8 Chimie

270
CHIMIE GENERAL I FARMACEUTIC

TEHNOLOGIA, ANALIZA I STANDARDIZAREA SOLUIEI IZOFURAL 0,05%
1
Livia Uncu,
2
Olga Staver,
1
Vladimir Valica,
3
Diana Guranda,
3
Viorel Prisacari
1
Centrul tiinific n domeniul Medicamentului, LASCM
2
Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic,
3
Laboratorul Infecii intraspitaliceti

Summary
Izohidrafural is researched with the purpose to create the rational pharmaceutical form for concrete
situations (solution) and elaboration of NAD for this medicinal form. There was elaborated the optimal
composition of solution, methods of analysis and standardization of it. There was made a research on the
stability and determination of storage term.
Rezumat
Izohidrafuralul este cercetat pentru crearea unor forme farmaceutice raionale pentru situaii
concrete (soluie) i elaborarea DAN pentru aceste forme medicamentoase. S-au elaborat compoziia
optimal a soluiei, metodele de analiz i standardizare pentru aceasta. S-a cercetat stabilitatea i s-a
determinat termenul de valabilitate.

Introducere
Astzi este greu de conceput terapia antiinfecioas fr utilizarea unui numr imponant
de remedii antibacteriene. Devine foarte important lrgirea spectrului tratamentului
medicamentos a bolilor infecioase, deoarece multitudinea remediilor existente, destul de
efective n prezent nu sunt scutite de diferite reacii adverse. Derivaii 5-nitrofuranului nu
constituie o excepie. n ultimile decenii a sporit interesul fa de acest grup de medicamente.
Ne-am propus elaborarea unei forme farmaceutice cu coninut de Izohidrafural (IHF). Este
cunoscut faptul, c determinarea calitii medicamentelor nu este posibil fr studierea
complex a proprietilor substanelor, elaborarea unor metode de analiz i standardizare
sensibile, exacte, rapide i specifice.
Se propune utilizarea Izohidrafuralului sub form de soluie de uz extern ca remediu
antibacterian n diferite stri patologice.
Materiale i metode
Cercetrile s-au efectuat pe trei serii de substan. Pentru elaborarea metodelor fizici-
chimice de analiz a fost utilizat spectrofotometru UV-VIS Perkin Elmer Lambda-40,
fotocolorimetrul CFC-3.
Rezultate
Reieind din particularitile farmacologice, a fost selectat concentraia de principiu
activ de baz: 0,05 %. Aceste concentraii asigur exercitarea efectului. Deoarece IHF nu se
dizolv n ap, n calitate de solveni s-au utilizat PEG-400 i propilenglicol.
n urma cercetrilor s-a constatat, c formula elaborat este optimal i corespunde
exigenelor FR X pentru soluii (tabelul 1).
A fost elaborat tehnologia de fabricaie a soluiei Izohidrafural 0,05%. Schema fluxului
tehnologic este prezentat n figura 1.
Se msoar cu cilindrul gradat volumele calculate de polietilenglicol, propilenglicol i
ap purificat. Izohidrafuralul se tritureaz la mojar, apoi se adaug polietilenglicolul n poriuni
mici la o amestecare continu, pn cnd se obine o suspensie fin i omogen. Suspensia
obinut se trece cantitativ ntr-un vas dotat cu malaxor, unde se adaug cantitile calculate de
propilenglicol i ap purificat. Soluia se amestec bine pn la obinerea unui amestec omogen.

271
Tabelul 1
Formula de fabricaie a soluiei Izohidrafural 0,05%

Produsul farmaceutic este utilizat n calitate de remediu antimicrobian de uz extern.
Soluia Izohidrafural 0,05% este form farmaceutic original. Nu este descris n Farmacopeele
altor ri.
La elaborarea DTN pentru forma farmaceutic s-a inut cont de cerinele Farmacopeei de
Stat ed. XI, a Farmacopeei Romne i alte acte normative, care reglementeaz ordinea elaborrii
DTN pentru forme medicamentoase .
Descrierea preparatului este apreciat n baza cercetrii aspectului exterior a trei serii,
obinute conform procesului tehnologic descris anterior. Probele analizate au prezentat un lichide
transparente, de culoare galben, fr miros, uleioase la pipit, vscoase.
Identificarea preparatului s-a petrecut prin prin metode chimice pentru grupele
funcionale specifice (tabelul 2).
Tabelul 2
Rezultatele reaciilor de identificare a Izohidrafuralului n soluie
Reagent Efect Sensibilitatea,g/ml
Sol.NaOH 0,1 M Rou-oranj 100
Dimetilformamid Galben-cafeniu 100
Nitroprusid de sodiu Rou-ntunecat 300
Reactivul Neesler Precipitat cafeniu 200
Vanadat de amoniu Rou treptat trece n
albastru-verzui
200
Perhidrol i NaOH
30%
Decolorarea soluiei 200

pH-ul se determin prin metoda poteniometric. Valoarile pH-ului fiind incluse ntre
valorile 7,0 - 8,0.
Densitatea se determin conform prevederilor FR IX.C.3, p.987 fiind de la 0,850 pn
la 1,2 g/ml.
Uniformitatea volumului de soluie s-a determinat conform cerinelor OCT 64-492-85
Devieri admisibile de la volumul nominal pentru preparatele medicamentoase industriale.
Pentru dozare este elaborat metoda spectrofotometric n VIS n baza reaciei de culoare
cu soluia de NaOH de 0,1M. 10 ml soluie de analizat se trec cantitativ ntr-un balon cotat cu
capacitatea de 25 ml, la care se adaug 10 ml ap purificat i 0,1 g clorur de sodiu. Amestecul
obinut se nclzete pe baia de ap pn la dispariia cristalelor clorurii de sodiu. Dup care se
aduce pn la cot cu ap purificat (soluia A). La 0,5 ml soluie A se adaug 7,5 ml ap
Denumirea materiei prime Cantitatea
1 Izohidrafural 0,05 g
2 PEG- 400 60 ml
3 Propilenglicol 20 ml
4 Ap purificat pn la 100 ml
TOTAL 100,0 ml
272
purificat i 2 ml soluie de hidroxid de sodiu de 0,1 mol/l. Dup 20 min se msoar absorbana
acestei soluiei la 410 2 nm, la spectrofotometru n cuv cu grosimea 1cm.

Figura 1. Schema fluxului tehnologic de preparare a soluiei Izohidrafural 0,05%.
Pregtirea spaiilor de
producere i a utilajului
Cntrirea
Izohidrafuralului
Incorporarea izohidrafuralului n
polietilenglicol sub form de suspensie
Amestecarea suspensiei cu propilenglicol i
ap purificat
Condiionarea soluiei n
flacoane
Etanarea i nchiderea
flacoanelor. Etichetarea.
Ambalarea flacoanelor n
cutii colective
PRODUS FINIT
Depozitare n carantin
Splarea i
uscarea
flacoanelor
Controlul calitii
Msurarea volumului necesar
de polietilenglicol
Controlul
calitii
Dopuri, cpcele, etichete
Cutii de carton, etichete
Depozitare produs finit
Msurarea volumului necesar
de propilenglicol i ap
purificat
273

Paralel se determin absorbana soluiei standarde de IHF.
Soluie de referin a servit amestecul din 8 ml ap purificat i 2 ml soluie de hidroxid
de sodiu de 0,1 mol/l.
Coninutul izohidrafuralului n substan s-a calculat conform formulei:
A
1
a 0,5 25 10
X = ----------------------------- , n care
A
2
m
a
250 10 10 0,5

X - cantitatea de izohidrafural n proba de analizat (%);
A
1
- absorbana soluiei probe;
A
2
absorbana soluiei standard IHF;
a - masa de substan standard IHF;
m
a
- masa de substan analizat IHF
Prepararea soluiei standarde de IHF
0,05g (mas exact) standard de IHF se dizolv n 150 ml ap purificat ntr-un balon
cotat de 250 ml, la care se adaug 2 g de clorur de sodiu, i se nclzete pn la fierbere pn la
dizolvarea substanei. Dup rcirei se aduce pn la cot cu acelai solvent (sol. A). La 0,5 ml
soluie A se adaug 7,5 ml ap purificat i 2 ml soluie de hidroxid de sodiu de 0,1 mol/l. Dup
20 min se msoar absorbana acestei soluiei la 410 2 nm, la spectrofotometru n cuv cu
grosimea 1cm. Coninutul de IHF n proba analizat trebuie s fie cel puin 0,048 % i cel mult
0,056 %.
Pentru cercetarea stabilitii i termenului de valabilitate a Soluiei Izohidrafural 0,05% s-
a petrecut pstrarea experimental prin metoda Degradrii accelerate la temperaturi de 40
0
C i
60
0
C. Termenul de valabilitate stabilit este 2 ani.
Concluzii
1. S-a stabilit componena optimal a soluiei Izohidrafural 0,05%. Tehnologia descris a
stat la baza elaborrii regulamentului tehnologic pentru producerea soluiei.
2. S-a efectuat analiza i standardizarea formei farmaceutice prin elaborarea documentelor
analitice de normare a calitii.
Bibliografie
1. Farmacopeea Romn, Ed. a X-a, Editura medical, Bucureti,2000;
2. Farmacopeea European, Ed. a IV-a, 2002.
3. Farmacopea de Stat, ed. XI, V.1 i 2, 1987, 1989.

TEHNOLOGIA I DETERMINAREA DISPONIBILITII FARMACEUTICE
PENTRU UNGUENTELE CU IZOHIDRAFURAL
1
Livia Uncu,
2
Nicolae Ciobanu, Cristina Ciobanu,
3
Viorel Prisacari,
1
Oxana Vslouh.
1
2
Catedra Tehnologia medicamentelor
3
Laboratorul Infecii intraspitaliceti

Summary
The technology and pharmaceutical availability determination of izohidrafural unguent
Izohidrafural is researched with purpose to create the rational pharmaceutical form for external
application (unguent). The behaviour of active substance in different compositions of auxiliary
274
substances for unguent preparation was researched. There was elaborated the optimal composition and
the pharmaceutical availability of this form was researched.
Rezumat
Izohidrafuralul este cercetat pentru crearea unor forme farmaceutice raionale pentru uz extern
(unguent). S-a studiat comportamentul principiului activ n diferite formule de excipieni pentru
prepararea unguentului. A fost elaborat compoziia optimal i studiat disponibilitatea
farmaceutic a acestei forme farmaceutice.

Introducere
n patologia uman infeciile septico-purulente, provocate de diverse microorganisme
patogene, att gram-negative, ct i gram-pozitive, ocup un loc aparte. Ele se deosebesc prin
incidena nalt i consecine grave, care duc direct sau indirect la majorarea brusc a valorii
tratamentului precum i a pagubei economice morale i sociale. Totodat, tratamentul infeciilor
septico-purulente constituie o problem dificil, cauzat de achiziionarea rezistenii agenilor
cauzali fa de antibiotice cu utilizare larg n practica medical i preurile nalte a remediilor
antibacteriene importate.
Anume din aceste considerente este foarte actual obinerea unor noi clase de compui
organici, cu aciune benefic asupra organismului. Izohidafuralul (IHF) este un derivat de 5-
nitrofuran, caracterizat printr-un ir de avantaje, ca: stabilitate ndelungat; manifestarea rapid a
aciunii; lipsa proprietilor iritante, cancerigene, embriotoxice; activitate antibacterian nalt;
toxicitate de 6-7 ori mai joas dect nitrofuralul. Poate fi utilizat ca remediu antibacterian n
diferite stri patologice.
Ne-am propus elaborarea unei forme farmaceutice de uz extern cu coninut de
Izohidrafural.Forma medicamentoas semisolid unguent se utilizeaz pe larg pentru tratarea
bolilor dermatologice, chirurgicale, n obstretic i ginecologie, oftalmologie, proctologie
datorit eficacitii i comoditii aplicrii, precum i unei biodisponibiliti acceptabile a
principiului activ.
Materiale i metode
Cercetrile s-au efectuat pe trei serii de substan activ Izohidrafural, fiind utilizai
diferii excipieni i substane auxiliare, cum ar fi: Polietilenglicol, Vaselina, Alcool stearic,
Propilenglicol, Glicerina, Tween 80, Laurilsulfatul de sodiu, Alcool cetilic. Pentru cercetarea
disponibilitii farmaceutice s-a utilizat aparatul pentru determinarea vitezei de cedare a
principiului activ prin metoda de dializ Solvotest M, spectrofotometru UV-VIS Perkin
Elmer Lambda-40, fotocolorimetrul CFC-3, Membran Milipore 0,22m, Dimetilformamid ca
mediu de dizolvare.
Rezultate
Activitatea antibacterian nalt a Izohidrafuralului permite utilizarea unor concentraii
destul de mici de principiu activ n forma farmaceutic. n scopul formulrii unguentului a fost
studiat concentraia 0,1%, care asigur o disponibilitate bun i exercitarea efectului
farmacologic maxim. Gama larg de excipieni ofer posibilitatea utilizrii lor raionale, n
scopul dirijrii vitezei i intensitii efectului n funcie de scopul terapeutic urmrit.
Izohidrafurarul reprezint o pulbere maro, pulverulent, insolubil n ap. din care cauz
s-au precutat unguentele de tip suspensie cu utilizarea de excipieni i emulgatori
corespunztori.
Pentru a selecta formula optimal a unguentului IHF, a fost ncorporat n excipieni de
natur diferit. S-au cercetat patru compoziii ce conin baze de unguent de tip emulsie U/A i
A/U.
Pentru formulare n compoziia excipientului complex s-au utilizat:
Polietilenglicol, care prezint o substan onctuoas, lavabil, care nu irit pielea, posed o
bun capacitate de ntindere i aderen fa de piele, este indiferent din punct de vedere
fiziologic i nu este invadat de microorganisme posendnd chiar aciune bactericid. PEG-
urile pot substitui grsimile i i-au gsit a larg aplicare n dermatologie, deoarece sunt
275
neiritante pentru piele, au o bun capacitate de ntindere fr a influena activitatea glandelor
sudoripare i sebacee, nu obtrueaz porii pielii.
Vaselina, care prezint o mas alb sau alb-glbuie este omogen, onctuoas la pipit,
filant, translucid. Excipientul se caracterizeaz prin stabilitate i conservabilitate
indefinit, inerie chimic fa de agentii oxidai; terapeutic vaselina nu prezint afinitate fa de
grsimea epidermului.
Alcool stearic compus organic solid de culoare alb, fr miros, insolubil n ap, solubil n
alcool, care posed proprieti emoliente i datorit acestui fapt are loc potenarea aciunea
substanei active.
Alcool cetilic Hexadecanol Compus organic solid de culoare alb, fr miros, insolubil n
ap, solubil n alcool. Posed proprieti emoliente datorit acestui fapt are loc potenarea
aciunii substanei active.
Propilenglicol lichid incolor, vscos, higroscopic, cu gust dulce, volatil i foarte stabil,
miscibil cu apa, acetona. Este un bun solvent pentru substanele medicamentoase. Are o
higroscopicitate superioar glicerinei, reinind astfel apa, proprietate pe care nu i-o modific la
variaii de umiditate ale mediului, protejnd astfel unguentul.
Glicerina lichid vscos, incolor, fr miros, solubil n ap, alcool, insolubil n grsimi, cu gust
dulce, higroscopic, utilizat pe larg n formulrile farmaceutice. La adugarea glicerinei n unguent
are loc mbuntira elasticitii acestuia.
Tween 80 lichid cu nuan pal, cu diferit grad de vscozitate, bine solubili n ap. Se
utilizeaz n formele medicamentoase ca emulgator, stabilizator i diluant.
Laurilsulfatul de sodiu pulbere alb, fr miros specific, solubil n ap. Este o substan
tensioactiv. Se utilizeaz n practica farmaceutic ca agent de umectare pentru mbuntirea
calitilor tehnologice i terapeutice a diferitelor preparate. Are proprieti de stabilizator,
emulgator; are un rol important la difuzia membranar a pielei i mucoaselor, reduce timpul de
dezagregare a componentelor unguentului.
Excipienii de tip U/A sint uor de aplicat, cedeaz rapid substana activ i n unele cazuri
favorizeaz penetrarea. n plus, se ndeprteaz uor prin splare i de aceea se mai numesc
baze lavabile.
Bazele emulsive de tipul A/U au o consistenl bun, ce asigur caliti avansate de intindere
i aderare de esuturi. Ele conin o faz apoas ncorporat in faza gras, datorit proprietilor
emulsive ale emulgatorilor. Posed capacitate de penetrare transepidermic i cedare a
substanelor medicamentoase, incorporare redus, de aceea se utilizeaz ca excipieni pentru
unguentele cu aciune protectoare i de suprafa.
Pentru selectarea formulei optimale a unguentelor cu IHF s-au preparat urmtoarele
prescripii:

Unguent pe baz emulsiv U/A
Nr.1 : Izohidrofural 0,1g
Polietilenglicol 400 - 18,3g
Alcool stearinic 31,2g
Glicerin 27,5g
Laurilsulfat de sodiu- 9,12
Ap purificat 13,7ml

Vaselin alb 25,0g
Alcool stearilic 25,0g
Propilenglicol 12,0g
Laurilsulfat de sodiu- 1,0g
Ap purificat - 37 ml
Unguent pe baz emulsiv A/U
Tween 80 - 10,0g
Alcool cetilic 25,0g
Vaselin - 45,0g
Ulei de vaselin 20,0g
Ap purificat 35,0 ml

Tween 80 - 7,0g
Alcool cetilic - 17,0g
Vaselin alb - 25,0g
Glicerin 15,0g
Ap purificat -36,0ml

276
Tehnologia unguentului emulsie cu Izohidrofural (Comp. Nr.1).
Forma medicamentoas semisolid prescris prezint un unguent emulsie cu coninut de
izohidrofural, greu solubil n ap, excipieni hidrofili Polietilenglicol 400, substan tensioactiv Lauril
sulfat de sodiu, emulgatori alcool stearinic, glicerina.
ntr-o patentul de porelan se introduce 31,2g de alcool stearinic, care se topete la baia
de ap la temperatura 55
0
58
0
C, apoi se adaug 9,12g laurilsulfat de sodiu i se amestec
minuios, dup care se adaug 18,3g de PEG 400, 27,5g glicerin sub agitare continu. Dup
emulsionare,amestecul se rcete pn la temperatura 40
0
45
0
C.
0,1g Izohidrafural se tritureaz la mojar cu 3-5 picturi de ap purificat fierbnd.
La substana triturat din mojar se adaug n 2- 3 reprize restul apei purificate.
Soluia substanei medicamentoase se incorporeaz n baza de unguent topit i se omogenizeaz.
Amestecul se trece n recipient din sticl ntunecat cu capacitatea 100g.
Forma medicamentoas prezint un unguent-emulsie cu coninut de izohidrafural,
excipieni hidrofobi vaselin alb, substan tensioactiv Lauril sulfat de sodiu, emulgatori
alcool stearinic, propilenglicol.
ntr-o patentul de porelan se ntroduce 25g de alcool stearinic care se topete la baia de
ap la temperatura 55
0
58
0
C, apoi se adaug 25g vaselin alb, 1g lauril sulfat de sodiu i se
amestec minuios, dup care se adaug propilenglicol sub agitare continu. Dup emulsionare,
amestecul se rcete pn la temperatura de 40
0
45
0
C.
0,1g Izohidrafural se tritureaz la mojar cu 3-5 picturi de ap purificat fierbnd.
La substana triturat din mojar se adaug n 2- 3 reprize restul apei purificate.
Soluia substanei medicamentoase se adaug la baza de unguent topit i se
omogenizeaz.
excipieni hidrofobi vaselin, ulei de vaselin, emulgatori alcool cetilic, tween 80.
ntro patentul de porelan se ntroduce 25g de alcool cetilic care se topete la baia de
ap la temperatura 50
0
55
0
C, apoi se adaug 45g vaselin alb, 20g de ulei de vaselin i se
amestec minuios, dup care se adaug tween 80 sub agitare continu. Dup emulsionare,
amestecul se rcete pn la temperatura 40
0
45
0
C.
0,1g Izohidrafural se tritureaz la mojar cu 3-5 picturi de ap purificat fierbnd. La
substana triturat se adaug la restul apei purificate.
La baza de unguent topit se adaug soluia substanei medicamentoase i se
omogenizeaz.
excipieni hidrofobi vaselin alb, emulgatori alcool cetilic, tween 80, glicerin.
0,1g Izohidrafural se tritureaz la mojar cu 3-5 picturi de ap purificat fierbnd. La
substana triturat se adaug restul apei purificate.
La baza de unguent topit se adaug soluia substanei medicamentoase se omogenizeaz.
Schema fluxului tehnologic de fabricare a unguentelor cu IHF 0,1% este prezentat n
Figura 1 .
Produsul farmaceutic poate fi utilizat n calitate de remediu antibacterian n diferite stri
patologice.
Este bine cunoscut faptul c disponibilitatea farmaceutic a substanei medicamentoase
din diverse forme este influenat n mare msur i de natura excipientului.
Pentru aprecierea compoziiei optimale i a excipienilor, care ar permite obinerea unui
unguent cu aciune terapeutic eficace i efecte secundare minime s-a realizat cedarea IHF din
277
formele elaborate iar apoi s-a determinat valorile disponibilitii farmaceutice, constanta vitezei
de dizolvare i timpul de njumtire n formele medicamentoase preparate.

Figura 1. Schema fluxului tehnologic de fabricaie a unguentelor cu IHF
Evaluarea disponibilitii unguentelor cu IHF 0,1% a avut ca obiectiv - determinarea
influenei bazei de unguent (emulsie U/A; A/U) i a modului de incorporare a izohidrafuralului
asupra eliberrii acestuia in vitro. Pentru dozarea IHF n scopul evalurii disponibilitii
farmaceutice din unguente s-a utilizat metoda spectrofotometric n VIS.
Tehnica de lucru: pe 4 tuburi de dializ se aplic membrana Milipore pe una din deschideri
i se fixeaz. Se introduce n fiecare tub cte 1 g de unguent cu grij pentru a evita bulele de aer.
Se fixeaz vasele de difuzie pe un stativ cu ajutorul clemelor de fixare. Tuburile se introduc n
vasele de sticl n care se adaug 50 ml dimetilformamid, coborndu-le cu 1 cm sub nivelul
lichidului.
La intervale egale de timp pe parcursul a 90 min se iau probe a cte 5 ml din fiecare vas. Se
msoar absorbana soluiei la spectrofotometru, folosind ca soluie de control
dimetilformamid.
Rezultatele dozrii IHF n dializat sunt indicate n tabelul 1 i figura 2.
Tabelul 1
Valorile concentraiilor IHF n funcie de timpul dializei

Modelul N1

Modelul N2

Modelul N3

Modelul N4
Pregtirea substanei medicamentoase
Obinereabazeideunguent
Pregtireaspaiuluideproducereiautilajului
Incorporarea substanei medicamentoase n excipient
Emulsionareaexcipientului
Standardizare
Pregtirearecipientelor
Omogenizare
Etichetareiambalare Produsfinit
278

Figura 2. Graficul cedrii principiului activ din unguente n funcie de timp

Dup cum se observ din rezultatele expuse n tabelul 1i din figura 2, cedarea maxim are
loc din compoziia Nr 4.
Timpul de njumtire sau perioada de semielimenare a preparatului, notat convenional
prin t, este timpul eliminrii din organism a unei jumti din doza administrat i absorbit i
care corespunde timpului de reducere de dou ori a concentraiei plasmatice a preparatului.
Cunoaterea timpul de njumtire este important pentru stabilirea intervalelor dintre
administrri, determinarea timpului n care concentraia preparatului n snge la suspendarea
tratamentului scade la zero, constatarea instalrii unei concentraii constante a preparatului n
fluxul sanguin la administrarea repetat a acestuia. S-a calculat constanta vitezei de dizolvare i
timpul de njumtire pentru toate compoziiile studiate. Valorile obinute sunt redate n tabelul
2.
Tabelul 2
Valorile constantei vitezei de dizolvare i a timpului de semidializ
a IHF din unguente

Denumirea K T
Comp. Nr 1 K= 2,06 10
-2
33.6 min
Comp. Nr 2 K= 2,54 10
-2
29.2 min
Comp. Nr 3 K= 1,94 10
-2
35,7 min
Comp. Nr 4 K= 2,66 10
-2
26,0 min

Timpul,
min
C% C% C% C%
15 0,0418 0,0424 0,0163 0,0254
30 0,0486 0,0568 0,0508 0,0448
45 0,0594 0,0613 0,0637 0,0681
60 0,0574 0,0683 0,0708 0,0876
90 0, 0689 0,0697 0,0712 0,0962
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0 15 30 45 60 90
t, min
C, %
C, % I comp.
C, % II comp
C, % III comp
C, % IV comp
279
Din tabel este reliefat faptul, c cele mai nalte valori ale constantei vitezei de dizolvare
sunt caracteristice pentru unguentul cu compoziia Nr. 4 (alcool cetilic, vaselin, glicerin, tween
80). Pentru aceiai compoziie este i cea mai scurt perioad de njumtire (26 minute).
Concluzii
1. Ca rezultat al ncorporrii IHF n excipieni de natur diferit s-au cercetat patru compoziii,
ce conin baze de unguent de tip emulsie U/A i A/U. Rezultatele cercetrilor au permis
selectarea compoziiei optime a unguentului cu IHF.
2. Evaluarea disponibilitii farmaceutice a compoziiilor elaborate denot cedarea maxim a
principiului activ din compoziia patru, pentru care poate fi elaborat documentaia analitic
de normare a calitii.
Bibliografie
1. Burgot G., Burgot J.L., Methodes Instrumentales dAnalyse Chimique et Applications
Methodes chromatographiques, electrophoreses et methodes spectrales, Editions Medicales
Internationales, 2004.
2. Grecu I. Structura cristalin i biodisponibilitatea substanelor medicamentoase. Bucureti.
1984.
3. Leucu S.E.- Biofarmacie i farmacocinetic Editura Didactic, Cluj-Napoca, 2002.

ELABORAREA METODEI SPECTROFOTOMETRICE DE DOZARE A
METIFERONULUI
Iurie Tihon,

Livia Uncu, Vladimir Valica, Oxana Vslouh, Roman Ciobanu
Laboratorul Analiz, Standardizare i Controlul medicamentului, CDM

Summary
The elaboration of spectrophothometric method for
quantitative determination of metiferon
The new component from izotioureic derivative Metiferon is researched. The UV
spectrophotometric method of qualitative and quantitative determination for this substance was
elaborated. There were respected all control parameters: linearity, selectivity, exactitude and
precision. This method has been included in project of AND for this pharmaceutical product.
Rezumat
Este cercetat un nou compus din grupul derivailor izotioureici - Metiferonul. A fost
elaborat metoda spectrofotometric de identificare i dozare pentru aceast substan. S-au
respectat parametrii de control: linearitatea, selectivitatea, exactitatea i precizia. Aceast metod
a fost inclus n proiectul DAN pentru acest produs farmaceutic.

Introducere
Metiferonul este un derivat izotioureic cu coninut de fosfor, cu aciune vasoconstrictoare,
posed un efect antihipotensiv marcat n condiii obinuite i activitate antihipotensiv nalt pe
fundalul de aciune al
1
adrenoblocantelor. Spre deosebire de simpatomimetice nu stimuleaz
sistemul simpatic, nu provoac tahicardie, nu modific echilibrul acido-bazic i electrolitic i nu
cauzeaz hipotensiune secundar. Utilizarea lui este raional att pentru prevenirea scderii
presiunii arteriale ct i pentru nlturarea dereglrilor hemodinamicii sistemice. mpreun cu
ceilali derivai din acest grup, metiferonul poate fi utilizat cu succes n terapia antihipotensiv de
urgen. Elaborarea metodelor de analiz calitativ i cantitativ va permite standardizarea
acestei substane i ntocmirea documentelor analitice de normare a calitii.
Spectrofotometria de absorbie n ultraviolet i vizibil (UV-VIS) este considerat ca una din
metodele clasice de analiz a medicamentelor, dei importana ei nu s-a diminuat n timp. Mai
mult chiar, prin cuplarea ei cu alte metode de analiz, domeniile de aplicaii ale
spectrofotometriei continu s creasc, popularitatea ei se explic n primul rnd prin faptul, c
280
este o tehnic de analiz simpl, rapid i relativ ieftin, iar numrul impuntor de lucrri de
specialitate din ultimii ani demonstreaz interesul cercettorilor fa de aceast metod.
Materiale i metode
A fost cercetat substana Metiferon en gross (trei serii de produs). Pentru elaborarea
metodei spectrofotometrice de analiz a fost utilizat spectrofotometrul Agilent Technologies 95-
00.
281
Rezultate
Spectrofotometria de absorbie n ultraviolet (UV) s-a utilizat pentru identificarea
Metiferonului substan.
Au fost determinate spectrele UV a soluiilor apoase n regiunea 190-320 nm. Spectrul
obinut este artat n figura 1.

Figura 1. Spectrul UV de absorbie al soluiei apoase Metiferon 20 g/ml

S-a examinat posibilitatea folosirii acestei metode specifice pentru dozarea Metiferonului
n substan.
Soluia etalon a fost preparat din Metiferon recristalizat consecutiv din ap bidistilat. A
fost obinut Metiferon cu puritate 99,87%, prezentndu-se dup uscare ca i o mas cristalin
acicular, cu punctul de topire de 140,6
0
C. Puritatea s-a stabilit prin cromatografie de lichide de
nalt presiune.
Soluia etalon s-a preparat cu concentraia 20 g/ml n ap bidistilat.
Tehnica de preparare: 0,1 g Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniu (Metiferon substan
standard) se trec ntr-un balon cotat cu capacitatea de 100 ml, se dizolv n 50 ml ap
purificat, se completeaz volumul soluiei cu acelai solvent pn la cot i se omogenizeaz. 1
ml soluie obinut se trec ntr-un balon cotat cu capacitatea de 50 ml, se completeaz volumul
soluiei pn la cot cu ap purificat i se omogenizeaz.
S-a obinut spectrul n domeniul 190-300 nm, referin fiind apa bidistilat. Pe spectru se
observ dou maxime de absorbie, n regiunea 197-203 nm i 219-221 nm. Reieind din faptul,
c la 200 nm absorb lumina mai multe substane, inclusiv i impuritile, a fost aleas n calitate
de lungime de und analitic =221nm.
Pentru stabilirea intervalului de concentraii n care se respect legea absorbanei s-a
construit diagrama de etalonare. Pentru aceasta ntr-un balon cotat de 50 ml s-a preparat soluia
etalon de baz din 0,0500 0,0001g Metiferon de dou ori recristalizat i ap bidistilat pn la
cot. Soluiile etalon de lucru s-au preparat prin diluarea soluiei de baz ntr-o regresie ptratic.
Sau obinut astfel 6 soluii cu concentraiile de 1,4931; 3,031; 6,185; 12,410; 25,041; 50,107
g/ml. S-au obinut spectrele de absorbie ale acestor soluii. S-a urmrit variaia lungimii de
und la absorbana maxim i valoarea maximelor de absorban (figura 2).
n urma determinrilor s-a constatat limita de detecie 0,3700 0,02 g/ml; eroarea relativ
a determinrilor variaz de la 0,31% la concentraii 40 g/ml, pn la 3% la concentraia
1,5625 g/ml. Sensibilitatea metodei este de 0,3 g/ml, iar domeniul de liniaritate este cuprins
ntre concentraiile de 3 i 50 g/ml. Absorbana specific molar la 20
0
C este de A
%
cm
= 250
[ua./cm].
n baza cercetrilor efectuate a fost elaborat tehnica de dozare spectrofotometric a
Metiferonului : 0,05g (mas exact) Metiferon se plaseaz ntr-un balon cotat de 50 ml, se
adaug 20 ml ap purificat i se nclzete pe baia de ap pn la solubilizarea complet a

190.0 200 220 240 260 280 300 320 330.0
0.00
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.80
nm
D
282
0,0125
0,0698
0,1401
0,2114
0,2699
0,3498
0
0,1
0,2
0,3
0,4
1,4931 3,031 6,185 12,41 25,041 50,107
C, g/ml
A
substanei, apoi se aduce pn la cot cu acelai solvent (soluia A). 1ml soluie A se dilueaz cu
ap purificat ntr-un balon cotat de 50 ml (soluia B).

Figura 2. Curba de etalonare a soluiei apoase de Metiferon

Se citete absorbana soluiei B la spectrofotometru, la lungimea de und 221 nm, n cuva
cu grosimea stratului 10 mm, utiliznd n calitate de soluie de compensare apa purificat.
Paralel se citete absorbana soluiei etalon cu concentraia 20 g/ml n ap bidistilat.
Coninutul Metiferonului n substan s-a calculat conform formulei:
A
x

*
m
o

*
1
*
50
*
50
*
100 A
x

*
m
o

*
50
X = --------------------------------- = ----------------- ,
A
o

*
m
x

*
100
*
50
*
1 A
o

*
m
x

n care:
A
x
absorbana soluiei prob de analizat;
A
o
absorbana soluiei etalon de Metiferon;
m
o
masa probei de Metiferon utilizat la prepararea soluiei etalon, g;
m
x
masa probei de analizat, g;
Coninutul de Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniu (Metiferon) n preparat trebuie s fie cel
puin 99,0 % i cel mult 101,0 %.
S-a determinat selectivitatea metodei de dozare prin analiza unei probe martor. La
lungimea de und de 221 nm corespunztoare determinrii Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniului,
proba martor a condus la o valoare a absorbanei de 0,001.
Precizia metodei de dozare se apreciaz prin coordonarea rezultatelor mai multor serii de
determinri repetate, efectuate pe aceiai prob sau pe mai multe eantioane prelevate dintr-o
prob mic omogen. Din punct de vedere cantitativ, precizia se exprim n general prin abaterea
standard i abaterea relativ standard.
n cazul metodei de dozare a Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniu s-au analizat trei probe
independente, pentru fiecare din acestea efectundu-se cte cinci determinri conform metodei
descrise la dozare. S-a determinat valoarea medie global 99,97%; abaterea relativ global
este 0,036%; abaterea relativ standard (RSD) este 0,06%. Condiia de admisibilitate prevede, c
o metod poate s fie considerat reproductiv dac RSD2. Dup cum se observ, aceast
condiie este ndeplinit, aa dar metoda este precis (tabelul 1).
Concluzii
1. S-au stabilit condiiile optime de identificare i dozare a Metiferonului prin metoda
spectrofotometric. Metoda este exact i reproductibil, erorile fiind n limitele admise
de exigenele controlului medicamentelor pentru substana activ.
2. Metoda spectrofotometric elaborat este inclus n proiectul DAN pentru Metiferon en
gross la compartimentele identificare i dozare.
283
Tabelul 1
Evaluarea statistic a rezultatelor dozrii
Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniului n substan

Seria X%
X
T S S
2
S
x

x
, %
0100
99,99
99,98
99,95
100,01
99,96
99,98 2,78 0,024 0,00058 0,011 0,03 0,040
0200
99,89
99,91
99,90
100,02
100,03
99,95 2,78 0,069 0,00475 0,031 0,090 0,092
0300
99,97
100,05
100,04
99,91
99,87
99,97 2,78 0,035 0,00125 0,016 0,044
0,040
Media
0,06

Bibliografie
1. Balaescu C., Metode spectrofotometrice aplicate n controlul medicamentelor, Editura
medical, Bucureti,1996;
4. L. Uncu, V .Valica, V.Ghicavi, Elaborarea metodei spectrofotometrice de dozare pentru
difetur i profetur, Anale tiinifice a USMF Nicolae Testemianu, Chiinu, 2001.

UTILIZAREA CROMATOGRAFIEI PE STRAT SUBIRE N ANALIZA
METIFERONULUI
2
Iurie Tihon,
1
Livia Uncu,
1
Vladimir Valica,
3
Victor Ghicavi,
1
Olga Suvorchina.
1
2
3
Catedra Farmacologie i Farmacologie clinic

Summary
The use of the thin layer chromatography in analysis of metiferon
The thin layer chromatography method for identification and specifically impurities
determination in substance Metiferon was elaborated. The chromatographic separation was
realized in the solvents system isopropyl alcohol chloroform ammoniac concentrate (4:8:1).
The elaborated method was included in MFT project of Metiferon en gross.
Rezumat
A fost elaborat metoda cromatografic n strat subire de sorbent pentru identificarea i
determinarea impuritilor specifice n substana Metiferon. Separarea cromatografic s-a
realizat n sistemul de solveni alcool izopropilic- cloroform- amoniac concentrat (4:8:1). Metoda
elaborat a fost inclus n proiectul MFT pentru Metiferon en gross.

284
Introducere
Bazat pe folosirea proceselor de adsorbie i repartiie n condiii dinamice, metoda
cromatografic posed o eficien nalt la separarea amestecurilor de substane medicamentoase
cu o structur i proprieti apropiate, la identificarea lor i determinarea cantitativ. De aceea
aceast metod este folosit pe larg n analiza farmaceutic. Cromatografia pe strat subire
(CSS), cea mai rspndit metod planar, este o metod sensibil, realizat pe un strat fin de
faz staionar. Selectarea solventului sau a amestecului de solveni pentru developare este o
etap de importan major n elaborarea tehnicii de cromatografiere i este n corelare direct cu
proprietile fizico-chimice ale substanei analizate.
Metiferonul este o substan nou din grupul derivailor izotioureici cu coninut de fosfor,
cu proprieti vasoconstrictoare, posed un efect antihipotensiv, marcat n condiii obinuite i
activitate antihipotensiv nalt pe fundalul de aciune al
1
adrenoblocantelor. Spre deosebire
de simpatomimetice nu stimuleaz sistemul simpatic, nu provoac tahicardie, nu modific
echilibrul acido-bazic i electrolitic, nu cauzeaz hipotensiune secundar, are aciune calmant,
reduce temperatura corporal i necesarul de oxigen de ctre organism. Utilizarea lui este
raional pentru prevenirea scderii presiunii arteriale, dereglrilor hemodinamicii sistemice,
echilibrului acido-bazic i regimului de oxigenare a organismului, pentru acordarea asistenei de
urgen n hipotensiunea arterial acut de genez divers.
Materiale i metode
S-a utilizat substana activ Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniu, uree i tiouree, acceptate
spre utilizare n scop medicinal. Reactivi i solveni preparai n corespundere cu prevederile
Farmacopeei Romne, ed. X; plci cromatografice Silicagel GF
254
i Silufol UV-254.
Rezultate
n calitate de impuriti specifice n Dimetilfosfit- S-metilizotiuroniu este posibil
prezena ureei i mercaptanilor (produse de degradare) i tioureei (produs iniial de sintez), fapt
confirmat i prin cercetrile ulterioare:

NH
2
O
| ||
C

H
3
S C = NH
2
+

-
O P

(OC

H
3
)

Dimetilfosfit S-metilizotiuroniu
NaOH H
2
O O
||
H
2
N CO NH
2
+ C

H
3
SH + NaO P(OC

H
3
)

Separarea cromatografic a Metiferonului i a impuritilor posibile se efectueaz pe un
amestec model, care const din soluie apoas 10% Metiferon i soluii 0,1% uree i tiouree. n
procesul elaborrii metodei au fost cercetate sisteme de developare cu caracter acid, neutru i
bazic. La folosirea sistemelor acide mobilitatea substanei de baz era mic, spoturile erau slab
pronunate. n mediu neutru de asemenea apreau spoturi slab conturate. n sistemele de
developare cu caracter bazic au fost obinute valori ridicate ale Rf-ului att ale substanei de
baz, ct i a impuritilor posibile. (tabelul 1.)
Pentru lucru a fost aleas sistema de solveni alcool izopropilic-cloroform- soluie
concentrat de amoniac n raporturile 4:8:1. Cromatograma a fost privit n lumin UV cu
lungimea de und 254 nm, apoi s-a pulverizat cu soluia de p-dimetil-aminobenzaldehid.
Aceast sistem de solveni a fost inclus n proiectul MFT pentru Metiferon i Soluie
Metiferon 10% pentru injecii.
Prepararea soluiei 10% Metiferon: 1g de substan (mas exact) se dizolv n 10 ml
ap purificat.
Prepararea soluiei 0,1% tiouree:0,05g tiouree (mas exact) se plaseaz n balon cotat
de 50 ml, se dizolv i se aduce pn la cot cu ap purificat.
285
Tabelul 1
Rezultatele cromatografiei n strat subire n diferite sisteme de developare
Nr. Sistema de developare Rf uree
Rf
subst.
de baz
Rftio-
uree
Adnotare
1. Alcool etilic 96% 0,27 0,45 0,70 spoturi mprtiate
2. Alcool etilic-ap purificat (1:1) 0,44 0,25 0,49 spoturi mprtiate
3. Amoniac-cloroform-propanol
(1:6:4)
0,20 0,51 0,48 valori apropiate ale Rf
4. Amoniac-cloroform-propanol-2
(3:1:6)
5. Amoniac-cloroform-propanol-2
(5:1:2)
6. Amoniac conc. alcool
izopropilic -cloroform- - (1:4:8)
0,2 0,75 0,35
Spoturi bine
conturate
7. Amoniac-metilenclorur-
propanol-2 (1:8:4)
0,52 0,09 0,62
Mobilitate redus
pentru substan
8. Amoniac-metilenclorur-
propanol-2 (3:1:2)
0,08 0,10 0,56
Mobilitate redus
pentru substan
9. Alcool etilic-aceton (1:1) 0,31 0,47 0,74 spoturi mprtiate
10. Trietilamin-cloroform-
propanol-2 (3:1:2)
0,43 0,87 0,17 spoturi mprtiate

Prepararea soluiei 0,1% uree: 0,05g uree (mas exact) se plaseaz n balon cotat de
5ml, se dizolv i se aduce pn la cot cu ap purificat.
Prepararea amestecului model: 2,5g Metiferon, cte 0,025g uree i tiouree se plaseaz n
balon cotat de 25 ml, se dizolv i se aduce pn la cot cu ap purificat.
Prepararea soluiei p-dimetilaminobenzaldehid: 0,5g p-dimetilaminobenzaldehid se
dizolv n 5 ml acid clorhidric diluat i se amestec cu 20 ml izopropanol. Soluia se folosete
proaspt preparat.
Pentru aprecierea semicantitativ a coninutului de impuriti, cromatografierea a fost
petrecut n prezena martorilor. Tehnica de lucru elaborat d posibilitatea de a determina ureia
n limitele 0,05-1% i tiouree n limite 0,2-1%.
Tehnica de lucru: Pe linia de start a plcii cromatografice Silufol UV 254 sau Silicagel
GF
254
se aplic cu microseringa cte 0,005 ml amestec model, soluii 0,1% tiouree i uree i
soluie Metiferon 10%. Placa se usuc la aer i se developeaz n sistemul de solveni alcool
izopropilic- cloroform - soluie concentrat de amoniac (4:8:1). Dup ce frontul de solveni
migreaz circa 10cm de la linia de start, cromatograma se scoate, se usuc la aer 15 min i se
examineaz la lumina UV la lungimea de und 254 nm. Pe cromatogram trebuie s fie dou
spoturi, corespunztoare Metiferonului substan i Metiferonului din amestecul model.
Pentru a ne convinge de lipsa impuritilor, placa se reveleaz cu soluie p-
dimetiaminobenzaldehid i se nclzete timp de 15 minute la 60
0
. Spoturile de uree i tiouree
se coloreaz n galben. Rezultatele obinute sunt prezentate n cromatograma din figura 1.
Controlul utilitii sistemului cromatografic. Sistemul cromatografic se consider util
dac ndeplinete urmtoarele condiii:
la examinarea n lumin UV se observ o separare desluit a spoturilor de difetur i tiouree;
pe cromatogramele soluiilor de uree i tiouree spoturile se desluesc clar.
286

Not: 1 amestec model; 2 soluie de uree;
3 soluie tiouree; 4 soluie Metiferon

Figura 1. Cromatograma Metiferonului n prezena amestecului model, ureei i tioureei n
sistemul de developare alcool izopropilic - cloroform- amoniac (4:8: 1)

Concluzii
Metoda cromatografiei pe strat subire permite determinarea prezenei impuritilor
posibile n substana Metiferon: a ureei n limitele 0,05-1,2% i a tioureei n limite 0,2-1%.
Tehnica de lucru elaborat a fost inclus n proiectul MFT pentru Metiferon en gross.
Bibliografie
3. Farmacopea de Stat, ed. XI, V.1 i 2, 1987, 1989.
4. Lazr M., Lazr Doina. Controlul medicamentelor.- Litografia.-Iai.-1980.- 377 P .
5. Liviu Roman, Marius Boji, Robert Sndulescu. Validarea metodelor de analiz n
control.- Bucureti; Editura medical. 1998.-587 P.

IDENTIFICAREA METIFERONULUI PRIN METODE CHIMICE I FIZICO-
CHIMICE
Iurie Tihon, Livia Uncu, Vladimir Valica,

Ludmila Fabian,

Oxana Vislouh
Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

Summary
The chemical and physico-chemical methods of identification of metiferon
The new chemical component from izotioureic derivative group with phosphor content is
researched. The elaborated methods for identification will be included in normative analytical
documents of quality of this substance.
Rezumat
Este cercetat un nou compus chimic din grupul derivailor izotioureici cu coninut de
fosfor. Metodele de identificare elaborate vor fi incluse n documentele analitice de normare a
calitii pentru aceast substan.
1 2 3 4
287
Introducere
Medicamentele au intrat cu aplomb n viaa noastr cotidian, bucurndu-se de acelai
statut ca i hainele, ziarele, alimentele, adic au devenit indispensabile. Anual pe mapamond apar
circa 1200 de varieti de compui noi, n ciuda faptului, c ansa unei noi substane chimice de a
fi finalizat ntr-un nou medicament de sintez este de ordinul 1:8000.
Aceast cifr ns, este departe de a se stabiliza, se vor nregistra n deceniile urmtoare
ascensiuni i mai spectaculoase. Numai n domeniul patologilor cardio-vasculare, care deine
topul de frunte n statistica morbiditii mondiale se cunosc peste 50000 [3].
Devine primordial lrgirea spectrului tratamentului medicamentos a maladiilor cardio-
vasculare, deoarece varietatea remediilor existente n prezent nu sunt scutite de diferite reacii
adverse.
Derivaii izotioureici sunt un grup de substane, ce posed aciune farmacologic
vasoconstrictoare, hipertensiv pronunat i de lung durat, datorit influenei directe asupra
musculaturii netede a peretelui vascular.
Din irul compuilor izotioureici deja au fost valorificate unele substane. Metiferonul
(Dimetilfosfit S-metilizotiuroniu) este o substan nou, original din acest grup, cu aciune
vasoconstrictoare musculotrop direct.
Materiale i metode
Pentru analiza spectral au fost utilizate spectrofotometre UV-VIS Perkin Elmer
Lambda-40 i Agilent Technologies 95-00. Spectrele IR au fost determinate la spectrofotometrul
FT/IR-4100TypeA. La identificarea prin metode chimice au fost utilizai reageni i solveni n
corespundere cu cerinele Farmacopeei Europene.
Rezultate
Determinarea identitii substanelor poate fi efectuat prin metode fizice, chimice i
fizico-chimice. Reaciile chimice, folosite n analiza farmaceutic trebuie s fie succedate de un
efect analitic: cderea de precipitat sau dizolvarea acestuia, apariia coloraiei sau schimbarea ei,
formarea compuilor cu miros specific etc.
La elaborarea reaciilor de identificare pentru metiferon au fost luate n consideraie
prezena n molecul a grupelor funcionale specifice, a anionului fosfat.
n molecula metiferonului este prezent grupa aminic alifatic, care condiioneaz
reacia pozitiv cu ninhidrina. La nclzire apare o coloraie roie-violet. Sensibilitatea reaciei
este de 200 g/ml.
Tehnica de lucru: 1g substan se dizolv n 10 ml ap purificat (soluia A). La 2ml
soluie A se adaug 1ml soluie hidroxid de sodiu 1mol/l i 2ml soluie ninhidrin.
S-a determinat, c metiferonul formeaz cu ionii metalelor (Cd
2+
, Zn
2+
, Co
2+
, Cu
2+
)
compui compleci colorai. Mai specific s-a dovedit a fi reacia cu ionul de cobalt n mediu
bazic - n rezultat apare o coloraie verde nchis. Sensibilitatea reaciei s-a dovedit a fi 100
g/ml.
Tehnica de lucru: La 2 ml soluie A se adaug 0,5 ml soluie hidroxid de sodiu 1mol/l, 0,5
ml soluie clorur de cobalt.
Prezena n molecula metiferonului a ionului fosfat condiioneaz reacia cu molibdat de
amoniu dup mineralizare - n rezultat cade un precipitat galben. Sensibilitatea reaciei este de
300 g/ml.
Tehnica de lucru: 1g substan se plaseaz n eprubet, se adaug 1ml acid sulfuric
concentrat i se nclzete pn la fierbere. Soluia se rcete, se adaug 10 ml ap purificat, 1
ml soluie de molibdat de amoniu.
Este cunoscut faptul, c compuii izotiouronici se descompun la interaciune cu bazele i
formeaz tioli. La tratarea metiferonului cu baz apare un miros specific de metilmercaptan.
Tehnica de lucru: 2 ml soluie A se nclzesc cu 1ml soluie de hidroxid de sodiu 1mol/l,
se percepe miros specific; prezena metilmercaptanului se demonstreaz i dup reacia pozitiv
la introducerea n eprubet a unei hrtii de filtru mbibate cu acetat de plumb (hrtia se
nglbenete).
288
Pb
2+
+ S
2-
==PbS
Metiferonul interacioneaz cu acidul picric, formnd picrai de culoare galben. Tehnica
de lucru: La 3 ml soluie A se adaug 2 ml soluie 0,5% acid picric cade un precipitat galben.
Prezena gruprii izotiuronice n molecula substanei poate fi demonstrat la interaciunea
preparatului cu nitroprusiat de sodiu i fericianur de potasiu n mediu bazic n rezultat apare
o coloraie roie. Sensibilitatea reaciei este de 200 g/ml.
Tehnica de lucru: la 1 ml soluie A se adaug cte 1ml soluie de 10% hidroxid de sodiu,
soluie nitroprusiat de sodiu i 1ml soluie fericianur de potasiu, se mai adaug 3 ml ap
purificat: apare o coloraie roie.
Metiferonul poate fi identificat i prin metode fizico-chimice. Cercetnd spectrele lor UV
i IR, propunem aceste metode pentru identificare.
Spectrofotometria UV este n prezent una din metodele eseniale ale analizei
farmaceutice. Pentru identificarea Metiferonului au fost determinate spectrele UV a soluiilor
apoase n regiunea 190-320nm. Spectrul obinut este prezentat n figura 1:

Figura 1. Spectrul UV de absorbie al soluiei apoase Metiferon 20 g/ml

Din figur se vede, c Metiferonul posed o band intens de absorbie cu maxim n
regiunea 201-202 nm. Aceasta poate fi explicat prin transferuri * i n * ale moleculelor
din starea normal ntr-o stare excitat. A doua band de absorbie are un maxim n regiunea
221-222 nm. Minimele se observ respectiv la 217 2 nm.
Au fost calculate mrimile unor caracteristice optice a benzilor electronice de absorbie. Datele
obinute sunt expuse n tabelul 1.
Folosind spectrul UV de absorbie a Metiferonului, precum i caracteristicile optice,
putem identifica cu siguran aceast substan.
Tabelul 1
Mrimile caracteristicelor optice a benzilor electronice de absorbie
Substana
Conc .
g/ml
max
nm
max
cm
-
1
A
max
max
log
max
A
%
/
1cm

Dimetilfosfit- S-
metilizotiuroniu
20
198
221
50505
45045
0,741
0,500
9562
6457
3,981
3,810
370,3
250,0

n ultimele decenii spectroscopia IR a devenit metoda de baz n cercetrile chimice i
farmaceutice, cu ajutorul creia pot fi rezolvate cu succes problemele identificrii, analizei
cantitative i efectuat concluzia despre structura moleculelor de substane.
Spectrul IR a fost determinat n regiunea 400-4000 cm
-1
prin comprimare cu bromur de

190.0 200 220 240 260 280 300 320 330.0
0.00
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.80
nm
D
289
potasiu.
Interpretarea spectrelor IR a Metiferonului s-a efectuat n baza datelor bibliografice [4,
5].
Spectrul IR al Metiferonului este redat n figura 2.
Pentru caracteristica benzilor de absorbie a fost aleas regiunea 1700-400 cm
-
, adic aa
numita zona amprentelor degetale. Aici caracterul spectrului se schimb chiar i la devieri
nensemnate n structur.
Metiferonul are o caracteristic spectral individual.
n regiunea 1400-1450 cm
-1
apare o absorbie puternic, cauzat de devieri de valen
NH
2
+
i in regiunea 3300-3000 cm
-1
sunt devieri deformate a grupei - NH
-
. La 1640-1690 cm
-1

se observ clar devieri deformate a grupelor C = N -. Prezena benzilor de absorbie la 550-580
cm
-1
este legat de vibraiile de valen ale grupei C-S. Benzile de intensitate medie de la 2200-
2300 cm
-1
, se datoreaz vibraiilor de deformare a grupei CH
3
. n regiunea 1000-1100 cm
-1
de
asemenea apar benzi de absorbie pentru poziia de la capete a grupei CH
3.

Poziia frecvenelor caracteristice n spectrul IR al Metiferonului este redat n tabelul 2.
Rezultatele analizei spectrelor IR ale Metiferonului demonstreaz structura acestei
substane, precum i posibilitatea utilizrii spectroscopiei IR pentru identificare.

Figura 2. Spectrul IR de absorbie al Metiferonului

Tabelul 2
Frecvenele caracteristice a Metiferonului n spectrul IR
Substana
maxime, cauzate de grupele, cm
-1

P=O; P-OH NH
2
+ ;
NH
- CH
3

-CH
3

C-S,C=N
Metiferon 1150-1250;1050; 1400-1450,
3300-3000
1000-1100;
2200-2300
550-580;
1640-1690

Concluzii
1. A fost cercetat spectrul UV de absorbie a Metiferonului, s-a artat specificul lui i
posibilitatea folosirii pentru identificare.
290
2. A fost cercetat spectrul IR de absorbie a Metiferonului, evideniind benzi de absorbie, care
deosebesc Metiferonul de alte substane i permit folosirea lor pentru demonstrarea structurii
i identificarea substanei.
3. Reaciile chimice de identificare posed o sensibilitate nalt i pun n eviden grupele
funcionale specifice metiferomului.
Bibliografie
1. Farmacopea European, ed. 3RD, 2001.
2. Liviu Roman, Marius Boji, Robert Sndulescu, Validarea metodelor de
analiz i control, Editura medical, 1998,283p.
3. Simpson G., Konstantionos A., Therapeutic drug monitoring. General Correspondence,
Internal Medicine Journal, 2004, 34:1-2 p. 72
4. Uncu L., Valica V., Cheptanaru Z. Analiza spectral a difeturului i profeturului //
Realizrile farmacologiei naionale n perioada anilor 1971-2001. - Chiinu.- 2001.- P. 208-
210.
5. .., .., .. . 3-
. 4-- 4-
3 //... 1989. .59.

TEHNOLOGIA I ANALIZA SOLUIEI INJECTABILE METIFERON 10%
1
Iurie Tihon,
2
Nicolae Ciobanu,
1
Livia Uncu,
1
Vladimir Valica,
3
Victor Ghicavi
1
2
Catedra Tehnologia medicamentelor
3
Catedra Farmacologie i Farmacologie clinic

Summary
The technology and standardization of injectable solution metiferon 10%
Metiferon (Dimetilphosphit S-metilizotiuronium) is researched with purpose to create the rational
pharmaceutical form for intravenous administration (injection solution) and elaboration of NAD for this
medicinal form. There was elaborated the optimal composition of injection solution, the technology of
preparation and the methods of analysis.
Rezumat
Metiferonul (Dimetilphosphit S-metilizotiuroniu) este cercetat pentru crearea unei forme
farmaceutice raionale pentru administrare intravenoas (soluie injectabil) i elaborarea DAN pentru
aceast form medicamentoas. S-a elaborat compoziia optimal a soluiei injectabile, tehnologia de
preparare, precum i metodele de analiz ale acesteia.

Introducere
Una din preocuprile majore ale medicinii moderne este punerea n valoare a unor noi
substane chimice cu o aciune benefic asupra organismului uman.
Derivaii izotioureici au devenit inta multor cercetri, deoarece constituie un grup de
substane ce posed aciune vasoconstrictoare i hipertensiv pronunat de lung durat datorit
influenei directe asupra musculaturii netede a peretelui vascular. Totodat a fost remarcat i
aciunea analgezic i sedativ a derivailor izotioureici.
Metiferonul (Dimetilfosfit S-metilizotiuroniu) este o substan original din acest grup,
ce difer dup mecanismul de aciune i dup alte proprieti de preparatele antihipotensive
cunoscute i utilizate deja n practica medical. Aceast substan exercit i aciune
vasoconstrictoare musculotrop direct.
Ne-am propus drept scop elaborarea unei forme farmaceutice injectabile cu coninut de
Metiferon. Exigenele sporite fa de calitatea medicamentelor necesit studierea complex a
proprietilor substanelor, elaborarea unor metode de analiz exacte, rapide i specifice.
291
Materiale i metode
S-a utilizat substana activ Dimetilfosfit S-metilizotiuroniu; substane auxiliare,
acceptate spre utilizare n scop medicinal. n elaborarea metodelor de analiz au fost utilizate
spectrofotometre UV-VIS Perkin Elmer Lambda-40 i Agilent Technologies 95-00. Spectrele
IR au fost determinate la spectrofotometrul FT/IR-4100TypeA. La identificarea i dozarea prin
metode chimice au fost utilizai reageni i solveni n corespundere cu cerinele Farmacopeei
Europene.
Rezultate
Deoarece Metiferonul este un remediu antihipotensiv, recomandat pentru ntrebuinare n
strile de hipotensiune arterial de diferit genez, preponderent n terapia de urgen, a fost
elaborat forma farmaceutic parenteral Soluie Metiferon 10% pentru injecii. Au fost
precutate cerinele fa de calitate, care stau la baza elaborrii MFT pentru aceast form
farmaceutic.
Tehnologia preparrii Soluiei Metiferon 10% pentru injecii a fost elaborat n
conformitate cu cerinele Farmacopeei Romne ed. X i a Farmacopeei Europene.
Prin cercetri preventive s-a constatat, c Metiferonul posed o stabilitate mai nalt n
mediu slab acid i acid, pe cnd soluia de Metiferon de 10% are pH-ul cuprins ntre 5,0 i 6,0.
Din acest motiv, metiferonul n soluie necesit stabilizator pentru ajustarea pH-ului. Au fost
cercetai mai muli stabilizatori de pH, ca rezultat, n calitate de stabilizator este recomandat
amestecul de acid citric si citrat de sodiu pn la obinerea unei soluii cu pH-ul 3,0-3,5.
Cercetrile preventive au mai demonstratat, c n procesul sterilizrii termice apare un
miros puternic de mercaptani (metilmercaptan), n rezultatul descompunerii metiferonului. Acest
fapt a fost confirmat i prin metode cromatografice (cromatografia pe strat subire dup apariia
unui spot adugtor de uree i HPLC dup apariia unui pic suplimentar).
O metod efectiv de sterilizare, folosit n tehnologia farmaceutic, este sterilizarea
filtrant. A fost aleas aceast metod, care asigur un nivel nalt de sterilizare i n acelai timp
nu are loc descompunerea substanei.
n baza cercetrilor efectuate, propunem urmtoarea componena optim a formei
farmaceutice:

Metiferon (recalculat pentru substan uscat) -100g
Acid citric -4g
Citrat de sodiu -8g
Ap pentru injecii - pn la 1 litru

Tehnologia preparrii soluiei Metiferon 10% pentru injecii.
innd cont de componena formei farmaceutice i coninutul de substan (recalculat
pentru 100% substan uscat), s-a calculat cantitatea de substan, necesar pentru prepararea
soluiei. Prepararea soluiei se efectueaz la volum, dar componentele sunt exprimate n uniti
de mas. Astfel, la 100g substan Metiferon ntr-un balon cotat de un litru s-au adugat
excipienii cntrii (acid citric-4g i citrat de sodiu 8 g). Aceste cantiti de excipieni au fost
calculate, pentru a form un tampon fosfat cu scopul meninerii pH-ului la valorile stabilite n
limitele 3,0-3,5. Substana medicamentoas i excipienii cntrii se dizolv n ap pentru
injecii. Dizolvarea se petrece la rece. S-a adugat jumtate din cantitatea necesara de ap pentru
injecii pentru a dizolva preparatul i excipienii. Dup dizolvare se aduce volumul soluiei pn
la 1000 ml cu ap pentru injecii.
Soluia obinut a fost controlat conform cerinelor proiectului MFT pentru Soluie
Metiferon 10% pentru injecii. Soluia, corespunztoare cerinelor DAN, a fost supus filtrrii
sterile prin membran Milipore cu diametrul porilor 0,22 m la dou instalaii de tip USF-293-7,
unite liniar cu ajutorul a dou filtre ( MFA-A-2 i MFA-A-1). Soluia filtrat s-a dozat n fiole
sterile a cte 1 ml din sticl neutr NS-3 conform OST 64-2-485-85 n aparatul cu vid pentru
umplerea fiolelor. nlturarea soluiei din capilare s-a efectuat de asemenea sub vid. Sudarea s-a
292
petrecut la maina de sudat de tip 432 R-M. Filtrarea, nfiolarea i sudarea fiolelor s-a efectuat n
condiii aseptice. S-a verificat etanietatea fiolelor prin scufundare n soluie de albastru de
metilen sub presiune. Apoi fiolele au fost splate, uscate i controlate la lipsa particulelor n
suspensie. Au fost preparate trei serii de Soluie Metiferon 10% pentru injecii (1001, 2002,
3003).
n baza cercetrilor efectuate a fost elaborat proiectul regulamentului tehnologic de de
fabricare a Soluiei Metiferon 10% pentru injecii conform schemei fluxului tehnologic
prezentat n figura 1.
La elaborarea metodelor de analiz pentru soluia injectabil de Metiferon s-a inut cont
de proprietile fizico-chimice ale principiului activ (metiferon substan), precum i a
excipienilor (acid citric i citrat de sodiu).
Descrierea preparatului este apreciat n baza cercetrii aspectului exterior a trei serii,
obinute conform procesului tehnologic descris mai sus. Probele analizate au prezentat soluii
incolore i transparente cu miros specific.

Figura 1. Schema fluxului tehnologic de preparare a soluiei Metiferon 10%

Aspectul soluiei s-a determinat n conformitate cu cerinele farmacopeei Europene
soluia trebuie s fie transparent i incolor.
Pentru identificarea metiferonului n soluie pot fi utilizate reaciile cu ninhidrina (pune n
eviden prezena grupei aminice alifatice primare), cu srurile de cobalt (formarea compusului
complex colorat). Metiferonul n soluie poate fi identificat i dup spectrul de absorbie n UV,
care se nregistreaz dup diluarea soluiei pn la concentraia 20 g/ml acestea trebuie s fie
identic cu spectrul substanei standard n intervalul lungimilor de und de la 200 nm pn la
280 nm s prezinte maxim de absorbie la 2212nm i minim de absorbie la 2172nm
(dimetilfosfit S - metilizotiuroniu).
PREGTIREA
RECIPIENILORI
ACCESORIILOR;
splare uscare;
PREGTIREA
SPAIULUIDE
PRODUCIEIA
UTILAJELOR
MATERII
PRIME:
METIFERON
PREPARAREAAPEI
NSCOP
INJECTABIL
DIZOLVARE
FILTRARECLARIFIANT
STERILIZARE
UMPLERE
NCHIDERE
FILTRARESTERILIZANT
AMBALARE
DEPOZITARE
GRUPARE
MARCARE
CONTROLULCALITII
CONTROLUL CALITII
293
pH-ul se determin prin metoda poteniometric. Valoarea medie pentru toate seriile s-a
ncadrat n intervalul 3,0-3,5.
La determinarea particulelor n suspensie s-a urmrit ca soluia s fie lipsit de
incluziuni mecanice vizibile.
Uniformitatea volumului soluiei s-a determinat conform cerinelor OCT 64-492-85
Devieri admisibile de la volumul nominal pentru preparatele medicamentoase industriale.
Sterilitatea s-a determinat conform cerinelor FS, ed XI, V2, p.187. Preparatul trebuie s
fie steril.
Impuritile strine se determin prin metoda Cromatografiei n strat subire (FEur.).
Pentru lucru a fost ales sistemul de solveni alcool izopropilic cloroform soluie concentrat
de amoniac n raporturile 4:8: 1, substana manifest valori optimale ale Rf-ului i o separare
bun a impuritilor posibile. Cromatograma a fost privit n lumin UV cu lungimea de und
254 nm, apoi s-a pulverizat cu soluia de p-dimetilaminobenzaldehid.
Pentru dozare sunt propuse dou metode (spectrofotometric i neutralizare n mediu
anhidru).
Dozarea soluiei de Metiferon prin metoda de neutralizarea n mediu anhidru
Pentru alegerea solvenilor, folosii n metoda de neutralizare n mediu anhidru am
efectuat titrarea poteniometric a metiferonului n amestec de anhidrid acetic i acid acetic
glacial (1:1), acid acetic glacial, acid formic (cod 11
A
). Din figur se vede, c saltul maxim de
potenial n punctul de echivalen revine pentru acidul acetic glacial (figura 2).

Figura 2. Curba titrrii poteniometrice a metiferonului n diferii solveni

Dozarea s-a petrecut mai nti pe un amestec model de Metiferon-substan pentru a
confirma selectivitatea metodei, apoi a fost elaborat tehnica dozrii n mediu anhidru: 2 ml
soluie Metiferon 10 % sau plasat ntr-un balon de titrare. Soluia s-a vaporizat la sec pe baia de
ap timp de 15-20 min. Reziduul obinut s-a dizolvat in 20 ml acid acetic glacial, s-au adugat 4-
5 picturi de violet cristalin i s-a titrat cu soluie 0,1mol/l acid percloric pn la coloraia verde-
albstruie. Paralel s-a efectuat proba control. Determinrile au fost repetate de 4 ori i rezultatele
au fost evaluate statistic.(Tabelul 1). Dup cum se observ din tabel, eroarea relativ a metodei
nu depete 0,35%.
S-a studiat posibilitatea utilizrii metodei spectrofotometrice, elaborate pentru dozarea
metiferonului substan, i pentru dozarea soluiei injectabile. Dup ajustare fa de un amestec
model, se propune urmtoarea tehnic de lucru: 1 ml soluie se dilueaz cu ap purificat ntru-
un balon cotat pn la 100 ml (soluia A). 2 ml de soluie A se dilueaz cu ap purificat ntr-un
balon cotat pn la 100 ml (soluia B). Se msoar absorbana soluiei B la 221nm la
spectrofotometru n cuv cu grosimea 1 cm, folosind ca lichid de compensare apa purificat.
0
100
200
300
400
500
600
700
800
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
V, ml
FEM, mV
ac acet glac+anhidr ac acid acetic glacial ac formic
294
Tabelul 1
Rezultatele dozrii Metiferonului n Soluie Metiferon 10% pentru injecii prin metoda de
neutralizare n mediu anhidru

Volumul
prelevat,
ml
S-au luat
pentru
analiz (g)
S-au
calculat
(g)
S-au calculat
(%)
Caracteristica
metrologic
2 0,2 0,1976 98,80 X=99,32
2 0,2 0,1982 99,10
S
2
=0,4425
Sx=0,332
2 0,2 0,1982 99,10
x=1,06
=1,06
2 0,2 0,2006 100,3 A=99,321,06%

Paralel se msoar absorbana soluiei standard de metiferon (Sol. B). Coninutul de
Metiferon n soluie se calculeaz conform formulei:
Ax
221
a
s
1 100100 Ax
221
a
e
2
C = = , n care
As
221
Vx 12 5050 As
221
Vc
Ac
221
absorbana soluiei analizate;
As
221
absorbana soluiei standard;
a
s
masa susbstanei standard, g;
Vx volumul soluiei analizate, ml.

Coninutul de Metiferon n 1 ml soluie trebuie s fie 0,090-0,110g.
Prepararea soluiei standard: 0,05g substan (metiferon standard) se dizolv cu ap purificat
n balon cotat de 50 ml (sol. A). 1 ml soluie A se dilueaz cu acelai solvent n balon cotat de 50
ml (sol. B).
Determinrile s-au efectuat pentru 3 serii de forma medicamentoas i au fost repetate de 4 ori,
apoi rezultatele au fost evaluate statistic.(Tabelul 2)
Tabelul 2
Rezultatele dozrii Metiferonului n Soluia Metiferon 10% pentru injecii

Volumul
prelevat,
ml
S-au luat
pentru
analiz (g)
S-au
calculat
(g/ml)
S-au calculat
(%)
Caracteristica
metrologic
1 0,1 0,0998 99,80 X=99,95
1 0,1 0,0998
99,80
S
2
=0,015
Sx=0,06
1 0,1 0,1001
100,06
x=0,192
=1,1
1 0,1 0,0998
99,80
A=99,950,192%

Eroarea relativ a determinrii spectrofotometrice nu depete 0,2 % , ceea ce este n
concordan cu rezultatele obinute pentru amestecul model i denot o exactitate sporit a
metodei.
Concluzii
1. A fost elaborat formula optim i tehnologia preparrii Soluiei Metiferon 10% pentru
injecii, care a stat la baza ntocmirii proiectului regulamentului tehnologic pentru prepararea
295
Soluiei Metiferon 10% pentru injecii.
2. Au fost elaborate metodele de analiz pentru soluia de Metiferon 10%, care sunt incluse n
proiectul MFT pentru Soluie Metiferon 10% pentru injecii.
Bibliografie
1. Chast F., Chopineau J.: Guide pratique des solutions injectables et interaction contenu,
1
ere
edition, Masson, Paris, 1995.

STANDARDIZAREA SUPOZITOARELOR VAGINALE RAVISET
1
Livia Uncu, Andrei Pleca,
2
Natalia Damaschin,
1
Oxana Vislouh,
2
Liviu Movil
1
Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic
2
Agenia Medicamentelor

Summary
Standardization of vaginal suppozitories Raviset
Dietilphosfat S-etilizotiuroniu is researched for creation of the rational pharmaceutical
forms and their NDT elaboration. The optimal composition of suppositories with this
component, the methods of analysis and standardization were elaborated. The stability and the
term of valability were researched.
Rezumat
Dietilphosfat S-etilizotiuroniu este cercetat cu scopul crerii formelor farmaceutice
raionale i elaborarea DTN pentru ele. A fost elaborat componena optimal a supozitoarelor
cu acest compus, metodele de analiz i standardizare, a fost cercetat stabilitatea i determinat
termenul de valabilitate.

Introducere
Sunt cunoscute proprietile farmacologice ale derivailor izotioureici, care sunt o clas
de compui cu un efect hipertensiv remarcabil, cu aciune hipoglicemic, antiaritmic; reduc
consumul de oxigen de ctre organism, micoreaz temperatura corporal, mrete rezistena
organismului fa de aciunea toxic a hiperbaroxiei, posed efect hipertensiv pe fonul
administrarii ganglioblocantelor i adrenoblocantelor. Un reprezentant din acest grup este i
dietilfosfat S-etilizotiuroniu (difeturul), care posed proprieti vasoconstrictoare, efect
antihipotensiv marcat n condiii obinuite i activitate antihipotensive nalt pe fundalul de
aciune al
1
- adrenoblocantelor. Utilizarea acestui preparat este raional pentru prevenirea
scderii presiunii arteriale a dereglrilor hemodinamicii sistemice, echilibrului acido-bazic i
regimului de oxigenare a organismului, deci, pentru acordarea asistenei de urgen n
hipotensiunea arterial acut de genez divers.
Totodat este demonstrat, c dietilfosfat S-etilizotiuroniu crete tonusul patului vascular
care se petrece pe fondul excluderii factorului de baz vasodilatator - al oxidului nitric. n acest
fel, compuii izotioureici cu aciune non-adrenergic deschid o larg perspectiv de aplicare n
practica reglrii tonusului vascular, inclusiv n modificrile homeostaziei circulatorii locale
uterine, fcnd posibil evidenierea factorilor care altereaz aportul de snge spre uterul afectat
de miom.
n acest aspect, elaborarea unei noi forme farmaceutice cu aplicare uterin supozitoare
vaginale permite utilizarea acestui preparat n corijarea indicilor hemodinamici regionali i
mbuntirea metodelor de tratament al miomului uterin. Dietilfosfat S-etiltiuroniu sub form de
supozitoare vaginale Raviset se propune pentru utilizare n tratamentul miomului uterin,
asociat cu hemoragii uterine.
296
Supozitoarele vaginale Raviset manifest o posibilitate real de aplicare cu nalt
randament terapeutic n practica tratamentului conservativ al miomului uterin i complicaiilor
lui, determinat n fond de limitarea fluxului regional.
S-a elaborat formula optimal a supozitoarelor vaginale ,,Raviset cu coninut de
Dietilfosfatul S-etiltiuroniu 0,1 g, innd cont de aciunea specific a substanei active de baz i
de proprietile fizico-chimice ale acesteia.
Materiale i metode
Supozitoare vaginale Raviset 0,1 g, seriile 01/20.10.06; 02/20.10.06; 03/20.10.06;
Aparat pentru determinarea timpului de fuziune Erweka PM 3
Aparat pentru determinarea vitezei de cedare a principiului activ prin metoda de dializ
Solvotest M
spectrofotometru UV-VIS Perkin Elmer Lambda-40;
Rezultate
Descrierea preparatului este apreciat n baza cercetrii aspectului exterior a trei serii, obinute
conform procesului tehnologic descris pentru supozitoare vaginale. Probele analizate au prezentat
supozitoare de form cilindro-conic cu aspect omogen, de culoare alb. n seciune transversal -
mas omogen. Se admite prezena unei caviti de aer, a unei poroziti pe axa supozitorului i a
unei depresiuni n form de plnie.
Identificarea preparatului s-a petrecut prin metoda spectrofotometric UV, comparnd
spectrul UV al soluiei cercetate cu spectrul UV al soluiei standard de dietilfosfat S -
etilizotiuroniu cu concentraia 20 g/ml.
Identificarea a fost efectuat i prin metode chimice pentru grupele funcionale specifice:
aminic, S-etilizotiuronic. Pentru gruparea S-etilizotiuronic se interacioneaz soluia de
analizat cu clorura de cobalt; apare o coloraie roz-murdar. Gruparea aminic alifatic primar se
pune n eviden la interaciunea preparatului cu ninhidrin n mediu bazic la nclzire apare
coloraie rou-violet.
Pentru determinarea impuritilor strine s-a folosit metoda cromatografiei n strat subire.
Pe lng metodele de analiz a principiului activ din supozitoare, au fost determinai unii
indici de calitate n conformitate cu cerinele Farmacopeei Europene: masa medie i
uniformitatea masei, comportamentul la topire, indicii chimici (de aciditate i de peroxid).
Pentru determinarea masei medii s-au cntrit 20 supozitoare i s-a calculat valoarea
medie. Masa obinut s-a aflat n limitele 1,85 2,15g.
Aceleai 20 supozitoare, la care s-a determinat masa medie, s-au cntrit individual
pentru determinarea uniformitii masei, devierii masei individuale fata de masa medie,%.
Fa de masa medie calculat, masa individual poate s prezinte devierile 7,5%. Determinrile
s-au petrecut n conformitate cu prevederile FR X, p.889. Rezultatele obinute pentru trei serii de
supozitoare se prezint n figura 1. Din figur se observ, c devierea de la masa medie nu
depete 0,11%.

Figura 1. Variatia in greutate a supozitoarelor vaginale ,,Raviset

1,99
1,995
2
2,005
2,01
2,015
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Nr. supozitoare
Masa. g
masa medie 2.001602g, Variatii 0.11%
297
Comportamentul la topire sau dizolvare s-a determinat n conformitate cu prevederile
FR X, p.889. Intr-un flacon conic de 100 ml, care conine 50 ml apa meninuta la temperatura de
372C, se introduce un supozitor. Flaconul se agita prin uoara rotire o data la 5 min.
Supozitoarele preparate cu baze liposolubile trebuie sa se topeasc in cel mult 30 min, iar cele
preparate cu baze hidrosolubile trebuie sa se dizolve in cel mult 1 h. Pot rmne in flacon
particule de substane active si substane auxiliare nedizolvate.
S-a determinat comportamentul la topire pentru supozitoare ,,Raviset pentru trei serii de
supozitoare care constituie:
Seria 01/20.10.06- 13 minute la 372
0
C.
Seria 03/20.10.06- 15 minute la 372
0
C.
Seria 03/20.10.06- 14 minute la 372
0
C.
Contaminarea microbian s-a efectuat n corespundere cu cerinele Farmacopeei
Europene, categoria 3B. In 1.0 g produs farmaceutic se admite prezena a cel mult 10
4

microorganisme aerobe, enterobacterii cel mult 10
2
i cel mult 100 fungi (levuri i fungi
filamentoi), n absena Salmonella, Escherichia coli. Staphzlococcus aureus.
Dozarea s-a efectuat prin metoda spectrofotometric i HPLC (de alternativ). n MFT
au fost incluse tehnicele de dozare n urma extraciei cu ap la nclzire (Metoda 1).
Stabilitatea a fost determinat prin metoda clasica, seriile de supozitoare fiind depozitate
timp de un an la temperatura 202 C, in condiii de umiditate 40-60%, la loc ferit de lumina. La
nceputul depozitrii experimentale s-a petrecut dozarea prin metode, oglindite n MFT. n
procesul studierii stabilitii supozitoarelor o atenie deosebit se acord coninutului de
substan activ n forma farmaceutic, apariiei produselor de degradare, care ar micora
coninutul principiului activ i ar putea fi toxice. De aceea, pentru studierea cineticii degradrii
trebuie folosit o metod de analiz, ce ar permite determinarea substanei active n prezena
produselor de degradare. Astfel, pentru determinarea stabilitii supozitoarelor vaginale
Raviset a fost folosit metoda spectrofotometric.
Toate determinrile au fost efectuate in perioada 22.10.06 - 23.10.07, periodicitatea
testrilor a fost 3 luni. S-au determinat indici de calitate: aspectul, identificarea, uniformitatea
masei, comportamentul la topire, contaminarea microbian, dozarea. Determinrile s-au efectuat
paralel pentru toate trei serii.
Pe perioada testrilor preparatul i-a pstrat proprietile fizico-chimice i a corespuns
cerinelor atribuite calitii n conformitate cu DAN.
S-a stabilit termenul de valabilitate pentru toate cele trei serii de 1 an, iar temperatura de
pstrare recomandata este sub 25
0
C, ferit de lumin.
n compartimentul Ambalare sunt indicate cerinele pentru ambalaj.
n compartimentul Marcare sunt indicate cerinele pentru marcarea ambalajului primar
i de transport, care au fost introduse n MFT pentru Supozitoare vaginale Raviset.
Astfel putem meniona, c n procesul standardizrii supozitoarelor Raviset s-a
constatat corespunderea lor cerinelor Farmacopeei Romne i Farmacopeei Europene.
Concluzii
1. Cercetrile efectuate au stat la baza elaborrii MFT pentru Supozitoare vaginale Raviset.
2. DAN pentru forma farmaceutic au trecut expertiza la Agenia Medicamentului i s-a obinut
certificatul de calitate.
Bibliografie
1. Farmacopea European, ed. 3RD, 2001.
2. Farmacopea Romn, ed.X, 2005.
3. Farmacopea de Stat, ed.XI, V.1 i 2, 1987, 1989.

298
STUDIUL CHIMICO-FARMACEUTIC AL METOPROLOLULUI
Lilia Conicov
1
, Tamara Cotelea
1
, Larisa Soloviova
2

1
Catedra Chimie farmaceutica i toxicologic USMF N. Testemianu
2
Centrul tiinific in Domeniul Medicamentului

Summary
The study of the metoprolol in chemico-pharmaceutical
There was elaborated the TLC method of metoprolol identification by using five develop
systems. We performed specifical identification reactions . Spectrophotometric method of
quantitative determination for metoprolol in powder and tablets of 0.05 g were elaborated, as
well as HPLC method was elaborated in order to determine the purity of substance. Usind the
analytical methods elaborated by us over the artificial biological test, there was extracted
metoprolol from biological liquids (blood plasma, urine). Having considered the elaborated
methods as specific and reproductive they are recommended for the study of metoprolol in
biological liquids.
Rezumat
Au fost aplicate reacii de identificare, cromatografia n strat subire, utiliznd doua sisteme
de solveni. Am utilizat metoda spectrofotometric pentru identificarea i dozarea metoprololului
n pulbere i comprimate de 0,05 g. Spectrometria n IR s-a folosit cu scopul determinarii
structurii chimice ale preparatulului, precum i metoda HPLC de identificare n pulbere. Am
determinat condiiile optime de extracie a substanei n probe biologice n vitro. Dat fiind
faptul, c metodele folosite sunt specifice i reproductive ele se recomand pentru studierea
metoprololului n lichide biologice.

Actualitatea temei
n prezent bolile cardiovasculare dein ntietatea n ceea ce priveste frecvena mortalitii .
Ele reprezint maladiile vrstei naintate, dar n ultimii ani afecteaz populaia din ce n ce mai
tnar. Metoprololul ()-1-(izopropilamina)-3-[para-(metoxietil)fenoxi]-2-propanol)tartrat se
utilizeaz pe larg n medicin n tratamentul bolilor cardiovasculare. Este un -blocant
cardioselectiv ce scade influiena simpatic asupra inimii, astfel reduce numarul i intensitatea
crizelor anginale, reduce mortalitatea de infarct miocardic i previne aritmiile cardiace toate
acestea duc la nbuntirea i prelungirea vieii bolnavilor cardiovasculari. n anumite condiii
preparatul posed efecte adverse i toxice . n acest context prezint un interes deosebit studiile
metoprololulului n lichide biologice n cazul intoxicaiilor.
Obiectivele lucrrii
De a efectua studiul n vederea determinrii metodelor chimice i fizico-chimice de analiz
de identificare i dozare a metoprololului, care ar putea fi aplicate i n urma extragerii din
lichidele biologice.
Mareriale i metode de cercetare
n cadrul cercetrilor s-a folosit metoprolol n substan pur i n comprimate. Am utilizat
plasma sanguin i urin ca lichide biologice. Au fost aplicate metode chimice i fizico-chimice
de analiz. n investigaii experimentale, ca reageni s-au utilizat: cloroformul, acidul sulfuric,
alcool etilic 96%, acidul clorhidric, hidroxid de sodiu i hidroxid de amoniu, care au fost cu grad
de puritate pur pentru analizi chimic pur.
n vederea aplicrii reaciilor microcristaloscopice st metoda chimic de identificare a
metoprololului dup forma cristalelor produsele reaciilor cu reactivii corespunztori. Forma
cristalelor deseori depinde de condiiile procesului de cristalizare, de exemplu de concentraia
soluiei de cercet , prezena impuritilor, pH-ul mediului, temperatura, timpul de cristalizare.
Aplicarea microcristaloscopiei ne d posibilitate s determinn cu exactitate identitatea
substanei i totodat specificitatea ei. Dat fiind faptul, c reactiile microcristaloscopice sunt de
importan toxicologic, am determinat metodica de obinere a microcristalelor cu acid picric,
reactivul Dragendorff, clorura de cadmiu, sulfat de hidrargiu i iodura de cupru. Caracterul
299
specific al metoprololului n microcristaloscopie s-a elucidat n urmtorul procedeu: pe lamela de
sticl se depune o pictur de soluie cloroformic de metoprolol de 0,01% , care se evapor la
sec, deasupra se picur reactivul. Dup uscare apar cristale caracteristice.
Aceste reacii se studiaz mai nti pe substan pur, apoi se aplic n extrasul organic din
materialulu biologic[4,5,7].
Pentru identificarea metoprololului am aplicat metoda CSS folosind plci de silicagel G. S-
au utilizat dou sisteme de solveni: benzen- n-hexan-alcool etilic 96% (3:5:5); cloroform-
metanol-hidroxid de amoniu 25% (80:15:2), pentru care s-a determinat valoarea Rf egal cu 0.46
i respectiv 0,56. Ca relevant am utilizat reactivul Dragendorff.
Metodica: 0,05 g de metoprolol se dizolv n 100ml cloroform (soluia A). Din siluia A
lum 1 ml i dizolvm n 10 ml cloroform (soluluia B) . Pe linia de start a plcii se aplic 2l
soluie B, placa se introduce n camera de cromatografiere i se cromatografiaz ascendent n
sistemul de solveni corespunztori, cnd frontul de solveni va parcurge 2/3 din lungimea total
a plcii cromatografice, placa se scoate din vas, se usuc la aer i se pulverizeaz cu reactivul
Dragendorff sau se prelucreaz cu vapori de iod. Spoturile de metoprolol se coloreaz n galben-
cafeniu. Se determin valorile Rf. Sensibilitatea reacieieste de 10 g/ml. Metoda poate fi
aplicat la cercetarea metoprololului in extrasul organic din lichidele biologice.
Pentru determinarea identitii s-a aplicat spectrometria n IR - este o metod modern ce
se caracterizaz printr-o informaie mai multilateral despre structura chimica a substantei
medicamentoase. Ea ne permite identificarea omologilor aceleiai clase, care prin alt metod nu
se se pot diferenia. Spectrul n IR al metoprololului s-a nregistrat cu ajutorul aparatului
SPECORD 75-IR, n intervalul 400-4000 cm
1
, suspensie n ulei de vazelin (0,05 metoprolol
i 5 picturi ulei de vaselin). Vibraiile intensive s-au nregistrat n regiunile 1297 cm
-1
-
corespund grupei OH si C-O ; cele din 1545-1576 cm-
1
corespund gruparilor C-H al inelului
benzenic; iar din 1600 cm
-1
i 1639 cm
-1
- caracterizaza prezena inelului benzenic (gruparile
carbon-carbonice asimetrice) i 690 cm
-1
- caracteristice pentru grupa NH.
n studiul nostru am aplicat reacii de identificare cu srurile ionilor de potasiu, obinndu-
se un precipitat alb , cu clorura de fier s-a obinut un compus complex rou. Am efectuat reacie
de formare a azocolorantului- rezultatul este un compus complex portocaliu.
Metodica: mai nti am efectuat hidroliza acid a metoprololului apoi am adugat
azoreactivul (streptocid cu nitrit de sodiu) i -naftol n urma creia se formeaz azocolorantul.
Metod de identificare i apreciere a subsranelor medicamentoase bazat pe compararea
cu spectrele substanelor de referin sub aspectul analizei structurale este spectrofotometria de
absorbie n UV. Astfel pentru identificarea metoprololului s-au nregistrat spectrele de absorbie
n intervalul lungimelor de und 222-276 nm.
Pentru aceasta 0,05 g de metoprolol se trece ntr-un balon cotat cu capacitatea 50ml, se
adaug 10 ml acid clorhidric, etanol, hidroxid de sodiu sau cloroforrm i se agit pn la
dizolvarea complet i se aduce la cot (soluia A). Se ia 1 ml soluie A i se trece n alt balon
cotat cu volum 100 ml i se aduce cu solvent corespunztor pn la cot (solvent B). Spectrul de
absorbie al metoprololului n aceti solveni are urmtoarele maxime de absorbie: astfel, n
soluia de alcool etilic are maximul la lungimea de und 224 nm, al soluiei cloroformice
maximele se nregistreaz la 276 nm, n hidroxid de sodiu- la lungimea de und 225 nm, iar cel
n acid clorhidric- la lungimea de und 222 nm.
Pentru lucru de mai departe s-a determinat curba de calibrare, unde acest maxim a fost ales
ca lungime de und analitic pentru determinarea metodei de dozare a metoprololului n
substan, comprimate i dup extragere din lichidele biologice [1,3,6].
Preventiv s-a cercetat dependena absorbanei de concentraia metoprololului. Pentru
aceasta 0,01 g metoprolol , substan pur, se introduce intr-un balon cotat cu capacitatea de 50
ml, se dizolv n cloroform i se completeaz pn la cot (soluia A 0,02%). 10ml soluie A se
plasez n alt balon cotat cu capacitatea de 50 ml i se aduce cu cloroform pn la cot (soluia
B 0,004%). Concentraia soluiei B este de 40 g /ml. Din soluia B se pregtesc o serie de
soluii cu concentraiile corespunztoare: 5; 10; 15; 20; 25; 30 g/ml. Se citete absorbana
300
acestor soluii la lungimea de und 276 nm, n cuva cu drumul optic de 10 mm. n calitate de
soluie de referin se utilizeaz cloroformul. n baza acestor date s-a construit graficul
absorbanei n funcie de concentraia metoprololului n soluie de cloroform. Din curba de
etalonre a metoprololului reiese, c legea Bouguer Lambert- Beer se respect n intervalul de
concentraie 0,1-30 g/ml de metoprolol. Pe aceast baz s-a elaborat tehnica de lucru pentru
dozarea spectrofotometric n pulbere i comprimate. Eroarea relativ a metodei determinrii
cantitative n comprimate nu depete 0,3 % .
n continuare am aplicat metoda cromatografiei lichide de performan nalt (HPLC),
folosind coloana Lichrosorb 100P-8. Conditiile: faza mobil A :B: C (acetonitril-acid
fosforic(0,025 v /v)- sol tampon trietilamin (60:25:15), rata curentului 0,6 ml/min, detecia s-a
efectuat n UV la = 229 nm.
Not: Prepararea sol tampon TEA: 9ml acid fosforic conc. i 10 ml trietilamin, ap pn
la 900ml,se aduce la pH 3,4 cu acid fosforic diluat i se completeaz cu ap pn la 1 litru.

Fig.1. Spectrul de absorbie al soluiei de metoprolol in cloroform.

.

Fig.2. Spectrul de absorbie al solutiei de Fig.3. Spectrul de absorbie al soluiei de
metoprolol in hidroxid de sodiu 0,1mol/l metoprolol n acid clorhidric 0,1mol/l

n continuare am determinat metoda de izolare a metoprololului din lichidele biologice cu
ap acidulat acid sulfuric i acid tricloracetic 30%. Substana activ se extrage din mediul bazic
la pH 10,0-11,0 (NH4OH).

1
2
3
260 270 280 290
0.05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
n

276
200 220 240 260
0.05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
nm
A
225
20 22 24 26
0.0
0,
0,1
0,
0,2
0,
n
222
301

Fig.4. HPLC. Cromatograma metoprololului.

Concluzii
Aplicnd metoda spectrofotometric s-a stabilit maximul de absorbie al metoprololului n
diferii solveni: astfel, spectrul de absorbie al metoprololului n soluie de alcol etilic are
maximul de absorbie la lungimea de und 224 nm; similar spectrul de absorbie al solutiei
cloroformice de metoprolol la 276 nm i spectrul de absorbie al soluiei de metoprolol n acid
clorhidric 222 nm, iar n hidroxid de sodiu - la lungimea de unda 225 nm. S-au stabilit condiiile
de indentificare prin metoda cromatografiei pe strat subire i HPLC. S-au efectuat reacii
microcristaloscopice caracteristice pentru metoprolol i spectrometria n IR. S-a determinat
metoda de izolare i extragere a metoprololului la pH 10,0 11,0.
Bibliografie
1. Baloescu C, Curea E. Contolul medicamentelor - Bucureti: Ed. Didactic i pedagogic,
1983. p.129 130.
2. Bodoga B., Maria Virginia Coman . Cromatografie pe strat subire Bucureti: Ed.Tehnic,
1995 160p.
3. Cotelea T. Teza de doctor Investigaii chimico toxicologice asupra cinarizinei i
clonidinei. Chiinu, 2002, .208p.
4. .. ..
. 1948
5. .. ..
1981 239 .
6. .. .. -
. . 1976 126 .
7. ..
. , 1968. 226 .

670 mV
1 2 3 4 5 6 min
A
3.94

302
INVESTIGAII CHIMICO-TOXICOLOGICE ASUPRA METOCLOPRAMIDEI
Mariana Hangan,
1
Tamara Cotelea,
1
Larisa Soloviov
2

1
Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic USMF N.Testemianu
2
Centrul tiinific in Domeniul Medicamentului

Summary

Chemico-toxicological investigations on methoclopramide
We elaborated the TLC method of methoclopramide identification by using two
developped systems, specrophotometric method of quantitative determination for
methoclopramide in powder and tablets of 0.01g. Using the analytical methods elaborated by us
over the artificial test there was extracted metoclopramide from biological liquids (plasma,
urine). The output of methoclopramede from plasma was 50.44%; from urine- 46.80%
Having considered the elaborated methods as specific and reproductive they are
recommended for the study of methoclopramide in biological liquids.
Rezumat
A fost elaborat metoda cromatografiei pe strat subire de identificare a metoclopramidei,
utiliznd 2 sisteme de solveni,metoda spectrofotometric de dozare n pulbere i comrimate
0,01g. Aplicnd metodele analitice elaborate de noi la probele biologice n vitro s-a efectuat
extracia metoclopramidei din lichidele biologice. Randamentul metoclopramidei din plasma
sanguin este de 50,44%, din urin-46,80%. Dat fiind faptul, c metodele folosite sunt specifice
i reproductive ele se recomand pentru studierea metoclpramidei n lichidele biologice.

Actualitatea temei
Clorhidratul de metoclopramid [clorhidratul de 4-amino-5cloro-N-[(2-dietilamino) etil]-2
meloxibenzamid] se utilizeaz pe larg n medicin n caz de vom i grea de diferit etiologie
(postoperator, n cadrul bolii de iradiaie, provocate de medicamente), sughi, esofagit de reflux,
staz gastric, dispepsie, flatulen, migrene; pentru uurarea tubajului duodenal i pentru
examenul radiologic gastrointestinal. Este un antivomitiv prin aciunea sa central, crete tonusul
sfincterului inferior al esofagului favorizeaz golirea stomacului prin stimularea peristaltismului
gastric i relaxarea sfincterului piloric; i se atribuie un efect de normalizare a funciilor motorii i
secretorii ale tubului digestiv, prin mecanism central.
Datorit acestor proprieti farmacologice, metoclopramida este utilizat pe larg n
medicin. n anumite condiii, preparatul posed aciuni adverse i toxice. Sunt cunoscute cazuri
de intoxicaie a populaiei cu aceste preparate medicamentoase. Din aceste considerente prezint
i interesul deosebit asupra studiului metoclopramidei n lichidele biologice.
Obiectivele lucrrii
De a efectua studiul n vederea determinriii metodelor de izolare, extragere, identificare i
dozare a acestui produs medicamentos extrae din lichidul biologic.
Materiale i metode de cercetare
n cadrul cercetrilor s-a folosit metoclopramida actv pur, comrimate 10 mg. A fost
folosit plasma sanguin i urina ca lichide biologice. Au fost aplicate metode chimice de analiz
rezultatele au fost prelucrate dup criteriul student. Ca reageni s-au utilizat n investigaiile
experimentale: soluie nitrit de sodiu, nafol, acid nitric, hidroxidul de sodiu, cloroformul,
reactivul Dragendorff etc. care au fost cu gradul de puritate pur pentru analiz i chimic pur .
Metoda chimic de identificare a metoclopramidei se apreciaz prin reactivii de precipitare:
reactivul Dragendorff, ce formeaz un precipiat brun, iar cu reactivul Leibermann-precipitat
galben-oranj; i de coloare: cu reacivul Mandelin-coloraie cafenie; reactia de formare a
azocolorantului-precipitat rosu caramiziu.
Cromatografia pe strat subire se distinge prin avantaje remarcabile n ceea ce privete
raporturile numrul de analize / mas i volumul aparatului folosit, numrul de analize / timp de
rspuns sau numrul de analize /cost de amortizare a investigaiilor [2, 3, 6, 8]. Separarea
substanelor din proba analizat prin metoda CSS, se realizeaz prin reacia diferit a
303
componenilor acesteia, n urma unor procese fizico-chimice, care se desfoar la suprafaa
fazei staionare (solide), prin trecerea continu a unei faze mobile (lichide), care poart compuii
respectivi. Fiecare component difer, n comportarea sa fa de granulele sorbentului fazei
staionare i astfel, este reinut mai mult sau mai puin la suprafaa acestora, separndu-se de
ceilali componeni, prezeni n amestecul iniial [1].
n prezenta lucrare am folosit metoda de identificare a metoclopramidei aplicnd metoda
cromatografiei pe strat subire pe plci standarde de silicagel G [5, 6, 7]. n rezultatul cercetrilor
preventive, pentru identificare se propun urmtoarele sisteme de solveni: metanol - ammoniac
25% (100 :1), cloroform - metanol (90:10) pentru care s-a determinat valoarea Rf egal cu 0.47
i 0,70. n calitate de relevant s-a utilizat reactivul Dragendorff, vapori de iod i reactivii pentru
formarea azocolorantului.
Prin urmare 0.1 g metoclopramid se dizolv n100 ml, se adaug cloroform (soluia A).
Se ia 0,1 ml soluie A n 100 ml cloroform (soluia B). Pe linia de start a plcii se aplic cu
capilarul de sticl 2 l soluie B, placa se introduce n vasul cromatografic i se cromatografiaz
ascendet n sistema de solveni copresunztori. Cnd frontul de solveni parcurge 2/3 din
lungimea total a plcii cromatografice, ultima se scoate din vas, se usuc la aer i se prelucreaz
cu reactivul Dragendorff sau cu vapori de iod, spoturile de metoclopramid se coloreaz n
galben cafeniu. Alte 2 cromatograme, n sistemele respective de solveni, se prelucreaz cu
acid clorhidric, nitrit de sodiu i soluie naftol. Spoturile de metoclopramid se coloreaz n
roz. Se determin valorile Rf. Sensibilitatea este de 10 g/ml.
Metod de identificare i apreciere a substanelor medicamentoase bazat pe compararea
spectrelor substanelor de referin sub aspectul analizei structurale este spectrofotometria de
absorbie n UV. Pentru identificarea metoclopramidei s-au inregistrat spectrele de absorbie n
soluie de acid clorhidric 0,1 mol/l , alcool etilic 96% i cloroform la intervalul lungimilor de
und 220-380 nm. pentru aceasta 0,1g metoclopramid se trece intr-un balon cotat cu capacitatea
100 ml, se adaug 60 ml acid clorhidric, alcool sau cloroform pn la dizolvarea complet i se
aduce la cot cu solventul corespunztor, (soluia A). Se ia 1ml soluie A i se trece n alt balon
cotat cu volumul 100 ml se aduce cu solvent corespunztor pn la cot, (soluia B). Se
spectrofotometreaz n cuv cu grosimea stratului de 1 cm n intervalul lungimii de und 220-
380nm.
Spectru de absorbie a soluiei B cu concentraia 0.001 % este prezentat n figura 1.

Fig.1 Spectrul de absorbie al soluiei de metoclopramid n cloroform

250,0 260 280 300 320 340 360,0
0,00
0,2
0,4
0,6
0,8
1,00
nm
A
310,97
286,14
269,81
304
Pentru lucru de mai departe s-a determinat curba de calibrare unde ca lungime de und
analitic s-a luat =270 nm. Din curba de etalonare a metoclopramidei reiese, c legea Bouguer
Lambert-Beer se respect n intervalul de concentraie 2-30 g/ml metoclopramid. In aceast
baz s-a elaborat tehnica de lucru pentru dozarea spectrofotometric n pulbere i compriomate.
Pentru identificare metoclopramidei n substan am aplicat metoda spectroscopiei n IR dup
care se poate deduce detalii de structur a preparatului. Din spectrul IR a metoclopramidei se
disting urmtoarele benzi de absorbie la lungimile de und: 1590, 1614, 1530, 1496, 1254,
1311 cm
-1
.
Cromatografia de lichide de nalt performan n prezent este cea mai popular metod
de analiz instrumental n laboratoare de analliz i control n domeniul farmaceutifc
Identificarea medicamentelor se face dup timpul de retenie a fiecrui component. Dozarea se
efectuiaz dup aria picului, care este proporional cu cantitatea de medicament n prob [3, 4,].
n condiiile: coloana C18 LiChrospher 100 RP-18e (125x 4, 50mm) mrimea particulelor 5 m;
rata curentului 0,6 ml/min t 25C; lungimea de und 295 nm pentru identificare
metoclopramidei am obinut un pic cu timpul de retenie 2,6 min (fig2).
Izolarea, extragerea i dozarea metoclopramidei din lichidele biologice(n vitro)
S-au studiat metode de izolare cu apa alcalinizat cu soluie NaOH 10 %. La 4 ml plasm
se adaug 2 ml soluie metoclopramid 0,02 %, se las pe 24 ore, apoi se aciduleaz cu soluie de
acid sulfuric 10 % pn la pH 2,0 - 2,5 (hrtia indicator universal). Amestecul se las pe 2 ore,
agitndu-se periodic, apoi se adaug 3 ml soluie acid tricloracetic 30 %, se agit i se
centrifugheaz timp de 10 minute (5000 rot/min). Centrifugatul se separ, iar reziduul nc de 2
ori se prelucreaz cu acid sulfuric 0,02mol/l sub controlul pH 2,0 2,5 i din nou se
centrifugheaz. Centrifugatele se unesc i se filtreaz. Se verific valoarea pH-ului, care trebuie
s fie egal cu 2,0. soluia apoas se alcalinizeaz cu soluie NaOH 10% pn la pH 9,0-10,0
(hrtia indicator universal). Se extrage cu cloroform de 3 ori cte 5 ml, extraciile cloroformice
se unesc.

Fig.2 HPLC. Cromatograma metoclopramidei

n extractul cloroformic se determin coninutul de metoclopramid prin metoda
spectrofotometriei UV. Pentru aceasta, 4 ml extract cloroformic se plaseaz ntr-un balon cotat
cu capacitatea de 10 ml, volumul se aduce cu cloroform la cot i se citete absorbana la
spectrofotometru, la lungimea de und 272 nm, n cuva cu drumul optic de 10 mm.(fig.4) n
calitate de soluie de referin se utilizeaz cloroformul.
Paralel, se analizeaz proba cu soluie metoclopramid standard.

283 mV
1 2 3 4 5 min
A
2,6
305

Fig.4 Spectrul de absorbie al soluiei de metoclopramid extras
cu cloroform din plasma sanguin

Rezultatele obinute ne demonstrezc c din plasm cloroformul extrage 50,44%, iar din
urin 46,80% metoclopramid.
Concluzii
Aplicnd metoda spectrofotometric s-a stabilit maximul de absorbie al metoclopramidei
la lungimile de und 270 i 311 nm. S-au stabilit condiiile de identificare prin metoda
cromatografiei pe strat subire, spectroscopiei n IR i HPLC. S-a determinat metoda de izolare i
extragere a metoclopramidei din lichidele biologice.
Bibliografie
1. Baloescu C., Curea E. Controlul medicamentilor- Bucureti: Ed. Didactic i pedagogic;
1983, p.129130.
2. Bogoda B., Maria Virginia Coman. Cromatografia pe strat subire- Bucureti: Ed. Tehnic,
1995-160p.
3. Daniela Lucia Muntean; Marius Boji; Controlul medicamentelor. (metodele spectrale,
cromatografice i electrografice de analiz). Ed. Med. Univer. Iuliu Hatiganu Cluj-Napoca
2003303p.
4. ., ., . .
- : , 1988. 688 c.
5. .. ..
. , 1976 376.
6. . - : , 1976-276.
7. .., // . 1963-Nr3-
c38.
8. . : 1963-309

240,0 260 280 300 320 340 360,0
0,07
0,2
0,4
0,6
0,8
1,00
nm
A
311,11 290,94
269,09
267,99
306
STUDIUL PARACETAMOLULUI N LICHIDELE BIOLOGICE
Maria Costin
1
Tamara Cotelea,
1
Leonid Lsi
2

1
Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic USMF N. Testemianu
2
Catedra Biochimie i biochimie clinic USMF N. Testemianu

Summary
Paracetamol Study in the Biological Liquids
We used Paracetamol phisico-chemical methods in the pure substance for its analysis in the
blood plasma. The identification FeCl3 reaction, Nessler reagent, Liebermann. Chromatography
on the thin layer in the ethylacetate-metanol-ammonia 25 % (85:10:5) there were used. FeCl
3
is
used as an eluent, obtaining Rf = 4.5 cm. There was used UV spectrophotometric method in the
hydroxide for identification obtaining maximum absorption on 244 and 258 wave lengths pH =
3,0 value of the extraction medium with chloroform organic extragent, as well as HPLC method
was elaborated in order to determine the purity of substance.
The used methods where applied according to chemico-toxicological analysis conditions of
Paracetamol in the biological liquids.
Rezumat
Am aplicat metode chimice i fizico-chimice de identificare a paracetamolului n substa
pur i plasm sanguin. Am folosit reaciile de identificare cu FeCl
3
, r-vul Nessler, reacia
Liebermann. Am aplicat cromatografia pe strat subire n sistemele de solveni etilacetat-
metanol-amoniac 25% (85:10:5). Ca developant am folosit clorura de fier (III), obinnd un
Rf=4,5cm. Deasemenea am aplicat metoda spectofotometric UV n acidul clorhidric i hidroxid
de sodiu obinnd maxime de absorbie la lungimea de und 244 i 258 nm respectiv. S-a
determinat valoarea pH=3,0 a mediului de extracie cu extragentul organic cloroform., precum i
metoda HPLC de identificare n substan.
Metodele folosite corespund condiiilor de analiz chimico-toxicologic a paracetamolului n
lichidele biologice.

Actualitatea temei
Paracetamolul (para-acetil-amino-fenol) este un preparat cu aciune analgezic, datorit
inhibrii sintezei prostaglandinelor i antipiretic, acionnd la nivelul centrului termoreglrii din
hipotalamus. Posednd o excelent biodisponibilitate dupa administrarea oral.
Dup administrare, 80-90% este metabolizat n ficat prin conjugare, rezultnd glucurono-
(cea mai mare parte) i sulfoconjugai, excretai apoi n urin. O mic fraciune ia calea
citocromului P450 din mitocondriile hepatice, fiind sursa unui metabolit foarte toxic, deoarece
implic formarea unui component intermediar, produs de oxidare (acetilimidoquinona) care este
rapid inactivat prin conjugare cu glutation i eliminat n urina.
n caz de supradozare cile de inactivare prin sulfo- i glucurono-conjugare se satureaz i
astfel se recurge la calea oxidativ a citocromului P450. Metabolitul intermediar, toxic datorit
gradului mare de reactivitate este rapid conjugat cu glutation. Rezervele hepatocelulare de
glutation se epuizeaz n intoxicaiile masive sau n cazul insuficienei hepatice, i astfel
produsul intermediar N-acetilimidoquinona liber difuzeaz n citoplasma hepatocitelor,
ajungnd s reacioneze ireversibil cu glicoproteinele membranare, ajungndu-se la citoliz, cu
necroz hepatic generalizat i implicit insuficien hepatic (fig. 1).
Deci mecanismul de toxicitate a paracetamolului const n epuizarea rezervelor hepato-
celulare de glutation care duce la citoliz cu necroz hepatic. Semnele unei intoxicaii apar la
doze foarte variate, ncepnd cu 5-8 g, n cazul copiilor dozele periculoase pot fi mult mai mici. [
4, 5, 6, 8]
Obiectivele lucrrii
n legtura cu creterea ntrebuinrii preparatelor medicamentoase, se marete necesitatea
aplicrii metodelor mai informative n analiza acestora. Studierea legitilor repartizrii
substanelor n organism deasemenea solicit metode de examinare rapide i sensibile.
307
Scopul lucrrii const n stabilirea metodelor de identificare i dozare a Paracetamolului
(Acetaminofen, para-acetil-amino-fenol), precum i a metodelor de izolare a acestuia din
materialul biologic.

Fig.1. Biotransformarea Paracetamolului

O
N H
O
CH
3
S
OH
OH
O H
N H
O
OH
CH
3
N H
O
OHglucuronid
CH
3
N H
O
O
CH
3
N H
O
O
CH
3
N H
O
OH
GS
CH
3
Biotransformarea Paracetamolului
Fenol sulfotransferaza
Glucuronil transferaza
Sulfo-conjugati
Glucurono-conjugati

50 -- 60%
25 -- 35%
Calea oxidativa
a Cit P 450
Glutation conjugatul paracetamolului
(acid acetaminofen 3 mercapturic)
N acetil p-benzochinonimina
Citotoxic
N acetil benzosemichininimina,
radical liber
Legare de proeteinele renale
cu alterarea zonei medulare
Legare de proteinele hepatice , fapt ce
duce la necroza centrilobulara
( )
( )
308
n cadrul cercetrilor s-a folosit paracetamol substan pur, comprimate de 500 mg. A fost
folosit plasma sanguin i urina ca lichide biologice. Au fost aplicate metode chimice de
analiz. Rezultatele au fost prelucrate dup criteriul student. n investigaiile experimentale ca
reageni s-au utilizat clorura de fier (III), formnd o coloraie albastr-violeta, r-vul Nessler, ce
formeaz coloraie galben, reactivul Liebermann coloraie violet, etilacetat, metanol,
amoniac 25% , acidul clorhidric, hidroxid de sodiu, cloroform care au fost cu grad de puritate
pur pentru analiz i chimic pur. [1, 2]
Pentru identificarea paracetamolului am aplicat metoda CSS folosind plci cromatografice cu
coninut de silicagel G. S-a utilizat sisteme de solveni etilacetat-metanol-amoniac 25%
(85:10:5), metanol:amoniac 25% (100:1,5), pentru care s-a determinat valoarea Rf = 4,5; 9,5. Ca
developant am folosit clorura de fier (III).
0,01 g de paracetamol se dizolv n 100 ml cloroform (soluia A). Din soluia A lum u1 ml i
dizolvm n 10 ml cloroform (soluia B). Pe linia de start a plcii se aplic 2 l soluie B, placa
se introduce n camera de cromatografiere i se cromatografiaz ascendent n sistemul de
solveni corespunztor, cnd frontul de solveni va parcurge 2/3 din lungimea total a plcii
cromatografice, placa se scoate din vas se usuc la aer i se pulverizeaz cu soluie de clorura de
fier (III). Spoturile de paracetamol se coloreaz in albastru-violet. Se determin valorile Rf.
Sensibilitatea reciei este de 10 g/ml. Sensibilitatea metodei ne d posibilitate de a o aplica n
extrasul organic din lichidul biologic cu coninut de paracetamol. [10]
Metod de identificare i apreciere a substanelor medicamentoase bazat pe compararea
cu spectrele substanelor de referin sub aspectul analizei structurale este spectrfotometria de
absorbie n UV. Astfel pentru identificarea paracetamolului sau nregistrat maximele de
absorbie la lungimile de und 244 i 258 nm la valoarea pH=3,0 a mediului de extracie cu
extragentul organic cloroform (fig. 2). [9]
Pentru identificarea paracetamolului n substan am aplicat metoda spectroscopiei IR, care
ne ofer posibilitatea s primim o informaie complet despre structura i compoziia
moleculelor n substan. Prezena benzelor de absorbie caracteristice spectrului IR corespund
oscilaiilor anumitor grupe funcionale.* n cele din urm cu ajutorul aparatului Specord 75 n
intervalul 400 4000 cm1 am obinut spectrul paracetamolului n suspensie de ulei de vaselin
(KBr). Principalele benzi de absorbie au fost identificate n intervalul lungimilor de und 1506,
1657, 1565, 1263, 1227, 1612,cm- (fig. 3). [7]

Fig. 2.Spectrul paracetamolului n UV Fig.3 Spectrul paracetamolului n IR

A
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
309
Conform structurii chimice paracetamolul este un compus ionic, ne-am propus s folosim
posibilitatea de anliz prin metoda cromatografiei lichide de nalt performan (HPLC), folosind
o coloan Lichrosorb C18 RP (150 x 4,0mm), mrimea particulelor 3 m; Am utilizat ca eluent
amestecul faza mobil ap acetonitril 50:50; t 25 C; lungimea de und 313 nm.
Izolarea i extragerea paracetamolului n lichide biologice (n vitro)
S-a studiat procesul de izolare al paracetamolului n lichide biologice cu ap acidulat cu
acid sulfuric 10% i acid tricloracetic 30%.
La 4 ml plasm sanguin se adaug 3 ml soluie alcoolic de paracetomol 0,1 %, se las pe
24 ore. Apoi acidulm cu soluie de acid sulfuric 10 % pn la pH 2,0-2,5 (hrtia de indicator
universal). Amestecul se las pe 1-2 ore, agitndu-se periodic, apoi se adug 3 ml soluie de
acid tricloracetic 30 %, se agit i se centrifugheaz timp de 10 min (5000 rot/min). Centrifugatul
se separ, iar reziduul nc de 2 ori se prelucreaz cu soluie de acid sulfuric 0,02 mol/l sub
controlul pH 2,0-2,5 i din nou se centrifugheaz. Centrifugatele se unesc i se filtreaz. Apoi se
extrage cu cloroform de 3 ori cte 5 ml. Extraciile cloroformice se unesc i volumul se aduce
pn la 20 ml.
n extractul cloroformic se determin coninutul de paracetamol prin metoda
spectrofotometriei UV. Pentru aceasta extrasul cloroformic se spectrofotometreaz, citindu-se
absorbana soluiei la lungimea de und 265 nm n cuva cu drumul optic de 10 mm. n calitate de
soluie de referin se utilizeaz cloroformul. Paralel se anlizeaz proba cu soluie paracetamol
standard.
Prepararea soluiei standard 0,05 g (masa exact) paracetamol, substan de referin, se
trece cantitativ nt-un balon cotat cu capacitatea de 100 ml, se dizolv ntr-un volum de 10 ml i
se aduce la cot cu acelai solvent (sol. A). 1 ml soluie A se plaseaz n alt balon cotat cu
capacitatea de 50 ml i volumul se completeaz pn la cot cu acelai solvent (sol. B). 1 ml
soluie B conine 10 g paracetamol. [3]
Concluzii
S-a fcut o analiz bibliografic n ceea ce privete metabolismul medicamentelor n
organismul uman. S-au determinat metodele chimice de identificare a 4-(Acetilamino)fenol n
substan pur i dup extracie din materialul biologic. Aplicnd metoda spectrofotometri s-a
stabilit maximul de absorbie al paracetamolului n acidul clorhidric i hidroxid de sodiu
obinnd maxime de absorbie la lungimea de und 244 i 258 nm respectiv. S-au stabilit
condiiile de identificare prin metoda CSS i HPLC. S-a determinat metoda de izolare i
extragere a paracetamolului la pH 2,0-2,5.
Bibliografie
1. Babilev F. V. Chimie farmaceutic-Chiinu, Universitas, 1994 351p.
2. Boji Marius, Sndulescu Robert, Roman Liviu, Opren Radu: Analiza i controlul
Medicamentelor, Vol. 2 Intelcredo DEVA 2003 768p.
3. Cotelea T. Teza de doctor Investigaii chimico-toxicologice asupra cinarizinei i clonidinei
Chiinu, 2002 208p.
4. Lester M., Md. Haddad, Michael W. Shannon, j Winchester, Judy Fletcher Editor), Lames P.
Winchester: Clinical Management of Poisoning and Drug Overdose
5. Matcovschi C., Procopiin V., Parii B. Ghid Farmacoterapeutic Chiinu, 2006-986 p.
6. Matthew J. Ellenhorn, Seth Schonwald, Gary Ordog, Jonathan Wasserberger: Ellenhorn's
Medical Toxicology: Diagnosis and Treatment of Human Poisoning (Medical Toxicology),
2nd edition, 1997
7. Nacanishi KOL. Inf red absorbtion Spectroscopy Practical Holden Daf ine, Tokzo, 1964
216p.
8. Roman Vlaicu, Emilia Macavei, Ioan Murean: Practica urgenelor medicale, vol. 1, 1979
9. . ., . .
: , 1976-126.
10. . : , 1976 276.

310
RISCUL DE INTOXICAIE CU AMINOFILIN I CONDIIILE OPTIME DE
ANALIZ CHIMICO-TOXICOLOGIC
Victoria Ciobanu,
1
Tamara Cotelea,
1
Leonid Lsi
2

1
Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic USMF N.Testemianu
2
Catedra Biochimie i biochimie clinic USMF N.Testemianu

Summary
Contribution in studying chemical-toxicology of
aminophylline in biotransformation process
The main idea of this work was to develop physical-chemical methods by investigation
theophylline Isolation tests from biological liquids were affected in PH diversions.
Results confirmed by thin layer of chromatography application.Application of mobile
phases of methanol-sol.ammonium25% (100-1.5) with Rf 0.75,and UV spectrophometry with
maximum absorbtionby wave length 275 nm, IR spectroscopy (suspension in oil of Vaseline )
with band absorbtion 1670,1717,1567,715,980 cm (KBr) Identification of theophylline was
determined by HPLC method.This method implicates coloumn C 18 Lichrospher 100-RP-18C
with precoloun Lichrocort-124-4 in mobile phase trietilamine 146 l , Phosphoric acid 750 l,
Water till 530 ml,PH-3,3 with Na0H solution 10% and apply Acetonitril till 750 ml. Current rate
is 0.6 ml/min
Rezumat
Scopul lucrrii a fost de a dezvolta metodele fizico-chimice de cercetare asupra teofilinei.
Probele de izolare din lichidele biologice au fost efectuate la diverse pH-uri. Rezultatele s-au
confirmat prin aplicarea cromatografiei pe strat subire, aplicnd fazele mobile metanol sol.
amoniac 25 % (100 : 1,5) cu valoarea Rf 0,75, i spectrofotometria UV cu maxim de absorbie
la lungimea de und 275 nm, spectoscopia IR (suspenzie n ulei de vaselin) cu benzile de
absorbie la 1670, 1717, 1567, 745, 980 cm
-1
(KBr). Identificarea teofilinei s-a determinat i prin
metoda HPLC aplicnd coloana C18 Lichospher 100-RP-18 C cu precoloan Lichrocort 124-4
n faza mobil trietilamin 146 l,, acid fosforic 750 l, ap pn la 530ml, se ajusteaz pH 3,3
cu soluie NaOH 10% i se aduce cu acetonitril la 750ml. Rata curentului 0,6 ml/min.

Actualitatea temei
n domeniul toxicologiei medicale studiul investigaiilor chimico-toxicologice a dobndit n
ultimii ani un interes deosebit. Metodele aplicate n cercetrile actuale au permis cercetarea
dezechilibrelor aprute n metabolismul preparatelor medicamentoase n cazul diferitor patologii.
Terapia bolii astmatice i hipertonice se confrunt n ultimii ani cu problema rezistenei
organismului vis-a-vis de medicamentele propuse, difer de la copil la adult de la om la om din
cauza metabolismului compuilor medicamentoi, care este n dependen de sistemul
microsomal al ficatului.
Aminofilina[1,3]-dimetilxantilxantino-[1,2]-etilendiamina se utilizeaz pe larg n practica
medical datorit aciunii antiastmatice.
n cazul administrrii aminofilinei la bolnavii afectai de hepatit cronic din cauza
insuficienei microsomale; metabolismul ei nu se petrece complet; se ntrerupe la formarea
teofilinei i n cele din urm la dozele repetate are loc acumularea metabolitului teofilina care
este foarte toxic.
Obiectivele lucrrii
Lucrarea i propune cercetarea chimico-toxicologic a aminofilinei n evaluarea unor
aspecte biochimice privind metabolismul aminofilinei.
n cadrul cercetrilor s-a folosit teofilin substan pur. A fost folosit plasma sanguin al
bolnavului afectat de hepatita cronic. . n cazul administrrii aminofilinei la bolnavii afectai de
hepatit cronic din cauza insuficienei microsomale, metabolismul ei nu se petrece complet, se
ntrerupe la formarea teofilinei ( 1,3-dimetilxantina). Transformarea respectiva este relatat mai
311
jos (fig.1). La cumularea metabolitului 1.3- dimetilxantina se produce intoxicaie grav. Acest
proces se ntmpl din cauza inhibrii enzimei Cyp 2E1. 1,3-dimetilxantina se cumuleaz n
cantiti mari i afecteaz sistemul de aprare antioxidant propriu al organismului.Mecanismul
de intoxicare cu 1,3-dimetilxantina const n epuizarea rezervelor hepatocelulare de glutation,
carea duce la citoliz i urmat de necroz hepatic. Semne de intoxicaie apar n dependen de
vrst, gen, patologie.

Eufilina
N
7
demetilare
Cyp 2E1

N
1
demetilare
1-metil-xantina

oxidare la C
8

1,3-dimetilxantina, Teofilina

N
3
demetilare

acid 1,3-dimetiluric acid 1-dimetiluric

Fig.1 Schema metabolizrii aminofilinei n organismul sntos

Teofilina formeaz o serie de reactii particulare: la dizolvarea n soluia de amoniac i la
interaciunea acestei soluii cu srurile de cobalt, se formeaza un precipitat alb cu nuan roz de
sare complex; cu soluia de nitroprusiat de sodiu d o coloraie stabil verde-intens, care prin
adugarea unui surplus de acid, dispare.Deasemenea formeaz sare de argint care prezint un
precipitat gelatinos La nclzire cu NaOH intr n reacie de condensare i formeaz culoare roz-
violet.
Aceste reacii se studiaz mai ntai pe substan pur, apoi se aplic n extrasul organic din
materialul biologic.
Pentru identificarea teofilinei am aplicat metoda CSS folosind plci cromatografice cu
coninut de silicogel G. S-au utilizat 2 sisteme de solveni: metanol-sol.amoniac 25%(100:1,5),
N NH-CO-CH
3
N
H
NH
2
H
3
C
O
O
N NH
2
N
CH
3
H
3
C
N
O
O
N NH
N
N
H
O
CH
3
H
3
C
N NH
N
H
N
H
O
H
3
C
O
O
O
O
N NH-CO-CH
3
N
H
NH - CHO
H
3
C
O
O
N NH
2
N
CH
3
H
3
C
H
2
C
H
2
C
NH
2
NH
2
N
O
O
.
1
2
3
4
5
6 7
8
9
312
eter dietilic-etilacetat(8:2), pentru care s-a determinat valoarea Rf egal cu 0,75; 0,6. Ca relevani
s-au utilizat reactivul Dragendorff i HCl 20% cu cristale de KMnO
4.

0.01g teofilin se dizolv n 100 ml alcool etilic 96% (soluia A). 1 ml soluia A se plaseaz
n balon cotat cu capacitatea de 10 ml i se aduce cu alcool etilic pn la cot (soluia B). Pe linia
de start a plcii se aplic cu capilarul de sticl 2 l soluie B placa se introduce n vasul
cromatografic i se cromatografiaz ascendent n sistemul de solveni corespunztor. Cnd
frontul de solveni va parcurge 2/3 din lungimea total a plcii cromatografice, ultima se scoate
din vas, se usuc la aer i se pulverizeaz cu reactivul Dragendorff sau se prelucreaz cu vapori
de iod.
Pentru identificarea 1,3-dimetilxantinei s-a nregistrat spectrul de absorbie n ulei de vaselin
(0.05 g teofilin i 5 picturi de ulei de vaselin), n intervalul lungimilor de und 400-4000
cm
-1
S-au depistat urmtoarele benzi de absorbie: n regiunea 745, 980, 1567 1670 1717 cm
-1

Fig.3.3 Spectrul de absorbie al soluiei de 1.3-dimetilxantin n IR

Metoda de identificare i apreciere a substanelor medicamentoase bazat pe compararea cu
spectrele substanelor de referin sub aspectul analizei structurale este spectrofotometria de
absorbie n UV.S-au nregistrat spectrele de absorbie in cloroform la lungimea de und 275 nm.

AAA

Fig.3.5 Determinarea maximului de absorbie al metabolitului 1,3-dimetilxantina n UV

n continuare am construit curba de etalonare: 0,02 g 1,3-dimetilxantin pulbere (mas
exact) se plaseaz ntr-un balon cotat cu capacitatea de 50 ml, se dizolv n cloroform i se
comple-teaz pn la cot (soluia A 0,04 %). 5 ml soluie A se plaseaz n alt balon cotat cu
capacitatea de 50 ml i se aduce cu cloroform pn la cot (soluia B 0,004%). Concentraia
soluiei B este de 40 g/ml. Din soluia B se pregtesc o serie de soluii cu concentraiile
corespunztoare: 5; 10; 15; 20; 25; 30 g/ml. Se citete absorbana acestor soluii la lungimea de
und 275 nm, n cuva cu drumul optic de 10 mm. n calitate de soluie de referin se utilizeaz
cloroformul.
Am stabilit condiiile de identificare a teofilinei prin metoda HPLC (cromatografia lichid
de nalt performan),obinnd timpul de reinere egal cu 1,7min.
313

Fig 2. HPLC. Cromatograma 1.3-dimetilxantinei aplicnd coloana LiChrospher 100RP18

Concluzii
S-a fcut o analiz a bibliografiei n ceea ce privete metabolismul medicamentelor n
organismul uman. S-au determinat metodele chimice de identificare a 1,3-dimetilxantinei n
substan pur i dup extracie din materialul biologic(pH2,5) . S-a determinat maximul de
absorbie a 1,3-dimetilxantinei n cloroform ( 275nm), timpul de retenie 1,7min (HPLC). S-a
confirmat schema de lucru a analizei chimico-toxicologice a 1,3-dimetilxantinei pentru aplicarea
n programul de studiu al chimiei toxicologice.
Bibliografie
1. Babilev F.V. Chimie farmaceutic-Chiinu, Universitas, 1994- 676 p.
2. Badescu M., Ciocoiu M. Compendiu de fiziopatologie special. Ed. Vasiliana, Iai, 2001,
371 p.
3. C.Blescu, C. Curea Controlul medicamentelor- Bucureti: Ed. Medical i pedagogic.
4. Cotru M. Popa L. Stan T. Preda N. Kincses, Ajtau M. Toxicologia- Bucureti, 1991, 243p.
5. Farmacopeea Romn, Ed. A. X-a, Ed. Medical, Bucureti, 1993
6. Guu N. V. Toxicologie- Chiinu, tiina, 1995, 261 p.
7. Liteanu C., Rca I., Teoria i metodologia statistic a analizei urinelor, Ed. Scrisul
Romnesc, Craiova, 1979.

314
SINTEZA I STUDIUL CLASTERULUI HOMOTRINUCLEAR AL FIERULUI(III) CA
PRECURSOR PENTRU OBINEREA PRODUSELOR FARMACEUTICE
ANTIANEMICE
Silvia Melnic
Catedra Chimie General USMF Nicolae Testemianu

Summary
Synthesis and study of a new iron(III) homotrinuclear cluster as precursor
for obtaining pharmaceutical antianemic products
A new trinuclear iron(III) furoate with the general formula [Fe
3
O(-
fur)
6
(CH
3
OH)
3
]Cl2CH
3
OH has been prepared and investigated by elemental analysis,
Mssbauer, X-ray and IR spectroscopy.
Rezumat
A fost sintetizat o combinaie complex de tip
3
-oxo-trinuclear a Fe(III) cu acidul -
furancarboxilic cu compoziia chimic [Fe
3
O(-fur)
6
(CH
3
OH)
3
]Cl2CH
3
OH. Compusul a fost
studiat prin analiz elementar, spectroscopie IR, Mssbauer i difracie cu raze X pe
monocristal.

Introducere
n ultimele decenii compuii coordinativi ai metalelor i gsesc o utilizare tot mai larg
n diverse domenii, printre care drept cele mai eficiente sunt: chimia clinic i medicina,
biologia, n special, biotehnologiile de cultivare dirijat a microorganismelor [1, 8]. Compuii
coordinativi manifest proprieti biologice, care sunt determinate de prezena n compleci a metalelor
implicate n majoritatea proceselor biochimice universale. Fierul este caracterizat prin cea mai
abundent prezen n organisme fiind unul din principalii biocationi implicai n procesele
biochimice parcurse la toate nivelele de complexitate celular. Un rol important revine fierului
datorit semnificaiei sale pentru producerea celulelor roii ale sngelui i formarea
hemoglobinei i a mioglobinei, precum i pentru multe enzime. Fierul joac de asemenea rolul
principal n multe procese biochimice i sisteme enzimatice care include: metabolismul
energetic, producerea serotoninei i dopaminei, formarea colagenului i funcia sistemului imun.
Deficiena nutriional i utilizarea unor produse srace n fier, vitamine i alte principii
bioactive afecteaz grav sntatea populaiei i n primul rnd a viitoarelor mame i a copiilor.
Deficiena fierului n organismul uman are drept consecin anemia fieripriv - una din cele mai
stringente i nesoluionate probleme la momentul actual dar i apariia defectelor n rspunsul
imun al organismului [4, 6, 7, 10, 11, 14]. n prezent n ntreaga lume se efectueaz cercetri
legate de obinerea unor suplimente alimentare ce conin fier. Este cunoscut, c cel mai accesibil
pentru organismul uman este fierul hemic, care se conine n ficat i alte produse din carne. ns
pentru suplinirea deficitului de fier este necesar utilizarea lor n cantiti sporite.
La momentul actual biomasa cianobacteriei Spirulina platensis este considerat sursa
vegetal principal non-convenional de substane bioactive, dar i sursa organic a unor
microelemente cu o semnificaie fiziologic pronunat, ndeosebi a manganului, cromului,
seleniului, zincului i a fierului [3,15]. Datorit faptului c biomasa de Spirulin este o surs
bogat de proteine, acizi grai polinesaturai, vitamine, antioxidani (superoxiddismutaza), -
caroten (ficocianina), polizaharide (calcium spirulan), aminoacizi imunoactivi, etc. mbogirea
ei cu fier legat organic va permite obinerea unor suplimente alimentare i produse noi care vor
putea fi utilizate pentru prevenirea anemiei.
Astfel, una din direciile actuale ale studiilor contemporane este studiul posibilitii dirijrii
cantitative i calitative a proceselor biosintetice, utiliznd compuii coordinativi ai metalelor. S-a
demonstrat eficacitatea utilizrii unor compui coordinativi ai metalelor (Cr, Cu, Mn, Co, Ni, Zn i Sn)
la cultivarea cianobacteriei Spirulina platensis prin stimularea proceselor biosintetice i acumularea
diferitor substane bioactive [5, 12, 13, 18]. Cultivarea Spirulinei n prezena unor compui
coordinativi ai fierului ar permite acumularea fierului n biomas, ceea ce ar contribui la
315
obinerea unei biomase calitative cu un coninut bogat de ficocianine i fier, care ar putea fi
utilizat att la obinerea unor produse nutriionale de fortificare a rspunsului imun, ct i a
preparatelor medicamentoase (comprimate, soluii injectabile) pentru profilaxia i tratarea
anemiei precum i a unor maladii legate de imunodeficiena organismului uman.
Scopul studiului dat a fost efectuarea sintezei, obinerea formelor policristaline i analiza
componenei chimice a compusului coordinativ al Fe(III) cu scopul, n perspectiv, de
investigare a aciunii acestui compus coordinativ cu acidul piromucic asupra procesului de
acumulare a principiilor bioactive i a fierului n biomas.
Materiale i metode de investigare
Acidul -furancarboxilic (Aldrich, >98%) a fost purificat prin recristalizare din soluiile
H
2
O-metanol [2]. Compusul iniial Cu
2
(C
4
H
3
OCOO)
4
4H
2
O a fost preparat prin reacia dintre
(CuOH)
2
CO
3
cu acidul -furancarboxilic, FeCl
3
6H
2
O a fost obinut din sursele comerciale i
utilizat far purificare preventiv.
Microanaliza C i H a fost efectuat n Laboratorul Microanalitic a Institutului de Chimie
folosind Vario-EL-III-CHNOS Elemental Analyzer, iar Fe n Laboratorul de Chimie
Bioanorganic, folosind procedurile standarde de analiz.
Spectrul IR a compuilor a fost msurat la spectrofotometrul Perkin Elmer Spectrum 100 FT-IR
n regiunea 250-4000cm
-1
.
Spectrul Mossbauer a complecilor la temperatura camerei (RT) i 80K au fost msurate
utiliznd echipament electrodinamic. Ca surs s-a utilizat
57
Co n Cr-matricea. Pentru calibrare s-
a utilizat nitroprussiatul de sodiu Na
2
[Fe(CN)
5
(NO)]2H
2
O.
Rezultatele obinute i discuii
Conform unui procedeu original a fost sintetizat compusul coordinativ de tip
3
-oxo-
trinuclear ai Fe(III) cu acidul -furancarboxilic cu compoziia chimic: [Fe
3
O(-
fur)
6
(CH
3
OH)
3
]Cl2CH
3
OH, unde -fur acidul -furancarboxilic. n 25 ml alcool metilic au
fost dizolvate 0,54g (2 mmol) FeCl
3
6H
2
O i 0,63g (1 mmol) Cu
2
(C
4
H
3
OCOO)
4
4H
2
O. Soluia
de culoare brun a fost filtrat i lsat la temperatura camerei. Dup o zi, precipitatul cristalin
portocaliu sub form de ace, a fost filtrat, splat cu metanol i uscat la aier. Randament: 60%.
Calc. Pentru C
33
H
30
O
22
ClFe
3
: C, 40.38; H, 3.08; Fe, 17.07%. Gsit: C, 39.18; H, 3.54; Fe,
17.33%. Compusul este solubili n DMFA, DMSO, metanol.
Compusul coordinativ a fost caracterizat prin analiz elementar la Fe, C, N, i H,
spectroscopie Mossbauer, IR i difracie cu raze X.
Structura combinaiei a fost determinat prin metoda de difracie cu raze X pe
monocristal. Din acest studiul s-a stabilit, c compusul coordinativ cristalizeaz in grupul de
singonie monoclinic P2
1
/n cu urmtorii parametri a celulei elementare: a = 9.663, b = 15.624, c
= 19.082 , | = 92.54 i prezint o structur tipic
3
-oxotrinuclear n care cei trei ioni de fier
sunt situai n vrfurile unui triunghi isoscel cu un atom de oxigen tridentat n centru. Fiecare din
atomii de metal coordineaz cu cte doi atomi de oxigen ai grupelor carboxilice, oxigenul din
centru i molecule de metanol ca liganzi axiali.
Studiul IR n stare solid a complexului analizat confirm formarea unui compus nou i
arat prezena grupelor carboxilice, alcoolului metilic i fragmentului {Fe
3
O}. Principalele benzi
de absorbie in spectrul IR al compusului sunt (cm
-1
): 3593, 3131, 1596, 1579, 1563, 1470, 1416,
1372, 1230, 1204, 1139, 1077, 1015, 934, 884, 855, 800, 766, 600. Frecvene caracteristice
pentru grupele alcoolului metilic apar la 3593 cm
-1
i 1372 cm
-1
. Frecvene caracteristice pentru
liganzii carboxilici sunt
s
(COO)

i
as
(COO) ale oscilaiilor de valen ale grupelor COO
-
. Ele
se caracterizeaz prin prezena a dou benzi de absorbie intensive la 1596 cm
-1
(
as
(COO)) i
1416 cm
-1
(
s
(COO)). Deferena n numrul de und al benzilor de absorbie
s
i
as
indic
modul de coordinare punte bidentat. Benzile analitice pentru inelul furanic sunt 1015 cm
-1
,
884 cm
-1
, 766 cm
-1
. Prezena frecvenei caracteristice la 1470 cm
-1
semnaleaz c oxigenul din
inelul furanic nu particip la coordinare. Pentru identificarea oscilaiilor de valen a
fragmentului {Fe
3
O} a fost efectuat studiul n intervalul de 800-600 cm
-1
. Banda medie intens
la 600 cm
-1
(
as
(Fe
3
O)) este caracteristic pentru clusterul -oxo trinuclear [17].
316
Spectrele Mssbauer pentru compusul dat prezint un dublet att la temperatura camerei
ct i la 80K. Valorile deplasrii de isomer (o
Na
+) = 0.68mm/sec (300K), 0.77 mm/sec (80K) i
despicrii de cuadrupol (AE
Q
) = 0.51mm/sec (300K), 0.54mm/sec (80K) calculate din spectrele
Mssbauer, indic prezena fierului n stare de oxidare (+3) spin nalt (5/2) cu o nconjurare
destul de simetric i sunt n bun corcondan cu datele din literatur [19].

Fig 1. Forma spectrului Mossbauer a compusului [Fe
3
O(-fur)
6
(CH
3
OH)
3
]Cl2CH
3
OH la
temperatura 80K.

Din datele literaturii de specialitate [9, 13, 16] referitoare la rolul excepional al
compuilor coordinativi ai fierului n procesele metabolice biosintetice ale Spirulinei, urmeaz c
reprezentanii clasei de
3
-oxotrinucleari coninnd acizii carboxilici n calitate de punte
carboxilat manifest un efect pozitiv asupra compoziiei biochimice i acumulrii fierului n
biomasa speciei respective. Reieind din aceast concluzie n perspectiv prezint un interes
deosebit iniierea unui studiu detaliat al influenei compusului coordinativ cercetat asupra
componenei biochimice a Spirulinei.
Concluzii
A fost sintetizat o combinaie complex a Fe(III) cu acidul -furancarboxilic cu
compoziia chimic [Fe
3
O(-fur)
6
(CH
3
OH)
3
]Cl2CH
3
OH. Compusul a fost studiat prin analiz
elementar, spectroscopie IR, Mssbauer i difracie cu raze X pe monocristal. Compusul
coordinativ cristalizeaz in grupul de singonie monoclinic P2
1
/n i prezint o structur tipic
3
-
oxo-trinuclear n care cei trei ioni de fier sunt situai n vrfurile unui triunghi isoscel cu un
atom de oxigen tridentat n centru. Valorile deplasrii de izomer i despicrii de cuadrupol
calculate din spectrele Mssbauer, indic prezena fierului n stare de oxidare (+3) spin nalt
(5/2) cu o nconjurare destul de simetric.
Mulumiri
Autorul aduce sincere mulumiri D-lui Constantin Turt, doctor habilitat n chimie,
membru-corespondent al ARM, profesor universitar, pentru discuii i ajutor, i Dr. Helene
Stoeckli-Evans pentru studiul cu raze X pe monocristal. Lucrarea a fost efectuat cu susinerea
financiar a Fundaiei WSF.
Referine Bibliografice
[1] Amato P., Morales J.A., Yen S.C. S. Effects of chromium picolinate supplementation on insuline
sensitivity, serum lipids, and body composition in healthy, nonobese, older and women. The
Journal of Gerontology, Series A: Biological Schiences, (2000), V. 55, p. 260-263.
[2] F. Armarego and D. D. Perrin, Purification of Laboratory Chemicals, Butterworth-
Heinemann, Oxford, 4th ed., (1996).
[3] Chamorro G., Salazar M., Araujo KG, dos santos CP., Ceballos G., Castillo LF. Update on the
pharmacology of Spirulina (Arthrospira ), an unconventional food. Arch. Latinoam. Nutr.,
(2002), Sep.V. 52, No3, p. 232-240.
317
[4] Dillon JC. Prevention of iron deficiency and iron deficiency anemia in tropical areas. Med. Trop.,
(2000), V.60, No1, p. 83-91.
[5] Dudnicenco T. Directed synthesis of carotenoids by green microalga Haematococcus pluvialis.
Abstracts of 4th European Workshop Biotechnology of Microalgae, may 29 and 30, (2000).
[6] Hay G., Sandstad B., Whtelaw A., Borch-Iohnsen B. Iron status in a group of Norwegian
children aged 6-24 months. Acta Paediatr., (2004), V.93, No.5, p. 592-598.
[7] Ekmekci OB, Donma O., Sardogan E., Yildirim N., Uysal O., Demirel H., Demir T. Iron, nitric
oxide, and myeloperoxidase in asthmatic patients. Biochemistry, (2004), V. 69, No. 4, p.462-467.
[8] Gudumac V., Baciu E., Rvneac V. Benefficial effect of zinc administration on collagen
degradation during recovery from experimental hepatic fibrosis. Abstracts and programme of the
4th International Simposium Metal Elements in Environment, Medicine and Biology. Nov. 6-
8, Timisoara, Romnia, (2000), p.2.
[9] S. Melnic, Ch. Simmons, L. Zosim, T. Chiriac, V. Bulimaga, V. Rudic, D. Prodius, H.
Stoeckli-Evans, S. Shova, C. Turta, Biotechnological application of new homo and
heteronuclear iron(III) furoates for cultivation of iron-enriched spirulina., (in press).
[10] Queiroz Sde S., Torres MA. Iron deficiency anemia in children. J. Pediatr. (Rio J), (2000), V. 76
suppl. 3.- S 298-304.
[11] Rasul I., Kandel GP An approach to iron deficiency anemia. Can. J. Gastroenterol, (2001), V. 15,
No. 11, p. 739-747.
[12] Rudic V. Spirulina biotechnology: new investigation in production facilities and products.
Abstracts of the 4
th
International Biotechnology of Microlagae. May 29 and 30, Bergholz-
Rehbrcke, Germany, (2000).
[13] Rudic V., Turt C, Gudumac V., Bulimaga V., Chiriac T., Ghelbet V., Mereacre V.,
Lazarescu A., Zosim L. Nanotehnologii de sintez a compuilor coordinativi noi ai Fe(III)
i biotehnologii de obinere a produselor farmaceutice antianemice. Expoziie
internaional specializat INFOINVENT-2004, noiembrie 10-13, Chiinu (2004), (C25),
p.57. (diplom medalie de argint).
[14] Schaison G., Cramer P., Tobelem G. Iron deficiency anemia. Hematologist s viewpoint // Sem.
Hop., (1982), V. 58, No. 43, p.2547-2550.
[15] Samuelson R., Mani UV., Iyer UM., Nayak US. Hypocholesterolemic effect of spirulina in
patients with hyperlipedemic nephrotic syndrome. J. Med Food., (2002), V.5, No.2, p. 91-96.
[16] Turt C., Rudic V., Lazarescu A., Bulimaga V., Zosim L., Chiriac T., The 7th International
Symposium on Metal Elements In Environment, Medicine and Biology, Timisoara -
Romania, 7, (2006), p. 333-338.
[17] . ., . ., ..
(III) (III). . . ,
(1985), .30, 2, . 1460.
[18] .., . Porphyridium cruentum CNM-AR-01
. . (2001), .11, 1, C.52-56.
[19] Turta C.I., Spatari F.A., Lazarescu A.G., Simonov Yu., Dvorkin A.A., Lipkowski Ia.: The
spectroscopic analysis of the trinuclear irons(III) compound with glycine aminoacid,
J.Inorg.Biochem., (1995), 59 (2-3), p.341.

318
DIOXIMAII DE NICHEL(III) CU PIRIDINA I DERIVAII EI: PROPRIETI
MAGNETICE I CATALITICE
L. Chistruga, D. Batr, V. Chistruga
Catedra Chimie general USMF Nicolae Testemianu
Institutul de Chimie AM,
Centrul Republican de diagnosticare medical

Summary
Dioximates of nickel (III) with pyridine and its derivates:
magnetic and catalytic properties
The combinations of nickel(III) with composition [Ni(Diox)
2
L
2
]XnHX and
[Ni(Diox)
2
PyL]XnHX (L - derivates of pyridine, Diox - monoanione of -dioxime, x Cl, Br)
were obtained. Their magnetic properties and catalytic action in some reactions were studied.
Rezumat
S-au obinut compui ai nichelului(III) cu componena [Ni(Diox)
2
L
2
]XnHX i
[Ni(Diox)
2
PyL]XnHX (L derivaii piridinei, Diox monoanion de -dioxim, X Cl, Br). S-
au studiat proprietile lor magnetice i aciunea catalitic n unele reacii.

n seria Fe, Co, Ni se observ tendina de micorare a gradului de oxidare superior de la
Fe spre Ni. Nectnd la aceea c n condiii obinuite pentru nichel e cunoscut doar starea de
oxidare +2, chimia acestui element nu este chiar att de simpl. Din compuii cu gradul de
oxidare inferior (-1,0,+1) cea mai numeroas clas o prezint compuii Ni(0), ca de exemplu,
Ni(CO)
4
, NiL
x
(CO)
4-x
, NiL
4
, unde L este ligand acid, K
4
[Ni(CN)
4
], K
4
[Ni(CCH)
4
] i alii.
Compui ai nichelului cu gradele de oxidare -1 i +1 se ntlnesc mai rar, de exemplu, anionul
[Ni
2
(CO)
6
]
2-
i respectiv complexul nestabil K
4
[Ni
2
(CN)
6
]. n seriile izoelectronice Ni(I), Co(0),
Cu(II) chimia nichelului (1) este mai aproape de chimia Co(0). n majoritatea cazurilor compuii
nichelului(1) au structur tetragonal sau trigonal.
Strile de oxidare +3 i +4 ale nichelului pot fi stabile doar la existena unei coordonri
deosebite. La interaciunea metalului cu liganzii are loc redistribuirea sarcinilor. Dac metalul se
afl n stare de oxidare superioar apoi ligandul trebuie s posede densitate electronic nalt i
una sau mai multe sarcini negative. n acest caz sarcina se deplaseaz de la ligand spre metal,
ns acest proces nu trebuie s aib un caracter nelimitat, ceea ce ar putea duce la oxidarea
ligandului. Cu alte cuvinte, electronegativitatea ligandului trebuie s fie nalt. Ca rezultat se
formeaz legturi trainice ntre metal i ligand. De aici devine clar de ce majoritatea
complecilor Ni(III) i Ni(IV) n sfera de coordinaie primar conin n calitate de donori de
electroni atomi de N, O, F.
Sunt cunoscui puini compui ai Ni(III), dar proprietile unora din ei
(3BaONiO
2
9MoO
3
12H
2
O, Na(K)NiIO
6
nH
2
O, K
2
NiF
6
) au fost destul de bine studiate. La
oxidarea unor compleci ai Ni(II) se formeaz compleci ai Ni(III). Aa, la oxidarea cu oxigen a
[Ni(Diars)
2
Cl
2
] ntr-un curent de ioni de clorur se obine [Ni(Diars)
2
Cl
2
]Cl. La interaciunea
unor compui de tipul Ni(R
3
P)
2
X
2
(X = Cl, Br) cu ClNO i BrNO se formeaz compuii
Ni(R
3
P)
2
X
3
, care au un electron necuplat.
n calitate de stabilizatori a gradelor de oxidare superioare ale nichelului (+3 i +4) sunt
cunoscui astfel de liganzi ca oximele. ns metodele descrise n literatur [1, 2] permit de a
obine un numr limitat de compui ai Ni(III) cu oximele. De exemplu, la oxidarea cu brom a
Ni(HDf)
2
se formeaz doar o singur substan Ni(HDf)
2
Br (HDf anion de - benzildioxim).
Oxidarea, ns, a dioximailor de nichel(II) n prezena aminelor heterociclice duce la
formarea unei clase numeroase de compui compleci, deoarece rolul liganzilor axiali n acest
caz l ndeplinesc bazele Lewis (piridina i derivaii ei), care pot varia. Aceti compleci au
componena [Ni(Diox)
2
L
2
]XnHX i [Ni(Diox)
2
PyL]XnHX i structur octaedric (L derivaii
piridinei, Diox monoanion de -dioxim, x Cl sau Br) [3, 4].
319
Valorile momentelor magnetice a acestor compui (1,73 1,83 M.B.) sunt caracteristice
pentru ionul Ni
3+
(d
7
) n cmp octaedric i vorbesc despre aceea c acest ion n complecii
studiai se afl n stare cu spin minim. Ionul d
7
n cmp octaedric poate avea configuraia
2 5
2 g g
e t
sau
g g
e t
6
2
(fig.1).
Fig.1 Strile cu spin maxim si spin minim pentru ionul d
7
n cmp cristalin octaedric

Energia diferitor stri se calculeaz de la valoarea energiei configuraiei iniiale, adic da
la energia ionului introdus ntr-un nveli sferic cu sarcina egal cu suma sarcinilor liganzilor.
Aceast energie este egal cu suma valorilor (-2/5
0
) pentru fiecare electron t
2g
, (+3/5
0
) pentru
fiecare electron e
g
i C pentru fiecare cuplu electronic care se afl pe o orbital (tab.1)

Tabelul 1. Energia strilor cu spin maxim i minim (configuraia d
7
)

Configuraia
electronic
Numrul necuplai Tria cmpului ESCC
2 5
2 g g
e t
3 slab -4/5
0
+ 2C
g g
e t
6
2

1 puternic -9/5
0
+ 3C
-
0
+ C
Aici
0
este energia de scindare n cmp cristalin octaedric; C energia medie de cuplare pentru
ionul dat. Cu ct e mai puternic cmpul cristalin din jurul ionului d
7
cu att e mai mare
probabilitatea c electronii acestui ion vor nimeri pe orbitalele mai stabile t
2g
.
Din reprezentarea grafic a dependenei energiei de stabilizare n cmp cristalin (ESCC)
de tria cmpului (fig.2) se observ c panta dreptei n cmp puternic este mai mare dect n
cmp slab.
Fig.2 Variaia ESCC n funcie de tria cmpului (configuraia d
7
)

320
La intersecia celor dou drepte efectele cmpului liganzilor i a repulsiei interelectronice
sunt egale (
0
= C).
Nectnd la aceea c paramagnetismul dioximailor de nichel(III) se supune legii lui
Curie - Weiss [5], totui exist o oarecare dependen de temperatur a momentelor magnetice
(tab.2), care nu poate fi descris doar cu ajutorul constantei lui Weiss. E posibil c temperaturile
nalte contribuie la schimbarea cu locul a liganzilor sferei interne i externe.

Tabelul 2. Dependena de temperatur a momentului magnetic al complexului
[Ni(DH)
2
(4-COOC
2
H
5
-Py)
2
]Br2HBr.

Studiul dioximailor de Ni(III) prin metoda RPE (2<g
zz
<g
xx
<g
yy
) d posibilitatea de a
presupune c electronul necuplat ocup orbitala d
z
2
, ce se poate realiza n modelul cmpului
cristalin pentru un octaedru ntins [6].
Aciunea catalitic a dioximailor de nichel(III) a fost cercetat n reacia de formare a
poliuretanilor [7]

R N C O + HO R'
O
C N R H O R'

i n reacia de oxidare a tetralinei [8]. n reacia de formare a poluiretanilor aceti compleci la
temperaturi joase sunt inhibitori, iar la 50-80 C viteza reaciei crete brusc n comparaie cu
reacia necatalitic (tab.3).
Reieind din rezultatele obinute mecanismul catalizei poate fi prezentat astfel. La prima
etap are loc formarea dioximaturetanilor coordinativi, care la temperaturi joase sunt ineri faa
de sistemul reactant, prin ce se lmurete viteza mic a reaciei de formare a uretanilor n
condiiile date. La mrirea temperaturii are loc descompunerea dioximaturetanului i
redistribuirea sarcinilor la atomii sistemului, din care cauz hidrogenul planului ecuatorial al
carcasului dioximatic trece la alcool.
Tabelul 3. Constantele de vitez a reaciei dintre 4,4-difenilmetandiizocianat i
polidietilenglicoladipinat n prezena unor dioximai ai Ni(III)

Dioximaii de Ni(III)
K10
4
, l/mols
20C 50C 80C
Fr catalizator 60 240 720
[Ni(HDf)
2
Py
2
]Cl2HCl 36 540 4352
[Ni(HDf)
2
(3-CH
3
-Py)
2
]Cl2HCl 27 250 1810
[Ni(HDf)
2
(4-CH
3
-Py)
2
]Cl2HCl 18 341 2415

Prin urmare atomii de oxigen ai grupei oxime cu surplus de densitate electronic
coordoneaz azotul 4,4-difenilmetandiizocianatului. Restructurarea de mai departe n complexul
T, K
M
10
6
, cm
3
/mol 1/
M
, mol/cm
3
ef.,
MB
274 1680,21 595,16 1,92
253 1780,17 561,74 1,90
202 2180,01 458,71 1,89
181 2388,26 418,71 1,86
164 2671,48 374,32 1,87
143 3013,01 331,89 1,86
131 3312,89 301,85 1,86
119 3646,08 274,27 1,86
99 4195,86 238,33 1,82
321
intermediar duce la formarea nodului polimeric. La etapa final se formeaz produsele reaciei
de tipul metalopolimerilor, n lanul molecular al crora sunt incluse moleculele
nicheldioximaturetanilor.
Aadar, -dioximaii de nichel(III) pot fi considerai catalizatori principial noi n reacia
de formare a poliuretanilor, deoarece ei rmn n polimer nu n stare liber, ci legat de tipul
metalopolimerilor.
n reacia de oxidare a tetralinei RH n prezena dioximailor de nichel viteza oxidrii s-a
calculat dup formula W
0
= 5,5510
-4
(
ROH CO R R ROOH
C C C + +
2 1
), unde
ROH CO R R ROOH
C C C , ,
2 1

respectiv sunt concentraiile hidroperoxidului tetralinei, tetralonului 1 i tetralolului 1:

n tabelul 4 sunt prezentate vitezele reaciei de oxidare a tetralinei la nceputul reaciei i
la sfritul ei n prezena unor dimetilglioximai ai nichelului (III)

Tabelul 4. Viteza oxidrii tetralinei n prezena dimetilglioximailor de nichel (III)

Dimetilglioximaii de nichel (III)
W
0
10
5
, mol/ls
iniial final
[Ni(HD)
2
Py
2
]Br2.5HBr 10,97 2,47
[Ni(HD)
2
(3-CH
3
-Py)
2
]Br2.5HBr 3,48 1,90
[Ni(HD)
2
(4-CH
3
-Py)
2
]Br2.5HBr 3,40 3,48
[Ni(HD)
2
(3-COOC
2
H
5
-Py)
2
]Br2HBr 13,05 2,46
[Ni(HD)
2
(4-COOC
2
H
5
-Py)
2
]Br2HBr 2,70 2,50
[Ni(HD)
2
(3-CON(C
2
H
5
)
2
-Py)
2
]Br3HBr 11,57 4,10
[Ni(HD)
2
(3-CONH
2
-Py)
2
]Br2HBr 2,82 1,60
[Ni(HD)
2
(3-CHO-Py)
2
]Br2HBr 3,98 1,54
[Ni(HD)
2
(4-CHO-Py)
2
]Br2HBr 2,96 2,40
Fr catalizator 0,13 -

n prezena dioximailor de nichel(III) are loc descompunerea activ a ROOH, iar
iniierea radicalilor liberi poate decurge conform schemelor:

. ] ) ( [ ] ) ( [
, ] ) ( [ ] ) ( [
, ] ) ( [ ] ) ( [
, ] ) ( [ ] ) ( [
, ] ) ( [ ] ) ( [
, 2
2 2
2 2 2 2
2 2
2 2
2 2 2
2 2 2
-
-
-
+ -
-
+ +
+ + +
+
+ +
+ + +
+ + +
RO OH Diox Ni ROOH Diox Ni
RO O H Diox Ni ROOH OH Diox Ni
RO OH Diox Ni ROOH Diox Ni
L Br ROOH Diox Ni ROOH Br L Diox Ni
L Diox Ni HBr RO ROOH Br L Diox Ni
O H R RH O RH

Cu totul n alt mod se comport fa de hidroperoxidul tetralinei complexul [Ni(DH)
2
], n
prezena cruia are loc cea mai mare acumulare a ROOH (13.6510
-2
mol/l), chiar mai mare
dect n cazul oxidrii nacatalitice a tetralinei. Probabil, bis-(dimetilglioximato)-nichel(II) nu
reacioneaz cu ROOH, iar generarea radicalilor liberi are loc n alt mod pe calea activrii
oxigenului molecular:
H
OOH
H
OH
O
322
. ] ) ( [ ] ) ( [
, ] ) ( [ ] ) ( [
2 2 2 2
2 2 2 2
- - +
+
+ + +
+
R HO DH Ni RH O DH Ni
O DH Ni O DH Ni
o o
o o

Structura planar a complexului i lipsa liganzilor axiali, probabil, este una din cauzele
activitii slabe a [Ni(DH)
2
] n procesul oxidrii tetralinei. n acest caz gradul de oxidare a
nichelului nu se schimb i nu se formeaz produsele interaciunii dintre [Ni(DH)
2
] i ROOH,
care ar putea duce la prelungirea lanului, genernd radicali noi tot mai activi.
Pe baza datelor obinute s-a propus mecanismul probabil de oxidare a tetralinei n
prezena dioximailor de nichel(III). Din schema propus reiese c catalizatorii particip n toate
actele elementare a procesului radical-nlnuit. La aceasta etapele de limitare sunt:

ROOH Br L DH Ni ROOH Br L DH Ni ..... ] ) ( [ ] ) ( [
2 2 2 2
+ i
]. ) ( [ ] ) ( [
2 2 2 2 2
L DH Ni ROO L DH Ni RO +
-

Bibliografie
1. Okac A., Simek M., Uber die Oxidationsproducte des Nickel-Dimethylglyoxims. Chem.
Analyt., V.3, Nr 3-4, 1958, p. 253-267.
2. Simek M., Oxidation von Nickel(II) salzen der -dioxime mit brom und jod. Collect. Czech.
Chem. Communs, V.27, Nr2, 1962, p.337-342.
3. .. , .. . - ()
. . . , V., Nr 1, 1975, . 126-130.
4. .. , .. . ()
. . , V.7, Nr 2,
1981, . 274-278.
5. .. , .. .
() -. . , V.3, Nr 11, 1977, . 1705-1709.
6. .. , .. , .. , .. , .. .
() . . ,
V.2, Nr 1, 1976, . 29-33.
7. .. , .. , .. .
. , . .
, Nr 5, 1981, . 61-65.
8. .. , .. , .. , .. .
, () -
. , V.XXIV, Nr 1, 1984, . 71-75.

COMPUII COMPLECI AI PLATINEI CU ACTIVITATE ANTITUMORAL
M. Anton, L. Chistruga
Catedra Chimie General USMF "Nicolae Testemianu"

Summary
Complex platinum compounds with anti-tumor activity
A synthesis of existing literature about the structure and proprieties of platinum
compounds as well as their action on the nucleic acids.
Rezumat
Aceste materiale prezint o sintez a literaturii existente privind structura i proprietaile
compuilor platinei, precum i mecanismul lor de aciune asupra acizilor nucleici.

Substanele medicamentoase eficace n neoplasmele umane i experimentale au, n
general, proprieti chelatoare sau sunt uor metabolizate cu compui cu astfel de proprieti.
323
Multe dintre ele interacioneaz cu acizii nucleici, inhibnd sinteza ADN, ceea ce explic modul
lor general de aciune. Utiliznd derivaii purinei ca liganzi ai unor ioni metalici, mai ales ai
Pt(II) i Pt(IV), au fost sintetizate combinaii complexe cu aciune citostatic. Se presupune c n
urma aciunii lor asupra virusurilor, se elibereaz ligandul biologic activ, care inhib n
continuare creterea celulelor. Implicarea compuilor de coordinaie n aceste fenomene are drept
justificare faptul c diferite pri ale virusurilor reprezint ageni de chelare, care pot nlocui
liganzii n compuii de coordinare. Chiar o alternare minor de acest gen, va conduce aproape
sigur la reducerea sau la eliminarea patogenitii virale.
Substituia n complecii planari tetracoordinativi este important din punct de vedere
biologic, deoarece complecii planari ai platinei (II) sunt importante remedii antitumorale. Att n
complecii Pt(II), ct i n ali compleci planari substituia are loc practic totdeauna conform
mecanismului asociativ i, din aceast cauz, viteza reaciilor depinde de natura i concentraia
ligandului prezent. n caz general, capacitatea de substituie a creiva grupe n complecii planari
depinde de natura ligandului ce se afl n poziia trans fa de aceast grup. n seria de liganzi :
H
2
O; OH
-
; NH
3
; Cl
-
; Br
-
; I
-
; NO
2
; CO; CN
-
capacitatea de substituie crete.
Acest efect se descrie mai uor prin intermediul mecanismului de asociere. Liganzii -
acceptori din dreapta seriei facilitez formarea legturii n poziia trans fa de sine, astfel
atrgnd densitatea electronic a metalului i a trans-ligandului i uureaz substituia nucleofil
n poziia dat. Ceilali liganzi, prin intermediul efectului faciliteaz ruperea legturii i
eliberarea ligandului ndeprtat. Trans efectul are o mare importan practic, deoarece permite
alegerea succesivitii reaciilor care vor duce la formarea izomerilor puri cis i trans :

Activitatea antitumoral a combinaiilor coordinative ale Pt(II) pare a fi limitat la cele de
tipul [PtA
2
X
2
], neutre din punct de vedere electric, caracteristic izomerilor cis. Combinaiile
coordinative ale Pt(II) cu sarcin electric sunt inactive, chiar dac liganzii sunt uor schimbabili.
Activitatea antitumoral a complecilor Pt(II), de tipul [PtA
2
X
2
], depinde de natura
liganzilor. Cele mai bune rezultate au fost obinute cu Cl
-
i Br
-
, liganzi anionici monodentai cu
capacitate de schimb intermediar i cu anionii oxalat, malonat, liganzi carboxilai bidentai. Prin
urmare, cis-diclorodiaminoplatina (II) (cis [Pt(NH
3
)
2
Cl
2
]), cunoscut i sub denumirea de Sarea
lui Peyrone, introdus n terapeutic de ctre Rosenberg i Van Camp, manifest cea mai ridicat
activitate antitumoral.
n cadrul cercetrii activitii biologice s-a calculat aa-numita doz letal DL
50
(doza ce
provoac moartea a 50% din animalele asupra crora se efectueaz cercetrile), doza inhibatoare
DI
90
(cea mai mic doz care duce la regresia tumorii) i indicile terapeutic IT ( IT = DL
50
/DI
90
).
S-au obinut urmtoarele rezultate [1]:

324
Tabelul 1. Datele privind activitatea biologic a cis-Pt(NH
3
)
2
Cl
2
i a trans-Pt(NH
3
)
2
Cl
2

Complexul

DL
50
, mg/kg

DI
90
, mg/kg

IT
cis-Pt(NH
3
)
2
Cl
2
13 1,6 8,1
trans-Pt(NH
3
)
2
Cl
2
27 27 1

Precum reiese din acest tabel, compuii compleci activi au configuraia cis i dou grupe
ce se desprind uor. n complexul cis-DDP grupele aminice sunt inerte i, n comparaie cu
grupele clorului, sunt liganzi trans-orientativi mult mai puternici. Astfel, clorul se labilizeaz i
poate fi uor substituit cu ali liganzi. ns concentraia mare a ionului Cl
-
n plasma sangvin
duce la aceea c substituia are loc foarte greu. Din aceast cauz n timpul transportului prin
snge, cis-DDP practic nu se transform. n cazul micorrii concentraiei locale a ionului de Cl
-

are loc substituia, ceea ce poate duce la legarea trainic a cis-complexului cu ligandul biologic.
Astfel, comportamentul cis-DDP poate fi explicat ca fiind un rezultat al posibilitii grupelor de a
se rupe de la complex (trans-efect) i a nucleofilitii ligandului. Generaliznd, putem afirma c
proprietile unui medicament depind de structura ntregii molecule sau a unei anumite pri
capabile s se combine cu un centru receptor (fig.1).

Figura1. Structura unor compui ai platinei cu activitate antitumoral

Din fig.1 putem stabili o serie de corelaii "structur-reactivitate":
-combinaiile octaedrice ale Pt(IV) prezint activitate citostatic mai redus dect cele
plan ptrate ale Pt(II), se presupune c speciile ce conin Pt(IV) sunt reduse in vivo la derivai ai
Pt(II).
-activitatea citostatic a fost pus n eviden numai la combinaiile cu configuraie cis,
izomerii trans aprnd ca inactivi.
-complexul trebuie s conin dou grupri nelabile sub form de doi liganzi monodentai
sau un ligand bidentat.
-ligandul clor se comport ca un membru activ, pe cnd legturile amin-platin sunt
foarte stabile i inerte la atacul nucleofilic.
-liganzii amin ca grupri nelabile trebuie s conin o jonciune N-H i, prin acesta,
posibilitatea de a forma puni de hidrogen.
325
-speciile neutre nu au dat dovad de activitate antitumoral, chiar dac s-a respectat
criteriul de labilitate. Acest fapt este adesea corelat i cu transportul prin membranele celulare, i
cu imposibilitatea de a atinge concentraiile dorite.
Din 1978, cis-platinul, ca preparat unic sau combinat cu alte citostatice (vinblastinul,
bloemicina, adriamicina, ciclofosfamid), a fost folosit n tratamentul carcinoamenlor ovariene,
pulmonare, ale vezicii i zonei cap-gt.
Cele mai frecvente efecte secundare ce apar n terapia cu cis-platin sunt afectarea zonei
gastrointestinale (apariia de greuri i stri de vom) i a rinichilor, datorit inhibrii enzimatice
prin coordinarea platinei la gruprile sulfhidrice ale proteinelor. De aceea, se recomand
administrarea unor combinaii cu sulf ca N-etilditiocarbamatul de sodiu, tiouree i chiar diuretice
ce mpiedic legarea platinei la atomii de sulf ai proteinelor.
Cis platinul este administrat intravenos sub form de soluie NaCl 0.9% steril. Odat
ajuns n circulaia sangvin, el rmne intact datorit concentraiei relativ crescute de ioni de Cl
-
(~100mM). Compusul neutru intr apoi n celul att prin difuzie pasiv, ct i prin distribuie
celular. n celul, molecula neutr de cis platin sufer un proces de hidroliz n care ligandul Cl
-

este nlocuit cu o molecul de ap, genernd specii cu sarcin pozitiv.
Hidroliza decurge n interiorul celulei la concentraii mult mai mici ale ionului clorur (3-
20 mM) i, deci, la concentraii mai mari de ap :

[Pt
II
(NH
3
)
2
Cl
2
] + H
2
O => [ Pt
II
(NH
3
)
2
Cl(H
2
O)]
+
+ Cl
-

[Pt
II
(NH
3
)
2
Cl(H
2
O)]
+
+ H
2
O => [Pt
II
(NH
3
)
2
(H
2
O)
2
]
2+

Figura 2. Distribuia celular a cis-platinului i intele intercelulare

Aa cum este indicat n fig.2, odat intrat n celul cis-platinul are mai multe inte
poteniale: ADN, ARN, enzimele care conin sulf (ca de exemplu metalotioneina sau glutationul)
i mitocondria. Dintre acestea, doar acionnd asupra ADN se poate stopa dezvoltarea celulei
canceroase. Cis-platinul formeaz combinaii coordinative cu ADN n principal prin intermediul
anumitor atomi de azot din perechile de baz ale acestuia. Aceti atomi de azot (n special atomul
N7 a purinelor) sunt liberi s se coordineze cu cis-platinul pentru c ei nu particip la formarea
legturilor de hidrogen cu alte baze ale moleculelor de ADN.

326
Figura 3. Perechile de baze ale ADN.
Cis-platinul se leag la atomii N
7
a bazelor purinice (guanina sau adenina).

Se pot forma multe tipuri de aduci sau combinaii complexe cis-platin - ADN. Cele mai
importante dintre acestea par s fie cele n care 2 liganzi Cl
-
ai cis-platinului sunt nlocuii de
atomi de azot purinici din baze adiacente ale aceleiai catene de ADN.
Bazele purinice implicate n mod normal n formarea acestor aduci sunt guaninele. S-au
evideniat ns i aduci care implica o molecul de G i una de A.

Figura 4. Structura cis-platinului coordinat n interiorul unui duplex de ADN

innd seama de geometria sa, trans-DDP nu poate forma aduci 1,2 intracatenari. De aici
reiese i caracterul inactiv n eliminarea celulelor canceroase. Se consider c tocmai formarea
acestor coordinri 1,2 intracatenare sunt importante pentru activitatea anticanceroas a cis-
platinului. Cercettorii au observat c legarea cis-platinului la ADN afecteaz att replicarea, ct
i transcripia, precum i mecanismele de reparare ale ADN.
327
Activitatea citotoxic a cis-platinului poate proveni din imposibilitatea celulei de a repara
moleculele de ADN afectate. ntr-adevr, studiile in vitro asupra extractelor celulare au
evideniat c cei mai ntlnii aduci cis-platin - ADN (aducii 1,2 intracatenari) nu sunt eliminai
prin reparare. Acest proces ar trebui s aib loc prin intermediul sistemului de reparare prin
excizie.
n afar de activitatea antitumoral, cis-platinul s-a dovedit a fi un bun agent antiviral. S-a
presupus c virusurile sunt singurii ageni care transform celulele normale n celule tumorale,
dar totodat s-a constatat c particulele virale sunt rareori regsite n celulele tumorilor, ceea ce
ar duce la concluzia c transformarea are loc dup infecia viral, prin imprimarea caracterului
viral celulelor normale. ncercnd o mutaie la celulele mamiferelor, putem presupune c
leziunile primare ale ADN provocate de complecii platinici acioneaz elibernd genomul viral.
Aceasta duce la multiplicarea activ a particulelor virale care pot avea, dar pot i nu avea,
defecte. Modificarea survine n sistemul imunologic care va fi stimulat s produc anticorpi
mpotriva celulelor tumorale. S-ar putea ca, prin eliminarea genomului viral i a particulelor
virale fr distrugerea celulelor care le-au coninut, acestea s revin la starea normal;
presupunerile date sunt posibile, dar insuficient studiate.
Concluzii
Din cele expuse mai sus, putem puncta urmtoarele concluzii :
- pentru ca un complex platinic s posede proprieti antitumorale, el trebuie s conin 2
grupri nelabile sub form de doi liganzi monodentai sau un ligand bidentat i 2 grupri ce
pot fi uor substituite cu ali liganzi;
- activitate antitumoral manifest doar izomerii cis, care, datorit trans-efectului, pierd uor 2
grupri i, astfel, se pot uni la liganzii biologici;
- cel mai nalt indice terapeutic al compuilor de tipul [PtA
2
X
2
], n cadrul cercetrilor
activitii biologice, s-a depistat la compusul numit "cis-platin" (cis-Pt(NH
3
)
2
Cl
2
sau cis-
DDP);
- nimerind n celul, cis-platinul hidrolizeaz i atac urmtoarele inte intercelulare : ADN,
ARN, mitocondriile (ADNul mitocondrial) i proteinele care conin sulf;
- legndu-se de molecula de ADN (n special la atomul N7 a dou baze purinice intracatenare),
cis-platinul stopeaz replicarea i transcripia ADNului, astfel blocnd ntreg metabolismul
celular;
- aducii 1,2 intracatenari astfel formai nu pot fi eliminai prin procesul de reparare al
ADNului din cauz c nu sunt recunoscui de factorii proteici specifici;
- pentru a preveni efectele adverse ale cis-platinului asupra tractului gastro-intestinal, se
recomand administrarea unor combinaii cu sulf ca N-etilditiocarbamatul de sodiu, tiouree i
chiar diuretice ce mpiedic legarea platinei la atomii de sulf ai proteinelor.
Bibliografie
1. M. N. Hughes // // , , 1983,
pp 381-386.
2. J. Reedijk // The mechanism of action of platinum anti-tumor drugs. // Pure & Applied
Chemistry, 1987, vol. 59, 2, pp. 181-192.
3. J.J. Roberts, A.J. Thomson // The mechanism of action of antitumor platinum compounds. //
Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology, 1979, vol. 22, pp. 71-133
4. Lippert // Impact of Cisplatin on the recent development of Pt coordination chemistry: a case
study. // Coordination Chemistry Reviews, 1999, 182, pp. 263-295
5. B. .. (.) // .
V-VII . // , , 1989.
6. J. Reedijk // The relevance of hydrogen bonding in the mechanism of action of platinum
antitumor drugs. // Inorganica Chimica Acta, 1992, vol. 198-200, pp.873-881.
7. A. Pasini, F. Zunino // New cisplatin analogues - on the way to better antitumor drugs. //
Angewandte Chemie International Edition English, 1987, 26, pp. 615-624.
328
8. .. , .. , .. //

. // , 1986, 12, pp.
79-89.
9. Mihescu Grigore // Microbiologie general i virologie Editura UB // 2000
10. Palamaru M.N, Iordan A. R., Cecal Alex. // Chimie bionaorganic i metalele vieii
Editura BIT // 1997
11. Grecu I, Neamu M, Enescu L // Implicaii biologice i medicale ale chimiei anorganice
Editura Junimea // 1982

8 Chimie

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

8 Chimie

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

270

CHIMIE GENERAL I FARMACEUTIC

S-ar putea să vă placă și