Lucrri practice Fiziologie I

EXPLORAREA SERIEI ERITROCITARE

Eritrocitele (hematiile) reprezint, alturi de leucocite i trombocite, elementele figurate ale
sngelui. Procesul de formare al eritrocitelor se numete eritropoiez, realizat prin
multiplicarea i maturarea precursorilor eritrocitari, expulzia nucleului si eritrodiabaza
(trecerea eritrocitelor din mduva hematogen n circulaie). Pentru explorarea corect a seriei
eritrocitare este necesar determinarea urmtorilor parametri:
- numrul de eritrocite;
- hematocritul;
- hemoglobina;
- indicii eritrocitari.

1. NUMRTOAREA ERITROCITELOR
Principiu
Metoda manual - se numr direct la microscop (n camera de numrat) eritrocitele
dintr-un volum cunoscut de snge, diluat ntr-o proporie cunoscut (diluarea sngelui se
face pentru a putea numra eritrocitele care sunt foarte numeroase i pentru ca sngele s
nu coaguleze).
Metoda automat - principiul impedanei electrice - o suspensie de eritrocite ntr-un
volum cunoscut de reactiv trece printr-un orificiu (fant) prevzut cu electrozi ntre care se
aplic un curent constant. Trecerea prin orificiu a fiecrui eritrocit, nonconductor, va
determina o scdere brusc de tensiune denumit puls. Pulsurile sunt numrate electronic
i exprimate ca numr de eritrocite.

Valori normale
RBC (red blood cells) = 4 - 5,5 mil/mm3 sau 4 - 5,5 1012/l (valoare medie)
brbai = 4,9 0,7 mil/mm3
femei = 4,3 0,6 mil/mm3

Variaii fiziologice
poliglobulia definete valorile crescute ale numrului de eritrocite i poate fi ntlnit la
persoanele care triesc la mare altitudine.

Variaii patologice
poliglobulia apare n insuficiena respiratorie, bolile cardio-pulmonare, etc.
anemia definete valorile sczute ale numrului de eritrocite, apare n hemoragii,
hemoliz, insuficiena mduvei hematogene din intoxicaii, iradiere, infecii, etc.

2. DETERMINAREA HEMATOCRITULUI
Definiie. Hematocritul (Ht) reprezint raportul dintre volumul total al eritrocitelor, dup
centrifugare, fa de volumul sangvin total, exprimat n % sau litru/litru. Ht reprezint cea mai
precis metod de evaluare a strii de anemie sau poliglobulie.

Principiu
Metoda automat - utilizeaz aparate electronice. Ht este calculat prin determinarea
numrului de eritrocite i a VEM-ului (volum eritrocitar mediu).

1
 Lucrri practice Fiziologie I

Metoda manual - se realizeaz prin centrifugare, cnd se separ eritrocitele de plasm i

se evalueaz raportul volumetric eritrocite/snge.

Materiale necesare
centrifug
2 tuburi de hematocrit
snge venos recoltat pe anticoagulant (heparin)

Tehnica. Se umplu cu snge venos 2 tuburi de hematocrit i se centrifugheaz 30 minute la

3000 de turaii/min. Dac centrifugarea este complet eritrocitele se vor separa de plasm.
Leucocitele i trombocitele formeaz un strat ntre acestea i nu reprezint n mod normal mai
mult de 1% din volumul total de celule sedimentate.

Calcul. Se citete n mm nlimea coloanei de eritrocite (h) i se exprim procentual fa de

nlimea total a coloanei de snge (H):

h
H h Ht (%) = 100
H

Valori normale (normocitemie):

valoare medie: 39-50 %
brbai: 45 7 % (0,38 - 0,52 l/l); raport eritro-plasmatic = 45-55
femei : 42 5 % (0,37 - 0,47 l/l); raport eritro-plasmatic = 40-60

Variaii patologice
policitemia definete valori crescute ale Ht (cauze: poliglobulie, deshidratare, etc.)
oligocitemia definete valori sczute ale Ht (cauze: anemii, hiperhidratare, etc.)
Dup o hemoragie acut, nainte de refacerea plasmatic exist normocitemie.
Pentru o apreciere corect, rezultatele obinute la determinarea Ht se coreleaz cu cele ale
volemiei (Tabelul I):

Tabelul I. Corelaia hematocritului cu volemia

Volemie Elemente figurate Exemple

Normovolemie normocitemic starea fiziologic
oligocitemic Anemii
policitemic fiziologic (de altitudine)
patologic (boli cardio-pulmonare)
Hipovolemie normocitemic hemoragie acut
oligocitemic boli cronice consumptive
policitemic deshidratare extracelular
Hipervolemie normocitemic fiziologic(gravide n trimestrul III)
patologic ( HTA)
oligocitemic hiperhidratare extracelular
policitemic HTA cu insuficien respiratorie

2
 Lucrri practice Fiziologie I

3. DOZAREA HEMOGLOBINEI SANGUINE. METODA DRABKIN

Definiie. Hemoglobina (Hb) reprezint elementul principal pentru realizarea funciei
respiratorii a eritrocitului. Eritrocitul conine: 60% ap, 33-35% Hb, 5-7% alte substane
(enzime, pompe ionice de Na+/K+, de Ca+2, schimbtori ionici de Cl-/HCO3-).
Exist 3 tipuri de Hb: Hb embrionar, Hb fetal, Hb de tip adult .

Principiu. Hb n prezena unei soluii de cianur de potasiu i fericianur de potasiu se

transform n cianmethemoglobin de culoare galben-rocat. Intensitatea culorii este
proporional cu concentraia de Hb i se determin spectrofotometric.

Materiale necesare
reactiv Drabkin (conine cianur i fericianur de potasiu);
snge proaspt sau recoltat pe anticoagulant (EDTA-Na2);
spectrofotometru.

Tehnica
n dou eprubete se introduc:

Reactivi Eprubeta Prob Eprubeta Martor

Reactiv Drabkin (ml) 5 5
Snge (l) 20 -

se omogenizeaz coninutul eprubetei prob

se las n repaus la temperatura camerei 20 minute
se citete extincia probei fa de martor la 540 nm
concentraia de Hb, corespunztoare extinciei, se determin din tabele

Valori normale
valoare medie: 13-17 g/dl
brbai: 15 2 g/dl
femei: 14 2 g/dl

VARIAII PATOLOGICE
poliglobulia definete valorile crescute ale Hb.
anemie definete valorile sczute ale Hb.

4. INDICII ERITROCITARI
Valorile Hb, Ht i ale numrului de eritrocite stau la baza calculrii indicilor eritrocitari, utili
pentru studiul eritrocitelor n funcie de mrime i coninutul n Hb, ct i pentru diagnosticul
morfologic al anemiei (Tabelul.II).

4.1. VOLUMUL ERITROCITAR MEDIU (VEM, MCV, mean corpuscular volume)

Definiie: VEM indic volumul mediu al eritrocitului.

Formula de calcul:
Ht(%) 10
VEM (m3) =
E (mil / mm 3 )
Valori normale: 80 - 100 m3 sau fl (femtolitri) = normocite.
3
 Lucrri practice Fiziologie I

Variaii patologice:
valori mai mici dect 80 m3 (fl) caracterizeaz microcitele (n cazul anemiei prin deficit
de Fe, microsferocitoz)
valori mai mari de 100 m3 (fl) caracterizeaz macrocitele (n cazul anemiei prin deficitt
de acid folic i vitamina B12, anemia Biermer, anemia megaloblastic)

4.2. CONCENTRAIA MEDIE DE Hb ERITROCITAR

(CHEM, MCHC - MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBIN CONCENTRATION)

Definiie: CHEM reprezint concentraia medie de Hb/100 ml eritrocite.

Formula de calcul:

Hb( g / dl ) 100
CHEM =
Ht (%)

Valori normale: 32 - 36 g Hb/100 ml eritrocite (normocromie).

Variaii patologice: valori < 31 g Hb/100ml eritrocite definesc hipocromia.

4.3. HEMOGLOBINA ERITROCITAR MEDIE

(HEM, MCH - MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBIN)

Definiie: HEM reprezint cantitatea de Hb coninut de un eritrocit.

Formula de calcul:

Hb( g / dl ) 10
HEM =
E (mil / mm 3 )

Valori normale: 20 - 34 pg.

Variaii patologice: valori mai mici dect 20pg definesc hipocromia.

4.4. INDICELE DE DISTRIBUIE ERITROCITAR

(RDW RED CELL DISTRIBUTION WIDTH)

Definiie: RDW reprezint deviaia standard a mediei volumelor eritrocitare raportate la VEM
i se determin cu ajutorul histogramelor curbe de distribuie % a mrimii celulelor.
Valori normale: 11,5 - 14,5 %.
Variaii patologice: variabilitatea crescut a volumului eritocitelor definete anizocitoza
(RDW crescut). Astfel, cu ct RDW va fi mai mare, cu att anizocitoza este mai marcat.

Celule normale Reticulocitoz crescut

4
 Lucrri practice Fiziologie I

5. DIAGNOSTICUL DIFERENIAL AL ANEMIILOR

Tabelul II. Diagnosticul diferenial al anemiilor.

INDICI Valori Anemie Anemie Anemie
normale hipocrom normocrom normocrom macrocitar
microcitar normocitar
VEM 80-100 m3 N
CHEM 32-36 g% N N
HEM 20-34 pg N N
Cauze Anemia feripriv Anemia aplastic Anemia megaloblastic
(deficit de Fe2+ ) (insuficiena mduvei (deficit de B12 i acid folic)
osoase hematogene)

6. VITEZA DE SEDIMENTARE A HEMATIILOR

ncepnd cu anul 1924, cnd Westergreen a standardizat metoda de determinare ce-i poart
numele, viteza de sedimentare a hematiilor (V.S.H.) s-a rspndit ca un test paraclinic
nespecific utilizat n diagnosticul unor variate stri patologice.

Principiu. n sngele recoltat pe anticoagulant, lsat n repaus, se produce separarea plasmei

de elementele figurate care sedimenteaz, n virtutea gravitaiei (Fig.nr.1).

n sngele circulant elementele figurate se gsesc n suspensie, dispersate n plasm.

Meninerea hematiilor n suspensie i implicit valorile V.S.H.-ului sunt determinate de:
Factori globulari:
- ncrctura electronegativ a eritrocitelor, care determin respingerea acestora;
- vscozitatea sngelui condiionat de masa eritrocitar; astfel scderea numrului de
hematii (anemie) determin accelerarea V.S.H.-ului, iar creterea numrului de
eritrocite (poliglobulie) determin scderea V.S.H.-ului.
Factori plasmatici:
- raportul albumine/globuline. Albuminele, care prezint un grad mare de disociere
ionic, determin creterea numrului de sarcini electronegative care se opun
sedimentrii. n schimb, globulinele i fibrinogenul, cu un grad de disociere ionic
mult mai redus, favorizeaz sedimentarea. Astfel, scderea raportului
albumine/globuline fie prin scderea concentraiei de albumine, fie prin creterea
concentraiei de globuline sau fibrinogen va accelera sedimentarea i va crete
valoarea V.S.H.-ului.
- creterea fibrinogenului plasmatic favorizeaz sedimentarea prin fenomenul de
pseudoaglutinare.

5
 Lucrri practice Fiziologie I

Materiale necesare:
sering de 2 cm3 i ac de puncie venoas;
pipete Westergreen cu stativul corespunztor;
citrat de sodiu 3,8%, soluie steril;
materiale necesare recoltrii sngelui prin puncie venoas.

Tehnica
se aspir n sering soluie de anticoagulant cu care se cltete seringa, reinndu-se 0,4ml;
se puncioneaz vena, dup dezinfectare, i se aspir snge n sering pn la 2 ml;
coninutul seringii se amestec prin cteva micri de rsturnare;
proba se trece apoi ntr-o eprubet din care se aspir cu pipeta Westergreen (Fig.nr.1)
pn la diviziunea 0, astfel nct coloana de snge s fie continu;
se plaseaz pipeta n stativ n poziie perfect vertical;
citirea se face dup o or, iar rezultatul se exprim n mm coloan de plasm separat de
eritrocite n decurs de o or (mm/or).

Valori normale:
brbat: 1 10 mm/or;
femeie: 2 13 mm/or;
nou-nscut: 0,5 mm/or (datorit poliglobuliei).

Variaii fiziologice:
la femei, V.S.H.-ul crete n timpul menstruaiei;
la femei, V.S.H.-ul crete n sarcin (mai ales n ultimele luni).

Variaii patologice:
Creterea V.S.H.-ului apare n boli infecioase sau inflamatorii (pneumonii, reumatism
articular acut, tuberculoz activ, septicemie, pielonefrite), n anemii, infarct miocardic,
leucemii, neoplasme, etc.
Scderea V.S.H.-ului apare n poliglobulii, etc.

Pentru a evita rezultatele eronate trebuie respectate urmtoarele condiii:

sngele se recolteaz dimineaa pe nemncate
determinarea se face imediat dup recoltare (n primele 2-3 ore); conservarea sngelui,
crete V.S.H.-ul
se utilizeaz ca anticoagulant citratul de sodiu deoarece oxalatul de sodiu crete V.S.H.-ul
poziia pipetei trebuie s fie perfect vertical, nclinarea acesteia crescnd V.S.H.-ul
temperatura camerei trebuie s fie cuprins ntre 20 i 27C deoarece creterea
temperaturii crete V.S.H.-ul
s se evite hemoliza

Fig.nr.1. Determinarea V.S.H. prin metoda Westergreen.

1. P.M. sex masculin
V.S.H. = 8 mm/or (normal)
2. S.I. sex feminin
V.S.H. = 40 mm/or (patologic)

6
 Lucrri practice Fiziologie I

BULETINE DE INTERPRETARE
S se interpreteze urmtoarele hemograme:

1. , 18 ani 2. , 25 ani 3. , 20 ani

(RBC) Nr E = 3,3 mil/mm3 Nr E = 3 mil/mm3 Nr E = 2,8 mil/mm3
(HGB) Hb = 10 g/dl Hb = 7 g/dl Hb = 5 g/dl
(HCT) Ht = 30 % Ht = 27 % Ht = 20 %
(MCV) VEM = 90 fl VEM = 110 fl VEM = 70 fl
(MCHC) CHEM = 33,3 g% CHEM = 34 g% CHEM = 25 g%
(MCH) HEM = 30 pg HEM = 32 pg HEM = 18 pg
RDW = 12 % RDW = 17 % RDW = 16 %

TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT)

1. Valorile normale ale eritrocitelor sunt:
A. La femei 4 - 5,5 mil/mm3
B. La brbai 4,2 - 5,6 mil/mm3
C. 5000 - 9000/mm3
D. 4 - 5,5 x 1012/l

2. Alegei afirmaiile corecte de mai jos :

A. Creterea nr. RBC definete poliglobulia i apare n insuficiena mduvei hematogene
B. Creterea nr. RBC definete poliglobulia i nu apare n insuficiena respiratorie
C. Poliglobulia apare ca urmare a scderii nr. de eritrocite
D. Anemia semnific o scdere a nr. de eritrocite sub 4 mil/mm3

3. Anemia se caracterizeaz prin:

A. Scderea numrului de eritrocite, Ht i Hb sub limita inferioar a normalului
B. Creterea concentraiei de hemoglobin medie (CHEM) > 36 g Hb/100ml
C. Hipovolemie cu oligocitemie
D. HEM > 32 pg

4. Pe frotiul de snge periferic putem ntlni:

A. Anizocromie = variaii de volum eritrocitar
B. Anizocitoza = variaii de volum eritrocitar
C. Poichilocitoza = variaii de ncrcare cu hemoglobin aeritrocitelor
D. Poichilocitoza = variaii de numr a eritrocitelor

5. Urmtoarea afirmaie este fals:

A. Hemoglobina se poate determina pe principiul spectrofotometriei
B. RDW reprezint deviaia standard a mediei volumelor eritrocitare raportate la VEM
C. VEM indic volumul mediu al unui eritrocit i este normal < 80 fl
D. Dozarea hemoglobinei se poate face prin metoda Drabkin

6. Despre V.S.H. (viteza de sedimentare a hematiilor) se poate afirma c:

A. Reprezint un test paraclinic nespecific
B. n anemie scade V.S.H.-ul
C. Valorile normale sunt: la femeie 1 - 10 mm/or iar la brbat 2 - 15 mm/or
D. Poliglobulia duce la creterea V.S.H.-ului
7
 Lucrri practice Fiziologie I

7. Alegei afirmaia corect de mai jos:

A. Eritrocitul conine 40% ap, 30 - 32% Hb, 5 - 7% alte substane
B. Exist 3 tipuri de Hb: embrionar, fetal, de tip senil
C. Hb, Ht i VEM-ul nu stau la baza calculrii indicilor eritrocitari
D. VEM > 100 fl caracterizeaz macrocitele ntlnite n anemia prin deficit de acid folic
i vitamina B12

8. Variaiile Ht (hematocritului) definesc:

A. Policitemia dac valoarea Ht > 0,52 l/l la brbat i > 0,47 l/l la femeie
B. Oligocitemia dac valoarea Ht > 0,52 l/l la brbat i > 0,47 l/l la femeie
C. Policitemia dac valoarea Ht este 0,38 - 0,52 l/l la brbat i 0,37 - 0,47 l/l la femeie
D. Dup o hemoragie acut, nainte de refacerea plasmatic exist anemie

9. Alegei afirmaia corect de mai jos:

B. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) se utilizeaz la aprecierea anizocitozei
C. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) se utilizeaz la aprecierea hipocromie
D. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) nu are valoare normal ntre 11,5 i 14,5
E. Toate afirmaiile de mai sus sunt adevrate

10. V.S.H.-ul reprezint:

A. Un parametru nespecific folosit pt determinarea nr. de eritrocite din sngele circulant
B. Un parametru specific folosit pt. determinarea nr. de eritrocite din sngele circulant
C. Un test paraclinic nespecific folosit n diagnosticul unor variate stri patologice
D. Nici o afirmaie nu este corect

Rspunsuri: 1-D, 2-D, 3-A, 4-B, 5-C, 6-A, 7-D, 8-A, 9-A, 10-C.