Laborator 1

METODE GENERALE DE ANALIZ FARMACOGNOSTIC I FITOCHIMIC

A PRODUSELOR VEGETALE
Produsele vegetale sunt o important surs de materie prim pentru industria
farmaceutic n vederea obinerii preparatelor medicamentoase.
Termenul de produs vegetal (PV) sau drog cuprinde material prim vegetal sau animal
utilizat pentru a obine un preparat farmaceutic. Cnd spunem PV ne referim fie la
planta ntreag fie la parte din plant: rdcin, tulpin, frunze, flori, fructe, semine. Tot
n categoria PV intr i produse obinute din plant prin diverse procedee: uleiri volatile,
uleiuri grase, balsamuri, etc.
OBTINERE PV
PV le putem obine prin recoltarea plantelor fie direct din flora spontan fie prin
introducerea speciilor de interes terapeutic n culturi. Recoltarea plantelor se face n
momentul n care PV care ne intereseaz a ajuns la cantitatea cea mai mare de principii
active.
Indicaii privind recoltarea diferitelor PV:
a) mugurii (gemma) recoltare primvara nainte de desfacere.
b) scoarele (cortex) primvara dup ncetarea circulaiei sevei (martie-mai)
c) frunzele (folium) pe timp frumos i uscat, n perioada de dinainte i dupa nflorire
d) florile (flos) n momentul mbobocirii, la dezvoltare complet sau numai petalele
e) partea aerian (herba) se recolteaz toat partea aerian, dac tulpina este lignificat
se recolteaz doar vrfurile nflorite numite somiti florale
f) fructele (fructus) att nainte de maturitate ct i la maturitate.
g) seminele (semen) la complete lor maturitate
h) organe subterane (radix, rhizome) toamna, la sfritul perioadei de vegetaie.

Uscarea PV se face prin dou ci:

a) natural n aer liber, la soare (rizomi, rdcini, flori albe sau galbene, fructe, semine)
sau la umbr
- plantele puternic mirositoare sau care conin principia active toxice se usc n
ncaperi separate.
b) artificial uscarea este de scurt durat evitnd astfel procesele enzimatice.

STABILIREA IDENTITII PRODUSELOR VEGETALE

Principalele metode de analiz ale produselor vegetale se pot mprii n dou mari grupe:
a) calitative
b) cantitative
a) Metodele calitative urmresc caracterele macroscopice i microscopice ale produselor
vegetale.
b) Metodele cantitative stabilesc puritatea produselor vegetale precum i coninutul n
princiipii active al produsului vegetal.
a) METODELE CALITATIVE
1. Examenul macroscopic
2. Examenul microscopic
3. Examenul microchimic
Examenele macroscopice i microscopice sunt necesare pentru identificarea
produselor vegetale, iar examenul microchimic pune n eviden pricipalele grupe de
principii active din produsele analizate.
1. Examenul macroscopic stabilete caracterele morfologice observate att cu ochiul
liber ct i cu lupa, dar i cele organoleptice percepute prin miros i gust al unui produs
vegetal nou sau cunoscut.
Dup forma de prezentare produsele vegetale pot fi:
- ntregi ( in toto )

- fragmente (concissum)
- pulverizate (pulveratum )
n urma examenului macroscopic se pot face urmtoarele percizri:
Aspectul:

stabilete forma produsului ( ntreg sau fragmentat)

particulritile feelor

fractura

consistena

tipul seciunii

Dimensiunile se apreciaz:
-

n cm pentru majoritatea produselor ( utiliznd rigla )

mm pentru fructele i seminele mici (cu hrtia milimetric)

nm pentru celule i incluziuni celulare (se utilizeaz micrometrul

ocular sau obiectiv)

Culoarea:
Mirosul:

- la exterior i interior
- se percepe pe produsul ca atare, zdrobit ntre degete (flori, frunze)
sau pulverizat

Gustul:

- se determin pe produs ca atare sau pe decoct 10 % ( NU SE

NGHITE, se elimin i se cltete cu ap).

Detaliile tehnice ale examinrilor macroscopice depind de grupa morfologic n care se

ncadreaz produsul vegetal ( radixrdcin, rhizomerizom, bulbusbulb, tubertubercul, cortex-scoart, folium-frunz, flos-floare, herba-parte aerian, fructus-fruct,
semen-smn, gemmae-muguri, stipites-peiol) i vor fi redate n Tabelul I.

2. Examenul microscopic reprezint faza avansat a analizei unui produs vegetal

stabilind esuturile i elementele anatomice caracteristice din pulberi sau produse
fragmentate.
Pentru analiza microscopic a unui produs vegetal este necesar n prealabil o pregtire a
preparatului:
a) obinerea preparatelor microscopice sub form de seciuni
b) examenul microscopic al produselor vegetale pulverizate
c) examenul microscopic al produselor vegetale concisum clarificate

2. Examenul microscopic
a) Obinerea preparatelor microscopice sub form de seciuni
Secionarea unui produs vegetal se face n general n plan transversal cu briciul sau
microtomul (produsul fiind inclus n parafin), dac este cazul se poate face i n plan
longitudinal (radiar sau tangenial).
n vederea secionrii produsul vegetal uscat i fragmentat trebuie adus la consistena
necesar prin nmuiere n ap fierbinte (flori frunze), fierbere timp ndelungat n ap
(rdcin, rizomi, scoare). Pentru produsele cu mucilagii se realizeaz o macerare 24 h
ntr-un amestec alcool:ap 1:1.
a) 1. Seciunile transversale
- din rdcin i tulpin cu diametrul pn la 1 cm trebuie s cuprind suprafaa
ntrag; dac sunt mai groase seciunea trebuie realizat din partea central a produsului;
- dac fragmentele sunt subiri ( frunzele, unele scoare) sau mici (fructe sau
semine) se include ntre dou fragmente de mduv de soc secionat longitudinal;
Secionarea unui produs inclus n mduva de soc se realizeaz printr-o micare
uniform a lamei briciului fr oprire de la baz spre vrf.
Seciunile se prind ntr-un cristalizator cu ap distilat, urmeaz o clarificare i o
colorare a lor. Clarificarea se realizeaz cu apa de Javel (R) timp de 20 minute, soluie de
cloral hidrat 80 % (R) sau soluie de NaOH 5% (R).
a) 2. Colorarea seciunilor se realizeaz prin urmtoarele procedee:
a) 2.1. Colorarea cu floroglucin n mediu de HCl (R)
Seciunile se clarific cu soluie de cloral hidrat 80 % (R) apoi se trateaz cu cteva
picturi de soluie alcoolic de floroglucin n mediu de HCl (R) astfel

pereii se

coloreaz n rou.
a) 2.2. Dubl colorare cu verde de iod i carmin alaunat
Seciunile au esuturile sclerificate colorate n verde sau albastru-verzui, cuticula i
pereii suberificai n galben-verzui sau brun (verdele de iod), iar esuturile celulozice n
rou (carminului alaunat).

a) 3. Montarea seciunilor n mas gelatinoas i n balsam de Canada

Masa gelatinoas reprezint un amestec de gelatin-glicerin realizat astfel: 2g
gelatin se las n contact cu 4 g ap pn la absorbia complet, se adaug 10 g glicerin
uor ncalzit i se menin pe baie de ap pn la obinerea unei mase omogene.
Balsamul de Canada este o oleo-rezin lichid limpede, transparent cu miros
balsamic, de culoare galben deschis sau galben-verzui.
b) Examenul microscopic al produselor vegetale pulverizate
Scopul acestui examen este de a identifica elementele anatomice comune organului i
de a stabilii caracteristicile produsului.
Produsul vegetal se pulverizeaz prin zdrobire sau mcinare, urmat de omogenizarea
prin cernerea pulberii (sit cu 30 ochiuri pe cm2).
La fel ca n cazul seciunilor i pulberea poate fi examinat microscopic ntr-o varietate
de soluii i reactivi.
Caracteristicile microscopice ale diverselor organe vegetale:
b) 1. Organele subterane (rdcin, rizomi, bulbi) se observ n urma examenului
microscopic fragmente de parenchim cu materii de rezerv (amidon, inulin, picturi de
ulei gras), fragmente de vase mari de lemn (reticulate, punctuate), fragmente de suber.
Examenul microscopic scote n eviden unele elemente structurale particulare reuind
s se fac astfel o deosebire ntre organele subterane:
-

aspectul granulelor de amidon

cristalele de oxalate de calciu

elementele mecanice

esuturi secretoare

culoarea coninutului celular

b) 2. Tulpina ca elemente anatomice de difereniere menionm:

- fragmente de epiderm cu stomate
- peri tectori i glandulari
- fragmente de parenchim i vase lemnoase
- incluziuni celulare

b) 3. Scoara
Diferenierea dintre scoare se realizeaz pe baza aspectelor i structurii elementelor
mecanice, natura chimic a materiilor de rezerv din parenchimuri i de esuturile
secretoare.
b) 4. Frunza, n esutul palisadic i lacunos se evideniaz cristale de oxalate de calciu,
celule i canale secretoare. Epiderma ofer numeroase caractere pentru identificarea unor
produse vegetale dintre care mai importante sunt:
- forma celulelor, prezena sau absena cuticulei
- prezena sau absena perilot tectori i glandulari; aspectul, numrul i dimensiunea
lor
Un rol important revine stomatelor din frunz, astefel frunzele la dicotiledonate
prezint cinci tipuri de stomatate.
b) 5. Florile
Examenul microscopic pune n eviden prezena perilor tectori foarte variai ca
aspect, form i numr; perii glandulari; polenul are un important caracter pentru
difereniere.
b) 6. Fructele i seminele conin n celule materii de rezerv, ulei gras, amidon, etc.
c) Examenul microscopic al produselor vegetale concisum clarificate
Acest examen este necesar pentru produsele vegetale care provin de la organe subiri
(frunz, flori, herba)
Detaliile necesare pentru efectuarea examenului sunt cuprinse n Tabelul II.

3. Examenul microchimic
Identificarea compuilor chimici n esuturile produselor vegetale se realizeaz prin
reacii specifice de culoare ct i prin cele de precipitare. n acest scop se utilizeaz
examenul histochumic i microsublimarea.
3. 1. Examenul histochimic se realizeaz pe seciuni (transversale i longitudinale), mai
rar pe pulveri vegetale n scopul localizrii principiilor active din produsul studiat. n
acest scop fragmentele de produs vegetal se fierb cu o soluie saturat de clorur de
sodiu sau sulfat de sodiu pn la consistena optim secionrii. Seciunile se aduc pe
lam i se acoper cu reactivul respective, dup cteva minute se spal cu solventul
necesar i se examineaza la microscop
Principalii reactivi utilizai n acest scop sunt:
-

clorura feric 1% - taninuri

NaOH 5% (R ) hidroximetilantrachinone, flavone

Sudan III uleiuri volatile, uleiuri grase, latexuri, rini

3. 2. Microsublimarea se aplic numai substanelor care au capacitatea de a trece n

stare de vapori prin nclzire i apoi cristalizare pe o suprafa rece.
Tehnica de lucru: pe o lam de microscop situat pe o sit de azbest aezat pe un
trepied se aduce cca 0,10g produs vegetal pulverizat; la unul din capetele lamei se pune o
baghet de sticl lung de 5-6 cm i diametrul de 5 mm pe care se sprijin o alt lam de
microscop. Pe lama superioar se aduce un tampon de vat mbibat n ap (rol de
refrigerant). Se nclzete tot sistemul la un bec de gaz la flacr mic situate la cca 10
cm de sita de azbest. Sublimarea se produce n dreptul tamponului de vat sub form de
cristale.
Tabelul III. Reactivii de culoare utilizai n recia de microsublimare
Substana sublimat

Reactivi Reacia de

Culoarea obinut

emodin
berberina
cafein
hidrochinon
atropin

identificare
NaOH 5% (R )
aceton
reacia murexidului
FeCl3 (R )
reacia Vitali

roie
verde
roie
brun
violet