Disciplina de biologie celulară

și moleculară

Asist.univ.dr.Covaci Aurelia
 LP 10

Determinarea cromatinei sexuale

(Corpusculul Barr)

în nucleii celulelor epiteliale din

mucoasa bucală
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară
Preparat de examinat cu imersie
Cromatina sexuală (corpusculul Barr)
Tehnica de lucru
se degresează cu alcool sanitar 3 lame de sticlă
curate
 după igienizarea cavităţii bucale prin clătire de
câteva ori cu apă, subiectul deschide gura şi se
raclează cu o lamă mucoasa de pe faţa laterală a
vestibulului bucal, îndepărtând astfel celulele moarte,
detritusurile celulare şi saliva
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 se repetă operaţia cu o altă lamă, recoltând celulele

din epiteliul mucoasei bucale

 lama care conţine celulele recoltate se aduce în

contact cu o lamă curată şi printr-o mişcare de
glisare de-a lungul lamei curate se etalează celulele,
obţinându-se astfel frotiul

 se lasă lama la uscat câteva minute

Laborator de Biologie Celulară și Moleculară
 se colorează frotiul cu fuxină bazică, prin imersarea
lamei, pe rând, în pahare Berzelius cu:
1) metanol absolut, 15-30 minute
2) metanol 70%, 5 minute
3) apă distilată, 10 minute
4) fuxină bazică, 15-30 minute
 se clăteşte lama cu apă la robinet pentru
îndepărtarea excesului de colorant, apoi se introduce
în: 5) metanol 70%, 1 minut
6) metanol absolut 1 minut
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 în primele două soluţii are loc fixarea

 în a treia rehidratarea

 în a patra colorarea integrală a nucleilor,

 iar în ultimele două decolorarea nucleilor

 cu excepţia corpusculului Barr, care are o afinitate

mare pentru colorant, astfel încât rămâne colorat

 se examinează lama la microscop cu obiectivul cu

imersie
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

De studiat:
 corpusculul Barr are aspectul unui mic triunghi
colorat în violet închis cu baza la periferia
nucleului

 sau poate avea formă semilună sau de cupolă cu

suprafaţa convexă spre interiorul nucleului, dar
totdeauna tangent la periferia nucleului

 restul nucleului este colorat palid în roz-violet şi

prezintă granule de cromatină
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Evidenţierea cromatinei sexuale (săgeţi)

Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

Evidenţierea cromatinei sexuale (săgeţi)

 OMUL - 22 de perechi de cromozomi -
autozomi
1 pereche sexuali XX – femei XY- bărbați
 Corpusculul Barr
 se găsește doar la femei, deoarece este un
cromozom X ce ramâne condensat în interfază,
este inactiv
 fără un cromozom X activ nu se poate supraviețui
 femeile au 2 cromozomi XX, unul este activ iar
celălalt este inactiv
 de obicei la femei se observă un singur corpuscul
Barr
 Dacă nu se observă corpusculul Barr la
femeie, înseamnă că avem un singur
cromozom X, vorbim de o anomalie
cromosomială(sindromul Turner)

 Dacă există 2 corpusculi Barr, înseamnă că

avem 3 cromozomi X(o altă anomalie- femei
triplo X)
 Sindromul Turner (XO)
 talie redusă
 atrofia ovarelor
însoţită de sterilitate
 malformaţii cardiace
 dezvoltare intelectuală
aproximativ normală
 pacientele cu sindrom
Turner nu prezintă
corpuscul Barr
 Bărbații au în mod normal un cromoozm X
activ și un cromozom Y

 În mod normal nu se observă corpusculul

Barr

 sunt cazuri când se vede, există 2

cromozomi X și un cromozom Y, atunci
vorbim de anomalie cromozomilală
(SINDROMUL KLINEFELTER)
 Sindromul Klinefelter (XXY)
 apare la bărbaţi
 prezintă corpuscul Barr
 pilozitate redusă
 dispunerea ţesutului
adipos de tip feminin
 criptorhidie însoţită de
sterilitate
 afecţiuni psihice
 are o frecvenţă de 1 la 400
de indivizi
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară
Cromatina – definiție şi clasificare

cromatina este materialul biologic intranuclear care

se colorează cu coloranții bazici
cromatina este deci bazofilă
genele active transcriptibile în ARNm formează zona
eucromatică, pe când cele inactive zona
heterocromatică
din punct de vedere al colorabilității cu coloranți
bazici, cromatina se clasifică în două categorii:
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 eucromatina (cromatina “adevarată”) care se

colorează mai puțin cu coloranți bazici - este
cromatina necondensată - transcriptibilă
 heterocromatina (“altă” cromatină) care se
colorează foarte intens cu coloranți bazici este
cromatina condensată – netranscriptibilă
Laborator de Biologie Celulară și Moleculară

 Heterocromatina este de două feluri:

constitutivă și facultativă
 Heterocromatina constitutivă este o
cromatina constant condensată în interfază
 este genetic inactivă
 Heterocromatina constitutivă conține așa-
numitul ADN repetitiv sau satelit
 Heterocromatina facultativă este o
cromatină condensată care conține gene
structurale ce sunt inactive, adică nu se face
transcripție
VIZUALIZARE LA TEM
VIZUALIZARE LA TEM