Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Omogenat celular
Pentru obinere omogenatului celular se
pornete de la 2 componente:
Materialul biologic (organul, esutul sau suspensia de celule) care este supus omogenizrii; Mediul de omogenizare ce reprezint soluia apoas ce urmeaz a realiza dispersia efectiv a elementelor subcelulare.
MATERIALUL BIOLOGIC
Criterii pentru alegerea materialului biologic S conin organitele ce urmeaz a fi investigate n cantitate mare; S poat fi prelucrat cu un minim de dificulti tehnice, n condiii controlate, reproductibile, care s evite apariia de erori; S fie bine delimitat din punct de vedere anatomic i relativ uor accesibil pentru a scurta timpul de prelevare i pentru a evita pericolul confuziei cu alte esuturi sau organe.
Omogenizator POTTER-ELVEHJEM
Omogenizatorul Potter-Elvehjem este format din: - piston de sticl sau teflon; - eprubet din sticl sau teflon, ntre care exist un spaiu foarte mic (~0,2mm). Pistonul este antrenat de un motor electric pentru a efectua o micare de rotaie (circa 1000 ture/min) i n acelai timp se realizeaz i o micare n sus i n jos a eprubetei ce conine mediul de omogenizare i esutul. Acesta din urm este forat s treac prin spaiul dintre piston i peretele interior al eprubetei, spaiu n care se dezvolt fore de forfecare extrem de mari, ce produc la nceput mrunirea esutului i apoi ruperea membranelor celulare.
RAPORTUL DE OMOGENIZARE
n mod tradiional, se folosete un raport de omogenizare
1:10 (g/v) ntre cantitatea de esut i volumul de mediu de
omogenizare utilizat (soluia apoas), ns este posibil varierea acestui raport n funcie de necesiti.
Coeficientul de sedimentare
Coeficientul de sedimentare al unei particule S reprezint viteza de sedimentare a unei particule ntr-un cmp centrifugal de valoare unitar (2x =1). Coeficientul de sedimentare depinde exclusiv de mediul de centrifugare i de caracteristicile particulei i are drept unitate de msur svedbergul [S].
2R2 ( p m ) S 2 x 9 v
Acceleraia centrifugal creia i este supus o particul depinde de parametrii funcionali ai aparatului n care se realizeaz procesul: raza rotorului = r; viteza de rotire = fiind posibil utilizarea unor combinaii diferite ale celor 2 parametri pentru generarea unei valori unice a acceleraiei centrifugale (2r). Pentru a se descrie n mod univoc condiiile de centrifugare, se obinuiete s se specifice acceleraia centrifugal sub forma de multiplii de g (acceleraia gravitaional - 9,81 m/s2). Exista 2 tipuri de conditii de realizare a separarii centifugale a particulelor dintr-un omogenat celular: - separarea lor in functie de dimensiune si forma, mediul in care sunt suspendate avand densitatea mai mica decat a lor si constanta in tot tubul de centrifuga, situatie denumita centrifugare diferentiala (se realizeaza prin aplicarea unor campuri gravitationale succesiv crescatoare); - separarea pe baza diferentelor de densitate, intr-un mediu a carui densitate variaza continuu sau in trepte de-a lungul tubului de centrifuga spre valori din ce in ce mai mari, fiecare particula deplasandu-se pana in zona de izodensitate, unde se stabilizeaza, ceea ce corespunde centrifugarii izopicnice, denumita si centrifugare in gradient de densitate.