XVII. LIPIDE.

STRUCTUR I PROPRIETI Lipidele sun biomolecule organice, insolubile n ap, ce se pot extrage din celule i esuturi cu solveni nepolari, ca eterul, cloroformul, benzenul etc. Lipidele su cteva funcii biologice importante, servind drept (1) componente structurale a membranelor, (2) ca forme de depozitare i de transport al combustibililor, (3) ca nveli protector al multor organe i (4) drept componente ale suprafeei celulare, implicat n recunoaterea celular, n specificitatea de specie i imunitatea tisular. Unele substane din clasa lipidelor, cum sunt unele vitamine i hormoni au o important activitate biologic. XVII.1. CLASIFICAREA LIPIDELOR Dup criteriul structural lipidele se mpart n: I. LIPIDE SIMPLE: 1. esteri ai acizilor grai cu glicerina (triacilglicerina); 2. esteri ai acizilor grai cu alcooli superiori monohidroxilici (ceruri). II. LIPIDE COMPLEXE. 1. fosfolipide; a) glicerofosfolipide (esteri ai glicerinei cu acizi grai, compui azotai i un rest de acid fosforic); b) sfingolipidele (conin ca alcool sfingozina, acizi grai, compui azotai i un rest de acid fosforic); 2. glicolipide (derivai de sfingozin, acizi grai i o component glucidic); 3. sulfatide; 4. aminolipide; 5. lipoproteine; III. DERIVAI AI LIPIDELOR (rezultate prin hidroliza claselor de mai sus) 1. acizi grai (saturai i nesaturai);

85

2. glicerin; 3. steroide; 4. aldehide grase; 5. corpi cetonici. Din punct de vedere funcional lipidele pot fi mprite n dou mari clase: I. LIPIDE DE REZERV (localizate n esutul adipos), constituite n principal din trigliceride de provenien exogen (alimentar); II. LIPIDE CITOPLASMATICE (lipide complexe care alctuiesc elementul constant care variaz numai cu natura esutului). XVII.1.1 Acizii grai liberi Acizii grai liberi sunt elemente constitutive ale unor clase de lipide i rezult prin hidroliza acestora. Din punct de vedere structural conin un lan de hidrocarbur care poate fi saturat sau nesaturat i o grup carboxil. Acizii grai saturai:
1. acid acetic 2. acid butiric 3. acid caproic 4. acid caprilic 5. acid caprinic 6. acid lauric 7. acid miristic 8. acid palmitic 9. acid stearic 10. acid arahic 11. acid behenic 12. acid lignoceric 13. acid cerotic 14. acid melisic 15. acid lacceroic C2 C4 C6 C8 C10 C12 C14 C16 C18 C20 C22 C24 C26 C28 C30 CH3-COOH CH3-(CH)2-COOH CH3-(CH)4-COOH CH3-(CH)6-COOH CH3-(CH)8-COOH CH3-(CH)10-COOH CH3-(CH)12-COOH CH3-(CH)14-COOH CH3-(CH)16-COOH CH3-(CH)18-COOH CH3-(CH)20-COOH CH3-(CH)22-COOH CH3-(CH)24-COOH CH3-(CH)26-COOH CH3-(CH)28-COOH

Acizii grai nesaturai cu o legtur dubl:

1. acid obtuzilic 2. acid laurinoleic 3. acid miristoleic 4. acid palmitoleic 5. acid oleic 6. acid petroselic 7. acid gadoleic 8. acid crucic 9. acid nervonic 10. acid hexacosenoic 1. acid sorbic C10 C12 C14 C16 C18 C18 C20 C22 C24 C26 4 9 9 9 9 6 9 13 15 17

CH3(CH2)4CH=CH(CH2)2COOH CH3CH2CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)3CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)10CH=CH(CH2)4COOH CH3(CH2)9CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)7CH=CH(CH2)11COOH CH3(CH2)7CH=CH(CH2)13COOH CH3(CH2)7CH=CH(CH2)15COOH

Acizi grai nesaturai cu dou legturi duble

C6 2,4 CH3CH=CHCH=CHCOOH

86

2. acid linoleic 1. acid linolenic 2. acid eleostearic 1. acid arachidonic

C18 C18 C18

9,12 9,12,15 9,11,13 C20

CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH CH3CH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)3CH =CHCH=CHCH=CH(CH2)7COOH CH3(CH2)3(CH=CHCH2)4CH2 CH2COOH

Acizi grai nesaturai cu trei legturi duble Acizi grai nesaturai cu patru legturi duble
5,8,11,13

Acizii grai saturai pot exista ntr-un numr infinit de conformaii datorit faptului c legtura simpl permite rotaia liber a atomilor de carbon. Termenii inferiori din seria acizilor grai saturai (propinic i butiric) se formeaz n procese de fermentaie i nu sunt prezeni n compoziia grsimilor naturale. Acidul butiric este prezent, dar n stare liber, n untul de vac. Dintre acizii saturai cei mai rspndii sunt acizii palmitic i stearic care nu lipsesc din nici o grsime animal sau vegetal. Acidul palmitic formeaz aproximativ 15 - 50% din totalul acizilor grai din uleiurile animale, 10% din uleiurule vegetale i 25% din grsimile din lapte. Acidul stearic este prezent ntr-o proporie mai mare, n special, n grsimile rumegtoarelor. XVII.1.1.1. ACIZI GRAI. STRUCTUR I PROPRIETI Izomeria acizilor grai poate fi de caten, de poziie i stereoizomerie. Izomeria de caten se refer la structura lanului de atomi de carbon: CH3-CH2-CH2-COOH
acid butiric

CH3-CH-COOH CH3
acid izobutiric

Izomeria de poziie a legturii duble din molecul:

10

CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-COOH
acid oleic
7

CH3-(CH2)10-CH=CH-(CH2)4-COOH
acid petroselic

CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)9-COOH
acid vaccenic

12 11

87

Aceti trei izomeri de poziie ai acidului oleic se gsesc n grsimile naturale, pe cale sintetic se mai pot obine nc 14 izomeri de poziie. Stereoizomeria se poate manifesta la acizii grai sub form de diastereoizomerie (geometric) i optic. Acidul oleic, de exemplu, prezint doi izomeri geometrici cis (oleic) i trans (elaidic). H-C-(CH2)7-COOH H-C-(CH2)7-CH3
acid oleic

H-C-(CH2)7-COOH CH3-(CH2)7-C-H
acid elaidic

Acidul linoleic se prezint sub form de patru stereoizomeri i anume 9-cis, 12-cis; 9-cis, 12-trans; 9-trans, 12-cis; 9-trans, 12-trans. Izomeria optic este mai puin rspndit la acizii grai i numai la acizii grai hidroxilai. Ca i lipidele acizii grai sunt insolubili n ap, solubili n solveni nepolari i n soluii de hidroxizi alcalini cu care formeaz spunuri. Acizii grai nesaturai dau reacii de adiie la legtura dubl, adiie de iod (indicele de iod) este utilizat pentru determinarea gradului de nesaturare, respectiv al numrului de legturi duble din molecul. Acizii grai cu un numr impar de atomi de carbon n molecul se afl doar n urme n animalele terestre, dar i gsim n cantiti apreciabile n multe organisme marine. Dac obolanii imaturi sau sugari sunt supui unei diete lipsite de grsimi, cresc slab, au pielea care se descoameaz, au pr care cade i, n cele din urm, manifestnd multe simptome patologice, mor. Aceste simptome nu mai apar dac n diet se adaug acid linoleic. Acidul linolenic i arachidonic au, de asemenea, proprietatea de preveni acest simptom. Acizii grai mononesaturai nu au aceast proprietate. De aici concluzia c organismul mamiferelor poate sintetiza acizii grai saturai i mononesaturai, dar sunt incapabile s sintetizeze acizii grai polinesaturai. Acizii grai necesari n alimentaia mamiferelor se numesc acizi grai eseniali. XVII.1.2. Lipide simple XVII.1.2.1. ESTERI AI ACIZILOR GRAI CU GLICERINA (ACILGLICERINELOR SAU GRSIMILE NEUTRE) Acilglicerinele, grsimile neutre sau gliceridele sunt rspndite n uleiuri vegetale, n esuturi adipoase animale precum i n alte organe de
88

depozitare. Gliceridele sunt esteri ai glicerinei cu unul, dou sau trei resturi de acizi grai saturai sau nesaturai, rezultnd monoacilglicerine, diacilglicerine sau triacilglicerine respectiv gliceride. Grsimile neutre naturale reprezint un amestec de trigliceride, digliceride i monogliceride. Prin hidroliz gliceridele trec n glicerin i acizi grai: CH2-O-OC-R1 CH-O-OC-R2 CH2-O-OC-R3 + 3H2O CH2OH CHOH CH2OH XVII.1.2.2. PROSTAGLANDINE Prostaglandinele alctuiesc o grup de substane rspndite n numeroase esuturi i lichide biologice: ficat, timus, pancreas, uter, creier, rinichi, plasm seminal animal i uman, n sngele din cordonul ombilical, n sngele de menstr, n organele tractului gastro-intestinal, iris, lichid amniotic etc. Principala lor aciune fiziologic const n contractarea sau relaxarea musculaturii netede a intestinului i a uterului. Prostaglandinele sunt sintetizate n veziculele seminale din acizi grai eseniali. Prostaglandinele sunt acizi grai superior nesaturai cu 20 de atomi de carbon i un ciclu pentagonal. Din punct de vedere al structurii chimice prostaglandinele sunt derivai ai acidului prostanoic.
9 10 11 8 12 13 7 6 14 15 5 4 16 17 3 2 18 19 1 20

R1-COOH + R2-COOH R3-COOH

XVII.1.2.3. ESTERI AI ACIZILOR GRAI CU ALCOOLI SUPERIORI MONOHIDROXILICI (CERIDE, CERURI) Cerurile naturale sunt de fapt amestecuri de mai muli esteri, n care, de obicei, unul predomin, cu cantiti variabile de acizi liberi i alcani, fiind foarte rspndite n lumea vegetal. Ceridele animale sunt secretate de glandele sebacee. La caalot n cutia cranian se gsesc cantiti importante de spermantet, o cear lichid, i walrat, o cear solid.

89

XVII.1.3. Lipide complexe XVII.1.3.1. FOSFATIDE (FOSFOLIPIDE) Fosfolipidele sunt substane complexe care conin n molecula lor un alcool, o baz azotat, acizi grai superiori i acid fosforic. La baza structurii fosfatidelor st, de regul, un alcool: glicerin, inozitol, aminoalcoolul nesaturat sfingozina. n calitate de baze se ntlnesc etanolamina i colina, substane apropiate structural de serin. CH2OH CH-NH2 COOH
serina CO2

CH2OH CH2-NH2
etanolamina

1)CH3I 2)AgOH

CH2OH

CH3 CH2-N+-CH3 CH3

colina

XVII.1.3.1.1. Glicerofosfolipide Glicerofosfolipidele prin hidroliz pun n libertate glicerina, dou molecule de acizi grai superiori, o baz azotat (colina, etanolamina, serina) i o molecul de acid fosforic. Acizii fosfatidici conin n molecula lor glicerin, acizi grai i un rest de acid fosforic. Acestea joac un rol important n biosinteza fosfatidelor. CH2-O-OC-R' CH-O-OC-R" CH2-O-PO3H2
acid fosfatidic

Cardiolipina este o fosfatid izolat din muchiul cardiac, avnd urmtoarea structur:
90

O R-CO-O-CH2 R-CO-O-CH O CH2 - O - P - O - CH2 CHOH OH CH-O-OC-R CH2-O-OC-R

CH2 - O - P - O - CH2 OH
cardiolipina

Colinfosfolipidele (colinfosfatidele) sunt reprezentanii tipici cei mai rspndii a fosfogliceridelor. Colinfosfatidele de ntlnesc n toate esuturile animale i vegetale. Componentele lor sunt glicerina, dou molecule de acizi grai superiori, colina i acidul fosforic. Acizii grai superiori esterific dou grupe hidroxil ai glicerinei, a treia fiind esterificat de acidul fosforic, care esterific i hidroxilul colinei. n funcie de poziia gruprii hidroxil care este esterificat cu acid fosforic vom avea sau - colinfosfolipide. R-CO-O-CH2 R-CO-O-CH O CH3 CH3

CH2-O-P-O-CH2-CH2-N+-CH3 OH
lecitin

Colinfosfolipidele pot pierde sub aciunea unor enzime specifice unul din cei doi acizi grai nesaturai dnd natere lizocolinfosfolipidelor cu o aciune hemolitic puternic. Etanolaminofosfolipide sunt asemntoare structural lecitinelor cu deosebire c n loc de colin conin o molecul de etanolamin. Ele se mai numesc i cefaline.

91

R-CO-O-CH2 R-CO-O-CH O

CH2-O-P-O-CH2-CH2-NH2 OH
cefalina

Fosfatidilinozitolul (lipozitolul) se gsete n lipidele din plante i n fosfolipidele din creier. n structura lor apare mioinozitolul un stereoizomer al inozitolului. R-CO-O-CH2 R-CO-O-CH O OH HO OH Fosfatidilserina este o lipid asemntoare cu cefalinele cu deosebire c n loc de etanolamin conine serin: R-CO-O-CH2 R-CO-O-CH O

CH2-O-P-OH OH O

OH

CH2-O-P-O-CH2-CH-COOH OH
serincefalin

NH2

XV.1.3.1.2. Sfingofosfolipide n produsele lor de hidroliz s-au identificat dou baze azotate (colina i sfingozina), un acid gras superior i acid fosforic. n compoziia acestor
92

fosfolipide nu intr glicerina. Sfingozina este un aminoalcool nesaturat. Reprezentantul principal al clasei este sfingomielina, care se gsete n cantiti mari n sistemul nervos. OH NH CO R
sfingomielina

OH

CH3

H3C-(CH2)12-CH=CH-CH-CH-CH2-O-P-O-CH2-CH2-N+-CH3 O CH3

XVII.1.3.2. GLICOLIPIDE Cerebrizidele conin n molecula lor aminoalcoolul, sfingozin, galactoz i un acid gras. Se cunosc mai multe tipuri de cerebrozide: cerebrona (conine ca i acid gras acid cerebronic), cerazina (acid lignoceric), nervona (acid nervonic) i oxinervona (acid oxinervonic). Structura acizilor grai este: 1. acid lignoceric 2. acid cerebronic 3. acid oxinervonic 4. acid nervonic (C24) (C24) (C24) (C24) CH3(CH2)22COOH CH3(CH2)21CHOHCOOH CH3(CH2)7CH=CH(CH 2)12CHOHCOOH CH3(CH2)7CH=CH(CH 2)13COOH

Sulfatidele sunt derivai sulfatai (cerebrozide sulfatate). Restul de sulfat se gsete n poziia 3 a galactozei. Cerebrozid-sulfatul are structura: OH sulfat-3-galactoza-O-(CH2)12-CH=CH-CH-CH-R NH-CO-R2 Gangliozidele se gsesc n esutul nervos i au n structura lor sfingozina, acid gras (n general cu C18) o oligozaharid ce conine hexoze

93

(glucoz, galactoz), hexozamine i NANA (N-acetilneuraminic acid). Structura este: Sfingozin-glucoz-galactoz-N-acetilgalactozamin-galactoz acid gras NANA XVII.1.4. Steroide. Steroizi. Steroizii alctuiesc o clas de compui naturali larg rspndii n regnul animal i vegetal care cuprinde hormonii secretai de glandele sexuale, de partea cortical a glandei suprarenale, de placent, precum i de substane ce nu au activitate hormonal, de exemplu, colesterolul i aicizii biliari. Dup numrul atomilor de carbon din molecul steroizii pot fi clasificai astfel:. -steroizii C17, care deriv de la gonan i nu au substituieni pe C10, C13,i C17; - steroizi C18, au ca nucleu de baz oestranul cu o grupare metil pe C13; - steroizi C19, au ca nucleu de baz androstanul cu grupri metil C10 i C13; - steroizi C21, derivai de la pregnan, cu grupri metil la C10 i C13 i cu un etil la C17;
12 11 1 10 9 13 14 17 18 16 15

C
8 7

A
4

B
5 6 gonan

oestran 20 21

18 19

18

androstan

pregnan

94

21

22 20 23 24 20 26 25 27

colan

colestan

- steroizi C24, derivai de la colan, cu grupri metil la C10 i C13, iar la C17 o caten format din cinci atomi de carbon; - steroizi C27, substane drivate de la colestan, adic cu grupri metil la C10 i C13, iar la C17 o caten ramificat din opt atomi de carbon Se constat c cei mai muli steroli au n poziiile 10 i 13 cte o grupare metil iar n poziia 17 un substituient variabil. Nucleul steranic are o configuraie aproximativ plan, iar substituenii se pot gsi deasupra sau de sub planul moleculei. Nucleul prezint 6 atomi de carbon asimetrici, ceea ce determin 26 stereoizomeri posibili. Prin convenie se noteaz cu linie plin, substituienii situai deasupra planului general al nucleului, i cu linie punctat pe cei aezai sub planul nucleului. Deoarece s-a constatat c gruprile metil din poziiile 10 i 13 se gsesc n acelai plan, toi substituienii care se gsesc de aceeai parte vor fi (cis), iar cei de partea opus (trans). De exemplu: CH3

HO

H
3-, 7- - diol

OH

n aceast structur H din poziia 5 i OH-ul din 7 se gsesc n poziia fa de metil i OH-ul din 3 n poziia . Ciclurile hexatomice n compuii naturali au structura scaun mai stabil dect forma baie. Jonciunea ciclurilor poate avea loc n cis sau n trans, ceea ce complic i mai mult stereoizomeria acestor compui. S-a constatat c la toi
95

stereoizomerii naturali ciclurile B/C i C/D prezint jonciune trans, iar ciclurile A/B fuziunea este fie n cis fie n trans. Cnd ciclurile A/B fuzioneaz n trans, metilul din 10 i hidrogenul din 5 sunt n configuraie , de o parte i alta a planului general a nucleului. Aceast configuraie se gsete la sterolii naturali i la toi hormonii steroizi. CH3 CH3

A
H

A
H
fuziune "trans"

CH3

A
H

B A
fuziune "cis"

CH3

XVII.1.4.1. STEROLI Sterolii sunt alcooli secundari superiori care deriv de la hidrocarbura colestan i prezint urmtoarele caracteristici: n poziia 17 conin o caten lateral format din 8 atomi de carbon, OH n poziia 3 i legturi duble. XVII.1.4.1.1. Colesterolul Colesterolul este principalul sterol din esuturile animale. Se gsete rspndit n toate celulele att liber ct i esterificat. Esterificarea se face, de obicei, cu acizi grai care conin 16 - 18 atomi de carbon, mono sau polienici.

96

n organismul uman colesterolul intr n alctuirea membranei celulare alturi de fosfolipide i proteine. El este inserat n dublul strat lipidic i are rol n reglarea fluiditii i permeabilitii membranelor, mrind fluiditatea n zona n care predomin acizii grai saturai i micornd fluiditatea n zonele ce conin cantiti mari de acizi grai nesaturai n structura fosfolipidelor din membran.

HO
colesterol

R-CO-O
ester al colesterolului

Cantitatea de colesterol coninut n diferite membrane celulare variaz considerabil, de exemplu, colesterolul reprezint 25% din lipidele membranei plasmatice i nu este prezent n membrana intern mitocondrial. De asemenea, colesterolul din membrana plasmatic se gsete liber, neesterificat, iar n reticulul endoplasmatic se gsete sub ambele forme. Colesterolul intr n structura lipoproteinelor plasmatice alturi de fosfolipide i proteine i n acelai timp este transportat de ctre acetia n snge mai ales sub form esterificat. Esterii colesterolului se mai gsesc n ficat i n corticosupraremale. Colesterolul este precursorul acizilor biliari, ai hormonilor steroizi i ai vitaminei D3. Colesterolul este prezent i n bil i este, de obicei, constituientul major din calculii biliari, din care a fost izolat pentru prima dat. 7-dehidrocolesterolul, este un alt sterol care se gsete alturi de colesterol i n alte esuturi. Prezint o importan special deoarece prin iradiere cu lumin ultraviolet trece n vitamina D3. Ca structur difer de colesterol avnd n plus o legtur dubl ntre C7 i C8. Coprostanolul i colestanolul sunt compui de catabolizare a colesterolului care se elimin prin fecale. XVII.1.4.1.2. Fitosteroli i micosteroli

97

Dintre sterolii vegetali (fitosteroli) cel mai important este sitosterolul, care se deosebete de colesterol prin catena lateral. Sterolii vegetali se absorb foarte puin n organismul uman i sunt utilizai ca ageni hipocolesterolemiani fiind inhibitori ai absorbiei colesterolului.

HO
sitosterol

HO
ergosterol

Ergosterolul este un micosterol care s-a izolat prima dat dintr-o ciuperc a bobului de secar. Se gsete n ciuperci, drojdie, uleiuri vegetale, alge, glbenu de ou. Prin iradiere cu lumin ultraviolet primete proprieti antirahitice, se transform n vitamina D2 sau ergocalciferol. XVII.1.4.2. ACIZI BILIARI Bila hepatic este un lichid de culoare galben-oranj, iar bila vezicular este brun nchis sau brun verzui; greutatea specific a milei este de 0,990 1,008 g/ml i tensiunea specific de 39,6 - 44,0 dyn/cm. Pe lng substanele organice i anorganice bila hepatic i bila vezicular mai conin cantiti nsemnate de acizi biliari i sruri ale acestora. Toi acizii biliari prezint configuraia cis ale inelelor A/B i gruprile hidroxil din 3 n . Catena este alctuit din 5 atomi de carbon i se termin cu o grupare carboxil. Acizii biliari cei mai importani pentru vertebratele superioare i pentru om sunt acizii colic, chenodezoxicolic, dezoxicolic i litocolic, care se deosebesc ntre ei prin numrul i poziiile gruprilor hidroxilice. Acidul colic i acidul chenodezoxicolic sunt acizi biliari primari, fiind sintetizai n ficat direct din colesterol, n timp ce acizii dezoxicolic i litocolic sunt acizi biliari secundari sintetizai n lumenul intestinal din acizii biliari primari sub influena bacteriilor intestinale. Srurile acizilor biliari sunt substane tensioactive cu un puternic efect emulsionant asupra grsimilor, ele activeaz, de asemenea, lipazele, exercitnd pe ambele ci o influen considerabil asupra digestiei i
98

absorbiei lipidelor. Peste 90% din cantitatea de acizi biliari, excretat zilnic n intestin i care constituie 20 - 30 g, este, n cazul organismului omenesc, resorbit i recirculat n ciclul enterohepatic.

OH COOH
12

COOH

acid colanic

HO

acid colic

OH

OH COOH
12

COOH

HO

OH

HO

3 acid dezoxicolic

acid chenodezoxicolic

COOH

COOH

HO

3 acid litocolic

HO

acid hiodezoxicolic

OH

XVII.1.4.3. HORMONI STEROIZI

99

Hormonii steroizi sunt produi de transformare a colesterolului la nivelul glandelor de secreie intern. Hormonii steroizi se clasific dup locul de sintez n hormoni corticosuprarenali i hormoni sexuali. Hormonii corticosuprarenali sunt la rndul lor: 1) hormoni glucocorticoizi; 2) hormoni mineralocorticoizi; 3) hormoni sexuali din csr sau sexocorticoizi. Hormonii sexuali secretai de gonade se mpart n: 1) hormoni sexuali masculini; 2) hormoni sexuali femenini. XVII.1.4.3.1. Hormoni corticosuprarenali Cortexul glandei suprarenale formeaz aproximativ 2/3 din greutatea total a glandei i este foarte bogat n lipide, n deoseb, n colesterol liber i esterificat (5% din greutatea glandei), precum i ali steroizi. Din extractul glandelor suprarenale au fost cristalizai peste 28 de compui, ns numai cinci din acetea au putut fi identificai i posed o aciune fiziologic. CH2OH CO HO OH O CH2OH CO OH

O
cortizol

O
cortizona

100

CH2OH CO HO O

CH2OH CO

O
corticosterona

O
11-dehidrocorticosterona

Hormonii glucocorticoizi formeaz aa numita grup a corticosteronei i se caracterizeaz prin prezena unei grupri alcoolice sau cetonice n poziia 11 a nucleului de baz (pregnan). Cei patru reprezentani ai acestei grupe sunt: cortizolul (17--hidroxicorticosterona, hidrocortizona), cortizona, corticosterona i 11-dehidrocorticosterona. Hormonii glucocorticoizi acioneaz asupra metabolismului lipidelor influennd oxidarea, mobilizarea i depunerea lipidelor i procesul de lipoliz. Hormonii mineralosuprarenali (mineralocorticoizi) particip la reglarea metabolismului hidromineral i din punct de vedere chimic se deosebesc de hormonii glucocorticoizi prin absena gruprii funcionale (hidroxil sau ceton) din poziia 11. Din aceast clas fac parte aldosterona, 11-dezoxicortizolul i 11 dezoxicorticosterona:. Insuficiena corticosuprarenalei n sinteza hormonilor mineralocorticoizi se manifest printr-un dezechilibru mineral, datorit dereglrii metabolismului apei, potasiului, sodiului i a clorului. Rolul fiziologic al hormonilor mineralocorticoizi const n meninerea constant a echilibrului de electrolii, ei influennd retenia de sodiu i clor i regleaz eliminarea potasiului.

101

CH2OH HCO CO HO

CH2OH CO OH

O
aldosterona

O
11-dezoxicorticosterona

Hormoni corticoizi de tip sexual. Zona reticulat a glandelor suprarenale produce i hormoni steroizi care nu posed activitate specific corticoid-suprarenal dar au aciune androgen, luteal sau extrogen. Efectul global al acestor hormoni este identic cu cel al hormonilor androgeni, din care cauz hipersecreia lor accentueaz caracterele secundare specifice sexului brbtesc. Din aceast grup fac parte androstendiona i 11 hidroxiandrosteron: O HO O

O
androstendiona

HO
11-hidroxiandrosterona

XVII.1.4.3.2. Hormoni sexuali Toi hormonii sexuali sunt de natur steroidic. Ei sunt sintetizai de organismul animal la nivelul glandelor cu secreie intern - testicul, ovar, placent - i excretai n limf sau uneori n snge, care-i transport la organele efectoare. T. Berzin definete hormonii sexuali drept substane de cretere care posed aciuni specifice care le exercit asupra unor organe specifice i care influeneaz comportarea sexual i caracterele sexuale secundare i primare.

102

Dup aciunea lor asupra caracterelor secundare i asupra metabolismului animal, hormonii sexuali sunt clasificai n trei mari grupe: - homoni androgeni sau hormoni sexuali masculini ce se caracterizeaz prin aciunea lor virilizant, anabolic i antigonadotrop; - hormoni esterogeni sau hormoni sexuali feminini care au o aciune de feminizare i particip la reglarea procesului ciclului menstrual; -hormoni gestogeni care se caracterizeaz prin aciunea lor asupra uterului i prin capacitatea de a facilita meninerea sarcinii. OH O

O
testosterona

HO
adrosterona

Hormonii sexuali masculini (androgenii) sunt secretai de organul mascul matur la nivelul testiculului n celulele interstiiale. Testiculul produce n special testosteron dar i cantiti de androstendion i dehidroepiandrosteron. Testosterona stimuleaz creterea normal a organelor sexuale masculine, influeneaz spermatogeneza i dezvoltarea caracterelor sexuale secundare la brbai (voce, piloziti, virilizare). O OH

HO
oestrona

HO
oestradiol

103

OH OH

HO
oestriol

Hormoni sexuali feminini sunt universal rspndii att n regnul animal ct i n cel vegetal, fapt ce dovedete rolul important al acestora n organism. n prezent se cunoate c funcia de inmulire la mamiferele femele, care au ajuns n faza de maturare sexual, este strns legat de metabolismul a dou clase de hormoni: estrogeni, produi de ctre foliculii DeGraaf, i hormoni gestogeni, care provin din corpul galben. Aceti hormoni sexuali feminini au o mare influen asupra psihicului i morfologiei unei femei. Se cunosc trei hormoni estrogeni: estrona, estradiolul i estriolul. Estrogenii sunt secretai n cea mai mare cantitate de foliculii ovarieni, din care cauz se numesc hormoni foliculari. n afar de folicul, sinteza hormonilor ovarieni se realizeaz i n celule interstiiale ale ovarului, de testicule, de zona reticular a corticosuprarenalei, iar la gravide i de vilozitile coriale ale placentei. Apariia i meninerea caracterelor secundare se gsesc sub influena hormonilor estrogeni. Hormonii gestogeni (progesterona) a fost izolat n 1934 din corpul galben -corpus luteus- din placent i extractele prii corticale a glandelor suprarenale. Progesterona apare dup ovulaie i ea favorizeaz dezvoltarea endometrului, pregtind uterul pentru nidarea i nutrirea ovulului. Progesterona determin creterea n greutate a uterului, n care concentraia n colagen, lipide, acizi nucleici, glicogen sunt sub aciunea ei. Micornd contractibilitatea musculaturii uterului i a musculaturii trompelor, progesterona are o aciune antiocitocic asigurnd meninerea sarcinii i ovulaia normal a acesteia. Progesterona mai poart denumirea de hormonul maternitii

104

CH3 CO

XVII.2. METABOLISMUL LIPIDELOR XVII.2.1. Metabolismul acizilor grai saturai XVII.2.1.1. CATABOLISMUL ACIZILOR GRAI SATURAI: OXIDAREA (CICLUL LUI LYNEN) Sursa endogen major de acizi grai este grsimea de depozit, format n special din triacilgliceride. Acetia sub aciunea lipazelor sunt hidrolizai la acizi grai i la glicerin. Degradarea acizilor grai n celul prin procesul de -oxidare, parcurge etapele de 1) activare a acidului gras, 2) transportul acidului gras activat n mitocondrie i 3) -oxidarea propriu zis. Activarea acizilor grai se realizeaz pentru a putea fi metabolizai n prezen de ATP, conform reaciei: CH3-(CH2)12-CH2-CH2-COOH + ATP + CoA-SH CH3-(CH2)12-CH2-CH2-CO
tiokinaz (Mg+2)

S-CoA + AMP + PPa

Pirofosfatul rezultat este scindat mai departe la acid fosforic de ctre pirofosfataz:

105

PPa + H2O

pirofosfataz

2 H3PO4

Pentru activarea fiecrei molecule de acid gras se consum dou legturi macroergice. Tiokinazele sunt localizate intra i extramitocondrial i prezint specificitate n funcie de lungimea catenei de acid gras. n mitocondrii se gsete i o tiokinaz GTP-specific, care (spre deosebire de cele ATP specifice) produce GDP i fosfat anorganic n urma reaciei de activare i are ca substrat acizii grai liberi intramitocondriali. Reacia de activare a acizilor grai cu lan lung are loc extramitocondrial i cei cu lan scurt intramitocondrial. Transportul acizilor grai n mitocondrie. -Oxidarea este un proces mitocondrial, acizii grai cu lan scurt (C4 - C10) pot ptrunde n mitocondrie prin traversarea membranei interne. Pentru acizii grai cu lan lung (mai mare de C12) membrana mitocondrial intern este impermeabil. Acetia sunt transportai n mitocondrie sub form de acil-carnitin, care se formeaz n prezena carnitinei i a enzimei carnitin-acil transferaz. Se observ c intrarea acil-carnitinei se cupleaz cu ieirea carnitinei. Enzima care catalizeaz acest schimb este o translocaz, localizat n membrana intern a mitocondriei. Acizii grai ptruni n mitocondrie ca derivai de carnitin sunt transformai n derivai ai CoA i constituie substrate de oxidare.

-Oxidarea acizilor grai. Enzimele care catalizeaz procesul de oxidare cunoscute sub denumirea de acidgrasoxidaz se gsesc n matricea mitocondrial, adiacente din lanul respirator. Prima enzim care acioneaz asupra acil-CoA este acil-CoA-dehidogenaza ce are ca i grupare prostetic FAD. Aceasta produce dehidrogenarea - , cu formare de acil-CoA-,106

nesaturat. Legtura dubl este saturat prin adiie de ap n prezen de enoil-CoA-hidrataz. -Hidroxi-acil-CoA rezultat, este substratul unei dehidrogenaze NAD dependente, care transform gruparea alcoolic din n ceton cu formare de -cetoacil-CoA. n prezena tiolazei i a unei molecule de CoA-SH, -cetoacil-CoA este scindat tiolitic la acetil-CoA i un acilCoA ce conine ce conine cu doi atomi de carbon mai puini fa de cel iniial. Acil-CoA-format reintr n procesul de oxidare. Astfel un lan lung poate fi oxidat la resturi de acid acetic i n final de dioxid de carbon i ap.
R-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA
acil-CoA deiidrogenaza FAD

R-CH2-CH=CH-CO-S-CoA lant respirator 2ATP

FADH2

R-CH2-CH=CH-CO-S-CoA

Enoil-CoA(trans) hidrataza H2O

R-CH2-CH-CH2-CO-S-CoA OH
L(+)hidroxiacil CoA

R-CH2-CH-CH2-CO-S-CoA OH

hidroxiacil-CoA dehidrogenaza

R-CH2-CO-CH2-CO-S-CoA lant respirator 3ATP

NAD+

NADH+H+

R-CH2-CO-CH2-CO-S-CoA

ceto-tiolaz

R-CH2-CO-S-CoA

ciclul citric 12 ATP TOTAL: 17 ATP

CoA-SH

CH3-CO-S-CoA

Bilanul energetic al oxidrii acidului palmitic. Parcurgerea unei secvene de reacii de -oxidare duce la o cantitate echivalent de 17 legturi

107

macroergice. Prin degradarea complet a acidului palmitic se parcurge de 7 ori etapele -oxidrii ceea ce corespunde la 17x7 + 12 = 119 + 12 = 131 legturi macroergice. Dac scdem cele dou legturi macroergice consumate pentru activarea acidului palmitic rezult formarea unei cantiti de energie echivalent cu 129 de legturi macroergice sau convertite n calorii 129x7,6 = 980 kcal/mol. Acidul palmitic are o valoare caloric de 2340 kcal/mol, n consecin randamentul reaciei de oxidare este de 41%. Rezult c 415 kcal/mol din energia total de combustie a acidului palmitic se transform n legturi macroergice. -Oxidarea acizilor grai reprezint o cale special de degradare a acizilor grai fr semnificaie cantitativ i const n eliminarea gruprii carboxil ca i oxid de carbon, urmat de oxidarea carbonului la aldehid. Procesul are loc n prezen de acid gras peroxidaz i necesit peroxid de hidrogen. R-CH2-CH2-COOH
acid gras acid gras peroxidaz CO2 2H2O2

3H2O

R-CH2-CHO
aldehid gras NAD+ H2O NADH+H+ NADH+H+ NAD
+

R-CH2-CH2OH
alcool gras

R-CH2-COOH
acid gras

108

ATP

ADP+Pa

COOH H3C-CH
Izomeraza (B12)

CH3-CH2-CO-S-CoA
biotin-CO2 biotin

CO-SCoA CH2-COOH

CH2-COOH CH2-COSCoA
H2O CoA

CH2-COOH

Dup cum se observ reaciile nu au loc prin intermediul coenzimei A i nu duc la formare de adenozintrifosfat. Peroxidul de hidrogen necesar reaciei este furnizat de oxidarea flavoproteinelor. Aldehida gras format se poate oxida mai departe cu formarea unui acid gras. -Oxidarea a fost detectat n creier. Unele persoane datorit unui defect ereditar nu pot realiza -oxidarea (boala lui Refsum). -Oxidarea. n ficat acizii grai pot fi oxidai n poziia , cu formare de acizi ,-dicarboxilic i este realizat de hidroxilaze microzomale cu participarea citocromului P450. Acizii dicarboxilici rezultai sunt degradai prin -oxidare, de obicei, la acid adipic sau suberic, care apar n urina persoanelor cu acidurie cetonic dicarboxilic. Oxidarea acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon se realizeaz prin procesul de -oxidare pn ce rezult acidul propionic sub form de propionil-CoA (vezi mai sus). Pentru a putea fi integrat n reaciile metabolice propionil-CoA este carboxilat n prezena propionil-CoA carboxilazei, proces ATP dependent, cu formare de metil-malonil-CoA. Acest compus este apoi izomerizat la succinil-CoA, care prin deacilare trece n acid succinic liber, intermediar al ciclului citric. Procesul necesit vitamina B12. XVII.2.1.2. BIOSINTEZA ACIZILOR GRAI SATURAI Calea citoplasmatic (calea de novo, calea malonic). Sinteza complet este realizat de un sistem enzimatic localizat n fraciunea solubil a citoplasmei. La mamifere sistemul formeaz un complex multienzimatic care nu poate fi divizat n enzimele componente fr pierderea activitii. Complexul acid gras sintetaz este un dimer, fiecare monomer avnd M = 267000. La animale monomerii sunt identici, fiind format dintr-un lan polipeptidic ce conine cele apte enzime ale complexului (cetoacil sintetaza 109

acil transacilaza - malonil transacilaza - - - enoil reductaza - hidrataza cetoacil reductaza - ACP - tioesteraza). Fiecare monomer conine dou grupri -SH, una aparine 4-fosfopantoteinei din ACP ( Acyl-CarrierProtein), a doua unei cisteine din -cetoacil sintetaz. Cei doi monomeri sunt astfel aranjai nct n vecintatea ACP-SH-ului dintr-un monomer se gsete o grupare Cis-SH din cetoacil sintetaz (aranjarea cap-coad). Deoarece ambele grupri SH sunt implicate n activitatea enzimatic numai dimerul este activat. Complexul necesit urmtorii cofactori NADPH, ATP, Mn+2, HCO3- i acil-CoA ca substrat, conform reaciei:
acil-CoA-carboxilaza biotin HCO3ATP

CH3-CO-S-CoA

HOOC-CH2-CO-SCoA

ADP+P

Biosinteza acidului gras ncepe prin legarea unei molecule de acetilCoA de gruparea Cys-SH, catalizat de aciltransacilaz. Malonil-CoA se combin cu gruparea -SH a 4-fosfopantoteinei legat de ACP din cellalt monomer n prezena maloniltransacilazei. Prin legarea acestor grupri de enzim rezult acetil (acil) - malonil - enzima.
(1)-Cys-SH + CH3-CO-CoA (2)-Pan-SH + HOOC-CH2-CO-CoA
acetiltransacilaza maloniltransacilaza

(1)-Cys-S-COCH3 + 2 CoASH (2)-Pan-S-CO-CH2-COOH

n continuare acetilul atac gruparea metilen din malonil, reacie catalizat de -cetoacilsintetaz cu eliberare de dioxid de carbon i formarea -cetoacilenzimei. Prin reacie de condensare devine liber gruparea Cys-SH, care era ocupat de acetil. Decarboxilarea furnizeaz energia necesar condensrii i desfurrii ntregii secvene de reacii.
(1)-Cys-S-CO-CH3 (2)-Pan-S-CO-CH2-COOH
cetoacilsintetaza CO2

(1)-Cys-S-CO-CH3 (2)-Pan-S-CO-CH2-CO-CH3

Gruparea cetoacil legat de enzim este redus, deshidratat, redus din nou pentru a forma acil enzima saturat. Reaciile sunt analoage cu cele

110

din -oxidare, cu deosebire c -hidroxiacidul este izomerul D(-), iar donorul este NADPH.
(1)-Cys-SH (2)-Pan-S-OC-CH2-OC-CH3 (1)-Cys-SH

acetoacilreductaza NADPH+H+

hidrataza

H2O

NADP+

(2)-Pan-S-OC-CH2-CHOH-CH3

(1)-Cys-SH (2)-Pan-S-OC-CH=CH-CH3

enoilreductaza

(1)-Cys-SH (2)-Pan-S-OC-CH2-CH2-CH3
acilenzima

n continuare o nou grupare malonil (molecul de malonil-CoA) se leag de gruparea SH din 4-fosfopantotein deplasnd restul acil saturat la gruparea Cys-SH liber. Secvena de reacii se repet de apte ori, de fiecare dat fiind incorporat un nou rest malonil pn cnd este asamblat molecula de acid palmitic.
(1)-Cys-SH (2)-Pan-S-OC-CH2CH2CH3
maloniltransferaz malonil-CoA CoA

(1)-Cys-S-OC-CH2CH2CH3 (2)-Pan-S-OC-CH2-COOH (1)-Cys-SH

C6

C8

C10

C12

C14

(2)-Pan-S-OC(CH2)14CH3

(1)-Cys-SH
tioesteraza

CH3(CH2)14COOH + (2)-Pan-SH

Acidul palmitic este eliberat din complex de tioesteraz. Pentru a putea integra ntr-o cale metabolic, acidul palmitic este activat n prezena unei tiokinaze i ATP la palmitil-CoA. Sursa principal de acetil-CoA o formeaz glucidele. Piruvatul rezultat prin glicoliz este oxidat n mitocondrie la acetil-CoA. Aceasta nu poate difuza ca atare n compartimentul extramitocondrial, pentru aceasta este necesar condensarea cu oxalilacetatul pentru formarea citratului.

111

Citratul format este translocat extramitocondrial unde n prezen de CoA i ATP sufer scindarea la acetil-CoA i oxalilacetat, reacie catalizat de citrat liaz. Acetil-CoA este apoi convertit n malonil-CoA i servete ca donor de fragment C2 n sinteza acizilor grai.
acilglicerine Acid palmitic
tiokinaz CoA ATP

palmitil-CoA

esteri ai colesterolului acil-CoA

AMP+PP

Sistemul microzomial de elongare. Mitocondriile pot produce alungirea lanului acizilor grai, proces n care particip probabil enzimele implicate n -oxidare cu excepia etapei de conversie a enoil-CoA la derivatul saturat corespunztor. Aceast reacie este catalizat de enoil-CoAreductaza i necesit NADPH ca donor de hidrogen. Enzima de condensare a acetil-CoA cu acil-CoA, necesit PALPO, astfel tiolaza nu este implicat n aceast cale. XVII.2.2. Metabolismul acizilor grai nesaturai Acizii grai nesaturai cu lan lung cu semnificaie metabolic la mamifere sunt acizii palmitoleic (16:1:9), oleic (18:1:9), linoleic (18:2:9:12), linolenic (18:3:9:12:15) i arahidonic (20:4:5:8:11:14). XVII.2.2.1. CATABOLISMUL ACIZILOR GRAI NESATURAI Pentru a putea fi oxidai acizii grai nesaturai necesit pe lng enzimele implicate n -oxidare dou enzime suplimentare: a) 3 cis 2 trans enoil-CoA-izomeraza i b) D(-)-3-hidroxiacil-CoA epimeraza. Prima catalizeaz deplasarea legturii duble din configuraia 3 cis n 2 trans, a doua catalizeaz transformarea izomerului D(-)-3-hidroxiacil-CoA n L(+)3-hidroxiacil-CoA. De exemplu vom discuta oxidarea acidului linoleic. CH3-(CH2)4-CH=CH-CH2-CH=CH-(CH2)7-CO
linoleil-CoA

SCoA

beta-oxidare

112

CH3-(CH2)4-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2-CO
cis

cis 3 cis 6 cis dienoil-CoA

SCoA

3-cis-2-trans enoil-CoA izomeraz

CH3-(CH2)4-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2-CO
cis

trans 2 trans 6 cis dienoil-CoA

SCoA

beta-oxidare

CH3-(CH2)4-CH=CH-CO

S-CoA

enoil-CoA hidrataza

2 cis enoil-CoA D(-)-3-hidroxiacil-CoA epimeraza

CH3-(CH2)4-CH-CH2CO OH OH

SCoA

D(-)-3-hidroxiacil-CoA

CH3-(CH2)-CH-CH2-CO

SCoA

beta-oxidare

L(+)-3-hidroxiacil-CoA

XVII.2.2.2. BIOSINTEZA ACIZILOR GRAI NESATURAI Acidul oleic i palmitoleic pot fi sintetizai de organismul animal din acizi grai corespunztori, n schimb, acizii linoleic, linolenic i arahidonic sunt cunoscui a fi eseniali pentru alimentaia complet a multor specii de mamifere, inclusiv omul. Acidul linoleic nu poate fi sintetizat de animale, el trebuie adus prin aport alimetar. Acidul arahidonic poate fi sintetizat de organismul animal din acid linoleic. Sinteza acizilor grai nesaturai se realizeaz n prezena unui sistem multienzimatic localizat n microzomi. Sistemul este de tip monooxigenazic ce implic participarea citocrom b5 i este specific pentru introducerea unei legturi duble 9. Reacia necesit oxigen molecular i ca donori de hidrogen NADH sau NADPH. Secvena de reacii prin care stearil-CoA este convertit n oleilCoA este prezentat mai jos.

113

CH3-(CH2)16-CO CoA aciltransferaza E CH3-(CH2)16-CO E

hidroxilaza

CH3-(CH2)16-CO E

CoA CH3-(CH2)7-CH2-CH-(CH2)7-CO E OH

O2+NADPH+H+

NADP++H2O

CH3-(CH2)7-CH2-CH-(CH2)7-CO E OH
hidroxisterilenzima H2O

CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CO
oleilenzima

CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CO

E
CoA E

CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-CO
oleil-CoA

CoA

Biosinteza acizilor grai polinesaturai. Pentru sinteza acizilor polienoici, poziia legturii duble introduse n molecula unui acid gras depinde de organismul care-l realizeaz. La animale, introducere de legtur dubl se face ntre cea existent i gruparea carboxil. n consecin animalele nu pot biosintetiza acizi grai polinesaturai. Acizi grai eseniali (AGE). Importana acizilor grai eseniali n alimentaie a fost subliniat de la nceputul secolului prin experiene pe animale. Carena se manifest prin tulburri de cretere, reproducere, dermatite, rezisten sczut la stres i unele deficiene n transportul lipidelor. Acizii grai eseniali ndeplinesc roluri multiple, nc incomplet precizate. Din ceea ce se cunoate, pe lng faptul c sunt surse de eicosanoide, ei se gsesc n lipidele celulare, sunt implicai n meninerea integritii membranei mitocondriale. De asemenea, se gsesc n cantitate mare n organele de reproducere i intr n structura fosfolipidelor. XVII.2.2.3. EICOSANOIDE

114

Eicosanoidele reprezint un grup de compui ce deriv din acizi grai eicosapolienoici (C20) i cuprind prostanoidele i leucotrienele. Prostanoidele, la rndul, lor includ prostaglandinele (PG), tromboxanii (TX) i prostaciclinele (PCI). Se cunosc trei serii de eicosanoide ce se sintetizeaz din acizi grai eseniali linoleic, -linolenic i arahidonic. Sinteza prostanoidelor i leucotrienelor, avnd ca substrat acidul arahidonic (seria a II-a), este prezentat mai jos. Acidul arahidonic rezult din fosfolipidele membranare ca urmarea a aciunii fosfolipazei A2. Sinteza de prostanoide necesit oxigen molecular i este catalizat de prostaglandinendoperoxid sintetaz, format din dou activiti catalitice i anume activitate cicloxigenazic i activitate peroxidazic. n procesul de biosintez a prostanoidelor se observ c are loc ciclizarea lanului C20 cu formare de intermediar comun prostaglandinendoperoxid (PGH). n continuare aceasta este convertit n prostaglandine (D2, E2 i F2), tromboxanii (TxA2) i prostaciclinele (PGI2). Prostaglandinele au fost descoperite prima dat n plasma seminal de unde i numele, ulterior a fost gsit n toate esuturile. Prostaglandinele sunt produi foarte activi biologic, concentraii de numai 1 g/l produc contracia musculaturii netede. De asemenea, cresc AMPc n plachete, tiroid, corpul galben, adenohipofiz i plmn i scad AMPc n esutul adipos. Seria I-a prostanoide PGE1 PGF1 TxA1 COOH leucotriene LTA3 LTC3 LTD3

acid eicosatrienoic

Prostaglandinele se utilizeaz ca ageni terapeutici ntr-o gam larg de afeciuni (ulcer gastric, astm, controlul inflamaiei i a presiunii sangvine, inducerea travaliului la termen etc.).

115

COOH

Seria a II-a prostanoide PGD2 PGE2 PGF2 PGI2 TxA2 leucotriene LTA4 LTB4 LTC4 LTD4 LTE4 Seria a III-a prostanoide PGD3 PGE3 PGF3 PGI3 TxA3 leucotriene LTA5 LTB5 LTC5

acid eicosatrienoic

COOH

acid eicosatrienoic

Tromboxanii cu structur puin diferit (conin ciclu cu oxigen) sunt sintetizai de plachetele sangvine i au rol vasoconstrictor i de agregare plachetar. Prostaciclinele produse de pereii vaselor au aciune antagonist tromboxanilor, fiind ihibitori ai agregrii plachetelor. Uleiul de pete bogat n acid eicosapentenoic este substrat pentru sinteza prostanoide3lor din seria a III-a. Sinteza acestora inhib eliberarea acidului arahidonic din fosfolipide i implicit prostanoidelor din seria a II.

116

Fosfolipide
(-) corticoizi cu efect antiinflamator fosfolipaza A2

COOH

COOH O
5-lipoxigenaza

OH

acid arahidonic

COOH

PGI2

aspirina indometacin

ciclooxigenaza

OH COOH

OH

5-HPET H2O

O O
PGG2

OOH
peroxidaza prostaciclinsintetaza

O COOH

O
leucotriena A4 (2) (1)

COOH
PGH2

O Glu Gly-Cys-S COOH OH O COOH OH

OH

OH
leucotriena B4

(3) Glu

COOH OH
PGE2

Gly-Cys-S COOH OH
leucotriena D4

OH

OH COOH OH
PGF2

OH

OH COOH O OH COOH OH
TxA2

Cys-S COOH OH O
leucotriena E4 PGD2

117

Prostanoidele necesit oxigen molecular i reacia este catalizat de prostaglandin-endoperoxid-sintetaz, format din dou activiti enzimatice, i anume, activitatea ciclooxigenazic i activitatea peroxidazic. n procesul de biosintez a prostanoidelor se observ ciclizarea lanului C20 cu formarea unui intermediar comun prostaglandinendoperoxid (PGH). n continuare acesta este convertit n prostaglandinele (D2, E2 i F2), tromboxanii (TxA2) i prostaciclinele (PGI2). Acest fapt are urmtoarea semnificaie: PGI 3 are rol de antiagregat mai puternic dect PGI2 n timp ce TxA3 este un agregant mai slab dect TxA2, ca urmare agregarea plachetar va scdea i timpul de coagulare se va prelungi. Aa se explic incidena mai redus a afeciunilor cardiace i a arterosclerozei la exchimoi, care consum ulei de pete bogat n acizi eicosanoici. Leucotrienele reprezint un grup de triene conjugate, formate din acizi eicosapentaenoici. Ele se sintetizeaz n leucocite, mastocite i macrofage pe o cale catalizat de lipoxigenaz. Primul produs al aciunii lipoxigenazei este 5-HPETE (hidroperoxieicosatetraenat) din care se formeaz leucotriena A4. Acesta este precursorul leucotrienei B4 sau C4. Leucotriena C4 se formeaz din A4 prin degradarea glutationului. Eliminarea secvenial a acidului glutamic i a glicinei duce la formarea leucotrienelor D4 respectiv E4. Leucotrienele produc peremeabilitatea vascular i sunt implicate ntr-o serie de boli cu reacii inflamatorii sau de hipersensibilitate imediat. Acidul arahidonic fiind substrat att pentru prostanoide ct i pentru leucotriene, prin aciunea unor sisteme enzimatice diferite, poate apare o competiie a acestora pentru o cale sau alta. Aspirina sau indometacinul inhib cicloxigenaza, n timp ce corticosteroizii cu rol antinflamator inhib eliberarea acidului arahidonic din fosfolipide prin aciune asupra fosfolipazei A2. XVII.2.3. Metabolismul corpilor cetonici n anumite condiii metabolice asociate cu o vitez de degradare a acizilor grai, ficatul produce cantiti mari de acid acetilacetic i acid D(-) -hidroxibutiric, care prin difuziune trec n snge. Acidul acetilacetic sufer decarboxilare spontan i trece n aceton. Aceste trei substane sunt cunoscute sub denumirea de corpi cetonici.

118

CH3 C=O CH3

CO2

CH3 C=O CH2

+ COOH NADH+H

CH3 CHOH CH2

NAD+

COOH

Acizii acetilacetic i hidroxibutiric sunt n echilibru, acesta fiind controlat de raportul NAD+/NADH din mitocondrie. n snge raportul dintre D(-)--hidroxibutiric i acetilacetic este cuprins ntre 1:1 i 1:10. Concentraia normal de corpi cetonici din snge este de sub 1 mg%, iar eliminarea prin urin este de sub 1 mg/24 ore. Cantiti peste valoarea normal n snge i eliminarea prin urin (cetonemia respectiv cetonunria) reprezint o stare cunoscut sub denumirea de cetoz. Condiia de cetoz este asociat cu deplasarea hidrailor de carbon utilizabili, cuplat cu mobilizarea acizilor grai liberi. Deoarece acidul acetilacetic are caracter acid pronunat excreia prin urin poate duce la cetoacidoz, care poate fi fatal ntr-un diabet netratat. XVII.2.3.1. BIOSINTEZA CORPILOR CETONICI (CETOGENEZA) n vivo, ficatul pare s fie singurul organ care produce cantiti semnificative de corpi cetonici, iar esuturile extrahepatice le utilizeaz ca substrate respiratorii. Fluxul de corpi cetonici de la ficat spre esuturile extrahepatice se datoreaz unui mecanism enzimatic activ de producere n ficat, cuplat cu o activitate sczut a enzimelor responsabile n utilizarea lor, n schimb n esuturile extrahepatice situaia se inverseaz. Enzimele responsabile cu formarea corpilor cetonici sunt localizate n mitocondrie. Substratul cetogenezei este acidul acetilacetic care rezult fie din fragmentul C4 terminal rezultat prin oxidarea acizilor grai n ficat, fie prin reversarea reaciei catalizate de ctre tiolaz. Dezactivarea acetoacetil-CoA la acetoacetat se poate face pe dou ci. Prima este deacilarea pe seama acetoacetil-CoA deacilazei, a doua considerat calea major implic condensarea acetoacetil-CoA cu o molecul de acetil-CoA cu formare de hidroxi, -metilglutaril-CoA catalizat de HMG-CoA sintetaz. Acesta este scindat n prezen de -hidroxi -metilglutaril-CoA liazei mitocondriale cu formare de acetoacetat. Ambele enzime sunt prezente n mitocondriile hepatice, locul cetogenezei. Acetoacetatul astfel format poate fi transformat

119

n D(-) -hidroxibutirat n prezen de D(-) .hidroxibutirat dehidrogenaz, constituind corpul cetonic predominant cantitativ n snge i urin, n cetoz. CH3-CO-CH2-CO-CoA
acetoacetil CoA deacilaza

CH3-CO-CH2-COOH

CH3-CO-CH2-CO-CoA + CH3-CO-CoA OH

HMG-CoA sintetaza CoA alfa-hidroxi-beta -metil-glutarilCoA liaza

HOOC - CH2 - C - CH2 - CO - CoA CH3

HOOC-CH2-CO-CH3 + CH3-CO-CoA

XVII.2.3.2. DEGRADAREA CORPILOR CETONICI Ficatul dispune de echipamentul enzimatic necesar sintezei corpilor cetonici dar nu dispune de cel necesar n reactivarea lor pentru a putea fi metabolizai. Acest proces are loc n esuturile extrahepatice i se poate face pe dou ci. Una din ci presupune reacia acetoacetatului cu succinil-CoA n prezen de succinil-CoA-acetoacetat-CoA-transferazei. Cealalt activeaz acetoacetatul n prezen de ATP, CoA i acetoacetat kinaz. CH3 C=O CH2 COOH + COOH CH2 CH2 COSCoA
tiokinaz CoA-transferaz

CH3 C=O CH2 COSCoA +

COOH CH2 CH2 COOH

CH3-CO-CH2-COOH + ATP + CoA-SH

CH3-CO-CH2-CO-SCoA + AMP + PP

120

n mod normal corpii cetonici sintetizai n ficat reprezint substrate uor metabolizabile pentru esuturile extrahepatice unde sunt scindai n acetil-CoA, n prezena tiolazei i oxidai prin ciclul acidului citric. Oxidarea corpilor cetonici n esuturile extrahepatice se face proporional cu concentraia lor din snge. Pn la o concentraie de 70 mg% ei sunt oxidai, peste aceast valoare capacitatea de oxidare a sistenmului este depit, concentraia va crete i se vor elimina prin urin. XVII.2.4. Metabolismul lipidelor simple XVII.2.4.1. BIOSINTEZA ACILGLICERINELOR Acilglicerinele se sintetizeaz de ctre organismul animal i vegetal superior. Sinteza are loc n majoritatea esuturilor, importan practic prezint doar ficatul i esutul adipos. Precursorii pentru sintez sunt glicerin3-fosfatul i acizii grai activai sub form de acil-CoA. Glicerina este activat prin fosforilare la glicerin-3-fosfat n prezena glicerinkinazei i ATP. Enzima este prezent n ficat, rinichi, mucoasa intestinal, glanda mamar n lactaie i este absent n muchi i esut adipos. n esuturile n care enzima este absent sursa de glicerin o formeaz dihidroxiaceton fosfatul, intermediar din glicoliz. Transformarea dihidroxiglicerin fosfatului n glicerin-3-fosfat, se face n ptrezen de NADH i glicerin-3-fosfat dehidrogenaz.
CH2OH CHOH CH2OH
glicerokinaz ATP ADP

CH2OH CHOH CH2-O-P

glicerin-3-fosfat dehidrogenaz

CH2OH C=O CH2-O-P

glicoliz

Acizii grai sunt activai prin transformarea lor n derivai de CoA n prezen de ATP i CoA-SH, reacie catalizat de tiokinaz. n prezen de acil-CoA, glicerin-3-fosfat i transferaze specifice se formeaz ca intermediar 1,2-diacilglicerinfosfatul (acid fosfatidic).

121

CH2OH CH-OH CH2-O-P

glicerin-3-fosfat dehidrogenaz

CH2OH C=O CH2-O-P

+

NAD+

NADH+H

Acil-CoA glicerin-3-fosfat aciltransferaz CoA

Acil-CoA dihidroxiaceton fosfat aciltransferaz CoA

CH2-O-OC-R1 acildihidroxiaceton CH-OH CH2-O-P

fosfat reductaza

CH2-O-OC-R1 C=O CH2-O-P

+

NAD+

NADH+H

CH2-O-OC-R1 1-acilglicerin-3-fosfat CH-OH CH2-O-P

1-acil-glicerin3-fosfat (acid lizofosfatidic)
CH2-O-OC-R1 CH-O-OC-R2 CH2-O-P
1,2-diacilglicerin 3-fosfat (acid fosfatidic) fosfohidrolaz H2O fosfat

CH2-O-OC-R1 CH-O-OC-R2
1,2-diacilglicerin 3-fosfat (acid fosfatidic)

2-acil transferaz

CH2-O-P

CH2-O-OC-R1 CH-O-OC-R2 CH2-OH

diacilglicerina acil-CoA diacilglicerin aciltransferaz CoA

monoacil glicerin acil transferaz acil-CoA

CH2-OH CH-O-OC-R2 CH2-OH

2-monoacil glicerina

CoA

CH2-O-OC-R1 CH-O-OC-R2 CH2-O-OC-R3

triacilglicerina

122

Reacia are loc n dou etape. Se obsev c acidul fosfatidic este intermediar att n sinteza acilglicerinelor ct i a fosfolipidelor. Pentru a fi convertit n triacilglicerin se face hidroliza fosfatului de ctre o fosfataz. n mucoasa intestinal exist o cale alternativ care pleac de la 2monoacilglicerin. Aceasta n prezena unui acil-CoA i a monoacil-glicerin transferazei este convertit la 1,2-diacilglicerin. Triacilglicerina se formeaz cu participarea diacilglicerin transferazei i a unei molecule de acil-CoA. XVII.2.4.2. CATABOLISMUL TRIACILGLICERINELOR Primul pas n degradarea triacilglicerinelor o constituie hidroliza legturii ester (lipoliza) n prezena unor enzime lipaze. Se cunosc triacilglicerin lipaze care se deosebesc prin localizare i funcie. n esutul adipos hidroliza triacilglicerinelor are semnificaie cantitativ i reprezint procesul de mobilizare a lipidelor cu eliberarea acizilor grai liberi n plasm. Acetia sunt captai de ctre esuturi i utilizai n scop energetic sau pentru sinteza lipidelor proprii. esutul adipos conine mai multe lipaze, triacilglicerin lipaza este hormon sensibil. Hormonii cu rol lipolitic (catecolaminele) acioneaz prin intermediul AMPc printr-un mecanism analog cu cel responsabil de stimularea glicogenolizei.
Denumire lipaza pancreatic lipaza hormon sensibil lipaza acid lipoprotein lipaza lipaza hepatic localizare Sucul pancreatic adipocite funcie digestia triacilglicerinelor din alimentaie mobilizarea lipidelor catabolismul intracelular utilizarea triacilglicerinelor n lipoproteine catabolismul lipoproteinelor alte caracteristici hidrolizeaz triacil glicerinele n micelii activat prin fosforilare prin intermediul protein kinazei AMPc dependente pH optim 5 eliberat n plasm de ctre insulin eliberat n plasm de ctre heparin.

lizozomi capilare ficat

XVII.2.5. Lipoproteine plasmatice

123

Lipidele reprezint un material hidrofob al crui transport prin plasm (mediu apos) necesit asocierea cu proteine sub form de complexe lipoproteice hidrofile. Pe baza unor proprieti ca diferene de densitate (ultracentrifugare), migrare ntr-un cmp electric (electroforez), au fost identificate cinci grupe majore de lipoproteine plasmatice, importante n transportul i metabolismul lipidelor precum i n diagnosticul clinic. Chilomicronii se sintetizeaz n mucoasa intestinal din lipidele aduse exogen prin alimentaie. De aici se secret n limf i intr n plasm prin ductul toracic. Conine peste 98% triacilglicerine, au densitate mic i greutate molecular mare (109). Cnd se gsesc n plasm n concentraie mare, dau acestuia un aspect lptos. Funcia lor major este de a transporta lipidele alimentare sub form de triacilglicerine. Colesterolul exogen esterificat, n prelabil, este de asemenea incorporat de aceste proteine. VLDL (very low density lipoproteins), conine aproximativ 90% lipide din care 50-60% sunt triacilglicerine. Se sintetizeaz n ficat i intestin i au rol n transportul triacilglicerinelor de la ficat la esutul extrahepatice. Apoproteina B este esenial pentru formarea chilomicronilor i a VLDL. n -lipoproteinemie, boal ereditar, nu se sintetizeaz apoproteina B, prin urmare lipoproteinele ce conin aceast apoprotein nu se sintetizeaz. LDL (low density proteins sau -lipoproteine), se sintetizeaz din VLDL i posibil chilomicroni. LDL are coninutul cel mai bogat n colesterol, din care cca 75% este esterificat. n celulele normale legarea LDL favorizeaz hidroliza colesterolului esterificat i translocarea lui n celul cu represia activitii HMG-CoA reductazei. Consecina este inhibarea sintezei de colesterol. n procesul de conversie a VLDL la LDL se formeaz n plasm o lipoprotein numit IDL (intermediate density lipoproteins). Acesta are un coninut de triacilglicerine i colesterol intermediar ntre VLDL i LDL. HDL (high density lipoproteins sau -lipoproteine) este sintetizat n ficat. HDL-eliberat n plasm este format iniial din fosfolipide, colesterol liber i apoproteine, avnd o structur plat, discoidal (HDL-nascent). n prezen de lecitin-colesterol-acil transferaz (LCAT), colesterolul este esterificat, devine astfel mai hidrofob i migreaz spre interiorul particulei. Acest fapt face ca particula discoidal s devin sferic. Colesterolul esterificat poate fi transferat din HDL la chilomicroni, VLDL i IDL prin intermediul unei proteine de transfer. Reacia catalizat de LCAT pare s fie implicat n ndeprtarea excesului de colesterol neesterificat din lipoproteine i esuturi. La persoanele cu nivel mai mare de HDL scade incidena arterosclerozei.
124

AGL (acizii grai liberi), rezult n plasm prin lipoliza triacilglicerinelor n esutul adipos sau ca urmare a aciunii lipoprotein lipazei. Forma circulant n plasm este aceea de complex cu albuminele. Rolul lor este acela de a servi drept surs de energie n diferite esuturi sau de a fi incorporai n lipidele proprii ale acestora. Dei se gsesc n cantitate mic n plasm au un turnover rapid i reprezint surse importante de lipide circulante. n citosolul celulelor din esuturile majore s-a gsit o protein ce leag acizii grai, numit proteina Z i are, probabil, un rol intracelular similar cu albumina n transportul acizilor grai cu lan lung. XVII.2.6. Metabolismul lipidelor complexe XVII.2.6.1. BIOSINTEZA GLICEROFOSFOLIPIDELOR Acidul fosfatidic este precursor comun pentru dou ci separate n biosinteza glicerofosfolipidelor: 1. o cale n care acidul fosfatidic se activeaz cu CTP i formeaz CDP-diacilglicerina, care apoi reacionaz cu componenta polar (mioinozit, serin, fosfatidil glicerin) formnd glicerofosfatidele respective; 2. a doua cale n care acidul fosfatidic sub aciunea unei fosfohidrolaze pierde fosfatul i trece n 1,2-diacilglicerin care reacioneaz apoi cu formele activate ale bazelor (CDP-etanol amin, CDP-colin) cu formare de cefaline i lecitine. n ambele ci citidindifosfatul are rol de activator. Biosinteza glicerofosfolipidelor plecnd de la acid fosfatidic. Aceast cale este specific bacteriilor dar este utilizat i de esuturile animale, n special pentru biosinteza cardiolipinei i a fosfatidil inozitolului. Activarea acidului fosfatidic cu citidin-trifosfat (CTP) are loc sub aciunea fosfatidil-citidil-transferazei:
CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH CH2-O-PO3H2 CTP
acid fosfatidic PP

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O O CH2-O-P-O-P-O-citidina OH OH

CDP-diacilglicerina

Biosinteza fosfatidilinozitolului. CDP-diacilglicerina reacioneaz cu inozita (ciclohexanhexol) n prezena CDP-diacilglicerin-inozitoltransferazei formnd fosfatidilinozitolul.
125

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O O + CH2-O-P-O-P-O-citidina OH OH

CDP-diacilglicerina

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O CH2-O-P-OOH

fosfatidilinozita

Prin fosforilarea gruprii OH din inozitol n prezena ATP i a unei kinaze rezult formele fosforilate: fosfatidilinozitol-4-fosfat i fosfatidilinozitol 4,5 bifosfat. Ultimul este considerat mesager de ordinul II care sub aciunea unor efectori (hormoni sau neurotransmitori) determin rspunsurile specifice la nivel celular. CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O O NH2 + HO-CH2-CH-COOH
serina

CH2-O-P-O-P-O-citidina OH OH
CDP-diacilglicerina

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O OH
fosfatidilserina

NH2

CH2-O-P-O-CH2-CH-COOH

126

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O OH
fosfatidilserina

NH2

CH2-O-P-O-CH2-CH-COOH

CO2

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O OH

CH2-O-P-O-CH2-CH2-NH2
fosfatidiletanolamina (cefalina)

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O
3 SAM 3 SAH

CH2-O-P-O-CH2-CH2-NH2
fosfatidiletanolamina (cefalina)

OH

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O OH CH2-O-P-O-CH2-CH2-N(CH3)3+

fosfatidilcolina (lecitina)

Biosinteza fosfatidil-serinei, fosfatidil-etanolaminei i fosfatidil colinei. n bacterii CDP-diacilglicerina reacioneaz cu gruparea OH i formeaz fosfatidil serina. Biosinteza difosfatidil glicerinei sau cardiolipinei. Cardiolipina se gsete n mitocondrii, cloroplaste i bacterii. Se sintetizeaz de la CDPdiacilglicerin care reacioneaz cu glicerin-3-fosfat i formeaz fosfatidilglicerofosfat. Acesta sub aciunea unei fosfataze pierde fosfatul formnd fosfatidilglicerina care este precursorul cardiolipinei. Fosfatidilglicerina reacioneaz cu o nou molecul de CDP-diacilglicerin care este acceptor de fosforil-baz. Rolul CTP este de a activa bazele azotate. Biosinteza fosfatidilcolinei i fosfatidiletanolaminei. n prima etap bazele (etanolamina i colina) se fosforileaz n prezen de ATP i a
127

unei kinaze specifice, apoi reacioneaz cu CTP formnd CDP-colina respectiv CDP-etanolamina. n ultima etap, baza este transferat pe diacilglicerin cu formarea fosfolipidei i eliberarea CMP.
+

O
colinkinaz ATP

HO-CH2-CH2-N(CH3)3
colin

HO-P-O-CH2-CH2-N(CH3)3 OH
fosfocolina

ADP

fosfocoli-citidiltransferaz CTP

PP

NH2 N O N O O O
fosfocolindiacil transferaz

CH2-O-P-O-P-O-CH2-CH2-N(CH3)3+ OH OH

1,2-diacilglicerina

CMP

HO

OH

CH2-O-CO-R1 R2-CO-O-CH O CH2-O-P-O-CH2-CH2-N(CH3)3+ OH

fosfatidilcolina (lecitina)

Aceast cale de sintez a lecitinei se mai numete i cale de recuperare deoarece lecitina provenit din alimente, n urma catabolismului, elibereaz colina care poate fi reciclat n acest sens. n esuturile animale lecitina se poate forma i prin metilarea succesiv a fosfatidiletanolaminei sub aciunea unui donor de metil Sadenozil metionin (SAM), care trece n S-adenozilhomocisteina (SAH).

128

Metilarea are loc n ficat avnd ca substrat unic fosfatidiletanolamina (cefalina) i depinde de disponibilitatea de S-adenozilmetionin.
NH2 3 N N N N O CH2-S+-CH3 (CH2)2 OH OH CH-NH2 COOH + CH2-O-CO-R1 CH-O-CO-R2 CH2-O-P-O-CH2-CH2-NH2

NH2 3 N N N N O CH2-S (CH2)2 OH OH CH-NH2 COOH Biosinteza fosfatidilserinei. n esuturile animale sinteza fosfatidilserinei const n nlocuirea enzimatic a etanolaminei din cefalin cu serin. Reacia este reversibil ntruct fosfatidilserina se poate decarboxila i reface fosfatidiletanolamina. Fosfatidiletanolamina se metileaz n continuare i formeaz lecitina. Toate aceste transformri au drept scop formarea de lecitin pentru sistemul nervos i creier, care necesit cantiti sporite de lecitin. Biosinteza plasmogenilor. Plasmogenii sunt o clas de glicerofosfolipide care conin n poziia 1 sau 2 a glicerinei n loc de grupare acil, gruparea alchenil (-O-CH=CH-R). La om plasmogenii reprezint 10% din lipidele sistemului nervos central. Biosinteza pornete de la derivatul acilat al dihidroxiacetonfosfatului. Gruparea acil este nlocuit cu un rest de alcool cu caten lung rezultnd 1-alchil-dihidroxiacetonfosfat coninnd legturi de tip eter. n continuare are loc reducerea gruprii cetonice din poziia 2 i acilarea n + CH2-O-CO-R1 CH-O-CO-R2 CH2-O-P-O-CH2-CH2-N+(CH3)3

129

aceeai poziie cu un acid gras activat. Compusul rezultat este analog unui acid fosfatidic, avnd, ns, n poziia 1 un eter (1-alchil-2-acil-glicerin-3fosfat). Urmeaz transformarea n fosfolipid iar n final se formeaz plasmogen prin desaturare oxidativ. CH2-OH C=O
dihidroxiaceton fosfat aciltransferaz R1-CO-SCoA CoA

CH2-O-OC-R1 C=O
R2-(CH2)2-OH 1-acildihidroxi aceton fosafat CH2-O-(CH2)2-R2

CH2-O-P

CH2-O-P

R1-COOH

CH2-O-(CH2)2-R2 C=O CH2-O-P

1-alchildihidroxi aceton fosafat reductaz NADPH+H+

HO-C-H
NADP+

acil transferaz R3-CO-SCoA

CH2-O-P
1-alchil-glicerin-3-fosfat

CH2-O-(CH2)2-R2 R3-CO-O-C-H CH2-O-P

fosfohidrolaza

CH2-O-(CH2)2-R2 R3-CO-O-C-H
P

H2O

CH2-O-H

CDP-colina

CMP

CH2-O-(CH2)2-R2 R3-CO-O-C-H
NADPH,O2 desulfurare

CH2-O-CH=CH-R2 R3-CO-O-C-H CH2-O-P-O-CH2-CH2-N+(CH3)3

plasmogen

CH2-O-P-O-CH2-CH2-N+(CH3)3
1-alchil-2-acil3-fosfocolina

XVII.2.6.2. CATABOLISMUL GLICEROFOSFOLIPIDELOR Degradarea glicerofosfolipidelor este un proces complex catalizat de enzime numite fosfolipaze. Locul de aciune a fosfolipazelor asupra diferitelor legturi din molecula substratului este:

130

A1 CH2-O - OC-R1 R2-CO - O-CH A2 D

CH2-O - P - O-colina C

Fosfolipaza A1 scindeaz legtura ntre poziia 1 a fosfolipidei elibernd acidul gras saturat. Fosfolipaza A2 acioneaz asupra legturii ester din poziia 2 elibernd acidul gras nesaturat. Prin ndeprtarea unui acid gras din glicerofosfolipid rezult lizoglicerofosfolipide, care sunt intermediari n metabolismul glicrofosfolipidelor. n general se gsesc n cantiti mici n celule i esuturi, n concentraii mari sunt toxice i au aciune distructiv asupra membranelor datorit proprietilor lor tensioactive. Asupra lizofosfolipidelor acioneaz fosfolipaza B sau lizofosfo-lipaza care ndeprteaz acidul gras rmas i formeaz glicerin-fosforil-baza. Fosfolipaza C atac legtura ester din poziia 3 i eliberaz 1,2diacilglicerina i baza fosforilat. Fosfolipaza D hidrolizeaz baza i elibereaz acidul fosfatidic. n urma acestei reacii este posibil schimbul de baze prin transfer ntre fosfolipide. Scindarea diferitelor pri componente ale fosfolipidelor se face cu viteze diferite, astfel, c degradarea parial poate fi urmat de resintez. De exemplu, catabolismul lecitinei poate avea loc pe mai multe ci, o cale important const n hidroliza de ctre fosfolipaza A2 a acidului gras nesaturat din poziia 2 cu formare de lizolecitin, care fie c este reciclat fie c sufer catabolism n continuare pn la glicerinfosfat i colin.

131

CH2-O-OC-R1 R2-CO-O-CH

fosfolipaza A1

CH2-O-OC-R1 HO-CH

CH2-O-P-O-colina H2O
lecitina

R2-COOH

CH2-O-P-O-colina
lizolecitina

CH2-OH HO-CH
H2O R1-COOH

CH2-O-P-O-colina

Lizolecitina se poate forma i pe alt cale alternativ care implic lecitin-colesterol-aciltransferaza (LCAT). lecitin + colesterol lizolecitin + colesterol esterificat Enzima se gsete n plasm i probabil n ficat i transfer acidul gras din poziia 2 a lecitinei pe colesterol. Acizii grai saturai se gsesc cu preponderen n poziia 1 a lecitinelor, iar cei nesaturai (de exemplu, precursori ai prostaglandinelor) n poziia 2. ncorporarea acizilor grai n lecitine se face pe mai multe ci i anume prin sintez complet, prin transacilare ntre colesterolul acilat i lizolecitin i prin acilarea direct a lizolecitinei cu acil-CoA. Fosfolipaza A1 care detaeaz acidul gras din poziia 1 a fosfolipidelor este localizat la suprafaa extern a majoritii celulelor i are rol n captarea fosfolipidelor circulante. Fosfolipaza A2 care scindeaz acidul gras nesaturat din poziia 2 furnizeaz astfel acizi grai nesaturai pentru sinteza prostaglandinelor, tromboxanilor i leucotrienelor. n pancreatita acut fosfolipaza A2 trece n snge unde transform lecitinele n lizolecitine a cror proprieti hemolizante stau la baza anemiilor din pancreatite. Fosfolipaza B care scindeaz acizii grai din poziia 1 sau 2 a lizofosfolipidelor are rol i n resinteza fosfatidilcolinei dup reacia:

132

Lizofosfatidilcolina + R-CO-SCoA fosfatidilcolina + CoASH Toxinele bacteriene conin fosfalipaze C care degradeaz lecitinele la diacilgliceride i fosfocolin. XVII.2.6.3. METABOLISMUL SFINGOLIPIDELOR Sfingolipidele sunt lipide complexe care se gsesc n cantiti mari n creier i esut nervos. Toate au ca unitate structural ceramida (format dintr-un aminoalcool, sfingozin i un acid gras) i o component polar. n funcie de componenta polar se clasific n sfingomieline care conin ca i grupare polar fosforiletanolamin i glicosfingolipide care au ca grupare polar una sau mai multe oze. Sinteza sfingozinei se realizeaz prin condensarea palmitil-CoA cu serin urmat de decarboxilarea acesteia. Reacia este activat de piridoxalfosfat (PALPO) i se formeaz 3-cetodihidrosfingozin. Urmeaz dou etape de reducere n care particip NADPH ca donor de hidrogen i o enzim flavinic. Reaciile au loc n microzomi.
CO2 PALPO CoASH

CH3-(CH2)12-CH2-CH2-CO-SCoA + HOOC-CH-CH2OH NH2

CH3-(CH2)12-CH2-CH2-CO-CH-CH2OH NH2
3-cetodihidrosfingozin

3-cetosfingozinreductaza

NADPH+H+

NADP+

CH3-(CH2)12-CH2-CH2-CH - CH-CH2OH OH
dihidrosfingozina

dihidrosfingozin reductaza

NH2

Fp

FpH2

133

CH3-(CH2)12-CH=CH-CH - CH -CH2OH OH
sfingozina

NH2

Prin acilarea gruprii amino din sfingozin cu un acid gras cu caten lung rezult N.acilsfingozina sau ceramida. CH3-(CH2)12-C-H H-C-CH-CH-CH2OH + R-CO-SCoA OH NH2 CH3-(CH2)12-C-H H-C-CH-CH-CH2OH OH NH-OC-R
N-acilsfingozina (ceramida)

Sfingomielina, n vivo, se sintetizeaz pe dou ci: 1. Sfingozina reacioneaz cu CDP-colina i formeaz sfingozinfosforil colina care se acileaz cu un acid gras cu caten lung. sfingozina
CDP-colina CMP acil-CoA CoA

sfingozinfosforilcolina sfingomielina

2.

Sfingozina cu acil-CoA formeaz ceramida, care reacioneaz cu CDP-colina: CH3-(CH2)12-C-H H-C-CH - CH-CH2-O-P-O-CH2-CH2-N+(CH3)3 OH NH-OC-R
sfingomielina

134

Sfingozin
acil-CoA CoA

ceramid
CDP-colin

sfingomielin
CMP

Cercebrozidele sunt sfingolipide ce conin glucoz sau galactoz. O caracteristic a cerebrozidelor o constituie acizii grai C 24 care intr n compoziia lor (acid lignoceric, cerebronic i nervonic). Cerebrozidele se sintetizeaz din ceramid i oze activate (UDP-glucoz sau UDP-galactoz).
UDP UDP-glc

glucocerebrozid

Sfingozin
acil-CoA CoA

ceramid
UDP-gal UDP

galactocerebrozid

CH3-(CH2)12-C-H H-C-CH-CH-CH2-O OH NH CO R OH
galactocerebrozid

CH2OH O HO OH

Sulfatidele se sintetizeaz din cerebrozide prin reacia de sulfatare a gruprii OH din poziia 3 a hexozei cu 3-fosfoadenozin-5-fosfosulfat (PAPS). Gangliozidele sunt glicofosfolipide ce conin un numr variabil de monozaharide i una sau mai multe molecule de acid sialic (acid N-acetilneuraminic). Gangliozidele se gsesc n cantitate mare n materia cenuie din creier i intr n structura membranei neutronului. Se cunosc peste 20 de tipuri de gangliozide care difer ntre ele prin numrul i poziia relativ a ozelor i a restului de aicd sialic. Dup numrul de molecule de acid sialic din molecula unei gangliozide, acestea se prescurteaz astfel, GM1 (monosialgangliozida), GM2 (disialgangliozida) etc. Prezena acidului sialic n structura gangliozidelor imprim gruprii polare n molecula lor un caracter acid.
135

Gangliozidele se sintetizeaz plecnd de la ceramid prin adugarea treptat de resturi de hexoze din formele active ale acestora: UDP-glucoza, UDP-galactoza, CMP-sialic, UDP-N-acetilglucozamina etc. Biosinteza unei galactozide se desfoar dup schema
Ceramid
UDP-Glc UDP

glucozilceramid
UDP-gal UDP

Cer-Glc-Gal

Cer-Glc-Gal-Sial
CMP-sial CMP UDP-GalNAc UDP

Cer-Glc-Gal-Sial Gal-NAc

Cer-Glc-Gal-Sial
UDP-Gal UDP

Gal-NAc-Gal
(monosialglicozid)

* * O
Gal-NAc

* O

O O

OH O-CH2-CH-CH-C-H

NHAc

Gal

Glc

NH H-C-(CH2)12-CH3 CO R

Gal

CH2OH CHOH CHOH O COOAcHN

ceramida

Sial

Degradarea sfingolipidelor. Sfingolipidele sunt degradate se ctre sfingomienilaz, o enzim care ndeprteaz restul de fosforilcolin. Cerebrozidele i gangliozidele sunt hidrolizate de ctre hidroxidaze, care ndeprteaz cte un rest de oz de la capetele nereductoare ale lanului glucidic. Arilsulfatazele ndeprteaz resturile sulfat din molecule. Toate

136

acestea sunt enzime lizozomale al cror deficit determin bolile lizozomale. Aceste boli se caracterizeaz prin acumulare n esuturi adipoase. XVII.3.METABOLISMUL STEROLILOR Colesterolul este sterolul major din organism i se gsete n cantitate mare n ficat, piele, creier, sistem nervos, corticosuprarenal, aort etc. Colesterolul intr n structura membranelor celulare i a lipoproteinelor plasmatice i este punct de plecare pentru biosinteza acizilor biliari, hormonilor steroizi i a vitaminei D3. Colesterolul din organism este de origine exogen i endogen. Colesterolul exogen provine din alimentaie (0,3 g/zi) (glbenu de ou, carne, ficat, creier, unt), iar colesterolul endogen provine prin biosintez. Turnoverul colesterolului este ilustrat n schema:
Formarea membranelor Steroidogeneza (hormoni steroizi)

Colesterol din alimente

COLESTEROL

Colesterol sintetizat

Vitamina D3 Acizi biliari

Esteri ai colesterolului Lipiproteine plasmatice

Din colesterolul sintetizat 50% se transform n acizi biliari care se excret prin bil. O parte se transform la nivelul pielii n vitamina D 3, la nivelul corticosuprarenalei n hormoni steroizi i intr n structura membranelor celulare. Excesul se excret ca atare, mai nti n bil apoi n intestin unde sub aciunea florei bacteriene se transform n coprostanol i colestanol, care se elimin prin fecale.

XVII.3.1.Biosinteza colesterolului

137

Toate esuturile care conin celule nucleate au capacitatea de a sintetiza colesterol, dar cele mai active sunt ficatul, pielea i aorta. Biosinteza colesterolului este un proces complex care const ntr-un numr mare de reacii ce se desfoar n faza solubil a citoplasmei i n microzomi. Cercetrile fcute n acest sens au stabilit trei etape n biosinteza colesterolului: 1. transformarea acidului acetic activat (Ac-CoA) n acid mevalonic; 2. transformarea acidului mevalonic n scualen; 3. transformarea scualenului n colesterol. n biosinteza colesterolului singura surs de atomi de carbon este AcCoA, toate reaciile se desfoar n faza solubil a citoplasmei i reaciile sunt catalizate de enzime care n marea lor majoritate sunt ataate de reticulul endoplasmatic i necesit prezena unor cofactori i coenzime: NADH, ATP, CoA etc. XVII.3.1.1.ETAPELE BIOSINTEZEI COLESTEROLULUI Formarea acidului mevalonic din Ac-CoA. Acidul mevalonic se realizeaz prin condensarea a trei molecule de Ac-CoA. n prima etap se condenseaz doar dou molecule de Ac-CoA n prezena -cetolazei, cu formare de acotoacetil-CoA. 2CH3-CO CoA
tiolaz

CH3-CO-CH2-CO

CoA + CoASH

n continuare are loc condensarea acetoacetil-CoA cu o a treia molecul de Ac-CoA n prezena -hidroxi--metil-glutaril sintetazei (HMG-CoA-sintetaz) i rezult -hidroxi--metil-glutaril-CoA (intermediar ntlnit i la sinteza corpilor cetonici n mitocondrii). CH3-CO-CH2-CO CoA + CH3CO CoA
HMGCoA sintetaz

CoASH

138

OH HOOC-CH2-C-CH2-CO CH3 n continuare gruparea carboxilic legat de CoA este redus la grupare hidroxilic, cu eliminare de CoASH. Reacia are loc n dou etape succesive n prezena unui sistem multienzimatic catalizat de -hidroxi-metil-glutaril-CoA-reductaz care necesit NADPH+H+ ca donor de hidrogen i rezult acid mevalonic. OH HOOC-CH2-C-CH2-CO CH3
2NADPH+H+ CoASH

CoA

OH HOOC-CH2-C-CH2-CH2OH CH3

CoA

HMGCoA-reductaza

NADP+

Reacia catalizat de HMCCoA-reductaz este etap limitant de vitez sau etap reglatoare a biosintezei colesterolului. Cnd colesterolul se acumuleaz n cantitate prea mare, n celul, inhib sinteza de HMGCoAreductaz. Transformarea acidului mevalonic n squalen. Acidul mevalonic se fosforileaz n trei etape. n prima etap n prezen de ATP i mevalonatkinaz se formeaz 5-fosfomevalonat:
OH HOOC-CH2-C-CH2-CH2OH CH3
ATP mevalonatkinaza Mg+2 ADP

OH HOOC-CH2-C-CH2-CH2OPO3H2 CH3

n etapa a doua, sub aciunea fosfomevalonatkinazei, acidul 5fosfomevalonic trece n acid 5-pirofosfomevalonic:

139

OH HOOC-CH2-C-CH2-CH2OPO3H2 CH3

fosfomevalonat kinaza Mg+2 ATP ADP

OH CH3

HOOC-CH2-C-CH2-CH2-P-O-P-OH OH OH

A treia fosforilare are loc la hidroxilul din poziia 3 i rezult acidul 3fosfo-5-pirofosfomevalonic. Acesta este un compus instabil care se decarboxileaz i pierde o grupare fosfat i rezult izopentenilpirofosfat. OH OH HOOC-CH2-C-CH2-CH2-O-P-O-P-OH CH3 OPO3H2 CH3 O O OH
pirofosfatmevalonatkinz

ATP

ADP

OH OH pirofosfomevalonatdecarboxilaza HOOC-CH2-C-CH2-CH2-O-P-O-P-OH O O OH OH CH2=C-CH2-CH2-O-P-O-P-OH + CO2 + Pa CH3 O O

3-Izopentenilpirofosfatul se izomerizeaz la 3,3-dimetilalilpirofosfat sub aciunea izopentenilpirofosfat izomerazei. OH OH CH2=C-CH2-CH2-O-P-O-P-OH CH3 O O CH3 OH OH CH3-C=CH-CH2-O-P-O-P-OH O O

140

Dimetilalil-pirofosfatul se condenseaz cu izopentenilpirofosfatul sub aciunea geranil pirofosfat sintetazei i formeaz geranil pirofosfatul (C10). n continuare geranil pirofosfatul se condenseaz cu o nou molecul de izopentenil pirofosfat i rezult farnesilpirofosfat (C15). CH2-O-P-O-P + CH2-O-P-O-P fosfatsintetaz
PP
farnesilpirofosfatsintetaz

geranilpiro

CH2-O-P-O-P +

CH2-O-P-O-P

CH2-O-P-O-P
farnesilpirofosfat

Prin condensarea reductiv a dou molecule de farnesilpirofosfat, la capetele pirofosfatice rezult squalenul, hidrocarbura C30.
2 CH2-O-P-O-P
squalen sintetaz

Transformarea squalenului n colesterol. Squalenul n urma ciclizrii formeaz primul sterol, lanosterolul. nainte de nchiderea ciclului scualenul se hidroxileaz n poziia 3 sub aciunea unei monoxigenaze formnd 2,3-epoxisqualenul. nchiderea ciclului se realizeaz dup schema:

141

14

HO

lanosterol

Lanosterolul conine trei grupe metil n plus fa de colesterol. Grupele metil sunt oxidate de ctre sistemul hidroxilazic microzomal care necesit oxigen molecular i NADPH i sunt ndeprtate sub form de dioxid de carbon. Compusul rezultat este zimosterolul (C27), care difer de colesterol prin poziia legturii duble din nucleul B. Prin dehidrogenare i deplasarea legturii duble zimosterolul trece n 7-dehidrodesmosterol care este precursorul desmosterolului i a 7dehidrocolesterolului. Aceti doi steroli sunt precursorii colesterolului

HO

HO

Reaciile de transformare ale scualenului n colesterol sunt catalizate de enzimele microzomale i necesit n plus prezena a dou proteine din faza solubil a citoplasmei, numite proteine transportoare de scualen respectiv de

142

steroli. Rolul lor este de a forma compleci solubili cu sterolii, facilitnd astfel reaciile din mediu apos din celul. Fcnd bilanul biosintezei colesterolului constatm c este un proces consumator de energie i echivaleni reductori. Pentru sinteza unui mol de colesterol se consum 18 moli de acetil-CoA, 16 moli de NADPH i 36 de legturi macroergice ATP.

7-dehidrodesmosterol

HO

7-dehidrocolesterol

desmosterol

HO

HO

XVII.3.1.2.REGLAREA BIOSINTEZEI COLESTEROLULUI. Reglarea biosintezei colesterolului se exercit la nivelul reaciilor catalizate de -hidroxi--metil-glutaril-CoA reductaz, ctre colesterolul liber din celul. Potrivit concepiei lui J. Goldstein i M. Brown, reglarea biosintezei colesterolului la nivel celulare este mediat de ctre -lipoproteinele plasmatice (LDL), care transport colesterolul la esuturi. Celulele care sintetizeaz colesterol conin la suprafaa membranei plasmatice receptori specifici de care se fixeaz -lipoproteinele (LDL) i formeaz complexul LDL-receptor. Complexul LDL-receptor este incorporat n celul prin endocitoz. n celul LDL-ul se separ de receptor, care este reciclat la suprafaa celulei i fuzioneaz cu lizozomii. Enzimele lizozomale degradeaz partea proteic a LDL la aminoacizi care pot intra n rezerva celulei, iar

143

colesterolesteraza lizozomal hidrolizeaz esterii colesterolului la colesterol i acizi grai. Colesterolul eliberat este utilizat de ctre celul, n general, pentru sinteze membranare, iar n celulele specializate este utilizat i n alte scopuri, cum ar fi sinteze de acizi biliari n ficat, hormoni steroizi n csr, hormoni sexuali n gonade etc. Cantitatea de colesterol eliberat de LDL determin viteza metabolismului colesterolului, reglarea la nivel celular, astfel exesul de colesterol acumulat n celule acioneaz prin trei mecanisme mai importante: 1. inhib sinteza de novo, reduce capacitatea celulei de a sintetiza colesterol, prin inhibarea sintezei de enzim HMG-CoA reductaz, n lipsa cruia celula va utiliza numai colesterol extracelular introdus prin receptori; 2. colesterolul extras din LDL faciliteaz stocarea lui n celul prin activarea enzimei acil-colesterol-aciltransferazei (ACAT), care esterific colesterolul n exces n vederea depunerii lui sub form de picturi n citoplasm; 3. acumularea colesterolului inhib prin mecanism feed-back sinteza de noi receptori pentru LDL. XVII.3.1.3. ABSORBIA I TRANSPORTUL COLESTEROLULUI Colesterolul exogen provine din alimente de natur animal n care se gsete liber i esterificat. Raia zilnic a unui adult conine 0,6 - 1,2 g colesterol, din care se absorb 0,3 - 0,4 g/zi. Cnd concentraia lui n hran este mai mic absoria este mai eficient i invers. Cnd se urmrete scderea concentraiei colesterolului la persoane cu hipercolesterolemie se impun restricii severe, adic scderea colesterolului din diet pn la 0,1 0,3 g/zi. Spre deosebire de colesterol, sterolii vegetali nu se absorb, ei sunt total excretai n lumenul intestinal. n lumenul intestinal colesterolul este ncorporat n agregate micelare mixte formai din acizi biliari, fosfolipide i colesterol. Colesterolul esterificat la nivelul micelelor este hidrolizat de ctre colesterolesteraza pancreatic, deoarece numai colesterolul liber este absorbit de ctre mucoasa intestinal. O parte din colesterolul absorbit este reexcretat n lumenul intestinului subire i eliminat prin fecale. Cea mai mare parte a colesterolului absorbit mpreun cu cel sintetizat n intestin, se esterific n celulele mucoasei

144

intestinale sub aciunea ACAT (acil-colesterol-aciltransferaz), enzim ce transfer un acid gras activat pe colesterol. Colesterolul liber i esterificat este integrat n chilomicroni, lipoproteine mari, ncrcate cu triacilglicerine. Chilomicromii ajung n snge i la nivelul extrahepatic (adipos i muscular) descarc trigliceridele cu ajutorul lipoproteinlipazei din endoteliul capilar. Cholomicromii reziduali ce conin esteri ai colesterolului i colesterol sunt captai de ctre ficat unde esterii sunt hidrolizai. Ficatul sintetizeaz pro- -lipoproteinele sau VLDL care conine trigliceride i colesterol esterificat. Cnd VLDL traverseaz vasele capilare ale esutului adipos i muscular cedeaz trigliceride, iar particulele rmase, de talie mic, ce conin esteri ai colesterolului sunt aa numitele lipoproteine cu densitate intermediar (IDL). IDL dispare repede din circulaie, n aproximativ 2 - 6 ore de la formarea VLDL, n urma interaciunii cu ficatul. Acesta extrage colesterol din IDL i-l utilizeaz pentru sinteza VLDL i acizi biliari. La nivelul HDL are loc esterificarea colesterolului din plasm printr-o reacie de transesterificare ntre acidul gras din poziia 2 a lecitinei i colesterol. Reacia este catalizat de lecitin-colesterol-aciltransferaz (LCAT). Esterii colesterolului de pe HDL sunt transferai pe LDL i apoi pe IDL pentru a fi reciclai. HDL este apoi catabolizat de ctre ficat i intestin. HDL i LCAT au rol de a purifica esuturile extrahepatice de colesterol. n final tot colesterolul destinat excreiei intr n ficat, apoi este excretat n bil fie ca atare, fie ca acizi biliari. XVII.3.1.4. CONCENTRAIA COLESTEROLULUI PLASMATIC I TULBURRI ALE METABOLISMULUI COLESTEROLULUI Concentraia normal de colesterol plasmatic la adult este de 200 mg %. Exist variaii n funcie de vrst, n funcie de sex (mai crescut la brbai dect la femei pn la menopauz), n funcie de alimentaie i variaz de la un individ la altul. Aproximativ 65% din totalul colesterolului se gsete sub form esterificat. Determinrile de colesterol se face jeun, adic la 12 - 14 ore de la ultima mas, cnd n plasm nu exist chilomicromi i exist puine pro- lipoproteine (VLDL). n aceste condiii colesterolul este coninut n cea mai mare parte n fraciunile de LDL i HDL. Creterea colesterolului plasmatic sau hipercolesterolemia apare n diferite boli cun sunt hipercolesterolemia familial i ateroscleroza.
145

Hipercolesterolemia familial sau hiperlipemia de tip II este o boal genetic ce se caracterizeaz prin creterea -lipoproteinelor i a colesterolului din plasm. Ateroscleroza este o boal care se caracterizeaz prin depunerea de colesterol esterificat n intima arterelor sub form de plci numite ateroame. Acest fapt duce la ngustarea lumenului capilarelor i n cele din urm la apariia infarctului. XVII.3.2.Catabolismul colesterolului Degradarea nucleului steranic n compui simpli nu are loc n organism, el se elimin sub form de derivai ai steranului, inactivi biologic. n funcie de esut colesterolul sufer transformrile:
INTESTIN COLESTEROL FICAT PIELE CORTICO SUPREARENALE steroli neutri acizi biliari provitamina D3 hormoni steroizi coprosterol colesterol

XVII.3.2.1.

STEROLI NEUTRI

HO

H
coprostanol (A/B cis, seria beta)

HO

colestanol (A/B trans, seria alfa)

146

O parte din colesterolul exogen se excret ca atare prin intestin fr s fie absorbit. O alt parte se transform n intestinul gros sub aciunea florei bacteriene n steroli neutri, coprostanol i colestanol, care se elimin prin fecale. XVII.3.2.2. ACIZI BILIARI Toi acizii biliari se conjug n ficat cu glicocol sau cu taurin formnd acizi biliari glico- sau tauroconjugai.

CO-NH-CH2-COOacid glico-conjugat

CO-NH-CH2-CH2-SO3acid taro-conjugat

Biosinteza acizilor biliari. Formarea acizilor biliari primari are loc n ficat prin introducerea gruprilor hidroxil n molecula colesterolului i scindarea catenei laterale. Prima reacie const n hidroxilarea poziie 7, de ctre 7--hidroxilaza microzomal. Aceast etap este limitant de vitez i necesit oxigen molecular, NADPH, citocrom P450. n continuare are loc hidroxilarea n poziia 12, izomerizarea hidroxilului din poziia 3 (din n ), reducerea dublei legturi i scindarea catenei laterale prin ndeprtarea a trei atomi de carbon sub form de propionil-CoA. n urma acestor transformri rezult acizii biliari sub form activat cu CoA, colil-CoA i chenodezoxicolil-CoA. Urmeaz conjugarea cu glicocolul i cu taurina cu formarea acizilor biliari primari glicocolic, glicochenodezoxicolic, taurocolic i taurochenodezoxicolic. Acizii biliari conjugai sunt excretai n bil, unde datorit mediului alcalin formeaz sruri biliare cu ionii de sodiu sau potasiu. Din bil acizii biliari sunt deversai n intestin. La nivelul intestinului o parte din acizii biliari primari sunt transformai sub aciunea florei bacteriene n acizi biliari secundari. Aceste transformri au loc prin deconjugarea de glicocol i taurin i ndeprtarea hidroxilului din poziia 7. Astfel, acidul colic trece n acid dezoxicolic, iar acidul cheno dezoxicolic trece n acid litocolic.

147

HO
colesterol

HO

OH
7-alfa-hidroxicolesterol

HO

OH
7-alfa-hidroxicolesterol

HO

OH

3-alfa-7-alfa-dihidrocoprostanol

n condiii normale un om sintetizeaz 200-500 mg acizi biliari/zi. Rata sintezei este reglat de cantitatea de acizi biliari care se rentorc din intestin n ficat, pentru a nlocui pierderile de acizi biliari eliminai prin intestin. n acest fel rezerva de acizi biliari rmne constant. Circulaia enterohepatic i funciile acizilor biliari. Acizii biliari primari i secundari din intestin sunt reabsorbii n proporie de 99% i se rentorc prin circulaia portal n ficat; de la ficat sunt reexcretai n bil, apoi n intestin, efectund aa numitul ciclu enterohepatic. n condiii normale zilnic se parcurge ciclul de 3 - 4 ori din care numai 1% este excretat prin fecale. Funciile acizilor biliari sunt. a. datorit proprietilor tensioactive, acizii biliari au rol n emulsionarea grsimilor la nivelul intestinului, favoriznd digestia i absorbia lor, precum i a vitaminelor liposolubile A, D, E i K; b. acizii biliari activeaz lipaza pancreatic i colesterolesteraza pancreatic; c. contribuie mpreun cu lecitinele la solubilizarea colesterolului sub form de micele n bil; d. acizii biliari au o aciune coleretic, de stimulare a secreiei biliare i aciune colegog, de contracie a vezicii biliare.

148

OH

HO

OH

HO

OH

OH COSCoA COSCoA

HO

OH
acid chenodezoxicolic

HO
acid colic

OH

XVII.3.2.3. BIOTRANSFORMAREA COLESTEROLULUI N VITAMINA D3 Colesterolul la nivelul pielii se transform n 7-dehidrocolesterol sau provitamina D3 care sub aciunea razelor ultraviolete trece n vitamina D3. Vitamina D3 sau colecalciferolul face parte din grupul vitaminelor D, substane liposolubile care au aciune antirahitic la copil i previn osteomaladia la adult. Vitamina D se formeaz prin iradierea cu lumin ultraviolet a sterolilor nesaturai din plante i animale. Astfel din ergosterol rezult ergocalciferolul, vitamina D2, iar din 7-dehidrocolesterol rezult colecalciferolul sau vitamina D3.

149

HO
ergosterol

HO
ergocalciferol (vitamina D2)

HO
7-dehidrocolesterol

HO
colecalciferol (vitamina D3)

Omul poate avea dou surse de vitamine, una exogen din alimente i una endogen prin fotoliza 7-dehidrocolesterolului din piele. Vitamina D3 sau D2 din alimente se absorb la nivelul intestinului sub form de micele, apoi este transportat n snge de o globulin specific i ajunge la ficat. n ficat vitamina D 3 este hidroxilat n poziia 25 de ctre o hidroxilaz specific, 25-hidroxilaza, enzim microzomal i rezult 25hidroxi- D3 (sau calcifediolul). Acesta este metabolitul principal din circulaie. La nivelul rinichiului 25-hidroxi- D3 este hidroxilat la poziia 1, de ctre 1--hidroxilaza mitocondrial. Produsul rezultat 1--25-hidroxi- D3 (sau calcitriolul), este metabolitul cu aciune major din organism considerat drept hormon. 1--25-dihidroxi D3 are rol n meninerea calcemiei la valori normale de 9 -11 mg%, favoriznd absorbia calciului la nivel intestinal i reabsorbia la nivel renal i osos. 25-Hidroxi- D3 se poate hidroxila i la poziia 24 sub aciunea unei enzime mitocondriale prezent n tubii renali, cartilagii, intestin i placent i rezult 24,25-dihidroxi- D3. Cnd valoarea calcemiei este normal, acest metabolit este n echilibru cu 1,25-dihidroxi- D3. n hipocalcemie, parathormonul stimuleaz 1--hidroxilaza i inhib 24 hidroxilaza. Acest fapt determin creterea concentraiei de 1,25-dihidroxi- D3 care restabilete calcemia i scade concentraia parathormonului.

150

OH
ficat hidroxilaza

HO
colecalciferol (vitamina D3)

HO
25-hidroxicolecalciferol

OH OH

OH

OH

HO
24,25-dihidroxicolecalciferol

HO
1,25-hihidroxicolecalciferol

Hipofosfatemia stimuleaz direct 1,25-hidroxi- D3, care la rndul lui va stimula absorbia fosfatului la nivelul intestinului. S-a constatat c acumularea 1,25-hidroxi- D3 inhib 1-hidroxilaza i activeaz 24-hidroxilaza renal care va forma 24,25-hidroxi- D3 a crui rol este de a iniia sinteza de dihidroxiapatit sau sare de os. Catabolismul 1,25-hidroxi- D3 se face prin hidroxilarea poziiei 26, iar a 25-hidroxi- D3 prin degradarea sub aciunea enzimelor din ficat. Mecanismul de aciune la nivel celular al 1,25-hidroxi- D3 este asemntor cu cel al hormonilor steroizi. n celulele int din intestin 1,25hidroxi- D3 se leag de un receptor citoplasmatic i formeaz un complex care este translocat n nucleu unde determin sinteza unui ARNm specific. Acesta servete ca matri pentru pentru sinteza unei proteine specifice transportoare de calciu care faciliteaz absorbia calciului la nivelul intestinului. XVII.4.METABOLISMUL HORMONILOR STEROIZI Hormonii steroizi sunt produi de transformare a colesterolului la nivel de glande de secreie intern. Hormonii steroizi se clasific dup locul de sintez n hormoni corticosuprarenali i hormoni sexuali. A. Hormonii corticosuprarenali, la rndul lor sunt de trei feluri:
151

1.

hormoni glucocorticoizi care se sintetizeaz n zona fasciculat a csr i acioneaz asupra metabolismului glucidic, proteic i lipidic (cortizol, cortizon i corticosteron); 2. hormoni mineralocorticoizi acioneaz asupra transportului de electrolii i asupra distribuiei apei n esuturi i se sintetizeaz n zona glomerular din csr (aldosterona i dezoxicorticosterona); 3. hormonii sexuali din csr sau sexocorticoizii se sintetizeaz n zona fasciculat sau reticulat a csr i au o aciune asupra caracterelor sexuale secundare n celula int (dehidroepiandrosterona, androstendiona) B. Hormoni sexuali secretai de gonade se mpart n hormoni sexuali masculini i feminini: 1. hormonii sexuali masculini, secretai de testicul, controleaz caracterele sexuale la brbat i au rol anabolizant (testosterona); 2. hormonii sexuali feminini sunt estrogenii secretai de foliculii De Graaf (estrona, estradiolul) i hormonii luteali reprezentai prin progesteron. Toi hormonii steroizi se formeaz din colesterol pe calea pregnandiolonei, printr-o serie de reacii care se desfoar n mitocondrie sau n reticului endoplasmatic al celulelor din corticosuprarenale sau gonade. La aceste reacii particip enzime de deramificare, hidrataze, monoxigenaze i izomeraze. Corticosuprarenala conine cantiti mari de colesterol mai ales sub form esterificat. Transformarea colesterolului esterificat n colesterol liber sub aciunea unei esteraze este o etap neceasar pentru biosinteza unor hormoni steroizi i este reglat de ACTH. Colesterolul liber este apoi scindat la catena lateral i formeaz pregnanolon. Reacia este catalizat de un sistem enzimatic numit colesterol desmolaz, localizat n mitocondrii care necesit citocrom P450, NADPH, O2 i este activat de ctre ACTH. n prima etap are loc hidroxilarea colesterolului n poziia C20 i C20 cu formare de 20,22-dihidroxicolesterol, urmat de scindarea catenei cu eliminarea unui rest de ase atomi de carbon sub form de aldehid izovalerianic.

152

Colesterol (C27)

pregnanolon (C21)

androgeni (C19)

progesteron (C21)

mineralocorticoizi (C21)

glucocorticoizi (C21)

androgeni (C19)

estrogeni (C18)

Pregnenolona steroidul pivot de la care se sintetizeaz toi hormonii prsete mitocondria i intr n citoplasm unde se transform pe dou ci: ao sub aciunea unei 17--hidroxilaze formeaz 17--hidroxipregnenolonon, care merge spre sintez de androgeni i bo sub aciunea a dou enzime din reticulul endoplasmatic 3--hidroxisteroid-dehidrogenaz i 4,5 izomeraz trece n progesteron. n funcie de esut 17--hidroxi-pregnenolona i 17--hidroxiprogesterona se transform n glucocorticoizi, mineralocorticoizi i androgeni. Astfel, n zona fasciculat a csr din progesteron sub aiunea 17-hidroxilazei i apoi a 21-hidroxilazei se deschide calea spre sinteza glucocorticoizilor avnd ca produs final cortizolul, cel mai important glucocorticoid.
OH OH

O2;NADPH citocrom P450

O2;NADPH citocrom P450

HO

colesterol

HO

20,22-dihidroxicolesterol

153

CH3 CO + H3C-CH-CH2-CH2-CHO
aldehida izocaproica pregnenolona

CH3

HO

CH3 CO

CH3 CO OH

HO

pregnenolona

17-alfa-hidroxipregnenolona

HO

CH3 CO

CH3 CO OH

O
progesterona

O
17-alfa-hidroxiprogesterona

n zona glomerular acioneaz, mai nti, 21-hidroxilaza i iniiaz calea spre sinteza aldosteronei, mineralocorticoidul major. n general hidroxilrile la poziia C21 sunt necesare pentru ambele clase, gluco i mineralocorticoizi, iar hidroxilarea C17 confer o activitate glucocorticoid

154

mai mare. n zona glomerular nu exist C17--hidroxilaz care acioneaz asupra corticosteronei i conduce spre formarea de aldosteron. COLESTEROL pregnenolon
17-hidroxilaz

17-hidroxipregnenolon

21-hidroxilaz

21-hidroxilaz

progesteron ao

17-hidroxilaz

17-hidroxiprogesteron

CH3 CO
21-hidroxilaza

CH2OH CO

11-hidroxilaza

progesterona

11-dezoxicorticosterona

CH2OH CO HO
18-hidroxilaza

CH2OH HOH2C CO HO

corticosterona

O
18-hidroxixorticosterona

155

CH2OH CHOCO HO
18-hidroxidehidrogenaza

aldosterona

bo
CH3 CO OH
21-hidroxilaz

CH2OH CO OH

11-hidroxilaz

O
17-alfa-hidroxiprogesteron

O
11-dezoxicortizol

CH2OH HO CO OH O

CH2OH CO OH

O
cortizol (hidrocortizona)

O
cortizona

n zona fasciculat i reticulat a csr se sintetizeaz hormoni androgeni. De la 17--hidroxipregnanolon prin scindarea catenei laterale rezult dehidroepiandrosteron, iar de la 17- -hidroxiprogesteron se formeaz androstendion. De la ambii hormoni androgeni, n testicule, rezult testosteron, iar n ovar, prin intermediul testosteronei, rezult hormonii estrogeni.

156

CH3 CO OH
C17-C21-liaza

CH3 CO OH

HO
17-hidroxipregnelonona

HO
dehidroepiandrosterona

CH3 O CO OH

HO

O
dehidroepiandrosterona 17-hidroxiprogesterona

O
androstendiona

OH

HO
oestrona

O
testosterona

HO
oestradiol

157

Mecanismul general de aciune a hormonilor steroizi. Homonii steroizi acioneaz la nivel celular asupra sintezei ARN i de proteine. Fiind substane liposolubile, hormonii steroizi difuzeaz prin membrana celular int i n citoplasm interacioneaz cu o protein specific (receptor), formnd un complex hormon-receptor. Receptorii sunt proteina care au o afinitate specific mare pentru un hormon dat. Complexul hormon-receptor sufer o reacie de activare, care const ntr-o schimbare conformaional, schimbare care-l face apt sau nu s se lege de cromatin. Complexul hormonreceptor intr n nucleu i se leag pe o anumit regiune de pe ADN, unde activeaz sau imnactiveaz transcrierea genelor specifice, avnd ca rezultat modificarea sintezei de proteine, de obicei, enzime dintr-o cale metabolic. Genele sunt reglate de hormoni steroizi ce se gsesc pe cromatine n regiuni activate i conin dou elemente reglatoare pe secvena ADN, n apropierea locului 5 de iniiere a transcrierii. Primul element promotor ( PE) are rol n iniierea transcrierii, este comun pentru toate genele i specific locul de legare a ARN-polimerazei II i al doilea, este denumit hormone responsive element (HRE), situat la o anumit distan de elementul promotor i este caracteristic pentru fiecare gen, variind, de exemplu, ntre 20-100 nucleotide pentru gena propiomelanocortinei (POMC) i pn la 2600 nucleotide pentru gena uteroglobinei. Elementul HRE regleaz frecvena iniierii transcrierii numite enhancer. Efectele fiecrui hormon sunt specifice i afecteaz mai puin de 1% din ARNm i proteinele din celula int. Un anumit hormoan poate induce sinteze de proteine diferite n celule diferite. Efectul hormonului apare evident numai dup un interval de 30 de minute pn la cteva ore, deoarece sinteza de ARN i proteine este un proces de durat. De asemenea, efectul persist i dup scderea concentraiei hormonului circulant ntruct enzimele induse se degradeaz lent. Aciunea hormonilor steroizi poate fi anulat de ctre inhibitori ai biosintezei de ARN i proteine. XVII.4.1.Hormoni glucocorticoizi Glucocorticoizii sunt C21 steroizii sintetizai n zona fasciculat a csr. Caracteristica structural o reprezint existena unei grupri hidroxil sau cetonice n poziia C11.

158

CH2OH CO HO OH O

CH2OH CO OH HO

CH2OH CO

O
cortizol

O
cortizona

O
corticosterona

XVII.4.1.1.

BIOSINTEZA

Principalul hormon, cortizolul, se sintetizeaz de la pregnenolon sau progesteron sub aciunea a trei hidroxilaze care acioneaz secvenial la poziiile C17, C21 i C11. Primele dou hidroxilaze sunt localizate n sistemul reticuloendotelial iar C11-hidroxilaza este o enzim mitocondrial. Cortizona este un produs de oxidare a cortizolului i este considerat metabolit a acestuia. Enzima 11--hidroxisteroid dehidrogenaza responsabil cu oxidarea cortizolului este prezent n suprarenal i mai ales n ficat. Corticosterona are importan mai mic la om dar la roztoare este principalul glucocorticoid. XVII.4.1.2.SECREIA I TRANSPORUL n general hormonii sintetizai nu sunt stocai n celulele csr ci sunt eliberai n plasm. n medie se sintetizeaz 20 mg cortizol pe zi. Cortizolul circul n plasm liber sau legat de o globulin numit transcortin sau corticosteroid binding globulin (CBG). Forma activ a cortizolului o constituie fraciunea liber, nelegat de CBG, care reprezint 8% din totalul cortizolului plasmatic. Secreia cortizolului se face ntr-un ritm diurn n funcie de eliberarea ACTH-ului. Astfel, cortizolul plasmatic crete dup orele 24 i atinge valoare maxim n plasm de aproximativ 15 g/100 ml ntre orele 6 i 8 a.m. Aproximativ 70% din cortizolul secretat este eliberat n acest interval. Dup orele 8 a.m. secreia cortizolului scade gradat atingnd valoare de 6 g% n intervalul de la orele 18-24. n cazuri se stres acest ritm este perturbat nregistrndu-se creteri ale cortizolului plasmatic de peste 28 g%. La aceast concentraie capacitatea de legare a transcortinei este depit i este crescut cortizoulul liber.

159

XVII.4.1.3.REGLAREA SINTEZEI DE GLUCOCORTICOIZI Sinteza de cortizol este controlat de ACTH, care la rndul lui este reglat de ctre factorul de eliberare din hipotalamus (CRH) prin mecanism feed back Scderea concentraiei cortizolului din circulaie stimuleaz eliberarea de CRH care acioneaz asupra celulelor bazofile din hipofiz i determin eliberarea de ACTH din precursorul propiomelanocortin (POMC). La nivelul csr, ACTH-ul stimuleaz colesteroldesmolaza i activeaz astfel sinteza de hormoni. Dup stabilirea nivelului plasmatic de cortizol, eliberarea de CHR scade. Nivelul plasmatic crescut de cortizol liber exercit un efect inhibitor feed - back rapid asupra hipotalamusului i unul lent asupra hipofizei, avnd ca rezultat diminuarea sintezei de cortizol. Eliberarea de ACTH i secreia de cortizol este controlat i de sistemul nervos care stabilete un ritm circodian al eliberrii de CHR i prin urmare de ACTH i cortizol. Acest ciclu are caracteristica eliberrii de hormoni n urin timp de 48 de ore. Secreia de cortizol este afectat i de stresul fizic i emoional. XVII.4.1.4. CATABOLISMUL Glucocorticoizii sunt inactivai n primul rnd n ficat. Metabolizarea se face n funcie de rata sintezei, astfel ca nivelul lor n lichidele biologice s se menin constant. n condiii normale timpul de njumtire a cortizolului este de 90-115 minute. Peste 90% din cortizolul injectat se gsete n urin timp de 48 de ore. Catabolismul cortizolului are loc prin reducerea legturii duble de la C4 cu formare de tetrahidrocortizol care se mai numete urocortozol. Hidroxilul din C3 este apoi conjugat cu acid glucuronic sau sulfat i i astfel este excretat n urin. Dac lanul lateral al tetrahidrocortizolului este scindat oxidativ se formeaz un 17-cetosteroid numit 11-hidroxietiocolanolon. Acest compus se excret sub form de diglucuronid sau sulfat.

160

CH2OH CO HO OH HO

CH2OH CO OH

O
cortizol

HO
tetrahidrocortizol

CH2OH CO O OH HO

CH2OH CO OH

HO
cortizona cortol

CH2OH CO O OH O

CH2OH CO OH

HO
tetrahidrocortizona

HO
cortolona

Alt metabolit important al cortizolului este cortizona care se formeaz prin oxidarea reversibil a hidroxilului din C11 cu formare de ceton. Deoarece enzima 11--hidroxisteroid dehidrogenaza care catalizeaz aceast reacie este rspndit, 2/3 din efectul glucocorticoid al cortizolului

161

se datoreaz cortizonei. De aceea cortizona este considerat un metabolit i nu un compus secretat independent de cortexul adreal. Din schema redat se poate remarca faptul c tetrahidro-cortizolul i tetrahidrocortizona se reduc n continuare la C20. Derivatul din cortizol este numit cortol, iar cel din cortizon se numete cortolon. Ambii se excret n urin ca glucuronizi ca i precursorii lor tetrahidrogenai XVII.4.1.5. FUNCIILE GLUCOCORTICOIZILOR Efecte asupra metabolismului intermediar. Glucocorticoizii acioneaz prin mecanismul general de reglare a transcrierii genelor pentru anumite enzime cu rol n metabolism. Sunt hormoni hiperglicemiani avnd aciune antagonist insuliei. Aciunea metabolic primar a glucocorticoizilor const n stimularea gluconeogenezei la nivelul ficatului avnd ca rezultat creterea glicemiei. Sursa de atomi de carbon pentru acest proces l constituie aminoacizii provenii din catabolismul proteinelor musculare. Glucocorticoizii acioneaz prin inducie de enzime din catabolismul aminoacizilor (alanilamino-transferaza, triptofan oxigenaza, tirozinamino transferaza etc). Creterea sintezei PEPCK, enzim cheie n glucogenez, este stimulat de glucocorticoizi dar i de ctre glucagon prin intermediul AMPc. n timp ce stimuleaz gluconeogeneza, glucocorticoizii inhib glicoliza i favorizeaz glicogenogeneza prin activarea glicogen sintetazei. n esutul adipos activeaz lipoliza i poteneaz efectul lipolitic al adrenalinei, noradrenalinei i al hormonului somatotrop. n anumite regiuni ale corpului (fa, trunchi) stimuleaz lipogeneza (n acest sens exist specificitate de esut). n general n esuturile periferice (muchi, esut adipos i limfoid) au rol catabolic. n aceste esuturi utilizarea glucozei este sczut dar crete catabolismul proteic i lipoliza. Ca urmare cresc acizii grai liberi (AGL) n plasm i scade formarea de glicerin necesar reesterificrii acizilor grai. Creterea AGL n plasm, cuplat cu transformarea lor n corpi cetonici determin apariia cetozei, n special n cazul unui deficit de insulin. La nivelul ficatului glucocorticoizii au efecte anabolice asupra metabolismului proteic i al acizilor nucleici prin stimularea sintezei de enzime specifice. Efectul antiinflamator. Pe aceast proprietate se bazeaz utilizarea lor n terapeutic. n concentraii mari glucocorticoizii produc scderea reaciilor de aprare prin retardarea migrrii leucocitelor n zona
162

traumatizat. Inhib proliferarea fibroblastelor la locul inflamaiei i inhib funcia lor de a produce colagen i fibronectin. n parte, efectul antiinflamator al cortizolului se datoreaz capacitii de a produce scderea sintezei i a secreiei de prostaglandine specifice. Tratamentul cronic cu glucorticoizi favorizeaz apariia ulcerului gastric i a osteoporozei. Rol n rspunsul imun. Cortizolul n concentraii mari inhib formarea de anticorpi, suprim rspunsul imun n caz de infecii, stri alergice i anafilaxie. Distruge leucocitele i produce involuia esutului limfoid, efect ce depinde de specie i de tipul de celul. Datorit acestei proprieti cortizolul este utilizat n tratamentul bolilor autoimune i n doze mari pentru a suprima rejecia de organ. Efectul permisiv. Glucocorticoizii au rol n meninerea presiunii sangvine normale i a debitului cardiac. Aceste efecte nu sunt rezultatul aciunii directe a glucocorticoizilor ci prin favorizarea aciunii altor hormoni cum sunt catecolaminele, prin aa numitul efect permisiv. Acest efect const n faptul c aciunea primar a unui hormon glucocorticoid nu se manifest numai dup ce esutul a fost expus la un hormon de tipul glucagon i adrenalina n gluconeogenez. Rol n adaptarea la stres. n acest proces se interptrund o serie de rspunsuri mediate primar de ctre catecolamine. Multe componente ale rspunsului la stres necesit glucocorticoizi pentru activitatea maxim. Glucocorticoizii sunt direct implicai n rspunsul la stresul acut ocazionat de intervenii chirurgicale sau infecii. n aceste cazuri organismul rspunde printr-o secreie crescut de glucocorticoizi, de cteva ori fa de normal, iar n cazul unui rspuns deficitar se reduce ansa de supravieuire. XVII.4.2.Hormoni mineralocorticoizi Hormonii mineralocorticoizi sunt C21 steroizi secretai de zona glomerular a csr. Reprezentanii mai importani sunt aldosterona i 11dezoxicorticosterona (DOC).

163

O HO CH

CH2OH CO O

CH2OH OH CH CO

O
aldosterona

O
aldosterona (semiacetal)

CH2OH CO

11-dezoxicorticosterol

Cel mai activ mineralocorticoid la om este aldosterona. Ea are o activitate de 1000 de ori mai mare dect cortizolul i corticosterona, care i ei, au o activitate mineralocorticoid slab, i de 35-50 de ori mai activ dect 11-dezoxicorticosterona. Mineralocorticoizii au rolul meninerii echilibrului hidroelectrolitic favoriznd reabsorbia apei, contribuind astfel la reglarea volumului sangvin i la meninerea presiunii arteriale. XVII.4.2.1. BIOSINTEZ Biosinteza hormonilor mineralocorticoizi parcurge etapele comune celorlali hormoni steroizi: colesterol pregnenolon progesteron. Progesterona n continuare este hidroxilat n poziia C 21 i formeaz 11dezoxicorticosterolul. Urmeaz o etap de hidroxilare la C 11 cu formarea corticosterolului, care are activitate glucocorticoid i este un hormon mineral slab. n continuare acioneaz C18-hidroxilaza, enzim localizat exclusiv n zona glomerular i formeaz 18-hidroxicorticosterona. Prin

164

oxidarea OH-ului din C18 la aldehid se formeaz ultimul produs aldosterona. Prin interaciunea OH-ului din C11 cu grupare aldehidic din C18 rezult forma semiacetalic a aldosteronei. XVII.4.2.2. SECREIA, TRANSPORTUL I CATABOLISMUL Zilnic se secret 0,1 - 0,2 g aldosteron. n plasm aldosterona este n concentraie relativ mic de 0,1 g/l i circul liber nelegat de proteine transportoare. DOC-circul legat de transcortin ca i glucocorticoizii. Durata de via a aldosteronei este foarte scurt, de 25 de minute dup care se dezactiveaz. Catabolismul are loc n ficat prin transformarea n derivai tetrahidrogenai care apoi se conjug cu acid glucuronic. Eliminarea urinar a tetrahidroaldosteronei atinge 30-60 g/zi. O HO CH CH2OH CO HO O CH CH2OH CHOH

HO
tetrahidroaldosterona

HO
hexaldosterona

Secreia de aldosteron este crescut n unele boli cum ar fi ciroza hepatic, nefroza, n afeciuni cardiace i n hipertensiune. Creterea secreiei atrage dup sine retenia ionului de sodiului i a apei determinnd apariia edemelor caracteristice acestor boli. n nefrite pierderea renal de ioni de sodiu i ap crete direct sinteza de aldosteron, care determin o eliminare mai mare de ioni se potasiu i de hidrogen. Compuii care blocheaz aciunea aldosteronei sunt substane diuretice folosite n tratamentul edemelor, cum ar fi spironolactona (aldactona).

XVII.4.2.3. REGLAREA SINTEZEI

165

Reglarea sintezei hormonilor minerali este diferit de a glucocorticoizilor. Principalii reglatori sunt sistemul renin-angitensin i ionii de potasiu. Mai particip ionii de sodiu, sistemul nervos i ACTH-ul. Sistemul renin-angitensin. Acest sistem este implicat n reglarea presiunii sangvine i n metabolismul electroliilor. Rolul principal l are angiotensina II, o octapeptid care se formeaz din angiotensinogen, o 2globulin format n ficat, sub aciunea reninei. Renina este o enzim localizat n celulele justaglomerulare ale arteriolelor aferente renale. Aceste celule sunt sensibile la variaia presiunii sangvine i la ali factori fiziologici care acioneaz prin receptorii de volum. Celelalte justaglomerulare sunt sensibile la schimbarea concentraiei de Na+ i Cl- din lichidul tubular (deshidratarea, scderea presiunii sangvine, pierderi de snge) sau scderea concentraiei de NaCl, stimuleaz eliberarea reninei. Sistemul nervos simpatic stimuleaz direct eliberarea reninei independent de factorii menionai, printru-un mecanism ce implic receptori beta-adrenergici. Angiotensinogen
renin (11 aminoacizi)

angiotensin I

(10 aminoacizi)

enzim de transformare

angiotensina II
aminopeptidaz

(8 aminoacizi)

angiotensina III
angiotensinaza

(7 aminoacizi)

produsi de degradare

166

Renina acioneaz asupra substratului angiotensinogen i formeaz o decapeptid, angitensina I. Aceasta sub influena enzimei de conversie n plmn, celulele endoteliale i plasm, se transform n angiotensin II. Angiotensina II este vasoconstrictor puternic al arteriolelor determinnd creterea presiunii sangvine i stimuleaz secreia de aldosteron. Totodat angiotensina II inhib eliberarea reninei. La unele specii angiotensina II se transform n angiotensin III, tot un stimul pentru eliberarea reninei. La om concentraia de angiotensin II este mai mare dect n angiotensin III. Ambele sunt repede inactivate de angiotensinaze. Rolul potasiului. Secreia de aldosteron este sensibil la schimbarea concentraiei potasiului. O cretere mai mic de 0,1 meq/l stimuleaz sinteza i secreia de aldosteron. Hiperkalemia prelungit duce la hipertrofia zonei glomerulare i crete sensibiltatea celulelor glomerulare la ionii de potasiu. Ionul de potasiu acioneaz asupra acelorai etape enzimatice ca i angiotensina II, mecanismele nc nu sunt lmurite. Ca i angiotensina II, ionul de potasiu nu influeneaz biosinteza de cortizol. Rolul ACTH-ului. O scdere brusc a ACTH-ului are un efect minor asupra sintezei de aldosteron, dar deficitul de lung durat poate reduce efectul altor reglatori (angiotensina II, Na+, K+) asupra aldosteronei la alte specii (obolan). Rolul sodiului. Deficitul de Na+ produce scderea sintezei de aldosteron,efect ce este mediat prin sistemul angiotensin-renin. Ionii de sodiu pot influena direct sinteza de aldosteron, dar n acest caz sunt necesare cantiti mari de Na+ i efectele sunt mici i de scurt durat. XVII.4.2.4. MECANISMUL DE ACIUNE A MINERALOCORTICOIZILOR Mecanismul general de aciune a aldosteronei este similar cu a altor steroizi. Celulele int conin receptori specifici n citoplasm i nucleu de care se leag aldosterona. Complexul hormon-receptor se leag de cromatin i reglez transcrierea unor gene specifice. Acest proces are ca rezultat sinteze de ARN i proteine. Mecanismul molecular de aciune a aldosteronei n transportul ionilor de sodiu nu a fost nc elucidat, dar n urma studiilor efectuate se admite c proteinele induse mresc permeabilitatea membranei aplicate pentru ionii de sodiu, prin creterea numrului de canale, ceea ce determin creterea concentraiei de sodiu intracelular. Pe de alt parte aldosterona mrete activitatea unor enzime mitocondriale care contribuie la generarea ATP-ului necesar pentru pompa Na+/K care ndeprteaz sodiu prin membrana seroas.

167

Printre aceste enzime se numr i malat dehidrogenaza, glutamat dehidrogenaza, GOT i citrat sintetaza. XVII.4.3. Hormoni androgeni din csr Acetia sunt steroizi C19 i se formeaz n toate glandele care sintetizeaz steroizi, dar nu sunt secretai dect de glandele suprarenale (zona reticulat). Reprezentanii sunt dehidroepiandrosteron, androsten -dion i 11--hidroxiandrosendion.
O O HO O

HO
dehidroepiandrosterona

O
androsendiona

O
11-beta-hidroxiandrostendiona

Dehidroepiandrosterona se sintetizeaz de la 17--hidroxipregnenolon sulfat iar androstendiona de la 17--hidroxiprogesteron, prin scindarea catenei din poziia 17 sub aciunea 17,20-liazei. Aceast enzim se gsete n csr i gonade i acioneaz exclusiv asupra steroidelor coninnd OH n poziia 17. Sulfatul de dehidroepi-androsteron este cel mai abudent androgen circulant (500 g/l plasm). Este aproape exclusiv de origine suprarenal i se elimin o parte prin urin i o parte se transform n androstendion. Androstendiona este preucursor al testosteronei (n csr, n cantiti mici i n cantiti mari n testicule). 11--Hidroxiandrostendiona se formeaz din androstendion sub aciunea 11--hidroxilazei, enzim mitocondrial localizat n suprarenale. n csr s-au mai izolat cantiti mici de estrogeni. Hormonii sexuali din csr sunt inactivai n ficat prin hidrogenarea dublei legturi i reducerea gruprii cetonice din poziia 3. Dup o prealabil conjugare cu acid glucuronic sunt eliminai prin urin sub form de 17cetosteroizi. Androgenii din csr au rol de stimulare a biosintezei proteice (rol anabolizant) i dezvoltare a caracterelor sexuale secundare. Aciunea lor apare evident n tulburrile funcionale ale glandei, cnd excesul de hormoni se traduce prin sindromul adrenogenital. n acest caz apare fenomenul de

168

virilizare la brbat imasculinizare la femeie. De obicei defectul metabolic const n lipsa C21-hidroxilazei cnd sinteza de gluco i mineralocorticoizi este impietat. XVII.4.4. Hormoni sexuali masculini Hormonii sexuali masculini sunt steroizi C19 sintetizai n celulele interstiiale Leydig din testicule. Cel mai important hormon androgen este testosterona i derivatul su hidrogenat, dihidrotestosterona (DHT). OH OH

O
testosterona

O
dihidrotestosterona

Biosinteza testosteronei pleac de la colesterol pe calea pregnenoloneii a progesteronei. Ca i n sinteza hormonilor din csr prima reacie catalizat este etapa limitant de vitez i este stimulat de gonadotropin LH (ICSH). Transformarea pregnanolonei n testosteron necesit cinci enzime: 3--hidroxisteroid dehidrogenaza, care se gsete n celulele Leydig i catalizeaz etapa cheie de biosintez a testosteronei; 5-4 izomeraza; 17-hidroxilaza; C17- C20-liaza i 17--hidroxisteroid dehidrogenaza. Mai jos este redat schema de secvene de reacii de biosintez a testosteronei. Calea progesteronei 4 (n dreapta) i calea pregnenolonei 5 (stnga)

169

HO

pregnenolon

HO

colesterol

O
progesteron

CH3 CO
3-beta-steroid dehidrogenaza si izomeraza

CH3 CO

HO
pregnenolona 17-alfa-hidroxilaza

O
progesterona 17-alfa-hidroxilaza

170

CH3 CO OH
3-beta-steroid dehidrogenaza si izomeraza

CH3 CO OH

HO
17-alfa-hidroxipregnenolona C17-C20-liaza

O
17-alfa-hidroxiprogesterona C17-C20-liaza

O
3-beta-steroid dehidrogenaza si izomeraza

HO
dehidroandrosterona

O
androstendiona

Enzimele sunt localizate n reticulul endoplasmatic i catalizeaz reaciile din ambele ci. Dihidrotestosterona se formeaz din testosteron prin reducerea legturii din ciclul A sub aciunea 5--reductazei.
OH
NADPH+H+

OH
NADP+

O
testosterona

O
dihidrotestostendiona

Reacia de reducere are loc n testicul i n esuturile periferice. Hormonii androgeni din csr, n special sulfatul de dehidroepiandrosteron din

171

circulaie, reprezint o surs de hormoni sexuali captai de testicul i transformai n testosteron. Testiculele mai secret cantiti mici de hormoni sexuali feminini (11-estradiol) prin aromatozarea ciclului A din testosteron i androstendion. Rolul lor la brbat nu este cunoscut dar creterea concentraiei lor n plasm determin creterea glandelor mamare. Secreia i transportul. Testosterona se secret la adult n cantitate de 5 mg/zi. Ca i ceilali hormoni androgeni, testosterona circul n plasm legat de o -globulin numit sex hormone binding globulin (SHBG). Forma legat a testosteronei reprezint 97-99%, iar restul de 1-3% reprezint fraciunea liber, activ biologic. Metabolismul i excreia. Calea major de metabolizare a androgenilor are loc n ficat i implic oxidarea la poziia 17 cu formare de ceton, reducerea legturii duble din poziia 4 i a cetonei din poziia 3. Rezult, astfel, 17-cetosteroizi, care se conjug la OH din poziia 3 cu acid glucuronic sau sulfat i se elimin prin urin. 17-Cetosteroizii majori sunt androsterona i etiocolanolona. Dozarea 17-cetosteroizilor urinari se utilizeaz pentru determinarea activitii androgenice. La brbai din totalul de 17-cetosteroizi 30% sunt de origine testicular iar restul de origine corticosuprarenal. O alt cale de metabolizare a testosteronei are loc n celula int prin reducere la dihidrotestosteron. Acest metabolit reprezint forma activ a hormonului. Din puncte de vedere cantitativ aceasta este calea minor, deoarece se formeaz numai 400 g DHT/zi, fa de 5 mg/zi testosteron. O O

HO

H
androsterona

HO
etiocolanolona

Reglarea biosintezei. Biosinteza de hormoni este legat de hipofiz prin gonadotropine LH i FSH. LH-ul se leag de receptorii membranei celulare Leydig, activeaz adenilat ciclaza i determin creterea intracelular a AMPc. n urma acestei reacii este stimulat etapa de formare a pregnenolonei din stereogenez. Nu este stabilit dac este vorba de o
172

activare a colesterol desmolazei sau de inducie de enzim, rezultatul const n creterea de sintez de testosteron. Creterea concentraiei de testosteron plasmatic inhib prin proces feed back, att eliberarea de gonadotropine, precum i eliberarea a GnRH (gonadotropin releasing hormone) de ctre hipotalamus. FSH-ul acioneaz prin inducie de receptori pentru LH, mrind astfel rspunsul esutului la hormonul luteinizant (LH). Rolul i mecanismul de reacie. Hormonii androgeni, n primul rnd testosterona i dihidrotestosterona, sunt implicai n diferenierea sexual, spermatogenez, dezvoltarea caracterelor sexuale secundare i comportament la brbat. De asemenea, au un rol anabolizant. Rolul anabolizant se manifest prin dezvoltatea scheletului i musculaturii n perioada pubertii. Caracterele secundare care se dezvolt la brbat sunt ngroarea vocii, creterea brbii, pilozitate corporal i dezvoltarea musculaturii. Inhib dezvoltarea i funcia glandelor mamare i stimuleaz libidoul. Testosterona inhib secreia de LH de ctre glanda hipofiz, probabil indirect, prin reglarea formrii factorului de eliberare i LH de ctre hipotalamus. n organele int acest hormon acioneaz la nivelul nucleului celular influennd sinteza de ARN. Lipsa hormonilor androgeni sau hiposecreia lor sunt nsoite de oprirea creterii organismului, regresul organelor sexuale masculine i de tulburri metabolice. Hipersecreia androgenilor sau administrarea lor produce retenia apei, a ionilor de sodiu, potasiu i calciu, a fosforului i a azotului n organism. Agenii oxidani distrug pruparea OH din poziia 17 a testosteronei, inactivnd-o. Testosterona este utilizat n tratamentul insufiecienei testiculare i ca anabolizant proteic. La femeie se administreaz n hiperfoliculemie, n doze mari are efect masculinizant. XVII.4.5. Hormoni sexuali feminini Ovarul secret dou feluri de hormoni sexuali cu efecte diferite i cu structur diferit: a) hormoni estrogeni sau foliculari i b) hormoni progestageni sau luteali. Ambele clase sunt necesare organismului femel pentru realizarea unui ciclu ovarian complet. Ciclul ovarian (28 zile) este iniiat n faza foliculinic, n care se formeaz unul sau mai muli foliculi (1-14 zi), apoi se rup i elibereaz ovulul (ovulaie). n cursul fazei foliculare celulele foliculului secret hormoni estrogeni. n partea doua a ciclului estral sau faza luteinic
173

(de la ziua 14 la 18) foliculul rupt se transform n corp galben, care secret progesteron. n faza luteic se secret n continuare estrogeni. XVII.4.5.1. HORMONI ESTROGENI Primele cunotiine despre secreia i funciile fiziologice ale ovarului n dezvoltarea i manifestarea caracterelor sexuale primare i secundare dateaz din jurul anului 1895, cnd pe animale castrate s-a efectuat prima transplantare experimental a ovarului. Restabilirea provizorie a structurii i funciilor organelor sexuale dup transplantarea ovarului a dus la concluzia c acest organ secret, probabil, substane active cu efect asupra organelor sexuale. Rspndirea universal a estrogenilor n regnul animal i vegetal subliniaz rolul important a acestor hormoni pentru organismele vii. n prezent se cunoate c funcia de inmulire a mamiferelor femele, care au ajuns la faza de maturare sexual este strns legat de metabolismul a dou grupe de hormoni estrogeni i gestogeni. Hormonii estrogeni acioneaz asupra aparatului genital, determinnd dezvoltarea tractului genital i proliferarea mucoasei uterine influennd direct funciile de perpetuare a speciei. Apariia i meninerea caracterelor sexuale secundare se gsesc sub influena hormonilor estrogeni. Estrogenii influeneaz metabolizarea glucidelor, purinelor i proteinelor activeaz dezoxiribonucleaza i stimuleaz osteogeneza. La nivel celular hormonii estrogeni sunt legai de organitele int, adic n principal, uterul, participnd la sinteza ARN nuclear i la procesul de proteinogenez. La doze mari aceti hormoni provoac oseificarea precoce a cartilajelor, ceea ce are ca urmare ncetinirea creterii. Estrogenii influeneaz metabolismul hidrominaral, determinnd reinerea NaCl i a apei n organism prin creterea resorbiei la nivelul tubilor renali. La animale hormonii estrogeni declaneaz fenomenul cunoscut sub denumirea de oestrus, care se concretizeaz printr-o serie de modificri la nivelul aparatului reproductor femel, nsoite de ovulaie.

174

Colesterol

pregnenolon

17-alfa-hidroxipregnenolon

dehidroepiandroseron

progesteron

17-alfa-hidroxiprogesteron
aromataz

androstendiona

testosteron
aromataz

OH HO
estrona (E1)

OH OH

HO
estradiol (E2)

HO

estriol (E3)

La femei hormonii estrogeni pregtesc mucoasa uterin n vederea aciunii ulterioare a hormonilor gestogeni. Aceti hormoni frneaz secreia de hormon foliculostimulator (FSH) de ctre hipofiz. Binteza. Biosinteza are loc n ovar i alte esuturi (csr, placent, testicul), pe calea general de sintez a steroizilor plecnd de la colesterol. Precursorii direci sunt hormonii androgeni testosterona i androstendiona. Transformarea lor n estrogeni implic trei etape de hidroxilare catalizate de un complex enzimatic aromataza, care conine citocrom P 450 i necesit NADPH i oxigen molecular. Estradiolul se formeaz din testosteron iar estrona din androstendion.
175

Cantiti importante de estrogeni se formeaz prin aromatizarea androgenilor n esuturile periferice. La brbai 80% din estradiol se formeaz pe aceast cale. La femeie n timpul sarcinii 50% din estradiol se formeaz prin aromatizarea sulfatului de dehidroepiandrosteron, iar androstendiona este sursa major de estrogeni la femeie dup menopauz. Aromataza este prezent n celulele adipoase, n ficat, piele i alte esuturi. Creterea activitii acestei enzime poate duce la estrogenizare caracteristic unei boli ca ciroza hepatic, hipertiroidism, obezitate i mbtrnire. Secreia i transportul. Rata secreiei de estrogeni de natur ovarian variaz considerabil n timpul ciclului estral i este legat de rata sintezei lor de ctre ovar. Hormonii sintetizai nu sunt stocai ci secretai pe msur ce se formeaz. Estrogenii sunt transportai n plasm sub form legat de proteine transportoare sex hormon bilding protein sau SHBP, iar progesterona de ctre corticotropin bilding globulin sau CBG. SHBG leag mai puternic estrogenii dect testosterona sau DHT care sunt translocai de aceeai protein; n timp ce progesterona i cortizolul au o afinitate mic pentru acest protein. Estrona dispare mai repede din plasm dect estradiolul i aceasta mai repede dect testosterona. Metabolism i excreie. n ficat estradiolul se metabolizeaz la estriol i se conjug cu acidul glicuronic sau sulfat. Formele conjugate nu se leag de proteine transportoare, sunt solubile n ap, se leag de proteine transportoare, sunt solubile n ap, se excret n bil i se elimin prin fecale i o mic parte prin urin. Catecolestrogenii sunt metabolii majori ai estrogenilor la speciile de mamifere. Ei rezult prin hidroxilarea la poziia 2 a nucleului aromatic. Catecolestrogenii au activitate estrogenic mic i sunt inhibitori competitivi ai metilrii catecolaminelor. Acest fapt ar explica nivelul crescut al catecolaminelor i creterea presiunii sangvine n timpul sarcinii. XVII.4.5.2. HORMONI PROGESTAGENI SAU LUTEALI n anul 1934, din extractele corpului galben - corpus leteum -din placent i din extractele prii corticale a glandelor suprarenale, a fost izolat un hormon cu aciune gestogen - progesterona - denumit i hormon luteal. Progesterona este secretat i de placent n ultima perioad a sarcinii. Ea se mai sintetizeaz n csr i testicul ca precursor al hormonilor, dar nu se secret dect de corpus luteum i de ctre placent. Este transportat n plasm de ctre CBG. Metabolismul are loc n ficat prin transformarea n mai muli

176

compui dintre care cel mai important este pregnandiolona, care se conjug cu acidul glicuronic i se elimin prin urin.
colesterol CO-CH3 CO-CH3

HO

pregnenolona

pregesterona

HO-CH-CH3

pregnandiol-20-glucuronid HO
acid glucuronic pregesterona

Rolul fiziologic al hormonilor ovarieni. Hormonii secretai de ovar au rol n maturarea i meninere a sistemului de reproducere la femeie: 1. Maturarea celulelor geminale, 2. Prepararea mucoasei uterine n vederea implantrii ovulului fecundat, 3. ntreinerea ritmului hormonal necesar ovulaiei, 4. mpreun cu hormonii placentari asigur meinerea sarcinii, 5. Au rol parturiie i lactaie. Estrogenii stimuleaz dezvoltarea esuturilor implicate n reproducere. n general stimuleaz creterea numrului celulelor prin mrirea ratei sintezei de proteine i acizi nucleici. Hormonii estrogeni determin proliferarea i diferenierea epiteliului vaginal, proliferarea endometrului uterin, motilitatea miometrului, dezvoltarea canalelor lactofore din glandele mamare. Estradiolul are efect anabolizant asupra osului i a cartilagiilor. Are efect vasodilatator periferic i de disipare a energiei calorice. Hormonii progestageni se secret dup ovulaie i n general necesit pentru aciunea lor aciunea anterioar sau concomitent a estrogenilor. Astfel, cele dou clase de hormoni, de obicei, acioneaz sinergic dei uneori sunt antagoniti. Progestagenii reduc aciunea de proliferare a estrogenilor
177

asupra epiteliului vaginal i uterin. Mresc funcia secretoare a epiteliului uterin n vederea implantrii ovulului fecundat i reduc motilitatea uterului. Stimuleaz dezvoltarea glandelor mamare n vederea secreiei de lapte. Progesterona micoreaz fluxul sangvin periferic, scade disiparea cldurii, astfel c temperatura corpului crete n faza luteal a ciclului estral. Creterea temperaturii este considerat un indicator al ovulaiei. Ciclul estral. Ciclul estral este rezultatul unei interaciuni complexe ntre hipotalamus, hipofiz i ovar. Ciclul normal are o durat medie de 28 de zile i cuprinde dou faze: faza foliculinic i faza luteal. Faza foliculinic. n faza foliculinic (de la 1- 15 zi) sub aciunea CSH se dezvolt un folicul care ncepe s secrete estradiol (E 2). n prima sptmn nivelul estradiolului este sczut, apoi crete progresiv i atinge un maxim cu 24 de ore nainte ca LH (FSH) s ating nivelul maxim. LH-ul este eliberat ca rspuns la nivelul crescut de estradiol prin mecanism feed back pozitiv sau ca rspuns la scderea brusc a E 2 de la nivelul maxim. n aceast faz nivelul progesteronei este foarte sczut. Maximul atins de LH anun sfritul fazei foliculare i precede ovulaia cu 16-18 ore. Faza luteal. Dup ovulaie foliculul rupt formeaz o structur numit corp galben care ncepe s secrete progesterona i puin estradiol. Estradiolul crete pna la mijlocul fazei luteale dup care scade foarte mult. Hormonul major al acestei faze este progesterona care este necesar pentru prepararea i meninerea n stare de secreie a endometrului necesar pentru hrnirea blastocitului implantat. LH-ul este necesar pentru meninerea corpului galben i se secret aproximatin 10 zile. Dac implantarea ovulului fecundat n ziua 22-24 a avut loc, funcia LH-ului este preluat de gonadotropina corionic, un hormon secretat de placent i foarte asemntor cu LH. Gonadotropina corionic menine sinteza de progesteron de ctre corpul galben pn cnd placenta ncepe s secrete cantiti mari de progesteron. Dac ovului nu a fost implantat corpus luteum regreseaz i are loc menstra, dup care ncepe un nou ciclu. Faza luteal dureaz aproximativ 14 zile. Mecanismul de aciune al hormonilor ovarieni. Estrogenii i progesterona i exercit efectele majore prin capacitatea lor de a se combina cu receptorii intracelulari care apoi se leag de regiuni specifice ale cromatinei sau AND i produc modificri ale ratei transcrierii genelor specifice. Rezultatul const n creterea sintezei de proteine specifice n esuturile int. Faptul c hormonii steroizi se combin cu receptori specifici a reieit prima dat din lucrrile lui E. V. Jensen asupra aciunii estrogenilor. Ei au

178

urmrit soarta unor cantiti foarte mici de estradiol radioactiv injectat la animalele femele imature. Hormonul marcat s-a localizat n uter i vagin, inta aciunii estrogenilor, dar nu a suferit nici o modificare chimic. Captarea estrogenului marcat s-a produs paralel cu detectarea primelor efecte hormonale ale estrogenilor asupra acestor inte. Incubarea unor cantiti mici de estradiol marcat cu esutul uterin intact sau cu omogenate de uter arat c hormonul s-a legat la dou fracii celulare: citosolic i nuclear. n fracia solubil a citosolului, estradiolul se leag de o protein specific de legare a estrogenilor, care se sedimenteaz la 4S. Estrogenul marcat gsit n fracia nuclear a fost localizat n cromatin. n esuturile care nu rspund la hormoni nu s-au gsit receptori pentru estrogeni. Studiile efectuate au artat c proteina receptoare de estrogeni liberi se ntlnete, n mod normal, n citosol sub o form care sedimenteaz la 4S i are tendina de a forma dimeri atunci cnd este izolat. Dup legarea estrogenului, receptorul 4S se transform ntr-o form ce sedimenteaz la 5S. complexul estrogen-receptor 5S se ndreapt apoi spre nucleul celulei, unde se leag de cromatin. Prin studii similare au fost gsii receptori proteici pentru ali hormoni steroizi, printre care receptorii pentr androgenii din prostat i pentru hormonii corticosuprarenali. B. W. OMalley a gsit receptori specifici pentru progesterona din esutul oviduct la pui, realiznd un studiu revelator asupra ciunii acestui hormon. Legarea progesteronei este urmat de translocarea complexului receptor progesteron din citosol n nucleu. Complexul receptor progesteron se leag de cromatin, producnd o cretere a activitii ARN polimerazei ADN dependete i a formrii ARN mesager care codific unele proteine sintetizate de ctre oviduct n cantiti mai mari, ca ovalbumina i ovidina.

179