LP 7.

REACŢII DE IDENTIFICARE A AMINOACIZILOR

7.1. Aminoacizi: considerații generale şi componente structurale

• Sunt compuşi organici cu funcţiune mixtă; ei au cel puţin o grupã amino (–NH2) şi una carboxil (–COOH) şi
au importanţă fiziologică.
• Ĩn funcţie de poziţia C de care este legată gruparea –NH2 raportat la gruparea –COOH, ei se clasifică în α-, β-
, γ- aminoacizi.
• Aminoacizii se clasifică în:
 proteogenici – intră in structura protidelor
 nonproteogenici – nu sunt încorporaţi în protide
Datoritã structurii lor, aminoacizii prezintã urmãtoarele tipuri de reacții:
A. reacții ale grupei funcționale amino
B. reacții ale grupei funcționale carboxil
C. reacții comune ambelor grupe funcționale
D. reacții specifice celorlalte grupe funcționale sau radicalilor din catenele laterale
Cunoasterea proprietãților chimice ale aminoacizilor prezintã o deosebitã importanțã ĩn chimia proteinelor, fiind
utilizate ĩn:
 identificarea şi analiza aminoacizilor din hidrolizatele proteice;
 identificarea secventei de aminoacizi din hidrolizatele proteice;
 identificarea resturilor de aminoacizi specifice proteinelor native care sunt esențiale pentru funcția lor
biologicã;
 modificarea chimicã a resturilor de aminoacizi din molecula proteicã pentru a produce schimbãri ĩn activitatea
lor biologicã sau ĩn alte proprietãți;
 sinteza chimicã a polipeptidelor.

A. Reacții ale grupei funcționale amino (-NH2)

1.Reacția cu ninhidina:
Principiu: α-aminoacizii formeazã cu ninhidrina compuşi colorați ĩn albastru-violet. Excepție fac prolina şi
hidroxiprolina (iminoacizi) care dau un compus galben, respectiv, portocaliu.
Reacția are loc ĩn mai multe etape. Ninhidrina este un agent de oxidare care determinã decarboxilarea oxidativã a α-
aminoacizilor, cu producerea de CO2, NH3 şi a unei aldehide cu un atom de C mai puțin decât aminoacidul. Ninhidrina
redusã, cu ninhidrina oxidatã şi cu NH3 eliberat formeazã un compus de culoare albastru-violet.
Reacția este foarte sensibilã şi poate fi utilizatã pentru estimarea cantitativã a unor cantitãți foarte mici de aminoacizi.
Mod de lucru: 1 ml soluție alaninã sau glicocol + 1 ml soluție ninhidrinã; amestecul se fierbe 1-2 minute.
Rezultat: se constatã apariția unei culori albastru-violet.

2.Dezaminarea cu acid azotos

Principiu: alfa-aminoacizii se dezamineazã relativ usor prin reacția lor cu HNO2 care se obține ĩn mediul de reacție
dintr-o sare a sa şi HCl, punând in libertateN2 şi generând hidroxiacizi.
NaNO2 + HCl → NaCl + HNO2

R-CH-COOH + HNO2 → R-CH-COOH + N2 + H2O

│ │
NH2 OH
Aceastã reacție fiind stoechiometricã este utilizatã pentru dozarea grupelor -NH2 din aminoacizi şi proteine, prin
mãsurarea gaz-volumetricã a azotului eliberat (metoda van Slyke).

Modul de lucru:
1-2 ml soluție glicocol + 1-2 ml soluție NaNO2 5% + 1 ml soluție CH3COOH; amestecul se ĩncãlzeşte uşor.
Rezultat: se observã degajare de N2.
1
C. Reacții datorate participarii concomitente a ambelor grupe funcționale –NH2 şi –COOH

1. Formarea de sãruri interne (chelați)

Principiu: α-aminoacizii reacționeazã cu sãrurile de Cu şi, ĩn general, cu sãrurile metalelor grele (Cr, Co, Mn), formând
combinații denumite sãruri interne (chelați), pe baza electronilor neparticipanți de la atomul de azot din grupa –NH2.
Aceste combinații complexe sunt stabile, usor solubile şi colorate (pe baza acestei proprietãți se formeazã
heteroproteidele de tipul metalproteidelor şi cromoproteidelor).
Mod de lucru:
1-2 ml soluție glicocol + câteva picãturi de soluție de CuSO4 10% + 1 ml soluție NaOH 10%
Rezultat: se formeazã o colorație albastrã.

D. Reacții specifice catenelor laterale (-R)

Aceste reacții se datoreazã altor grupe existente ĩn radicalul legat de atomul de carbon din poziția alfa fațã de grupa
carboxil şi sunt reacții utile pentru identificarea aminoacizilor şi determinarea cantitativã a anumitor grupe funcționale.

1. Reacția xantoproteicã
Principiu: aminoacizii cu caracter aromatic pot fi nitrați, prin ĩncãlzire cu HNO3 concentrat, transformându-se ĩn
nitroderivații corespunzãtori, de culoare galbenã. Reacția este datã mai uşor de tirozinã si mai greu de fenilalaninã,
triptofan sau histidinã.
Mod de lucru:
1-2 ml soluție tirozinã + 1 ml soluție HNO3concentrat; amestecul se ĩncãlzeşte la fierbere pânã când apare o colorație
galbenã; dupã rãcire, amestecul se alcalinizeazã, iar colorația se intensificã.

2. Recunoasterea aminoacizilor cu sulf

Principiu: Prin incãlzire, ĩn mediu puternic alcalin, sulful din tioaminoacizi (cisteinã, metioninã) este eliberat sub
forma de S2- ce reacționeazã cu (CH3COO)2Pb, formând un precipitat negru-brun de sulfurã de plumb (PbS).
Mod de lucru:
1-2 ml soluție cisteinã + 1 ml soluție NaOH 10% + 1 ml soluție (CH3COO)2Pb; amestecul se fierbe câteva minute.
Rezultat: precipitat negru-brun de PbS.