Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Disciplina de biologie celulară

și moleculară

Asist.univ.dr.Covaci Aurelia
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară
LP 4

MICROSCOPUL OPTIC

EXAMINARE cu OBIECTIVUL
DE IMERSIE
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

partea cea mai importantă a unui microscop

este obiectivul, fiindcă de calităţile lui depind
calităţile imaginii

obiectivul este format din mai multe lentile montate

într-un tub metalic
lentila inferioară este plan convexă, cu faţa plană
spre obiect şi se numeşte lentilă frontală
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 puterea de mărire a ei este în raport direct cu mărimea

unghiului de deschidere, adică cu unghiul format de razele
de lumină divergente extreme, care plecând din punctul O,
aflat pe obiect, pătrund în lentilă.

 puterea de mărire a unui obiectiv este cu atât mai mare cu

cât diametrul lentilei sale frontale este mai mic.
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

între obiect şi lentila frontală trebuie să rămână

întotdeauna un spaţiu de cel puţin 1,5 mm, numit
distanţă frontală.
 acest spaţiu poate fi liber (aer) în cazul obiectivelor
uscate
 în cazul obiectivelor cu imersie, poate fi ocupat de
un lichid cu indice de refracţie (n) apropiat cu al
sticlei, cum este apa (n=1,33) sau egal cu al sticlei, în
cazul uleiului de cedru (n=1,51).
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 în cazul obiectivelor cu imersie, dacă se introduce

între lentila frontală şi lama ulei de cedru, cu
indicele de refracţie 1,51, egal cu al sticlei, sunt
eliminate fenomenele de reflexie a luminii,
precum şi fenomenele de refracţie
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

deci obiectivele cu imersie dau o imagine mult mai

luminoasă decât cele uscate fiindcă primesc toate
razele conului de lumină corespunzător unghiului de
deschidere.
în plus puterea de mărire a obiectivelor cu imersie
este superioară celei a obiectivelor uscate,
 de asemenea se pot observa mai bine detaliile de
structură ale obiectelor fiindcă şi rezoluţia
obiectivelor cu imersie este mai bună.
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Sistemul cu imersie

 în urma refracţiei şi reflexiei datorită trecerii din

sticlă în aer, o parte din razele de lumină provenite de

la obiectul microscopic (preparat) se pierd, nu pătrund
în obiectiv (razele de tip 1)
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 punând pe lamelă de sticlă un fluid cu indice de

refracţie apropiat de cel al sticlei
 de exemplu ulei de cedru (n=1,51) şi coborând
sistemul microscopului până când lentila frontală a
obiectivului se scufundă în ulei
 aceste raze trec aproape nedeviate, intrând în obiectiv,
contribuind astfel la îmbunătăţirea calităţii imaginii.
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

obiectivele cu imersie sunt obiective speciale, cu

sistem telescopic pentru a realiza mai uşor apropierea
de preparat fără a distruge lamela de sticlă.
puterea de mărire a acestor obiective poate fi de:
40X;60X;80X;100x sau 110x
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Aplicaţii medicale importante

 studiul bacteriilor
examinări hematologice
 examinări de citogenetică
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Tehnica examinării în imersie

 se plasează preparatul la microscop, utilizând
obiectivul de 4x, se focalizează microscopul pe
câmpul cel mai potrivit care conţine preparatul de
examinat
 se centrează preparatul în câmpul de examinare,
manipulând şuruburile laterale ale microscopului.
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 se schimbă obiectivul la 20x şi se

refocalizează cu mai multă fineţe, din nou
se centrează câmpul de examinare
 se roteşte obiectivul la jumătatea distanţei
între 20x şi 40x
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 se pune o picătură de ulei de imersie pe lamă, în

centrul câmpului de examinare
 se continuă rotirea revolverului până când cel de
40x ,60x ajunge în picătura de ulei, sub nici o
formă nu trebuie ca obiectivul de 20x sa ajungă în
ulei

 folosind focalizarea de fineţe se refocalizează

imaginea care ne interesează

Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

imediat după ce s-a terminat vizualizarea, se şterge

uleiul de pe lamă şi de pe obiectivul de folosit cu o
hartie speciala, înmuiată în etanol, toluen sau un
substituent de xylol special pentru acest scop.

aproape toţi solvenţii organici, în special xylolul şi

toluenul sunt potenţial periculoşi, sunt inflamabili şi
pot pătrunde in organism prin absorbţie directă la
nivelul pielii sau plămânilor(recomandat manusi)
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 expunerea constantă la aceşti solvenţi a fost pusă

în legătură cu afecţiuni hepatice şi chiar se
consideră a fi implicate în carcinogeneză
 astfel este recomandată utilizarea tuturor
solvenţilor cu precauţie şi în spaţii bine ventilate
 odată ce uleiul de cedru este pus pe lamă,
obiectivele de 10x şi de 40x nu vor mai fi folosite
până după îndepărtarea uleiului
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară
Preparat de examinat cu obiectivul cu imersie
Cromatina sexuală (corpusculul Barr)
Tehnica de lucru

se degresează cu alcool sanitar 2 lame de sticlă

curate
 după igienizarea cavităţii bucale prin clătire de
câteva ori cu apă, subiectul deschide gura şi se
raclează cu o spatula mucoasa de pe faţa laterală a
vestibulului bucal, îndepărtând astfel celulele moarte,
detritusurile celulare şi saliva
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 se repetă operaţia cu o altă lamă, recoltând celulele din

epiteliul mucoasei bucale
 lama care conţine celulele recoltate se aduce în contact cu
o lamă curată şi printr-o mişcare de glisare de-a lungul
lamei curate se etalează celulele, obţinându-se astfel frotiul
 se lasă lama la uscat câteva minute
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară


1) metanol absolut, 15-30 minute

2) metanol 70%, 5 minute
3) apă distilată, 10 minute
4) fuxină bazică, 15-30 minute
 se clăteşte lama cu apă la robinet pentru
îndepărtarea excesului de colorant, apoi se introduce
în: 5) metanol 70%, 1 minut
6) metanol absolut 1 minut
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 în primele două soluţii are loc fixarea

 în a treia rehidratarea
 în a patra colorarea integrală a nucleilor
 iar în ultimele două decolorarea nucleilor
 cu excepţia corpusculului Barr, care are o afinitate
mare pentru colorant, astfel încât rămâne colorat
 se examinează lama la microscop cu obiectivul cu
imersie
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

De studiat:
 corpusculul Barr are aspectul unui mic triunghi
colorat în violet închis cu baza la periferia
nucleului
 sau poate avea formă semilunară sau de cupolă cu
suprafaţa convexă spre interiorul nucleului, dar
totdeauna tangent la periferia nucleului
 restul nucleului este colorat palid în roz-violet şi
prezintă granule de cromatină
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Evidenţierea cromatinei sexuale (săgeţi)

Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Evidenţierea cromatinei sexuale (săgeţi)

Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Cromatina – definiție şi clasificare

cromatina este materialul biologic intranuclear care se

colorează cu coloranții bazici
cromatina este deci bazofilă
genele active transcriptibile în ARNm formează zona
eucromatică, pe când cele inactive zona heterocromatică
din punct de vedere al colorabilității cu coloranți
bazici, cromatina se clasifică în două categorii:
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 eucromatina (cromatina “adevarată”) care se

colorează mai puțin cu coloranți bazici - este
cromatina necondensată - transcriptibilă
 heterocromatina (“altă” cromatină) care se
colorează foarte intens cu coloranți bazici este
cromatina condensată – netranscriptibilă
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Vă mulțumesc!