se formeaz precipitate cristaline.

10

Control final I. II. Aprecierea rezultatelor obinute dup efectuarea lucrului practic. Controlul proceselor verbale.

Bibliografie 1. Conspectul leciilor. 2. .. , : , 1989 3. .. . :, 1975 4. .. . :,1976

11

LUCRARE DE LABORATOR N 3 Tema : Analiza chimico-toxicologic a preparatelor cu caracter acid i slab bazic Scopul lucrrii : A nsui particularitile izolrii i identificrii din materialul biologic a substanelor cu caracter acid i slab bazic : acidul salicilic, derivaii purinei, pirazolonei. Planul 1. Controlul cunotinelor teoretice. 2. Lucrul de sinestttor asupra izolrii i identificrii substanelor cu caracter slab bazic din materialul biologic. 3. Concluziile lucrrii i controlul deprinderilor practice. 4. Oformarea proceselor verbale.

MATERIAL INFORMATIV Acidul salicilic se folosete n medicin pentru tratarea bolilor de piele. n concentraii mari (10-20%) acidul salicilic provoac distrugerea epidermului. De aceea acidul salicilic se folosete n preparate antimozolice. n concentraii mici din contra provoac restabilirea epidermului, deminuaz funcia glandelor sudoripare. Datorit aciunii dezinfectante (paste i unguente) se aplic pentru tratarea bolilor de piele. Acidul salicilic se folosete ca conservant n fabricarea vinurilor, dulceilor, sucurilor .a. n cantiti nensemnate acidul salicilic se gsete n viine, maline. Dup ptrunderea acidului salicilic n organism se observ , inflamaia mucoasei stomacale, apar dureri n regiunea epigastric, greuri, vom. n practica medical se folosesc srurile acidului salicilic. Metabolismul.Acidul salicilic se elimin parial prin urin sub form de
O C OC6 H9O6 C O OH

OH (1) (2)

OC6 H9O6

12

complexi cu glicin i acid glucuronic. Metaboliii acidului salicilic sunt : o hidroxibenzoil glucuronid (1) i o-carboxibenzoil glucuronid (2) Parial acidul salicilic se metabolizeaz prin hidroxilare, formnd metobolii : - 2,5-dehidroxi acid benzoic (1) - 2,3-dexidroxi acid benzoic (2) - 2,3,5-trioxi acid benzoic (3)
O HO C OH C OH (2) OH (3) O OH HO C O OH

OH (1)

OH

Aspirina n organism formeaz aceeai metabolii.

Pentru extragerea acidului salicilic din material biologic se aplic metoda bazat pe izolarea cu ap acidulat cu acid sulfuric ori acid oxalic. Antipirina(fenazon). n practica medical se aplic pentru tratarea nevralgiilor, reumatismului, horeei, procese inflamatorii .a. ntrete rezistena capilarelor i mpiedic dezvoltarea proceselor inflamatorii. Metabolismul.Antipirina repede se absoarbe n snge din canalul digestiv. Relativ ncet se metabolizeaz n organe i esuturi (50%). 40 % se leag cu acidul glucuronic i se elimin n form de glucuronidCafeina aparine alcaloizilor care se conin n cafea, ceai i n alte plante. n afar de cafein se mai conine teobromin, teofilin. Cafeina se extrage cu solveni organici din mediul acid i bazic. Posed aciune iritant asupra SNC, diminueaz aciunea somniferilor i narcoticelor, majoreaz extracia mduvei din coloana vertebral; excit controlul respiratoriu i vasolocomotor. Metabolismul.Cafeina se absoarbe repede din tractul digestiv. Se descompune n organism prin N-demetilare i oxidare dnd natere la un ir de metabolii, care se

13

elimin prin urin (1-metilxantin, 7-metilxantin, 1,7-dimetilxantin, 1-metil acid ureic, 1,3 metil acid ureic. Subiectele ce stau la baza pregtirii temei 1. Particularitile, izolrii din materialul biologic a derivailor purinei, pirazolonei, acidului salicilic. 2. Identificarea derivailor purinei, pirazolonei, acidului salicilic. 3. Absorbia, distribuia i eliminarea din organism a derivailor purinei, pirazolonei, acidului salicilic. 4. Biotransformarea organismul uman. 5. Cercetarea extractului cu caracter acid prin metoda CSS. Sarcina 1. - De ce derivaii purinei se extrag cu solvenii organici din mediul acid ? - De ce derivaii pirazolonei se extrag cu solveni organici din mediul acid ? - Care sunt principiile metodei de izolare pentru derivaii pirazolonei i purinei ? - Care sunt metodele de purificare a extrasului organic cu coninut de toxici din mediul acid ? Sarcina 2. - Ce reacie este caracteristic pentru identificarea cafeinei, teofelinei i teobrominei? - Care reacie poate fi ndeplinit pentru identificarea derivailor pirazolonei? - Care sunt particularitile metodei CSS n analiza derivailor pirazolonei i purinelor? Ce reactivi se folosesc pentru developare? - Ce reacii specifice cunoatei pentru identificarea preparatelor din aceast grup? - Explicai toxicocinetica i toxicodinamia derivailor pirazolonei i purinei. Sarcina 3. Lucrul practic al studenilor n laborator Metodele de identificare Cercetarea extrasului din mediul acid prin metoda CSS. derivailor purinei, pirazolonei, acidului salicilic n

14

Faza staionar : sorbent silicagel. Sistema de solveni : cloroform aceton 9 : 1. Tehnica de lucru : n camera de cromatografiere se introduc 20-30 ml amestec de solveni. Penrtu saturaia camerei se ofer 10-15 min. Apoi n camer se introduce placa, unde stau depus preparatele de cercetat. Dup cromatografiere i uscare la aer placa se developeaz cu urmtorii reageni : 1. Soluie apoas de clorur de fer 5% (derivaii pirazolonei, acid salicilic) 2. Reactivul Dragendorf (derivaii purinei i pirazolonei) Se calculeaz mrimea Rf i se completeaz tabelul urmtor : Culoarea aprut FeCl3 r-v Dragendorf

Denumirea substanei 1. 2. 3.

Rf

Identificarea prin reacii chimice Acidul salicilic 1. Reacia cu FeCl3 . Pe o hrtie de filtru se depune o pictur din extractul cloroformic i se evapor pn la sec, apoi se adaug o pictur de clorur de fer (III).n prezana acidului salicilic apare culoarea albastru-violet.
O C OH OH O

FeCl3

[(

C -

3+

)3

15

2. Reacia Jorissen. La 3 ml extras cloroformic dup evaporare pn la sec se adaug 2 ml nitrit de sodiu, 1 ml acid acetic glacial i sulfat de cupru la fierbere. n cazul acidului salicilic i acidului acetilsalicilic apare o coloraie roie. 3. Reacia de formare a salicilatului de metil. La nclzirea acidului salicilic cu alcool metilic n prezena acidului sulfuric se obine salicilatul de metil cu miros caracteristic.
O C OH OH C O OCH 3 OH

CH3OH

H2SO4

H2SO4

4. Reacia de formare a tribromfenolului La 5-6 picturi soluie cloroformic dup evaporare pn la sec se adaug 4 -5 picturi de ap i alcool etilic, se amestec i se adaug 2 -3 picturi soluie saturat ap de brom. La prezena acidului salicilic se formeaz precipitat alb.
O C OH OH Br OH Br

+ 3 Br2
Br

3HBr

+ CO2

Cafeina : 1. Formarea murexidei

La 5-6 picturi soluie cloroformic de cercetat se depune n ceaa de porelan i solventul se evapor fr nclzire. La rezidiul format se adaug 1 ml soluie saturat de ap de brom. Se evapor la sec. La reziduu se adaug o pictur soluie amoniac 25%. La prezena cafeinei ori teobrominei apare culoarea purpurie-violet. O
O O H3C N N CH3 H2O2 H3C O H3C H N O N CH OH O

+
O N CH3 O

Cafein

CH3

3 1,3-Dimetilalloxan1,3-Dimetil acid dialuronic

16

O N N N CH3 O CH3

+ NH3

H3C

N CH3

O O NH4

acidul tetrametil purpuric rou-purpuriu Antipirina Reacia de formare a nitrozoantipirinei. La 2 ml extract cloroformic dup evaporare se adaug 2 ml Na2NO2, apoi se adaug 10 picturi soluie diluat H2SO4. Apare culoarea verde-izumrud. Reacia cu FeCl3 .2 ml extras clotroformic se evapor la sec. Se adaug 2 ml
CH3 2 O N N C6 H5 CH3 + 2 NaNO2 + H2SO4 O N C6 H5 O N N CH3 CH3

+ Na2SO4 + 2 H2O

CH3 O N N C6 H5 + 2 FeCl3 CH3 O N C6 H5 N

CH3 . 2 FeCl3 CH3

ap i 1 pic FeCl3. Apare culoare roie intens.

17

Controlul total I. II. Aprecierea rezultatelor obinute dup efectuarea lucrului practic. Controlul proceselor verbale. Bibliografie 1. Conspectul leciilor. 2. .. , : , 1989 3. .. . :, 1975 4. .. . :,1976