LPs - REACTII DB IDENTI FICARE A AMINO ACIZTLOR SI PROTETNELOR

REACTTI DE TDENTIFICARE A AMTNOACIZTLOR

Cunoasterea proprietatilor chinrice ale anrinoacizilor prezinta o cleosebita iprpor.tarrta in cSipria
proteinelor. fiind utilizate in
- identiflcarea si anzrliza aurinoercizilor clin hiclrolizatele proteice;
- iderrtificarea secventei cle anrinoacizi clin hidrolizatele nroteice:
- identifical'ea festLlrilol cle alttirtoacizi speciticc proteinelor native care slut eserrtiale Dclltrll fglctia
lor biologica
- modificarea clrimica a resturilttr cle amiuoacizi clin molecr-rla ploteica pentlr a procluce sc6iprbari
in activitatea lor biologica sau in alte ;rroprietati
- sinteza chirnica a polipepticlelor.
1. Reactii ale grup:rrii functionale amino (-NHz)
1.1. Reactia cu

ninhidina:
Principiu: o-aminoacizii fbrmeaza cLr ninhidrina conipusi colorati in albastru-violet. Exceptie fac
prolina si hidroxiprolina (iminoacizi) czrre dau Lln colnplrs galben. respective portocalir-r.
Reactia are loc in n-rai rnulte etape. Ninhidrina este un agent cle oxidare care cletermina clecarboxilarea
oxidative a u.-aminoacizilor. cu producerea de COu. NI-l1 si a unei atdehicle cu I atom cle C mai putin

decat aminoacidul. Nir-rhidrirra redusa, cu rrinhidrina oxiclata si cu NH3 eliberat formeaza un compus cle
culoare albastru-violet.
Reactia este fbarte sensibila si poate fl Lrtilizata pentru estimarea cantitativa a unor caltitati foarte
'rici
de aminoacizi.
Modul de lucru: I m[ solutie alanina sar-r glicocol + I ml solr-rtie ninhiclripai se frerbe 1-2 ninute
Rezultat: se constata aparitia unei culori albastru-violet.

l.2.Dezaminarea cu acid azotos

Principiu: aminoacizii se dezamineaza relative usor prin reatia lor cu HNO2 care se obtile i1 mediul
reactie dintr-o sare a sa si HCI. punand in libertateN2 si generarrd [-ridroxiacizi.
NaNO: + FICI --' NaCl + HNOz
R-CI-I-COOH + FINOz ---+ R-CH-COOI{ + N, + IIrO

cle

ll

NHz

OFI
Aceasta reactie fiind stoechiometrica esteutilizata pentru dozatea gruparilor -NH2 dil arninoacizi si
proteine. prin masutarea gaz-volumetrica a azotultri eliberat (metocla van Slvke).
Modul de luclu:
l-2 mI solutie glicocol + 1-2 r-nl solutie NaNOI 5oA + 1 ml solutie ra'Flr{,:{ X)t-l; se ipcalzeste Llsor.
Rezultat: se observa dega.iare cle N2.

2. Reactii datorate p:rrticiparii concomitente a ambelor grupari functionale

-NH2 si -COOH
2.1. Formarea de saruri interne (chelati)
Principiu: o,-aminoacizii reactioueaza aLt sarurile cle Cu si in gener"al cu sarurile metalelor grele (C1,
Co. Mn) formand combinatii clenumite saruri interne (ctrerlati). pe baza electr:olilor neparticipanti de la

atomul deN din grltparea-NFI:. Aceste combinatii conrplexe sr-urt

stabile. Llsor solubile si colorare
baza acestei proprietati se fbrrneaza lreteloll'oteiclele cle iipLrt
metalproteiclelor si cromoproteiclelor).
lvtoctul de lucru:
l-2ml solutieglicocol *catevapiczrtr-rri clesolutieclcCuSO+ 10o/o+ lnrl soluticNaOFI
l0%
Rezr-rltat: se lbrnreaza o coloratie alb:rstrzr.

1pe

3. Reactii specifice c:rtenelor laterale (-R)

Sr-'rt datorate altor grupari existerrte irr raclicalut tegat cle co"..
Sr'ult reactii utile pentrr-r identiflcarea anrinoaciziloisi determinarea
cantitativa a a.umitor grupzrri.
Re:rctia xantoproteica
Prir-rcipiLr: amitroacizii cr-t caracter aronratic pot fi nitrati
prin incalzire cu FINo.r concentrat,
transfbrniandu-se in nitroderivatii corespunzatori. cle culoare galbepa.
Reactia este clata mai uor cie
tirozina si mai greu de ibnilalanir-ra. triptolan satr histiclina.
ModLrl de lucru:
l-2 rnl solutie tirozina + I ml solutie I-lNO:collcentrat; se incalzeste la fierbere pana
apare o coloratie
galbena; dupa racire se alcalinizeaza iar coloratia se intensiflc:r.
3. 1.

3.2.

Principiu: Prin incalzi5e

in nrecliu puternic alcalin. S clin tioamirroacizi (cisteina. metioni'a) este

eliberat sub forma de S'-. ce t'eacliotleaza cu (CFl3Coo)uPb formancl
un precipitat negru-brun de pbS.
Modul de lucru:
l-2 ml solutie cisteina + I ml solutie Naol{ 10o/o + 1 ml solr,rtie (cH.rcoo)zpb;
se fierbe careva
tlllllute
Rezultat: precipitat negru-brun cte pbS
REACTII DE TDEI\TIFICARE A PROTEINELOR

l.

Reactia de culoare a proteinelor - Reactia biuretrlui

Principiu: in medir-r alcalin si in prezenta ionilor de Cu2n proteinele formeaza
o coloratie albastruvioleta datorita legaturilor pepticlice. Producerea acestei leactii necesita
existenta a cel pr-rtin 2 legatr-rri
peptidice, iar nuanta cr-rlorii depiride cle nunrarul acestor legatr-rri.
Reactia biuretul*i' se bazeaza pe
formarea unor conlpr-rsi de tip "chelati" intre Iesarura pepridlca si iopr-rl
a. C,.,i;, in;.;;,;;ulotii
fiind proportior-rala cLr concentratia protei'eror ctin soIr-rtie.
Biurettrl este compusul organic cel rnai simplu care cla reactia biuretuh-ri
clatorita existentei celor 2
legaturi pc;r1 irl icg din structura.
Modulde lucru: 1 ml solutie ovalbumina * I ml reactiv biuret :> o coloratie violet.

2' Reactia cu ninhidrina - proteirrele reactionezrza cu ninhiclrina si for.meaza compusi colorati

albastru-violet.

3'

in

Reactia xantoproteica - proteinele reaction eaza cLL aciclul azotic concentrate si

- i' cauzul
prezeutei arninoacizilor arotnatici in structura lor
clirT reactie rezulta nitroderivatii aro'ratici
corespunzatori, solutiile avand o color.atie galbena.
Modul de lucru: I ml solutie ovalbuuriua * 1 ml so[. Acicl azotic corlcentra:> o coloratie galbe*a