XIV. GLUCIDE (HIDRAI DE CARBON) XIV. 1. NOMENCLATUR.

CLASIFICARE n acest capitol vom trata despre polihidroxialdehide sau polihidroxicetone i unii derivai ai lor, numii hidrai de carbon nc din vremea n care nu se cunotea structura lor. Numele acesta impropriu (fiindc nu cuprinde dezoxizaharurile) vine de la faptul c principalii derivai, de exemplu glucoza C6H12O6, celuloza (C6H10O5)x au formula general Cn(H2O)m. Bertrand n anul 1923 a introdus termenul de glucid datorit gustului dulce (glycos = dulce) i a fost adoptat de Comisia Internaional de Chimie Biologic (Cambridge, 1923).

n cadrul acestei clase mari, se folosesc termenii de oze pentru glucidele reductoare nehidrolizabile (monozaharide) i de ozide pentru moleculele formate din oze sau care prin hidroliz formeaz cel puin dou molecule de oze. Ozidele pot fi alctuite numai din oze i n acest caz se numesc holozide (holozidele formate dintr-un numr mic de oze se numesc oligozaharide sau oligozide, iar cele formate dintr-un numr mai mare, polizaharide sau poliozide). Ozele sau monozaharide, ce sunt considerate ca produi de oxidare a poliolilor alifatici simpli cum ar fi etilenglicolul, glicerina, teritolii, pentitolii i
255

hexitolii se mpart n bioze, trioze, tetroze, pentoze i hexoze. n urma oxidrii gruprii hidroxil primare din polioli rezult aldoze i la un atom de carbon secundar cetoze. Dup cum este uor de vzut, fiecare grupare CHOH din formulele de mai sus conine un atom de carbon asimetric. Se tie c o molecul care conine n atomi de carbon asimetrici poate exista n 2n izomeri optici. De aici urmeaz c vor exista 2 aldotrioze, 4 aldotetroze, 8 aldopentoze i 16 aldohexoze. Evident c ntre aldoze i hexozele corespunztoare exist relaie de izomerie de poziie. HOCH2 - CHOH - CHO
aldehida gliceric

HOCH2 - CO - CH2OH
dihidroxiacetona

Glicerinaldehida prezint dou configuraii spaiale posibile, una cu OH scris n dreapta: dextro, D sau d i cellalt la stnga: levo, L sau l dup Fischer. CHO H - C - OH CH2OH
D-glicerin aldehida

CHO HO - C - H CH2OH
L-glicerin aldehida

n schema de mai jos sunt redate formulele aldozelor din aa numita serie D. Se poate foarte uor deduce o serie analoag L cu structurile enantiomere seriei D. Schemele acestea cuprind formulele tuturor monozaharidelor posibile n conformitate cu teoria atomului de carbon asimetric. La ora actual se cunosc toi izomerii acestor dou serii. Denumirea se pstreaz i atunci cnd C terminali (asimetrici) se leag si alte grupe dect cea aldehidic, precizndu-se ns conformaia la care corespunde C asimetric.

256

X H - C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH Y

X HO - C - H H - C - OH HO - C - H HO - C - H Y

Astfel X respectiv Y pot fi, de exemplu, CHOH, CHOCH 3, CHOAc, CHNH2. Considernd c toate deriv de la glucoz i c funcia principal de la care ncepe notarea este Y, unele vor aparine seriei D-gluco i celelalte seriei L-gluco. Pentru ozele cu cetona n poziia 2 denumirea se face de la un prefix ce indic numrul atomilor de carbon i tipul de izomerie, urmat de sufixul uloz, dar se folosesc i denumirile uzuale, de exemplu Darabinohexuloza corespunde fructozei, iar D-xilohexuloza este sorboza etc. Izomeria optic n sensul de rotire a planului luminii polarizate se noteaz spre dreapta (+) sau pe stnga (-). Deoarece sensul rotirii planului luminii polarizate este o proprietate de ansamblu moleculei asimetrice, care nu are nimic comun cu convenia de scriere a substituenilor la dreapta sau la stnga, estre necesar ca la caracterizarea unei molecule optic active s trecem seria steric din care face parte (D sau L) i n parantez sensul rotirii planului luminii polarizate (+) sau (-), de exemplu, D(+)-glucoza sau D(-)fructoza. Structurile aciclice prezentate pn n prezent pentru oze nu corespund n totalitate realitii. Una din proprietile chimice fundamentale ale aldehidelor i cetonelor este reacia de adiie la legtura dubl carbonilic. Dintre reactanii poteniali pentru acest grup de reacii sunt combinaiile hidroxilice cu formare de acetali, cetali sau semiacetali respectiv semicetali. Pentru aceste reacii vom da un exemplu general: a) pentru aldehide R - CH = O + R' - OH R - CH OR' OH +R'OH R CH OR' -HOH OR'

b) pentru cetone

257

R C=O + R'-OH R

R C R

OH OR'

R'OH HOH

R C R

OR' OR'

n situaia dat se constat c n moleculele ozelor gsim concomitent att gruparea funcional carbonilic ct i cea hidroxilic. Este evident faptul c aceste dou grupri funcionale vor reaciona ntre ele cu condiia ca i geometria moleculei s o permit. Constatm c n acest fel se pot nchide dou feluri de cicluri i anume cu 5 atomi (forma furanozic) i cu 6 atomi (forma piranozic). n continuare prezentm exemplificarea acestui fenomen i totodat diferite tipuri de scriere a monozaharidelor. Formule Fischer Formule TOLLENS CHO H-C-OH HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OH I H C H-C-OH HO-C-H O H-C-OH H-C CH2OH piranozid II OH H OH C O

H-C-OH HO-C-H H-C H-C-OH

CH2OH furanozid

Formula (I) corespunde analizei experimentale i funcionale i explic unele reacii de oxidoreducere proprii gruprii aldehidice, pe care le dau i ozele, de exemplu, reducerea Cu +2, Bi+3 i Ag+, a acidului picric, fericianurii etc, dar nu explic reacia Schiff i mutarotaia. Deci gruparea aldehidic din maltoz nu se comport ntocmai ca i o aldehid, se abate parial de la proprietile generale ale acestora motiv pentru care le vom numi pseudoaldehide.

258

259

Fa de formula (I) care arat patru atomi de carbon asimetrici, cu formulele semiacetalice se observ apariia unui nou atom de carbon asimetric (C1), care d dou forme i . Existena acestor dou forme a fost dovedit pentru glucoz prin puterea rotatorie (+113,4 o pentru i +18,7 pentru ), precum i diferen de solubilitate, ale punctului de topire, de stabilitate i n general proprietile fizice. Dizolvndu-se, de exemplu, glucoza n ap se constat c soluia prezint iniial o rotaie specific de +113,4o, care scade n 5 minute la +108o, pentru a se stabiliza la +52,7 o; dac se pleac de la -glucoz, iniial se constat o rotaie specific de +18,7 o care apoi crete i ajunge la +57,2 o. Acest fenomen se numete mutarotaie i denot starea de echilibru a celor dou forme i n soluie. Evident c acest nu se poate imagina dect prin intermediul formei aciclice. n cazul aldozelor acest tip de izomerie se numete anomerie iar izomerii anomeri. Formule Haworth CH2OH O OH HO OH OH
III

CH2OH O OH OH HO OH

n reaciile cu metanolul, aldozele particip cu un singur OH aprut la C1 (spre deosebire de aldehide i cetone care reacioneaz cu dou molecule de alcool metilic) i dau dou forme de derivai enantiomeri -metil glicozida i -metil glicozida. Prin tratare cu acid boric se constat o cretere a conductibilitii electrice pentru soluia de -glucoz, ceea ce pledeaz pentru situarea gruprilor OH din poziiile 1 i 2 de aceeai parte a planului. Generaliznd aceste observaii se constat c se dubleaz numrul de izomeri sterici pentru aldoze, atomul de carbon C1 devine asimetric deci vom avea 25 stereoizomeri.

260

XIV.2. PROPRIETI FIZICE I CHIMICE ALE OZELOR DE INTERES BIOLOGIC Ozele sunt substane solubile n ap, greu solubile n alcool i eter i foarte greu solubile n aceton. Punctele de topire sunt relativ ridicate, topirea se desfoar cu descompunerea parial a monozaharidei respective. Gustul dulce nu este o proprietate exclusiv a glucidelor. n tabelul XIV.1. se prezint gradul de dulce a glucidelor mai importante n comparaie cu alte substane dulci. Etalonul de dulce se consider zaharoza. Tabel nr. XIV.1. Tabel care cuprinde gradul de dulce
Substana zaharoza fructoza glucoza lactoza maltoza galactoza zahr invertit Grad de dulce 1 1,5 0,5 0,25 0,6 0,3 0,8 Substana sorbita glicerina ciclamat de sodiu dulcina zaharina neohesperidina paraldehidantioxina Grad de dulce 0,5 0,5 30 200 300 1500 2000

Proprietile chimice ale ozelor, valorificate n identificarea i dozarea lor precum i compartimentul acestora n sistemul biochimic este determinat de gruparea carbonil, gruprile carboxilice i interaciunea acestora. Aciunea acizilor. Prin nclzire cu acizi (HCl, H2SO4), pentozele se transform n furfurol, hexozele n hidroximetilfurfurol, care se poate descompune la acid levulinic. Derivaii furfurolului se polimerizeaz uor formnd humine, substane instabile, de culoare castanie. Furfurolul i derivaii si se condensaz cu derivai fenolici sau amine aromatice, formnd substane colorate, care stau la baza reaciilor de identificare. Cu -naftolul, furfurolul i derivaii si d o coloraie roie pentru cetoze i incolor pentru aldoze (Selivanoff); cu orcina se pot diferenia pentozele (culoare violet) de hexozei etc.

261

O
OH

HO-HC

CH-OH

acizi -3 HOH

CHR CH-CH=O HO OH

CH=O

-2 H, -HOH

OH

Aciunea alcaliilor (epimerizarea). n soluii alcaline diluate, de la o anumit oz, apare un amestec de echilibru dintre cei doi izomeri posibili la atomul de carbon C2, ai cetozelor corespunztoare prin intermediul unui endiol. Zaharidele care se difereniaz ntre ele doar prin atomii de carbon C1 i C2 se numesc epimere. produsi neidentificati (3%)

H-C= O H - C - OH D-glucoz (aldoz:63,5%)

CH-OH C - OH Endiol

H - C = O HO - C - H D-manoza (aldoz:2,5%)

CH2OH C = O D-fructoz (cetoz:31%)

262

Reacii de lungire a lanului de oze. Prin aciunea acidului cianhidric se formeaz cianhidrine, care prin hidroliz trec n hidroxiacizi, care apoi prin reducere parial se transform ntr-o oz cu un atom de carbon mai mult (E. Fischer).
R - CH = O + H-CN
(n) reducere

R - CHOH - CN

+ 2 HOH - NH3

R - CHOH - COOH

R - CHOH - CHO
(n-1)

Reacii de scurtare a lanului moleculei ozelor. Ozele reacioneaz cu hidroxilamina pentru a forma oxime, acestea prin reducere cu amalgam de sodiu, conduc la o amin primar; prin deshidratare trece n cianhidrin, din care prin eliminare de HCN se ajunge la oze cu un atom de carbon mai puin n molecul (metoda Wohl). CHO H - C - OH
aldohexoz (n) +NH2OH -H2O

HC=N-OH H-C-OH
aldoxima (b) -H2O 2 H2 (a)

CH2-NH2 H-C-OH
amin primar

C N H-C-OH
nitril -HCN

CHO
aldopentoz (n-1)

Cu aminele, aldehidele dau baze Schiff, n timp ce ozele formeaz Nheterozide, n care se pstreaz forma ciclic. Reprezentani de mare importan biologic ai N-heterozidelor sunt nucleozidele, rezultate din oze (de obicei pentoze) i baze purinice sau pirimidinice. Ele rezist la aciunea alcaliilor dar sunt hidrolizai de acizi sau de ctre enzime. Cu o-toluidina, ozele dau baze Schiff colorate care servesc la dozarea colorimetric (560 - 650 nm).

263

CH3 CH2OH O OH HO OH OH + H2N

- HOH

CH3

CH=N H-C-OH HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OH

Reacii cu fenilhidrazina. Gruparea carbonilic din oze reacioneaz cu fenilhidrazina (FH) formnd, la rece, fenilhidrazone. La cald reacioneaz cu 3 moli de FH, cu formare final de osazone.
CHO CHOH + C6H5-NH-NH2 R
aldoze fenilhidrazin rece -HOH

CH=N-NH-C6H5 CHOH R
fenilhidrazon + C6H5-NH-NH2 -C6H5-NH2 -NH3

CH=N-NH-C6H5 C=O R
C6H5-NH-NH2 HOH

CH=N-NH-C6H5 C=N-NH-C6H5 R
osazon

CH=O
C6H5-NH-NH2 H2O + C6H5-NH-NH2 C=N-NH-C6H5 -C H -NH 6 5 2 -NH3

CH2OH C=N-NH-C6H5
fenilhidrazon

C6H5-NH-NH2 H2O

CH2OH C=O R
cetoz

Osazona se transform uor, prin oxidare blnd cu o soluie cald de sulfat de cupru n osatriol. HC=N-NH-C6H5 C=N-NH-C6H5 R HC C R Reacii de oxidoreducere. Oxidarea blnd a ozelor se realizeaz cu ap de brom, de iod, Cu+2, Bi+3, Ag+ etc, conduce la acizi onici, de la glucoz se obine acidul gluconic, de la galactoz se obine acidul galactonic. n soluie apoas exist o stare de echilibru ntre forma acid i cea lactonic. N N-C6H5 + H2N-C6H5 N

264

CH2OH OH

CH2OH O OH OH HO OH

CH2OH O O HO OH OH

OH COOH OH

HO

n reacia Trommer au loc urmtoarele etape: CuSO4 + 2NaOH OH Cu OH OH Cu OH

H2O

Cu(OH)2 + Na2SO4

OH Cu O Cu OH
RCHO

CuOH R-COOH + CuOH

H2O

Cu Cu

Deoarece excesul de hidroxid de cupru (II) neredus se deshidrateaz la oxid negru care deranjeaz reacia, se adaug compui care pot lega Cu(OH)2 de exemplu, acid lactic, acid citric, n care se formeau complexul Cu-citrat.
-OOC-H C 2

COOC Cu O

O C
-OOC

CH2-COO-

-OOC-H C 2

S sau tartrat dublu de sodiu i potasiu, sarea Seignette (reacia Fehling).

CH2-COO-

265

COOK H-C-OH H-C-OH COONa + HO HO Cu

-2 HOH

COOK H-C-O H-C-O Cu

COONa

Ionul cupric din acest complex se reduce uor la ion cupros cu ozele la cald. n alte reacii se utilizeaz reducerea ionilor de argint metalic (reacia Tollens), azotatul bazic de bismut la bismut metalic (reacia Nylander), compuii organici cum ar fi acidul picric se reduc la acid picramic, indigoul violet de reduce la indoxil incolor, fericianura se reduce la ferocianur etc.
CHO COOH O HO OH OH OH H-C-OH HO-C-H H-C-OH H-C-OH COOH COOH H-C-OH HO-C-H H-C-OH H-C-OH COOH ; COOH H-C-OH HO-C-H HO-C-H H-C-OH COOH

Prin oxidare energic cu acid azotic se produce att oxidarea gruprii aldehidice ct i a alcoolului primar, formndu-se acizi glutarici, de la glucoz se obine acid zaharic, de la galactoz, acid mucic. Reacii enzimatice. Din culturile de Aspergillus i Penicilium s-a obinut o gluconozid, denumit notatin, care oxideaz specific -glucoza la gluconolacton. Concomitent se formeaz cantiti echivalente de peroxid de hidrogen care se determin cu ajutorul unei peroxidaze i a unor cromogeni, cum ar o-dianisidina. n mod similar pentru determinarea galactozei se utilizeaz galactoxidaza din Dactilium denoroides. n alte metode se utilizeaz sistemul hexokinaz (HK)/gluco-6-fosfat dehidrogenaz (G-6-P-DH). Reacia de fosforilare a glucozei n prezen de HK nu este specific (reacia este dat i de manoz sau fructoz, dar acest inconvenient este eliminat prin fosforilarea celei de a doua enzim. G-6-PDH este o enzim specific numai pentru substratul ei G-6-P i nu pentru Fr6-P sau Man-6-P.

266

CH2OH O HO OH OH
H2N OCH3 OCH3 NH2
H2O2 peroxidaz

CH2OH
O2 notalina

O O + H2O2 OH

OH

HO

OH

HN OCH3 OCH3

NH

XIV.3. DERIVAI AI HIDRAILOR DE CARBON XIV.3.1. Monozaharide Bioze. Singurul reprezentant, cea mai simpl oz, este aldehida glicolic. Trioze. ncepnd cu triozele poate s apar izomeria de poziie i izomeria optic, D sau L glicerinaldehida i dihidroxiacetona. Tetroze. Aldotetrozele pot aprea sub form de eritroz sau treoz. Ele formeaz uor polimeri, motiv pentru care nu se gsesc n stare liber n esuturi i celule. n cursul metabolismului intermediar pot fi gsii sub form de esteri fosforici, la atomul de carbon C4. Pentoze. Lund n considerare doar pentozele de baz vom aminti patru exemple: riboza, arabinoza, xiloza i lixoza (fiecare sub form D sau L). De asemenea, n biomolecule mai pot intra pentozele i sub form de cetoze. Pentozele pot aprea i sub forme modificate, de exemplu, dezoxipentoze. D(-)-Riboza nu se gsete liber n esuturi, dar prezint un deosebit interes biologic, ca parte component a nucleotidelor, coenzimelor, acizilor nucleici (ARN) i ca intermediari metabolici, sub form de esteri fosforici ai -ribofuranozidelor. D(+)-Ribuloza este cetoza corespunztoare ribozei cu rol important n anumite procese biochimice. L(+)-Arabinoza este rspndit n vegetale sub form de polizaharide denumite arabane de unde se obine prin hidroliz. Nu este metabolizat n organism.

267

D(+)-Xiloza, numit i zahr de lemn, se gsete liber n cantiti mici n unele frunze (zarzre), dar este destul de rspndit sub form de polizaharide denumite xilane, n lignin (paie, lemn). Se obine prin hidroliza polizaharidelor din cocenii de porumb. Metilpentozele dei au ase atomi de carbon sunt considerate pentoze, deoarece un atom de carbon apare sub forma unei grupri metil i nu corespund formulelor generale ale hidrailor de carbon. Cei mai importani reprezentani sunt L-ramnoza i fucoza care intr n structura unor polizaharide microbiene i n glicoproteine. Hexoze. D(+)-Glucoza este foarte rspndit n regnul vegetal i animal i este principala oz a organismului uman. Se gsete att liber ct i n structura unor oligozaharide (zaharoz, lactoz, trehaloz), polizaharide (amidon, glicogen i celuloz) i sub form de derivai (esteri fosforici, glucozamin etc). Se separ prin hidroliza chimic sau enzimatic a amidonului. Prin reducere (cat. Ni), D-glucoza se transform n polialcoolul sorbitol (sorbit) care oxidat cu B. xilinum sau Acetobacter suboxidans trece n sorboz, care servete la sinteza vitaminei C.
CHO H-C-OH HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OH D-glucoza CH2OH H-C-OH HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OH D-sorbita CH2OH H-C-OH HO-C-H H-C-OH C=O CH2OH D-sorboza CH2OH HO-C-H HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OH D-manita

Acidul glucuronic prezint un interes deosebit n conjugare, proces prin care intervine ficatul n eliminarea unor produi strini, ca de exemplu, fenoli, indoxili, medicamente, toxice accidentale i o serie de hormoni, produi de organism. D(+)-Manoza se gsete sub forma unor polimeri, manane. D(-)-Fructoza rotete planul luminii polarizate spre stnga de unde i denumirea de levuloz. Este mai dulce dect zahrul. Fructoza este rspndit n stare liber n fructe i intr n structura zaharozei, rafinozei, genianozei inulinei etc.

268

D(+)-Galactoza se gsete n cantiti foarte mici n snge, lichid cefalorachidian, urin i n cantiti mai mari n lacoz, rafinoz, stachioz etc. Heptozele au un singur reprezentant de interes biologic, seduheptuloza, izolat din Sedum spectabile, care apare n unii intermediari la metabolizarea glucidelor. H H H OH

HOCH2 - C - C - C - C - C - CH2OH OH OH OH H O

XIV.3.2. Oligozaharide Diholozide (dizaharide). Dup modul de cuplare a celor dou molecule de oze, diholozidele vor avea un caracter reductor sau nereductor. Conform nomenclaturii biochimice (1963) dizaharidele nereductoare se numesc glicozil-glicozide, de exemplu zaharoza este -Dfructofuranozil--D-glucopiranozid sau -D-glucopiranozil--Dfructofuranozid, iar cele reductoare glicozil-glucoze, de exemplu, lactoza este 4-O--D-galactopiranozil--D-glucopiranoz sau O--Dgalactopiranozil-(14)--Glucopiranoz., dar n practic se folosesc denumirile uzuale mai simple. Trehaloza este format din dou molecule de -glucoz legate prin grupele reductoare. Se gsete n cantiti relativ mari n ciuperci, fiind obinut iniial din cornul de secar, apare n drojdia de brutrie, cu legturi -, n alge, insecte, bacilul tuberculozei etc. Pe lng forma obinuit a trehalozei se cunosc izomeri ai acesteia cum ar fi izotrehaloza i neotrehaloza. OH CH2OH O OH OH O OH HO O OH CH2OH
trehaloza

269

Zaharoza se gsete n regnul vegetal, de exemplu, n sfecla i trestia de zahr, de unde se obine zahrul comercial care este o zaharoz destul de pur. Are rotaia specific [ ]D20 = +66,5o i prin hidroliz acid sau enzimatic rezult un amestec echimolecular de D-glucoz i D-fructoz, ultimul puternic levogir. Din aceast cauz acest amestec se numete zahr invertit. CH2OH OH OH
zaharoza

O O

CH2OH O HO OH CH2OH

HO

Dizaharide reductoare. Maltoza prezint o legtur -glicozidic ntre dou molecule de glucoz. Este un intermediar n hidroliza amidonului: CH2OH OH OH
maltoza

OH O O OH O OH CH2OH HO

CH2OH OH

O O OH
-maltoza

CH2OH O OH OH OH

HO

Celobioza are structura celulozei cu acelai rol n celuloz ca i maltoza n amidon. CH2OH CH2OH O O O OH OH OH HO OH
celobioza

OH

270

Lactoza este -glicozido-(14)-glucoz. Lactoza are o mare importan biologic, fiind glucida caracteristic laptelui (50 g/l n laptele de vac i 65 g/l n laptele de femeie), care asigur o mare parte a necesarului energetic pentru sugar. n laptele de femeie se mai gsesc nc opt zaharide care deriv din lactoz. Lactoza este hidrolizat de lactaz. CH2OH HO OH OH
lactoza

O O

CH2OH OH

O OH

OH

Oligozaharide cu 3-5 molecule de oze. Denumirea de oligozaharid se face ncepnd cu prima oz, nereductoare i continund cu celelalte, i notnd, n parantez, cele dou cifre care indic legtura dintre oze, de exemplu, rafinoza [O--D-galactopiranozil-(16)--D-glucopiranozil--Dfructofuranozid. Genianoza este o triholozid nereductoare din rdcina de geniana i are urmtoarea structur: CH2OH HO OH OH HO OH OH
gentianoza

O O

CH2

O O

CH2OH O HO OH CH2OH

Rafinoza nsoete zaharoza n sfecl. Oze i ozide aminate. Se cunosc numeroi compui n care gruparea hidroxilic din oze este nlocuit cu grupri aminice. Numele se formeaz de la numele ozei cu adugarea sufixului amin, de exemplu, glucozamina i galactozamina.

271

OH CH2OH O HO OH NH2
glucozamina

H O OH

OH CH2OH O HO OH O OH NH2
galactozamina

H-C-NH2 HO-C-H H-C-OH H-C CH2OH

H-C-NH2 HO-C-H HO-C-H H-C CH2OH

Glucozamina intr n structura unor dizaharide aminate. Esteri fosforici ai ozelor sunt intermediari importani n metabolismul glucidelor i sunt utilizai ca i substrate pentru determinarea activitii diferitelor enzime sau n terapie. Polioze. Amidonul constituie rezerva energetic a seminelor i a tuberculilor. Granulele de amidon sunt constituite din dou pri amiloza i amilopectina. CH2OH OH OH O CH2OH O OH OH O CH2OH O OH OH CH2OH O OH OH OH

HO

n-2 2

molecula amidonului (amiloza)

Amiloza, M = 50000, are o caten liniar, format din cca 300 de molecule de -glucoz. Amiloza este solubil n ap fierbinte cu formarea unei soluii coloidale, care la rece formeaz o coc (gel). Se recunoate datorit culorii albastre pe care o d cu iodul. Amilopectina sau izoamiloza are M = 200000 - 300000, d culoare violacee cu iodul. Are o structur mult mai complicat dect amiloza, pe lng lanurile de legturi 14, prezint i ramificaii cu legtur 16, cu un grad de ramificaie pentru 8 - 10 uniti de glucoz. Hidroliza amidonului sub aciunea acizilor sau a enzimelor duce la o serie de produi intermediari, molecule mai mici, care se difereniaz prin reacia cu iodul, amilodextrine (culoare albastr), eritrodextrine (roie), acrodextrine (nu coloreaz soluia de iod) i n final se ajunge la glucoz.

272

Prin arderea amidonului se obine o cenu care pe lng ionii fosfat i silicat mai conine cationi de calciu, magneziu, sodiu i potasiu.
O O O O O CH2 O O O O O O O O O O O

Glicogenul este o polizaharid cu M = 1 - 5000000, ce corespunde la animale, amidonului vegetal, cu o structur foarte ramificat de felul:

Formula uniramificata a gligenul

Formula multiramificata a glicogenului

Glicogenul se gsete n cantitate mare la animalele inferioare (molute, stridii) i la mamifere, ca i glucid de rezerv n ficat (pn la 10% din greutatea ficatului), n muchi (unde asigur procesul contraciilor) precum n bacterii i ciuperci. Ca structur se aseamn cu amilopectina, fiind hidrolizat de amilaze, dar are ramificaii mai dese; o ramificaie la 3 - 4 uniti de glucoz. Cu iodul d o coloraie roie crmizie. XIV.4. GLICOLIZA Cu acest capitol ncepem s studiem sistemele multienzimatice care catalizeaz degradarea moleculelor de combustibil i recuperarea unei pri din energia chimic sub form de ATP. Glicoliza este una din cile metabolice cunoscute sub genericul de fermentaie anaerob, sistemul care-i

273

procur energie chimic n absena oxigenului. Calea glicolitic a fost primul sistem enzimatic de importan major care a fost elucidat. XIV.4.1. Fermentaia i respiraia Toate organismele heterotrofe i obin n final energia din reacii de oxido-reducere, adic reacii n care electronii sunt transferai de la un compus, donor de electroni sau agent reductor, la un acceptor de electroni sau agent oxidant. A. In conditii anaerobe Glucoza
fermentatie

B. In conditii aerobe Glucoza

fermentatie

produsi de fermentatie

produsi de fermentatie
O2 respiratie

CO2 + H2O Organismele aerobe i procur cea mai mare parte din energie prin respiraie, definit ca oxidarea compuilor organici pe seama oxigenului molecular, oxigenul servete n acest caz ca i acceptor final de electroni. Organismele anaerobe heterotrofe i obin cea mai mare parte din energie din reaciile de oxido-reducere, dar n acest caz electronii trec de la un intermediar organic, de la degradarea zahrului, donor de electroni, la alt intermediar organic din procesul de fermentaie, care acioneaz ca i acceptor de electroni. n procesele de fermentaie anaerob nu apare o oxidare net a combustibilului. Organismele care pot tri n mediu anaerob i pot folosi fermentaia ca surs de energie se mpart n dou clase. Organismele obligat sau strict anaerobe, care nu pot folosi sub nici o form oxigenul i de multe ori nici mcar tolera. Organismele facultativ anaerobe, care pot tri n absena sau n prezena oxigenului. Cnd triesc n mediu anaerob ele continu procesul de fermentaie anaerob, oxidndu-se apoi n mediu aerob cu ajutorul oxigenului molecular.

274

A Clicoliza Glucoz 2 acid lactic C1-C2-C3-C4-C5-C6 (glucoza)

B. Fermentatia alcoolica Glucoz 2 etanol + 2CO2 (glucoza) C1-C2-C3-C4-C5-C6

C1-C2-C3 trioza + C4-C5-C6 trioza

C4-C5-C6 trioza + C1-C2-C3 trioza

CH3

(1)

CH3

(1)

CHOH (2) COOH (3) acid lactic + CH3 (6) CHOH (5) COOH (4)

CH2OH (2) etanol + (3) CO2 + CH3 (6) CH2OH (5) + (4) CO2

ntre numeroasele tipuri de fermentaie a glucozei mai frecvente sunt dou aflate n strns legtur. n glicoliz, denumit uneori i fermentaie homolactic, molecula de glucoz din 6 atomi de carbon se degradeaz n dou molecule de acid lactic de cte trei atomi de carbon, singurul produs final. Acest tip de degradare a glucozei apare la multe microorganisme i la celulele plantelor i animalelor superioare. n fermentaia alcoolic, ce caracterizeaz o serie de drojdii, molecula de glucoz se degradeaz n dou molecule de etanol cu cte doi atomi de carbon i dou molecule de dioxide de carbon. Fermentaia alcoolic are loc pe aceeai cale enzimatic ca i glicoliza, dar mai solicit dou etape enzimatice diferite la sfrit. XIV.4.2. Bilanul energetic a glicolizei i a fermentaiei alcoolice Schema de mai sus nu descrie soarta atomilor de carbon din molecula de glucoz i nu spune nimic despre energia sistemului. De fapt, att n glicoliz ct i n fermentaie alcoolic rezult ATP din ADP. Ecuaiile complete includ etapele de conservare a energiei:

275

Glicoliza: C6H12O6 + 2 Pa + 2 ADP Fermentatie alcoolic: C6H12O6 + 2 Pa + 2 ADP

2 CH3CHOHCOOH + 2 ATP + 2 HOH 2 CH3CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 2 HOH

Pentru a analiza partea energetic a glicolizei n condiii standard, ne putem opri la ecuaia general a dou procese, i anume, trecerea glucozei n lactat care este exoterm i trecerea ADP n ATP, care este endoterm: Procesul exoterm: Glucoz 2 lactat Procesul endoterm: 2 Pa + 2 ADP 2 ATP + 2 HOH 2 lactat + 2 ATP + 2 HOH

Suma: Glucoz + 2 Pa + 2 ADP

o G1 = 47 ,0kcal / mol

Go 14 ,6kcal / mol 2 =+ Go 32 ,4kcal / mol total=

Din schimbrile de energie liber standard artate rezult c degradarea g-glucozei n lactat furnizeaz o cantitate mai mult dect suficient de energie necesar etapei endoterme de obinere a ATP din ADP. XIV.4.3. Etapele glicolizei Glicoliza este catalizat de aciunea consecutiv a unui grup de 11 enzime, dintre care cele mai multe au fost izolate n stare cristalizat i studiate n profunzime. Ele sunt uor de extras din celule sub form solubil i se presupune c sunt fixate n partea solubil a citoplasmei. De asemenea, se crede c enzimele individuale care catalizeaz etapele glicolizei nu depind fizic una de alta, ele nu par a fi asociate ntr-un complex multienzimatic. Toi produii intermediari ai glicolizei de la glucoz la piruvat sunt compui fosforilai. Gruprile lor fosfat par s ndeplineasc trei funcii. 1. Fiecare produs intermediar primete cte o grupare fosfat polar negativ, care-l face s nu mai poat strbate membrana celular (care, n general nu las s treac compuii polari). 2. Grupele fosfat ale produilor intermediari ai glicolizei servesc, de asemenea, ca grupri de legtur sau de recunoatere
276

n formarea complecilor enzim-substrat. 3. Cea mai important funcie a gruprii fosfat din compuii intermediari ai glicolizei este cea de conservare a energiei, deoarece n final se transform n ATP. Glicoliza anaerob prezint dou etape mai importante. n prima etap, glucoza este pregtit pentru catabolizare prin fosforilare i apoi disociat pentru a forma trioza (aldehida 3-fosfogliceric). n cea de a doua etap aldehida 3-fosfogliceric este convertit n lactat. Prima servete ca o faz de pregtire, de colectare, prin care toate monozaharidele, dup ce au fost fosforilate trec ntr-un produs comun aldehida 3-fosfogliceric. Aceast etap utilizeaz dou molecule de ATP pentru fosforilarea poziiilor 1 i 6 a glucozei. n cea de a doua faz se formeaz patru molecule de ATP, astfel, ctigul net este de dou molecule de ATP pentru fiecare molecul de glucoz prelucrat. n timpul glicolizei au loc diferite transformri chimice iar cile lor se afl n interconversiune: 1) Lanul de reacii prin care scheletul carbonic a glucozei se degradeaz pentru a forma lactatul sau calea atomilor de carbon. 2) Lanul de reacii prin care fosfatul anorganic se transform n grupare fosfat terminal la al ATP-ului sau calea fosfatului. 3) lanul de reacii de oxido-reducere sau calea electronilor.

277

Fructoza Galactoza Manoza Pentoze Etapa I tipuri de monozaharide si conversia lor in glicerinaldehid-3-fosfat: intrarea a 2 moli de ATP
fosforilare

Glucoza ATP ADP glucozo-6-fosfat

Glicogen, amidon

Pa

fructozo-6-fosfat ATP ADP fructozo-1,6-difosfat 2NAD+ Pa Etapa II conversia glicerinaldehid- 2ATP 3-fosfatului in lactat, cu conservarea energiei ca ATP; rezultatul final al stadiului I si stadiului II sunt doua molecule de ATP/molecula de glucoza 3-fosfogliceroil-fosfat 2ADP 3-fosfoglicerat 2NADH+2H+

2-fosfoglicerat fosfoenolpiruvat 2ATP 2ADP piruvat 2NAD+ lactat

XIV.4.3.1. TREPTELE ENZIMATICE DIN PRIMA ETAP A GLICOLIZEI Fosforilarea D-glucozei de ctre ATP. Aceasta este prima din cele dou trepte de iniiere a glicolizei n care este utilizat ATP-ul. Molecula neutr de glucoz se pregtete pentru etapele urmtoare prin fosforilare la poziia 6, pe socoteala ATP, obinndu-se, astfel, o molecul ncrcat negativ. n celule exist puine molecule de glucoz liber, cea mai mare parte este fosforilat. Fosforilarea D-glucozei la 6-glucozofosfat este
278

catalizat de dou enzime: hexokinaz i glucokinaz care difer prin specificitatea lor. Reacia general este: ATP + D-glucoza CH2OH O OH HO OH OH ATP ADP
Mg+2

ADP + D-glucozo-6-fosfat Go = - 4,0 kcal/mol CH2OPO3-2 O OH HO OH OH

Hexokinaza este mai larg rspndit, ea reprezint enzima folosit de majoritatea celulelor. Aceast enzim catalizeaz fosforilarea, n general, a unui numr mare de hexoze (D-fructoza, D-manoza etc), are o activitate sporit fa de aldoze. Hexokinaza din drojdie a fost izolat i cristalizat, are M = 96000. Hexokinaza din diferite esuturi se gsete sub forma a trei izomeri care se deosebesc ntre ei privind afinitatea fa de glucoz i este inhibat de produsul de reacie, glucozo-6-fosfat. Cel de al doilea tip de enzim catalizatoare pentru aceast treapt este glucokinaza, care acioneaz numai asupra glucozei nu i asupra asupra altor hexoze. Aceast enzim nu este inhibat de glucozo-6-fosfat. Glucokinaza se gsete n cantiti mari n ficat i este absent n muchi, unde ntlnim numai hexokinaz. Rolul glucokinazei ncepe cnd concentraia glucozei n snge este temporar ridicat, de exemplu, dup o mas bogat n zaharuri. Att hexokinaza ct i glucokinaza au nevoie de prezena unui ion bivalent (Mg+2 sau Mn+2), care se combin mai nti cu ATP-ul pentru a forma MgATP-2 sau MnATP-2 . Defosforilarea enzimatic a D-glucozofosfatului se realizeaz n prezena glucozo-6-fosfatazei, care are rolul de a furniza glucoza liber n snge. D-glucozo-6-fosfat
G o' = 4,0kcal / mol

D-glucoza + fosfat

Trecerea glucozo-6-fosfatului n fructozo-6-fosfat. Enzima care catalizeaz aceast reacie este glucozofosfat izomeraza, care a fost separat din esutul muscular n stare pur.

279

D-glucozo-6-fosfat CH2OPO3-2 O HO OH OH OH

glucofosfoizomeraza

G o' = + 0,4kcal / mol

D-fructozo-6-fosfat

CH2OPO3-2 O HO OH

CH2OH OH

Fosforilarea D-fructozo-6-fosfatului la frucotzo-1,6-difosfat. n aceast reacie, a doua din cele dou reacii de iniiere a glicolizei, a doua molecul de ATP este necesar pentru fosforilarea fructozo-6-fosfatului n poziia 1 prin aciunea 6-fosfofructokinazei.
ATP + D-fructozo-6-fosfat ADP + D-fructozo-1,6-difosfat

Go = -3,4 kcal/mol CH2OPO3-2 O HO OH CH2OH OH ATP ADP OH CH2OPO3-2 O HO

6-fructokinaza

CH2OPO3-2 OH

Este nevoie de Mg+2. Cu toate c fructozo-6-fosfatul reprezint acceptorul specific de fosfat n aceast reacie, ATP-ul poate fi nlocuit de UTP. Fosfofructokinaza este o enzim allosteric, fosforilarea fructozo-6fosfatului este cel mai important punct de control al glicolizei. Asemenea enzimelor allosterice, fosfofructokinaza (M = 380000), conine un numr de subuniti i prezint dependena complex a vitezei de reacie de concentraiile substratelor. Fosfofructokinaza are modulatori multipli. Ea este inhibat de concentraii mari de ATP, de citrat i de acizi grai cu caten lung, dar este stimulat de ADP i AMP. n consecin atunci cnd celulare are o concentraie mare de ATP sau ori de cte ori apare un alt combustibil, cum ar acizii grai sau citratul se oprete procesul glicolizei. n mod contrar

280

cnd predomin ADP sau AMP i lipsesc ali combustibili se reia procesul glicolitic. D-Fructozo-1,6-fosfatul poate fi reconvertit n fructozo-6-fosfat pe o alt cale enzimatic, printr-o reacie de hidroliz catalizat de hexozodifosfataz, de asemenea, o enzim allosteic cu rol evident n reglarea biosintezei glucozei. fructozo-1,6-difosfat + H2O fructozo-6-fosfat + Pa

Go = -4,0 kcal/mol Scindarea fructozo-1,6-difosfatului n dihidroxiaceton-fosfat i glicerinaldehid-3-fosfat. Aceast reacie este catalizat de binecunoscuta enzim fructozo-difosfat aldolaz, care se poate separa n stare cristalin din muchii de iepure. Reacia catalizat reprezint o condensare aldolic reversibil, din care rezult doi triozofosfai.
D-fructozo-1,6-difosfat
fructozodifosfat aldolaz

dihidroxiacetonfosfat + D/glicerinaldehid-3-fosfat

Go = +5,73 CH2OPO3-2 C=O HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OPO3-2 Cu toate c reacia este endoterm, reacia este rapid i echilibrul deplasat spre dreapta. Tipic pentru fructozo-difosfat-aldolaze, care se gsete n plante i animale superioare, denumite adesea aldolaze de clasa I-a, este aceea c are M = 160000i conine patru subuniti. Ea conine un numr de grupri SH libere, dintre care unele au activitate catalitic.
281 fructozo-difosfat aldolaz

CH2OPO3-2 C=O CH2OH +

HC=O H-C-OH CH2OPO3-2

Interconversia triozo-fosfailor. Un singur triozofosfat i anume gliceraldehid-3-fosfatul poate fi degradat n mod direct n reaciile urmtoare ale glicolizei. n aceste condiii dihidroxiacetonfosfatul este reversibil convertit la glicerinaldehid-3-fosfat de ctre enzima triozofosfat izomeraz. dihidroxiacetonfosfat CH2OPO3-2 C=O CH2OH D-glicerinaldehid-3-fosfat
triozofosfat izomeraza

HC=O H-C-OH CH2OPO3-2

Se observ c n cursul reaciilor atomii de carbon C1 i C6 ai glucozei iniiale devin C3 al D-glicerinaldehid-3-fosfatului, atomii C2 i C5 devin C2 i atomii C3 i C4 devin C1. Aceast reacie ncheie prima etap a glicolizei, n care molecula de glucoz este pregtit pentru cea de a doua etap prin dou trepte de fosforilare i scindare. Reaciile de colectare prin care glicogenul, amidonul i celelalte zaharuri sunt introduse n prima etap le vom descrie mai trziu. XIV.4.3.2. TREPTELE ENZIMATICE DIN A DOUA ETAP A GLICOLIZEI Aceast etap cuprinde treptele de oxidoreducere ca i cele de fosforilare n care ADP este trecut n ATP. Oxidarea gliceraldehid-3-fosfatului la 3-fosfogliceroil fosfat. Aceasta este una din cele mai importante trepte ale secvenei glicolitice, deoarece conserv energia de oxidare a gruprii aldehidice din Dglicerinaldehid-3-fosfat n produsul su de oxidare, 3-gliceroilfosfatul. Elucidarea acestei ci a fost elucidat de ctre Warburg (1938-1939). Enzima care catalizeaz oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice, denumit n mod curent gliceraldehidfosfat dehidrogenaz se poate izola sub form cristalin (M = 140000) din muchiul de iepure sau drojdie. Ea conine 4 subuniti identice, fiecare fiind constituit dintr-un lan polipeptidic de aproximativ 330 de resturi, a crui secven de aminoacizi este descifrat. Reacia total sub aciunea enzimei catalizatoare este urmtoarea:
D-Aldehida 3-fosfogliceric + NAD+ + Pa

D-3-fosfdogliceroil fosfat + NADH + H+

282

HC=O H-C-OH CH2OPO3

NAD+ + Pa

NADH + H+

O C H-C-OH

O O-P-OO-

gliceraldehidfosfat -2 dehidrogenaza

CH2OPO3-2

n aceast reacie, gruparea aldehidic a D-glicerinaldehid-3fosfatului este oxidat la carboxil. n ciuda acestui fapt, n locul unui acid carboxilic liber din reacie rezult o anhidrid mixt a gruprii carboxil a acidului 3-fosfogliceric i acidului fosforic, respectiv 3-fosfogliceroil-3fosfatul, care, dup cum am vzut este un compus fosfatidic macroergic avnd o energie liber standard de hidroliz mai mic dect ATP-ul. Cealalt component care intr n aceast reacie este NAD+, forma oxidat a nicotinamid-adenin-dinucleotidului, care accept electronii de la gruparea aldehidic a aldehidei D-3-fosfoglicerice. NAD servete drept transportor de electroni de la donorul de electroni, aldehida D-3fosfoglicerice, la piruvat, care se va forma mai trziu n secvena glicolitic. Reacia global are o valoare Go, relativ mic, fiind astfel puin stabil i pornete uor n ambele direcii n funcie de concentraia reactanilor i a produilor. Reacia de la stnga spre dreapta se poate separa n dou procese pentru analiza schimbului de procese energetice, folosind RCHO pentru a desemna aldehida 3-fosfogliceric, RCOOH pentru acidul 3fosfogliceric i RCOOPO3H2 pentru 3-fosfogliceroilfosfat. Reacia parial exoterm: RCHO + H2O + NAD+ RCOOH + NADH + H+

Go = -10,3 kcal/mol Reacia parial endoterm: RCOOH + H3PO4 RCOOPO3H2 + H2O

Go = +11,8 kcal/mol Suma reaciilor:

283

RCHO + H3PO4 + NAD+

RCOOPO3H2 + NADH + H+

Go = -10,3 + 11,8 = +1,5 kcal/mol Mecanismul acestei importante reacii a fost studiat n detaliu. Fiecare dintre cele 4 subuniti identice ale enzimei conine cte un centru activ, de care se leag molecula NAD+. 3-Fosfogliceroil-fosfat dehidrogenaza este inhibat de metalele grele, ca i de agenii alchilani, de exemplu, iodacetatul. De aici s-a tras concluzia c cel puin o grupare SH este esenial activitii enzimatice. Enzima leag, mai nti, forma oxidat a coenzimei NAD+, printro reacie n care gruparea esenial sulfhidril este mascat steric. n faza urmtoare, gruparea aldehidic a substratului formeaz o legtur tiolacetat cu gruparea sulfhidril.
NAD+ RCHO

SH

NAD+ SH

NAD+ E S-CH-R OH

transfer de electroni

NADH + H+ E S-C-R O

NAD+

NADH + H+

NAD+ E S-C-R O E

NAD+ + R-C-O-PO3-2 SH O

Dup aceea enzima catalizeaz transferul hidrogenului de la aldehida 3-fosfogliceric, formnd un tioester ntre gruparea sulfhidril al enzimei i gruparea carboxil a substratului, aceast form a enzimei poart numele de acil-enzim. NADH prsete, apoi, centrul activ al enzimei n schimbul unei molecule de NAD+ libere din mediu. Gruparea acil este apoi transferat de la gruparea sulfhidril a enzimei la fosfatul anorganic pentru a forma 3fosfogliceroil fosfatul, produsul de oxidare. Forma liber oxidat a enzimei este gata de un nou ciclu catalitic. Transferul fosfatului de la 3-fosfogliceroil fosfat la ADP. Warburg a artat c 3-fosfogliceroil fosfatul format n cadrul reaciei prezentate, reacioneaz acum pe cale enzimatic cu ADP-ul, cu transferul gruprii acilfosfat la ADP i formarea 3-fosfogliceratului, catalizat de fosfogliceratkinaz.

284

3-Fosfogliceroil fosfat + ADP

3-fosfoglicerat + ATP

ADP CO O-PO3-2 H-C-OH CH2OPO3-2

ATP COOH-C-OH CH2OPO3-2

fosfoglicerat kinaz

Aceast reacie este puternic exoterm i servete pentru a trage reacia precedent spre consunare. Enzima transportoare de substrat are un grad de afinitate deosebit de ridicat pentru 3-fosfogliceroil fosfat. Ecuaia general a celor dou procese este:
Aldehida 3-fosfogliceric + Pa + ADP + NAD+ 3-fosfoglicerat + ATP + NADH + H+

Go = -3,0 kcal/mol Prin intermediul acestor dou reacii consecutive, energia de oxidare a unei grupe aldehidice la gruparea carboxilic se conserv sub form de ATP Conversia 3-fosfogliceratului la 2-fosfoglicerat. Aceast reacie este catalizat de enzima fosfogliceromutaz: 3-Fosfoglicerat 2-fosfoglicerat

Go = +1,06 kcal/mol COOH-C-OH CH2OPO3-2

fosfogliceromutaz

COOH-C-OPO3-2 CH2OH

Pentru aceast reacie este esenial prezena magneziului care implic transferul gruprii fosfat din poziia 3 n poziia 2 a acidului gliceric. Aceast enzim apare sub dou forme, cea din esutul se pare c necesit ca intermediar 2,3-difosfogliceratul:
285

COOH-C-OH CH2OPO3-2 +

COOH-C-OPO3-2 CH2OPO3-2

fosfogliceromutaz

COOH-C-O-PO3-2 CH2OPO3-2

COO+ H-C-O-PO3-2 CH2OH

Deshidratarea 2-fosfogliceratului la fosfoenolpiruvat. Trecerea 2fosfogliceratului n 2-fosfoenolpiruvat este cea de a doua reacie a secvenei glicolitice, n care este generat un compus macroergic. Treapta este catalizat de enolaz: 2-Fosfoglicerat fosfoenolpiruvat + H2O

Go = +0,44 kcal/mol COOH-C-PO3-2 COOH-C-PO3-2 + H2O

CH2OH CH2 Enolaza a fost obinut n forma cristalin din mai multe surse (M = 85000). Ea necesit, n mod absolut, prezena unui cation bivalent (magneziu sau mangan) care alctuiete mpreun cu enzima un complex, nainte ca substratul s fie legat. Transferul fosfatului de la fosfoenolpiruvat la ADP. Transferul gruprii fosfat de la fosfoenolpiruvat la ADP, prin obinere de piruvat liber este catalizat de enzima piruvatkinaz: Fosfoenolpiruvat + ADP
piruvatkinaz

piruvat + ATP

Go = -7,5 kcal/mol COOH-C-PO3-2 + ADP CH2 COOC=O + ATP CH3

Aceast enzim a fost obinut n starea cristalin (M = 250000). Reacia este puternic exoterm i este ireversibil n condiii celulare. Enzima are nevoie
286

de magneziu i mangan cu care trebuie s formeze un complex nainte de a se lega de substrat. Ionul de calciu intr n competiie cu magneziu, formnd un complex inactiv. Piruvatkinaza prezent la mamifere este o enzim reglatoare i apare n forme diferite n esuturi. Forma F, sau cea din ficat este activat de ctre fructozo-1.6-difosfat i de concentraii mari de fosfoenolpiruvat, dar este inhibat de ATP, ANP, citrat i alanin. Forma M, sau cea muscular, nu este inactivat de fructozo-1,6-difosfat, dar este inhibat de fenilalanin. Reducerea piruvatului la lactat. n ultima treapt a glicolizei, piruvatul este redus la lactat pe socoteala electronilor donai iniial de aldehida 3-fosfogliceric. Aceti electroni sunt transferai de NADH. Reacia este catalizat de lactatdehidrogenaz. Piruvat + NADH + H+ lactat + NAD+

Go = -6,0 kcal/mol COOC=O CH3

NADH+H+ lactatdehidrogenaza

COOHO-C-H CH3

NAD+

Echilibrul reaciei este deplasat foarte mult spre dreapta, dup cum arat i valoare negativ ridicat a Go. Lactat dehidrogenaza apare la animalele superioare n cel puin cinci forme de molecule diferite sau izoenzime, care difer prin viteza de reducere a piruvatului n funcie de concentraia acestuia Lactatul, produsul final al secvenei glicolitice n condiii aerobe, difuzeaz prin membrana celular n exterior ca i produs de excreie. n cazul n care muchii animalelor sunt nevoii s funcioneze anaerob n timpul unor scurte puseuri de activiti intense, lactatul care iese din celula muscular n snge este recuperat de ficat i reutilizat pentru a forma glucoza din snge. XIV.4.4. Bilanul energetic global al glicolizei

287

Acum putem ntocmi un bilan energetic general al glicolizei, care s ne prezinte un tablou general despre ce a intrat n reacie, ce s-a recuperat, ce s-a pierdut i ce s-a ntmplat cu energia n decursul glicolizei.
Glucoz + ATP + 2 NAD+ + 2 Pa + 4 ADP + 2 NADH + 2H+ 2 lactat + 2 ADP + 2 NADH + 2 H+ + 4 ATP + 2 NAD+ + 2 H2O

Reducnd termenii asemenea:

Glucoz + 2 Pa + 2 ADP 2 lactat + 2 ATP + 2 H2O

n general D-glucoza trece n dou molecule de lactat, dou molecule de ADP i fosfat trec ATP i sunt transferai 4 electroni. Un interes deosebit prezint aspectul energetic al glicolizei la nivelul celulei intacte. O astfel de analiz s-a fcut la nivelul celulelor roii din snge, care difer de celelalte celule din organism c i obine energia n urma glicolizei. Pentru fiecare etap s-a calculat valoare energiei libere. Din aceste rezultate s-au artat c opt reacii din secvena glicolitic sunt reversibile, (Go este foarte aprope de zero), n timp ce trei dintre reacii prezint Go < 0, aflndu-se departe de starea de echilibru, i anume etapele catalizate de hexokinaz, fosfofructokinaz i piruvatkinaz.

XIV.4.5. Intrarea altor hidrai de carbon n secvena glicolitic Polizaharidele de rezerv, glicogenul i amidonul, i zaharurile simple n afara glucozei sunt introduse n prima faz a glicolizei prin intermediul unor ci metabolice catalizate de nite enzime auxiliare. Glicogenul i amidonul. Unitile de D-glucoz din glicogen i amidon intr n secvena glicolitic prin aciunea consecutiv a dou enzime glicogenfosforilaza (sau amidonfosforilaza) i fosfoglucomutaz. Glicogenfosforilaza i amidonfosforilaza catalizeaz o gam larg de reacii de tipul:
(Glucoz)n + HPO4-2
fosforilaz

(glucoz)n-1 + glucozo-1-fosfat

288

Go = +0,73 kcal/mol n aceast reacie, legtura glicozidic terminal (14) de la captul nereductor al catenei laterale a glicogenului sufer o fosforiliz.
o O O o O O PO3-2 + o O O o O O o O O o O O o O O o O O Pa
glicogenfosforilaza

Aa cum hidroliza provoac ruperea unei molecule prin introducerea unei molecule de ap, fosforilaza provoac scindarea unei legturi covalente prin introducerea unei molecule de acid fosforic. Ruperea legturii glicozidice terminale duce la ndeprtarea glucozei terminale sub form de glucozo-1fosfat, lsnd o caten glicogen cu o unitate de glucoz mai puin. Enzima reacioneaz n mod repetat asupra capetelor nereductoare ale lanului glicogenic pn cnd se ntlnete cu punctele de ramificare 1 6 pe care nu le poate ataca. Aciunea exhaustiv a glicogenfosforilazei poate produce astfel o dextrin limit, care poate fi degradat mai departe de glicogenfosforilaz dup aciunea unei enzime de deramificare, o amilo-1,2-glucozidaz hidrolitic, ce hidrolizeaz legtura 16 din punctele de ramificaie, alctuind astfel o nou caten de polizaharid care poate fi atacat de glicofenfosforilaz. Fosforilaza se situeaz la punctul strategic important ntre rezervorul de combustibil (glicogen sau amidon) i secvena glicolitic ce utilizeaz combustibilul. Activitatea sa n muchi i ficat se afl sub controlul unui sistem complicat de reglatori. Fosforilaza din muchii scheletici apare sub dou forme, cea activ, fosforilaza a i una mai puin activ fosforilaza b, ambele au fost cristalizate. Fosforilaza a are M = 380000 i const din patru subuniti identice. Fiecare subunitate prezint un rest de fosfoserin, esenial pentru activitatea catalitic i o molecul de piridoxal fosfat, care este legat covalent de un rest de lizin. Funcia piridoxalfosfatului este nc necunoscut. Fosforilaza a poate fi atacat de enzima hidrolitic

289

fosforilazfosfataz, care ndeprteaz gruprile fosfat din resturile de serinfosfat. Aceast reacie face ca fosforilaza a s se disocieze n dou molecule de fosforilaz b, care este forma mai puin activ. Fosforilaza b trece n forma activ printr-o cale metabolic n care patru molecule de ATP acioneaz asupra dou molecule de fosforilaz b n prezena enzimei fosforilazkinaz. Prin aciunea fosforilazkinazei i a fosforilazfosfatazei poate fi controlat raportul dintre fosforilaza a i fosforilaza b n interiorul celulei. Ficatul conine i el formele active i inactive ale fosforilazei, raportul fiind controlat de viteza de interconversie a celor dou forme. Glucozo-1-fosfatul, produs final al reaciei dintre glicogen i fosforilaze, trece n glucozo-6-fosfat cu ajutorul fosfoglucomuatazei, care a fost obinut n form pur din multe surse. Ea catalizeaz o reacia uor reversibil. Fosfoglucomutaza conine un rest de serin indispensabil activitii catalitice. n timpul ciclului catalitic, gruparea hidroxil al serinei se esterific cu acid fosforic, care penduleaz ntre poziiile 1 i 6 ale glucozei: Glucozo-1-fosfat
fosfoglucomutaz

Glucozo-6-fosfat

G = -1,74 kcal/mol
o

P E +

1 6

P P
1

P +
6 1

P E P + P

+
6

Dizaharidele ingerate de animalele superioare sunt de obicei hidrolizate n componentele lor monozaharidice nainte de a fi absorbite de intestin, dup reaciile:
Zaharoza + HOH Maltoza + HOH Lactoza + HOH
fructofuranozidaz glucozidaz galactozidaz

D-glucoz + D-fructoz 2 D-glucoz D-glucoz + D-galactoz

290

Enzima lactaza, o -galactozidaz secretat de intestinul subire, are o activitate redus sau lipsete cu desvrire la muli aduli arabi, evrei, bantu, japonezi, indieni americani i filipinezi. La aceti indivizi lactoza nu se absoarbe normal ceea ce poart numele de intoleran la lactoz. Monozaharidele rezultate i fac intrarea in glicoliz dup cum urmeaz. n ficatul vertebratelor fructoza intr n glicoliz sub aciunea fructokinazei, care catalizeaz fosforilarea fructozei la C1. D-Fructoza + ATP D-fructozo-1-fosfat + ADP

Fructozo-1-fosfatul este apoi disociat n D-glicerinaldehid i dihidroxiaceton fosfat. Sub aciunea aldolazei, D-glicerinaldehida liber este fosforilat la glicerin aldehid 3 fosfat.
D-Glicerinaldehid + ATP D-aldehida-3-fosfogliceric + ADP

D-Galactoza intr n ciclul glicolitic dup ce are loc fosforilarea cu ajutorul ATP-ului sub aciunea galactokinazei. ATP + D-galactoz ADP + galactozo-1-fosfat

D-galactozo-1-fosfatul trece prin izomerizare, prin mai multe etape, n D-glucozo-1-fosfat, care necesit coenzima uridintrifosfat (UTP). CH2OH HO OH OH OPO3-2 O CH2OH
UTP

O OPO3-2

OH HO OH

D-Manoza este fosforilat de ctre hexokinaz, reacie relativ nespecific: D-Manoza + ATP D-manozo-6-fosfat

D-Manozo-6-fosfatul este izomerizat reversibil la D-fructozo-6-fosfat de ctre manozoizomeraz. XIV.5. BIOSINTEZA GLUCIDELOR

291

Am vzut c n majoritatea celulelor, conversia glucozei la piruvat, catalizat de enzime glicolitice este calea metabolic principal a catabolismului hidrailor de carbon att n condiii anaerobe, ct i n condiii aerobe. Procesul invers, de conversie a piruvatului n glucozo-6-fosfat, este calea metabolic principal n biosinteza hidrailor de carbon de ctre diferite organisme (figura XIV1). Ctre aceast cale metabolic principal converg diverse ci metabolice afluente, provenite din precursori care nu sunt hidrai de carbon. O asemenea cale metabolic se compune din secvenele de reacie prin care intermediarii ciclului acizilor tricarboxilici sunt transformai n precursori ai glucozei; aceast cale metabolic este folosit i cnd lanurile carbonate ale anumitor aminoacizi sunt convertite n glucoz. O alt cale metabolic afluent o constituie reaciile care realizeaz reducere net a dioxidului de carbon pentru a forma precursori ai glucozei n celulele fotosintetizante. Glucozo-6-fosfatul, produsul principal al sintezei, se poate transforma ulterior, pe numeroase ci divergente la ali metabolii importani: 1) monozaharide i derivaii lor, 2) dizaharide, 3) polizaharide energetice de depozit (amidon, glicogen), 4) a componenilor peretelui celular i ai membranei celulare, cum sunt, celuloza, xilanii, peptidoglicanii i mucopolizaharidele acide i glicoproteinele. Cile metabolice divergente care conduc de la glucozo-6-fosfat la diferii compui difer de la un tip de organism la altul. De exemplu, capacitatea de a forma dizaharide este o caracteristic pentru plante i nu pentru animale. Diverse ci metabolice duc la polimeri extracelulari sunt, de asemenea, specifici speciei. Vom ncepe prin a examina calea metabolic biosintetizant principal, care conduce de la piruvat la glucozo-6-fosfat, utilizat n procesul gluconeogenezei, sinteza glucozei de novo din precursori ca piruvatul, glucoz lactatul, anumii aminoacizi i intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilic ATP
Pa

Figura XIV.1.Calea principal de Figura nr. XIV.2. Cile de ocolire G6P ADP biosintez a hexozelor n calea gluconeogenezei.
ATP F6P Pa ADP FDP

G3P(DHAP)

3PG

2PG GDP fosfoenolpiruvat

292

GTP ADP cetat CO2 oxalila NADH NAD ATP piruvat malat
+

polizaharide ale glicogen, peretelui celular amidon i ale membranei dizaharide celulare glucoz alte monozaharide

glucozo-6-fosfat

3-fosfoglicerat

RuDP

fosfoenolpiruvat intermediarii ciclului acidului tricarboxilic

oxalilacetat

CO2 (fotosintez) lactat

piruvat

aminoacizi glicogenici

XIV.5.1. Calea de biosintez de la piruvat la glucozo-6-fosfat Majoritatea etapelor de reacie din intens circulat cale metabolic principal, de la piruvat la glucozo-6-fosfat, sunt catalizate de enzime ale secvenei glicolitice i au loc, astfel, prin etape inverse ale glicolizei. Totui, exist dou etape ireversibile n calea glicolitic normal la vale care nu pot fi utilizate n conversia invers la deal a piruvatului la glucozo-6-fosfat. n direcia biosintetic aceste etape sunt ocolite prin reacii alternative, care sunt favorabile termodinamic n direcia sintezei. Conversia piruvatului la fosfoenolpiruvat. Prima etap de ocolire este fosforilarea piruvatului la fosfoenolpiruvat, care nu are loc prin etap invers a reaciei piruvat kinazei, probabil datorit variaiei nalt pozitive a energiei libere standard: piruvat + ATP fosfoenolpiruvat + ADP
293

Go = +7,5 kcal/mol n timpul gliconeogenezei, fosforilarea piruvatului este realizat printr-o cale alternativ, printr-o secven de reacii tip suveic care implic cooperarea enzimelor att n citosol ct i n compartimentele mitocondriale ale ficatului de obolan i al altor specii (figura nr. XIV.2.). Prima etap este catalizat de piruvat carboxilaz mitocondrial, care catalizeaz, reacia anaplerotic principal prin care intermediarii ciclului acizilor tricarboxilici sunt generai din piruvat. Aceast reacie este aproape ireversibil n celule.
piruvat + CO2 + ATP
acetil-CoA

oxalilacetat + ADP + P

Go = -0,5 kcal/mol Totui, aceast reacie este controlat strict, ntruct piruvat carboxilaza, o enzim allosteric, este complet inactiv n absena modulatorului su specific, acetil-CoA. Pentru ca reacia s poat s aib loc este necesar ionul Mn+2. Oxalil acetatul format n aceast reacie mitocondrial este apoi redus la malat de ctre malat dehidrogenaza mitocondrial, cu consum de NADH: NADH + H+ + oxalilacetat NAD+ + malat Go = -6,7 kcal/mol Malatul, astfel format, poate prsi mitocondria prin sistemul de transport dicarboxilat al membranei mitocondriale interne, n schimbul fosfatului sau a altui dicarboxilat. n citosol malatul este apoi reoxidat de malat dehidrogenaza NAD-dependent citoplasmatic pentru a forma oxalilacetatul extramitocondrial: malat + NAD+ oxalilacetat + NADH + H+ Go = +6,7 kcal/mol Dei aceast reacie este puternic endergonic, ea decurge spre dreapta deoarece produii sunt rapid ndeprtai. n ultima etap a cii prin ocolire, oxalilacetatul este preluat de ctre fosfoenolpiruvat cocarboxikinaz (GTP) pentru a forma fosfoenolpiruvat i dioxid de carbon, o reacie n care GTP (sau ITP) servete ca i donor de fosfat.
294

oxalilacetat + GTP

fosfoenolpiruvat + CO2 + GDP Go = +1,0 kcal/mol

Fosfoenolpiruvat cocarboxikinaza (GTP) are masa molecular de aproximativ 75000. ntruct are o foarte mic afinitate fa de dioxid de carbon, enzima este activ numai n direcia formrii fosfoenolpiruvatului. Se poate scrie acum reacia global pentru formarea fosfoenolpiruvatului (suma reaciilor de mai sus).
piruvat + ATP + GTP fosfoenolpiruvat + ADP + GDP + P

Go = +0,5 kcal/mol Reacia total este termodinamic reversibil, datorit variaiei mici a energiei libere standard i va tinde s mearg spre dreapta ori de cte ori raportul ATP/ADP este mare i piruvatul este prezent n exces. Componenii reaciei totale pot fi mprii n componeni endergonici i exergonici. Componentul care necesit energie este: piruvat + GTP fosfoenolpiruvat + GDP Go = +7,8 kcal/mol procesul din care rezult energie este: ATP + H2O ADP + P Go = -7,3 kcal/mol Dou legturi macroergice, una de la ATP i una de la GTP, fiecare furniznd -7,3 kcal/mol, sunt cheltuite n total pentru a fosforila o molecul de piruvat. Conversia fosfoenolpiruvatului la fructozo-1,6-difosfat. Fosfoenolpiruvatul format din piruvat este convertit n continuare, cu uurin, la fructozo-1,6-difosfat prin reaciile inverse glicolizei.

295

fosfoenolpiruvat + H2O ATP + 3-fosfoglicerat

enolaz

2-fosfoglicerat

ADP + 3-fosfogliceroilfosfat

3-fosfogliceroilfosfat + NADH + H+ 3-fosfogliceraldehid + P + NAD+ 3-fosfogliceraldehid dihidroxiacetonfosfat 3-fosfogliceraldehid + dihidroxiacetonfosfat

aldolaz

fructozo-1,6-difosfat

Conversia fructozo-1,6-difosfatului la fructozo-6-fosfat. Aceasta este al doilea punct crucial n gliconeogenez, n care reacia secvenei glicolitice directe este ocolit printr-o enzim care funcioneaz n principal n direcia sintezei. Reacia direct a glicolizei n acest punct este catalizat de fosfofructo kinaz.
fructozo-6-fosfat + ATP fructozo-1,6-difosfat + ATP

Go = -3,4 kcal/mol Reacia nu funcioneaz biologic n direcie invers, parial datorit valorii Go nefavorabile. n timpul gliconeogenezei, reacia este ocolit (figura XIV.2.) prin reacia catalizat de enzima din citosol, hexozodifosfataza sau fructozodifosfataza, care realizeaz ndeprtarea hidrolitic, practic ireversibil, a gruprii 1-fosfat. fructozo-1,6-difosfat + H2O fructozo-6-fosfat + P Go = -4,0 kcal/mol Hexozodifosfataza este o enzim allosteric; ea este puternic inhibat de AMP (modulatorul negativ) i stimulat de 3-fosfoglicerat i citrat. Enzima are cel puin trei situsuri de legare pentru AMO, care sunt distincte de situsul de legare a substratului. Enzima prezint un maxim de activitate i favorizeaz formarea glucozei, cnd concentraia unor precursori ai glucozei

296

este mare i concentraia AMP este mic, adic atunci cnd ncrctura energetic este mare. Hexozodifosfataza din ficat are alte proprieti legate de reglarea gluconeogenezei. Ea este convertit de proteazele lizozomale ntr-o form cu un pH optim mai alcalin; aceast schimbare pare s fie rezultatul unei reglri endocrine. n ultima etap, fructozo-6-fosfatul este convertit ireversibil la glucozo-6-fosfat de ctre glucozofosfat izomeraz, care funcioneaz reversibil att n glicoliz ct i n gluconeogenez. fructozo-6-fosfat glucozo-6-fosfat

Reacia global rezult din suma reaciilor gluconeogenezei conducnd de la piruvat la glucozo-6-fosfat este:
2 piruvat + 4 ATP + 2 GTP + 2 NADH + 2 H+ + 6 H2O glucozo-6-fosfat + 4 ADP + 2 GDP + 2 NAD+ + 5 P

Pentru fiecare molecul de glucozo-6-fosfat format, se consum patru legturi macroergice, fiind necesare dou molecule de NADH ca reductor; reacia global este exergonic. Aceast ecuaie este diferit, n mod evident, de cea a conversiei directe a glucozo-6-fosfatului n piruvat, care genereaz trei molecule de ATP. glucozo-6-fosfat + 3 ADP + 2 P + 2 NAD+ 2 piruvat + 3 ATP + 2 NADH + 2 H+ + 3 H2O n unele esuturi, n special n ficat, rinichi i n epiteliul intestinal, glucozo-6- fosfatul poate fi defosforilat pn la glucoz liber, ficatul este centrul principal de formare a glucozei n snge. Clivarea hidrolitic a glucozo-6-fosfatului nu se produce prin reacie invers a hexokinazei, ci este realizat de glucozo-6-fosfataz, care catalizez reacia hidrolitic exergonic: glucozo-6-fosfat + H2O glucoz + P Go = -3,3 kcal/mol

XIV.5.2. Gliconeogeneza din intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici

297

Calea de la piruvat la glucoz permite sinteza net a glucozei din diveri produi ai piruvatului sau a fosfoenolpiruvatului. Dintre ei, cei mai importani sunt intermediarii ciclului acizilor tricarboxilici, care se pot oxida la oxalilacetat. Acesta este apoi convertit la fosfoenolpiruvat prin aciunea fosfoenolpiruvat carboxikinazei. Prin aceast cale, trei atomi de carbon de la diferii intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici sunt convertii, n final, n trei atomi de carbon ai fosfoenolpiruvatului. Aceti atomi de carbon provin din atomii carboxil, -carbonil i atomii de carbon ai oxalilacetatului. Aceast cale a fost amplu verificat prin numeroase experimente cu izotopi marcai, realizate cu animale intacte, pe seciuni de esuturi sau n extracte. COOH CH2 C=O COOH XIV.5.3. Gliconeogeneza din aminoacizi Aa cum vom vedea mai trziu, unii sau toi atomii de carbon ai unor aminoacizi pot fi, n final, convertii de vertebrate fie n piruvat fie n intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici, care vor fi precursori pentru fosfoenolpiruvat. Aceti aminoacizi, care sunt i precursori ai glucozei, sunt numii aminoacizi glucogenici. Un exemplu l constituie acizii glutamic i aspartic, care pot fi convertii direct, printr-o reacie de transaminare, n intermediarii ciclului acizilor tricarboxilici, -cetoglutaratul respectiv oxalilacetatul. Aminoacidul leucina nu genereaz nici piruvat nici vreun intermediar al ciclului acizilor tricarboxilici n timpul degradrii sale oxidative. Deoarece genereaz acetil-CoA, care poate fi convertit n corpi cetonici, dar nu la piruvat, leucina este un aminoacid cetogenic. XIV.5.4. Reglarea gluconeogenezei i glicolizei n figura XIV.3. sunt prezentate punctele de control ale cilor metabolice dintre piruvat i glucoz n esuturile animale. Prima reacie n calea metabolic de la piruvat la glucoz este catalizat de o enzim reglatoare, piruvatcarboxilaza, care exercit primul control.

298

Vedem deci c enzimele reglatoare importante ale cilor metabolice opuse, glicoliza i gluconeogeneza, sunt situate n acele puncte n care cele dou ci nu sunt identice, aceasta asigurnd reglarea independent a fiecreia. n concluzie, ori de cte ori celula prezint un nivel ridicat de ATP i combustibilii respiratori ca acetil-CoA, citratul sau NADH sunt disponibili, glicoliza este accelerat i gluconeogeneza este inhibat. Aceast reacie este iniiat de modulatorul allosteric acetil-CoA. Ca urmare, cnd se sintetizez acetil-CoA mitocondrial n exces fa de necesitile imediate energetice ale celulei, este iniiat sinteza glucozei. Al doilea punct de control al acestei ci este reacia catalizat de hexozodifosfataz, care este stimulat de precursorii glucozei, citratul i 3fosfogliceratul i inhibat de AMP. Astfel, calea metabolic de la piruvat la glucoz este reglat att de nivelul combustibililor respiratori, cum sunt acetil-CoA i citratul, ct i de nivelul energetic al sistemului ATP. Prin contrast, calea metabolic direct este reglat mai nti de enzima allosteric fosfofructokinaz, care este stimulat deAMP i ADP, dar inhibat de ATP, citrat i NADH. Un al doilea punct de reglare a glicolizei este reprezentat de hexokinaz, care este inhibat de glucozo-6-fosfat i probabil de acetil-CoA i fosfoenolpiruvat. un alt Reglator al glicolizei este piruvat kinaza care este inhibat de ATP, NADH i alanin, dar stimulat de fructozo-1,6-difosfat i glucozo-6-fosfat.

299

glucoz ATP ADP G6P

P H2O

F6P AMP ADP ATP NADH AMP citrat FDP citrat 3PG

PEP GDP CO2 GTP malat oxalilacetat acetil-CoA

FDP G6P

ATP NADH alanin

oxalilacetat

piruvat

300