Investigarea tulburarilor echilibrului leucocitar

1.Numararea leucocitelor – tehnica, valori normale, variatii patologice

2.Formula leucocitara - tehnica, valori normale, variatii patologice
3.Teste de diagnostic in leucemii: variatia numarului de leucocite si formulei leucocitare in leucemii
4.Teste de diagnostic in leucemii: modificari ale frotiului de maduva, examenele citochimice si
citoenzimatice in leucemii

1.Numararea leucocitelor – tehnica, valori normale, variatii patologice

Tehnica:
-se realizeaza cu ajutorul analizatorului automat prin metoda citometrie in flux cu fluorescenta
-dupa liza hematiilor analizatorul coloreaza leucocitele cu o substanta fluorescenta cu afinitate pt acizi
nucleici
-numararea manuala se realizeaza cand numar leucocitelor e prea mare sau prea mic
VN: 4000-9000 mmc
Instrumente:
-pipeta Potain cu bila alba pentru leucocite
-camera de numarat Burker-Turck
-lichid de dilutie Turk
-sange
Tehnica:
-se aspira sange pana la diviziunea 0,5
-se aspira lichid de dilutie Turk pana la diviziunea 11
-sa omogenizeaza 3 minute
-se arunca primele 2-3 picaturi
-se umple camera de numarat Burker-Turk
-se numara 4 patrate de 1mm^2 din cele 4 colturi ale camerei deci 4mm^2
Calcul:
-se face corectia de inaltime (1/10) si de dilutie (1/20)
nr de leucocite= Mx10x20
Leucocitoza:>10000 mmc
fiziologic: sarcina, stres, efort fizic intens, hemoconcentratie
patologic: inflamatii, infectii
Leucopenie: <4000 mmc
fiziologic: surmenaj fizic, varstnici
patologic:prin inhbitie medulara , distrugeri exagerate (hipersplenism)

2.Formula leucocitara - tehnica, valori normale, variatii patologice

Tehnica:
-se realizeaza cu ajutorul analizatorului automat
-cand valorile rezultate sunt prea mari sau prea mici, cand aparatul semnalizeaza celule anormale sau
in esecul aparatului de a indica FL, se realizeaza manual
-se realizeaza un frotiu de sange venos(recoltat pe EDTA deoarece heparina poate produce deformari
ale leucocitelor) sau sange capilar in coloratie May Grunwald-Giemsa si se examineaza la
microscopul optic sau cu imersie
Calcul:
FL= raportul procentual al leucocitelor pe frotiu dupa numararea cel putin a 100 de elemente
Valori nomale:
B= 0-1%
E= 1-4%
M= 4-8%
L= 20-40%
N= 50-70%
Variatii patologice:
Neutrofile: 50-70%
Neutrofilie >6500 mmc
1. Infectii localizate sau generale: fungice, bacteriene, parazitare
2. Inflamatii: arsuri, infarct miocardic, boli de colagen (sclerodermie, poliartrita reumatoida ,
lupus eritematos sistemic)
3. Afectiuni mieloproliferative: leucemia mieloida cronica, neoplasme ( gastrice, uterine,
pulmonare, pancreatice)
4. Hemoragia sau hemoliza acuta
5. Afectiunie endocrine sau metabolice: hipertiroidism, cetoacidoza diabetica
Neutropenie <1500 mmc
1. Infectii virale: rujeola, rubeola, varicela, SIDA, gripa
2. Deficit de acid folic sau vitamina B12
3. Medicamentoasa: citostatice, antitiroidiene, AINS, anticonvulsivante
4. Afectiuni hematologice: leucemii, limfoame, aplazii medulare
5. Afectiuni asociate cu splenomegalie: sdr. Felty (artrita reumatoida + splenomegalie),
sarcoidoza
Eonzinofile: 1-4%
Eonzinofilie >500mmc
1. Infectii parazitare: trichinoza, echinocoza, giardioza
2. Afectiuni alergice: astm bronsic, reactii alergice, rinita alergica, urticarie
-hipersensibilitate de tip 1 (imediata sau anifilactica)
-nu se manifesta la primul contact cu antigenul
-mediata de IgE, se fixeaza pe suprafata mastocitelor si a bazolifelor ==> degranularea unor mediatori
preformati (histamina) si la sinteza de noi mediatori derivati din ac arahidonic (prostaglandine, leukotriene)
-histamina si serotonina au actiune vaselor si det vasodil si cresterea permeabilitatii vasculare si au efect
chemotactic asupra eonzinofilelor !!!!
3. Afectiuni maligne: LMC, leucemia cu eonzinofilie, postsplenesctomie
4. Sdr de hipereonzinofilie: Sdr Loeffler (infiltrat pulmonar cu eonzinofile), boli vasculare de
colagen (periatrita nodoasa, dermatomiozita)
Eonzinopenie <500 mmc
semnificatie clinica este redusa
explicata prin scaderea mobilizarii rezervelor medulare
insosita de neutrofilia
cele mai comune cauze de scade usoara/moderata:
1. stres acut/cronic
2. strs emotional/somatic
3. cauze endocrine: exces de ACTH, cortizon, epinefrina
Bazofile 0-1%
Bazofilie >80 mmc
LMC
Afectiuni alergice: astm, urticarie, soc anafilactic
Afectiuni proliferative: LMC, policitemia vera, mielofribroza
Alte afectiuni: postsplenectomie, mixedem, boala Hodkin, colita ulceroasa, varicela
Bazopenie
stres
adm de corticoizi

Corticoterapie:
+ neutrofilie
- bazopenie
- eonzinopenie
- limfopenie
- monocitopenie

Limfocite 20-40%
Limfocitoza >2500 mmc
2 tipuri : relativa (nr total de limfocite circulante e neschimbat dar nr de globule albe e scazut datorita
neutropeniei ) si absoluta (nr de limfocite circulante creste)
Limfocitoza relativa ⇒ conditiile mentionate la neutropenie
Limfocitoza absoluta:
● Limfocitoza usoara :
Infectii virale cu exantem ( rubeola, rujeolam varicela, tuse convulsiva, parotidita epidemica)
Infectii ba cteriene cronice : tuberculoza, sifilis, bruceloza
Afectiuni endocrine: insuficienta corticosuprarenaliana, tireotoxicoza
● Limfocitoza + leucocitoza marcata
LLC
● Limfocitoza marcata + leucocitoza
Boli infectioase acute (pertussis, mononucleaza infectioasa, limfocitoze)
● Cea mai frecventa cauta de limfocitoza severa : Leucemia limfocitara cronica asociata cu
cresterea globulelor albe
Limfopenie <1200 mmc
falsa ⇒ prin cresterea nr de granulocite
reala
Imunodeficienta secundare : SIDA
Postradioterapie/ indusa medicamentos
Boli maligne : aplazii medulare, limfoame
Altele : LES, mixedem
Monocite 4-8%
Monocitoza>750 mmc
Boli infectioase: endocardita bacteriana, bruceloza(limfocitoza usoara), mononucleaza infectioasa
(limfocitoza), malarie, TBC pulmonar
Maligne: leucemii monocitare si mielomonocitare, neoplasm de ovar/san/rinichi/gi
Boli granulomatoase: sarcoidoza, boala Crohn
Monocitopena <240 mmc
Aplazia med primara sau dupa toxice med
Indusa medicamentos: imunosupresoare, corticoterapie

3.Teste de diagnostic in leucemii: variatia numarului de leucocite si formulei leucocitare

Leucemiile acute
=caract prin proliferarea maligna a celulelor tinere(blasti) cu blocarea maturatiei
de 2 tipuri :
LA limfoblastica
LA mieloblastica
Diagnostic paraclinic:
1.Numararea leucocitelor din sangele periferic
peste 80.000-100.000 mmc ⇒ forme leucemice
50.000-60.000 mmc ⇒ forme subleucemice
10.000-15.000 mmc ⇒ forme aleucemice
2.Examenul frotiului de sange periferic
● caract la examenul sangelui periferic in LA este evidentierea “hiatusului leucemic” adica
formula lecucocitara cuprinde celule blastice in proportie de 90% si restul de 10% forme
adulte normale, fara forme intermediare de maturatie celulare
in LAL => 90% limfoblasti + 10% cel mature
in LAM => 90% mieloblasti + 10% cel mature
● particularitatile blastilor la coloratia uzuala (MGG) sugereaza tipul de leucemie
prezenta corpilor Auer : LAM2, LAM3

citoplasma bazofila vacuolizata: LAL3

Leucemiile cronice:
=caract prin proliferarea maligna a cel mature si a celor aflate in stadii intermediare de maturatie
de 2 tipuri :
● LC mieloida
a)faza acuta ⇒ imbraca aspectul unei leucemii acute (sindrom anemic, infecios si hemoragic)
b)fara cronica (mieloproliferativa)
1.Numararea leucocitelor:
peste 100.000 mmc ⇒ forme leucemice
50.000-60.000 mmc ⇒ forme subleucemice
citodiabaza (trecerea elementelor figurate din maduva osoasa in sangele periferic) nu este mult
afectata in leucemiile cronice astfel incat nr de leucocite este foarte mare (100.000-300.000 mmc)
2.Studiul frotiului de sange periferic:
evidentiaza hipercelularitate cu prezenta cel in diverse stadii de maturatie
granulocitele adulte sunt rare
domina granulocitele neutrofile
sunt rep toti precursorii seriei mieloide⇒ toate treptele de maturatie de la mieloblast la granulocit
segementat (predomina mielocitele, metamielocitele si neutrofilele segmentate )
nr blastilor nu depaseste 5%
eonzinofilia si bazofilia sunt elemente importante de diagnostic
● LC limfatica
1.Numararea leucocitelor:
este crescut intre 20.000-200.000 mmc
2.Studiul frotiului de sange periferic:
in formula leucocitara predomina limfocitele mature (60-90%)
caract este prezenta umbrelor nucleare Gumprecht care apar sub forma de nuclei fara citoplasma
deoarece leucemice fiind foarte fragile, se distrug la intindere pe lama

4.Teste de diagnostic in leucemii: modificari ale frotiului de maduva, examenele citochimice si

citoenzimatice in leucemii
Leucemiile acute:
 1.Modificari ale frotiului de maduva:
normal: pop cel a maduvei hematogene ⇒ 50.000-80.000 mm3
aprox ⅔ seria granulocitara
⅓ seria eritrocitara
alte cel: limfocite, cel reticulare, megacariocite
in leucemii:
hipercelularitate monoforma det de infiltrare blastica
serii mielodie normale/reduse/ uneori inexistente
prezenta blastilor peste 30% ⇒ criteriul pt diagnosticul de certitudine al LA
2.Examene citochimice si citoenzimatice
sunt utile pt evidentierea tipului blastic proliferat
necesar pt stabilirea atitudinii terapeutice si a prognosticului
➢ testul peroxidazelor
sunt enzime prezente in granulocite
POX + ⇒ LAM
POX - ⇒ LAL
➢ col negru de Sudan
colorantul are afinitate pt fosfolipide si steroli, aceeasi semnificatie ca si testul
peroxidazelor, dar este mai sensibilă
+ ⇒ LAM (peste 3% din blasti se coloreaza)
- ⇒ LAL (nu se coloreaza)
➢ testul esterazelor
naftol acetatul si derivatii sai sunt hidrolizati de esteraza celulara
esterazo-pozitiv ⇒ LAM (M1-M3, si negativ in M5)
esterazo-negativ ⇒ LAL
➢ reactia PAS
in prezenta PAS glicogenul si alti compusi organici care contin hidrati de carbon sunt
pusi in evidenta prin coloratie rosie aprins
normal⇒ continutul de glicogen este redus in limfocitele, dar in leucemii creste
PAS + ⇒ LAL + LAM5 / uneori si in LAM6 (eritroleucemia)
PAS - ⇒ LAM
Leucemiile cronice:
LMC:
1.Modificari in frotiul de madua osoasa :
hiperplazie medulara pe seria granulocitara
granulocitele adulte au putine granulatii sau sunt agranulate
repartizarea cel seriei granulocitare este aproape identica cu cea observata in sangele periferic
2.Examene citochimice si citoenzimatice :
cercetarea FAL contribuie la diferentierea leucemiilor de reactiile leucemoide
FAL +++ ⇒ reactii leucemoide , deoarece procentul de neutrofile este crescut, iar neutrofilele sunt
adulte si normale
FAL -/absenta ⇒ LMC, deoarece desi procentul de neutrofile adulte e crescut, acestea sunt
anormale si provin din proliferari maligne
LLC:
1.Examenul frotiului de maduva osoasa:
metaplazie med pe seria limfocitara (limf leucemice in prop 50-80%) cu reducerea seriei mielocitare
peste 30% limfocite din cel med