Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Coloraţii Şi Coloranţi
Coloraţii Şi Coloranţi
COLORAREA Etapa prin care se urmrete creterea contrastului dintre diferitele componente tisulare prin modificarea indicilor de refracie ai substratului morfologic cu ajutorul coloranilor . Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului utilizat i de esutul pe care dorim s l examinm. COLORANTUL HISTOLOGIC substan chimic colorat, de obicei de natur organic, ce poate intra n celul atandu-se la nivelul componentelor celulare i permind astfel diferenierea lor optic. Nu toate substanele colorate sunt colorani! COLORANI - grupri cromofore purttoare de culoare - grupri auxocrome capacitatea de a colora GRUPARILE AUXOCROME 1. Ionizate ( principale ) formeaz legturi electrochimice cu substratul
2. Neionizate ( secundare) formeaz legaturi de hidrogen cu substratul. Acest tip de legatur mrete stabilitatea colorantului. CLASIFICAREA COLORANILOR - natura lor - caracterele chimice CLASIFICAREA COLORANILOR Dup natura lor Naturali - vegetali : hematoxilina ,safranina , orceina , turnesolul - animali : carminul Sintetici : albastru de metil
Bazici gruparea auxocroma principal ncrcat electric pozitiv , deci se va ataa pe un substrat ncrcat negativ
Neutri grupri auxocrome principale ncrcate electric pozitiv i negativ, fiind soluii apoase de colorani bazici i acizi ntr-o anumit proporie MECANISMUL COLORRII PROTEINELE - substratul molecular la nivelul crora se fixeaz coloranii prin legturi electrochimice i de hidrogen. In funcie de tipul gruprilor ionizabile din structur , proteinele sunt 1 2 3 acide bazice neutre
Nucleul caracter bazofil: albastru-nchis / violet MECANISMUL COLORRII Colorant acid substrat bazic (ex: eozina) Citoplasma caracter acidofil: roz/rou
ETAPELE COLORRII METODE DE COLORARE 1. In funcie de momentul colorrii 2. Dupa nr. de coloranti utilizai 3. Dup mecanism 4. Dup metoda de obinere a coloraiei optime 5. In funcie de raportul dintre rezultatul colorrii i culoarea colorantului Momentul colorrii Numr de colorani a b Simple folosete un singur colorant Combinate (policrom) 2 sau mai muli colorani i. ii. Mecanism - direct simplu contact dintre colorant si substrat - indirect necesit prezena unui mediator sau MORDANT , ntre colorant i substrat. Acesta fixeaz colorantul de componentele celulare. Succesiv Simultan, ex . : hemalaun - eozin, azan
Metoda de obinere a coloraiei optime - progresive prin adugri succesive pna se ajunge la momentul optim de colorare - regresive - prin aciunea prelungit a colorantului pn la obinerea unei supracolorri , apoi se acioneaz cu un agent chimic decolorant (difereniator) (ex. Coloratia Nissl). Rezultatul colorrii i culoarea colorantului - Ortocromatic substratul se coloreaz n aceeai culoare ca i cea a colorantului - Metacromatic - substratul se coloreaz n alt culoare ca cea a colorantului IMPREGNARI METALICE PRINCIPIU: precipitat de metal care se depune pe diferitele elemente de tesuturi evideniind structuri care n mod obisnuit nu se coloreaz cu colorani. - cele mai folosite sunt : Ag , Au , Os , Hg. IMPREGNARE ARGENTIC - folosit pentru evidenierea elementelor din esutul epitelial, conjunctiv i n cercetarea sistemului nervos . Rezultate: structurile vizate sunt colorate n negru.
2 colorani: 1 2 - hemalaunul colorant bazic - eozina colorant acid REZULTATE - nuclei albastru - violet - citoplasma roz- rosu
REZULTATE 1. 2. 3. Nuclei violet Citoplasma albastru cenusiu Fibrele de colagen albastru intens
COLORATIA MASSON
- coloratie tricrom 1. 2. 3. hematoxilin feric soluia colorant A ce conine fuxin acid soluia colorant B ce conine albastru de anilin
REZULTATE 1. 2. 3 Nuclei negru Citoplasma rou violet deschis Fibrele de colagen albastru intens
COLORATIA MALLORY
REZULTATE 1. 2. 3. 4. 5. Nuclei - rou intens Citoplasma roie Fibre de colagen i reticulin albastru esut muscular neted - violet esut muscular striat - rou portocaliu
COLORATIA AZAN
- azocarmin C - albastru Heidenhein , cu anilin i orange G REZULTATE Nuclei rou viu Citoplasma rou Fibre de colagen i reticulin albastru deschis esut muscular striat rou , orange sau galben
- evidenierea complexului Golgi REZULTATE Nuclei necolorai Aparatul Golgi reea perinuclear de culoare neagr Citoplasma aurie
- evidenierea mitocondriilor REZULTATE Nucleu necolorat Nucleol negru Mitocondrii puncte negre
- evidentierea interstiiului dintre celulele epiteliului din seroase limitele intercelulare apar net n culoarea neagr IMPREGNARE ARGENTICA ESUT EPITELIAL TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV
COLORAIA CU ALBASTRU DE TOLUIDIN - granulaiile din mastocite prin coloraie metacromatic n rou violet
TEHNICI SPECIALE DE EXAMINARE A TESUTULUI CONJUNCTIV METODE PENTRU EXAMINAREA FIBRELOR CONJUNCTIVE 1. Fibrele de reticulin se examineaz folosind o metoda electiv IMPREGNAREA ARGENTICA i apar colorate n negru 2. a. b. Fibrele elastice se poate utiliza coloraia cu Rezorcin fuxina - albastre Orcein cafeniu - roscate Fibre reticulin
TEHNICI SPECIALE PENTRU EXAMINAREA ESUTULUI MUSCULAR METODA HEIDENHEIN (cu hematoxilina ferica) - evidentiaz structura periodic a miofibrilelor. Se remarc alternana de zone clare i ntunecate.
Metode speciale pentru evidenierea esutului nervos - metoda Nissl impregnare argentic Evidenierea tecii de mielin prin fixare cu tetraoxid de osmiu Impregnare Ag Nissle