Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Antibiograma Difuzimetrica
Antibiograma Difuzimetrica
\
PROCEDURA
Generalitati
Proba
Echipamente :
Termostat
Aparat pentru masurarea densitatii inoculului bacterian
Resurse:
Frigider;
Ansa cu bucla de 2,5mm;
Bec de gaz ;
Cutii Petri cu medii de cultura:
Eprubete
FORMULAREA PROCEDURII
1
Indicatiile si contraindicatiile antibiogramei/ antifungigramei difuzimetrice :
- se supun testarii numai germenii al caror rol in producerea imbolnavirii este
absolut cert si care au fost izolati in cultura pura .
- se testeaza numai acele specii a caror concentratie minima inhibitorie nu este
considerata ca o constanta dinainte previzibila (este considerat ca fiind inutila efectuarea
antibiogramei pentru streptococul β hemolitic grup A).
- se testeza doar germenii cu dezvoltare rapida, nu se testeaza germenii cu
dezvoltare lenta sau cu pretentii deosebite.
- este o contraindicatie absoluta, indiferent de solicitarea clinicianului efectuarea
antibiogramei direct din produsele pluricontaminate: exsudat faringian, secretie vaginala.
Prelevarea
Proba este reprezentata de tulpini de referinta/culturile pure de germeni patogeni
care au fost obtinute in prealabil din produsele biologice ale pacientilor prelucrate
anterior.
Pregatire
Tehnica de lucru
Tehica de lucru este reprezentata de metoda difuzimetrica standardizata Kirby –
Bauer, conform următoarelor etape:
- prepararea inoculului
- insamantarea acestuia
- depunerea microcomprimatelor
- incubarea
- Prepararea inoculului :
2
- Insamantarea
- Aplicarea microcomprimatelor
Aplicarea microcomprimatelor se face cu pensa, presind usor fiecare
microcomprimat pe suprafata mediului. Se va respecta o distanta de ~15 mm de la
marginea placii si ~30 mm intre microcomprimate.
Se utilizeaza truse diferite de substante antimicrobiene/ antifungice in functie de
tipul germenelui identificat: coc sau bacil, fung si de natura produsului din care a fost
izolat microbul.
Substantele antimicrobiene / antifungice.
Discurile impregnate cu o cantitate fixa de substanta activa sunt marcate clar pe
ambele fete cu simbolul antibioticului/ antifungicului respectiv.
Conservarea microcomprimatelor se face prin mentinerea lor la adapost de
caldura, lumina si umiditate.
Preparatele sunt folosite strict in intervalul termenului de valabilitate .
Prin depunerea microcomprimatelor cu antibiotice la suprafata unui mediu solid
insamantat cu suspensia bacteriana/fungica de testat, substanta
antimicrobiana/antifungica activa difuzeaza in mediu si realizeaza in jurul discului o zona
de inhibitie a culturii in functie de sensibilitatea culturii bacteriene/ fungice.
Germenele insamantat nu creste in aria in care concentratia de antibiotic depaseste
concentratia minima inhibitorie.
Fiecare din etapele care concura la efectuarea antibiogramei, pot influenta
diametrul zonei de inhibitie si deci criteriile de interpretare. In acest sens, metodologia
recomanda urmatoarele perioade de timp optime:
- Incubarea
3
Se citesc numai placile care prezinta o crestere a culturii corespunzatoare din
punct de vedere al puritatii si al densitatii (cultura densa aproape confluenta) .
Citirea se face cu ochiul liber, masurand diametrul zonei de inhibitie in mm, de
2-3 ori in directii diferite, cu ajutorul unei rigle. Daca mediul este transparent , citirea se
poate efectua direct pe fundul placii, iar pe placile cu geloza sange masurarea diametrelor
zonei de inhibitie se face la suprafata mediului.
Se iau in considerare diametrele zonelor de inhibitie: zona lipsita de colonii
microbiene vizibile cu ochiul liber, inclusiv diametrul discului cu antibiotic. Se iau in
considerare coloniile bine dezvoltate aparute in interiorul zonei de inhibitie. Acestea pot
reprezenta mutante rezistente, in cadrul unei populatii microbiene predominant sensibile;
ele se vor repica si retesta .
DOCUMENTE DE REFERINTA