Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Coordonator:
Simona Ivana
Autori:
Alexandru T. Bogdan
Iulian ogoe
Gheorghe Cmpeanu
Simona Ivana
Traian Enache
Stelian Britreanu
Ipate Iudith
Alexandru Popescu
MicrobiologiA ALIMENTELOR
- volumul III
Patogeni alimentari
Ediie mbunatit i revizuit
Editura Asclepius
Bucureti, 2011
Cuprins
CAPITOLUL 1
Implicaiile bacteriilor din genul Shigella n producerea toxiinfeciilor alimentare 7
1.1. Caractere generale 7
1.2. Taxonomie
10
1.3. Ci de transmitere 12
1.4. Caractere de cultivare 13
Medii uzuale i medii selective de cultivare.
13
1.5. Structura antigenic 13
1.6. Patogenitate
15
1.7. Epidemiologie 22
1.8. Manifestri clinice 24
1.9. Sensibilitatea fa de factorii de mediu 25
1.10. Izolarea i identificarea shigelelor
36
CAPITOLUL 2
Implicaiile bacteriilor din genul Escherichia n producerea toxiinfeciilor alimentare 70
2.1. Caractere generale
70
2.2. Istoric 71
2.3. Taxonomie
72
2.4. Morfologie
73
2.5. Condiii de cultivare i caractere culturale
73
2.6. Proprieti biochimice 74
2.7. Proprieti antigenice 75
2.8. Sensibilitatea fa de factorii de mediu 77
2.9. Patogenitatea
78
2.10. Epidemiologie 87
2.11. Detectarea EPEC, ETEC i EIEC n alimente i materiale patologice 91
2.12. Detectarea Escherichia coli O157:H7 din fecale i alimente 93
2.13. Infeciile naturale la animale 98
Colibaciloza vieilor 99
Colibaciloza purceilor 99
Colibaciloza psrilor 100
2.14. Infecii cu Escherichia coli la om
100
3
106
CAPITOLUL 3
Implicaiile bacteriilor din genul Yersinia n producerea toxiinfeciilor alimentare 124
3.1. Caractere generale
124
3.3. Specii ale genului Yersinia implicate n toxiinfeciile alimentare 127
3.3.1. Yersinia pseudotuberculosis subsp. pseudotuberculosis
(Pasteurella pseudotuberculosis)
127
3.3.2. Yersinia enterocolitica
131
3.4. Specii zoonotice din genul Yersinia
132
3.4.1. Yersinia enterocolitica cu serotipurile 03, 05, 27, 08, 09 i Yersinia pseudotuberculosis
132
3.4.2. Yersinia pestis
133
CAPITOLUL 4
Implicaiile bacteriilor din genul Vibrio n producerea toxiinfeciilor alimentare 143
4.1. Caractere generale
143
4.2. Taxonomie
144
4.3. Istoric 145
4.4. Morfologie
146
4.5. Condiii de cultivare i caractere culturale
147
4.7. Ecologie 150
4.8. Factorii de patogenitate 150
4.9. Specii mai importante de vibrioni
150
4.10. Metode de izolare i identificare
154
a speciilor din genul Vibrio din alimente
154
4.11. Izolarea i identificarea vibrionilor din produsele acvatice 163
Bibliografie 170
CAPITOLUL 5
Implicaiile campylobacteriilor n toxiinfeciile alimentare 173
5.1. Caractere generale
173
5.2. Taxonomie
174
5.3. Specii ale genului Campylobacter implicate n producerea
4
toxiinfeciilor alimentare
174
5.3.1. Campylobacter jejuni
174
5.4. Epidemiologie 176
5.4.1. Distribuia campylobacteriozelor la om dup vrst i sex 177
5.4.2. Sezonalitatea
178
5.4.3. Cazurile importate 178
5.6. Metode de izolare i identificare a genului Campylobacter
181
din alimente 181
5.6.1. Prepararea probelor
181
5.6.2. Izolarea speciilor de Campylobacter
183
5.6.3. Identificarea speciilor de Campylobacter 183
5.6.4. Confirmarea campilobacteriilor 183
CAPITOLUL 6
Toxiinfecii alimentare de origine bacterian cu
inciden redus
194
6.1. Genul Aeromonas
194
6.1.1. Taxonomie 194
6.1.2. Morfologie 195
6.1.3. Condiii de cultivare i caractere culturale
195
6.1.4. Ecologie 196
6.1.5. Diagnostic 197
6.2. Genul Plesiomonas
199
6.3. Genul Photobacterium 200
6.4. Genul Brucella 200
6.5. Genul Enterobacter
205
6.6. Genul Bacteroides
205
6.6.1. Bacteroides fragilis
205
6.7. Genul Klebsiella 205
6.7.1. Klebsiella pneumoniae 206
6.8. Genul Streptococcus
208
6.9. Genul Erysipelothrix
211
6.9.1. Erysipelothrix rhusiopatiae
211
Capitolul 7
Principalele micotoxine implicate n producerea
toxiinfeciilor alimentare
226
7.1. Aflatoxinele
228
7.2. Toxinele produse de Alternaria 234
5
CAPITOLUL 1
Implicaiile bacteriilor din genul
Shigella n producerea toxiinfeciilor
alimentare
1.1. Caractere generale
Multiplicarea shigelelor pe suport alimentar, chiar la temperaturi de
10-19C, explic implicarea n declanarea toxiinfeciilor alimentare a unor
alimente contaminate iniial cu un numr subinfectant de germeni.
Produsele lactate au fost cauza unor focare familiale, ns controlul
curent al materiei prime n fabricile de lapte i a produsului finit nainte
de comercializare reduce posibilitatea contaminrilor acestei categorii de
produse.
Alte produse alimentare de origine animal (oule, carnea i derivatele
lor) pot fi contaminate cu germeni din genul Shigella spp. prin manipulare
i procesare neigienic.
La nceputurile investigaiilor tiinifice despre cauza mbolnvirilor
produse la om prin consumul alimentelor de origine animal, Paul Riegler a
publicat, n anul 1906, o valoroas lucrare despre Otrvirile cu carne, care
reprezint prima expunere tiinific din ara noastr asupra toxiinfeciilor
alimentare la om, datorate consumului de carne contaminat cu germeni
patogeni din genul Salmonella (Enache T., i col., 2002).
Paul Riegler mpreun cu Victor Babe cerceteaz un episod grav de
mbolnviri (27 persoane din care 3 au murit), ca urmare a consumului de
carne de miel (infectat cu Salmonella Gartner) din care a izolat germenul,
identificat apoi i la persoanele decedate.
Medicii legiti suspectau iniial o otrvire colectiv. Din analiza
chimic a probelor recoltate de la cadavre nu s-a descoperit ns nici o
substan toxic, dar serul bolnavilor din acest episod a aglutinat germenul
izolat, la un titru de 1/50 - 1/100, chiar i dup o lun de la debutul bolii.
Din punct de vedere juridic, acest episod a beneficiat de un diagnostic
corect care a nlturat cu argumente tiinifice prezumia de atentat criminal
7
depozitrii, servirii.
Riscul de contaminare a minilor persoanelor care manipuleaz
aceste alimente este corelat cu exercitarea profesiilor care asigur asisten
medical, paramedical, prim-ajutor, personalul din sectorul sanitar i sanitarveterinar, personalul care lucreaz la salubritate (att pentru ndeprtarea
reziduurilor solide, ct i la ntreinerea reelei de canalizare).
Importana minilor murdare n transmiterea bolilor infecioase este
influenat de intensitatea contaminrii, de anumite deprinderi neigienice
individuale, de nivelul cultural i igienico-sanitar, ct i de condiiile de
supravieuire ale patogenilor pe suprafaa tegumentului.
Insectele joac rolul de vectori activi sau pasivi n transmiterea
patogenilor, dup cum germenii se nmulesc sau nu pe organismul insectei
vector.
Vectorii mecanici (biologic-pasivi) vehiculeaz doar microorganisme
care supravieuiesc pasiv pe suprafaa corpului lor sau n tubul digestiv, fr
a se multiplica.
Musca domestic prin habitatul ei peridomestic, mobilitate, voracitate,
preferine coprofage, poate vehicula infecia la mari distane de locul
contaminrii iniiale.
Gndacii de buctrie (Blatella germanicus i Blatella orientalis) pot
vehicula pasiv enterobacterii, enterovirusuri, stafilococi, ou i larve de
helmini etc.
Furnicile pot transmite mecanic germenii Gram negativi.
Aceti factori biologici au rol important n transmiterea infeciilor n
locuine, colectiviti umane, sector alimentar, medical etc.
Cel de-al treilea element constitutiv al focarului epidemiologic
este reprezentat de organismul uman i de receptivitatea indivizilor care
alctuiesc o populaie.
Rezistena antiifecioas reprezint capacitatea natural a organismului
de a mpiedica ptrunderea patogenilor n organism, de a asigura distrugerea
i eliminarea lor din organism i de a neutraliza produii toxici care induc
boala.
Pentru om, riscul reprezentat de consumul crnii animalelor acvatice
este condiionat de mediul din care provin aceste vieuitoare. Literatura
de specialitate cuprinde date relativ puine despre microbiologia acestor
produse.
Riscurile sunt mai mari la carnea animalelor acvatice provenite din
zonele tropicale unde bolile digestive evolueaz sub form endemic.
Molutele sunt frecvent purttoare de germeni patogeni enterici, n
organismul lor concentrndu-se cele mai diverse bacterii i virusuri luate
9
1.2. Taxonomie
Genul Shigella este component al familiei Enterobacteriaceae i
prezint multiple nrudiri cu genul Escherichia, ns nu face parte din flora
saprofit a intestinului.
10
- Bacteria;
- B XII Proteobacteria;
- Gammaproteobacteria;
- Enterobacteriales;
- Enterobacteriaceae;
- Shigella.
Shigella sonnei, denumit de unii autori n trecut ca S. pseudodysenteriae, are activitatea metabolic cea mai bogat, fiind spre deosebire de
celelalte specii lactozo-pozitiv (tardiv), betagalactoxidaz prompt pozitiv
i constant productoare de ornitindecarboxilaz (Negu M, 1998).
La nivel mondial se estimeaz c numrul anual al toxiinfeciilor
alimentare umane, cu Shigella este de 6,5-8 milioane (Mahon C, Manuselis
G, 1995).
1.3. Ci de transmitere
Enterobacteriile din genul Shigella spp. sunt patogene numai pentru
om i primate non-umane, iar rspndirea lor este realizat exclusiv prin
aceste surse.
Contaminarea fecaloid intereseaz frecvent solul i apele de suprafa,
de unde se poate dispersa direct (irigaii) sau indirect (prin vectori: vegetale,
fructe, ape de suprafa, pete, fructe de mare i alte alimente), de unde
germenii pot ajunge la om (Adams M. R., Moss M. D., 1995).
Alimentele de origine animal sunt contaminate n timpul procesri
(surse umane) sau prin transportul i manipularea neigienic (vectori i alte
surse).
n funcie de anumite condiii, Shigella se poate izola din ap, alimente
sau chiar de pe obiecte (Ballows A et al, 1992).
Shigella alturi de Salmonella, Escherichia coli i Yersinia spp. au
fost n mod clar demonstrate ca patogeni enterici (Cunin P et al. 1999; Gray
DL, 1995).
Legumele i fructele se pot contamina cu Shigella n urma irigrii cu
ape poluate i prin manopere de recoltare, pstrare i distribuire neigienic
(Beuchat L R, 1996).
Shigella poate fi izolat din legumele contaminate, att n stare crud,
ct i din cele gtite (Frost J A et al., 1995).
ntruct acvacultura are o mare dezvoltare, contaminarea cu fecale a
apelor poate cauza infectarea cu Shigella a petilor i crustaceelor i apoi a
oamenilor prin consumul acestor vieuitoare (Bryan F. I. 1985).
Petii i alte animale marine pescuite/recoltate din ape de suprafa
contaminate consecutiv deversrilor de ape reziduale provenite din
canalizrile urbane, constituie o surs tot mai frecvent de contaminare a
oamenilor cu Shigella (Gessner BD i Beller M, 1994).
12
1.6. Patogenitate
Elementele de patogenitate induse de Shigella spp., ca i cele produse
de Escherichia coli enteroinvaziv (EIEC) se datoreaz capacitii acestor
microorganisme de a invada epiteliul intestinal, de a se multiplica intracelular
i de a se rspndi de la o un enterocit la altul (Morris J. G. Jr. Ferreccio C.,
Garcia J., Lobos H., Black R. E., Rodriguez H., Levine M.M., 1984, Page
A. L., Ohayon H., Sansonett, P. J., Parsot C., 1999).
Capacitatea de a invada celulele epiteliale a fost demonstrat deopotriv
i pe modele experimentale pe animale i in vitro. Aceast capacitate se
poate verifica pe culturi celulare HeLa, prin numrarea coloniilor dezvoltate
n monostrat. Variantele de Shi. flexneri care nu au fost capabile s invadeze
culturile celulare, nu au determinat mbolnviri experimentale la maimu.
Hibrizii de Shi. flexneri 2a i Escherichia coli K12, capabili de a adera
i invada celulele epiteliale i incapabili de se multiplica intracelular s-au
dovedit nepatogeni la maimuta Rhesus (Kumene N F et al., 1999).
Nu este ns suficient ca Shigella s invadeze i s se multiplice
intracelular pentru a aprea leziunile caracteristice i pentru a declana
fenomenele clinice.
Mutante de Shigella, capabile de a invada i a se multiplica intracelular,
s-au dovedit nepatogene, ntruct nu aveau capacitatea de a se transmite de
la o celul la alta (Sandlin R. C., Maurelli A. T., 1999).
Aceste capaciti, care reprezint totodat markeri de virulen, sunt
expresia capabilitilor bacteriei, reglate genetic n succesiunea actului
patogenic. Controlul genetic al invazivitii este multifactorial, necesitnd
participarea ambilor determinani: plasmidic i cromozomal.
n ansamblu acest control este reglat de temperatura ambiental. La
15
1.7. Epidemiologie
n 2006, au fost raportate 6.513 cazuri de shigeloz de ctre 26 state
membre ale UE i state EEA/EFTA (Danemarca, Frana, Italia i Liechtenstein
nu au raportat). Dintre acestea 6.410 au fost confirmate i rata notificrii
medii la nivelul UE a fost de 1,7 la 100.000 locuitori. Aceste date sunt cu
24% mai mici dect raportrile din 2005 ale acelorai ri. Cea mai mare
rat a notificrilor a fost realizat de Bulgaria (11,4 la 100.000 locuitori),
Slovacia (8,1 la 100.000 locuitori), Lituania (5,9 la 100.000 locuitori) i
Suedia (4,7 la 100.000 locuitori). Raportul cazurilor de shigeloz importate
versus domestice variaz substanial de la o ar la alta. n Finlanda, Suedia,
Norvegia, Olanda, Irlanda, Germania i Regatul Unit, 63%-92% din cazurile
de schigeloz sunt considerate de import sau asociate cltoriilor. Aceasta
este n contrast cu ri precum Grecia, Slovenia, Slovacia i Ungaria, unde
87-100% din cazuri sunt domestice.
Tabelul 1.1.
Numrul i rata notificrilor cazurilor de shigeloz uman n UE i EEA/
EFTA, n 2006 (Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
ara
Tipul de raportare
Total cazuri
Cazuri confirmate
Austria
Belgia
Bulgaria
Cipru
Republica Ceh
Danemarca
Estonia
C
U
A
C
C
U
A
77
305
879
2
289
53
77
305
879
0
276
53
0,93
2,9
11,4
0,26
2,7
3,9
22
ara
Tipul de raportare
Total cazuri
Cazuri confirmate
Finlanda
Frana
Germania
Grecia
Ungaria
Irlanda
Italia
Latvia
Lituania
Luxembourg
Malta
Olanda
Polonia
Portugalia
Romnia
Slovacia
Slovenia
Spania
Suedia
Marea Britanie
Total UE
Islanda
Liechtenstein
Norvegia
Total
C
U
C
C
C
C
U
C
A
C
U
C
A
C
C
C
C
C
C
C
74
814
30
93
54
87
203
13
0
256
35
2
559
465
43
148
429
1425
6375
0
138
6513
74
814
26
73
53
73
203
13
0
248
30
1
559
436
36
148
429
1425
C
N
C
0
138
6410
1,4
0,99
0,23
0,72
1,3
3,2
5,9
2,8
0,0
1,5
0,08
0,1
2,6
8,1
1,8
0,34
4,7
2,4
1,71
0,0
3,0
1,73
Sursa: Raportri naionale. A = Raportri de date agregate; C = Raportri bazate pe cazuri; - = fr raportare; U = nespecificat
Cazuri/100.000
Figura 1.1.
Distribuia pe grupe de vrst a cazurilor de shigeloz uman n EU i EEA/
EFTA n 2006 (n=142325 cazuri)
(Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Sursa: Raportri naionale. Austria, Belgia, Bulgaria, Cipru, Republica Ceh, Estonia, Finlanda, Germania,
Grecia, Ungaria, Irlanda, Latvia, Luxembourg, Olanda, Portugalia, Slovacia, Slovenia, Spania, Suedia, M.B., i
Norvegia. Malta i Islanda au raportat 0 cazuri
Sezonalitatea
Un vrf al numrului total de cazuri raportate a fost observat spre
finalul verii i n lunile de toamn.
Shigeloza nc are un impact major asupra copiilor de vrst foarte
mic, cu o rat a notificrilor maxim la grupa 0-4 ani. n statele unde
rata maxim a notificrilor a fost la grupele de vrst mijlocie, acestea
au fost cel mai adesea asociate cltoriilor, iar la aceste state majoritatea
cazurilor raportate au fost de import. De asemenea, variaia de la tiparul
sezonier general observat n unele state se poate datora tot cazurilor asociate
cltoriilor, din timpul vacanelor de iarn.
1.8. Manifestri clinice
Tabloul clinic de baz are dou forme de manifestare: diareea apoas
asociat cu vom i deshidratare sau cu dizenterie (volum mic al fecalelor,
cu mucus, snge, crampe i tenesme), (Djuretic T, col., 1996; Guerrant L.R.,
1995).
Semnele clinice apar la 24-48 ore de la ingerare n infecia acut,
cu limite ntre 7 i 36 ore, pn la 1-7 zile n transmisiile nealimentare.
Durata bolii este n medie de 7 zile la adulii tratai i pn la 30 zile la cei
netratai.
24
ara
Nr. cazuri
tratate
1977-1979
1984-1987
Suedia
43
M.B.
120
Antibioticul
Suscepti
bilitatea (%)
Autorul
100
Houstonetal. (1981)
1984-1989
Olanda
1985-1986
Elveia
1985-1986
SUA
1985
Bangladesh
1313
107
252
91
Acid nalidixic
Acid nalidixic
Quinolone noi
Acid nalidixic
Acid nalidixic
Acid nalidixic
Acid nalidixic
1986
Bangladesh
1987
Bangladesh
1987-1992
Israel
515
58
262
Acid nalidixic
Acid nalidixic
Acid nalidixic
68,7
40,0
98,1
Munshietal. (1987)
Munshietal. (1987)
Admonietal. (1995)
1989-1990 Germania
255
Acid nalidixic
100
Aleksieetal.(1993)
100
Lingetal. (1988)
99,8
98,0
99,6
100
Voogaletal. (1992)
Altweggetal. (1986)
Tauneetal. (1990)
Musnshictal.(1987)
profunzime;
VV
Cnd greutatea individual a petelui depete 2 kg, cte o bucat
(de aprox. 1 kg) dintr-un pete de la suprafa i o bucat dintr-un pete
din profunzimea ambalajului. Cnd petele este n vrac se va recolta cte
o prob (de 1 kg) pentru fiecare 1.000 kg, ns nu mai puin de 3 probe i
nu mai mult de 10. Probele se vor recolta att de la suprafa, ct i din
profunzime;
VV
Dac petele este ambalat n butoaie cu saramur, din fiecare ambalaj
controlat se recolteaz i o prob de aproximativ 200 ml saramur.
VV
Icre. Se desfac 10% din ambalajele lotului i se recolteaz cte o
prob (suprafa i profunzime) de aproximativ 250 g din minimum dou i
maximum 5 ambalaje deschise.
VV
Crustacei i molute. Se recolteaz 1% din numrul exemplarelor
care formeaz lotul, astfel nct greutatea probei s fie de 500-1000 g pentru
fiecare lot. Probele se vor lua din diferite puncte ale lotului.
VV
Pulpe de broasc (pui de balt). Se recolteaz ambalajele originale
(brichete) n procent de 5%, dar nu mai puin de dou i nu mai mult de
cinci.
VVPentru probele de ou. Se deschid 10% din ambalajele care
formeaz lotul i din fiecare ambalaj se recolteaz 12 ou din cutiile de 360
ou. Numrul total al oulor recoltate dintr-un lot nu va fi mai mare de 100.
n cazul oulor preambalate se recolteaz 1% din numrul preambalajelor.
VVPudr de ou sau produse de ou pasteurizate sau congelate (ou
integral, glbenu, albu). Se recolteaz probe n procent de 2% din numrul
ambalajelor, dar nu mai puin de 5 i nu mai mult de 10.
VVRecoltarea probelor de lapte la locul de producie se face n caz
de litigii pentru stabilirea fraudelor privind integritatea (mai ales cantita
tea de grsime) sau calitatea igienic, n acest caz se vor recolta probe n
urmtoarele condiii:
VVCel mai trziu la 3 zile de la ivirea litigiului: de la aceeai vac sau
de la acelai numr de vaci i de la aceeai mulsoare sau de la acelai numr
de mulsori ca i proba n litigiu;
VVSe va controla dac alimentaia animalelor nu s-a schimbat ntre
timp;
VVMulgerea va fi complet i fcut n aceleai condiii ca i cea de
la care s-a obinut laptele;
VVPentru depistarea unor germeni n lapte se vor recolta probe
individuale de la fiecare animal direct n recipientul de recoltare, dup ce n
prealabil s-a asigurat dezinfecia ugerului i minilor muncitorului.
Probele se vor recolta de la nceputul mulsorii dup ce s-au ndeprtat
32
Din proba medie se trimit la laborator 200 - 300 g. Dac lotul este
format din ambalaje mici (pachete) se recolteaz 2% din numru unitilor
de ambalaj, dar nu mai puin de 2 i nu mai mult de 5.
Pentru probele de cacaval i brnzeturi fermentate (diferite
sortimente) se deschid 5% din unitile de ambalaj care formeaz lotul,
dar nu mai puin de 2 i nu mai mult de 5. Din fiecare ambalaj deschis se
recolteaz pentru laborator cte o prob de 200-300 grame n felii sau cu o
sond special, astfel nct s cuprind att suprafaa, ct i profunzimea.
Pentru sotimentele ambalate n pachete mici de pn la 250 grame se
recolteaz pachete originale n procent de 1, dar nu mai puin de 3 i nu
mai mult de 10.
Brnza telemea n cutii sau bidoane. Se recolteaz o felie dintr-o
bucat de la suprafa i una dintr-o bucat din profunzime. De asemenea,
se recolteaz i 200-300 mililitri saramur.
Mierea de albine. Se deschid 10% din numrul ambalajelor din
fiecare lot, ns nu mai puin de 3 i nu mai mult de 7. Dup o omogenizare
atent se recolteaz din fiecare ambalaj deschis aproximativ 250 grame
miere, fcndu-se o prob medie. Dup omogenizare, din aceasta se
recolteaz pentru laborator 250 grame.
Trebuie menionat c n funcie de felul alimentului i al modului de
ambalare, probele recoltate pentru examen de laborator se refrigereaz la
1-4C, fr ns a le congela.
Din alimente congelate, prezentate n ambalaje mici, probele se iau
ca atare, iar din cele prezentate n ambalajele mari se recolteaz probe prin
forare, tiere sau prin achiere cu instrumentar corespunztor.
Prelevarea probelor de ap pentru identificarea germenilor
din genul Shigella spp.
Se recolteaz ap de robinet din sursa de alimentare, ap din rezervoare,
bazine, lacuri, fntni, etc, n funcie de situaia existent.
Pentru proba de ap din reeaua de alimentare se flambeaz robinetul,
apoi se deschide complet i se las s curg ap 5 minute i aproximativ 10
secunde din rezervor. Se scoate dopul flaconului pentru prob i se menine
sub jet pentru a se umple pn la aproximativ 2 centimetri sub dop. Sunt
necesare probe de 1-5 litri.
Probele se transport n lad izoterm pentru examinare n interval de
maxim 2 ore.
Examinarea se poate temporiza maximum 6 ore, dac proba este
34
36
2. decantarea
supernatantului ntr-un balon
steril
3. Incubare
anaerob 20 de ore la 44C
(Shi. Sonnei) sau la 42C
(celelalte specii)
4. nsmnare
n placa Petri. Incubare la
35C, 20-48 de ore
5. nsmnare
pe mediul TSI i alte teste
biochimice
6. Confirmarea serologic
37
Izolarea
Izolarea shigelelor de la pacieni i purttori se face dup metodologia
general preconizat la investigarea sindromului diareic.
Izolarea de la pacieni n stadiul acut al bolii se realizeaz prin etalarea
materiilor fecale (omogenizate i suspensionate n soluii saline tamponate)
direct pe mediile selective (fr a trece pe medii de mbogire), datorit
densitii mari a shigelelor n fecale (aproximaiv 107/g).
Mediile selective recomandate sunt geloza MacConkey (MC), agaruldeoxicolat-citrat-lactoza (ADCL), geloza Salmonella-Shigella (SS) i
agarul xiloz-lizin-deoxicolat (XLD) sau asocierea de medii din clase
selective diferite, slab selective: MC i moderat selective: ADCL, SS, XLD.
Rezultatele cele mai bune au fost raportate cu XLD.
Izolarea shigelelor din alimente de origine animal
Acest procedeu se realizeaz cu dificultate datorit mai multor
factori:
Identificare biochimic
Identificarea biochimic a coloniilor prezumtive de Shigella spp.
se poate face prin teste exoenzimatice asociate (metoda multitest) sau
individuale pe seturi de teste comerciale.
O asociere multitest de TSI (triple sugar iron) i MILF (motilitate,
indol, lizin, fenilalanin) este larg utilizat datorit multiplelor avantaje pe
care le ofer. Celelalte metode de analiz biochimic, utile n caracterizarea
izolatului se pot face de pe TSI, prin metode macrotest ori microtest. La
acestea se adaug si testele de serotipizare sau de testare a sensibilitii la
antibiotice.
Identificare serologic
Identificarea serologic se face utiliznd suspensii antigenice inactivate
prin cldur (pentru a evita inaglutinabilitatea i a reduce riscul contaminrii
profesionale) cu seruri aglutinante ori latex aglutinante. ncadrarea de
serotip este obligatorie.
Markeri epidemiologici
Oportunitatea investigaiilor epidemiologice a impus folosirea unor
metode de difereniere a serotipurilor, mai ales n cazul Shi. sonnei (serotip
unic) i Shi. flexneri 2a (serotip ubicvitar, larg rspndit geografic).
Biotipia, antibiotipia, fagotipia i bacteriocinotipia au fost preco
nizate i utilizate de mai muli autori la investigarea unor focare cu areal de
evoluie foarte larg.
Determinarea profilului plasmidic i caracterizarea DNA-ului
plasmidelor de rezisten se utilizeaz n investigarea epidemiologic.
Colicinotipia, antibiotipia i profilul plasmidic au o valoare limitat datorit
mobilitii mari a plasmidelor de rezisten la acest gen.
Diagnosticul bacteriologic prin tehnici alternative
Detectarea shigelelor direct n prelevatele patologice ori alimentare
prin mijloace rapide suscit un larg interes medical. Metodele de diagnostic
bazate pe principii genetice i imunologice au fost aplicate deja n
diagnosticul dizenteriei acute.
39
Antiserul polivalent
Al
CI
C2
A-D
+
+
+
+
+
+
+
Numrul de probe
examinate
Numrul de probe
pozitive
320
12
Ca proaspt
120
Urd dulce
46
257
743
Total
Numrul de loturi
Cantitatea
(tone/lot)
Numrul de probe
examinate
Numrul de probe
pozitive
Belgia
20
SUA
99
Italia
29
Frana
139
Olanda
390
14
Brazilia
31
Total
609
28
Tabelul 1.6
Prevalenta tulpinilor de Shigella sp. n prjituri i produse de patiserie
comercializate de uniti de alimentate public (perioada 2000-2002)
Denumirea
produsului
Cantitatea
(buci)
Numrul de
probe analizate
Numrul de probe
pozitive
Prjituri
785
20
2000
Produse de
patiserie
524
12
2001
Prjituri
23404
10
2002
Prjituri
232
15
24945
57
Anul
Total
Probe
pozitive
2573
17
2135
11
100
Salat nordic
30
Salat pescreasc
42
3100
15
7980
52
Macrou afumat
Total
2000
2001
2002
Numrul
Numrul Numrul
Cantitatea
de loturi
de loturi de probe
(kg)
importate
examinate pozitive
ara de
provenien
Denumirea
produsului
Belgia
maionez
12
2521
Olanda
maionez
5795
sosuri pe baz de
maionez
23
2907
13
Polonia
maionez
300
Italia
sosuri pe baz de
maionez
1440
Germania
maionez
11
1883
sosuri pe baz de
maionez
24
7012
21
maionez
3750
Olanda
sosuri pe baz de
maionez
3041
Germania
maionez
sosuri pe baz de
maionez
maionez
sosuri pe baz de
maionez
-
324
2701
360
Belgia
Total
7
114
54
8
32036
75
Lacul Floreasca
50
Lacul Tei
76
Lacul Toboc
70
Lacul Colentina
60
trandul 1
60
Lacul Snagov
60
Total
376
Mehedini
Botoani
Clrai
Ialomia
Dmbovia
Vaslui
Galai
Tulcea
32
Total
Tabelul 1.11
Prevalena tulpinilor de Shigella spp. n apa din canalele Deltei Dunrii n
perioada 2001-2003 (Enache T. Enache T. Jr., 2005)
Locul de recoltare a probelor
Numrul de probe
recoltate
Numrul de pozitive
pentru Shigella
Braul Sulina
72
60
Braul Chilia
5
Total
192
Tabelul 1.12
Probe coprologice recoltate de la animale vii pentru evaluarea contaminrii
cu Shigella spp. (perioada 2001-2003)
Specie
Numrul Numrul
de exploataii de probe
controlate analizate
Agar XLD
Bovine
23
184
Porcine
Psri
16
9
128
270
Total
48
582
Numrul
Numrul de
Numrul de
unitilor
probe analizate probe pozitive
verificate
Abatoare de psri
36
65
Total
101
investigat.
n acest context, trebuie avut n vedere faptul c infeciile produse
de bacteriile din genul Shigella nu pot fi nc controlate eficient, datorit
necunoaterii incidenei reale la bolnavii cu toxiinfecii alimentare, ntruct
prevalenta n produsele alimentare de origine animal i n ap nu este
evaluat corect i complet.
Pe acest teren, cu numeroase elemente incerte sau nc necunoscute,
n cadrul studiilor ntreprinse s-a urmrit investigarea, aprofundarea,
clarificarea i completarea acestor date cu noi observaii de cert valoare
tiinific i practic.
De aceea s-a cutat s se evidenieze i s se aprofundeze i alte
elemente revelatorii pentru clarificarea rolului alimentelor de origine animal
ca verigi epidemiologice majore n declanarea toxiinfeciilor alimentare la
om.
Rezultatele obinute ofer posibilitatea formulrii unor concluzii
fundamentate pe baza analizei comparative a acestor date cu cele din
literatura internaional:
Pn n prezent n literatura de specialitate nu s-au comunicat nc
rezultate certe, bazate pe date aprofundate privind prevalena i incidena
acestor germeni, pe grupe de alimente i nu exist statistici oficiale rezultate
dintr-un amplu screening (derulat succesiv de la recoltare, prelucrare,
transport, stocare, desfacere i pn la consumul alimentelor), din care s
rezulte c produsele alimentare de origine animal constituie rezervorul de
Shigella cu risc epidemiologic recunoscut pentru consumatori;
Sub raportul problemelor de sntate public veterinar nu se
cunosc nc ndeajuns sursele reale de contaminare cu Shigella i factorii
care influeneaz i determin apariia i gravitatea evoluiei unor focare
de toxiinfecii alimentare, care nu sunt ntotdeauna diagnosticate rapid i
corect din punct de vedere etiologic;
Cu toate c germenii din genul Shigella spp. fac parte din punct
de vedere epidemiologic din grupa de risc n care este ncadrat toxiinfecia
alimentar produs de Salmonella, nu este nc legiferat i impus
obligativitatea investigrii curente, n ceea ce privete prezena de Shigella,
a tuturor alimentelor de origine animal de ctre laboratoarele veterinare
pentru controlul alimentelor de origine animal;
Datele din prezenta lucrare dau numai o orientare general asupra
posibilelor surse de alimente de origine animal care constituie rezervor
de contaminare a consumatorilor cu Shigella, fr a fi luat n considerare
uriaul potenial de contaminare pe care l reprezint zarzavaturile i alte
legume comestibile obinute de pe culturi irigate cu ap provenit din surse
59
61
62
Shi.
flexneri.
Agar Luria.
65
Bibliografie selectiv
1. Ashkenazi S (2004) Shigella infections in children: new insights. Semin Pediatr
Infect Dis 15:246-252
2. Ashkenazi S (2004) Shigella infections in children: new insights. Semin Pediatr
Infect Dis 15:246-252
3. Baird-Parker AC (1994) Foods and microbiological risks. Microbiology 140:687695
4. Baird-Parker AC (1994) Foods and microbiological risks. Microbiology 140:687695
5. Baylis, C. L., Penn, C. W., Thielman, N. M., Guerrant, R. L., Jenkins, C. and
Gillespie, S. H., 2006. Escherichia coli and Shigella spp., In Principles and Practice
of Clinical Bacteriology. Second Edition. S. H. Gillespie and P. M. Hawkey Eds.,
John Wiley & Sons Ltd, London: p 347-365.
6. Brian MJ, Van R, Townsend I, Murray BE, Cleary TG, Pickering LK (1993)
Evaluation of the molecular epidemiology of an outbreak of multiply resistant
Shigella sonnei in a day-care center by using pulsed-field gel electrophoresis and
plasmid DNA analysis. J Clin Microbiol 31:2152-2156
7. Brian MJ, Van R, Townsend I, Murray BE, Cleary TG, Pickering LK (1993)
Evaluation of the molecular epidemiology of an outbreak of multiply resistant
Shigella sonnei in a day-care center by using pulsed-field gel electrophoresis and
plasmid DNA analysis. J Clin Microbiol 31:2152-2156
8. Caprioli A, Morabito S, Brugre H, Oswald E., 2005. Enterohaemorrhagic
Escherichia coli: emerging issues on virulence and modes of transmission. Vet Res.
2005. 36(3):289-311.
9. Center for Disease Control and Prevention (2002) Shigella. Annual Summary.
Department of health and human services. National Center for Infectious Diseases.
Division of Bacterial and Mycotic Diseases. Foodborne and Diarrheal Diseases
Branch. Atlanta, GA
10. Center for Disease Control and Prevention (2002) Shigella. Annual Summary.
Department of health and human services. National Center for Infectious Diseases.
Division of Bacterial and Mycotic Diseases. Foodborne and Diarrheal Diseases
Branch. Atlanta, GA
11. Chen Q, Savarino SJ, Venkatesan MM., 2006, Subtractive hybridization and optical
mapping of the enterotoxigenic Escherichia coli H10407 chromosome: isolation of
unique sequences and demonstration of significant similarity to the chromosome of
Escherichia coli K-12. Microbiology. Apr;152(Pt 4):1041-54.
12. Cheryl L. Tarr, Adam M. Nelson, Lothar Beutin, Katharina E. P. Olsen, and Thomas
S. Whittam. 2008, Molecular Characterization Reveals Similar Virulence Gene
66
40. Simona Ivana, 2002 Bacteriologie veterinar special (Ed. Ceres, Bucureti; 460
pagini), ISBN: 973-40-0568-5
41. Simona Ivana, 2005 Bacteriologie general (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;
250 pagini), ISBN: 973-86485-7-2
42. Simona Ivana, 2006 Tratat de bacteriologie medical-veterinar i introducere n
micologie (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;768 pagini), ISBN (10) 973-865715-6; ISBN (13) 978-973-86571-5-1
43. Simona Ivana, 2007 Manual de microbiologia alimentelor (Ed. tiinelor medicale,
Bucureti; 160 pagini), ISBN: 978-973-86571-3-7
44. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. I (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-01-6
45. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. II (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-02-3
46. Simona Ivana, 2008, Microbiologia alimentelor, Ed. Orizonturi, ISBN: 978-973736-090-8
47. Simona Ivana, 2008, Practical guide of microbiogical diagnosis, Ed. Orizonturi,
ISBN: 978-973-736-089-2
48. Sussman, M., 1997, Escherichia coli, Mechanisms of virulence, Cambridge,
Cambridge University Press.
49. Traian Enache, tefan Nicolae, tefan Enache jr., Felicia Hlciuc, 2005,
Toxiinfecii alimentare, prin alimente de origine animal contaminate cu Shigella
spp., Editura Coral Sanivet.
50. Welch RA, Burland V, Plunkett G 3rd, Redford P, Roesch P, Rasko D, Buckles EL,
Liou SR, Boutin A, Hackett J, Stroud D, Mayhew GF, Rose DJ, Zhou S, Schwartz
DC, Perna NT, Mobley HL, Donnenberg MS, Blattner FR, 2002, Extensive mosaic
structure revealed by the complete genome sequence of uropathogenic Escherichia
coli. Proc Natl Acad Sci U S A. Dec 24;99(26):17020-4.
51. Wick LM, Qi W, Lacher DW, Whittam TS, 2005, Evolution of genomic content in
the stepwise emergence of Escherichia coli O157:H7, J Bacteriol. Mar; 187(5):178391.
52. Wickham, M. E., Lupp, C., Mascarenhas, M., Vazquez, A., Coombes, B. K., Brown,
N. F., Coburn, B. A., Deng, W., Puente, J. L., Karmali, M. A. and Finlay, B. B, 2006,
Bacterial genetic determinants of non-O157 STEC outbreaks and hemolytic-uremic
syndrome after infection. J. Infect. Dis. 194(6): 819-827
53. Yang J, Nie H, Chen L, Zhang X, Yang F, Xu X, Zhu Y, Yu J, Jin Q., 2007, Revisiting
the molecular evolutionary history of Shigella spp. J Mol Evol. Jan;64(1):71-9.
69
CAPITOLUL 2
Implicaiile bacteriilor din genul
Escherichia n producerea toxiinfeciilor
alimentare
2.1. Caractere generale
Enterobacteriaceele sunt prezente n intestinul animalelor i al omului,
iar fecalele conin peste 1010 per gram enterobacterii, de unde ajung n
mediul ambiant (sol, ap, plante, animale). Sunt cunoscute ca fiind agenii
etiologici ai sindromului diareic infecios.
Grupul coliformilor se limiteaz la bacterii care cresc n tractul
gastrointestinal al omului i al animalelor i include 5 genuri: Escherichia,
Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Raoultella - adugat de curnd,
formnd o parte din genul Klebsiella. Aceste bacterii prezint o mare
importan pentru microbiologia alimentar deoarece reprezint unul din
cei mai utilizai indicatori microbiologici sanitari care reflect condiiile
de igien la prelucrarea i manipularea produselor, iar n multe situaii
reflect modul de respectare al diferitelor tratamente termice (de exemplu,
pasteurizare) aplicate diverselor produse. Separarea bacteriilor coliforme
n cele de origine fecal i nefecal se face prin folosirea temperaturilor
ridicate.
Prin definiie grupul coliformilor fecali conine bacili sau cocobacili
Gram negativi, nesporogeni, aerobi i facultativ anaerobi, mobili prin
flageli peritrichi sau imobili care fermenteaz lactoza cu producere de gaz
i produc colonii nchise la culoare ce au suprafaa cu luciu metalic i reflex
auriu-verzui n decurs de 48 de ore la 45,5C.
Din genul Enterobacter, speciile mai importante pentru microbiologia
alimentar sunt: E. (Pantoea) agglomerans, care a fost transferat n genul
Pantoea i E. sakazakii.
Citrobacter produce colonii tipice pigmentate n galben, fermenteaz
lent lactoza i utilizeaz citratul ca unic surs de carbon. Specia prevalent
din alimente este C. freundii, care se gsete de obicei n legume i carnea
70
proaspt.
Klebsiella cuprinde mai multe specii trecute de curnd n genul
Raoultella: K. (Raoultella) terrigena, R. planticola, R. ornitinolytica, ce se
izoleaz din sol, ap, plante, dar i de la nivelul tubului digestiv. Contamineaz
frecvent alimentele, de obicei n asociaie cu alte microorganisme,
determinnd alterarea acestora.
Escherichia coli este larg rspndit n natur i reprezint microflora
dominant a intestinului gros, de unde prin intermediul fecalelor se elimin
n mediul exterior contaminnd solul, apa, furajele, alimentele, etc. Tulpinile
capabile de a provoca mbolnviri la om se situeaz ntr-una din cele 4
categorii de Escherichia coli enteropatogen:
1. Tulpini enteropatogene (EPEC);
2. Tulpini enterotoxigene (ETEC);
3. Tulpini enterohemoragice (EHEC);
4. Tulpini enteroinvazive (EIEC).
2.2. Istoric
Pentru prima dat n 1885 Theobold Escherich a izolat germenul din
fecalele unor copii sugari, cu diaree. Implicaiile lui n patologia veterinar
au fost recunoscute treptat, pe msura acumulrii cunotinelor dobndite n
acest domeniu.
Prezena n filtratele culturilor unor tulpini de Escherichia coli a unei
citotoxine necunoscute pn atunci, activ pe celulele Vero, a fost relatat
de Konowalchuk i colaboratorii n 1977.
Un antiser preparat mpotriva unei citotoxine Vero (VT) parial
purificate, obinut de la tulpina de Escherichia coli productoare de
VT (ECVT) prototip H30 (serotip O26:H11) a neutralizat activitatea
verotoxinelor provenite de la 8 din 10 tulpini pozitive pentru VT, dar nu
i pentru celelalte dou, sugernd existena unei heterogeniti serologice,
observaie care a fost confirmat ulterior.
apte tulpini ECVT au provenit de la pacieni cu gastroenterit,
sugernd faptul c VT a fost un factor de virulen n boala enteric.
n 1983, OBrien i La Veck au purificat i caracterizat toxina H30
i au demonstrat c este un polipeptid subunitar similar toxinei produse de
Shigella dysenteriae tipul 1. De atunci a fost denumit Shigella-like toxin
(SLT-toxin asemntoare toxinei Shiga).
n 1983, Riley i colaboratorii, de la Centrul de Control al Bolilor
din Atlanta, au coordonat investigaiile epidemiologice n dou episoade de
71
2.3. Taxonomie
n cadrul genului sunt incluse 5 specii de Escherichia: Escherichia
coli (cu dou biovaruri: Escherichia coli normal i Escherichia coli inactiv),
Escherichia fergusonii, Escherichia hermannii, Escherichia vulneris,
Escherichia blattae, Escherichia adecarboxylata, Escherichia albertii.
Descoperirea unei toxine VT1, la Escherichia coli, care este virtual
identic toxinei Shiga, produs de Shigella dysenteriae, tip 1 nu este
surprinztoare.
Proprietatea produciei VT distinge ECVT de alte serotipuri de
Escherichia coli enterice, patogene, de tipul Escherichia coli enterotoxigen,
Escherichia coli enteroinvaziv, Escherichia coli enteropatogen i Escherichia
coli enteroagregativ.
Mai mult de 150 de serotipuri OH ECVT diferite au fost pn acum
asociate cu boala de la om. Multe altele au fost izolate exclusiv de la
animale.
Termenul Escherichia coli enterohemoragic (EHEC) a fost aplicat
acelor serotipuri VT EC, care au caracteristici clinice, epidemiologice i
72
2.4. Morfologie
Escherichia coli este o bacterie Gram negativ, de form bacilar
sau cocobacilar cu dimensiuni de 1-1,5/2-6 microni. Este nesporogen, n
general flagelat peritrich.
Exist tulpini capsulogene i necapsulogene. Unele tulpini prezint
fimbrii i sunt hemaglutinante.
Au fost identificate dou tipuri fimbriale: tipul 1, care sunt manozsensibile i tipul 2, manoz-rezistente, caracterizate printr-o mare diversitate
antigenic.
Fimbriile manoz rezistente mplinesc funcia unor factori de
patogenitate.
Unele tulpini prezint plasmide F, fiind prevzute cu pil de sex,
detectabile serologic sau cu ajutorul fagilor sexuali.
neregulate.
Exist i tulpini care dau colonii mucoide. Pe agar snge de iepure,
unele tulpini (n special cele izolate de la porcine) determin hemoliz
incomplet, fr legtur cu enteropatogenitatea.
Longevitatea germenilor n culturi pe medii uzuale este de 2-3 luni.
Culturile bacteriene degaj un miros caracteristic de amoniac.
+
+
+
+
+
+
tulpini
Denumiri anterioare
Asocieri patologice
F1
F2
F3
F4
F5
F6
F7
F8
F9
F10
F11
F12
Tipul I
CFA I
CFA II
K88
K 99
K 987
C 1212
C 1254-79
3669
C 1960-79
C 1976-79
C 1979-79
2.9. Patogenitatea
Escherichia coli este o bacterie condiionat patogen cu numeroase
fenotipuri patogene (patotipuri).
Genele cromozomale, dar mai ales resortarea variailor factori de
patogenitate prin transfer plasmidic i conversie lizogenic determin
constituirea numeroaselor sale patotipuri diareigene i uropatogene.
Unele tipuri sunt predominant toxigene n timp ce altele sunt virulente
i invazive.
Pe baza mecanismului de aciune de la nivelul tubului digestiv, tulpinile
de Escherichia coli se mpart n enteroinvazice i enterotoxice.
Enteroinvazivitatea se datoreaz posibilitii bacteriei de a penetra
78
subclonate i secvenializate.
Mecanismele produse de Shigella, Stx1, Stx2, Stx2e i ricin sunt
asemntoare. Ele sunt N-glicozidaze ce cliveaz un reziduu de adenin
specific din subunitatea 28S a RNA-ului eucariotic, ducnd la inhibarea
sintezei de proteine.
Capacitatea de a produce enterotoxine se evideniaz prin testul ansei
ligaturate, care de regul se face pe iepure, prin administrare intragastric la
oarece sau in vitro, respectiv prin teste serologice.
Endotoxina de natur lipopolizaharidic, prezent i la alte bacterii
Gram negative, favorizeaz diseminarea septicemic i particip la
producerea ocului endotoxic. Se identific cu antigenele somatice O,
fiind determinante pentru ncadrarea n serogrupe. Este responsabil de
producerea septicemiilor, mamitelor, infeciilor urinare.
Hemolizinele alfa i beta acioneaz asupra integritii membranelor
celulare. Sunt incriminate ca ageni etiologici ai bolii edemelor.
Hemolizinele sunt codificate plasmidic i acioneaz ca citotoxine
calciu dependente.
Sideroforii influeneaz aciunea colibacililor enteroinvazivi, ca
urmare a competiiei dintre celulele somatice i cele bacteriene, pentru
utilizarea fierului biodisponibil.
Factorii de patogenitate toxici, cu efect necrozant CNF1 i CNF2 sunt
toxine de natur proteic, ce pot facilita rspndirea bilateral a tulpinilor
uropatogene din tractusul urinar spre i din torentul sangvin.
Acetia sunt:
1. Escherichia coli enterotoxigen (ETEC), fiind grupa cu cea mai
important pondere n patologia enteritelor infecioase la animale.
Acioneaz prin inhibarea absorbiei apei i electroliilor fr lezionarea
mucoasei intestinale, n condiiile meninerii sau exacerbrii exorbiei,
ceea ce se soldeaz cu deficit n balana hidroelectrolitic (deshidratare,
acidoz).
Aceste tulpini se ataaz i colonizeaz intestiul subire prin intermediul
CFAs (colonization factor antigens = factor fenibrial(de colonizare)
Exist 4 tipuri de CFA mature cu I, II, III, IV care au fost clonate i
secvenializate.
CFA-urile sunt codificate n general de aceeai plasmid care codific
enterotoxina termostabil nefiind produse sub 20oC. O data ataate ele
produc una sau dou enterotoxine. O dat ataate ele produc una sau dou
enterotoxine.
ntr-un studiu al tulpinilor ETEC izolate de la 109 pacieni ,cele care
au produs att ST ct i LT erau mai restricionate n serotipurile O:K:H
81
EHEC
2
5
6
4
22
26
38
45
46
82
84
88
EIEC
28 ac
29
112 a
124
135
136
143
144
147
152
164
167
83
EPEC
18 ab
19 ac
55
86
111
114
119
125
126
127
128 ab
142
ETEC
6
8
15
20
25
27
63
78
80
85
101
115
EAggEC
85
111
127
142
162
EHEC
91
103
113
104
111
116
118
145
153
156
157
163
EIEC
EPEC
158
ETEC
128 ac
139
141
147
148
149
153
159
167
Tabelul 2.4
Cazuri de gastroenterite alimentare provocate de Escherichia coli patogen
Anul
ara
Sursa alimentar
1947
1961
Anglia
Romnia
1963
Japonia
1966
1967
1971
1980
1981
1982
Japonia
Japonia
SUA
SUA
SUA
SUA
salam
substitut de cafea
ohagi - mncare
tradiional din orez
legume
sushi
brnzeturi importate
carne de vit
carne de vit
carne de vit
Nr. de victime/
Nr. de risc
Toxina/
Tipul tulpinii
Serotip
47/300
10/50
EIEC
EPEC
O124
O86:B7:H34
17/31
EIEC
O124
244/435
835/1736
387/?
500/3000
282/3000
26/?
EIEC
?
EIEC
ETEC
ETEC (LT)
EHEC
O124
O11
O124:B17
O6:H16
O25:H+
O157:H7
Grupa de
E. coli
EHEC
Rezervorul
cunoscut sau
presupus
Surse de
contaminare a
alimentelor
Alimente implicate n
toxiinfeciile alimentare
fecale de bovine
carnea tocat de vit;
vacile de lapte i i de alte animale;
laptele nepasteurizat;
alte animale
utilaje;
salata
lptrii
2.10. Epidemiologie
Infeciile cu Vero/shiga toxin Escherichia coli (VTEC/STEC) din
2006 au nregistrat la nivelul a 27 de state membre ale UE i EEA/EFTA un
numr de 3.463 raportri cu 3.458 de confirmri, furniznd astfel o rat a
notificrilor la nivelul UE de 0,74 la 100.000 locuitori.
Tabelul 2.6.
Numrul i rata notificrilor de cazuri VTEC/STEC raportate n UE i EEA/EFTA
n 2006
ara
Austria
Belgia
Bulgaria
Cipru
Tipul de
raportare
Total cazuri
Cazuri confirmate
C
C
U
U
41
47
0
0
41
47
0
0
0,50
0,45
0,0
0,0
87
ara
Tipul de
raportare
Total cazuri
Cazuri confirmate
Republica Ceh
0,1
Danemarca
146
146
2,7
Estonia
0,59
Finlanda
14
14
0,27
Frana
67
67
0,11
Germania
1236
1236
1,5
Grecia
0,1
Ungaria
0,1
Irlanda
158
153
3,6
Italia
17
17
0,1
Latvia
0,0
Lituania
0,0
Luxembourg
0,43
Malta
1,2
Olanda
42
42
0,26
Polonia
0,1
Portugalia
Romnia
Slovacia
0,15
Slovenia
30
30
1,5
Spania
13
13
0,1
Suedia
265
265
2,9
Marea Britanie
1301
1301
2,2
3412
3407
0,74
Total UE
Islanda
0,33
Liechtenstein
Norvegia
50
50
1,1
3463
3458
0,74
Total
Cazuri
Figura 2.1
Distribuia sezonier a cazurilor de VTEC/STEC n EU i EEA/EFTA n 2006
(3323 cazuri) (Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Ian
Feb
Mar
Apr
Mai
Iun
Iul
Aug
Sep
Oct
Nov Dec
Cazuri/100.000
Figura 2.2.
Distribuia pe grupe de vrst a cazurilor de VTEC/STEC n EU i EEA/
EFTA n 2006
(Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
EPEC
EIEC
EHEC
ETEC
Patotipul
Tabelul 2.7
Metode de identificare a patotipurilor diareigene de Escherichia coli
(dup Negu M., 1999)
Metode in vitro
Metode in
ncadrare n
Efect
Metode
Metode
vivo
serogr.
citopatogen
genetice
imunologice
iepure:
- ans ligat.
- factorul de
perm. cut.;
oarece nou
nscut:
- inoculare
intragastric
neconcludent pentru
incadrarea n
patotip
purcel:
enterocolit
hemoragic
letal
ser 0157:H7
(aglutinare;
coaglutinare;
latex
aglutinare)
cobai:
inoculare n
sacul conjunctival
(testul
Sereny)
aglutinare/
latex aglutinare cu seruri
polivalente i
monovalente:
28, 29, 124,
136, 143,
144, 152, 164,
167
aglutinare
cu seruri
polivalente i
monova-lente
OK: 26, 55,
86, 111, 114,
119, 125, 126,
127, 128, 142,
158
amplificare
genic (PCR);
efect citopatodetectarea genei
gen pe celule:
toxinei termola- CHO (globubile LTI (lt I);
lizare);
detectarea genei
- Y1 (picnoz)
toxinei termostabile ST (st I)
amplificare
genic (PCR):
efect citopatodetectarea genegen pe celule
lor SLT (slt IB):
Vero; leziuni
- direct n scaun
de tipul A-E
a eae A;
(aderen,
- n colonii
tergere a
izolate pe agar
microvililor)
Mac Conkey cu
sorbitol
pentru LTI:
- latex aglutinare;
- ELISA;
- Imunodifuzie
(testul Biken);
pentru ST:
- ELISA
latex aglutinare
i ELISA pt. detectarea separat
a toxi-nelor:
- SLT 1;
- SLT 2;
seroneutralizarea
efectului citotoxic pe celule
Vero
amplificare
genic (PCR):
detectarea genei
ipa H
amplificare
genic (PCT):
detectarea
operonului alfa;
detectarea genei
eae A
Colibaciloza vieilor
Poate evolua ca enterit colibacilar (diaree colibacilar) sau ca
septicemie colibacilar.
Tulpinile de Escherichia coli care produc enterita colibacilar aparin
serogrupelor O8, O9, O101, O15, O115, dau pe medii glucozate colonii
mucoide, produc enterotoxine, posed antigenul A i L (ca factori de
adeziune), K99 sau F4.
n etiologia septicemiei colibacilare, cel mai frecvent raportat, n toate
rile este O78, urmat de O15, O111 i O115.
Enteritele colibacilare reprezint rezultatul aciunii colibacililor
aparinnd fie patotipului ETEC (cel mai frecvent), fie patotipului EPEC,
EHEC sau EIEC.
n cazul lui ETEC i EPEC sunt prezente adezinele fimbriale F5 (mai
frecvent) fie adezinele F6, F41, F17 (rar).
n cazul colibacilozei septicemice, principalul factor de patogenitate l
reprezint endotoxinele, care dup ce se multiplic intravascular, genereaz
ocul endotoxic.
Colibaciloza purceilor
Se manifest sub urmtoarele forme:
diareea colibacilar (DC) sau enterita colibacilar (EC) sau
colibaciloza enterotoxic ntlnit la purcei n primele zile de via, fiind
cea mai frecvent i pgubitoare form.
Cele mai multe tulpini enterotoxigene izolate de la purcei posed
adezinele fimbriale F4 (K88) i, mai rar F5 (K99), F6 (987) sau F41 i aparin
serogrupurilor somatice O141, O147, O149, O157, O8, O9, O138, O64,
O10, O15 i altele.
O parte dintre acestea elaboreaz, n afara enterotoxinelor ST i LT i
verotoxinele care, de obicei nu posed adezine fimbriale.
diareea de nrcare (DI) apare n creterea intensiv, n primele
zile dup constituirea loturilor de tineret;
septicemia colibacilar (SC) apare la purceii sugari, dar n proporie
mai mic dect DC;
enterotoxiemia colibacilar, numit i boala edemelor (B.E.). De la
purceii cu B.E. se izoleaz, de regul, tulpini de Escherichia coli hemolitice,
care aparin serotipurilor O138 K81, O139 K82, O141 K85, care posed
adezine i au capacitatea de a produce verotoxine.
99
diareei), care are cea mai nalt inciden la copii. De obicei, se manifest
n cteva zile de la declanare, printr-o diaree acut prodromal, care
este frecvent sanguinolent, cu trsturi indistincte de cele din colita
hemoragic.
SUH clasic rmne cauza major a insuficienei renale acute la copii.
Se pot ntlni complicaii grave, ca rezultat al bolii microangiopatice de
la nivelul altor sisteme organice, cum ar fi sistemul nervos (SNC), cordul,
pulmonul i pancreasul.
SUH clasic i/sau SUH asociat ECVT, cu manifestri predominant
nervoase este frecvent denumit purpura trombotic trombocitopenic
(PTT).
SUH reprezint de asemenea complicaia major a dizenteriei Shiga,
asociat cu Shigella dysenteriae, tipul 1.
Factorul responsabil n geneza SUH, aprut att n urma infeciei
ECVT ct i a dizenteriei Shiga este probabil aceeai exotoxin proteic,
denumit VT1 sau Shiga toxin (toxin Shiga), care este elaborat att de
ECVT, ct i de Shigella dysenteriae tipul 1.
La majoritatea pacienilor cu diaree i colit hemoragic, asociate
ECVT, boala este autolimitant, iar recuperarea total se obine prin msuri
generale de susinere.
SUH nregistreaz, de obicei, o rat a fatalitii cazurilor de aproximativ
50%.
Terapia intravenoas cu imunoglobuline a fost benefic n cazul unor
copii cu SUH, dei bazele acestui efect rmn a fi elucidate.
Tehnica de lucru:
Determinarea prezenei i a numrului de bacterii coliforme se poate
efectua att n medii lichide ct i pe medii solide, de izolare selectiv (fr
mbogire).
1. Se cntresc 50 g de prob ntr-un blender de nalt vitez. Se
adaug 450 ml de fosfat tampon Butterfield i se omogenizeaz 2 minute la
10.000-12.000 rot/min. Astfel se obine diluia 10-1.
2. Toate diluiile zecimale se pregtesc cu 90 ml diluant + 10 ml
din diluia anterioar. Diluiile pregtite depind de densitatea anticipat a
coliformilor. Se omogenizeaz bine fiecare diluie.
3. Pentru testul prezumptiv se transfer cte 1 ml din fiecare diluie n
cte 3 tuburi per diluie cu bulion LT (lauril-triptoz). Pipeta se ine n aa
fel nct marginea sa inferioar s fie sprijinit de tub.
4. Se incubeaz tuburile 24-48 de ore, la 35C. Se examineaz la 24 de
ore pentru producia de gaz n tubul Durham.
5. Se reincubeaz tuburile negative nc 24 de ore i se examineaz
pentru a doua oar pentru producia de gaz.
106
Tabelul 2.9
Sortiment
Tampoane utilaje
Carne de porc
Carne de vit
Slnin
Salamuri
semiafumate finite
Carne tocat
Past de mici
Total
Nr.
probe
Tulpini
izolate
Tulpini ncadrate
serologic
Tulpini nencadrate
serologic
nr.
nr.
nr.
20
17
19
5
5
2
1
0
25
11
5
0
1
1
0
0
20
50
0
0
4
1
1
0
80
50
100
0
37
33
66
4
12
85
1
6
18
25
50
21
0
2
5
0
33
27
1
4
13
100
66
72
Tampoane
utilaje
Carne porc
Carne vit
Slnin
Salamuri
semiafumate
finite
Carne tocat
Past mici
Total
07
08
010
015
020
nr
nr
nr
nr
nr
5/1
20
20
2/1
1/0
0/0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
0
0
50
0
0
3/1
1/0
6/2
18/5
1
0
2
50
0
11
0
0
1
0
0
5,5
0
1
1
0
16,6
5,5
1
0
1
100
0
5,5
0
1
2
0
16,6
11
Tabelul 2.11
Testarea patogenitii unor tulpini de E. coli izolate pe fluxul producerii
mezelurilor i a unor semipreparate
Tulpini
Tulpini Globule
examinate pozitive
roii
Testul
Obs.
nr. % nr. % oaie/om
1=N
Producia de hemolizine
85 100 2 23,52
1 = 010
RSAR
85 100 2 23,52
1 = N:K99F41
Prezena fimbriilor
latex aglutinare
1 1,17
1 = N: F41
Testul ansei ligaturate
pentru ST/LT
5 100 0
0
(purcel sugar nrcat)
Producia de H2S
85 100 10 11,76
N = tulpin nencadrat serologic
113
1. Se amestec
proba alimentar
ntr-un
blender
rotativ de nalt
vitez.
2. Se dilueaz
omologatul
de
prob alimentar.
Bulion lauril-triptoz
4. Test de confirmare.
Se incubeaz la
35C 48 de ore
Bulion BGB 2%
5. Interpretare: Se numr tuburile gaz-pozitive i se calculeaz mPN din tabele.
114
Escherichia coli.
Coloraia Gram. Preparat din cultur
Escherichia coli.
Coloraia Gram. Preparat din cultur
116
117
Bibliografie selectiv
1. Baylis, C. L., Penn, C. W., Thielman, N. M., Guerrant, R. L., Jenkins, C. and
Gillespie, S. H., 2006. Escherichia coli and Shigella spp., In Principles and Practice of
Clinical Bacteriology. Second Edition. S. H. Gillespie and P. M. Hawkey Eds., John Wiley
& Sons Ltd, London: p 347-365.
2. Caprioli A, Morabito S, Brugre H, Oswald E., 2005. Enterohaemorrhagic
Escherichia coli: emerging issues on virulence and modes of transmission. Vet Res. 2005.
36(3):289-311.
3. Chen Q, Savarino SJ, Venkatesan MM., 2006, Subtractive hybridization and
optical mapping of the enterotoxigenic Escherichia coli H10407 chromosome: isolation
of unique sequences and demonstration of significant similarity to the chromosome of
Escherichia coli K-12. Microbiology. Apr;152(Pt 4):1041-54.
4. Cheryl L. Tarr, Adam M. Nelson, Lothar Beutin, Katharina E. P. Olsen, and
Thomas S. Whittam. 2008, Molecular Characterization Reveals Similar Virulence Gene
Content in Unrelated Clonal Groups of Escherichia coli of Serogroup O174 (OX3) J.
Bacteriol. 2008 190: 1344-1349.
5. de Sablet T, Bertin Y, Vareille M, Girardeau JP, Garrivier A, Gobert AP, Martin
C., 2008., Differential expression of stx2 variants in Shiga toxin-producing Escherichia
coli belonging to seropathotypes A and C., Microbiology. 154:176-86.
6. Devasia RA, Jones TF, Ward J, Stafford L, Hardin H, Bopp C, Beatty M, Mintz
E, Schaffner W., 2006. Endemically acquired foodborne outbreak of enterotoxin-producing
Escherichia coli serotype O169:H41. Am J Med. 2006 Feb;119(2):168.e7-10.
7. Donnenberg, M. S., 2002, Escherichia coli virulence mechanisms of a versatile
pathogen, London, Academic Press.
8. Duffy, G., Garvey, P. and McDowell, D. A., 2001, Verocytotoxigenic Escherichia
coli, Trumbull, Connecticut, Food & Nutrition Press Inc.
9. EFSA, 2007, Monitoring of verotoxigenic Escherichia coli (VTEC)
andidentification of human pathogenic VTEC types, Scientific Opinion of the Panel on
BIOLOGICAL HAZARDS (Question No EFSA-Q-2007-036) The EFSA Journal.
10. Kaper, J. B. and OBrien, A. D., 1998, Escherichia coli O157:H7 and other
Shiga toxin-producing Escherichia coli strains, Washington D.C, ASM Press.
11. Karmali, M. A., 2003, The medical significance of Shiga toxin-producing
Escherichia coli infections. An overview. Methods Mol. Med. 73: 1-7
12. Le Gall T, Darlu P, Escobar-Pramo P, Picard B, Denamur E., 2005, Selectiondriven transcriptome polymorphism in Escherichia coli/Shigella species. Genome Res.
Feb;15(2):260-8.
13. Morabito S, Karch H, Mariani-Kurkdjian P, Schmidt H, Minelli F, Bingen E,
Caprioli A., 1998, Enteroaggregative, Shiga toxin-producing Escherichia coli O111:H2
118
29. Wickham, M. E., Lupp, C., Mascarenhas, M., Vazquez, A., Coombes, B. K.,
Brown, N. F., Coburn, B. A., Deng, W., Puente, J. L., Karmali, M. A. and Finlay, B.
B, 2006, Bacterial genetic determinants of non-O157 STEC outbreaks and hemolyticuremic syndrome after infection. J. Infect. Dis. 194(6): 819-827
30. Yang J, Nie H, Chen L, Zhang X, Yang F, Xu X, Zhu Y, Yu J, Jin Q., 2007,
Revisiting the molecular evolutionary history of Shigella spp. J Mol Evol. Jan;64(1):71-9.
31. Erickson, J.P., J.W. Stamer, M. Haycs, D.N. McKenna, and L.A. van Alstine.
1995. An assessment ol Escherichia ,,,/, 0157:H7 contaniinaiion risks in commercial
mayonnaise Iroin pasicurized eggs and environmcntal sourccs. and behavior in Iow-pH
dressings. J. FoodProtect. 58:1059-1064.
32. Fenton, L.L., L.W. Hand, T.G. Rehberger, F.K. Ray, and T.G. Harbolt. 1995.
Fate of Escheruhia coli Ol 57:H7 in theniially processed low fat ground becf pattics. Proc.
Inst. Food Technol. 36.
33. Ficlding, L.M., P.E. Cook, and A.S. Grandison. 1994. The effecl of electron
beam irradiation and modified pH on the survival and recovery of Escherichia coli. J. Appl.
Bacteriol. 76:412-416.
34. Fisher, T.L., and D.A. Golden. 1998. Fate of Escherichia coli Ol57:H7 in ground
apples used in cider production. /. Food Proiect. 61:1372-1374.
35. Frantz, J.C., L. Jaso-Fricdman, and D.C. Robertson. 1984. Binding of
Escherichia coli heat-stable enterotoxin to rat intestinal cells and brush border membranes.
Infect. Immun. 43:622-630.
36. Glass, K.A., J.M. Loeffelholz, J.P. Ford, and M.P. Doyle. 1992. Fate of
Escherichia coli 0157:H7 as affected by pH or sodium chloride and in fermented, dry
sausage. Appl. Environ. Microbiol. 58:2513-2516.
37. Gonthier, A., V. Gue>in-Faublee, B. Tilly, and M.-L. Delignette-Muller. 2001.
Optimal growth temperature of 0157 and non-0157 Escherichia coli strains. Lett. Appl.
Microbiol. 33:352-356.
38. Griffin, P.M., and R. V. Tauxe. 1991. The epidemiology of infections caused by
Escherichia coli 0157:H7, other enterohe-morrhagic Escherichia coli, and the associated
hemolytic uremie syndrome. Epidemiol. Rev. 13:60-98.
39. Gross, R.J.. L.V. Thomas, T. Cheasty, N.P. Day, B. Rowe, M.R.F. Toledo, and
L.R. Trabulsi. 1983. Enterotoxigenic and enteroinvasive Escherichia coli strains belonging
to a new O Group, 0167. J. Clin. Microbiol. 17:521-523.
40. Herriott, D.E., D.D. Hancock, E.D. Ebel, L. V Carpenter, D.H. Rice, and TE.
Besser. 1998. Association of hercl management factors with colonization of dairy cattle by
Shiga toxin-positive Escherichia coli 0157../. Food Proiect. 61:802-807.
41. Hitotsubashi, S., Y. Fujii, and K. Okamota. 1994. Binding protein for Escherichia
coli heat-stable enterotoxin II in mouse intestinal membrane. FEMS Microbiol. Lett.
122:297-302.
42. Hitotsubashi. S., Y. Fujii. and H. Yamanaka. 1992. Some properties of purified
120
2004. Longitudinal study ol fecal shedding of Escherichia coti ()157:H7 in feedlot cattle:
Predominante and persistence of specific clonal typcs despite massive cattle population
turnover. Appl. Environ Mu robioi. 70:377-384.
57. Leyer. G.J.. L.-L. Wang. and E.A. Johnson. 1995. Acid adaptation of Escherichia
coli 0157:H7 increases survival in acidic foods. Appl. Environ. Microbiol. 61:3752-3755.
58. Line. J.E.. A.R. Fain, Jr.. A.B. Moran. L.M. Martin. R.V. Lechowich, J.M.
Carosella, and W.L. Brown. 1991. Lethality of heat to Escherichia coli 0157:H7: D-value
and r-value determinations in ground beef. J. Food Protect. 54:762-766.
59. Lior. H. 1994. Escherichia coli0\51\Hl and verotoxigenic Escherichia coli
(VTEC). Dairy Food Environ. Sanil. 14:378-382.
60. Louise, CB., S.A. Kaye. B. Boyd, CA. Lingwood, and T.G. Obrig. 1995. Shiga
toxin-associated hemolytic uremie syndrome: Effect of sodium butyrate on sensitivity of
human umbilical vein endothelial cells to Shiga toxin. Infect. Immun. 63:2766-2769.
61. Machino. H.. K. Araki, S. Minami, T. Nakayama, Y. Ejima. K. Hiroe, H. Tanaka,
N. Fujita, S. Usami, M. Yonekawa. K. Sadamoto, S. Takaya, and N. Sakai. 1998. Recent
outbreaks of infections caused by Escherichia coli Ol57:H7 in Japan. In Escherichia coli
0157.H7 and Other Shiga Toxin-Producing Escherichia coli Strains, ed. J.B. Kaper and
A.D. OBrien, 73-81. Washington. DC: ASM Press.
62. Marier. R., J.G. Wells, R.C Swanson, W. Callahan. and I.J. Mehlman. 1973.
An outbreak of enteropathogenic Escherichia coli foodborne disease traced to imported
French cheese. Lancet 2:1376-1378.
63. Mazaitis, A.J., R. Maas. and W.K. Maas. 1981. Structure of a naturally occurring
plasmid with genes for enterotoxin production and drug resistance. J. Bacteriol. 145:97105.
64. Merson. M.H., F. Orskov. I. Orskov. R.B. Sack. I. Huq. and F.T. Koster. 1979.
Relationship between enterotoxin production and serotype in enterotoxigenic Escherichia
coli. Infect. Immun. 23:325-329.
65. Montenegro, M.A., M. Buhe. T. Trumpf, S. Aleksic, G. Reuter, E. Bulling, and
R. Helmuth. 1990. Detection and characterization of fecal verotoxin-producing Escherichia
coli from healthy cattle. J. Clin. Microbiol. 28:1417-1421.
66. Mundell. D.H., C.R. Anselmo, and R.M. Wishnow. 1976. Factors influencing
heat-labile Escherichia coli enterotoxin activity. Infect. Immun. 14:383-388.
67. Neill. M. A.. P.I. Tarr. D.N. Taylor. and M. Wolf. 2001. Escheru hia coli. In
Foodborne Disease Handbook: Diseases Caused by Bacteria, ed. Y.H. Hui. M.D. Pierson,
and J.R. Gorham, 2nd ed., 169-212. New York: Marcel Dekker.
68. OBrien. A.D., M.R. Thompson. J.R. Cantey. and S.B. Formal. 1977. Production
of Shigella dysenteriae-Uke toxins by pathogenic Escherichia coli. Abstr.. Amer. Soc.
Microbiol. 32.
69. OBrien, A.D.. and R.K. Holmes. 1987. Shiga and Shiga-like toxins.
Microbiol. Rev. 51:206-220.
122
123
CAPITOLUL 3
Implicaiile bacteriilor din genul Yersinia
n producerea toxiinfeciilor alimentare
3.1. Caractere generale
A fost constituit n 1944 la propunerea lui Van Loghem.
Cuprinde 13 specii, dintre care, cele mai importante n patologia
veterinar i uman sunt: Yer. pseudotuberculosis (cu dou subspecii:
pseudotuberculosis i pestis), Yer. pestis, care este agentul etiologic al ciumei
la om; Yer. pseudotuberculosis, care produce yersinioza la multe specii de
animale; Yer. enterocolitica (subsp. enterocolitica i palearctica), care este
agentul etiologic al unei enterite grave la om i animale, dar care se izoleaz
i din intestinul porcilor sntoi; Yer. ruckeri, care produce la salmonide
infecia numit gura roie.
Bacterii din genul Yersinia, sunt Gram negative, au form bacilar,
sunt facultativ anaerobe, imobile la 37C, mobile la 25-30C (cu excepia
lui Yer. pestis i Yer. ruckeri, care sunt ntotdeauna mobile). Sunt oxidaz
negative, catalaz pozitive, testul Voges-Proskauer negativ la 37C, nu
produc hidrogen sulfurat, nu fermenteaz lactoza, ureaz pozitivi.
Se dezvolt pe medii de cultur ca: snge, Mac Conkey, bulion-cord,
agar SS, la temperatura camerei sau la 39C i n ser fiziologic, tamponat,
la 4C.
Coloniile sunt foarte mici, dup 24 de ore, dar bine vizibile dup 48
de ore.
3.2. Epidemiologie
n 2006, au fost confirmate 9.067 cazuri de yersinioz uman din
9.075 notificri provenide de la 25 state (Frana, Grecia, Olanda, Romnia
i Liechtenstein nu au raportat). Aceste notificri sunt cu 4,5% mai mici
dect cele raportate cu un an n urm de ctre aceleai state. Rata medie a
notificrilor pentru 2006 a fost 2,3 la 100.000 locuitori.
Distribuia yersiniozelor pe grupe de vrst i sex.
124
Cazuri/100.000
Figura 3.1.
Distribuia pe grupe de vrst a cazurilor de yersinioz n 2006 (8608cazuri)
(Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
ara
Austria
Belgia
Bulgaria
Cipru
Tipul de raportare
C
C
C
U
Total cazuri
Cazuri confirmate
158
264
5
0
158
264
5
0
1.9
2.5
0.06
0.0
125
Total cazuri
Cazuri confirmate
535
534
5.2
Danemarca
215
215
4.0
Estonia
42
42
3.1
Finlanda
795
795
15.1
Frana
Germania
5161
5161
6.3
Grecia
Ungaria
38
38
0.38
Irlanda
0.1
Italia
0.0
Latvia
94
92
4.0
Lituania
411
411
12.1
Luxembourg
1.1
Malta
0.0
Olanda
Polonia
110
110
0.29
Portugalia
0.0
Romnia
Slovacia
83
82
1.5
Slovenia
80
76
3.8
Spania
375
375
0.86
Suedia
558
558
6.2
Marea Britanie
59
59
0.10
8989
8981
2.4
ara
Tipul de raportare
Republica Ceh
Total UE
Islanda
0.0
Liechtenstein
Norvegia
86
86
1.9
Total
9075
9067
2.3
Sursa: Raportri naionale. A = Raportri de date agregate; C = Raportri bazate
pe cazuri; - = fr raportare; U = nespecificat
126
Cazuri
Figura 3.2.
Distribuia sezonier a cazurilor de VTEC/STEC n EU i EEA/EFTA n 2006
(n=8660) (Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Ian
Feb
Mar
Apr
Mai
Iun
Iul
Aug
Sep
Oct
Nov Dec
Morfologie
Bacterie Gram negativ, de 0,8-6/0,8 microni, pleomorf mai frecvent
cocobacilar cu tendin de coloraie bipolar.
Necapsulogen, nesporogen, prezint flageli peritrichi, cnd este
cultivat la 28-30C.
Condiii de cultivare i caractere culturale
Crete bine pe medii de cultur uzuale n aerobioz. Pentru izolarea
din materiale patologice cu flor bacterian mixt se utilizeaz mediul lui
Morris, n compoziia cruia intr substane care i confer selectivitatea,
cum ar fi eritromicina, novobiocina, teluritul de potasiu.
Pe agar dezvolt la 37C n 24 de ore colonii de 1-1,5 milimetri,
care n 48 de ore ating 2-3 milimetri. Acestea sunt rotunde, uor granulate,
translucide i cu centrul opac, avnd un aspect striat la periferia coloniei.
Proprieti biochimice
Fermenteaz glucoza fr producia de gaz, nu produc hidrogen
sulfurat, nu fermenteaz lactoza. La 37C este imobil (mediul MILF se
tulbur numai dup meninerea 24 de ore la temperatura camerei).
Nu produce indol, lizindecarboxilaz i fenilalanin-deaminaz.
Nu cresc pe mediul cu citrat (Simmons), nu scindeaz malonatul,
produce ureaz i beta galactozidaz.
Tabelul 3.2.
Ureaz
Indol
Zaharoz
Ramnoz
Celobioz
Sorbitol
Salicin
Yer. pestis
Yer. pseudotuberculosis
Yer. enterocolitica
Yer. frederiksenii
Yer. ruckeri
Ornitindecarboxilaz
Yersinia spp.
Mobilitatea la
37Ca
0
0
2
5
0
0
0
95
95
100
5
95
75
70
0
0
0
50
100
0
0
0
95
100
0
1
70
1
99
0
0
0
75
100
5
50
0
99
100
50
70
25
20
92
0
128
Sorbitol
Salicin
Celobioz
Zaharoz
100 15
100 20
100 20
100
0
60
0
100 100
Indol
100
100
100
25
0
96
Ureaz
Ramnoz
Ornitindecarboxilaz
Mobilitatea la
37Ca
5
92
77
30
0
0
Yer. kristensenii
0
80
20
0
100
0
Yer. mollaretii
0
80
60
0
100
0
Yer. bercovierii
0
25
62
0
100
0
Yer. rohdei
0
40
60
0
20
0
Yer. aldovae
5
100
80 100 100 100
Yer. intermedia
a)
Cu excepia Yer. pestis, toate speciile sunt mobile la 25C
Yersinia spp.
Proprieti antigenice
Posed antigene somatice O i antigene flagelare H, pe baza
crora specia este divizat n 8 serogrupuri majore, dintre care unele sunt
subdivizate n subgrupe, fiecare cu mai multe serotipuri.
Subspecia pseudotuberculosis prezint antigene comune cu subspecia
pestis, salmonelele din grupele B, D i Escherichia coli. Nu exist
nrudiri antigenice ntre Yer. pseudotuberculosis i Yer. enterocolitica.
Identificarea antigenic prin aglutinare cu ser anti Yer. pseudotuberculosis
tip 1 (serovarurile dominante n ara noastr) confirm apartenena de gen
i specie.
Comportarea fa de factorii de mediu
Yer. pseudotuberculosis este o bacterie sensibil la aciunea factorilor de
mediu fizici i chimici i a dezinfectantelor obinuite n concentraii uzuale.
Cele mai active antibiotice sunt streptomicina, neomicina, tetraciclina.
Ecologie
Rezervorul natural al acestei bacterii l constituie roztoarele i psrile
slbatice, de unde ajunge n sol i n apele de suprafa, unde supravieuiete
chiar i la temperaturi joase. La om, ajunge pe cale alimentar, fiind cauza
unor enterite subacute, nsoite de adenopatie mezenteric ce poate mima
apendicita.
129
Patogenitate
Ajunse n tubul digestiv, yersiniile se multiplic n mucoasa intestinal,
producnd focare inflamatorii n lamina propria i nodurile limfatice aferente,
sub form de microabcese determinnd atrofierea vilozitilor intestinale.
Ca rezultat se produce malabsorbie, maldigestie i uneori diaree.
Virulena bacteriilor depinde de antigenele V i W, care determin
dependena de calciu, cnd sunt cultivate la 37C.
Tulpinile patogene sunt rezistente la complementul seric, ptrund n
celulele epiteliale umane (celulele He La), sunt letale pentru oarecii de
laborator i prezint citotoxicitate.
Factorii de virulen sunt codificai de plasmida de 70 Kdal. Acetia
sunt reprezentai de o protein-kinaz i de o protein din membrana extern
(YOP = yersinia outer membrane protein), care inhib fagocitoza.
Bacteria ptrunde n celulele eucariote folosind o protein de suprafa
(invaziv), codificat de o gen cromozomal.
Multe tulpini produc o toxin termostabil similar cu cea generat de
Escherichia coli. Aceasta prezint importan (cnd este eliberat la 22C)
n producerea diareei.
Germenul mai produce i o endotoxin, LPS, cu proprieti biologice
similare ce cele provenite de la alte bacterii Gram negative.
Infecia natural. mbrac forme anatomoclinice variate, care
prezint urmtoarele trsturi comune:
55
calea digestiv de contaminare;
55
caracterul sezonier;
55
incidena mare n anotimpurile reci i umede;
55
afectarea constant a ganglionilor mezenterici;
55
prezena unor noduli pseudotuberculoi asemntori cu cei
din tuberculoz, cu centrul necrotic cazeos, cu sau fr tendin de
ncapsulare;
55
evoluia latent a infeciei evideniabil numai prin examen
serologic.
Infecia natural poart denumirea de yersinioz (pseudotuberculoz
sau rodenioz), fiind mai frecvent la roztoare, dar afecteaz i multe specii
de animale i omul. Se caracterizeaz prin slbire progresiv, adenopatie i
formare de noduli cazeoi n diverse organe i pe seroase.
La iepure i cobai, yersinioza se manifest prin apariia de leziuni
nodulare n ganglionii limfatici, ficat, splin, rinichi, plmni, cu tendin
de transformare n abcese.
130
realizeaz prin ingestia de alimente sau ap i mai rar prin contact direct cu
animalele infectate sau pacienii umani.
Transmiterea infeciei n rile nord europene de la animale la om, se
realizeaz probabil prin cinii de companie i prin consumul de carne de
porc insuficient pregtit.
Germenul se poate gsi n lacuri, izvoare, ap potabil, ns rareori,
s-au produs infecii pe aceast cale.
Supravieuiete la frigider, ceea ce arat c produsele refrigerate pot
fi contaminate.
Epidemiile de boal n SUA prin consum de alimente s-au semnalat
prin ciocolat contaminat, lapte pasteurizat, intestine crude de porc.
Infecia cu Yer. pseudotuberculosis, este extrem de rar, fiind
semnalat mai ales n Europa, transmiterea realizndu-se prin ingestie, dup
contactul cu un animal infectat sau prin contaminare intrafamilial prin ap
i alimente.
Majoritatea mbolnvirilor depind de: vrst (copiii ntre 5-15 ani);
sex (masculin); anotimp (iarna).
Transmiterea bolii de la un animal la altul se realizeaz pe cale fecaloral, prin ingestia furajului sau a apei contaminate.
Yer. enterocolitica este sensibil in vitro la aminoglicozide,
cloramfenicol, tetracicline, trimetoprim, sulfametoxazol, piperaciclin i
cefalosporine de generaia a III-a.
Yer. pseudotuberculosis prezint sensibilitate la urmtoarele antibiotice:
ampicilin, tetraciclin, cloramfenicol, cefalosporine i aminoglicozide.
Combaterea trebuie concentrat asupra rezervoarelor animale din
toate zonele.
Pregtirea complet a crnii i pasteurizarea laptelui ar trebui s fie
principalele mijloace de protecie.
Christiansen (1987) a propus evitarea refrigerrii crnii pentru perioade
mai mari de timp datorit capacitii bacteriei de a se nmuli la 4C.
Pentru a mpiedica transmiterea bolii prin transfuziile de snge este
necesar testarea donatorilor pentru episoadele recente de diaree sau febr.
3.4.2. Yersinia pestis
Pesta a produs dezastre nc din Evul Mediu, cnd a ucis un sfert din
populaia Europei.
n prima jumtate a secolului trecut, India a fost grav afectat de o
epidemie de pest n care au murit mai mult de 10 milioane de oameni.
ntre anii 1960 i 1970 n Vietnam, pesta a fcut peste 10.000 de
133
victime pe an.
O dat cu descoperirea streptomicinei a sczut drastic mortalitatea la
om. Mai mult de 10 milioane de oameni au fost vaccinai n timpul rzboiului
din Vietnam cu tulpina atenuat EV76.
Cele mai importante rezervoare ale acestui bacil sunt reprezentate de
obolanii urbani i domestici.
n SUA, n focarele silvatice, rezervoarele sunt reprezentate de ctre
veveria de stnc i cinele de preerie. Mai rar, iepurii, pisicile i alte
carnivore.
Yer. pestis rezist n interiorul fagocitelor mononucleare multiplicndu-se intracelular, prin producerea antigenelor de membran.
Cel mai eficient vector este puricele obolanului asiatic.
Transmiterea ntre animale se face prin muctura puricelui sau prin
ingerarea de esuturi animale moarte.
Boala, la animale se poate prezenta de la forma bacteriemiei subclinice
pn la afeciuni cu limfadenopatii i abcese n multiple organe sau moarte
subit prin septicemie.
Cea mai comun manifestare, la om este pesta bubonic. Boala se
manifest prin febr, frisoane, cefalee, iar n cteva ore apar buboanele
(adenoflegmoane), n special n zona inghinal, axilar i cervical.
O caracteristic special a pestei o reprezint capacitatea bolii de a
nvinge rezistena organismului prin proliferarea intens a bacteriilor n
fluxul sanguin.
Una din complicaiile de temut ale pestei la om este reprezentat de
pneumonia secundar.
Diagnosticul bacteriologic const n efectuarea de culturi din biopsii
ganglionare. Picturile din aspiratul biopsic trebuie puse pe lame de
microscop i uscate la aer i apoi colorate Gram sau Wayson.
n coloraia Wayson, aspiratul este aplicat pe o lam, fixat 2 minute n
metanol concentrat i colorat 10-20 secunde n amestecul colorant, splat cu
ap i uscat (Thomas Butler).
Yersiniile apar sub forma unor bacili azurii cu o extremitate albastru
nchis, iar mediul apare colorat n roz.
Pesta netratat prezint o rat a mortalitii de 50%. Streptomicina
reduce mortalitatea la mai puin de 5%. Se administreaz intramuscular n
doze de 30 de mg/kg/zi, timp de 10 zile.
Majoritatea infeciilor apar n mai-octombrie, cnd oamenii ies n
natur i vin n contact cu roztoarele.
ntre 1980-1989 s-au raportat de OMS, 8554 de cazuri de pest n
17 ri. rile cu mai mult de 100 de cazuri sunt: Tanzania, Vietnam, Zair,
134
135
Bibliografie selectiv
1. Aleksic, S., and J. Bockemuhl. 1984. Proposed revision of the Wauters et al.
antigenic scheme for serotyping of Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol. 20:99-102.
2. Aleksic, S., A. Steigerwalt, J. Bockemuhl, G. Huntley-Carter, and D.J. Brenner.
1987. Yersinia rohdei sp. nov. isolated from human and dog feces and surface water. Int. J.
Syst. Bacteriol. 37:327-332.
3. Archer, J R, R F Schell, D R Pennell and P D Wick. 1987. Identification of
Yersinia spp. with the API 20E system. J Clin Microbiol. 25(12): 2398-2399.
4. Aulisio, C.C.G., I.J. Mehlman, and A.C. Sanders. 1980. Alkali method for rapid
recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from foods. Appl.
Environ. Microbiol. 39:135-140.
5. Aulisio, C.C.G., J.M. Lanier, and M.A. Chappel. 1982. Yersinia enterocolitica
O:13 associated with outbreaks in three southern states. J. Food Prot. 45:1263.
6. Aulisio, C.C.G., J.T. Stanfield, S.D. Weagant, and W.E. Hill. 1983. Yersiniosis
associated with tofu consumption: serological, biochemical and pathogenicity studies of
Yersinia enterocolitica isolates. J. Food Prot. 46:226-230.
7. Aulisio, C.C.G., J.T. Stanfield, W.E. Hill, and J.A. Morris. 1983. Pathogenicity
of Yersinia enterocolitica demonstrated in the suckling mouse. J. Food Prot. 46:856-860.
8. Aulisio, C.C.G., W.E. Hill, J.T. Stanfield, and R.L. Sellers, Jr. 1983. Evaluation
of virulence factor testing and characteristics of pathogenicity in Yersinia enterocolitica.
Infect. Immun. 40:330-335.
9. Bercovier, H., D.J. Brenner, J. Ursing, A.G. Steigerwalt, G.R. Fanning, J.M.
Alonso, G.P. Carter, and H.H. Mollaret. 1980. Characterization of Yersinia enterocolitica
sensu stricto. Curr. Microbiol. 4:201-206.
10. Bercovier, H., A.G. Steigerwalt, A. Guiyoule, G. Huntley-Carter, and D.J.
Brenner. 1984. Yersinia aldovae (Formerly Yersinia enterocolitica-like group X2): a new
species of enterobacteriaceae isolated from aquatic ecosystems. Int. J. Syst. Bacteriol.
34:166-172.
11. Bhaduri, S., C. Turner-Jones, and R.V. Lachica. 1991. Convenient agarose
medium for simultaneous determination of the low-calcium response and congo red binding
by virulent strains of Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol. 29:2341-2344.
12. Boyce, J.M., E.J. Evans, Jr., D.G. Evans, and H.L. DuPont. 1979. Production
of heat-stable methanol-soluble enterotoxin by Yersinia enterocolitica. Infect. Immun.
25:532-537.
13. Buchrieser, C., S. D. Weagant and C. W. Kaspar, 1994. Molecular characterization
of Yersinia enterocolitica by pulsed-field gel electrophoresis and hybridization of DNA
fragments to ail andpYV probes. Appl. and Environ. Microbiol. 60:4371-4379.
14. Carter, P.B., and F.M. Collins. 1974. Experimental Yersinia enterocolitica
138
30. Laird, W.J., and D.C. Cavanaugh. 1980. Correlation of autoagglutination and
virulence of Yersinia. J. Clin. Microbiol. 11:430-432.
31. Lee, W.H., P.P. McGrath, P.H. Carter, and E.L. Eide. 1977. The ability of some
Yersinia enterocolitica strains to invade HeLa cells. Can. J. Microbiol. 23:1714-1722.
32. Linde,H.-J. H. Neubauer, H. Meyer, S. Aleksic, and N. Lehn. 1999. Identification
of Yersinia Species by the Vitek GNI Card. J. Clin. Microbiol.. 37:211-214.
33. Miliotis, M.D. 1991. Acridine orange stain for determining intracellular
enteropathogens in HeLa cells. J. Clin. Microbiol. 29:830-832.
34. Miliotis, M.D., and P. Feng. 1992. In vitro staining technique for determining
invasiveness in foodborne pathogens. FDA Laboratory Information Bulletin, March,
9(3):3754.
35. Miliotis, M.D., J.E. Galen, J.B. Kaper, and J.G. Morris. 1989. Development and
testing of a synthetic oligonucleotide probe for the detection of pathogenic Yersinia strains.
J. Clin. Microbiol. 27:1667-1670.
36. Miller, V.A., and S. Falkow. 1988. Evidence of two genetic loci in Yersinia
enterocolitica that can promote invasion of epithelial cells. Infect. Immun. 56:1242-1248.
37. Miller, V., J.J. Farmer III, W.E. Hill, and S. Falkow. 1989. The ail locus is found
uniquely in Yersinia enterocolitica serotypes commonly associated with disease. Infect.
Immun. 57:121-131.
38. Minnich, S. A., M. J. Smith, S. D. Weagant and P. Feng. 2001. Yersinia, Chapter
19, pp. 471-514. In Foodborne Disease Handbook, 2nd Ed., Vol. 1. Y. H. Hui, M. D. Pierson,
J. R. Gorham (Eds.) Marcel Dekker, Inc. New York.
39. Pai, C.H., and L. DeStephano. 1982. Serum resistance associated with virulence
in Yersinia enterocolitica. Infect. Immun. 35:605-611.
40. Pierson, D.E., and S. Falkow. 1990. Nonpathogenic isolates of Yersinia
enterocolitica do not contain functional inv-homologous sequences. Infect. Immun.
58:1059-1064.
41. Portnoy, D.A., S.L. Moseley, and S. Falkow. 1981. Characterization of plasmids
and plasmid-associated determinants of Yersinia enterocoliticapathogenesis. Infect. Immun.
31:775-782.
42. Portnoy, D.A., and R.J. Martinez. 1985. Role of plasmids in the pathogenicity
of Yersinia species. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 118:2943. Prpic, J.K., R.M. Robins-Brown, and R.B. Davey. 1985. In vitro assessment of
virulence in Yersinia enterocolitica and related species. J. Clin. Microbiol. 22:105-110.
44. Ramamurthy T, Yoshino K, Huang X, Balakrish Nair G, CRNAiel E, Maruyama
T, Fukushima H, Takeda T. 1997. The novel heat-stable enterotoxin subtype gene (ystB)
of Yersinia enterocolitica: nucleotide sequence and distribution of the yst genes. Microbial
Pathogenesis. 23: 189-200.
45. Robins-Brown, R., and K. Prpic. 1985. Effects of iron and desferrioxamine on
infections with Yersinia enterocolitica. Infect. Immun. 47:774-779.
140
46. Robins-Brown, R., M.D. Miliotis, S. Cianciosi, V.L. Miller, S. Falkow, and J.G.
Morris. 1989. Evaluation of DNA colony hybridization and other techniques for detection
of virulence in Yersinia species. J. Clin. Microbiol. 27:644-650.
47. Schiemann, D.A. 1982. Development of a two-step enrichment procedure for
recovery of Yersinia enterocolitica from food. Appl. Environ. Microbiol. 43:14-27.
48. Schiemann, D.A. 1989. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis,
pp. 601-672. In: Foodborne Bacterial Pathogens. M. Doyle (ed). Marcel Dekker, New York
and Basel
49. Sereny, B. 1955. Experimental Shigella keratoconjunctivitis. Acta Microbiol.
Acad. Sci. Hung. 2:293-296.
Simona Ivana, 2002 Bacteriologie veterinar special (Ed. Ceres, Bucureti; 460
pagini), ISBN: 973-40-0568-5
50. Simona Ivana, 2005 Bacteriologie general (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;
250 pagini), ISBN: 973-86485-7-2
51. Simona Ivana, 2006 Tratat de bacteriologie medical-veterinar i introducere
n micologie (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;768 pagini), ISBN (10) 973-86571-5-6;
ISBN (13) 978-973-86571-5-1
52. Simona Ivana, 2007 Manual de microbiologia alimentelor (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti; 160 pagini), ISBN: 978-973-86571-3-7
53. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. I (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-01-6
54. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. II (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-02-3
55. Simona Ivana, 2008, Microbiologia alimentelor, Ed. Orizonturi, ISBN: 978973-736-090-8
56. Simona Ivana, 2008, Practical guide of microbiogical diagnosis, Ed. Orizonturi,
ISBN: 978-973-736-089-2
57. Tsubokura, M., K. Otsuki, K. Sato, M. Tanaka, T. Hongo, H. Fukushima,
T. Maruyama, and M. Inoue. 1989. Special features of distribution of Yersinia
pseudotuberculosis in Japan. J. Clin. Microbiol. 27:790-791.
58. Wauters, G. 1981. Antigens of Yersinia enterocolitica, pp. 41-53. In: Yersinia
enterocolitica. E.J. Bottone (ed). CRC Press, Boca Raton, FL.
59. Wauters, G., M. Janssens, A.G. Steigerwalt, and D.J. Brenner. 1988. Yersinia
molleretii sp. nov. and Yersinia bercovieri sp. nov., formerly called Yersinia enterocolitica
biogroups 3A and 3B. Int. J. Syst. Bacteriol. 38:424-429.
60. Weagant, S.D. 1983. Medium for the presumptive identification of Yersinia
enterocolitica. FDA Laboratory. Appl Environ Microbiol. 45(2):472-3.
61. Weagant, S. D. and P. Feng. 2001. Yersinia, Chapter 41, pp. 421-428. In
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th Ed., F. Pouch
Downes and Keith Ito (Eds.) American Public Health Assoc. Washington, D. C.
141
62. Weissfeld, A.S., and A.C. Sonnenwirth. 1982. Rapid isolation of Yersinia spp.
from feces. J. Clin. Microbiol. 15:508-510.
63. Zink, D.L., J.C. Feeley, J.G. Wells, C. Vanderzant, J.C. Vickery, W.D. Roof, and
G.A. ODonovan. 1980. Plasmid-mediated tissue invasiveness in Yersinia enterocolitica.
Nature 283:224-226.
142
CAPITOLUL 4
Implicaiile bacteriilor din genul Vibrio n
producerea toxiinfeciilor alimentare
4.1. Caractere generale
Genul Vibrio face parte din familia Vibrionaceae (cu 8 genuri).
Cuprinde 76 de specii. Genul reunete bacili Gram negativi cu aspect
caracteristic de virgul (rar n S), necapsulogeni, nesporogeni i extrem
de mobili. n mediile lichide prezint flageli polari (mono sau lofotrichi), iar
pe mediile solide formeaz flageli laterali.
V. parahaemolyticus reprezint principala cauz a gastroenteritelor
epidemice, mai ales n zonele unde se consum pete crud (Japonia). Exist
dovezi c nc alte 4 specii halofile de Vibrio sunt patogene pentru om:
V. alginolyticus, V. fluvialis, V. metschnikovii i V. vulnificus. Toate aceste
specii halofile se difereniaz printr-unul sau mai multe teste biochimice.
Tabelul 4.1.
Teste biochimice de difereniere ntre V. parahaemolyticus i alte specii de Vibrio
Specia
Bacili
Reacia Voges-Proskauer
Dezvoltarea n NaCl 6%
Fenomenul de roire
Sucroz
Celobioz
Utilizarea putresceinei
Agar TCBS
4.2. Taxonomie
Familia Vibrionaceae, cuprinde genurile: Vibrio, Allomonas,
Catenococcus, Enterovibrio, Grimontia, Listonella, Photobacterium,
Salinivibrio
n genul Vibrio sunt ncadrate mai multe specii, patogene i nepatogene.
144
4.3. Istoric
Holera a fost descris pe toate continentele n decursul a ase pandemii.
Prima a aprut n 1817, n India, Pakistan, Birmania, de unde a difuzat n
China i Europa n decursul a patru ani. Cea de-a doua s-a declanat n
Europa (1829) i a difuzat n America de Nord.
n Romnia a fost semnalat n 1913, n cursul celei de-a asea
pandemii. nc din 1855, Snow a artat c holera este transmis la om de un
microb din ap, fecale sau alimente contaminate.
145
4.4. Morfologie
Genul Vibrio reunete bacili Gram negativi, cu diametrul de 0,5-2/0,30,4 microni, frecvent ncurbai ntr-un singur plan, cu aspect caracteristic de
cornioare sau de virgul, necapsulogeni, nesporogeni i extrem de mobili.
n mediile lichide, mobilitatea le este asigurat de flageli polari, mono
sau lofotrihi, iar pe mediile solide, prin flageli laterali, cu lungime de und
mai mic dect a flagelului polar.
La examenul ntre lam i lamel, pe fond ntunecat din culturi n
medii lichide, V. cholerae prezint o micare vie de rostogolire, caracteristic
organismelor monoflagelare, care se traduc plastic prin traversarea
146
2-3
100
galben
bun
V. alginolyticus
2-5
99
galben
bun
V. fluvialis
2-3
100
galben
bun
V. furnissi
2-3
100
galben
bun
V. metschnikovii
2-4
100
galben
poate fi
slab
V. parahaemolyticus
2-5
verde
bun
Aeromonas hydrophila
Plesiomonas shighelloides
0-3
1
> 90
0
galben
verde
variabil
variabil
Proteus vulgaris
2-3
97
galben
bun
Alte enterobacteriacee
0,1
variabil
transparente
variabil
variabil
verde
variabil
Pseudomonas spp.
148
Testul
Tabel 4.3.
Caractere biochimice difereniale ale speciilor din genul Vibrio
(dup Janda, 1998, McLaughlin, 1995)
V.
V. parahae- V. alginoV.
V.
V.
cholerae molyticus
lyticus fluvialis furnissi metschnikovii
100
100
100
100
100
0
Oxidaz
0/129 zon
de inhibiie la
discul cu 150 g
Crete n
bulion cu 0%
NaCl
1% NaCl
6% NaCl
8% NaCl
10% NaCl
12% NaCl
Indol
Decarboxilaze,
Moeller
Arginin
Lizin
Ornitin
ONPG
VogesProskauer
99
20
19
31
90
100
100
53
1
0
0
99
100
99
80
2
1
98
99
100
94
69
16
85
99
96
71
4
0
13
99
100
78
0
0
11
100
78
44
4
0
20
93
100
60
99
99
94
100
95
5
99
50
0
0
0
40
0
0
35
35
0
50
75
95
96
149
Acid din:
L-arabinoz
m-inozitol
Lactoz
Zaharoz
Ureaz
80
93
100
0
7
100
0
0
1
1
15
0
0
99
0
0
3
100
0
0
0
100
0
40
50
100
0
4.7. Ecologie
Vibrionii sunt microorganisme acvatice. Speciile halofile sunt limitate
la apele marine, estuariene, costiere i lagunare.
Speciile non-halofile se gsesc i n apele dulci: ruri, lacuri. Prezena
vibrionilor n apele dulci este tranzitorie.
n apele marine se gsesc sub mai multe forme:
forma liber triete n aceste ape atta timp ct apa le ofer
transporturi i concentraii de nutrieni optime pentru cretere;
forma epibiotic reprezint o asociaie intim a vibrionilor cu
matricea chitinoas a zooplanctonului, a scoicilor sau copepodelor. Vibrionii
epibioni rezist mai mult n mediul marin dect vibrionii liberi i traverseaz
mai uor bariera gastric acid;
forma dormant este reprezentat de microvibrioni, care
sunt celule necultivabile, prezena lor fiind demonstrat prin coloraii
imunofluorescente a probelor provenite din mediul marin.
Tabelul 4.4.
Caractere difereniale ale biovarurilor de V. cholerae 0:1
(dup Buiuc D., 1999)
Testula
Clasic
Biovarul
El-Tor
b
Hemoliza
d
c
Hemaglutinarea
+
Sensibilitatea la:
+
Polimixina B (50 UI)
Fagul clasic IV
+
Fagul El Tor
+
a
Simboluri: + = > 90% din tulpini pozitive; d = 11-89% din tulpini pozitive; - = >
90% din tulpini negative.
b
Hematii de berbec.
c
Hematii de pui de gin.
colonie cu o ans de platin ori cu vrful unei pipete Pasteur cudat n tromp
de musc i se etaleaz uor n spot pe suprafaa hrtiei impregnate.
Testul pozitiv: Se traduce prin virajul spotului la purpuriu n interval
de 10 secunde. Un viraj mai tardiv, ntre 10 i 60 de secunde, nu este
caracteristic: poate fi datorat testrii unei culturi btrne sau de pe un mediu
cu carbohidrai fermentabili.
Testul negativ: Se traduce prin absena culorii purpurii.
Testul vibriostatic cu O/129 (2,4-dinamic-6,7-diizopropilpteridina).
Se prepar o suspensie a tulpinii de identificat cu turbiditatea echivalent
etanolului 0,5 Mac Farland i se nsmneaz ca pentru antibiograma
difuzimetric o plac cu agar tripticaz soia.
Se plaseaz pe aria nsmnat cte un disc cu 10 g i respectiv 150
g O/129.
Orice zon de inhibiie aprut n fundul discurilor dup ncurbare
peste noapte semnific un test pozitiv. Eficiena testului a devenit relativ
odat cu apariia tulpinilor de V. cholerae rezistente la O/129. De exemplu,
peste 90% din tulpinile de V. cholerae O:1 izolate n India sunt rezistente la
ambele concentraii. Deci, rezistena la O/129 nu exclude n mod necesar
aceast specie.
Tolerana la 6-6,5% NaCl.
Acest test difereniaz corect genul Vibrio, tolerant, de Aeromonas i
Plesiomonas, care nu cresc la aceast concentraie salin.
Testul uviei de DNA.
Se suspensioneaz o colonie suspect de Vibrio, ntr-o pictur din
soluia 0,5% dezoxicolat de sodiu depus pe o lam de microscop.
Prin liza vibrionilor este eliberat DNA, care poate fi tras cu ansa ca o
uvi. Testul difereniaz rapid V. cholerae de Aeromonas spp., care sunt
oxidaz pozitive i pot forma colonii asemntoare pe mediile de izolare.
Alternativ, izolatele suspecte pot fi triate pe mediul TSI:
Vibrionii cu interes medical:
fermenteaz fr producere de gaz glucoza;
fermenteaz sau nu zaharoza;
uzual, speciile diareigene nu fermenteaz lactoza;
nu produc H2S.
Aeromonadele diareigene, uzual produc gaz din glucoz.
Orict de fidel ar fi, un singur test nu individualizeaz corect genul
Vibrio.
156
Oxidaz
O/129 zon de inhibiie
la discul cu 150 g
Creterea n bulion cu:
0% NaCl
1% NaCl
6% NaCl
8% NaCl
10% NaCl
12% NaCl
Indol
Decarboxilaze Moeller
Arginin
Lizin
Ornitin
ONPG
V. carchariae
V. cincinnatiensis
V. metschnikovii
V. damsella
V. hollisae
V. furnissi
V. fluvialis
V. alginolyticus
V. vulnificus
V. parahaemolyticus
V. mimicus
Testula
V. cholerae
100 100
99
95
20
90
25 100
100
100
53
1
0
0
99
100
100
49
0
0
0
98
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
100 99 99 99 99 99 100 100 100 100
99 65 100 96 100 83 95 78 100 100
80 0 94 71 78 0
0 44 62 0
2
0 69 4
0
0
0
4
0
0
1
0 17 0
0
0
0
0
0
0
98 97 85 13 11 97 0 20 8 100
98
0
0
0
0
99 100 100 99
99 99 95 55
94 90 5 75
157
19
0
99
50
0
31
93 100
0
0
0
0
40 35
40
0
0
0
0
90
95
50
0
0
60
35
0
50
0
0
57 100
0
0
86 0
V. damsella
V. metschnikovii
V. cincinnatiensis
V. carchariae
0
40
9
50
100
0
V. furnissi
0
0
0
0
5
0
V. fluvialis
50
V. alginolyticus
V. vulnificus
V. hollisae
V. parahaemolyticus
96
V. mimicus
95
V. cholerae
Voges-Proskauer
75 9
0
0 95 0
0
0
Acid din:
L-arabinoz
0
1 80 0
1 93 100 97
m-inozitol
0
0
0
0
0
0
0
0
Salicin
1
0
1 95 4
0
0
0
Lactoz
7 21 1 85 0
3
0
0
Zaharoz
100 0
1 15 99 100 100 0
Ureaz
0
1 15 1
0
0
0
0
a
Rezultate pozitive exprimate procentual.
Testula
100 0
100 0
100 0
0
0
100 50
0
0
Biotipia
Vibrio cholerae O:1 se difereniaz n biovarurile, clasic i El Tor.
Vibrio cholerae O:139 este o mutant O a biovarului El Tor.
Serotipia
Vibrio cholerae O:1 are, indiferent de biovar, trei serovaruri definite
prin factorii antigenici a, b i c: Ogawa (a, b), Inaba (a, c) i Hikojima (a, b,
c), primele dou curent izolate i cu rspndire epidemic, al treilea, foarte
rar i nerecunoscut de ctre unii specialiti.
Identificarea combinat biovar-serovar ofer un marker epidemiologic
orientativ.
Lizotipia
Sistemul de lizotipare a biovarului El Tor a fost mult ameliorat prin
completarea setului Basu-Mukerjee, cu cinci fagi litici (I-V), cu ali cinci
noi fagi i redefinirea diluiei test de la liza confluent la liza aproape
confluent.
n acest mod au fost definite 146 de lizovaruri care acoper tiparea a
circa 99% din tulpini.
Capacitatea discriminatorie a acestor lizovaruri este excelent, mai
puin lizovarului 115, cu o prevalen de 12%.
Metode ale biologiei moleculare
n prezent, mai greu accesibile, ofer markeri epidemiologici fideli
pentru biovarul El Tor.
158
Tehnica de lucru
Prepararea probei
a) probe de pete: se recolteaz esuturi de suprafa, intestine,
branhii;
b) crustacee cu cochilie: se recolteaz ntregul coninut interior; se
adun 10-12 crustacee, din care se recolteaz 50 g pentru o prob test.
c) crustacee fr cochilie: se prepar n ntregime sau se recolteaz
poriunea central inclusiv branhii i intestine.
Ziua I:
Se amestec 450 ml de bulion cu NaCl 3% i polimixin B, ntr-un
blender steril pentru 1 minut, cu 8.000 rpm. Aceasta reprezint diluia 1:10.
n continuare se fac diluii seriate (1:100, 1:1.000, 1:10.000 etc.). Din fiecare
diluie seriat se trec cte 10 ml n cte 3 tuburi per diluie cu bulion GST
(glucose salt Teepol).
mbogirea: Se incubeaz bulioanele respective la 35C, 18-24 de
ore. Dac diluarea i incubarea nu se pot realiza n aceeai zi, probele se
pstreaz pe ziua urmtoare la o temperatur cuprins ntre 0 i 5C. n
cazul produselor congelate se recomand s se efectueze o a doua izolare
dup 18 ore de incubare.
Ziua a II-a:
Izolarea i identificarea: dup incubare se nsmneaz din fiecare tub
o ans de cultur pe suprafaa mediului de izolare TCBS (agar cu sucrozsare-bil-citrat-tiosulfat) (M65) n plci Petri (cte 3 per diluie) astfel nct
s se obin colonii izolate. Se incubeaz plcile la 35C, timp de 18-24 de
ore.
Ziua a III-a:
Testul diferenial I: Se recolteaz cu acul de nsmnare dou sau
mai multe colonii tipice (netede, verzi, zaharoz negative, cu diametrul de
2-3 milimetri), de pe suprafaa plcilor cu agar TCBS i se transfer pe
urmtoarele medii:
a) Agar TSI salin: V. parahaemolyticus i V. vulnificus realizeaz o
pant alcalin (roie = lactoz i zaharoz negative); baza mediului este
acid (galben = glucoz pozitiv), fr producere de gaze i nu prezint
nnegrire (hidrogen sulfurat negativ). Aceasta este o reacie tipic shigeloid
(Shigella-like). V. alginolyticus, V. fluvialis i V. metschnikovii dau o pant
acid i o baz fr gaz.
b) Mediul TSA (3% NaCl) i TSB (3% NaCl): Se nsmneaz mediile
TSA i TSB cu bacteria de cercetat i se nsmneaz 18-24 de ore la 35C.
Aceste culturi se folosesc ca surse de inoculare pentru alte teste, pentru
159
V. anguillarum
V. vulnificus
V. fluvialis
V. metschnikovii
Aeromonas
hydrophila
Plesiomonas
shigelloides
V. alginolyticus
Test
V.
parahaemolyticus
Tabelul 4.6.
Teste de difereniere a lui V. parahaemolyticus de bacteriile nrudite
+
+
+
nd
var
var
+
-
160
V. alginolyticus
V. anguillarum
V. vulnificus
V. fluvialis
V. metschnikovii
Aeromonas
hydrophila
Plesiomonas
shigelloides
V.
parahaemolyticus
Test
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
var
+
+
+
+
var
var
+
+
var
var
+
var
+
var
-
+
var
+
+
+
+
-
+
var
var
+
+
var
+
+
+
var
var
var
var
+
var
var
+
+
+
var
var
-
5 zile. Reacia acid se traduce prin virarea culorii bulionului din purpuriu
n galben. Rezultatele acestor teste de fermentaie sunt incluse n tabelul de
mai sus.
h) Fenomenul Kanagawa (agar Wagatsuma) (M71): Reacia
Kanagawa reprezint un test pentru determinarea prezenei hemolizinei
termostabile directe specifice pe agarul Wagatsuma. S-a constatat c
reacia pozitiv se coreleaz strns cu patogenitatea rezultatelor de V.
parahaemolyticus. Izolatele care produc boala la om, sunt de obicei Kanagawa
pozitive, n timp ce izolatele recuperate din hrana marin sunt Kanagawa
negative, aproape ntotdeauna. Pentru efectuarea testului Kanagawa se
introduce o pictur dintr-o cultur de 18 ore n TSB cu NaCl 3% cu o
scobitoare steril pe o plac cu agar snge Wagatsuma, bine uscat. Se pot
face mai multe nepturi de tip circular pe o singur plac. Se nsmneaz
ntotdeauna culturi pozitive i negative pe fiecare plac. Se incubeaz la
35C i se urmresc rezultatele nregistrndu-se la 24 de ore.
Testul pozitiv const n beta-hemoliz, adic n clarificarea mediului
n jurul coloniei datorit unui proces de hemodigestie. Zona are o singur
margine, clar delimitat, fr inele concentrice multiple. Hemoliza este pe
deplin clar, fr s aib loc nverzirea mediului. Zonele de hemoliz se
observ de la marginea coloniei pn la marginea extern a zonei. Izolatele
care produc zone clare de hemoliz, mai mici de 3 mm pot fi slab patogene
prin testul ansei ileale de la iepure. Este important de reinut c n acest test
nu e valabil nici o observaie dup 24 de ore.
i) Conservarea culturilor bacteriene: Se inoculeaz un mediu de
conservare semisolid pe termen lung prin nepare n profunzime. Se
las capacul lax, pn la apariia unei creteri vizibile n cursul incubrii
la 35C, timp de 24 de ore. Se nchide etan capacul pentru a mpiedica
deshidratarea i se pstreaz la temperatura camerei. Pentru conservarea
lui V. parahaemolyticus i a lui V. vulnificus pentru cteva luni la -70C
se plaseaz 1 ml dintr-o cultur de 6-12 ore de TSB NaCl 3% i 0,09 ml
de dimetil-sulfoxid (DMSO) n criotuburi sterile; se congeleaz imediat la
-70C.
f) Confirmarea serologic a lui V. parahaemolyticus: Antigenele K,
care cuprind diferite grupe somatice sunt prezente n tabelul de mai jos:
Tabelul 4.7.
O grup
1
2
3
4
Tipul K
1, 25, 26, 32, 38, 41, 56, 58, 64
3, 28
4, 5, 6, 7, 29, 30, 31, 33, 37, 43, 45, 48, 54, 57, 58, 59
4, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 34, 42, 49, 53, 55, 63
162
O grup
5
6
7
8
9
10
11
TOTAL
Tipul K
15, 17, 30, 47, 60, 61
18, 46
19
20, 21, 22, 39, 62
23, 44
19, 24, 52
36, 40, 50, 51
60 de tipuri K/63 de serotipuri
Tabelul 4.9
Indol
H2S
+
+
+
-
Rezultatele antibiogramei
Analiznd comparativ rezultatele obinute n urma efecturii
antibiogramelor, constatm c, speciile de Vibrio non-holerice sunt sensibile
la aciunea tetraciclinei, a penicilinei, ampicilinei, cefalosporinelor,
cloramfenicolului, aminoglicozidelor i fluorochinolonelor. Vibrio
parahaemolyticus i Vibrio alginolyticus sunt rezistente la aciunea
penicilinei i a ampicilinei.
A fost constatat antibiorezistena unor tulpini la ampicilin (V.
alginolyticus i V. parahaemolyticus), la gentamicin (V. metschnikovii), la
164
1. diluarea
probei alimentare
50 g aliment; se amestec la 8.000
rpm pt 1 min.
diluii seriate
n 90 ml
tampon fosfat
2. Efectuarea
diluiilor seriate
3. mbogirea
Incubarea la 35C,
18-24 de ore
1 g de inocul
n fiecare tub
GSTB
0,1 g de inocul
n fiecare tub
GSTB
4. Obinerea
coloniilor izolate
Agar TCBS
5. Teste biochimice i serologice de confirmare
167
0,01 g de inocul
n fiecare tub
GSTB
Bibliografie
1. Adams MR & Moss MO., 2000, Bacterial Agents of Foodborne Illness., Food
Microbiology 2nd Edition, The Royal Society of Chemistry; P.184-271.
2. Chai TJ & Pace JL., 2001. Vibrio parahaemolyticus, Hui YH, Pierson MD &
Gorham JR, editors. Foodborne Disease Handbook Volume 1: Bacterial Pathogens,
2nd Edition. New York: Marcel Dekker, Inc.; P.407-437.
3. Dalsgaard et al., 2001. Vibrio vulnificus., Foodborne Disease Handbook Volume
1: Bacterial Pathogens, 2nd Edition. New York: Marcel Dekker, Inc.; P.439-470
4. FAO/WHO. Joint FAO/WHO Activities on Risk Assessment of Microbiological
Hazards in Foods. Preliminary Document. Hazard Identification, Exposure
Assessment and Hazard Characterization of Vibrio spp. in Seafood. Disponibil la:
ftp://ftp.fao.org/es/esn/food/vibrio.pdf
5. Gram L & Huss HH. Fresh and Processed Fish and Shellfish, 2000, The
Microbiological Safety and Quality of Food. Volume I. Maryland: Aspen
Publishers, Inc; P.472-506.
6. Heymann DL., 2004, Cholerae and Other Vibrioses., Control of Communicable
Diseases Manual, 18th Edition. Washington DC: American Public Health
Association;. P.103-117 United States Food and Drug Administration Centre for
Food Safety and Applied Nutrition. Bad Bug Book: Vibrio cholerae Serogroup
O1. Disponibil la: http://www.cfsan.fda.gov/~mow/chap7.html
7. International Commission on Microbiological Specifications for Foods., 1996,
Vibrio cholerae, Microorganisms in Foods Characteristics of Microbial Pathogens.
London: Blackie Academic & Professional; P.414-425.
8. International Commission on Microbiological Specifications for Foods, 1996,
Vibrio parahaemolyticus, Microorganisms in Foods 5. Characteristics of Microbial
Pathogens, Blackie Academic & Professional; P. 426-435.
9. International Commission on Microbiological Specifications for Foods, 1996.
Vibrio vulnificus, Microorganisms in Foods 5. Characteristics of Microbial
Pathogens., Blackie Academic & Professional P.436-439.
10. International Commission on Microbiological Specifications for Foods., 1998.
Fish and Fish Products., Microorganisms in Foods 6. Microbial Ecology of Food
Commodities, Blackie Academic & Professional; P. 130-189.
11. Kaysner CA., Vibrio species, 2000. The Microbiological Safety and Quality of
Food. Maryland: Aspen Publishers, Inc.; P.1336-1362.
170
26. United States Food and Drug Administration Centre for Food Safety and
Applied
27. Xu H et al., 1998, Occurrence and Distribution of Vibrios in Fishes and Shellfishes
in Coastal Waters of Hong Kong, Acta Oceanologica Sinica, 17: 545-553.
28. Yam WC et al., 1999. Abundance of Clinical Enteric Bacterial Pathogens in
Coastal Waters and Shellfish. Water Research; 34: 51-56.
172
CAPITOLUL 5
Implicaiile campylobacteriilor n toxiinfeciile alimentare
5.1. Caractere generale
Genul Campylobacter conine 25 de specii, iar dintre acestea cea mai
important specie izolat din alimente este Cam. jejuni subsp. jejuni. Spre
deosebire de Cam. jejuni subsp. doylei este rezistent la cefalotin, crete
la 42C i reduce nitraii n nitrii. Diferenierea de Cam. coli const n
capacitatea de a hidroliza hipuratul. Genul Campylobacter este strns
nrudit cu genul Arcobacter. Campilobacteriile au fost clasificate n trecut
ca specii Vibrio.
Din punct de vedere morfologic Cam. jejuni este un bacil subire
n form de virgul sau litera S. Se pot ntlni i forme mai lungi,
multispiralate, ct i scurte, cocoide. Este monoflagelat, iar flagelul poate
fi dispus la unul sau la ambii poli ai celulei bacteriene. Produce oxidaz
i catalaz i nu se dezvolt la 25C, n prezen de NaCl 3,5%. Este
microaerofil, necesitnd pentru cretere cantiti mici de oxigen (3-6%).
Temperaturile minime, optime i maxime de cretere pe mediile solide sunt
de 30C, 40C i respectiv 45C. Se dezvolt bine la un pH ntre 5,5-8,0 i
n prezen de NaCl 1,75%. Creterea este inhibat de oxigen 21%. Dioxidul
de carbon 10% este necesar pentru creterea bacterian. Metabolismul este
respirator.
Datorit dimensiunilor lor mici, campilobacteriile pot fi separate de
alte bacterii Gram negative folosind filtre de 0,65 microni.
Campilobacteriile cresc mai lent pe mediile de cultur dect
enterobacteriaceele.
De obicei, nu sunt asociate cu mediul nconjurtor ci cu animalele
homeoterme. S-a dovedit c majoritatea animalelor de carne conin aceste
microorganisme n fecale, n special psrile de cas.
Cel puin cteva tulpini de Cam. jejuni produc o enterotoxin
termolabil asemntoare cu enterotoxinele produse de Vibrio cholerae i
Escherichia coli. Producia maxim de toxin ntr-un mediu special are loc
la 42C, n 24 de ore i sporete prin adugarea de polimixin.
Simptomele toxiinfeciilor provocate de aceste microorganisme includ
173
5.2. Taxonomie
Genul Campylobacter face parte din familia Campylobacteriaceae
(Vandamme i De Ley, 1991) i cuprinde urmtoarele specii: Cam. fetus cu
subspeciile: fetus i veneralis; Cam. jejuni cu subspeciile: jejuni i chloylei;
Cam. hyointestinalis cu subspeciile hyointestinalis i lawsonii; Cam.
sputorum cu subspeciile: sputorum i bubulus; Cam. mucosalis; Cam. coli;
Cam. helveticus; Cam. upsaliensis.
Tot din aceast familie, mai fac parte:
55Genul Lawsonia, cu specia Lw. intracellularis.
55Genul Helicobacter, cu specia tip Hlb. pylori.
55Genul Arcobacter, cu specia tip Aob. nitrofragilis.
Cam. jejuni mai produce gastroenterit i diaree mucoid-sangvinolent la taurine, ovine i om.
5.4. Epidemiologie
n 2006, au fost raportate 180.009 cazuri (179.510 confirmate) de ctre
24 state membre ale UE, Islanda i Norvegia (Grecia, Portugalia, Romnia
i Liechtenstein nu au raportat). Numrul cazurilor de campylobacterioz
raportate n 23 de state cu date disponibile, att pentru 2005, ct i pentru
2006 a fost n mic msur diferit, constatndu-se doar o uoar scdere
(12%) a cazuisticii din 2006 fa de cea din 2005. Rata total a notificrilor
a fost de 39,5 la 100.000 locuitori, cu cea mai mare rat a notificrilor n
Republica Ceh (220,2 la 100.000). Numai Lituania a raportat 0 cazuri.
Tabelul 5.1.
Numrul i rata notificrilor camylobacteriozelor raportate n UE i EEA/EFTA n
2006
ara
Tipul de raportare
Austria
Belgia
Bulgaria
Cipru
Republica Ceh
Danemarca
Estonia
Finlanda
Frana
Germania
Grecia
Ungaria
Irlanda
Italia
Latvia
Lituania
Luxembourg
Malta
C
C
A
C
C
C
C
C
C
C
U
C
C
C
C
A
C
C
Total cazuri
Cazuri confirmate
5020
5771
75
2
22713
3239
124
3439
2675
52035
6829
1815
801
0
624
285
54
5020
5771
75
2
22571
3239
124
3439
2675
52035
6807
1812
801
0
624
285
54
60,7
54,9
1,0
0,26
220,2
59,7
9,2
65,4
4,2
63,1
67,6
43,1
1,4
0,0
18,3
60,8
13,3
176
ara
Tipul de raportare
Total cazuri
Cazuri confirmate
Cazuri/100.000
Olanda
C
3401
3186
19,5
Polonia
C
157
156
0,4
Portugalia
U
Romnia
U
Slovacia
C
2797
2728
50,6
Slovenia
C
944
897
47,1
Spania
C
5883
5883
13,4
Suedia
C
6078
6078
67,2
Marea Britanie
C
52543
52543
87,0
Total UE
177304
176805
39,3
Islanda
C
117
117
39,0
Liechtenstein
N
Norvegia
C
2588
2588
55,8
Total
180009
179510
39,5
Sursa: Raportri naionale. A = Raportri de date agregate; C = Raportri bazate
pe cazuri; - = fr raportare; U = nespecificat
Figura 5.1.
Distribuia pe grupe de vrst a cazurilor de campylobacterioz n 2006 (177.469
cazuri)(Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Cazuri
Figura 5.2.
Distribuia sezonier a cazurilor de campylobacterioz n 2006 (178.838 cazuri)
(Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Ian
Feb
Mar
Apr
Mai
Iun
178
Iul
Aug
Sep
Oct
Nov
Dec
185
186
+
+
+
NaCl 3,5 %
H2S, TSI
Catalaz
Oxidaz
Mac Conkey
Mobilitate
Creterea n 1% glicin
Utilizarea glucozei
Hidroliza hipuratului
Rezistena la cefalotin
Cam.
jejuni
25C
35-37C
42C
Reducerea nitratului:
Creterea la:
Caractere biochimice
+
+
+
Cam.
coli
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Cam. upsaliensis
Skirow
Agar Columbia
snge de cal
Butzler
Agar Columbia
snge defibrinat de
cal
BlaserWang
Agar Columbia
snge de berbec ori
snge de cal
Campy-ic
Campylosel
Agar Columbia
(biosnge de berbec 5%
Mrieux)
Preston
Tabelul 5.3.
Aspectul coloniilor
Vancomicin
Trimetoprim
Polimixin
- 1-2 mm
- semitransparente
- rotunde, bombate
- suprafa umed
- tendin de a se ntinde pe striuri
Novobiocin
- 1-2 mm
- semitransparente, gri-metalic,
strlu- citoare
- rotunde
- nehemolitice
Vancomicin
Trimetoprim
Cephalothin
Amfotericin
B
Polimixin B
Vancomicin
Rifampicin
Cefalotin
Trimetoprim
Colistin
Cefoprazon
Colistin
Vancomicin
Amfotericin
B
Polimixin B
Rifampicin
Trimetoprim
Cicloheximid
Hemin
Piruvat de Na
Cefoperazon
Vancomicin
Cicloheximid
Karmali
Agar Columbia
crbune activat
CCDA
- 1-2 mm
- semitransparente, gri, umede
- rotunde, de mrimi diferite
- nehemolitice
- 1-2 mm
- rotunde, bombate
- de culoare gri-castaniu
- cu tendina de a se ntinde pe
striu
- 1-2 mm
- translucide
- plate, cu margini neregulate
- cu tendin de ntindere pe striu
- nehemolitice
- 1 mm
- semitransparente
- preponderent rotunde
- 3-5 mm
- semitransparente
- mucoase
- de form neregulat cu tendin
de a se ntinde pe striu
- 2-3 mm
- semitransparente
- polimorfe, rotunde
- deseori mucoide
Campylobacter jejuni. Frotiu din cultur de pe mediu solid. Bacili n form de virgul
sau litera S, dar i forme mai lungi, ct i scurte cocoide
Campylobacter jejuni
Campylobacter lari - rezistent; Campylobacter jejuni subsp. jejuni - sensibil. Scopul acestui test este acela de a determina sensibilitatea unui microorganism la acid nalidixic. Este
de obicei folosit pentru identificarea lui Cam. lari. Discul cu acid nalidixic se plaseaz
n centrul plcii Petri i se incubeaz, dup nsmnare n condiii microaerofile. Dac
apare o zon de inhibiie mai mare de 5-7 mm (msurat de la marginea coloniilor) cultura respectiv este considerat pozitiv.
Bibliografie selectiv
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Embley, T. M. 1991. The linear PCR reaction: a simple and robust method for
sequencing amplified rRNA genes. Lett. Appl. Microbiol. 13:171-174.
8.
Enright, M., and B. G. Spratt. 1998. A multilocus sequence typing scheme for
Streptococcus pneumoniae: identification of clones associated with serious
invasive disease. Microbiology 144:3049-3060.
9.
10. Harrington, C. S., F. M. Thomson Carter, and P. E. Carter. 1997. Evidence for
recombination in the flagellin locus of Campylobacter jejuni: implications for the
flagellin gene typing scheme. J. Clin. Microbiol. 35:2386-2392.
11. Heuvelink, A. E., J. J. H. C. Tilburg, N. Voogt, W. van Pelt, W. J. van Leeuwen,
J. M. J. Sturm, and A. W. van de Giesen. 1999. Surveilance of zoonotic bacteria
among farm animals (Dutch). RIVM-report 285859-009. RIVM, Bilthoven, The
Netherlands.
12. Holmes, E. C., R. Urwin, and M. C. J. Maiden. 1999. The influence of
recombination on the population structure and evolution of the human pathogen
190
34:277-281.
27. Parkhill, J., B. W. Wren, K. Mungall, J. M. Ketley, C. Churcher, D. Basham, T.
Chillingworth, R. M. Davies, T. Feltwell, S. Holroyd, K. Jagels, A. V. Karlyshev,
S. Moule, M. J. Pallen, C. W. Penn, M. A. Quail, M. A. Rajandream, K. M.
Rutherford, A. H. van Vliet, S. Whitehead, and B. G. Barrell. 2000. The genome
sequence of the food-borne pathogen Campylobacter jejuni reveals hypervariable
sequences. Nature 403:665-668.
28. Peabody, R., M. J. Ryan, and P. G. Wall. 1997. Outbreaks of Campylobacter
infection: rare events for a common pathogen. Communicable Dis. Rep. 7:R33R37.
29. Penner, J. L., J. N. Hennessy, and R. V. Congi. 1983. Serotyping of Campylobacter
jejuni and Campylobacter coli on the basis of thermostable antigens. Eur. J. Clin.
Microbiol. 2:378-383.
30. Selander, R. K., D. A. Caugant, H. Ochman, J. M. Musser, M. N. Gilmour, and
T. S. Whittam. 1986. Methods of multilocus enzyme electrophoresis for bacterial
population genetics and systematics. Appl. Environ. Microbiol. 51:837-884.
31. Skirrow, M. B. 1994. Diseases due to Campylobacter, Helicobacter and related
bacteria. J. Comp. Pathol. 111:113-149.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10. Staden, R. 1996. The Staden sequence analysis package. Mol. Biotechnol. 5:233241.
11. uerbaum, S., J. Maynard Smith, K. Bapumia, G. Morelli, N. H. Smith, E.
Kunstmann, I. Dyrek, and M. Achtman. 1998. Free recombination within
Helicobacter pylori. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:12619-12624.
32. Walker, R. I., M. B. Caldwee, E. Lee, P. Guerry, T. J. Trust, and G. M. RuizPalacios. 1986. Pathophysiology of Campylobacter enteritis. Microbiol. Rev.
50:81-94.
33. Wareing, D. 1999. The significance of strain diversity in the epidemiology of
Campylobacter jejuni gastrointestinal infections. Ph.D. thesis. University of
Central Lancashire, Preston, United Kingdom.
34. Wassenaar, T. M., and D. G. Newell. 2000. Genotyping of Campylobacter species.
Appl. Environ. Microbiol. 66:1-9.
193
CAPITOLUL 6
Toxiinfecii alimentare de origine
bacterian cu inciden redus
6.1. Genul Aeromonas
6.1.1. Taxonomie
Interesul tiinific fa de bacteriile din genul Aeromonas a crescut
foarte mult ncepnd cu anul 1980, cnd s-a demonstrat patogenitatea lor
pentru om i animale, i mai ales asocierea unora dintre specii cu bolile
gastrointestinale la oameni, cu alur de toxiinfecii alimentare.
S-au izolat, de la muli copii cu diaree, specii de Aeromonas
productoare de enterotoxine.
Din momentul demonstrrii semnificaiei lor patogene s-au ntreprins
numeroase cercetri referitoare la taxonomia complicat a genului i la
factorii de virulen implicai n infeciile umane i animale.
Dei continu s existe ideea c toxiinfecia alimentar ar fi provocat
numai de A. hydrophila specia tip a genului n realitate aceast mbolnvire
poate fi cauzat i de alte specii, n primul rnd de A. sobria.
Genul Aeromonas cuprinde 14 specii. Speciile clasice ale grupului
psichrofil (A. salmonicida, cu subspeciile sale) i ale grupului mezofil (A.
hydrophila, A. caviae, A. sobria) sunt de fapt fenospecii, n care analizele
prin hibridare DNA-RNA au delimitat 12 grupe de hibridare (HG) care, dat
fiind homologia de 70-100% n cadrul unei grupe de hibridare, au cptat
rang de genospecii:
A. hydrophila = HG1;
A. salmonicida = HG3;
A. caviae = HG4;
A. media = HG5;
A. eucremephila = HG6;
A. sobria = HG7;
A. veronii biovar sobria = HG8;
A. jandaei = HG9;
194
Tabel 6.1.
Criteriile de difereniere ale subspeciilor din specia A. salmonicida
(dup Quinn i col., 1994)
A. salmonicida
Pigment Gaz din
Catalaz
Importana patogen
(subspeciile)
brun
glucoz
+
+
+
Furunculoz (tulpini tinere)
Subsp. salmonicida
Eritrodermatit la crap
Subsp. nova
Se izoleaz de la salmonide i
Subsp. achromogenes
+
sunt considerate tulpini atipice
+
+
Subsp. masoucida
Oxidaza
Creterea pe agar cu:
0% NaCl
6% NaCl
Aeromonas
Plesiomonas
+b
+
-
+
-
Nonhalofil
Halofil
+
+
+
Glucoz:
+
+
+
+
Fermentarea
-c
v
Producere de gaz
d
+
+
Testul uviei DNA
Rezistena la:
-c
v
+
O/129 (10 g)
-e
v
+
O/129 (150 g)
v
+
Ampicilin (10 g)
a
Simboluri: + = reacie pozitiv (pentru testele de rezisten: rezistent); - = reacie
negativ (pentru testele de rezisten: sensibil); v = diferit la diferite specii.
b
Cu excepia V. metschnikovii.
c
Cu excepia V. furnissi i rare tulpini de V. damsella.
d
Cu excepia unor tulpini de V. parahaemolyticus.
e
Cu excepia A. trota.
Caracterul
LDC
ODC
ADH
Indol
VP
Hemoliz
Esculin
Glucoz**
Arabinoz**
Celobioz*
Manitol*
Zaharoz*
Salicin
12
+
V
V
+
V
V
+
V
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
v
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Legend:
* Are loc acidifierea.
** Produce gaz din glucoz.
1 = A. allosaccharophila;
2 = A. caviae;
3 = A. enteropelogenes;
4 = A. eucrenophila;
5 = A. hydrophila;
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
6 =
7 =
8 =
9 =
10 =
11 =
12 =
198
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
v
+
+
-
+
+
+
v
+
+
+
-
A. ichthiosmia;
A. jandae;
A. schubertii;
A. sobria;
A. trota;
A. veronii (sobria);
A. veronii (veronii)
+
+
+
+
+
+
v
+
+
-
caracterul mucoid.
Proprieti biochimice. Fermenteaz glucoza cu producie de
gaz, produce ureaz, lizindecarboxilaz, utilizeaz citraii ca unic surs
de carbon, reacia Voges-Proskauer este pozitiv. Nu produce indol,
ornitindecarboxilaz, hidrogen sulfurat, gelatinoliz.
Proprieti antigenice. Klebsielele conin antigene somatice O
(lipopoliglucide, care dau frecvent reacii ncruciate cu polizaharizii O
Escherichia) i capsulare K (poliglucide acide capsulare ce dau reacii
ncruciate cu polizaharizii capsulari de S. pneumoniae, Escherichia, S.
paratyphi B).
Deoarece, polizaharizii capsulari sunt termostabili, antigenele O
situate mai profund sunt greu de pus n eviden. n practic, se face numai
diferenierea serotipurilor K.
Tipizarea serologic se practic dup schema Kauffman i Orscov.
ncadrarea ntr-un serovar K se poate realiza prin aglutinare, coagulare,
latex aglutinare. Prin oricare din aceste metode ncadrarea este laborioas i
pretenioas, datorit numrului mare de serovaruri i a nrudirilor antigenice
frecvente dintre acestea.
Ecologie. Principalul habitat al klebsielelor este tubul digestiv. n urma
contaminrii mediilor naturale cu fecale, K. pneumoniae se poate adapta i
multiplica ntr-o mare diversitate de biotipuri, cum ar fi suprafaa arborilor,
plante, ceea ce implic acestora un caracter mucos-vscos.
Patogenitate. K. pneumoniae este o bacterie virulent (prin capsula
polizaharidic antifagocitar, prezena pililor cu aderen specific,
bacteriocinele factori de autoselectare), posed o endotoxin, condiionat
patogen. Afecteaz, n special organismele cu aprare antiinfecioas
deficitar. Odat ajuns n esuturi se nmulete rapid, este piogen, uneori
bacteriemic.
Klebsielele produc complicaii supurative bronhopneumonice postvirale (mai ales n viroze tratate cu antibiotice i chimioterapice), n
tuberculoz; complic leziunile n pasteureloza iepurilor; produce infecii
secundare n tusea de canis, mai ales dup intervenia agenilor virali,
izolndu-se frecvent de la cinii bolnavi; mamite la vaci; infecii pulmonare primare sau asociate cu ali germeni la viei i cobai); metrite la iap,
etc.
La om, subspecia ozaenae determin ozena, care se manifest printr-o
secreie nazal, purulent i fetid, cu leziuni granulomatoase i evoluie
cronic, iar subspecia rhinoscleromatis (Frisch, 1882) produce rinoscleroma,
care se manifest printr-o rinit cronic cu leziuni granulomatoase.
Aceast bacterie a fost izolat dintr-un episod de toxiinfecie alimentar
207
Tabelul 6.4
Diferenierea grupelor de streptococi n funcie de unele caractere de baz
(dup Rpuntean Gh., Boldizsar E., 2001)
Streptococi de
grup
Hemoliz
Sensibilitatea la
bacitracin
CAMP
6,5% NaCl
Bil
esculin
nehemolitic
Viridans
Pneumococi
215
217
Enterobacter aerogenes: mediu Eosin-Methylene Blue. Colonii mari mucoide, brune cu central ntunecat, ce indic fermentarea lactozei i producia
de acid (Naowarat Cheeptham, Thompson Rivers University, Canada)
Brucella spp.: Cocobacili mici gram-negativi (0,5-0,7 x x0,61,5 ) (are gram-negative in their staining morphology (CDC,
Public Health Image Library)
219
221
222
Bibliografie selectiv
1.
Amagliani, G.; Omiccioli, E.; Andreoni, F.; Boiani, R.; Bianconi, I.; Zaccone, R.;
Mancuso, M.; Magnani, M. Development of a multiplex PCR assay for Photobacterium
damselae subsp. piscicida identification in fish samples.; Blackwell Publishing, Oxford,
UK, Journal of Fish Diseases, 2009, 32, 8, pp 645-653, 28 ref.
2.
Benno, Y.; Mitsuoka, T. Incidence and isolation of three new Bacteroides spp.
from abscesses in pigs.; Japanese Journal of Veterinary Science, 1984, 46, 5, pp 749-752,
9 ref.
3.
Bergagna S, Zoppi S, Ferroglio E, et al. Epidemiologic survey for Brucella suis
biovar 2 in a wild boar (Sus scrofa) population in northwest Italy. [Journal Article, Research Support, Non-U.S. Govt] J Wildl Dis 2009 Oct; 45(4):1178-81.
4.
Chacko, K. L.; Vineeth Rajagopal; Jaibi, K.; Latha, C.; Nanu, E. Fish borne bacterial zoonoses. ; Intas Pharmaceuticals Ltd, Ahmedabad, India, Intas Polivet, 2006, 7, 2, pp
207-211, 5 ref.
5. Falkenhorst G, Bagdonaite J, Lisby M, et al. Outbreak of group A streptococcal
throat infection: dont forget to ask about food. [JOURNAL ARTICLE] Epidemiol Infect
2007 Nov 16.:1-7.
6.
Gonzlez-Rey, C.; Svenson, S. B.; Bravo, L.; Siitonen, A.; Pasquale, V.; Dumontet, S.; Ciznar, I.; Krovacek, K. Serotypes and anti-microbial susceptibility of Plesiomonas
shigelloides isolates from humans, animals and aquatic environments in different countries. ; Pergamon Press, Oxford, UK, Comparative Immunology, Microbiology & Infectious Diseases, 2004, 27, 2, pp 129-139, 40 ref.
7. Hassan, N. B. A.; Abdalla, M. O. M.; Nour, A. A. A. M. Microbiological quality
of heat-treated milk during storage.; ANSInet, Asian Network for Scientific Information,
Faisalabad, Pakistan, Pakistan Journal of Nutrition, 2009, 8, 12, pp 1845-1848, 24 ref.
8.
Jaradat, Z. W.; Ababneh, Q. O.; Saadoun, I. M.; Samara, N. A.; Rashdan, A. M.
Isolation of Cronobacter spp. (formerly Enterobacter sakazakii) from infant food, herbs
and environmental samples and the subsequent identification and confirmation of the isolates using biochemical, chromogenic assays, PCR and 16S rRNA sequencing. ; BioMed
Central Ltd, London, UK, BMC Microbiology, 2009, 9, 225, pp (27 October 2009), 51
ref.
9.
Jin ShengQuan; Yin BinCheng; Ye BangCe Multiplexed bead-based mesofluidic
system for detection of food-borne pathogenic bacteria.; American Society for Microbiology (ASM), Washington, USA, Applied and Environmental Microbiology, 2009, 75, 21,
pp 6647-6654, 44 ref.
10. Linhart Y, Amitai Z, Lewis M, et al. A food-borne outbreak of streptococcal pharyngitis. [Journal Article] Isr Med Assoc J 2008 Aug-Sep; 10(8-9):617-20.
11. Manzat, R. M.; Vintila, C.; Isolation and cultivation of Fusiformis (Bacteroides)
nodosus. Lucrari Stiintifice, Institutul Agronomic Timisoara, Seria Medicina Veterinara,
1980, 17, pp 159-162, 12 ref.
12. Munn, C. B. Microbial diseases of fish. ; Garland Science, Taylor and Francis
Group, LLC, New York, USA, Marine microbiology: ecology and applications, 2004, pp
223-242, 39 ref.
224
13. Musgrove, M. T.; Jones, D. R.; Shaw, J. D.; Sheppard, M.; Harrison, M. A. Enterobacteriaceae and related organisms isolated from nest run cart shelves in commercial shell
egg processing facilities. ; Poultry Science Association, Savoy, USA, Poultry Science,
2009, 88, 10, pp 2113-2117, 25 ref.
14.
Nagano, I.; Inoue, S.; Kawai, K. Repeatable immersion infection with Photobacterium damselae subsp. piscicida reproducing clinical signs and moderate mortality.; Oshima, S.; Springer-Japan, Tokyo, Japan, Fisheries Science, 2009, 75, 3, pp 707-714
15.
Nakazawa H, Hayashidani H, Higashi J, et al. Occurrence of Erysipelothrix spp.
in chicken meat parts from a processing plant. [Journal Article] J Food Prot 1998 Sep;
61(9):1207-9.
16.
Neta AV, Mol JP, Xavier MN, et al. Pathogenesis of bovine brucellosis. [JOURNAL ARTICLE] Vet J 2009 Sep 2.
17.
Newaj-Fyzul, A.; Mutani, A.; Ramsubhag, A.; Adesiyun, A. Prevalence of bacterial pathogens and their anti-microbial resistance in tilapia and their pond water in Trinidad.; Blackwell Publishing, Berlin, Germany, Zoonoses and Public Health, 2008, 55, 4, pp
206-213, 44 ref.
18.
Pereira, C. S.; Amorim, S. D.; Santos, A. F. das M.; Siciliano, S.; Moreno, I. B.;
Ott, P. H.; Rodrigues, D. dos P. Plesiomonas shigelloides and Aeromonadaceae family
pathogens isolated from marine mammals of southern and southeastern Brazilian coast.;
Sociedade Brasileira de Microbiologia, So Paulo, Brazil, Brazilian Journal of Microbiology, 2008, 39, 4, pp 749-755, 30 ref.
19.
Roop RM, Gaines JM, Anderson ES, et al. Survival of the fittest: how Brucella
strains adapt to their intracellular niche in the host. [JOURNAL ARTICLE] Med Microbiol
Immunol 2009 Sep 22.
20.
Salerno, A.; Deltoile, A.; Lefevre, M.; Ciznar, I.; Krovacek, K.; Grimont, P.;
Brisse, S. Recombining population structure of Plesiomonas shigelloides (Enterobactenaceae) revealed by multilocus sequence typing. ; American Society for Microbiology
(ASM), Washington, USA, Journal of Bacteriology, 2007, 189, 21, pp 7808-7818, 57 ref.
21.
Scheff, G. J. Comparison of Fusobacterium sp. versus Bacterioides sp. in the
monoxenic cultivation of E. histolytica.; Zentralblatt fur Bakteriologie, Parasitenkunde
und Infektionskrankheiten, Abteilung 1, Originale A, 1978, 242, 3, pp 419-421
22.
Suzuki J, Sakaguchi K [Properties of metabolic substance produced by group A
Streptococcus from two food-borne epidemic] [English Abstract, Journal Article] Kansenshogaku Zasshi 2009 Jul; 83(4):380-5.
23.
Takayama Y, Hikawa S, Okada J, et al. A foodborne outbreak of a group A streptococcal infection in a Japanese university hospital. [JOURNAL ARTICLE] Eur J Clin
Microbiol Infect Dis 2008 Aug 21.
24.
Yez, M. A.; Cataln, V.; Apriz, D.; Figueras, M. J.; Martnez-Murcia, A. J.
Phylogenetic analysis of members of the genus Aeromonas based on gyrB gene sequences.; Society for General Microbiology, Reading, UK, International Journal of Systematic
and Evolutionary Microbiology, 2003, 53, 3, pp 875-883, many ref.
25.
Ye YingWang; Wu QingPing; Yao Lin; Dong XiaoHui; Wu Kui; Zhang JuMei;
Mary Ann Liebert A comparison of polymerase chain reaction and international organization for standardization methods for determination of Enterobacter sakazakii contamination of infant formulas from Chinese mainland markets. Inc., New Rochelle, USA, Foodborne Pathogens and Disease, 2009, 6, 10, pp 1229-1234, 31 ref.
225
Capitolul 7
Principalele micotoxine implicate n
producerea toxiinfeciilor alimentare
Caractere generale
Micotoxinele sunt metabolii toxici produi de micei n substraturile
alimentare i furaje. Termenul de micotoxin deriv de la grecescul
mykes, mucos = ciuperc (fung) i latinescul toxicum = otrav.
Se pare c fungii (mucegaiurile) reprezint grupul cel mai mare de
microorganisme din sistemul biologic (~300 000 specii), fapt care a dus
la concluzia c nu trim ntr-o lume cu fungi, ci mai degrab ntr-o lume a
fungilor (Bulmer, 1969).
Un numr foarte mare de ciuperci produc micotoxine. Unele sunt
mutagene i carcinogene, altele prezint o toxicitate cu specificitate pentru
anumite organe.
Toxicitatea acestora pentru om nu a fost nc demonstrat. Se cunosc
ca substane carcinogene 14 micotoxine, dintre care aflatoxinele sunt cele
mai importante.
n general este acceptat faptul c 93% dintre compuii mutageni sunt
carcinogeni.
Micotoxinele sunt metabolii secundari. Ei se formeaz la sfritul
fazei exponeniale, nefiind implicai n cretere sau metabolism. n general
se formeaz cnd se acumuleaz cantiti mari de precursori primari de
metabolism (aminoacizi, acetat, piruvat). Din fericire speciile patogene
sunt n numr de cteva zeci.
n patologie, fungii sunt implicai n trei categorii de afeciuni:
micoze, micotoxicoze i alergiile fungice.
Micozele sunt boli determinate de fungi a cror prezen este obligatorie
n organismul afectat (de exemplu: candidoza, tricofiia, etc).
Micotoxicozele sunt entiti determinate de micotoxine care ptrund
n organism o dat cu furajele n care au fost elaborate de ctre fungii toxici.
Astfel, micotoxicozele nu implic prezena agentului biotic (fungului)
n organismul animal i uneori nici chiar n substratul n care a fost elaborat
micotoxina.
Alergia fungic este un sindrom determinat cel mai frecvent de sporii
226
de mucegai.
Tabelul 7.1.
Toxicitatea i efectele biologice ale unor micotoxine majore din alimente
Alimentele
Activitatea
LD50 (mg/
Micotoxina
Specii productoare
implicate
biologic
kg)
porumb, alune,
0,5 (cine),
smochine, lapte Aspergillus flavus
hepatotoxic,
Aflatoxine
9,0
i produse din
Aspergillus parasiticus carcinogen
(oarece)
lapte
Aspergillus flavus
Acid
brnz, porumb,
36
Penicillium
convulsii
ciclopiazonic alune, mei
(obolan)
aurantiogriseum
DeoxinivaFusarium graminearum vom, refuzarea 70
cereale
lenol
Fusarium culmorum
hranei
(oarece)
leucopenie toFusarium
xic de origine 4 (obolan)
Toxina T-2
cereale
sporotrichioides
alimentar
Ergotamina secar
Claviceps purpurea
neurotoxin
55encefalomalacia ecvin
55edem pulmoFumonizin porumb
Fusarium moniliforme nar - la ecvine ?
55carcinom
esofagian - la
suine
2030
porumb, cereale, Penicillium verrucosum
Ochratoxina
nefrotoxic
(obolan)
boabe de cafea
Aspergillus ochraceus
edem, hemo35
suc de mere,
Penicillium expansum ragii, posibil
Patulina
produse din mere
(oarece)
carcinogen
Penicillium
efect tremorgen 1,05
Penitrem A
nuc
aurantiogriseum
(oarece)
Sterigmatocistina
cereale, boabe de
Aspergillus versicolor
cafea, brnz
Acid
tenuazonic
past de tomate
Alternaria tenuis
Zearalenona
porumb, orz,
fin
227
hepatotoxic,
carcinogen
Convulsii, hemoragii
166
(obolan)
81
(oarece
) 186
(oarece
)
nu prezint
toxicitate
acut
Tabelul 7.2.
Nr. de ri
48
17
5
6
10
2
4
7.1. Aflatoxinele
Aflatoxinele reprezint un grup de metabolii secundari elaborai dup
faza de cretere logaritmic a unor tulpini toxigene de Aspergillus. Sunt de
departe cele mai studiate micotoxine.
Sunt cunoscute, nc din anii 1960, cnd mai mult de 100.000 de
pui de curc au murit n Anglia dup ce au consumat o mncare cu alune,
importat din Africa i America de Sud. Din alimentul toxic au fost izolate
Aspergillus flavus i o toxina produs de acest microorganism, care a fost
denumit aflatoxin (toxina lui A. flavus: A-fla-toxin).
Aspergillus flavus este un microorganism mezofil care se dezvolt la
temperaturi cuprinse ntre 6C i 46C, cu un interval optim de 36-38C.
Umiditatea, substratul, gradul de aerare etc sunt foarte importante
pentru dezvoltarea tulpinilor aflatoxigene.
Aspergillus flavus se dezvolt i elaboreaz aflatoxine cnd umiditatea
relativ a aerului este de 80% i a substratului de 30%.
Temperatura optim de dezvoltare n condiii de laborator este de 25C,
cnd tulpina este cultivat pe arahide, iar elaborarea aflatoxinei ncepe din a
7 a pn n a 9 a zi de cultivare (Diener i Davis, 1966).
Hesseltine i col. (1966) au publicat o sintez a cercetrilor privind
producerea aflatoxinei pe boabele de cereale ntregi sau mcinate: porumb,
gru, orez. Mayne i col. (1966) au artat c producia de aflatoxine pe
seminele de bumbac a fost egal cu cea de pe gru i de dou ori mai
mare dect cea de pe arahidele infectate cu Aspergillus flavus. Cantiti de
ordinul zecilor de g/ml aflatoxin au fost obinute prin cultivarea fungului
pe sucuri de mere, caise, grapefruit, struguri, portocale, piersici, ananas,
roii (Wildman citat de Diener i Davis, 1969) precum i pe alte substraturi
alimentare ca: paste finoase, brnz, lapte praf, alune de pdure, nuci,
semine de mac, miez de nuc de cocos, cartof, bacon afumat, mazre,
228
231
Tabelul 7.3.
Specie
boboc de ra
obolan
hamster
porc de guineea
iepure
Sex
M
M
M-F
M
F
M
M
F
M
M
M-F
Cale
per os
per os
per os
per os
per os
per os
intraperitoneal
per os
per os
intraperitoneal
intraperitoneal
DL50 (mg/kg)
0,37
0,56
1,0
5,5
7,4
7,2
6,0
17,9
10,2
15,0
9,0
adult
M-F
intraperitoneal
0,5
adult
100 g
M-F
M-F
per os
per os
0,38
7,5
cine
pstrv
Dup Wogan G. N.
Limita (g/kg)
Alimente
5
20
SUA
Australia
0,5
5
India
Japonia
15
30
10
China
50
1977).
Procedeele de purificare a extractului primar depind de compoziia
chimic iniial a substratului analizat. Cele mai dificile sunt cele care
implic analizele nutreurilor combinate, datorit multiplelor posibiliti
de interferen fizico-chimic. Cel mai indicat procedeu n acest sens este
utilizarea unui precipitat de plumb acid, urmat de trecerea fazei lichide pe o
coloan de absorbie cu gel de aluminiu acid (Ponce i col, 1971).
Separarea, identificarea i evaluarea aflatoxinelor se face prin procedee
cromatografice: cromatografie, n strat subire (CSS), cromatografie n faz
de gaz-lichid (CGt) i cromatografie de lichid de nalt presiune (CtIP).
3. Testele de confirmare se realizeaz de obicei prin reacii de
derivatizare a aflatoxinei in situ pe placa cromatografic cu diferii reactivi
chimici.
Derivatizarea are drept scop modificarea culorii fluorescentei
aflatoxinei n lumin UV de 366 nm.
4. Pentru evaluarea cantitativ a aflatoxinelor din alimente i
substraturife furajere, fluorodensimetria reprezint cea mai practic metod
(Peterson, Stotoff, 1972). O nou metod cantitativ pentru determinarea
aflatoxinelor o reprezint cromatografia n lichid de nalt presiune (CLIP)
(Engsticom i col.).
7.3. Citrinin
Cu toate c ciupercile productoare de citrinin au fost gsite pe boabele
de cafea i cacao, acestea nu au produs micotoxine n aceste substraturi.
Citrinina este o substan cristalin cu greutatea molecular de 250 Kda
i punctul de topire la 170-1710C. n stare cristalizat din alcool citrinin
(C13H14O5 ) formeaz cristale aciforme de culoare galben-citrin care n
lumin UV de 366 nm prezint fluorescen galben strlucitoare.
235
Pentru confirmare se poate folosi sistemul de developare toluen acetat de etil-acid formic.
7.4. Ochratoxinele
Ochratoxina A este o substan cristalin, incolor, optic activ n
cloroform i fluorescent n lumina UV de 254 nm i 366 nm. Greutatea
ei moleculara este de 403 kda, iar punctul de topire de 90C, cnd este
cristalizat din benzen i 169C cnd este cristalizat din xilen (Steyn i
Holzapfef, 1967).
7.5. Patulina
Patulina este un antibiotic toxic produs de un numr mare de fungi
ce aparin genurilor Penicillium (P. claviforme, P. expansum, P. patulum),
Aspergillus (A. clavatus, A. terreus i alii) i Byssochlamys (B. nivea, B.
fulva). n mai multe ri s-au impus restricii n folosirea patulinei drept
conservant n produsele pe baz de mere. OMS (WHO) recomand o
concentraie maxim de 50 g/l n sucul de mere. n UE, limita maxim
admis este 50 g/kg att n sucul de mere, ct i n cidru, 25 g/kg n
produsele pe baz de mere, pentru aduli i 10 g/kg n produsele pe baz
de mere pentru copii (1 noiembrie 2003).
Proprietile sale biologice sunt asemntoare cu cele ale acidului
penicilic. Unii fungi pot produce patulina i sub 2C
Aceast micotoxin a fost gsit n pinea mucegit, crnai, fructe,
suc de mere, cidru, i alte produse. Au fost gsite n sucul de mere (de pn
la 440 g/l) i n cidru (pn la 45 ppm). A fost identificat n alimentele
mucegite examinate n Germania.
P. expansum i P. patulum au nevoie petru dezvoltare de un minim de
aw de 0,83 i 0,81.
P. patulum i P. roquefortii au produs patulina n 10 zile n bulion cu
dextroz de cartofi, prin incubare la 12C. P. roquefortii a produs pn la
1033 ppm. Patulina a fost produs i n sucul de mere la 12C de ctre B.
nivea, cea mai mare concentraie obinndu-se dup 20 de zile la 21C
Aceti cercettori au confirmat c producia de patulin este favorizat
239
7.7. Sterigmatocistina
Sterigmatocistina i derivaii si au fost izolai iniial n condiii de
laborator din culturi de Aspergillus versicolor (Bullocu si col, 1962, Pohland,
1976), P. luteum (Dean, 1963), A. nidulans, A. rugulosus (Ballantin i col
1965), Bipolaris sorokiniana Drechslera (Holzapfel si col. 1966).
Coman i col., 1981 au izolat din nutreuri combinate trei tulpini
toxigene de A. versicolor, capabile s sintetizeze sterigmatocistina.
Sterigmatocistina a fost identificat pe cromatoplci, pe baza fluorescenei
i a valorii RG-ului.
Unele sortimente de brnz care reclam n procesul de preparare i
241
7.8. Fumonizinele
Fumonizinele sunt produse de Fusarium spp. pe porumb i pe alte
cereale, iar mbolnvirile la oameni i animale sunt asociate cu consumul
de cereale sau produse ale acestora, care conin niveluri ridicate de astfel de
242
mucegaiuri.
Speciile care produc fumonizine sunt: F. sacchari, F. subglutinans,
F. thapsinum, F. globosum, F. anthophilum, F. dlamini,F. napiforme, F.
nygami, F. moniliforme, F. proliferatum. Ultimele 3 specii produc cantiti
mari de toxin. F. moniliforme (iniial denumit F. verticilliodes; Gibberella
fujikuroi) este cea mai studiat dintre cele 3.
Prevalena lui F. moniliforme este mai mare n porumb n zonele unde
exist o rat ridicat a cancerului esofagian.
Exist cel puin 15 fumonizine, cele mai cunoscute fiind: FB1, FB2,
FB3, FB4, FA1, FA2, FA3.
Cele mai importante sunt FB1-FB3 celelalte fiind considerate minore.
Din 9 tulpini de F. moniliforme, FB1 , produs n grul autoclavat n cantitate
de 960 - 2350 micrograme/g n timp ce FB2 a fost produs ntre 120-320
g/g.
Fuzarina A Fuzarina B
7.10. Zearalenonele
Exista 5 tipuri de zearalenone naturale, produse de Fusarium spp. (n
special F. graminearum i F. tricinctum). Zearalenonele se produc dup
acumularea unor cantiti mari de fungi n cereale.
Toxinele produc n lumina UV, cu unde lungi o fluorescen bleverzuie, iar n lumina UV cu unde scurte o culoare verzuie. Posed proprieti
estrogene i produc estrus la oareci i hiperestrogenism la suine. Nu sunt
mutagene prin testul Ames i produc un rspuns pozitiv la testul cu Bacillus
subtilis.
Metode de izolare i identificare a levurilor i mucegaiurilor
din alimente
Din cauza creterii lor lente i a capacitii relativ reduse de a concura
cu bacteriile, levurile i mucegaiurile se gsesc, cel mai probabil n alimentele
al cror mediu nconjurtor este mai puin favorabil creterii bacteriene:
pH-redus, umiditate crescut, coninut mare de sare sau zahr, temperatur
de depozitare redus, prezena antibioticelor sau expunerea la radiaii.
Analiza probelor.
Se prepar un mediu steril de agar (porii de 250 ml n sticle sau flacoane,
autoclavate 15 minute la 121C). Se rcesc la 45C, n baie marin.
Prepararea mediului se face cu mult timp nainte i se las s se
solidifice. Mediul nu se retopete, dect o singur dat sau sub presiune. Se
recomand o camer de distilare Arnold. O dat ce mediul a fost rcit, acesta
poate fi pstrat 2-3 ore nainte de folosire, cu condiia ca nivelul apei din
baia marin s fie cu 2-3 centimetri deasupra suprafeei agarului. Mediul de
elecie este reprezentat de agarul cu dextroz de cartofi. Agarul cu dextroz
de cartofi i sare este deosebit de util pentru analizarea probelor care conin
mucegaiuri de rspndire (Mucor, Rhizopus, etc.) deoarece NaCl inhib
creterea lor permind detectarea altor propagule de levuri i mucegaiuri.
Pentru inhibarea creterii bacteriene, mediul se amendeaz fie cu
antibiotice, fie cu soluie de acid tartaric 10% (dup rcirea agarului i
imediat nainte de turnarea plcilor), dup cum urmeaz:
antibiotice: se recomand clortetraciclin HCL, la un mediu
de agar cu concentraie de 40 ppm; mai pot fi folosite i alte antibiotice
(cloramfenicol, streptomicin) n aceeai concentraie cu clortetraciclina
HCL.
245
247
3. Se pipeteaz 1 ml din
fiecare diluie n plci
separate cu PDA
PDA (Potato Dextrose Agar) suplimentat cu Clortetraciclin HCL sau acid tartric
4. Se incubeaz la ntuneric, la 22-25C, timp de 5 zile.
5. Se numr plcile ce conin ntre 10 i 150 colonii.
248
Saccharomyces cerevisiae
Microscopie electronic
Saccharomyces cerevisiae
Microscopie cu contrast de faz n cmp
ntunecat
Saccharomyces cerevisiae
Microscopie cu contrast de faz n cmp
ntunecat (coloraie cu floxin). Reproducere asexuat prin nmugurire
Saccharomyces cerevisiae
Microscopie cu contrast de faz n cmp
ntunecat (coloraie cu floxin). Se observ
n mijlocul figurii o asc cu 4 ascospori
Saccharomyces cerevisiae
Cultur pe agar cu dextroz de cartof
Saccharomyces cerevisiae
Cultur pe mediul Czapek
249
Bibliografie selectiv
1. Enomoto, M., and M. Saito. 1972. Carcinogens produced by fungi. Annu. Rev.
Microbiut. 26:279-312.
2. Eschcr. F.E., P.E. Koehler, and J.C. Ayres. 1973. Production of ochratoxins A and B
on country cured ham. Appl. Microbiol. 26:27-30.
3. Escobar, A., and O.S. Regueiro. 2002. Determination of aflatoxin Bi in food and
feedstuffs in Cuba (1990 through 1996) using an immunoenzymatic reagent kit
(Aflacen). J. Food Proiect. 65:219-221.
4. Farber, J.M., and G.W. Sanders. 1986. Fusarin C production by North American
isolates of Fusarium moniliforme. Appl.Eimron. Microbiol. 51:381-384.
5. Gclderblom. W.C.A., N.P.J. Kriek, W.F.O. Marasas. and P.G. Thiel. 1991. Toxicity
and carcinogenicity of the Fusarium moniliforme metabolite, fumonisin B|, in rats.
Carcinogenesis 12:1247-1251. I. Gelderblom.
6. W.C.A., K. Jaskiewicz, W.F.O. Marasas. P.G. Thiel, R.M. Horak, R. Vleggaar, and
N.P.J. Kriek. 1988. Fumonisinsnovei mycotoxins with cancer-promoting aclivity
produced by Fusarium moniliforme. Appl. Environ. Microbiol. 54:1806-1811.
7. Gourama. H., and L.B. Bullerman. 1995. Antimycotic and antiaflatoxigenic effect
of lactic acid bacteria: A review. J. Food Proiect. 58:1275-1280.
8. K Gutema, T., C. Munimbazi, and L.B. Bullerman. 2000. Occurrence of fumonisins
and moniliformin in corn and corn-based food products of U.S. origin. J. Food
Proiect. 63:1732-1737.
9. Harrison, M.A. 1989. Presence and stability of patulin in apple products: A review./
FoodSaf 9:147-153. ).
10. Henry. S.H., F.X. Bosch, T.C. Troxell. and P.M. Bolger. 1999. Reducing liver
cancerglobal control of aflatoxin. Science 286:2453-2454. ).
11. Hesseltine, C.W. 1967. Aflatoxins and other mycotoxins. Health Lab. Sci. 4:222228.
12. I. Holmquist. G.U., H.W. Walker. and H.M. Stahr. 1983. Influence of temperature.
pH, water activity and antifungal agents on growth of Aspergillus flavus and A.
parasiticus. J. Food Sci. 48:778-782. .
13. Jorgenssen, K.V., D.L. Park. S.M. Rua, Jr., and R.L. Price. 1990.
Reduction of mutagenic potcntials in milk: Effects of ammonia treatment
on aflatoxin-contaminated cotton-seed. J. Food Protect. 53:777-778, 817.
3.
14. Karunaratne. A., E. Wezenberg, and L.B. Bullerman. 1990. Inhibition of mold
growth and aflatoxin production by Lactobacillus spp. J. Food Protect. 53:230236.
15. Kcdera. C.J.. R.D. Plattner. and A.E. Desjardins. 1999. Incidence of Fusarium spp.
250
30. Mphande. F.A., B.A. Siame, and J.E. Taylor. 2004. Fungi aflatoxins, and
cyclopiazonic acid associated with pea retailing in Botswana. J. Food Protect.
67:96-102.
31. Nelson. PE., R.D. Plattner, D.D. Shackelford. and A.E. Desjardins. 1992. Fumonisin
Bi production by Fusarium spec other than F. moniliforme in section Liseola and by
some related species. Appl. Environ. Microbiol. 58:984-989.
32. Newsome, R. 1999. Issues in internaional trade: Looking to the Codex Alimentarius
Commission. Food Technol. 53(6):
33. Niranjan. B.G., N.K. Bhat, and N.G. Avadhani. 1982. Preferenial attack of
mitochondrial DNA by aflatoxin B| dur hepatocarcinogenesis. Science 215:73-75.
34. Northolt, M.D., C.A.H. Verhulsdonk. P.S.S. Soentoro, and W.E. Paulsch. 1976.
Effect of water activity and temperat on aflatoxin production by Aspergillus
parasiticus. J. Milk Food Technol. 39:170-174.
35. Oatlcy, J.T., M.D. Rarick, G.E. Ji, and J.E. Linz. 2000. Binding of aflatoxin Bi to
bifidobacteria in vitro.y. Food Prot 63:1133-1136.
36. Pestka, J.J., J.I. Azcona-Olivera, R.D. Plattner, F. Minervini, M.B. Doke, and A.
Visconti. 1994. Comparative assessm of fumonisin in grain-based foods by ELISA,
GC-MS, and HPLC. J. Food Protect. 57:169-172.
37. Pierides. M.. H. El-Nezami, K. Peltonen. S. Salminen, and J. Ahokas. 2000. Ability
of dairy strains of lactic acid bact( to bind aflatoxin Mi in a food model. J. Food
Protect. 63:645-650.
38. Pittet, A., V. Parisod, and M. Schellenberg. 1992. Occurrence of fumonisins Bi
and B2 in com-based products from Swiss market. J. Agric. Food Chem. 40:13521354.
39. Park. K.Y., and L.B. Bullerman. 1983. Effect of cycling temperatures on aflatoxin
production by Aspergillus prsii and Aspergillus flavus in rice and cheddar cheese.
J. Food Sci. 48:889-896.
40. Ram, B.P. P Hart. R.J. Cole, and J.J. Pestka. 1986. Application of ELISA to retail
survey of aflatoxin B| in peanut bui ./ Food Protect. 49:792-795.
41. Rheeder, J.P. W.F.O. Marasas, P.G. Thiel, E.W. Sydenham. and D.J. van Schalkwyk.
1992. Fusarium moniliforme fumonisins in corn in relation to human esophageal
cancer in Transkei. Phytophathology 82:353-357.
42. Roland, J.O., and L.R. Beuchat. 1984. Biomass and patulin production by
Byssochlamy.s nivea in apple juice as affec by sorbate, benzoate, SO and
temperature. J. Food Sci. 49:402^*06.
43. Ross, P.F., L.G. Rice, R.D. Plattner, G.D. Osweiler, T.M. Wilson, D.L. Owens, H.A.
Nelson, and J.L. Richard. 1< Concentration of fumonisin B| in feeds associated
with animal health problems. Mycopathology 114:129-135.
44. Ross, P.F., P.E. Nelson, J.L. Richard, G.D. Osweiler, L.G. Rice, R.D. Plattner. and
T.M. Wilson. 1990. Productioi fumonisins by Fusarium moniliforme and Fusarium
252
253
Capitolul 8
Scurt prezentare a principlalelor
virusuri ce se transmit prin alimente
Caractere generale
Moto
Virusurile sunt entiti potenial patogene care au o faz infecioas,
posed un singur tip de acid nucleic, se multiplic sub form de material
genetic, nu cresc, nu se divid i sunt lipsite de sistem Lippman (Lwoll A,
1957; The concept of a virus; Y. gen. Microbul).
n 1972, Uniunea Internaional de Biochimie (IUB) recomand
folosirea prescurtrilor DNA i RNA pentru acid dezoxiribo i respectiv
ribonucleic indiferent de limba n care este scris textul (Diem K i
Lentner).
Virusurile constituie un regim aparte, VIRA, datorit caracterelor de
structur i funcie prin care se deosebesc fundamental de microorganismele
procariote i eucariote.
Pasteur a intuit prezena virusurilor n studiile sale privind agentul
turbrii (1884) ca fiind un microoganism infinitezimal de mic.
D. I. Ivanovski (1892) demonstreaz c mozaicul tutunului este produs
de un agent att de mic, nct poate trece prin filtrele care rein cele mai
mici bacterii.
Loefler i Frosch n 1898, n febra aftoas a bovinelor, J. Cord mpreun
cu Watter Reed (1901) n febra galben, Remlinger (1903) n turbare, au pus
n eviden faptul c agenii infecioi respectivi sunt filtrabili.
n urmtoarele decenii, au fost identificai i ali ageni cu caractere
asemntoare prin inocularea la animalele de laborator de filtrate lipsite de
bacterii obinute din suspensii de organe sau fluide de la gazdele naturale
(animale, plante, bacterii).
Aceti ageni noi au fost denumii iniial virusuri filtrabile
ultramicroscopice apoi virusuri ultrafiltrabile, i n cele din urm
254
virusuri.
n 1915, Twort i, independent, n 1917, dHerelle au descoperit
bacteriofagul. n 1930, studiile pe modelul fag-bacterie i-au permis lui
Schlesinger (1930) s arate c particula de fag este alctuit din DNA i
protein.
Virusurile sunt sisteme genetice independente dotate cu continuitate i
variabilitate genetic i care posed o istorie evolutiv proprie.
Pentru replicare virusurile utilizeaz mainria de sintez a celulei viigazd dirijnd-o spre sinteza de virioni, particule specializate care conin
genomul viral (acid nucleic) i componentele structurale (proteine, nveli),
care permit transferul acestuia la alte celule gazd.
Clasificarea virusurilor se bazeaz pe urmtoarele criterii:
1) Tipul de acid nucleic: DNA sau RNA; structura i proprietile
acestora;
2) Dimensiuni i morfologie (tipul de simetrie al capsidei, numr de
capsomere, prezena de inveliuri);
3) Comportarea fa de agenii fizici i chimici (fa de eter);
4) Caractere antigenice;
5) Modul de transmitere n natur;
6) Gazda, esutul, celula pentru care prezint tropism;
7) Leziuni celulare i anatomopatologice.
8) Simptome clinice.
Componentele principale ale unui virus sunt acidul nucleic i
proteina.
Metodele de purificare sunt reprezentate de: a) metode care se
adreseaz fracionrii proteinelor din matricea lipoidal i b) metode fizice,
ca de pild adsorbia i ultracentifugarea, care in seama de diferenele de
dimensiune, densitate i proprieti de suprafa ntre particula de virus i
componentele subcelulare, nevirale, prezente n omogenatul de celule sau
esut infectat folosit ca surs de virus.
Pn n prezent se cunosc mult mai puine date legate de incidena
virusurilor n alimente, dect a bacteriilor i a fungilor.
n primul rnd virusurile fiind parazii obligatorii nu se dezvolt pe
medii de cultur ca bacteriile sau fungii. Replicarea lor se realizeaz numai
n celulele vii. Pentru replicarea virusurilor animale se pot folosi celule vii
provenind din trei surse: a) animale de laborator, b) embrioni de gin n
dezvoltare (ou embrionate) sau c) culturi celulare.
255
256
Caracteristici
Familia Picornaviridae, nenvelite, capsid icosaedral, 2732 nm, RNA monocatenar, nu produce infecii cronice i nu
are statut de purttor, exist vaccinuri, mortalitate sczut
Tabelul 8.2
Genul
enterovirusul bovin
enterovirusul uman A
enterovirusul uman B
enterovirusul uman C
enterovirusul uman D
poliovirusul*
enterovirusul porcin A
enterovirusul porcin B
enterovirusul simian A
rinovirusul uman A
rinovirusul uman B
rinovirusul uman C
virusul hepatitei A (HAV)
virusul encefalomielitei aviare (AEV)
virusul encefalomiocarditei (EMCV)
theilovirus
virusul febrei aftoase*
virusul rinitei ecvine A (ERAV)
parechovirusul uman (HPeV)
virusul Ljungan
virusul rinitei ecvine B
virusul aichi
kobuvirusul bovin
teschovirusul porcin
Enterovirus
Rhinovirus
Hepatovirus (nainte Heparnavirus)
Cardiovirus
Aphthovirus
Parechovirus
Erbovirus
Kobuvirus
Teschovirus
259
8.2. Norovirusurile
Norovirusurile (nainte denumite Norwalk virus - like) sunt virusuri
noi, aparinnd familiei Caliciviridae, cu RNA monocatenar, de 7,5 knt,
conine proteina structural major VP1, de aproximativ 58-60 Kda i o
protein capsidic minor (VP2). La microscopul electronic apar ca structuri
amorfe, cu dimensiuni ntre 27 i 38 nm.
Tabelul 8.3.
Serotipurile genului Norovirus
Serotip
Tulpin
Desert Shield
Lordsdale
Mexico
Norwalk
Hawaii
Snow Mountain
Southampton
[U04469]
[X86557]
[U22498]
[M87661]
[U07611]
[L23831]
[L07418]
Izolat
(Hu/NLV/DSV395/1990/SR)
(Hu/NLV/LD/1993/UK)
(Hu/NLV/MX/1989/MX)
(Hu/NLV/NV/1968/US)
(Hu/NLV/HV/1971/US)
(Hu/NLV/SMV/1976/US)
(Hu/NLV/SHV/1991/UK)
stnga:
Rotavirus A,
microscopie
electronic
dreapta:
distribuirea
proteinelor n
virion
Peste 500.000 de copii, sub 5 ani mor anual din cauza infeciilor cu
rotavirusuri, iar peste 2.000.000 prezint forme severe.
Istoric. n 1943, Jacob Light i Horace Hodes au dovedit c agentul
filtrabil, din scaunele diareice ale copiilor este acelai cu cel care produce
diareea infecioas n efectivele de vite.
n 1974, Thomas Henry Flewett, a propus denumirea de Rotavirus
dup ce a observat prin microscopie electronic aspectul asemntor al
particulelor virale cu al spielor de roat (rota n latin). Numele a fost
recunoscut oficial de ctre Comitetul internaional de taxonomie viral, n
1978.
n 1980 au fost descrise serotipurile de Rotavirus i n anul urmtor au
fost izolate pe culturi celulare de rinichi de maimu.
n 1998, a aprut primul vaccin comercial, n SUA, care a fost scos de
pe pia un an mai trziu, deoarece exista suspiciunea ca ar produce ocluzie
intestinal la 1/12.000 copii.
n 2006, au aprut dou noi vaccinuri vii atenuate mpotriva infeciilor
cu Rotavirus A (Rotarix - GlaxoSmithKline i RotaTeq - Merck), care s-au
dovedit a fi sigure i eficiente.
Aceste vaccinuri sunt disponibile n Australia, Europa, Canada,
Brazilia, Egipt, India, Israel, Taiwan, Africa de Sud, Panama, Argentina i
SUA.
Programul de vaccinare mpotriva rotavirusului A, reprezint o
colaborare ntre PATH, OMS i CPC i este finanat de GAVI Alliance.
Programul are ca scop reducerea mortalitii i morbiditii prin campanii
de vaccinare, n rile n curs de dezvoltare.
n iunie 2009, WHO a recomandat vaccinarea obligatorie n toate
programele de imunizare naionale.
Epidemiologie. Calea de transmitere este cea fecal-oral, prin
contactul cu mini, suprafeele sau obiectele contaminate i posibil pe
cale respiratorie. Fecalele unei persoane bolnave conin peste 10 trilioane
de particule infecioase/gram (numai 10-100 dintre acestea pot transmite
264
Rat de
mortalitate
Sursa
Anh DD, Thiem VD, Fischer TK, Canh DG, Minh TT, Tho le
H, Van Man N, Luan le T, Kilgore P, von Seidlein L, Glass RI
Viet1 din 61 - 1
(2006). The burden of rotavirus diarrhea in Khanh Hoa Provnam
din 113
ince, Vietnam: baseline assessment for a rotavirus vaccine trial.
Pediatr. Infect. Dis. J. 25 (1): 3740
Tanaka G, Faruque AS, Luby SP, Malek MA, Glass RI, Parashar
Ban1 din 330 - UD (2007). Deaths from rotavirus disease in Bangladeshi chilgladesh 1 din 660 dren: estimates from hospital-based surveillance. Pediatr. Infect. Dis. J. 26 (11): 10148
Prez-Schael I, Salinas B, Gonzlez R, Salas H, Ludert JE, EsVencalona M, Alcal A, Rosas MA, Matern M (2007). "Rotavirus
1 din 1800
ezuela
mortality confirmed by etiologic identification in Venezuelan
children with diarrhea". Pediatr. Infect. Dis. J. 26 (5): 3937.
Soriano-Gabarr M, Mrukowicz J, Vesikari T, Verstraeten T
UE
1 din 20433 (2006). Burden of rotavirus disease in European Union countries. Pediatr. Infect. Dis. J. 25 (1 Suppl): S7S11.
Cook SM, Glass RI, LeBaron CW, Ho MS (1990). Global seaSUA 1 din 21675 sonality of rotavirus infections. Bull. World Health Organ. 68
(2): 1717.
265
CAPITOLUL 9
Principalii prioni ce se transmit prin
alimente
Prionii sunt proteine unice prin faptul c pot converti alte proteine n
unele duntoare fcndu-le s i modifice forma.
Proteina prionic din celula normal (PrP) exist n membrana
celular din creier, avnd unele funcii vitale i fiind degradat de proteaze.
Forma sa patogen apare deformat, fiind rezistent la proteaze, i astfel se
acumuleaz n esutul creierului i d natere bolilor.
S-a postulat ideea c molecula prionic distorsionat acioneaz ca o
matri, convertind proteinele normale n forme deformate. Proteina normal
(forma -helical) cnd devine patogen ia o form -linear, rezistent la
proteaze.
Formele patogene au tendina s se agrege n fibrilele amiloide, unde
cauzeaz degenerarea celulei nervoase, ceea ce conduce la manifestarea
clinic.
Aceste particule au fost pentru prima dat denumite prioni de ctre
Stanley Prusiner n 1982, cruia i-a fost acordat premiul Nobel pentru
munca sa de pionierat n domeniul fiziologiei.
Prionii cauzeaz scrapia la oi, capre i hamsteri i kuru la oameni.
Alte infecii cu aceeai origine etiologic sunt: boala Kreutzfeldt Jacob
(CJD), encefalopatia spongiform bovin (BSE) - boal a vacilor i oilor,
denumit i boala vacii nebune, encefalopatia transmisibil a nurcilor,
boala cahectizant a cervideelor.
Toate acestea aparin unei familii de boli denumite encefalopatii
spongiforme transmisibile (TSEs)
cazuri BSE
cazuri vCJD
5
133
15
28
14
1
1
900
312
1
2
1,353
1
0
0
1
0
0
0
0
23
0
0
0
4
0
268
ar
Italia
Japonia
Liechtenstein
Luxembourg
Olanda
Oman
Polonia
Portugalia
Arabia Saudit
Slovacia
Slovenia
Spania
Suedia
Elveia
Thailanda
Marea Britanie
SUA
Total
cazuri BSE
cazuri vCJD
138
26
2
2
85
2
21
875
1
1
0
1
3
0
0
2
1
0
0
5
0
0
2
167
3
214
15
7
412
1
453
nu exist date
183,841
3
188,579
270
Distribuia BSE. Zonele verde nchis reprezint cazuri confirmate la om, iar cele verde
deschis, zone n care au fost raportate cazuri umane.
Se remarc vacuole mici rotunde sau ovale grupate difuz sau focal n neuropil. Spectrul
de intensitate crete de la fig. (A) - fr modificri, (B) - modificri moderate la (C) modificri pronunate. Coloraia HE. (H. Budka 2000).
vCJD cu plci florale vizibile (plci amiloide fibrilare nconjurate de vacuole spongiforme).
Coloraia HE. H. Budka 2000
273
Bibliografie selectiv
1. Bovine Spongiform Encephalopaphy: An Overview. Animal and Plant Health
Inspection Service, United States Department of Agriculture. 2006. http://www.aphis.
usda.gov/publications/animal_health/content/printable_version/BSEbrochure122006.pdf.
2. Bovine Spongiform Encephalopathy - Mad Cow Disease. Fact Sheets. Food
Safety and Inspection Service. 2005. http://www.fsis.usda.gov/Fact_Sheets/
Bovine_Spongiform_Encephalopathy_Mad_Cow_Disease/index.asp.
3. BSE cases - Italy 2001 - 2006. 2006. http://www.izsto.it/ceafoc_bse.htm.
4. BSE Cases in North America, by Year and Country of Death, 1993-2008. Centers
for Disease Control and Prevention, Department of Health and Human Services.
2008. http://www.cdc.gov/ncidod/dvrd/bse/images/bse_cases_namerica_2008.gif.
5. BSE in Belgium. 2006. http://home.hetnet.nl/~mad.cow/landen/Belgium.htm.
6. BSE in Greece. http://home.hetnet.nl/~mad.cow/landen/Greece.htm.
7. BSE Positive Findings in the Czech Republic. State Veterinary Administration,
Ministry of Agriculture, Czech Republic. 2007. http://www.svscr.cz/files/bse/en_
mappositivefindingsbse.pdf.
8. BSE: Disease control & eradication - Causes of BSE, Department for Environment,
Food, and Rural Affairs, 2007.
9. Commonly Asked Questions About BSE in Products Regulated by FDAs Center for
Food Safety and Applied Nutrition (CFSAN). Center for Food Safety and Applied
Nutrition, Food and Drug Administration. 2005. http://vm.cfsan.fda.gov/~comm/
bsefaq.html.
10. Creutzfeldt-Jakob Disease Fact Sheet. National Institute of Neurological Disorders
and Stroke. 2008. http://www.ninds.nih.gov/disorders/cjd/detail_cjd.htm.
11. Israel: BSE testing according to source of cattle and age groups, 2002-2008. 2008.
http://agri3.huji.ac.il/~yakobson/bse/bse_test.htm.
12. Mad cow disease: Still a concern. MayoClinic.com. CNN. 2006. http://premium.
edition.cnn.com/HEALTH/library/ID/00012.html.
13. Mad cow watch goes blind. USA Today. 2006. http://www.usatoday.com/news/
opinion/editorials/2006-08-03-our-view_x.htm.
14. Overzicht BSE-gevallen. Ministerie van Landbouw, Natuur en Voedselkwaliteit.
2008. http://www.minlnv.nl/portal/page?_pageid=116,1640440&_dad=portal&_
schema=PORTAL&p_document_id=110016&p_node_id=1161644&p_
mode=BROWSE.
15. Statistics. Trade Library. U.S. Meat Export Federation. http://www.usmef.org/
TradeLibrary/Statistics.asp.
16. The BSE Inquiry, Lord Phillips of Worth Matravers, 2000.
274
17. The Current Status of BSE and scrapie in Denmark. Danish Veterinary and Food
Administration. 2007. http://www.uk.foedevarestyrelsen.dk
18. vybp7ro2oirh77lz4kacv72gwfhuv6gmt4g643hvuhg4t2wgmynpbco2zpem2ucte/
StatusreportonBSEandscrapieinDenmarkMay20071.
19. Variant Creutzfeld-Jakob Disease, Current Data, 2009. The National CreutzfeldtJakob Disease Surveillance Unit (NCJDSU), University of Edinburgh. http://www.
cjd.ed.ac.uk/vcjdworld.htm.
20. Almer, G., Hainfellner, J. A., Brcke, T., Jellinger, K., Kleinert, R., Bayer, G., Windl,
O., Kretzschmar, H. A., Hill, A., Sidle, K., Collinge, J., and Budka, H. (1999): Fatal
familial insomnia: a new Austrian family. Brain 122, 5-16.
21. Belichenko, P. V., Miklossy, J., Belser, B., Budka, H., and Celio, M. R. (1999):
Early destruction of the extracellular matrix around parvalbumin-immunoreactive
interneurons in Creutzfeldt-Jakob disease. Neurobiol Dis 6, 269-279.
22. Bell, J. E., Gentleman, S. M., Ironside, J. W., McCardle, L., Lantos, P. L., Doey,
L., Lowe, J., Fergusson, J., Luthert, P., McQuaid, S., and Allen, I. V. (1997): Prion
protein immunocytochemistry -- UK five centre consensus report. Neuropathol
Appl Neurobiol 23, 26-35.
23. Brown, David, 2001. The recipe for disaster that killed 80 and left a 5bn bill.
The Daily Telegraph. http://www.telegraph.co.uk/news/uknews/1371964/Therecipe-for-disaster-that-killed-80-and-left-a-5bn-bill.html. Retrieved.
24. Budka, H. (1997a): The human prion diseases: from neuropathology to pathobiology
and molecular genetics. Final report of an EU Concerted Action. Neuropathol Appl
Neurobiol 23, 416-422.
25. Budka, H. (1997b): Transmissible spongiform encephalopathies (prion diseases),
pp. 449-474. In J. H. Garcia (Ed.): Neuropathology. The diagnostic approach,
Mosby, St.Louis.
26. Budka, H. (2000a): Histopathology and immunohistochemistry of human
transmissible spongiform encephalopathies (TSEs). Arch Virol.
27. Budka, H. (2000b): Prions and transfusion medicine. Vox Sang 78 (suppl 2), 231238.
28. Budka, H., Aguzzi, A., Brown, P., Brucher, J.-M., Bugiani, O., Gullotta, F., Haltia,
M., Hauw, J.-J., Ironside, J. W., Jellinger, K., Kretzschmar, H. A., Lantos, P. L.,
Masullo, C., Schlote, W., Tateishi, J., and Weller, R. O. (1995): Neuropathological
diagnostic criteria for Creutzfeldt-Jakob disease (CJD) and other human spongiform
encephalopathies (prion diseases). Brain Pathol 5, 459-466.
29. Chesebro, B. (1999): Minireview: Prion protein and the transmissible spongiform
encephalopathy diseases. Neuron 24, 503-506.
30. Colchester AC, Colchester NT 2005. The origin of bovine spongiform
encephalopathy: the human prion disease hypothesis. Lancet.
31. Colchester, A; Colchester, N 2006. Origin of bovine spongiform encephalopathy
275
57. Richt JA, Hall SM 2008. BSE case associated with prion protein gene mutation.
PLoS Pathogens.
58. Schulz-Schaeffer, W. J., Tschoke, S., Kranefuss, N., Drose, W., Hause-Reitner, D.,
Giese, A., Groschup, M. H., and Kretzschmar, H. A. (2000): The paraffin-embedded
tissue blot detects PrP(Sc) early in the incubation time in prion diseases. Am J Pathol
156, 51-56.
59. Seltzer, Molly 2008. Meat Recalls to Name Retailers. Bloomberg News.
The
Washington
Post.
http://www.washingtonpost.com/wp-dyn/content/
article/2008/07/11/AR2008071102818.html.
60. Thompson, Geoff 2005. New theory traces mad cow disease to animal feed
exported from India. The World Today (ABC). http://www.abc.net.au/worldtoday/
content/2005/s1453543.htm.
61. Valleron AJ, Boelle PY, Will R, Cesbron JY 2001. Estimation of epidemic size
and incubation time based on age characteristics of vCJD in the United Kingdom.
Science (New York, N.Y.) .
62. Van Everbroeck, B., Palsa, P., Martina, J.-J., and Cras, P. (1999): Antigen retrieval
in prion protein immunohistochemistry. J Histochem Cytochem 47, 1465-1470.
63. Wanschitz, J., Klppel, S., Jarius, C., Birner, P., Flicker, H., Hainfellner, J. A.,
Gambetti, P., Guentchev, M., and Budka, H. (2000): Alteration of the serotonergic
nervous system in fatal familial insomnia. Ann Neurol (in press).
64. Weiss, Rick 2007. Scientists Announce Mad Cow Breakthrough. The Washington
Post.
http://www.washingtonpost.com/wp-dyn/content/article/2006/12/31/
AR2006123100672.html.
65. WHO (1998): Global surveillance, diagnosis and therapy of human transmissible
spongiform encephalopathies: report of a WHO consultation. Geneva, Switzerland,
9-11 February 1998, pp. WHO/EMC/ZDI/98.9, WHO, Geneva.
278