Ingineria tisulară a vaselor sanguine în practica medicală.

Aspects of vascular tissue engineering in medical practice

Chisinau 2022 1
 Cuprins

• Introducere
• Structura unui vas sanguin
• Scurt istoric
• Tehnici de fabricare
• Tipuri de producere a vaselor
• Sursa de biomateriale
• Perspective din biologia vasculară

Cuvinte cheie: vase, ingineria tisulară, grefe, EC-celule endoteliale, SMC-uri - celule musculare
netede, TEBV- dezvoltarea vaselor de sânge prelucrate prin inginerie tisulară
2
 Introducere
Bolile ischemice, cum ar fi boala cardiovasculară aterosclerotică (BCV), rămân principala cauză de
mortalitate și morbiditate în întreaga lume . Arterele, venele și capilarele sunt toate trilaminate cu tunica
intimă formată din celule endoteliale (EC), care reglează coagularea, conferă permeabilitate selectivă și
participă la traficul de celule imune . Arterele și venele sunt legate în continuare de un al doilea strat, tunica
medie, care este compusă din celule musculare netede (SMC), colagen, elastină și proteoglicani, conferind
rezistență vasului și acționând ca efectori ai tonusului vascular. Ingineria țesuturilor vasculare a evoluat
pentru a genera constructe care încorporează funcționalitatea acestor straturi structurale, rezistă la stresul
fiziologic inerent sistemului cardiovascular și promovează integrarea în țesutul gazdă fără a crește respingerea
imunologică

3
Structura unui vas sanguin

4
 Scurt istoric
Începând cu anii 1950, grefele vasculare construite din materiale polimerice sintetice, cum ar fi tereftalatul
de polietilenă (PTFE), puteau fi utilizate clinic ca conducte pentru arterele cu diametru mare, dar complicațiile
au apărut atunci când au fost utilizate pentru vase mai mici ( DeBakey și colab., 1965 ). Aceste probleme au
inițiat dezvoltarea vaselor de sânge prelucrate prin inginerie tisulară (TEBV) ca alternativă ( Canver, 1995 ; 
Chard şi colab., 1987 ).

Weinberg și Bell au raportat primul TEBV care a imitat toate cele trei straturi histologice arteriale. Ei au
construit un vas prin însămânțarea de EC, SMC-uri( celule musculare netede) și fibroblaste adventițiale de
aortă bovină cultivate pe o schelă subțire de colagen și Dacron ( Weinberg și Bell, 1986).). Apoi au turnat
stratul medial cu colagen și SMC-uri amestecate cu medii de cultură, au căptușit ghipsul cu fibroblaste
adventițiale în plasă Dacron pentru suport mecanic și au căptușit lumenul cu EC. Acest proces a format o
căptușeală endotelială adiacentă care a oferit o barieră de permeabilitate a moleculelor mari și sa observat că
este activ din punct de vedere biochimic cu factorul von Willebrand și producția de prostaciclină. Cu toate
acestea, s-a atins doar 120 până la 180 mmHg puterea de spargere în comparație cu puterea fiziologică de
spargere de aproximativ 2000 mmHg și 3000 mmHg în vena safenă umană și respectiv artera mamară internă.

Pentru a valorifica rezistența mecanică a grefelor sintetice în combinație cu capacitatea EC(celule

endoteliale) Herring și colaboratorii au raportat prima grefă sintetică căptușită cu CE. Autorii au însămânțat
o grefă de Dacron de 6 mm cu suspensii EC venoase canine și au observat o rată de permeabilitate de 76%
față de 22% la martori .
5
6
 Tehnici de fabricare

• Principalele criterii pentru proiectarea unei artere de lungă durată includ:

• proprietăți mecanice de înaltă complianță/întindere,
• trombogenitate scăzută și remodelare regenerativă care duce în cele din urmă la o integrare cu succes .
• După ramificarea imediată a aortei, arterele trebuie să fie suficient de conforme pentru a se potrivi fluxului
cu presiune puternic pulsatilă și suficient de rezistente pentru a preveni ruptura.
•  Odată grefat, vasul implantat trebuie să supraviețuiască răspunsului gazdei care deseori duce la
inflamație și formarea de tromb și eșecul grefei.
•  În cele din urmă, sunt necesare evenimente de remodelare pentru a încuraja integrarea regenerativă cu
țesutul gazdă, inclusiv
• 1) migrarea EC și formarea contactului celulă-celulă între EC gazdă și grefa,
• 2) estomparea interfeței gazdă-grefă prin migrarea SMC prin interfață,
• 3) și restabilirea homeostaziei mecanice prin rearanjarea ECM a grefei circumferențiale ( 
Huang și Niklason, 2014 ; Roh și colab., 2010 ; Sapoznik și colab., 2015).). 

7
 Structurile tubulare care seamănă cu arterele (<6 mm în diametru) pot fi obținute xenogenic sau
fabricate cu biomateriale prin rulare, turnare și/sau schele directe. 
Odată fabricate, grefele sunt însămânțate cu EC și SMC și condiționate cu stimuli biomecanici
(neprezentați) înainte de implantare. Grefele pot fi, de asemenea, utilizate fără celularizare pentru
aplicații precum accesul la hemodializă..

8
Tipuri de producere a vaselor

9
 Sursa de biomateriale
• Colagenul și elastina, care sunt cele două
componente majore ale unei artere responsabile
pentru proprietățile sale mecanice caracteristice,
au fost utilizate pe scară largă ca coloana
vertebrală a biomaterialului grefei ( 
Miranda-Nieves și Chaikof, 2017 ). 
• De obicei, aceste ECM-uri naturale sunt recoltate
din ECM-uri xenogenice, digerate, care pot fi
declanșate pentru re-reticulare prin ajustarea
temperaturii și pH-ului sau prin adăugarea de
aldehide sau enzime de reticulare ( 
Delgado și colab., 2017 ; 
Makris et al., 2017). al., 2014 ). 
• Materialele polimerice sintetice care sunt
biocompatibile, neimunogene și degradabile
sunt, de asemenea, explorate pentru utilizare ca
schele, inclusiv acid poliglicolic (PGA),
policaprolactonă (PCL), poli-L-lactidă (PLLA)
și amestecuri ale acestora. În aceste materiale,
rezistența mecanică a grefei rezultate depinde nu
numai de proprietățile mecanice inițiale ale
materialului compozit, ci și de noul colagen care 10
este produs și depus de celulele însămânțate, cum
 Construcția unui vas de sânge artificial pe bază de
colagen, așa cum este descris de Weinberg și Bell

Construcția unui vas de sânge artificial fără utilizarea unei schele, așa cum este descris de
L'Heureux și colab.

11
 Celulele stem ca surse de semințe

Pentru ingineria țesutului vascular, celulele de semințe trebuie să posede capacitatea de a prolifera, de a evita
o reacție imunologică, de a fi recoltabile și de a păstra funcționalitățile sintetice realizate de tipul de celulă
relevant în vasele native. Nu numai că celulele stem oferă o sursă mai ușor disponibilă de celule semințe, ele
produc și componente ECM, cum ar fi colagenul și elastina, cu randamente mai mari în comparație cu
celulele autologe. Capacitatea limitată de replicare și de productivitate a ECM a celulelor adulte poate fi
rezultatul scurtării telomerilor și, respectiv, al reducerii senescente a producției de ECM. Cu toate acestea, ar
putea rezista doar până la 500 mmHg de presiune de explozie după 8-9 săptămâni de cultură și să se dilate in
vivo pe o perioadă de 2 săptămâni, ceea ce sugerează că este nevoie de diferențiere sau maturare suplimentară.
Există dificultăți semnificative în utilizarea acestei surse de celule, inclusiv provocările tehnice de recoltare,
o capacitate proliferativă redusă care necesită o expansiune prelungită ex vivo și lipsa generală de
disponibilitate la cei mai răspândiți pacienți care sunt în vârstă și au boală aterosclerotică sistemică.

12
 Perspective din biologia vasculară

Într-un model de pește-zebra și modele in vitro care utilizează HUVEC și celule progenitoare endoteliale
derivate din ESC, anastomoza a doi muguri endoteliali sau a unui mugur și a unui vas preexistent a implicat:
1) stabilirea contactului celulă-celulă prin intermediul aderinei (în special VECad) și joncțiuni strânse 2)
polarizarea celulelor vârfului fuzionat 3) invaginarea membranelor apicale determinată de tensiunea arterială
pentru a forma un vas perfuzabil . Deși mecanismul precis nu este identificat, anastomozele par să apară în
zonele în care EC țintă au un nivel scăzut de VEGFR1 membranos (și probabil o semnalizare ridicată a
VEGFR2) ( Nesmith și colab., 2017 ). 

13
Macrofagele interacționează, de asemenea, cu EC
pentru a promova anastomoza a doi muguri vasculari
cu mecanisme care necesită încă investigații
suplimentare .Implanturile vasculare care conțin paturi
microvasculare proiectate ar fi utile pentru o varietate
de stări ischemice care decurg din insuficiențe
microvasculare, cum ar fi boala microvasculară
coronariană și vindecarea rănilor diabetice și traume
cum ar fi arsurile. În aceste cazuri ischemice,
insuficiența este prezentată microscopic, necesitând
astfel înlocuirea sau adăugarea unui pat vascular, spre
deosebire de leziunile macroscopice care ar necesita
înlocuirea unui vas mare bolnav.

14
Schele supramoleculare instructive pentru ingineria
țesuturilor cardiovasculare in situ

15
 Bibliografie

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5849079/
2. https://www.nature.com/articles/s41536-017-0011-6
3. https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fbioe.2021.721843/full
4. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7155776/
5. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0741521404016969#sec1
6. https://www.liebertpub.com/doi/10.1089/ten.teb.2019.0264
7. https://www.annualreviews.org/doi/10.1146/annurev.bioeng.3.1.225
8. https://rjms.iums.ac.ir/article-1-5653-en.html
9. https://www.hindawi.com/journals/bmri/2012/956345/
10. https://aip.scitation.org/doi/10.1063/5.0039628
11. https://wires.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/wsbm.1246
12. http://perspectivesinmedicine.cshlp.org/content/8/2/a025742.full
13. https://www.degruyter.com/document/doi/10.1515/iss-2018-0016/html
14. https://jbioleng.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13036-018-0133-4
15. https://www.futuremedicine.com/doi/10.2217/rme-2018-0133
16. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0042569
17. Burdick JA, Prestwich GD. Hidrogeluri cu acid hialuronic pentru aplicații biomedicale. Adv Mater. 2011
18. Baranski JD, Chaturvedi RR, Stevens KR, Eyckmans J, Carvalho B, Solorzano RD, Yang MT, Miller JS, Bhatia SN,
Chen CS. Controlul geometric al rețelelor vasculare pentru a îmbunătăți integrarea și funcționarea țesuturilor
proiectate. Proc Natl Acad Sci US A. 2013;
19. Ayala P, Dai E, Hawes M, Liu L, Chaudhuri O, Haller CA, Mooney DJ, Chaikof EL. Evaluarea unui construct
bioinginerie pentru aplicații de inginerie tisulară. J Biomed Mater Res Part B Appl Biomater. 2017:1–10
20. Bertassoni LE, Cecconi M, Manoharan V, Nikkhah M, Hjortnaes J, Cristino AL, Barabaschi G, Demarchi D, Dokmeci
MR, Yang Y, et al. Rețele de microcanale bioimprimate cu hidrogel pentru vascularizarea constructelor de inginerie
16
tisulară. Chip de laborator. 2014;