INGINERIA TISULARĂ –

TESUT
CARDIOVASCULAR Curs VIII
Prof. Dr. Ing. Mariana
IONIȚĂ
Drd. Ing.
George Mihail VLASCEANU
 IT cardiovasculara
Bolile cardiovasculare sunt afectiuni ale inimii şi ale vaselor de sânge includ
bolile coronariene -boli ale vaselor de sânge care irigă muşchiul cardiac;
boli cerebrovasculare -boli ale vaselor de sânge care irigă creierul;
boli arteriale periferice- boli ale vaselor de sânge care irigă braţele şi picioarele.

Bolile cardiovasculare (BCV) sunt principala cauza de deces în țările dezvoltate (1

din 3 decese în Statele Unite în 2008).
Modificarile in dieta si obiceiuri sunt cauzatoare de BCV si mortalitate si
în țările în curs de dezvoltare.
Acest grup de boli constituie o povară pentru autoritățile naționale, consum mare pentru
sistemele de sănătate (in 2010, 503,2 miliarde).
În mod particular boli cardiace coronariene determina decesul a 3,8 milioane de bărbați
și 3,4 milioane de femei la nivel mondial iar in Statele Unite, 1 din 6 decese în 2008, a
fost cauzat de boli cardiace coronariene.
 IT cardiovasculara

Inima = organ complex, care pompeaza aprox. 7000 litri

de sange pe zi, in toate tesuturile din organism. Tesutul
sau cuprinde:
o cardiomiocite = elemente contractile, care formeaza
fibrele musculare orientate variat in cadrul peretelui
ventricular; aceste fibre sunt organizate, la randul lor,
in lamine miocardice cu grosimea de 4-6 miocite si
separate intre ele de colagen extracelular;
o celule musculare netede;
o celule fibroblaste;
o nervi;
o vase de sange si componente ale matricii
extracelulare (interstitiu cardiac si colagen).
La o contractie ventriculara a sarcomerelor (unitati structurale
musculare) de numai 15%, inima ejecteaza o fractie sangvina
de 60%.
 IT cardiovasculara
10-20% din totalul celulelor de la nivelul tesutului cardiac sunt elemente
contactile

1% sunt inlocuite anual de celule progenitoare la varsta de 25 ani

0,3% sunt inlocutie anual de celule progenitoare la varsta 75 de ani

20-40% dintre pacienti resping tesutul cardiac transplantat

70 % reduc activitatile curente

Rata de succes este sub 70 % in primii cinci ani

Structura Torrent-Guasp, 2006

 IT a tesutului cardiac
Infarct miocardic coronarian

 Lipsa de oxigen si nutrienti, si stagnarea metabolitilor;

 Metabolismul aerob se transfoma in glicoliza anaeroba (reduce fuctia contractila);
 La 20-40 de minute de cand fluxul sanguin este oprit incepe apoptoza celulara;
 Alte celule isi incetinesc metabolismul pentru a rezita conditiilor dure pana la
restabilirea fluxului sanguin;
 Remodelare ECM colagenul de tip I este inlocuit cu colagenul de tipul III.
IT a tesutului cardiac
Modificarile cauzate de infarct miocardic coronarian
 IT cardiovasculara

Practicile clinice tintesc in general spre limitarea severitatii si potentialelor

complicatii/extinderi ale infarctului miocardic acut (datorat ocluziilor venoase prin
ateroscleroza coronariana sau trombotica, in ~80% din cazuri), prin:
o restabilirea imediata a perfuziei venoase cardiace si a aportului de oxigen necesar;
o reducerea/evitarea traumelor.

Abordare farmacologica
Anticoagulante, substante trombolitice → eliminarea ceagurilor; Insa orice medicament
Vasodilatatoare (nitrati) → dilatarea vaselor de sange; prezinta reactii adverse,
Aspirina → evitarea agregarii plachetelor; stabilirea unui
Beta-blocanti → reducerea ritmului cardiac; necesitaprezinta
orar,
Morfina → atenuarea durerilor. anumite costuri
→ eficienta redusa
 IT cardiovasculara
Abordare chirurgicala

Angioplastia comuna (cateter + balon sau

Reperfuzia = proces complex, care
stenturi vasculare ) poate induce apoptoza prin
→ restabileste diametrul lumenului si permite schimbarile de micromediu induse
fluxului sangvin sa irige zona de infarct. (se elibereaza substante toxice)

Toate aceste metode traditionale:

o limiteaza distrugerile cauzate de episodul acut
o nu regenereaza tesutul distrus
o nu anuleaza modificarile ventriculare ulterioare care au loc (continutul de colagen de
tip I este redus de la 80% la 40%, iar cel de tip III devine mai abundent; forma
venticulilor se modifica din eliptica in sferica → se reduce fractia de ejectie; etc).
 IT cardiovasculara

Noi tendinte:
oCardiomioplastia (a);
oStraturile celulare (b);
oGelurile injectabile (b);
oScaffoldurile (b);
oDispozitive de
“imbracare” a inimii (c).
 IT cardiovasculara

Terapia cu celule:
o Se implanteaza celule pe sau in miocardul patologic;
o Realizata in combinatie cu biomateriale (organizare 3D, protectie, stimuleaza si
mentin cresterea celulara, mentin celulele in zona de interes, etc) si molecule
bioactive, in scopul recuperarii tesutului lezat;
o Prin implantarea biomaterialelor (injectabile, geluri, etc) in peretele ventricular,
grosimea acestuia creste si, tinand cont de legea lui Laplace, stress-ul in acest tesut
este redus (efect secundar benefic).
o Permite vindecarea tesutului afectat.
 IT cardiovasculara
Cardiomioplastia celulara sau dinamica
Injectarea celulelor de diverse origini direct la nivelul inimii

Inima - organ complet diferentiat dupa nastere ?

Miocitele au capacitate de regenerare de aproximativ 1 % pana la varsta de 30 ani

si se reduce la 0.3 % pana la varsta de 75 ani;

Mecanismele de regenerare se datoreaza prezentei celulelor stem cardiace;

Rata de regenerarea este scazuta fata de nevoile survenite in urma ifarctului miocardic;

IT vizeaza cresterea ratei de regenerarea a tesutului cardiac.

 IT cardiovasculara

Cardiomioplastia (C)

o a evoluat de la c. dinamica (acoperirea inimii cu muschiul latissimus dorsi, care sa

sustina bataile inimii si sa evite remodelarea ventriculara)
o c. celulara (injectarea celulelor de diverse origini direct la nivelul inimii);
 IT cardiovasculara
Cardiomioplastia celulara

oCelulele injectate trebuie sa induca angiogeneza, inhibe apoptoza, ajute la

regenerare, activeze mecanismele de vindecare, formeze un nou tesut
muscular contractil in zona distrusa;

oMetode de implantare celulara:

ointracoronariana - (cel. trebuie sa migreze prin vasele de sange
si sa se stabileasca in zona de interes);
odirecta- la nivelul tesutului ischemic, prin
injectie intra- sau endo-miocardica .

o Ambele tipuri de cardiomioplastie prezinta limitari dpdv al restabilirii

functiei cardiace si al celulelor utilizate.

o Posibile limitari?
 IT cardiovasculara
Cardiomioplastia celulara - Problematica

Teste in vivo versus teste clinice?

Celule din sursa autogene sau alogene?

Tehnica de implantare versus tipul de celula folosita in procesul de regenerarea

cardiaca;
-la 50-70 minute dupa injectarea intracoronariana de (MSC-BM) doar 1.3-2.6 %
din celule raman la nivelul muschiului cardiac (schimbarile de compozitie
determina o adeziune scazuta a celulelor).

-bataile inimii indeparteaza celulele injectate la nivel cardic sau pierderea se

poate face prin orificiul ramas dupa ce dispozitivul de injecatre a fost indepartat
(modularea viscozitatii solutiei de injectare)

-asiguarea unei rate de supravieturie a celulelor mai ridicata (in prezent 10%).
 IT cardiovasculara
Cardiomioplastia celulara:

o Tipurile de celule implicate: autologe sau alogene

o Celule stem embionice - etica, imunosupresoare, riscul generarii
de teratoame → aplicatiile clinice sunt limitate (etic-risc);
o exista protocoale bine stabilite pentru metodele de diferentiere a
ESC in cardiomiocite dar si in alte tipuri de celule necesare
regenerarii.

o Celule stem pluripotent induse - fibroblasti tratati cu factori

virali; nu prezinta problemele etice intalnite la ESC; pot fi de natura
autologa; limitari ce tin strict de factorii virali, care pot induce
malignitate, si riscul de producere a teratoamelor datorare
pluripotentei);
 IT cardiovasculara
Cardiomioplastia celulara:

Tipurile de celule implicate: autologe sau alogene

Celule stem adulte -autologe pot fi inmultite si diferentiate in cardiomiocite in vitro
fara sa puna probleme de etica sau imunogenitate, nu sunt disponibile imediat.
1. maduva osoasa: pot fi in vivo in cardiomiocite (mecanism
diferentiate controversat necunoscut in in vitro cu suplimentarea mediului de
totalitate) sau cultura;
 pe modele animale, neovascularizatia si functiile inimii au fost imbunatatite;
clinic, au fost inregistrate beneficii temporare, iar prin tratarea cu GF pot fi
prelungite efectele si rata de supravietuire.
 datroita formei si dimensiuni nu pot fi distribuite intracoronarian (produc
microinfarct)
2. tesut adipos: studii privind combinarea acestuia cu geluri peptidice si inglobate in
matrici polimerice 3D (suport pt ventriculul dilatat + prelungirea efectelor
pozitive), dar mecanismul procesului nu este pe deplin cunoscut.
IT cardiovasculara
Cardiomioplastia celulara:

3. Celule stem cardiace - nediferentiate, regasite la nivelul inimii si care se

pot diferentia in celule endoteliale, musculare netede, cardiomiocite;
responsabile de refacerea normala tesutului ;
sursa limitata (in particular pentru provenienta umana)
pot fi izolate din biopsii si extinse in vitro;
aplicate in studii in vivo si clinice au reprezentat suportul potrivta pentru
refacera miocadica.
IT cardiovasculara

Straturile celulare - metoda propusa ca urmare a pierderii masice a

tesutului muscular in cazul unui infarct micardic este una importanta (50 g)
Straturile celulare – crescute pe suport de sticla
crescute pe suporturi polimere

o In cazul culturilor celulare crescute pe sticla se aplica tratamente enzimatic in

scopul detasarii celulelor se pierd proteine si receptori celulari, conexiunile
electromecanice, celulele sunt astfel lezate.
→ alternativa: straturi celulare detasate prin metode care permit conservarea
conexiunilor electromecanice intercelulare ; celulele sunt mentinute in propria
ECM, fiind pastrate proteinele membranare celulare si influentele ECM asupra
maturarii si supravietuirii acestora.
IT cardiovasculara

Straturile celulare - Culturi pe substraturi acoperite cu poli(N-izopropilacrilamida)

Poli(N-izopropilacrilamida) este un polimer hidrofob la 37° C si de care celulele se

ataseaza;
la temperaturi reduse, poli(N-izopropilacrilamida) sufera o
tranzitie in stare hidrofila, iar monostratul celular poate fi indepartat.
o Prezinta superioritate in termeni de functii cardiace, retentie celulara, rata de
proliferare si densitate vasculara.
 IT cardiovasculara

Straturile celulare - Culturi pe substraturi acoperite cu poli(N-izopropilacrilamida)

50 g de tesut nu poate fi inlocuit cu un strat celular

Obtinem un start celular mai gros?
Suprapunem mai multe starturi celulare?

S-a observat o buna adeziune si semnalizare elecromecanica intre mai multe starturi
celulare (2-3 minute)
Lipsa vascularizarii impiedica patruderea oxigenului, nutrinetilor daca
sunt suprapuse prea multe straturi (maxim 3)
Implantarea de 3 straturi succesiv a produs obtinerea unui strat celular cu grosimea
de 1 mm.
 IT cardiovasculara
Gelurile injectabile:
o Trebuie sa fie proiectate astfel incat sa poata fi injectate
prin proceduri minim invazive, pe baza de cateter;

o La locul implantarii, trebuie sa se autoasambleze si sa vindece cat mai rapid, fara sa

elibereze factori toxici;

o Adopta forma cavitatii in care sunt injectate si pot creste grosimea si rigiditatea
peretelui ventricular;

o Ajuta la mentinerea celulelor in zona de interes, simuland un mediu 3D propice

acestora si protejandu-le de conditii ostile (consecinte ale infarctului), precum hipoxia,
specii reactive de oxigen sau anumite citokine;

o Pot reprezenta sisteme de eliberare controlata (medicamente, GF, etc);

 IT cardiovasculara

Caracteristicile Gelurilor injectabile ideale

o biodegradabil, non-imunogen, non-citotoxic, antitrombogenic;

o sa prezinte proprietati mecanice adecvate, complianta a.i. sa permita contractarea normala;

o sa transmita stimulii mecanici catre celule;

o sa induca angiogeneza (cel putin sa nu perturbe activitatea angiogenica normala);

o sa fie capabil sa livreze celule si molecule bioactive.

 IT cardiovasculara

Gelurile injectabile:
o Biomateriale gelifiante in situ naturale:
o fibrina, Matrigel, acidul hialuronic, colagenul, gelatina;
o chitosanul – polizaharida cationica naturala, solubila in solutii acide, dar dupa
neutralizare formeaza un gel; polimer capabil sa purifice / absoarba speciile reactive
de oxigen produse in conditiile ischemice si sa recruteze citokine cu rol primordial in
chemotactismul celulelor stem; polimer capabil sa imbunatateasca micromediul
pentru celulele stem prelevat din tesutul adipos.
o keratina din par – mai mult de 30 tipuri de GF sunt implicate in morfogeneza parului;
o parte din acestia raman in keratina si pot fi folositi in repararea cardiaca. Pudra de
keratina liofilizata se poate auto-asambla la aditia apei, formand geluri. Implantat in
inimi ischemice de sobolan, gelul de keratina permite infiltrarea celulelor
miocardice si endoteliale si promoveaza angiogeneza, fara a provoca inflamatii;
o alginatul – copolimer bloc, polizaharida incarcata negativ, obtinuta din alge
marine si care gelifiaza in prezenta ionilor de Ca.
 IT cardiovasculara

Gelurile injectabile:
o Biomateriale gelifiante in situ (sintetice):
o Hidrogeluri termosensibile (prezinta tranzitii sol-gel
dependente de temperatura), de ex. cele pe baza de N-izopropilacrilamida (polimer non-
biodegradabil, dar care prin copolimerizare cu polimeri degradabili devine
biodegradabil) + acid acrilic, etc;

o Poli(etilen glicol) – hidrogel ce reticuleaza in situ, formand un suport permanent care

limiteaza remodelarea ventriculara;
 IT a tesutului cardiac

oCardiomioplastia (a);
oStraturile celulare (b);
oGelurile injectabile (b);
oScaffoldurile (b);
oDispozitive de
“imbracare” a inimii (c).
 IT a tesutului cardiac
Scaffoldurile:

o Folosirea biomaterialelor pentru obtinerea unor “plasturi”

ex vivo si implantarea acestora in zona epicardica, pe tesutul afectat de infarct (pot fi pre-
incarcati cu celule, GF, medicamente);
o Biomateriale implicate:
o naturale: colagen, gelatina, fibrina, alginat, matase, tesuturi decelularizate;
o sintetice: PLA, PGA, PU

Poli(glicerol sebacat) → elastomer biocompatibil si biodegradabil, obtinut in urma policondensarii

glicerolului si a acidului sebacic

Poroase 3D, anizotropie structurala, proprietatilor mecanice similare tesutului cardiac, transfer de masa
constant, ghidarea coloniilor de cardiomiocite.
 IT a tesutului cardiac
Fibroina

Celule Scaffold
Factori de
mezenchimale Hidrogel fibroina
crestere

Patch-urile ajuta la dezvoltarea vaselor de sange noi si elibereaza proteine

care stimuleaza repararea tesutului cardiac
IT a tesutului cardiac

Scaffoldurile:

o Stimularea electrica
o aplicarea unor campuri electrice externe asupra culturilor celulare (stem: embrionare,
adulte) contribuie la diferentierea celulelor in cardiomiocite si la dezvoltarea unor
proprietati de conductivitate si contractilitate;

o foarte important: materialul electrozilor (carbonul → cele mai bune rezultate),

amplitudinea si frecventa;

o Scaffoldurile polimerice limiteaza comunicarea electrica a cardiomiocitelor, ceea ce

conduce la restrictia contractiilor sincrone ale tesutului → solutie: incorporarea
unor nanofire electroconductive in scaffold.
 IT a tesutului cardiac

Dezvoltarea / Soarta celulei este controlata de 3 factori

Stimuli fizici (presiunea fizica exercitata de celula din

vecinatate)
Stimuli chimici (semnalizarea chimica de la celule vecine
sau indepartate)
Stimuli electrici
IT a tesutului cardiac
Scaffoldurile:

o Stimularea mecanica:
o Stressul mecanic influenteaza semnificativ proliferarea celulara, sintetizarea si
organizarea ECM;

o Functiile contractile sunt imbunatatite, histologic se observa caracteristicile unui tesut

cardiac adult;

o Celulele se aliniaza, se alungesc si formeaza jonctiuni de interconectare;

o Se obtin structuri organizate similar miocardului, in mare parte datorita faptului ca,
prin solicitarile mecanice de intindere ale scaffoldului, favorizeaza transferul de
nutrienti si oxigen, creandu-se astfel un micromediu adecvat.
IT a tesutului cardiac
 IT a tesutului cardiac

Dispozitive de “imbracare” a inimii:

o Scopul acestei metode nu este acela de a regenera tesutul ischemic, este de a evita
extinderea efectelor adverse de remodelare, aparute in urma infarctului miocardic;

o Este aplicat un material de invelire, ce ofera o rezistenta mecanica si care trebuie

sa limiteze sau sa induca regresia dilatarii ventriculare.
 IT a tesutului cardiac
Dispozitive de “imbracare” a inimii:

o a fost propusa o varietate de retele sintetice:

o Bistrat membranar: polipropilena (PP pe o parte care faciliteaza cresterea s

dezvoltarea tisulara (cel putin limiteaza dilatarea ventriculara) si politetraflouretilena
(PTFE) pe cealalta parte, care previne adeziunea pericardiumului.
o Rezultate benefice dpdv al proceselor de remodelare, materialele nu sunt
biodegradabile, pt a avea un efect permanent).

o Disponibile comercial:
- Marlex;
- Merseline;
- Paracor.