Familia Enterobacteriaceae

Caractere generale:

• enterobacterium = bacterie intestinală

• habitat: tractul intestinal om/animale

 Caractere morfo-tinctoriale:
• Bacili Gram-negativ
• Mobili/imobili
• Unii au capsulă: Klebsiella
pneumoniae

• Nu formează endospori
 Caractere de cultură:
• Facultativ anaerobe
• Tulbură uniform mediul de cultură lichid
• Au necesităţi nutriţionale reduse → se
dezvoltă şi pe geloză nutritivă
• Colonii tip S
• Uneori colonii mucoase: Klebsiella
pneumoniae
• Medii selective, majoritatea au lactoză:
• Drigalski, Levin, Leifson, Istrate-Meitert,
MacConkey
 Mediul Levine
• Categoria: Mediu
selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză
simplă + eozină +
lactoză + albastru de
metilen
• Utilizare: cultivarea
enterobacteriilor (E.coli)
 ADCL (Leifson)
• Categoria: Mediu
selectiv şi diferenţial
• Componente: geloză
simplă + săruri biliare +
lactoză + roşu neutru
• Utilizare: cultivarea
shigelelor şi
salmonelelor
 Caractere biochimice:
~ Încadrarea în familie pe baza a trei
teste biochimice:
• Fermenteză glucoza cu producere de acid
şi gaz
• Testul oxidazei negativ
• Reduc nitraţii la nitriţi

~ Pe baza testelor biochimice şi a

caracterelor antigenice → genuri →
specii → variante serologice
 OXIDAZA
• Scop: evidentierea citocromoxidazei
• Substrat: benzi indicatoare (alfanaftol- clorhidrat
de dimetilparafenilendiamina)
• Tehnica:
- se umecteaza banda indicatoare cu apa
distilata
- se descaraca o colonie bacteriana cu
ajutorul ansei pe banda indicatoare
• Interpretare: test+ coloratie albastra
Testul oxidazei
 REDUCEREA NITRATILOR LA
NITRITI
• Substrat: apa peptonata + KNO3

• Incubare: 24h la 37 C

• Substanta indicatoare: ac sulfanilic/acid acetic,

alfanaftilamina/ac acetic

• Interpretare: test +  viraj spre rosu al

indicatorului (Enterobacteriaceae)
 Coprocultura
Izolarea
- Medii de cultură pentru enterobacterii
- Medii selective şi de diferenţiere
*Drigalski
*Levin
*Leifson
*Istrate-Meitert
*MacConkey
 Caractere morfo-tinctoriale

Bacili Gram-negativ
 Proprietăţi de cultură

•Colonii S
•Lactozo-negative
 Proprietati biochimice

TSI
UTILIZAREA CITRATULUI SIMMONS
• Substrat: mediu minimal cu citrat de sodiu
solidificat in eprubeta in pozitia inclinata

• Tehnica: inocularea bacteriei de testat pe panta

agarului. Incubare 18h la 37 C

• Interpretare: test +dezvoltarea coloniilor

bacteriene si viraj verdealbastru al culorii
mediului
testul citrat – mediul
Simmons
UTILIZAREA CITRATULUI
SIMMON’S
 Structura antigenică

- Aglutinări pe lamă cu
seruri anti-O
 Teste de patogenitate

Testul Sérèny
 Caractere morfo-tinctoriale

Bacili Gram-negativ
Mobili (preparat nativ)
 Proprietăţi de cultură

Colonii S
Geloză nutritivă
 Proprietăţi de cultură

Mediul Drigalski
Colonii lactozo-negative
 Proprietăţi de cultură

- lactozo-negativ
- Agar EMB (Levin)
 Proprietăţi de cultură

- Agar McConkey
 Proprietati de cultura
Geloza Hektoen
H2S
 GENUL SALMONELLA
AGAR
ADCL--H2S
ADCL
CROMOGENIC
 Genul Salmonella
peste 2200 serotipuri

Infecţii (salmoneloze):
~ Febra tifoidă – S.typhi
~ Febra paratifoidă – S.paratyphi A, B
~ Toxiinfecţii alimentare şi enterite (copii)
S.typhymurium
S.enteritidis
S.paratyphi B
S.panama
~ Stări septico-piemice
S.paratyphi C
S.choleraesuis
 Clasificarea serotipurilor de
Salmonella
2. Adaptate la gazde
1. Adaptate la om
altele decât omul
• S.schottmuelleri • exc. tulpini → boli om
– S.typi – S.dublin
– S.paratypi A,B – S.choleraesuis

• S.hirschfeldii 3. Fără adaptate la o

– S.paratypi C gazdă specifică
• S.enteritidis →
>2000 serotipuri →
gastroenterite
 Caractere generale:
~ bacili Gram-negativ
~ mobili (flageli peritrichi)
~ lactozo-negativi
~ identificarea antigenelor O, H, Vi →
reacţii de aglutinare
 Recoltarea produselor patologice:

2) Gastroenterite
1) Febre tifo-
paratifoide: – coprocultură
– S1 – lichid de
hemocultură vărsătură
– S2 urocultură, – alimente
coprocultură
 Teste biochimice

H2S
 Teste biochimice

Creste pe mediul Simmons,

cu citrat
 Proprietăţi antigenice

- Schema de identificare antigenică

Kauffmann-White
Ag “O” – caracteristică de GRUP
Ag “H” - caracteristică de TIP (variaţie de
fază)
Ag Vi <=> Ag K – de suprafaţă
Serotip = enumerarea completă a Ag O, Vi
şi H1,2
 Reacţia Widal

- r. aglutinare în tuburi
- Febre tifo-paratifoide
- Creşterea titrului de anticorpilor
aglutinanţi anti-O şi anti-H
 Enterobacterii oportuniste

Escherichia
Klebsiella – Enterobacter – Hafnia –
Serratia
Proteus – Providencia – Morganella
Arizona – Edwarsiella – Citrobacter
 Enterobacterii oportuniste

Escherichia coli
~ 80% flora normală a colonului
~ bacili Gram-negativi
~ lactozo-pozitivi
~ luciu metalic – mediul Levin
 Escherichia coli
~ Tipuri de îmbolnăviri:
~ boli diareice
~ infecţii urinare
~ infecţii ale plăgilor
~ septicemii
 Escherichia coli

Tulpini care produc boli diareice:

~ ETEC (E.coli enterotoxigen)

~ EIEC (E.coli enteroinvaziv)

~ EPEC (E.coli enteropatogen)

~ EHEC (E.coli enterohemoragic)

~ VTEC (E.coli produce toxină Shiga-like) → O157:H7

 GENUL ESCHERICHIA

E. coli – non
pathogen
E. coli - EPEC pathogen
- EHEC
- EIEC
- ETEC
 GENUL ESCHERICHIA
E. coli
Cultura pura
E. coli -ADCL
 E. coli

LEVINE
DRIGALSCHI
Fermentarea lactozei pe geloză lactozată
 E. coli

MEDIU CROMOGEN
COLONII ROZ
 Escherichia coli
Identificare biochimică
IMViC
~ Testul indol
~ Testul roşu metil
~ Reacţia Voges-Proskauer
~ Testul citrat
 OXIDATIE-FERMENTATIE

DEGRADARE MIXTA

MEDIU NEDAGRADAT
 TESTE REZULTATE DIN TIPURILE
DE FERMENTATIE

• TESTUL ROSU-METIL

• TESTUL VOGES-PROSKAUER
 TESTUL ROSU-METIL

• Scop: fermentarea substratului si scaderea pH-ului sub 5

• Tehnica:
– tulpina bacteriana testata se insamanteaza in apa peptonata glucozata.
– Incubare 18h la 37 C.
– Developare cu solutie rosu fenol
• Interpretare:
– Test +  culoare rosie (pH<5): E. coli
– Test -  culoare galbena (pH>5): Klebsiella
 TESTUL VOGES-PROSKAUER

• Scop: evidentierea fermentatiei acetoinice

• Tehnica:
– tulpina bacteriana se insamanteaza in apa peptonata glucozata.
– incubare 18h la 37 C.
– Se alcalinizeaza.
– Developare cu alfanaftol.

• Interpretare:
– test + inel rosu-violaceu la interfata de contact: Klebsiella
– Test - : E.coli
TESTUL VOGES-PROSKAUER
 TESTUL INDOL
• Scop: evidentiaza prezenta triptofanazei
• Tehnica:
– cultura bacteriana de 24h in apa peptonata
– benzi indicatoare cu reactiv indol.
• Interpretare:
– test + culoare rosu-violaceu (E.coli)
TESTUL INDOL
Grupul Klebsiella – Enterobacter
– Hafnia – Serratia
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella rhinoscleromatis
Enterobacter cloacae
Enterobacter aerogenes
Hafnia alvei
Serratia marcescens
 Grupul KEHS
Tipuri de îmbolnăviri:
~ Dobândite în spital
~ Infecţii cu localizări <=> E.coli
~ Cauze imp. de bacteriemii
~ Klebsiella pneumoniae – inf. pulmonară
~ Majoritatea → tulpini cu rezistenţă multiplă
la antibiotice
 Klebsiella pneumoniae

~ cantităţi moderate în intestinul omului

/animalelor
~ infecţii respiratorii, urinare, otite
~ bacili Gram-negativi
~ capsulă polizaharidică
~ colonii mari mucoase , fenomen de
cameleonaj
KLEBSIELLA
Frotiu coloratia tuş de China
Klebsiella pneumoniae
 KLEBSIELLA
Colonii mucoase
 KLEBSIELLA

Proprietati biochimice
 Proteus vulgaris, P.mirabilis
~ saprofiţi (materie organică în
descompunere)
~ flora intestinală normală
~ infecţii urinare, alte tipuri de infecţii
~ bacili Gram-negativi, mobili
~ lactozo-negativi
~ invadează suprafaţa mediilor gelozate
 GENUL PROTEUS

Proteus
vulgaris
Flageli
GENUL PROTEUS - migrare
PROTEUS
Proteus spp.
PRODUCEREA DE H2S
 TESTUL UREAZEI
• Scop : evidentierea ureazei, enzima ce scindeaza ureea cu
formare de amoniac

• Substrat: mediu de cultura ce contine uree si indicator

colorimetric (de Ph).

• Tehnica:
– tulpina bacteriana testata se inoculeaza in mediu.
– Se incubeaza 18h la 37 C.

• Interpretare:
– test+ viraj corespunzator al zonei bazice: Proteus
Proteus spp.
Ureaza +

H2S
 TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI

• Scop: evidentierea prezentei FAD

• Substrat: agar inclinat ce contine fenil-alanina

• Tehnica:
– tulpina bacteriana se insamanteaza pe panta agarului.
– Developarea reactiei cu FeCl3

• Interpretare: test+ aparitia culorii verzi (Proteus)

TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI
 Yersinia
Yersinia pestis enterocolitica
~ ciuma (pesta) ~ Sdr. Diareic febril

~ bacili Gram-negativ Yersinia

~ capsulă proteică pseudotuberculosis
~ Inf. la păsări,
rozătore, rar om
~ Lez. tipică: noduli
asemănători celor
tbc în intestin, org.
parenchimatoese
 Bacili Gram negativi aerobi glucozo-
nefermentativi
Pseudomonade

- bacili Gram negativi

- strict aerobe, metabolism oxidativ

- catalazo-pozitivi si oxidazo-pozitivi
 Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi

Pseudomonade
specii fluorescente, care produc
pigmenti difuzibili fluorescenti:
P. aeruginosa (bacilul piocianic)
P. putida,
P. fluorescens;
specii non-fluorescente:
P. alcaligenes,
P. pseudoalcaligenes.
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

• patogen nosocomial (10% din totalul infectiilor

nosocomiale)
• Bacterie oportunistă
• Habitat:
– sol, apă
– Poate coloniza tubul digestiv şi pielea
persoanelor sănătoase
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

• ITU
• infectii de tract respirator
• infectii ale plagilor, suprainfectii ale
arsurilor
• bacteriemie, septicemie, infectii sistemice,
mai ales la pacientii imunocompromisi
• otite externe la inotatori ;
• infectii oculare dupa interventii chirurgicale
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

Proprietati microscopice:

• bacili Gram negativi

• mobili
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
Proprietati de cultura:

• pigment difuzibil fluorescent de mai multe tipuri:

* piocianina, albastra, cu proprietati antibacteriene fata de
alte specii bacteriene
* pioverdina, galben-verde culoarea verde, stralucitoare
* piorubina, rosie, ocazional
*piomelanina, bruna, ocazional

• cultura degaja o aroma caracteristica, aromata,

asemanatoare cu florile de tei, iasomie, mere verzi

• strict aeroba
 Pseudomonas spp.
► Bacil Gram-negativ, ► Se dezvoltă pe medii
mobil simple, geloză
► Nefermentativ nutritivă → producere
de pigment difuzibil
Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)
Antibiograma – obligatorie
• foarte rezistenta la antibiotice;
• are rezistente naturale multiple, datorate structurii
peretelui celular.
• Carbapenemi
• Penemi
• Unele Cefalosporine gen. III; gen. IV
• Quinolone
• Aminoglicozide
• Polimixine.
• In caz de monoterapie dezvolta rapid rezistenta.
Genul Vibrio
bacterii Gram-negative
foarte mobile (cil polar)
formă de bastonaş încurbat
facultativ anaerob
majoritatea speciilor saprofite, unele produc
îmbolnăviri uşoare
 Specia tip: Vibrio cholerae

două biotipuri holerigene:

► cholerae clasic

► El Tor

V. cholerae O139 "Bengal" (1992,

Bangladesh → derivate din biotipul El Tor

mai multe biotipuri neholerigene

(sindroame diareice benigne)
Habitat: apa de Infecţie:
mare, apa de Holera = infecţie
suprafaţă acută, intestinală

Contaminare: ► diaree
► apă, alimente
► deshidratare
contaminate masivă
► fecal-orală
► stare generală

alterată
► evoluţie severă
 Structuta antigenică

variaţia antigenică → rol în epidemiologia

holerie şi virulenţa vibrionilor holerici

Ag H (flagelar) → specificitate largă

Ag O (somatic) → strict specific

 Şase serogrupuri O1 → O6
Vibrionii holerigeni = serogrup O1 conţin
trei factori antigenici: A, B, C
► 3 serotipuri:
→ Ogawa (AB)
→ Inaba (AC)
→ Hikojima (ABC)
► Fiecare serotip poata exprima fenotip
„clasic” sau El Tor
► V. cholerae O139 "Bengal" este singurul

serotip non-O1
 Recoltarea produselor patologice

► Materii fecale → mediu de transport

Cary-Blair

► Lichid de vărsătură

► Apă potabilă, alimente

 Izolare

► apă peptonată alcalină (mediu de

îmbogăţire)
► mediu cu săruri biliare (BSA)
a) Caractere morfo-tinctoriale:
bacili Gram-negativi
încurbaţi
b) Caractere de cultură:
► Mediul BSA:

Colonii tip S,
transparente
c) Caractere antigenice:
► vibrionii holerigeni aglutinează cu ser

anti-O1
► vibrionii neholerigeni nu aglutinează cu

ser anti-O1 (neaglutinabili – NAG)

d) Caractere de patogenitate:
testul ansei ligaturate
 Tratament

reechilibrare hidro-elecrolitică

antibiotice: ex. Tetraciclină

 Genul Helicobacter

• bacili Gram negativi, incurbati pana la

spiralati
• mobili prin unul/mai multi flageli
• microaerofili
• speciile gastrice se caracterizeaza prin
producerea de ureaza in cantitati mari.
 Helicobacter pylori

Recoltarea produselor patologice: biopsie din

mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de
probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea
fundica.
• Important: cel putin o luna fara tratament inainte
de recoltarea probei.
un fragment plasat direct in mediu cu uree si
indicator de pH (rosu fenol)+ureaza preformata
a HP =>virarea indicatorului de pH in galben;
 examen histopatologic
 Helicobacter pylori

Recoltarea produselor patologice: biopsie

din mucoasa gastrica (endoscopie);
prelevarea de probe multiple=>4
fragmente din antru, regiunea fundica.
 frotiu: bacili Gram negativi, incurbati; IF
pentru diagnostic diferential cu
Campylobacter
cultura: colonii mici, transparente, apar in
3-7 zile; permite testarea sensibilitatii la
antibiotice.
 Helicobacter pylori

Metode neinvazive:
• testul respirator cu uree marcata :
– ingerare uree marcata cu C13 (neradioactiv)
sau C14 (radioactiv) => intensa activitate a
ureazei, daca exista HP in stomac =>
eliberare de CO2 marcat, absorbit in circulatia
sanguina si eliminat prin respiratie => detectat
si cuantificat in aerul expirat (spectroscopie
de masa);
– dezavantaj: este foarte costisitor.
 Helicobacter pylori

• detectarea anticorpilor specifici, in special

de tip IgG;
• ELISA;
• cost relativ scazut,
• indicat preferential in studii epidemiologice.
 Helicobacter pylori - Tratament

• Macrolide (Claritromicina),
• Amoxicilina,
• Metronidazol,
• Quinolone.