LP 7

Reacția de precipitare
Reacția de aglutinare
Serologie

• studierea serului sanguin

• identificarea în scop
diagnostic a Ac din ser
• poate identifica și Ag
Testele imunologice
• pot detecta un compus nociv:
• toxine, virusuri, bacterii greu de cultivat
• folosește avantajele naturii specifice a Ac

• creșterea cantității de Ac este un bun indicator

• creșterea cantității de Ac specifici este un indicator al expunerii și confirmă dg

• Ac se leagă, precipită și aglutinează

Termeni folosiți în evaluarea unei
metode de testare
Sensibilitate
• Sensibilitate analitică
• capacitatea testului de a detecta
cantități foarte mici dintr-o
substanță
• Sensibilitate clinică
• capacitatea testului de a da un
rezultat pozitiv dacă pacientul are
boala (nu dă rezultate fals
negative)
Specificitate
• Specificitate analitică
• capacitatea testului de a detecta
substanța fără reacții încrucișate
cu alte substanțe
• Specificitate clinică
• capacitatea testului de a genera u
rezultat negativ dacă pacientul nu
are boala (nu dă rezultate fals
pozitive)
Afinitatea
• forța legăturii dintre un epitop și
un paratop
• este suma forțelor de atracție și
de respimgere care intervin între
epitop și paratop
• este constanta de echilibru care
descrie reacția Ag-Ac
Aviditatea
• măsoară forța globală de legare
a unui Ag multivalent cu Ac
multivalenți
• este influențată atât de valența
Ag cât și a Ac
• este mai mult decât suma
afinităților individuale
Forțele de atracție dintre Ag și
Ac specific
• Electrostatice: între grupări ionice cu sarcini opuse (-NH3+ a lizinei și –COO-
a acidului aspartic)
• Legături de hidrogen: punți de hidrogen relativ slabe și reversibile între
grupări hidrofile (-OH, -NH2, COOH)
• Hidrofobe: catenele laterale hidrofobe, ne-polare ale aminoacizilor (valină
- Val, leucină – Leu, izoleucină – Ile) se apropie și exclud moleculele de apă
dintre ele. Forța de atracție crește.
• Van der Waals: depind de norii electronici externi

Forțe de atracție nespecifică

Reacția de precipitare
• Reacția Ag solubile cu Ac (în proporție adecvată) care conduce la
formarea de complexe imune insolubile (precipitat vizibil)
• Când interacționează suficiente molecule de Ag și Ac se pierde
solubilitatea complexelor și se formează un precipitat
• prea puține Ag puțin precipitat
• prea multe Ag nu se leagă încrucișat Ac la Ag
• Ex:
• Imunodifuzie: Ag și Ac reacționează în agar pentru a forma o bandă sau un inel de
precipitare
• Imunelectroforeză: un amestec complex de Ag este separat, apoi reacționează cu
Ac
Tipuri de reacție de precipitare
• Precipitarea în soluție
• Precipitarea în tub (testul inelului)
• Precipitarea în gel
• Dubla imunodifuzie (testul Ouchterlony)
• Imunodifuzia radială simplă (tehnica Mancini)
• Imunelectroforeza
• Rocket electroforeza
• Contraimunoelectroforeza

Aceste teste se fac în special în laboratoarele de biochimie.

Reacția de precipitare în tub
Reacția de precipitare în soluție
- într-o serie de eprubete se pipetează același volum dintr-o soluție de Ac
- deasupra se adaugă un volum (același în toate eprubetele) dintr-o soluție tot mai concentrată de Ag
- după un timp se remarcă tulburarea lichidului din eprubete
Reacția de precipitare în soluție
• După centrifugarea eprubetelor în care s-a produs reacția Ag-Ac se obține un precipitat
• Volumul precipitatului crește până într-un punct, dincolo de care scade
Reacția de precipitare în soluție – curba de precipitare
Curba de precipitare
 Reacția de precipitare în soluție
- cuantificare
- Intensitatea reacției de precipitare se realizează prin:
 turbidimetrie - măsoară scăderea intensității luminii la trecerea prin soluție
 nefelometrie – măsoară dispersia luminii monocromatice care străbate
amestecul de reacție
Reacția de
precipitare în gel

Interacțiunile Ag-Ac pot forma precipitate vizibile:

• Imunodifuzia radială simplă (Mancini)
• Dubla imunodifuzie (Ouchterlony)
• Imunelectroforeza
• Contraimunelectroforeza
• Imunoforeza contracurent
• Rocket electroforeza
Reacția de precipitare în gel
Tehnica Mancini (imunodifuzia radială simplă)
 Tehnica Mancini (imunodifuzia radială simplă)

Diametrul
inelului de
precipitare
Reacția de precipitare în gel: Tehnica Ouchterlony (dubla imunodifuzie în gel)

o linie de precipitare = 1 Ag

2 linii de precipitare = 2 Ag recunoscute de Ac

Reacția de precipitare în gel: Tehnica Ouchterlony (dubla imunodifuzie în gel)
Reacția de precipitare în gel: Tehnica Ouchterlony (dubla imunodifuzie în gel)
Reacția de precipitare în gel: Tehnica Ouchterlony (dubla imunodifuzie în gel)
Reacția de precipitare în
gel: Tehnica Ouchterlony
Reacția de precipitare în gel:
Imunelectroforeza
1. Separarea Ag

2. Se pipetează Ac într-un șanț decupat în gel

Reacția de precipitare în gel:
Imunelectroforeza
3. Difuzia Ag și Ac în gel și interacțiunea lor, cu formarea precipitatului în zona de echivalență
Reacția de
precipitare în
gel:
Imunelectrofo
reza
Reacția de precipitare în gel: Electroforeza
contracurent
Reacția de precipitare în gel: Rocket
electrophoresis
Reacția de precipitare Reacția de aglutinare

• Reacția Ac cu Ag solubile, care • Reacția Ac cu Ag insolubile sau

duce la formarea de CI insolubile particulate, care duce la
formarea unui agregat
Reacția de aglutinare
• Directă • Indirectă