Lipazele-clasificare, mecanism de aciune, factori care influeneaza activitatea catalitic

n ultimii ani lipazele au fost intens folosite ca biocatalizatori pentru o diversitate de reacii ce se desfoar n sistem folosind solveni organici cum ar fi de exemplu sinteza esterilor i modificarea lipidelor.ntr-un sistem apos aceti biocatalizatori sunt capabili s catalizeze hidroliza triacilglicerolilor cu formare de acizi grai i glicerol, compui foarte importani n industria chimic. Hidroliza catalizat de lipaz a trioleinei a fost deasemeni folosit pentru producerea de mono- i di-gliceride cu utilizare larg n calitate de emulgatori n industria alimentar i chimic. proximativ !"# din enzimele produse in $uropa, incluz%nd i lipazele au aciune hidrolitic. &olul biologic al lipazelor pentru organismele vii' -asigur funcionarea membranelor( -particip la metabolismul lipidic( -particip la procesul de depozitare a grsimilor de rezerv. )ipazele sunt enzime cu rsp%ndire larg care s-au izolat dintr-o varietate de surse' animale, vegetale i microbiene, fiind cunoscute i lipaze produse de archaea. )ipazele de diferite proveniene se deosebesc ntre ele sub aspectul proprietilor i caracterului aciunii. )ipazele microbiene prezint un potenial uria n domeniul tehnologiilor alimentare, al tiinelor medicale i n industria chimic, deoarece' *+ au specificitate larg de substrat( ,+ nu necesit cofactori. -+ sunt stabile n solveni organici( 1.1. Lipazele: membre ale familiei de /-hidrolaze Hidrolazele sunt enzime care catalizeaz reacia de scindare a moleculelor cu fixarea componentelor apei la produsele rezultate, dupa reacia general'

R-R' + HOH R-H + R' OH .in aceast clas fac parte enzimele care hidrolizeaz proteinele p%n la aminoacizi, polizaharidele p%n la monzaharide i lipidele p%n la acizi grai i glicerol. &eaciile catalizate de hidrolaze se produc cu modificri enrgetice mici, cu dega/are de energie liber mic, deci ele nu constituie o surs energetic important pentru organism. Hidrolazele au totui un rol deosebit in metabolismul substanelor aduse cu alimentaia deoarece ele descompun moleculele mari care intr n compoziia alimentelor, n molecule uor de asimilat. n general reaciile de hidroliz enzimatic sunt reversibile, iar principalele legturi chimice care pot fi scindate sunt ' legatura ester, legatura glicozidic, legatura peptidic. 0lasa hidrolaze 1$.0. -.x.x.x+ conine un numr mare de diferite enzime' acetilcolinesteraze 1$.0. -.*.*.!+, amidaze 1$.0. -.".*.x+, amilaze 1$.0. -.,.x.2+, carboxilesteraze 1$.0. -.*.*.*+, celulaze 1$.0. -.,.*.3+, esteraze 1$.0. -.*.x.x+, lipaze 1$.0. -.*.*.-+, serin-proteaze 1$.0. -.3.*4 5 -.3.,*+ etc. 0omun tuturor lipazelor i esterazelor este faptul ca ele prezint o structur 678, adic 9 structuri paralele n 8-foaie pliat sunt ncon/urate de 6-helixuri.

Fi !. Structura / hidrolaz a lipazelor. Enzima hidrolizeaz esterii la interfaa lipideap, n ap accesul la situsul serinic,reprezentat cu albastru, fiind blocat de un helix colorat cu !erde".

Fi "# #ipaza acion$nd la interfaa creat de substrat% helixul reprezentat cu portocaliu se rote&te permiand substratului colorat cu 'alben" ata&area la situsul acti!.

Fi $. (oziia helixului n enzima liber colorat cu !erde "&i in complexul enzimsubstrat colorat cu portocaliu" Hidrolazele sunt capabile s catalizeze reversibil hidroliza legturilor covalente iar lipazele hidrolizeaz legturi ester, cum sint cele din triacilgliceroli.)ipazele scindeaza toi cei trei acizi grai ai gliceridei, nsa nu simultan, ci succesiv, fapt foarte important pentru procesul de absorbie a lipidelor. )ipazele mai catalizeaz i alte tipuri de reacii, cu importan industrial' ntr-un mediu lipsit de ap, esterificarea acizilor carboxilici cu un alcool 1reacie de esterificare+ sau cu un rest alcool al unui ester secundar 1reacie de interesterificare+. ntr-o reacie de interesterificare, n absena apei, poate avea loc i transferul unui rest acil al unui ester pe un alt ester. ntr-o reacie de transesterificare, un rest acil este transferat fie pe un alcool 1alcooliz+, fie pe un acid 1acidoliz+. ciunea lipazelor are o mare importana pentru pstrarea alimentelor, mai ales a celor ce conin cantitti mari de lipide. :rin aciunea acestor enzime, n timpul depozitrii

produselor alimentare se produce o rapid descompunere a gliceridelor in acizi grai i glicerol, ceea ce conduce la o cretere a aciditii produselor i la deprecierea lor calitativ. )ipazele catalizeaz hidroliza triacilglicerolilor p%n la glicerol i acizi grai. 0ontrar esterazelor lipazele sunt activate numai c%nd sund adsorbite la interfaa ulei-apa, i nu hidrolizeaz substraturile dizolvate n interiorul lichidului. n urma procesului de emulsionare lipaza separ esterii glicerinei de acizii grai cu lan lung precum trioleina si tripalmitina. )ipazele au o activitate mic n soluiile apoase care conin substraturi solubile. n contrast, esterazele arat o cinetic normal ;ichaelis-;enten n soluii apoase. &eacia de scindare hidrolitic a esterilor nu este cantitativ, starea de echilibru se atinge n prezena catalizatorilor din ambele direcii. &eacia de hidroliz are loc, n cea mai mare parte n faza omogen gras. Hidroliza care se petrece la interfaa grsime-ap este redus. <iteza de hidroliz este cu atat mai mare cu c%t cantitatea de ap n faza gras este mai mare. =olubilitatea apei este redus n grsimea neutr, n schimb este mult mai mare n acizii grai. .in acest motiv, n cazul grsimilor neutre, viteza de hidroliza la nceput este mai mic i apoi crete rapid, pe masur ce apar acizi grai liberi, atinge o valoare maxim de alcool i apoi scade, scz%nd i concentraia grsimii nehidrolizate. =ubstanele detergente care mresc solubilitatea apei n faza gras accelereaz i procesul de hidroliz. :roporia dintre componente' ester, alcool, acid i ap la starea de echilibru este dat de legea aciunii maselor. n prezena unei cantitti mari de ap, n cazul hidrolizei grsimilor, glicerina, fiind uor solubil n ap, va trece n cea mai mare parte n faza apoas i echilibrul se va deplasa spre faza apoas. n prezena unei cantiti mici de ap, echilibrul se va deplasa spre sintez. )a eucariote lipazele sunt implicate n diferite etape ale metabolismului lipidic incluz%nd' digestia grsimilor, absorbia, reconstituirea i metabolismul lipoproteinelor. >aptul c lipazele i lipidele interacioneaz la interfaa nu este nc pe deplin clar i reprezint un subiect de investigare intens. 0ercetarile privind lipazele sunt concentrate n special pe caracterizarea structural, elucidarea mecanismului de aciune, cinetic, secvenierea i clonarea genelor de lipaz. n comparaie cu acest efort o mic parte a

cercetrilor s-a realizat prin dezvoltarea sistemelor de producere a lipazelor de uz comercial in bioreactoare. 1.2. Specificitatea lipazelor )ipazele manifest diferite specificiti fa de grsimi7uleiuri. =pecificitatea lipazelor poate fi clasificat n " tipuri 1conform &ogals?a, citat de :feffer, ,@@9+' *+ specificitate de substrat Ariacilgliceridele nu reprezint unicul substrat pentru lipaze' diacilgliceridele, monoacilgliceridele i fosfolipidele pot fi, de asemenea, hidrolizate. Bnele lipaze manifest preferin pentru anumii acilgliceroli. )ipaza din (enicilium camembertii, de exemplu, manifest o activitate catalitic mai mare fa de mono- i diacilgliceroli, dar nu i fa de triacilgliceroli. ,+&egiospecificitate 1specificitate regionala+.

Fi %# )eactii posibile catalizate de lipaza )ipazele au capacitatea de a face distincie ntre poziiile *, , sau - ale gliceridelor, astfel' lipazele cu specificitate *,- 1cunoscute ca lipaze specifice sn*,-+, cum sunt cele secretate de )hizopus or*zae i )hizomucor miehei, hidrolizeaz preferenial legturile esterice din poziiile * i -, n timp ce lipazele cu specificitate pentru poziia , 1lipaze specifice sn,+, produse de +andida antarctica, +andida parapsilosis sunt puin numeroase i manifest preferin pentru poziia ,. -+ )ipaze nespecifice Bnele lipaze nu prezint nici specificitate de substrat nici stereospecificitate. enzime hidrolizeaz orice legtur esteric. ru'osa i (seudomonas cepacia. 3+ )ipaze acil-specifice Bnele lipaze prezint specificitate pentru anumii acizi grai, aa cum este cazul lipazei din ,eotrichum candidum, care prezint o specificitate strict pentru acizii grai nesaturai cu dubla legtur n CD 1de ex. acidul oleic+. lte lipaze ce aparin acestui grup prezint specificitate nalt fa de acizii grai cu lan scurt, aa cum este cazul lipazelor din (enicillium ro-uefortii. "+)ipaze stereospecifice ceste lipaze pot face distincia ntre poziiile * i - ale trigliceridelor, exemple fiind lipaza lingual uman i unele lipaze produse de (seudomonas fluorescens i .umicola lan'uinosa 1:feffer, ,@@9+. ceste

stfel de lipaze sunt produse de +andida

1.3 Grsimile i lei rile ca s bstrat ri ale lipazelor Ersimile i uleiurile se deosebesc, n primul r%nd, prin starea de agregare' solide, semisolide sau lichide, mai mult sau mai puin v%scoase. $le au origine vegetal sau animal, fiind constituite n special din triacilgliceroli ai acizilor grai cu numr par de atomi de carbon. :rin grsimi se neleg produsele solide sau semisolide la ,@F0, n timp ce uleiurile sunt lichide. Aoate sunt nemiscibile cu apa i au o densitate mai mic dec%t

aceasta. :roprietile fizice ale grsimilor i uleiurilor sunt determinate de lungimea lanului acizilor grai constitueni i de numrul dublelor legturi din acetia. cizii grai saturai cu lan lung prezint un punct de topire mai ridicat dec%t acizii grai nesaturai, cu lan scurt. )ipidele vegetale sunt, de regul, bogate n acizi grai nesaturai, exclusiv cu numr par de atomi de carbon, n care dublele legturi au configuraia cis. 0ei mai comuni acizi grai prezeni n gliceride sunt acidul dodecanoic 1lauric+, acidul tetradecanoic 1miristic+, acidul octadecanoic 1stearic+, acidul hexadecanoic 1palmitic+ i acidul oleic 1Aabelul *+. &a'elul ! +ompoziia n acizi 'ra&i a celor mai importante 'rsimi &i uleiuri !e'etale, / 1dup :feffer, ,@@9+ (rsimi)uleieuri !*+* Blei de rapi Blei de floareasoarelui Ersime de cocos Blei din semine de palmier Blei de palmier Blei de soia , 3, *@ " 3* 3* *@ -4 * " "@ *" ! , *" * ! 39 *! D , ! * !"+* !%+* @," !,+* 3 4 !-+* * 3 !-+! 4@ ,9 !-+" ,@ 4* !-+$ D "*+! , ""+! , -

n ultimii 4@ de ani, producia de grsimi i uleiuri s-a dublat 1,@@47@! mai mult de *@@ milioane tone+ 1Aabelul ,+. crescut, n special, producia de ulei de rapi 10rassica napus oleifera+, ulei de soia 1,l*cine max+, grsime de palmier i ulei de floarea-soarelui 1.elianthus annuus+, n timp ce cantitatea de ulei de pete a sczut.

&a'elul "

(roducia mondial de uleiuri &i 'rsimi milioane tone" in di!erse perioade pentru perioada 1223-1224, datele reprezint predicia" 1dup :feffer, ,@@9+ .lei) rsime =oia :almier =emine oleaginoase Ersimi animale &api ;sline Guc de cocos ltele &otal !/0--!/-" *,,3 3," *@,! **,, -,D !,-,3 ,,9 1,," !/-,-!//* *",D,* *3,4 **,D !," 9,3,3,4 01,, "**$-"**0 ,-,@ ,-,@ *",! *",! 9,3 9,3 !,-,@ !*%,1

Ersimile i uleiurile sunt importante componente ale produselor alimentare. <alorile nutriionale i senzoriale precum i proprietile fizice ale trigliceridelor sunt mult influenate de factori ca' poziia la care se leag acizii grai la molecula de glicerol, de lungimea lanului moleculei de acid gras i gradul de nesaturare. )ipazele permit modificarea proprietilor lipidelor prin modificarea poziiei legrii acizilor grai n molecula de glicerol i nlocuirea unuia sau mai multor acizi grai cu alii noi. n acest fel lipidele relativ ieftine pot a/unge la valori mai ridicate i cu proprieti mbuntite. Bntul de cacao, o grsime de valoare ridicat, conine acid stearic i acid palmitic i are un punct de topire de aproximativ -!H0. Aehnologiile care se bazeaz pe mecanismul de aciune al lipazelor incluz%nd hidroliza mixt i reacii de sintez sunt utilizate n comer pentru a mbunti unele proprieti nedorite ale grsimilor cu cele ale substituienilor din untul de cacao. I versiune a acestui proces utilizeaz lipaza imobilizat pe )hizomucor miehei n reacia de transesterificare unde nlocuiete acidul palmitic din untul de palmier n acid stearic. Bnele studii descriu un tip de lipaz ce catalizeaz procesele de interesterificare a grsimii din unt i care are drept rezultat o scdere considerabil a lanului de acizi grai saturai.

.intre gsimile vegetale, cele mai utilizate sunt uleiul de palmier, uleiul de soia, uleiul de rapi, uleiul de floarea soarelui, untul de arahide, untul de cacao, uleiul de msline, uleiul de bumbac. 0onsumul total de grsimi vegetale a fost de **9 milioane tone n ,@@*, la nivel mondial. n unele ri din sud-estul siei, precum ;alaiezia i Jndonezia, exist culturi extinse de palmieri din care se produce uleiul. n lume, numai n anul ,@@*, s-a produs aproximativ ,- milioane tone de ulei de palmier, din care ;alaiezia a furnizat *, milioane tone 1",#+. Elicerolul i acizii grai se obin din grsimi prin hidroliz chimic sau catalizat de lipaze. Elicerolul este materie prim pentru obinerea nitroglicerinei i oxidului de propilen, n timp ce acizii grai sunt transformai n metil-esteri, care sunt utilizai drept carburani, i n amide, alcooli i diveri reactivi chimici 1Kamane, ,@@,+.. Iamenii consum i grsimi animale, precum ulei de pete, unt, untur, seu etc. n *DD9, la nivel mondial, s-au consumat aproximativ *9 milioane tone grsime animal, ceea ce reprezint doar o cantitate mic n comparaie cu uleiurile vegetale. :rintre uleiurile comestibile, cele din pete sunt unice prin coninutul de acizi grai polinesaturai din categoria L--, care sunt eseniali pentru om 1acizii eicosapentaenoic i docosahexaenoic+. >osfolipidele au i ele o importan nutriional i tehnologic mare. :rincipalele surse de fosfolipide sunt licitina din soia i lecitina din glbenuul de ou. :roducia anual de lecitin din soia i glbenu a fost, n Maponia, n ,@@*, de 4"@@ tone, respectiv ,"@ tone. >osfolipidele, dei utilizate actualmente mai mult ca emulgatori n industria alimentar i cea cosmetic, prezint potenial ridicat ca nutraceutice. )ipazele sunt responsabile, n primul r%nd, de hidroliza acilglicerolilor. u

rsp%ndire larg i sunt indispensabili pentru degradarea triacilglicerolilor n natur. :e l%ng semnificaia lor bilogic, lipazele manifest un potenial excelent pentru biotehnologii. ceste enzime posed proprietatea unic de a aciona la interfaa apoas i ctivitatea catalitic a lipazelor depinde, n mare neapoas, disting%ndu-se de esteraze.

msur, de starea de agregare a substratelor. =tudiile experimentale au artat c activarea implic demascarea centrului activ i modificri conformaionale, care necesit prezena picturilor de ulei n ap. =tudii recente asupra structurii unor lipaze au evideniat unele

aspecte privind activitatea hidrolitic, activarea la interfa i stereoselectivitatea lipazelor. $nzime precum proteazele i carbohidrazele sunt folosite pe scar larga, la nivel industrial. .ei, actualmente, lipazele reprezint "# din piaa enzimelor, potenialul lor va crete spectaculos datorit aplicaiilor din ce n ce mai numeroase.