UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

Catabolismul lipidelor endogene

In adipocite, lipaza hormon sensibila la catecolamine, glucagon, ACTH (cAMP)

ATP

E-OH

Pi

PKA

PP

ADP

E-O-P

TAG-triacilgliceroli
AGL-acizi grasi liberi

H2O

TAG + 3 H2O

Glicerol + 3 AGL

In stare de inanitie
E-OH

E-O-P

AGL

degradare pt sinteza de ATP (muschi scheletici,

cord)

Acetil CoA

corpi cetonici (ficat) pt alimentare creier

Glicerolul intra in gluconeogeneza
ATP
Glicerol

NAD+
Glicerol 3-P

DHAP

Glucoza

-oxidarea acizilor grasi cale catabolica majora

1904 Franz Knoop caini hraniti cu derivati ai acizilor grasi care au in

pozitia un radical fenil in urina se detecteaza fenil acetat - -oxidare

1949 Eugene Kennedy si Albert Lehninger AG sunt oxidati in

mitocondrie
1) Activarea AG are loc in membrana externa a membranei mitocondriale

acid gras CoA sintetaze

R-COOH + ATP + CoASH

R-CO~SCoA + AMP + PP
2 Pi

pirofosfataza

2 etape distincte:
R-COOH + ATP
R-CO~AMP + CoASH

R-CO~AMP + PP
R-CO~SCoA + AMP

Hidroliza PP de catre pirofosfataza confera reactiei 1 un caracter ireversibil!

Exista 3 acil gras CoA sintetaze cu specificitati diferite fata de lungimea
catenei
Transportul acizilor grasi activati in mitocondrie
AG sunt activati pe membrana externa si oxidati in matricea mitocondriala
AG activati (R-CO~SCoA) cu catena lunga nu traverseaza membr.mit.interna
Transportul necesita prezenta unui sistem de transport special:
Carnitina (4-trimetil amino 3-hidroxi-butirat)
Carnitin acil transferaza (CAT)
Transportor (translocaza)

2 izoenzime:
CAT -1 legata la membr mit externa, catalizeaza acilarea carnitinei
CAT-2 din matricea mitocondriala, catalizeaza dezacilarea Acil-carnitinei
Un defect genetic la nivelul CAT sau translocazei, o deficienta in carnitina gasit
la gemeni identici (dureri, crampe musculare din primele zile de viata; durerile
cresc in stare de inanitie, dupa un exercitiu fizic sustinut sau in cazul unei diete
bogate in grasimi). Normale: glicoliza, glicogenoliza, lipoliza TAG. Lipseste acid
gras CoA sintetaza activa fata de AG cu catena medie

CAT 1

CAT 2

Acyl CoA
H
Dehydrogenase
R-CH2 -C-C-COSCoA
R-CH2 -C=C-COSCoA

Reactiile 2-5 au
loc in mitocondrii

H H

H H

FAD

FADH2

L--Hydroxyacyl
CoA
Dehydrogenase

-Ketoacyl CoA
H

NADH
+ H+

CoASH
Thiolase

H2 O
3
Enoyl CoA Hydratase

R-CH2-CH2-CH2-COSCoA

H H
R-CH2 -C-C-COSCoA

R-CH2 -C-C-COSCoA
OH

trans-2 -enoyl CoA

NAD+

HO H

FAD

FADH2

NAD+

NADH

L--Hydroxyacyl CoA

CoASH

CH3CO~SCOA

5
R-CH2-COSCoA

R-CH2 -C-SCoA
O

CH3 -C-SCoA
O

Urmeaza o noua runda de -oxidare

CH3 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 COSCoA

7 cicluri de -oxidare
8 CH3COSCoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+

Acil gras CoA Dehidrogenaza

Echivalentii de reducere de la FADH2 alimenteaza CTEM:

R-CH2-CH2-SCoA
R-CH=CH-SCoA

E-FAD

EFT-FADH2

E-FADH2

EFT-FAD

Fe3+-S
Fe2+-S

QH2
Q

ETF-FAD electron transfering protein

ETF:ubichinona reductaza
Genereaza 2 moli ATP la reoxidare
3 izoenzime: short (4-6 C).; medium (4-14). si long (12-18 C) chain acyl
CoA dehydrogenases
Tetramer A4, MMA 43 kDa, 1 FAD/monomer
Sudden infant death syndrome lipseste medium chain acyl CoA dehydrogenase

Enoil CoA hidrataza

transforma stereospecific:
trans-2-enoil

L-3-hidroxi-

cis-2-enoil

D-3-hidroxi-

3-L-hidroxiacil gras dehidrogenaza

dar si

Strict specifica pentru L-3-hidroxiIntra in CTEM genereaza 3 ATP

Bilant
Palmitat + 7 FAD + 7 NAD+ +7 H2O + 7 CoASH
8 Acetil CoA + 7 FADH2 + 7 NADH
7 3= 21 moli ATP

Ciclul Krebs 8 12= 96 moli ATP

7 2= 14 moli ATP

CTEM

96 + 14 + 21 = 131 moli ATP

Se scad 2 legaturi macroergice consumate in reactia 1
= (129 7,3)/2340 100 = 40 %

129 moli ATP

9
-oxidarea acizilor grasi nesaturati
Ex.1. -oxidarea acidului palmitoleic 16:1 9cis
10

CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)7-CO~SCoA
3 runde -oxidare
4

CH3-(CH2)5-CH=CH-CH2-CO~SCoA
cis-3-enoil SCoA
Enoil CoA izomeraza
4

cis -trans
Deplare dubla
legatura

CH3-(CH2)5-CH2-CH=CH-CO~SCoA
trans-2-enoil SCoA

-oxidare normala

10
Ex.2. -oxidarea acidului 18:2 6,9 all cis octadecadienoic
10

CH3-(CH2)7-CH=CH-CH2-CH=CH-(CH2)4-CO~SCoA
2 runde -oxidare
3

CH3-(CH2)7-CH=CH-CH2-CH=CH-CO~SCoA
Enoil CoA hidrataza
CH3-(CH2)7-CH=CH-CH2-CH-CH2-CO~SCoA
OH
3-D-hidroxi-enoil CoA
Epimeraza
3-L-hidroxi-enoil CoA

-oxidare normala

Cai minore de oxidare a acizilor grasi

11

-oxidarea AG cu numar impar de atomi de carbon

Unele plante, organisme marine exista AG cu nr impar de C sufera -oxidare in
final rezultand propionil CoA care intra in ciclul Krebs.
-oxidarea peroxizomala
Acid gras CoA + O2

acid gras CoA oxidaza (FAD) trans-2-enoil CoA + H2O2

Trans-2-enoil CoA hidrataza 3-L-hidroxi acil CoA dehidrogenaza 3-oxoacil CoA

Enzima difunctionala

3-oxoacil CoA + CoASH

-tiolaza peroxizomala

Inactiva fata de AG < 8C

Faciliteaza -oxidarea mitocondriala, principial ca in mitocondrie, dar cu enzime

diferite; fara a fi necesara o translocaza, AG difuzeaza liber in peroxizomi; H2O2
este descompus de catalaza

12

-oxidarea la animale

Hidroxilare la C, in RE si mitocondrii, implica o oxidaza cu functie

mixta, O2, NADPH si cit P450
CH3-(CH2)n-CH2-COOH

CH3-(CH2)n-CH-COOH

CH3-(CH2)n-C-COOH

OH

CH3-(CH2)-COOH + CO2
-oxidarea la plante, seminte germinate
R-CH2-CH2-COOH

acid gras peroxidaza R-CH2-CHO + CO2

13-18 C
H2O2

H2O
E-FAD

O2

E-FADH2

NAD+

NADH
R-CH2-COOH
Acid gras Cn-1

R-CH2-CH2-OH
Alcool gras
plante ceruite

-oxidarea

Procesul are loc n peroxizomi

CH3(CH2)n -C00H
CH2(CH2)n- C00H
0H

H00C- (CH2)n- C00H

- apare in RE al multor tesuturi, sub actiunea oxidazei cu funcie mixta care

necesita 02, NADPH si citP45o
se formeaza acid adipic sau acid succinic.

13

UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

Corpii cetonici

Acetoacetatul, 3-hidroxibutiratul, acetona

Echivalenti energetici ai acizilor grasi, dar solubili in apa
Sintetizati in matricea mitocondriala ficat si rinichi
(intr-un grad mai mic)
Surse de energie pentru cord, muschi scheletici, creier
in stare de inanitie (lipsa de glucoza)

Reglari metabolice in diabet si inanitie

Acizi grasi

Corpi cetonici

2
Acetil CoA

Pir dehidrogenaza

c.Krebs

Oxalacetat
Piruvat
glicoliza

Pir carboxilaza
3

Glucoza
activare
inhibitie

Reactie totala
2 CH3-CO~SCoA + H2O

2 CoASH
CH3-CO-CH2-COOH
acetoacetat

2 izoenzime -tiolaza una implicata in -oxidare

alta implicata in cetogeneza
2 izoenzime HMG-CoA sintaza in ficat
- una in mitocondrie sinteza corpilor cetonici
- una in citosol sinteza colesterolului
-hidroxi butirat dehidrogenaza
- asociata cu membrana interna a mitocondriei

Raportul

[-HO-butirat]/[acetoacetat] =
din sangele care paraseste ficatul

[NADH]/[NAD+]
mitocondrial

HEPATOCIT

Mitocondrie
Acizi grasi
-OXIDARE
SINTEZA CORPI CETONICI
-HO-butirat ` Acetoacetat ` HMG-CoA ` Acetoacetil CoA ` Acetil CoA
Ciclul Krebs
Citosol
SINTEZA COLESTEROL

GLUCONEOGENEZA
Glucoza

Colesterol ` HMG-CoA ` Acetoacetil CoA ` Acetil CoA

SINTEZA AC GRASI

Acizi grasi ` Malonil CoA

AmAcizi

9
Concept vechi corpii cetonici sunt deseuri metabolice
Concept actual corpii cetonici sunt combustibili metabolici, solubili
in apa, trec bariera sange-creier, au valoare energetic
similara acizilor grasi
-produsi in special de ficat, difuzeaza in sange, transportati la tesuturi extra-hepatice, utilizati de creier
in lipsa glucozei (inanitie) si a insulinei (diabet)
Ficatul nu poate utiliza corpii cetonici, nu are CoA transferaza !
Acetoacetat CoA transferaza Acetoacetil CoA -tiolaza 2 AcetilCoA! Krebs
succinil CoA

succinat

GDP + P succinil CoA sintetaza

ATP
GTP + CoASH

ciclul Krebs

10

Concentratii ale corpilor cetonici in sange

< 0,2 mM

normal

3-5 mM

inanitie

20 mM

diabet

11

Sinteza acizilor grasi

mitocondrie

citosol

Mamifere acid gras sintaza

Procariote enzime independente

FAD

-HO-L
NAD+

CoA-SH
2 C - acetil

NADPH

-HO-D
NADPH

ACP-SH
2 C malonil

12

Acil coenzima A

Acyl carrier protein

E.Coli 8,86 kDa 77 aminoacizi

1) Carboxilarea acetil CoA catalizata de acetil CoA carboxilaza

CH3-CO~SCoA + HCO3 + ATP

13

OOC-CH2-CO~SCoA + ADP +P

La E.coli
1.Biotin carboxilaza
2.Transcarbomilaza
3.Proteina carrier a biotinei

E-biotina + HCO3 +ATP!

E-carboxi-biotina + ADP + P1

E-carboxi-biotina +acetil CoA!

Malonil CoA + E-biotina

Urmatoarele reactii au loc sub actiunea complexului AG sintazei

2.Formarea acetil SACP catalizata de acetil transacilaza (E1)
Acetil~SCoA + ACP-SH

Acetil~SACP + CoASH

3.Formarea malonil SACP catalizata de malonil transacilaza (E2)

Malonil~SCoA + ACP-SH

Malonil~SACP + CoASH

4. Condensarea acetil si malonil SACP 3-oxoacil ACP sintaza (E3)

CH3-CO~SACP + OOC-CH2-CO~SACP
Acetil SACP

Malonil SACP

CH3-CO-CH2-CO~SACP
3-oxoacil (acetoacetil) ACP
+ CO2 + ACP-SH

5. Reducerea 3-oxoacil ACP 3-oxoacil ACP reductaza (E4)

CH3-CO-CH2-CO~SACP + NADPH

CH3-CH(OH)-CH2-CO~SACP +NADP+
3-D-hidroxiacil ACP

14

15

6. Dezhidratare - 3-D-hidroxiacil ACP dehidraza (E5)

CH3-CH(OH)-CH2-CO~SACP

CH3-CH=CH-CO~SACP
2-trans-enoil (crotonil) ACP

7. Reducerea - 2-trans-enoil ACP reductaza (E6)

CH3-CH=CH-CO~SACP + NADPH

CH3-CH2-CH2-CO~SACP+NADP+

Reactiile 3-7 se repeta de 6 ori

Acetil SACP + 7 Malonil SACP + 14 NADPH+14H+

Palmitoil SACP +

+7CO2 + 14 NADP+
8. Hidroliza palmitoil SACP palmitoil tioesteraza (E7)
Palmitoil SACP + H2O

Palmitat + ACP-SH

16

Reactie totala:
8 Acetil CoA + 7 ATP + 14 NADPH+14 H+

Palmitat + 8 CoASH +
7 (ADP+Pi) + 14 NADP+

Complexul acid gras sintazei

Drojdie

Mamifere

2400 kDa

260 kDa

66

Catena : ACP, E3, E4

Fiecare catena pliata in

3 domenii

Catena : E1, E2, E5, E6

Unitatea de intrare a substratelor si de condensare: E1, E2, E3

Unitatea de reducere: E4, E5, E6, ACP
Unitatea de eliberare a palmitatului

17
E5
E1
E2
E3

E6

E7
E4

18

Gr. Fosfopantetenil 20
flexibila
contacteaza
toate situsurile
active si toate
substratele

Substratele sintezei acizilor grasi

19

ATP
CO2

8 moli Acetil CoA

8 moli Acetil CoA

8 moli NADPH

6 moli NADPH provin din suntul pentozo fosfatilor

Reglarea sintezei acizilor grasi

20

Palmitoil
CoA

activa

Inactiva

E-OH

E-P

a) Reglarea la nivelul acetil CoA carboxilazei

Partial activa

Acetil CoA

Malonil CoA
+

21

Citrat

Glucagon,epinefrina,

insulina

AMP, palmitoil CoA

Fosforilarea E-OH catalizata de o protein kinaza diferita de PKA

Inanitie Glucagon, epinefrina PKA

fosforileaza si inhiba
PPP-2A E-P inactiva nu are loc sinteza AG
Insulina fosforileaza PPP-2A la alt situs o activeaza E-OH
stimuleaza sinteza AG
Exista multi modulatori alosterici

22

b) Intrarea acil CoA in matricea mitocondriala

citosol

sinteza

-oxidare
R-COOH

Acetil CoA

R-CO-SCoA

Membrana interna

mitocondrie

CAT 1

R-CO-SCoA

Malonil CoA

c
[NADPH] mari inhiba 3-HO-D-acil
dehidrogenaza
[acetil CoA] mari inhiba -tiolaza

d
Control long term animale infometate, cu o dieta bogata in glucide, cu o dieta
saraca in lipide creste nivelul acetil CoA carboxilazei si a acid gras sintazei

23

Elongarea si nesaturarea acizilor grasi

24

Produsul acid gras sintazei acidul palmitic

Sinteza AG mai lungi, la eucariote are loc in RE (major) si in mitocondrii
In RE enzime separate donorul de unitati cu 2 C malonil CoA reactii
similare cu cele din citosol

Desaturarea acizilor grasi se realizeaza prin intermediul unei

CTE desaturante:

Diferite combinatii de reactii de alungire si nesaturare pot genera o

varietate de acizi grasi nesaturati

25