1) Programare numere rosii, -2) programare rar, dosar de inmatriculare luata in evidenta

taxa si impozite, taxa de certificat, dosarul dus dupa rar, inainte de 2) programare
numere definitive pe site mai 0219672
2) Birou 2 declaratii.

Biochimia homocisteinei în
normal și în patologii

Matei Baciu-student anul 1

Introducere
Homocisteina este derivată din aminoacidul esențial metionină și joacă un rol vital în
homeostazia celulară la om. Nivelurile de homocisteină depind de sinteza acesteia, implicând
metionina adenoziltransferaza, metiltransferaze dependente de S-adenosilmetionină, cum ar fi
glicină N-metiltransferaza și S-adenozilhomocisteină hidrolaza; remetilarea sa la metionină de
către metionin sintază, care necesită metionin sintază reductază, vitamina B (12) și 5-
metiltetrahidrofolat produs de metilentetrahidrofolat reductază sau betain metiltransferaza; și
degradarea acesteia prin transsulfurare implicând cistationin beta-sintaza. Controlul
metabolismului homocisteinei implică modificări ale conținutului de țesut sau ale
proprietăților cinetice inerente ale enzimelor. În special, S-adenosilmetionina acționează ca un
comutator între remetilare și transsulfurare prin inhibarea sa alosterică a metilentetrahidrofolat
reductazei și activarea cistationinei beta-sintazei.
Alelele mutante ale genelor pentru aceste enzime pot duce la pierderea severă a
funcției și la diferite severități ale bolii. Mai multe defecte duc la hiperhomocisteinemie
severă, cea mai frecventă formă fiind deficitul de cistationin beta-sintaza, cu peste o sută de
mutații raportate. Creșterile mai puțin severe ale homocisteinei plasmatice sunt cauzate de
deficiența de folat și vitamina B (12), iar boala renală și hiperhomocisteinemia moderată sunt
asociate cu mai multe stări comune de boală, cum ar fi bolile cardiovasculare. Toxicitatea
homocisteinei este probabil directă sau cauzată de nivelurile perturbate ale metaboliților
asociați; de exemplu, reacții de metilare prin S-adenosilomocisteină crescută.
Fiecare compus, metionina sau homocisteina, este precursorul celuilalt. În mod similar,
sinteza unuia este mecanismul de detoxifiere a celuilalt. Ciclul omniprezent al metioninei este
baza metabolică a acestei relații. În unele țesuturi, calea de transsulfurare deviază
homocisteina din ciclu și oferă un mijloc pentru sinteza cisteinei și a derivaților săi.
Metabolismul metioninei (sau homocisteinei) este reglat de dispunerea homocisteinei între
aceste secvențe concurente. Ambele căi necesită cofactori derivați din vitamine, piridoxină
pentru transsulfurare și atât folați cât și cobalamină în ciclul metioninei.
Consecințele clinice ale perturbării acestor căi au fost evidente mai întâi în erorile înnăscute
rare ale metabolismului care provoacă homocistinurie, dar studiile recente se concentrează pe
„hiperhomocisteinemia” - o afectare metabolică mai mică care poate rezulta din variații
genetice, patologie dobândită, toxicitate și inadecvare nutrițională. Hiperhomocisteinemia este
un factor de risc independent pentru bolile trombovasculare, totuși nu este clar dacă
concentrația minimă crescută a aminoacidului este agentul cauzal sau doar un marker al
patologiei. Până nu rezolvăm această întrebare nu putem prezice potențiala eficacitate a
terapiilor bazate pe administrarea de folați cu sau fără cobalamină și piridoxină suplimentare.
Metode
Prezentul studiu a fost aprobat de Comitetul de etică al celui de-al patrulea spital afiliat al
Universității Medicale din Harbin (Harbin, China). Toți subiecții participanți au fost informați
cu privire la drepturile lor și a fost obținut consimțământul informat scris. Un total de 161 de
probe de sânge a jeun au fost obținute de la pacienți cu vârsta cuprinsă între 25 și 79 de ani în
timpul examinării fizice de rutină la Departamentul Centrului de Examinare Fizică al
Spitalului Afiliat al IV-lea al Universității Medicale din Harbin, între 5 aprilie și 18 aprilie
2015.
Probele au fost împărțite în grupări cu homocisteină seric ridicată și scăzută pe baza unui prag
de 15,0 µmol/l nivel de homocisteină seric. Pacienții au fost chestionați cu privire la stilul lor
de viață, inclusiv statutul de fumat (nefumătorii au fost identificați ca nu au fumat niciodată
sau s-au oprit de fumat în urmă cu > 1 an) și consumul de alcool (ne-băutorii au fost
identificați ca nu au consumat alcool în ultimele 2 săptămâni și nu au consumat >38% alcool
v/v și >200 ml în luna precedentă). De asemenea, pacienții au fost întrebați dacă au fost deja
diagnosticați cu boală vasculară.
Pentru a preveni bolile vasculare și obiceiurile nesănătoase care afectează rezultatele
prezentului studiu, pacienții care aderă la următoarele criterii au fost excluși din studiu:
hipertensiune arterială, diabet zaharat, hiperlipemie, obezitate, boală coronariană,
ateroscleroză, accident vascular cerebral, embolie cerebrală și beneficiari de suplimente cu
acid folic și/sau vitamina B12. Hipertensiunea arterială a fost diagnosticată când tensiunea
arterială sistolică (TAS) era ≥140 mmHg și/sau tensiunea arterială diastolică (TAD) era ≥90
mmHg. Diabetul a fost diagnosticat atunci când nivelul glucozei plasmatice a jeun a fost ≥6,1
mmol/l. Hipercolesterolemia și hiperlipemia au fost definite ca colesterol total ≥6,22 mmol/l
și respectiv trigliceride ≥2,26 mmol/l, conform Ghidului de prevenire a dislipidemiei la adulți
chinezi din 2007.
Obezitatea a fost definită ca având un indice de masă corporală (IMC) ≥28,00 kg/m2,
conform Ghidurilor din 2006 pentru prevenirea și controlul obezității la adulții chinezi (20).
Boala coronariană a fost confirmată prin angiografie coronariană. Accidentul vascular
cerebral, ateroscleroza și embolia cerebrală au fost diagnosticate prin tomografie
computerizată. Un total de 86 de probe au fost excluse și 75 de eșantioane au fost reținute
pentru investigații suplimentare.
Polimorfismele independente de nucleotide asociate cu tHcy (n = 14), folat (n = 2), vitamina
B6 (n = 1) și vitamina B12 (n = 14) la nivelul de semnificație la nivelul genomului au fost
selectate ca variabile instrumentale. Datele la nivel rezumat pentru 12 obiective
cardiovasculare au fost obținute de la consorții genetice, studiul Biobank din Marea Britanie
și consorțiul FinnGen.
Rezultate
Valorile medii ale concentrației serice de homocisteină în grupele cu homocisteină
seric ridicată și scăzută au fost 29,4 și, respectiv, 11,9 µmol/l. Caracteristicile clinice
biochimice ale probelor sunt rezumate în Tabelul I. Nu au fost identificate diferențe
semnificative între cele două grupuri pentru următoarele caracteristici: Sex, vârstă, FSG, TC,
HDL-C, LDL-C, TAD, SBP și IMC.

Un total de 75 de probe de ser au fost analizate prin HPLC cuplat la ESI(+)- sau
ESI(-)-MS. Datele brute din analizele individuale au fost supuse unei alinieri neliniare a
datelor. Statisticile univariate au fost utilizate pentru a verifica caracteristicile diferențiale
dintre grupurile cu homocisteină seric ridicată și scăzută, iar statisticile multivariate au fost
utilizate pentru a determina separarea grupurilor. În modul ESI(+), au fost detectate un total
de 1.949 de caracteristici, dintre care 695 (35,7%) au prezentat diferențe semnificative între
cele două grupuri (P<0,05 ajustat FDR;). Analiza corelației a arătat că 269 (13,8%) dintre cele
1.949 de caracteristici diferite sunt corelate cu nivelul de homocisteină seric (FDR <0,05),
variind de la 0,41 la 0,65 pentru 59 de caracteristici de corelație pozitivă și de la -0,68 la -0,41
pentru 210 de caracteristici de corelație negativă. În modul ESI(−), au fost detectate un total
de 1.721 de caracteristici, dintre care 157 (9,1%) au prezentat diferențe semnificative între
cele două grupuri (FDR <0,05), iar un total de 69 (4,0%) din cele 1.721 de caracteristici au
prezentat corelații clare cu nivelul de homocisteină seric (FDR <0,05), variind de la 0,40 la
0,68 pentru 32 de caracteristici de corelație pozitivă și de la -0,63 la -0,39 pentru 37 de
caracteristici de corelație negativă. Căutările în baza de date Matlin au arătat că doar 36 de
mase precise care reprezentau diferențe semnificative și caracteristici corelate au fost potrivite
și au fost selectați cei 77 de compuși corespunzători.

Analiza componentei principale a celor 36 de caracteristici menționate mai sus (adică,

reprezentarea grafică a componentului principal 1 față de componenta principală 2) a
evidențiat o separare a grupurilor de eșantion de homocisteină seric ridicat și scăzut (Fig. 2).
În modul ESI(+)-MS, valoarea medie a probelor din grupul de nivel scăzut a fost de 10,8
µmol/l în comparație cu cea a grupurilor de nivel înalt (39,1 µmol/l) în zona neînchegată.
(Fig. 2A). Cu toate acestea, o parte a probelor dintr-un grup a fost dispersată în celălalt grup
în zone strânse unite și au prezentat niveluri similare de homocisteină seric: Valoarea medie a
probelor de nivel scăzut în zona strânsă a fost de 14,3 µmol/l, comparativ cu probele de nivel
înalt (16,6 µmol/l). Separare similară a fost găsită în modul ESI(-)-MS (Fig. 2B). În modul
ESI(−)-MS, valoarea medie a probelor din grupul de nivel scăzut a fost de 11,2 µmol/l în
comparație cu cea a grupurilor de nivel înalt (36,8 µmol/l) în zona neînchegată. (Fig. 2B).
 Valoarea medie a probelor de nivel scăzut în zona strânsă a fost de 14,5 µmol/l,
comparativ cu probele de nivel înalt (17,0 µmol/l). În general, poate exista o suprapunere între
clase datorită pragurilor subiective de clasificare a homocisteinei serice, care a fost stabilit la
15,0 µmol/l.
Au fost analizate căile metabolice care au fost semnificativ îmbogățite pentru cei 77 de
compuși menționați mai sus potriviți în baza de date Matlin și au fost identificate două căi ;
FDR <0,05). Prima cale îmbogățită a fost metabolismul acidului arahidonic
(FDR=8,01×10−8), care joacă un rol important în homeostazia vasculară; un total de 17
compuși care au fost potriviți în baza de date Matlin s-au dovedit a fi implicați în această cale
(Fig. 3A; Tabelul VI). A doua cale a fost metabolismul acidului linoleic (FDR = 1,72 × 10-2)
și un total de 4 compuși care au fost potriviți în baza de date Matlin au fost implicați în
această cale (Fig. 3B; Tabelul VII). Cu toate acestea, a fost observată un tip de relație „unu-la-
mulți” între masa exactă și compușii identificați în baza de date Matlin. M321T139, de
exemplu, a potrivit 9 compuși din baza de date Matlin și toți cei 9 compuși au fost adnotați în
calea metabolismului acidului arahidonic. Acest lucru sugerează că cel puțin unul dintre cei 9
compuși a fost metabolizat anormal în calea acidului arahidonic. În acest caz, rata fals
pozitive a analizei de îmbogățire a căii poate să fi fost mărită.

Pentru a obține rezultate mai fiabile în analiza căii, relațiile unu-la-mulți dintre masa
exactă și compuși au fost eliminate în cele două căi dovedite a fi semnificative și doar un
compus a fost reținut aleatoriu în fiecare unu-la- multe relații. Indiferent de care un compus a
fost reținut în relațiile unu-la-mai multe, nu a existat niciun efect asupra semnificației în
analiza MetaboAnalyst 3.0. Ulterior, îmbogățirea căii metabolice a fost reanalizată folosind
MetaboAnalyst 3.0 și s-a dezvăluit că metabolismul acidului arahidonic (FDR=0,02) și
metabolismul acidului linoleic (FDR=0,12) au rămas primele două căi îmbogățite
semnificativ cu cei 21 de compuși reținuți.
Nivelurile mai ridicate de tHcy circulante prezise genetic au fost asociate cu un risc
crescut de accident vascular cerebral. Pentru fiecare creștere cu o abatere standard (SD) a
nivelurilor de tHcy prezise genetic, cota cotelor (OR) a fost 1,11 (interval de încredere (IC)
95%, 1,03, 1,21; p = 0,008) pentru orice accident vascular cerebral, 1,26 (IC 95%, 1,05, 1,51;
p = 0,013) pentru hemoragia subarahnoidiană și 1,11 (IC 95%, 1,03, 1,21; p = 0,011) pentru
accidentul vascular cerebral ischemic. Niveluri mai ridicate de acid folic prezise genetic au
fost asociate cu risc scăzut de boală coronariană (ORSD, 0,88; 95% CI, 0,78, 1,00, p = 0,049)
și orice accident vascular cerebral (ORSD, 0,86; 95% CI, 0,76,  =0,97, p 0,049) ). Nivelurile
crescute de vitamina B6 prezise genetic au fost asociate cu un risc redus de accident vascular
cerebral ischemic (ORSD, 0,88; 95% CI, 0,81, 0,97, p = 0,009). Niciuna dintre aceste asocieri
nu a persistat după corectarea testelor multiple. Nu a existat nicio asociere între vitamina B12
prezisă genetic și bolile cardiovasculare.
 Discuții
Rezultatele studiului de față au demonstrat o separare între grupurile de homocisteină
seric ridicat și scăzut folosind caracteristicile corelate detectate în modurile ESI(+) și ESI(-).
În plus, analiza căii metabolice a arătat că metabolismul acidului arahidonic și metabolismul
acidului linoleic au fost semnificativ îmbogățiți pentru compușii potriviți în baza de date
Matlin. Aceste rezultate au indicat că nivelurile serice de homocisteină pot afecta
metabolismul acidului arahidonic și acidului linoleic și, ulterior, pot contribui la dezvoltarea
bolilor vasculare. S-a raportat anterior că homocisteina are potențialul de a perturba
metabolismul acidului arahidonic prin demetilarea ADN-ului in vitro.
O serie de studii anterioare au sugerat că metabolismul acidului arahidonic a jucat un
rol important în bolile vascular. Acidul arahidonic este un acid gras liber derivat din
fosfolipidele membranei , care este catalizat de fosfolipaza A2 și metabolizat în sute de
metaboliți prin trei căi: căile ciclooxigenazei (COX), lipoxigenazei (LOX) și citocromului
P450 (CYP450). Diferiții metaboliți ai acidului arahidonic au roluri diferite în patogeneza
bolilor vasculare și un total de 17 compuși adnotați în calea metabolismului acidului
arahidonic pot fi împărțiți în trei grupe principale: prostaglandine, acizi
hidroxieicosatetraenoici (HETE) și acizi epoxieicosatrienoici (EET). Prostaglandinele sunt
molecule bioactive cruciale care sunt derivate din calea COX și din sinteza ulterioară a
prostaglandinelor și au fost implicate în inflamație HETE sunt metaboliți în calea LOX și au
fost implicați în numeroase procese biologice, cum ar fi angiogeneza și activarea
trombocitelor . EET-urile sunt metaboliți din calea CYP450 și pot acționa ca mediatori
antihipertensivi și antiaterosclerotici ai sistemului vascular. Prin urmare, un metabolism
dezechilibrat al acidului arahidonic în vascular poate duce la o afectare a homeostaziei
vasculare și la dezvoltarea ulterioară a bolii vasculare.
Creșterea Hcys la nivelul plasmei a fost demonstrată ca un factor de risc în bolile
oculare, cum ar fi CRVO, ARMD, neuropatia optică și retinopatia diabetică. În aceste studii,
nivelurile plasmatice de Hcys au fost corelate cu starea bolii. Umoarea apoasă Hcys a fost
asociată cu pseudoexfoliere (PEX) și glaucom. Nivelul lacrimal Hcys în glaucom a fost
raportat de Roedl et al. Cu toate acestea, am găsit un singur studiu asupra nivelurilor de Hcys
în vitros. Aydemir et al. au arătat o creștere a Hcys în corpul vitros al ochilor cu PDR care s-a
corelat cu nivelurile plasmatice de Hcys în comparație cu corpul vitros din ochi cu boli
oculare neproliferative. În studiul de față, raportăm că nivelurile de Hcys vitros sunt crescute
la ochi cu PDR, o afecțiune asociată cu neovascularizare, și în RRD, în care nu există
neovascularizare. În ambele aceste condiții, totuși, există modificări extinse ale ECM. În
studiul nostru anterior am arătat că LOX, enzima de reticulare a colagenului, a scăzut
semnificativ activitatea cu o creștere a MMP-2 în RRD și MMP-9 în PDR, care indică
activitatea ECM modificată în aceste două boli vitreoretinale.
Deși etiologia PDR și RRD este diferită, nivelul crescut de Hcys în PDR se poate
datora unei modificări mediate de Hcys a permeabilității barierei retiniene interioare, în timp
ce în RRD s-ar putea datora unei defecțiuni exterioare a barierei sangvine-retiniene. Pierderea
permeabilității barierei sânge-retiniene și ruperea barierei sânge-retiniene (exterioară și
interioară) pot crește difuzia Hcys în corpul vitros. Faptul că în RRD există un nivel
semnificativ mai mare de Hcys în comparație cu PDR, indică faptul că gradul diferit de
defalcare exterioară a barierei hemato-retiniene care poate crește nivelurile de Hcys vitros.
Sen şi colab. au sugerat că acumularea crescută de Hcys este asociată cu remodelarea
matricei, cum ar fi sinteza colagenului de tip 1 și activitatea metaloproteinazei matriceale
(MMP)-9. Studiile au arătat că Hcys crește sinteza MMP-2 și -9 în celulele endoteliale și
celulele musculare netede vasculare. Modificări caracteristice ale nivelurilor activității MMP-
2 și -9 atribuite remodelării ECM au fost raportate atât în PDR 37 38 39 cât și în RRD. Prin
urmare, nivelurile crescute de Hcys în vitros ar putea fi un factor cauzator al activității
crescute a MMP-2 și -9, degradând astfel ECM.
Hcys modulează modificările ECM nu numai prin activarea MMP-urilor, ci și prin
reglarea în jos a LOX. Prezentul studiu arată o corelație negativă semnificativă între Hcys și
LOX, atât în RRD, cât și în PDR, care este fundamentată de nivelul mediu mai ridicat de
Hcys în vitrosul ochilor cu RRD, comparativ cu cei cu PDR. Raposo și colab. au raportat că
concentrațiile patofiziologice de Hcys (35 μM) au inhibat activitatea LOX și expresia ARNm
în celulele endoteliale aortice porcine de cultură. Ei au observat că gruparea Hcys tiol și
stresul oxidativ declanșat de autooxidarea acestui aminoacid sunt implicate în inhibarea LOX.
Rodríguez și colab. au raportat, de asemenea, că LOX vascular este reglat în jos în stadiile
incipiente ale aterosclerozei și crește în stadiile avansate. Scăderea expresiei vasculare a LOX
a fost raportată, de asemenea, la șobolanii diabetici, cu o scădere concomitentă a
componentelor ECM.
În afară de activarea MMP-urilor și reglarea în jos a LOX, o revizuire recentă a
Toohey propune că toxicitatea Hcys poate provoca boli ale țesutului conjunctiv. El a propus
că mercaptoaldehida formată din tiolactona Hcys poate afecta metabolismul colagenului prin
epuizarea acidului ascorbic necesar pentru sinteza colagenului sau poate provoca reticulare
anormală a colagenului. Deși există o sinteză și o descompunere continuă a colagenului,
reglarea turnover-ului colagenului în bolile vitreoretinale precum PDR și RRD nu este încă
foarte clară. Studiile sugerează sinteza de colagen vitros care are loc în principal prenatal, deși
există un nivel scăzut de producție, chiar și la vârsta adultă. Prezentul studiu a arătat niveluri
semnificativ crescute de hidroxiprolină în corpul vitros al ochilor cu PDR și RRD, în
comparație cu globul vitros al donatorului, care prezintă un turnover crescut de colagen. Cu
toate acestea, nu a fost observată nicio corelație semnificativă între nivelurile de
hidroxiprolină și activitatea LOX în acest studiu. Inhibarea LOX favorizează prezența
formelor solubile de colagen care sunt foarte susceptibile la degradare de către MMP. Astfel,
creșterea turnover-ului de colagen reflectă o ECM modificată. Ar trebui investigat dacă
creșterea Hcys care se corelează cu scăderea LOX poate duce la o reticulare inadecvată a
colagenului.
Concluzie
S-au evidentiat efectele homocisteinei asupra modificărilor metabolice în serul uman.
Rezultatele au sugerat că căile metabolice ale acidului arahidonic și acidului linoleic pot fi
implicate în boala vasculară indusă de homocisteină. Aceste date au relevat un efect nou al
homocisteinei în bolile vasculare și pot avea semnificație clinică pentru tratamentul acestor
boli.
Bibliografie
1. Bin Li,  Guangqiang Gao, Wanying Zhang, Bowen Li. Metabolomics analysis reveals an
effect of homocysteine on arachidonic acid and linoleic acid metabolism pathway. Molecular
med. February 27, 2018; 6261-6268.
2. Perła-KajánJ, TwardowskiT, JakubowskiH. Mechanisms of homocysteine toxicity in
humans. Amino Acids. 2007;32(4)561–572. 
3. LominadzeD, RobertsAM, TyagiN, MoshalKS, TyagiSC. Homocysteine causes
cerebrovascular leakage in mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2006;290(3)H1206–
H1213. 
4. MoshalKS, SenU, TyagiN, et al. Regulation of homocysteine-induced MMP-9 by ERK1/2
pathway. Am J Physiol Cell Physiol. 2006;290(3)C883–C891.

5. LiebermanTW, PodosSM, HartsteinJ. Acute glaucoma, ectopia lentis and homocystinuria.

Am J Ophthalmol. 1966;61(2)252–255. 
6. RoedlJB, BleichS, ReulbachU, et al. Homocysteine in tear fluid of patients with
pseudoexfoliation glaucoma. J Glaucoma. 2007;16(2)234–239. 
7. StangerO, WegerM, ObeidR, et al. Impairment of homocysteine metabolism in patients
with retinal vascular occlusion and non-arteritic ischemic optic neuropathy. Clin Chem Lab
Med. 2005;43(10)1020–1025. 
8. CoralK, RamanR, RathiS, et al. Plasma homocysteine and total thiol content in patients
with exudative age-related macular degeneration. Eye. 2006;20(2)203–207. 
9. NarayanasamyA, SubramaniamB, KarunakaranC, et al. Hyper-homocysteinemia and low
methionine stress are risk factors for central retinal venous occlusion in an Indian population.
Invest Ophthalmol Vis Sci. 2007;48(4)1441–1446. 
10. BrazionisL, RowleyK, Sr, ItsiopoulosC, HarperCA, O'DeaK. Homocysteine and diabetic
retinopathy. Diab Care. 2008;31(1)50–56. 
11. MooreP, El-sherbenyA, RoonP, SchoenleinPV, GanapathyV, SmithSB. Apoptotic cell
death in the mouse retinal ganglion cell layer is induced in vivo by the excitatory amino acid
homocysteine. Exp Eye Res. 2001;73:45–57. 
12. ReichsteinD, RenL, FilippopoulosT, MittagT, DaniasJ. Apoptotic retinal ganglion cell
death in the DBA/2 mouse model of glaucoma. Exp Eye Res. 2007;84:13–21. 
13. PoloschekCM, FowlerB, UnsoldR, LorenzB. Disturbed visual system function in
methionine synthase deficiency. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2005;243:497–500. 
14. TooheyJI. Homocysteine toxicity in connective tissue: theories, old and new. Connect
Tissue Res. 2008;49(2)57–61. 
15. SenU, TyagiN, KumarM, et al. Cystathionine-beta-synthase gene transfer and 3-
deazaadenosine ameliorate inflammatory response in endothelial cells. Am J Physiol Cell
Physiol. 2007;293(6)C1779–C1787. 
16. DoronzoG, RussoI, MattielloL, TrovatiM, AnfossiG. Homocysteine rapidly increases
matrix metalloproteinase-2 expression and activity in cultured human vascular smooth muscle
cells: role of phosphatidyl inositol 3-kinase and mitogen activated protein kinase pathways.
Thromb Haemost. 2005;94(6)1285–1293. 
17. MoshalKS, SenU, TyagiN, et al. Regulation of homocysteine-induced MMP-9 by ERK1/2
pathway. Am J Physiol Cell Physiol. 2006;290(3)C883–C891. 
18. JinM, KashiwagiK, IizukaY, TanakaY, ImaiM, TsukaharaS. Matrix metalloproteinases in
human diabetic and nondiabetic vitreous. Retina. 2001;21:28–33. 
19. NodaK, IshidaS, InoueM, et al. Production and activation of matrix metalloproteinase-2 in
proliferative diabetic retinopathy. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003;44:2163–2170. 
20.De La PazMA, ItohY, TothCA, NagaseH. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in
human vitreous vitreoretinal diseases. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1998;39:1256–1260. 
21.Abu El-AsrarAM, DralandsL, VeckeneerM, et al. Gelatinase B in proliferative
vitreoretinal disorders. Am J Ophthalmol. 1998;125:844–851. 
22. KonCH, OcclestonNL, CharterisD, DanielsJ, AylwardGW, KhawPT. A prospective study
of matrix metalloproteinases in proliferative vitreoretinopathy. Invest Ophthalmol Vis Sci.
1998;39:1524–1529.