IZOLAREA VIRUSURILOR IN

CULTURI CELULARE

EFECTE CITOPATICE
 AVANTAJE / DEZAVANTAJE ALE
SISTEMELOR DE IZOLARE VIRALA

AVANTAJE DEZAVANTAJE

ANIMAL DE LAB Infectie naturala Cost / etica

O.G.E. Cost Susceptibilitate

limitata

CULTURI DE Sensibilitate buna Susceptibilitate

CELULE / disponibilitate variabila
 Componentele culturilor de celule: Celule dispersate+ mediu nutritiv

Mediu nutritiv

• solutie salina tamponata - Earle, Hanks

• substanţe nutritive (SFV, lizate proteice)- Serul fetal de vitel (SFV) contineo
serie de factori ce actioneaza pentru a stimula cresterea si diviziunea
celularä (hormoni nonpeptidici, factori de adeziune ce intervin în atasarea
celulelor pe un substrat celular solid, factori de crestere) – SFV este
adäugat în proportie de 10% în mediul de creçtere si 2-5% în mediul de
întretinere
• vitamine si aminoacizi esenüiali
• antibiotice şi antifungice

Condiţii necesare
• Asespsie riguroasa
• pH adecvat
• Temperatură constantă
• atmosferă cu 5-10% CO2
CLASIFICAREA CULTURILOR DE CELULE

• Culturi de organ
• Culturi de celule dispersate
» Culturi primare- pot fi mentinute în vitro timp
limitat (3-5 pasaje).
» Tulpini celulare pot fi mentinute în vitro timp de
50-60 de pasaje. - Cariotipul cromozomial este cel
al tipului de origine - diploid - ceea ce certificä
netumorigenitatea culturii
» Linii celulare - CELULE TRANSFORMATE
 CELULE TRANSFORMATE
1. conţin gene implicate în imortalizarea în vitro (cultivare nr. infinit
pasaje) modificari cromozomiale => cariotip heteroploid

2. se multiplică haotic, cerinţe nutritive foarte scăzute (se multiplică

la concentraţii foarte scăzute de SFV), glicoliza anaerobă = sursa
principala de energie

3. membrană celulară modificată în compoziţie (absenţa fibronectinei

=> independente de aderarea la un suport solid

4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat diferit de ţesutul

din care derivă
5. telomeraza activa
6. inoculate la animale, pot reproduce tumora de provenienta
7. modificarea morfologiei
8. au antigene de suprafaţă diferite codificate de virus sau de celulele
gazda=> neoantigene
9. aglutinează uşor cu lectinele (antigene vegetale)
10. modificarea mesagerilor secunzi (AMPc)
 Echipament de laborator

Hote cu flux laminar pentru obtinerea, si

propagarea culturilor de celule si izolarea
virala
TIPURI DE EFECTE CITOPATICE

• SINCITIAL: HIV, v rujeolos, VRS, herpes

• PICNOTIC – LITIC- enterovirusuri (v.
poliomielitice; v. Coxsackie; ECHO)

• INCLUZIONAR- intranuclear,
intracitomplasmatic, mixt
EFECT CITOPATIC SINCITIAL
Celule normale ECP picnotic litic
 EFECT CITOPATIC
INCLUZIONAR
• Intracitoplasmatic acidofil: v rabic, v vaccinal

• Intranuclear -acidofil: papovavirusuri

- bazofil: adenovirusuri

• Mixt: v herpetice, v rujeolos

 INCLUZII
CITOPLASMATICE
(RABIE)
patognomonic in SNC - CORPII
BABES NEGRI in cornul lui Ammon
si neuronii piramidali din cerebel
INCLUZII INTRANUCLEARE
(BOALA CU INCLUZII CMV)
 INCLUZII
INTRANUCLEARE