CICLUL KREBS

Ciclul Krebs (numit i ciclul acidului citric sau ciclul acizilor tricarboxilici, descris de ctre Hans Krebs) reprezint calea de degradare oxidativ a acetil-CoA rezultat din catabolismul glucozei, al acizilor grai i al unor aminoacizi; deci acest proces metabolic reprezint o cale final comun pentru degradarea aerob a celor trei categorii de combustibili metabolici. (#2) Reaciile ciclului Krebs au loc n mitocondrie, enzimele fiind localizate n matricea mitocondrial, libere sau ataate de membrana mitocondrial intern. (#3) 1. Condensarea acetil-CoA cu oxalacetatul, cu formare de citrat Procesul debuteaz cu o condensare aldolic ntre acetil-CoA i oxalacetat: carbonul metilic al acetil-CoA este legat la carbonul carbonilic al oxalacetatului; intermediar se formeaz citril-CoA, care este hidrolizat rapid la citrat i coenzima A. Reacia este catalizat de citrat sintaz. Hidroliza intermediarului tioesteric macroergic (citril-CoA) face ca reacia s fie puternic exergonic, deci echilibrul su este net n favoarea citratului; acest fapt este esenial pentru funcionarea ciclului Krebs, ntruct concentraia oxalacetatului n celul este redus. 2. Transformarea citratului n izocitrat Aconitaza catalizeaz un proces reversibil de deshidratare a citratului la cis-aconitat, urmat de adiia apei la dubla legtur n aa fel nct se formeaz izocitratul. Dei citratul are o molecul simetric, aconitaza reacioneaz cu acesta ntr-o manier asimetric (are un situs activ asimetric), astfel nct cei 2 C care vor fi pierdui n etapele ulterioare nu deriv din acetil-CoA, ci din oxalacetat (abia n rundele ulterioare ale ciclului Krebs se vor elimina cei 2 C ai acetil-CoA). 3. Conversia izocitratului n -cetoglutarat Izocitrat dehidrogenaza (ICDH) catalizeaz oxidarea izocitratului n prezen de NAD+, cu formarea unui intermediar numit oxalo-succinat, care apoi se decarboxileaz la -cetoglutarat. Exist dou izoenzime ale ICDH: - ICDH - NAD+ dependent, care se gsete n mitocondrii i acioneaz n ciclul Krebs; - ICDH - NADP+ dependent, care are localizare dubl (mitocondrial i citosolic) i care are rol n generarea NADPH (ce va servi ca agent reductor n reacii anabolice reductive). 4. Decarboxilarea oxidativ a -cetoglutaratului la succinil-CoA Acest proces este catalizat de -cetoglutarat dehidrogenaz (KG-DH), care este un complex enzimatic asemntor, din punct de vedere structural i funcional, cu piruvat dehidrogenaza (este alctuit din 3 enzime i 5 coenzime: TPP, acid lipoic, coenzima A, FAD i NAD+). n aceast reacie, energia liber degajat n procesul de oxidare este conservat sub forma legturii tioesterice din succinil-CoA (legtur de tip macroergic: G pentru hidroliza succinilCoA este 8,6 kcal/mol). 5. Transformarea succinil-CoA n succinat n aceast reacie, energia eliberat prin scindarea legturii tioesterice din succinil-CoA este utilizat pentru sinteza legturii fosfat-macroergice din GTP sau ATP. Reacia este catalizat de succinat tiokinaza (succinil-CoA sintetaza), care are dou izoenzime: - una specific pentru ADP (distribuit n toate esuturile); - o alta specific pentru GDP (localizat n esuturile implicate n procesul gluconeogenezei - ficat i rinichi - care utilizeaz GTP n una din reaciile sale). Acesta reprezint un proces de fosforilare la nivel de substrat: energia eliberat prin decarboxilarea oxidativ a -cetoglutaratului este conservat n legtura tioesteric a succinil-CoA, fiind apoi utilizat pentru sinteza ATP din ADP i Pi.

GTP format n aceast reacie (sub aciunea succinat tiokinazei specifice pentru GDP) poate ceda un fosfat ADP-ului, pentru a genera ATP, ntr-o reacie reversibil catalizat de nucleozid difosfat kinaza: GTP + ADP GDP + ATP. 6. Dehidrogenarea succinatului la fumarat Succinatul se dehidrogeneaz n prezena coenzimei FAD, sub aciunea succinat dehidrogenazei, cu formarea acidului fumaric (izomerul trans). Aceast enzim este legat de membrana mitocondrial intern i reprezint complexul II din lanul transportorilor de electroni. 7. Hidratarea fumaratului la malat Fumaraza (fumarat hidrataza) catalizeaz o reacie de hidratare a fumaratului; enzima are o stereospecificitate ridicat: acioneaz numai asupra izomerului trans (acidul fumaric), nu acioneaz asupra izomerului cis (acidul maleic). 8. Dehidrogenarea malatului la oxalacetat Malat dehidrogenaza catalizeaz reacia de dehidrogenare, n prezen de NAD+, a malatului, cu regenerarea oxalacetatului. n condiii standard, echilibrul reaciei este net spre formarea malatului (G = 7,1 kcal/mol). n condiiile din celula vie, oxalacetatul este ndeprtat continuu din reacie prin angajare n reacia citrat sintazei dintr-o nou rund a ciclului Krebs; n consecin, concentraia oxalacetatului este meninut la valori foarte sczute, ceea ce duce la direcionarea reaciei malat dehidrogenazei spre formarea oxalacetatului. Rezultatul net pentru o rund a ciclului Krebs: - o molecul de acetil-CoA intr n ciclu i 2 molecule de CO2 sunt eliberate; - o molecul de oxalacetat este utilizat pentru a forma citrat (n prima reacie a ciclului) i o molecul de oxalacetat este regenerat (n ultima reacie) aceasta poate ncepe o nou rund de reacii; - n consecin, o molecul de oxalacetat poate asigura oxidarea unui numr considerabil de molecule de acetil-CoA, ntruct se regenereaz la finalul fiecrei runde a ciclului (s-ar putea considera c oxalacetatul are un rol catalitic n cadrul ciclului Krebs); ntr-adevr, oxalacetatul se gsete n celul n concentraii mici, dar aceste cantiti mici de oxalacetat pot asigura degradarea unor cantiti mari de acetil-CoA. Ecua ia global a ciclului Krebs: Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + ADP + Pi + 2H2O 2 CO2 + 3 (NADH+H+) + FADH2 + ATP + CoA-SH ROLURILE CICLULUI KREBS Ciclul Krebs are un rol central n cadrul metabolismului, care nu se limiteaz doar la oxidarea acetil-CoA; el este un proces amfibolic, avnd caracter dublu: catabolic i anabolic. 1. Latura catabolic a ciclului Krebs const n degradarea acetil-CoA, cu generare de ATP. (#5) Exist 4 reacii de oxidare n ciclul Krebs (3 NAD+-dependente i una FAD-dependent); energia liber degajat n aceste reacii este conservat sub forma a 3 molecule de NADH i a unei molecule de FADH2; aceste coenzime reduse vor transfera echivalenii reductori n lanul respirator, cuplat cu fosforilarea ADP => sintez de ATP (3 molecule pentru fiecare molecul de NADH i 2 molecule pentru FADH2, deci n total 11 molecule de ATP sintetizate n procesul fosforilrii oxidative). n reacia succinat tiokinazei se sintetizeaz 1 molecul de ATP prin fosforilare la nivel de substrat. 2

 Bilanul energetic global al ciclului Krebs este, deci, de 12 molecule de ATP. 2. Latura anabolic a ciclului Krebs const n faptul c unii intermediari ai si servesc ca precursori pentru o varietate larg de produi, n cadrul unor procese de biosintez. (#6) Rol n gluconeogenez: toi intermediarii ciclului Krebs pot fi folosii la sinteza de glucoz; dup transformarea n oxalacetat, ei se pot angaja n procesul gluconeogenezei. Scheletele de C ale multor aminoacizi pot fi utilizate pentru sinteza de glucoz dup transformare n diveri intermediari ai ciclului Krebs. -cetoglutaratul i oxalacetatul se transform, prin reacii de transaminare, n glutamat i aspartat; aceti aminoacizi vor servi ulterior la sinteza altor aminoacizi, precum i la sinteza nucleotidelor purinice i pirimidinice (aspartatul ca atare, iar glutamatul dup transformare n glutamin). Succinil-CoA este utilizat la sinteza hemului, gruparea prostetic a hemoproteinelor (hemoglobin, mioglobin, citocromi). Citratul joac rol de transportor al radicalului acetil (din componena acetil-CoA provenit din degradarea glucozei) din mitocondrie n citoplasm, n vederea participrii la biosinteza acizilor grai (dup prnzurile bogate n glucide, n ficat). ETAPELE DEGRADRII TOTALE A GLUCOZEI n anaerobioz, molecula de glucoz este degradat parial (pn la lactat), cu generarea a 2 molecule de ATP. n aerobioz, glucoza este degradat total, la CO2 i H2O, cu implicarea mai multor etape: 1. Glicoliza pn la piruvat; 2. Decarboxilarea oxidativ a piruvatului la acetil-CoA; 3. Oxidarea acetil-CoA la CO2 n ciclul Krebs. Ca urmare a desfurrii celor trei procese se genereaz ATP n dou moduri: - prin reacii de fosforilare la nivel de substrat (dou n glicoloz i una n ciclul Krebs); - n reaciile de dehidrogenare din cadrul celor trei etape are loc conservarea energiei eliberate sub forma coenzimelor reduse NADH i FADH2; acestea se vor reoxida n lanul respirator, ducnd la sintez de ATP n procesul fosforilrii oxidative. Bilanul energetic al degradrii totale, aerobe, a moleculei de glucoz: (#7) 1. Glucoz piruvat (glicoliza): - reaciile de fosforilare la nivel de substrat 2 ATP - reacia gliceraldehid-3-P dehidrogenazei: 2 x NADH 2 x 3 ATP = 6 ATP n procesul fosforilrii oxidative => bilan al glicolizei desfurate n condiii aerobe: 2 + 6 = 8 ATP. 2. Piruvat acetil-CoA (reacia piruvat dehidrogenazei): - 2 x NADH 2 x 3 ATP = 6 ATP n procesul fosforilrii oxidative. 3. Acetil-CoA 2 CO2 (ciclul Krebs): - 2 x 12 ATP = 24 ATP. Total: 8 + 6 + 24 = 38 ATP. Realiznd o comparaie ntre bilanul energetic al degradrii anaerobe a glucozei, prin glicoliz la lactat (2 ATP) i bilanul degradrii totale aerobe (38 ATP), se observ c degradarea aerob permite eliberarea ntregii cantiti de energie liber coninut n molecula de glucoz i conservarea acesteia sub form de ATP, deci are o eficien energetic mult mai mare n comparaie cu degradarea anaerob, care elibereaz doar aproximativ 5% din energia moleculei de glucoz. Ca o concluzie, n celule exist dou ci de sintez a ATP-ului: 3

 n condiii aerobe, cea mai mare parte a ATP-ului se produce n procesul fosforilrii oxidative: aceasta este calea major, d.p.d.v. cantitativ, de sintez a ATP-ului n celul; n condiii anaerobe, fosforilarea oxidativ nu poate avea loc singura posibilitate de generare a ATP-ului este fosforilarea la nivel de substrat (deci aceast cale, minor d.p.d.v. cantitativ, dobndete un rol major n condiii de anaerobioz). REACII ANAPLEROTICE (#8) Sunt reacii care au rolul de a aproviziona ciclul Krebs cu intermediari care au fost ndeprtai din acest proces pentru reacii biosintetice (n limba greac ana nseamn din nou, iar pliro nseamn a umple, a completa). n condiii normale, ntre procesele care ndeprteaz unii compui din ciclul Krebs i cele care reintroduc aceti compui napoi n ciclu exist un echilibru, astfel nct concentraiile intermediarilor din aceast cale metabolic rmn relativ constante. Depleia unora din intermediarii ciclului Krebs nu ar mai permite funcionarea sa optim. 1. Piruvat carboxilaza (PC) catalizeaz principala reacie anaplerotic, ce duce la generarea de oxalacetat necesar pentru angajarea acetil-CoA spre degradare n ciclul Krebs. (#9) Reacia de carboxilare a piruvatului se realizeaz cu participarea biotinei (o vitamin hidrosolubil) n calitate de coenzim. Piruvat carboxilaza este activat alosteric de acetil-CoA (enzima are o activitate foarte redus n absena acestui modulator); astfel, pe msur ce acetil-CoA se formeaz prin catabolismul glucozei sau al acizilor grai, ea asigur automat propria sa degradare n ciclul Krebs prin formarea de oxalacetat. 2. Malic enzima catalizeaz carboxilarea reductiv a piruvatului, n prezen de NADPH, cu formare de malat. (#9) Atunci cnd se desfoar de la malat spre piruvat, reacia genereaz NADPH, care este donor de echivaleni reductori pentru reacii de biosintez reductiv. 3. Oxidarea glutamatului sub aciunea glutamat dehidrogenazei (GDH) duce la formarea de -cetoglutarat. REGLAREA CICLULUI KREBS Viteza de desfurare a ciclului acizilor tricarboxilici depinde de urmtorii factori: (#10) 1. Disponibilitatea de substrate: acetil-CoA i oxalacetat. Atunci cnd, n urma degradrii glucozei (sau a altor substrate energogene), se formeaz cantiti mari de acetil-CoA, activitatea ciclului Krebs va fi crescut. Acetil-CoA are i rolul de activator alosteric al piruvat carboxilazei, ce catalizeaz principala reacie anaplerotic, n care se formeaz oxalacetatul necesar pentru angajarea acetil-CoA n ciclul Krebs. 2. Disponibilitatea de NAD+ (n forma oxidat), necesar n trei din cele patru reacii de dehidrogenare din cadrul ciclului. Meninerea unei cantiti adecvate de NAD+ depinde de reoxidarea NADH (format n cele trei reacii de dehidrogenare) n lanul respirator; viteza de desfurare a lanului respirator depinde de disponibilitatea de ADP, deci de starea energetic a celulei: - stare energetic joas (tradus prin [ATP] i [ADP] ) disponibilitatea mare de ADP va duce la creterea vitezei fosforilrii oxidative accelerarea oxidrii NADH n lanul respirator => creterea cantitii de NAD+ n forma oxidat aceasta va permite creterea vitezei ciclului Krebs;

- stare energetic nalt (tradus prin [ATP] i [ADP] ) scderea disponibilitii ADP va duce la scderea vitezei fosforilrii oxidative ncetinirea oxidrii NADH n lanul respirator => cantitii de NAD+ n forma oxidat scderea vitezei ciclului Krebs. Aadar, viteza de desfurare a ciclului Krebs este strns corelat cu viteza lanului respirator i a fosforilrii oxidative. 3. Activitatea celor trei enzime care catalizeaz reaciile exergonice din cadrul ciclului Krebs: citrat sintaza, izocitrat dehidrogenaza, -cetoglutarat dehidrogenaza. (#11) Enzima Citrat sintaza Izocitrat dehidrogenaza -cetoglutarat dehidrogenaza Modulatori pozitivi ADP ADP Modulatori negativi ATP NADH Citrat ATP NADH NADH Succinil-CoA

a) Citrat sintaza - este modulat alosteric: - pozitiv de ctre ADP; - negativ de ctre ATP, NADH i citrat (produs al reaciei). b) Izocitrat dehidrogenaza - este cel mai important punct de control al ciclului acizilor tricarboxilici (etapa limitant de vitez). Aceast enzim cheie este modulat alosteric: - pozitiv de ctre ADP; - negativ de ctre ATP i NADH. c) -cetoglutarat dehidrogenaza - este inhibat alosteric de ctre NADH i succinil-CoA (produs al reaciei). Existena unor cantiti mari de ATP n celul semnific satisfacerea necesitilor energetice ale celulei; ATP-ul determin scderea vitezei de desfurare a ciclului Krebs prin inhibarea alosteric a dou dintre enzimele supuse controlului metabolic. Concentraii mari de ADP n celul semnific depleia rezervelor de ATP; ADP-ul determin accelerarea ciclului Krebs prin activarea a dou dintre enzime, n felul acesta genernduse noi cantiti de ATP. Acumularea de NADH (ca urmare a scderii reoxidrii sale n lanul respirator) duce la inhibarea activitii celor trei enzime reglatorii. Acumularea de citrat (produs de reacie al citrat sintazei) i de succinil-CoA (produs de reacie al -cetoglutarat dehidrogenazei) determin inhibiia feed-back a celor dou enzime. Ca o concluzie, principalii factori care regleaz viteza de desfurare a ciclului Krebs sunt rapoartele [NADH]/[NAD+] i [ATP]/[ADP], care reflect starea energetic a celulei: - o stare energetic nalt este asociat cu valori crescute ale celor dou rapoarte, care determin ncetinirea ciclului Krebs, ducnd la diminuarea produciei de ATP; - o stare energetic joas este asociat cu valori sczute ale celor dou rapoarte, care determin accelerarea ciclului Krebs, ducnd la refacerea rezevelor de ATP ale celulei. Aceast modalitate de reglare se ncadreaz n mecanismul general de corelare a ritmului degradrii combustibililor metabolici cu ritmul utilizrii ATP ca surs de energie.

SISTEME DE TRANSPORT AL ECHIVALENILOR REDUCTORI DIN CITOSOL N MITOCONDRIE n condiii aerobe, NADH-ul format n reacia gliceraldehid-3-P dehidrogenazei din glicoliz (proces citosolic) este reoxidat n lanul respirator mitocondrial. n acest scop, NADH trebuie s treac din citoplasm n mitocondrie, ns membrana mitocondrial intern este impermeabil pentru NADH. Din acest motiv, sunt necesare sisteme de transport al echivalenilor reductori din NADH citosolic spre matricea mitocondrial pe o cale indirect, cu ajutorul aanumitelor navete. Funcionarea acestor sisteme de transfer se bazeaz pe existena unor dehidrogenaze cu localizare dubl, citosolic i mitocondrial. (#13,14) 1. Naveta malatului: - NADH reduce oxalacetatul la malat sub aciunea malat dehidrogenazei (MDH) citosolice; - malatul este transportat n mitocondrie cu ajutorul transportorului malat/-cetoglutarat; - n matrice, malatul este oxidat la oxalacetat, echivalenii reductori fiind transferai pe + NAD sub aciunea MDH mitocondriale NADH format va fi oxidat n lanul respirator generarea a 3 molecule de ATP; - oxalacetatul se ntoarce n citosol sub form de aspartat (format printr-o reacie de transaminare). 2. Naveta glicerol-fosfatului: - NADH reduce dihidroxiaceton-fosfatul la glicerol-3-P sub aciunea glicerol-3-P dehidrogenazei citosolice (NAD+-dependent); - o glicerol-3-P dehidrogenaz (FAD-dependent) legat de faa extern a membranei mitocondriale interne transfer echivalenii reductori de pe glicerol-3-P pe FAD, cu formare de FADH2; ulterior acetia sunt transferai pe coenzima Q din lanul respirator, n final generndu-se 2 molecule de ATP.

GLUCONEOGENEZA
Gluconeogeneza (GNG) reprezint procesul de sintez a glucozei din precursori neglucidici. esuturile gluco-dependente necesit o aprovizionare continu cu glucoz pentru a-i satisface necesitile energetice. n anumite circumstane, aportul exogen de glucide nu asigur necesarul de glucoz al esuturilor respective: - lipsa aportului alimentar de glucide (n perioadele inter-prandiale i n strile de post, precum i n cazul unei diete bazat pe lipide i proteine dar srac n glucide); - efortul muscular susinut. n aceste condiii se apeleaz la sursele endogene de glucoz: depozitele de glicogen hepatic: acestea pot asigura necesarul de glucoz pentru o perioad de 10-18 ore; sinteza de glucoz prin GNG: este activ, ntr-o anumit msur, i la cteva ore dup un prnz glucidic, dar rolul su devine foarte important dup ce rezervele de glicogen hepatic s-au epuizat. Gluconeogeneza are loc n ficat (90%) i rinichi (10%). Precursorii de la care se poate porni pentru a se realiza sinteza de novo a glucozei sunt: - lactatul - glicerolul (eliberat prin hidroliza trigliceridelor) - aminoacizii glucogenici. (#17) 1. GNG din lactat Lactatul provine din glicoliza anaerob n muchiul n activitate i eritrocit de aici este eliberat n snge captat n ficat, unde este transformat n glucoz prin GNG glucoza este eliberat n snge de unde este captat parial de muchi i eritrocit, care o vor folosi ca surs de energie. n felul acesta se creeaz aa-numitul ciclu lactat-glucoz ntre muchi/eritrocit i ficat (ciclul Cori). (#18) GNG din lactat are loc, n principiu, prin parcurgerea n sens invers a glicolizei. ns echilibrul global al glicolizei favorizeaz net formarea lactatului/piruvatului (procesul este puternic exergonic); ca urmare: - reaciile reversibile din glicoliz pot fi parcurse n sens invers, n GNG, sub aciunea acelorai enzime (enzime comune celor dou procese); - trei dintre reaciile glicolizei sunt ireversibile (fiind puternic exergonice), deci reprezint bariere termodinamice care mpiedic desfurarea lor n sens invers pentru depirea lor, n GNG intervin enzime distincte de cele din glicoliz, care catalizeaz reacii diferite de cele glicolitice (enzime specifice gluconeogenezei). Deci, dei glicoliza i GNG mprtesc mai multe etape (7 enzime sunt comune), totui ele nu sunt ci identice care se desfoar n sensuri opuse. (#16) GNG din lactat ncepe cu transformarea lactatului n piruvat sub aciunea lactat dehidrogenazei. (1) Urmeaz prima etap care constituie o barier energetic: transformarea piruvatului n fosfoenolpiruvat (PEP). n glicoliz, transformarea PEP n piruvat este realizat ntr-o singur etap, catalizat de piruvat kinaz. n GNG, transformarea piruvatului n PEP are loc n dou etape: Mai nti, piruvatul este transformat n oxalacetat prin carboxilare sub aciunea piruvat carboxilazei (PC, piruvat carboxiligaza, enzim din clasa ligazelor). (#19) 7

Biotina (o vitamin hidrosolubil) intervine n calitate de coenzim n aceast reacie; ea este legat covalent de apoenzima piruvat carboxilazei printr-o legtur de tip amidic cu o grupare -amino aparinnd unui rest de lizin din centrul activ, formndu-se biotin-enzima. CO2 particip la reacia de carboxilare sub form de anion bicarbonat; ntr-o prim etap HCO3 se leag de o grupare fosfat provenit din ATP, formnd o molecul carboxil-fosfat. Apoi are loc transferul gruprii carboxil activate pe biotin-enzim, cu formare de carboxi-biotin-enzim: aceasta este donorul de grupare carboxil ctre piruvat, cu formare de oxalacetat. (#20) Piruvat carboxilaza este o enzim mitocondrial, iar restul enzimelor gluconeogenezei sunt localizate n citosol; oxalacetatul nu poate fi transferat n citosol ca atare (membrana mitocondrial intern nu conine un transportor pentru oxalacetat), ci sub form de malat: (#21) - oxalacetatul este redus la malat sub aciunea malat dehidrogenazei mitocondriale; - malatul este translocat n citosol cu ajutorul unui transportor specific; - n citosol, malat dehidrogenaza citosolic oxideaz malatul napoi la oxalacetat. Oxalacetatul este transformat n fosfoenolpiruvat sub aciunea carboxikinazei (PEPCK), n prezen de GTP ca donor de grupare fosfat. (#19) fosfoenolpiruvat

Reaciile piruvat carboxilazei i PEP carboxikinazei au, n anasamblu, G = 0,2 kcal/mol, dar G real este de aproximativ 6 kcal/mol, ceea ce face ca transformarea piruvatului n PEP s fie ireversibil la concentraiile reale ale celor doi compui n celul (PEP este consumat imediat n reaciile ulterioare ale GNG). (2) PEP parcurge mai multe etape reversibile din glicoliz, sub aciunea enzimelor comune glicolizei i gluconeogenezei, pn cnd se ajunge la cea de a doua barier energetic din glicoliz ce trebuie depit: transformarea fructozo-1,6-difosfatului n fructoz-6-fosfat (care corespunde reaciei din glicoliz catalizat de fosfofructokinaza-1). n GNG, aceast transformare are loc prin ndeprtarea hidrolitic a fosfatului sub form de fosfat anorganic, sub aciunea fructozo-1,6-difosfatazei. (#22) Fructozo-6-fosfatul este convertit n glucoz-6-fosfat sub aciunea fosfohexoz-izomerazei. (3) Ultima barier energetic este transformarea glucozo-6-fosfatului n glucoz; scindarea hidrolitic a fosfatului este catalizat de glucozo-6-fosfataza. (#22) Ecuaia global a GNG din lactat: 2 lactat + 4 ATP + 2 GTP + 6 H2O

Glucoz + 4 ADP + 2 GDP + 6 Pi

2. GNG din lipide Lipidele de rezerv (trigliceridele) din esutul adipos reprezint o alt surs de glucoz. Prin hidroliza trigliceridelor rezult glicerol i acizi grai. a) Glicerolul este eliberat n snge, de aici este captat n ficat i rinichi, unde poate fi transformat n glucoz n modul urmtor: este fosforilat sub aciunea glicerol kinazei, dup care glicerol-3-P este oxidat n prezen de NAD+ sub aciunea glicerol-3-P dehidrogenazei, cu formare de dihidroxiaceton-fosfat (DHAP). (#23) DHAP este un intermediar al glicolizei/gluconeogenezei: din 2 molecule de DHAP, una este izomerizat la gliceraldehid-3-P (GA-3-P); cele dou trioze formeaz mpreun fructoz-1,6difosfat, care apoi parcurge etapele din GNG pn la formarea de glucoz: DHAP + GA-3-P F-1,6-P2 F-6-P G-6-P Glucoz b) Acizii grai cu numr par de atomi de C (cum sunt marea majoritate a acizilor grai din componena trigliceridelor depozitate n esutul adipos), eliberai n snge dup hidroliza trigliceridelor, sunt captai parial n ficat: aici sunt degradai prin -oxidare la acetil-CoA. 8

Pentru a se transforma n glucoz, acetil-CoA ar trebui s se transforme mai nti n piruvat: acest lucru este imposibil, datorit ireversibilitii reaciei piruvat dehidrogenazei (care catalizeaz reacia invers, de transformare a piruvatului n acetil-CoA) din acest motiv, acizii grai cu numr par de C nu constituie substrate pentru GNG (avnd n vedere c nici nu exist o alt cale prin care acetil-CoA s se transforme n piruvat sau ntr-un alt intermediar al GNG). 3. GNG din aminoacizi Din cei 20 de aminoacizi existeni n structura proteinelor, 18 pot fi transformai n glucoz (sunt glucogenici sau glucoformatori; excepie fac leucina i lizina). Pentru a se transforma n glucoz, aceti aminoacizi sunt metabolizai la: (#24) - piruvat acesta este convertit n glucoz; - diveri intermediari ai ciclului Krebs acetia, parcurgnd ciclul, sunt convertii n oxalacetat, care dup transformare n fosfoenolpiruvat, intr n calea GNG i genereaz glucoz. Principalul aminoacid glucogenic este alanina: aceasta este implicat, alturi de glutamin, n transportul gruprilor amino ale altor aminoacizi de la esuturile extra-hepatice (muchiul scheletic, n cazul alaninei) spre ficat. Aici, alanina este transformat prin transaminare n piruvat: (#23) - piruvatul va genera glucoz n procesul GNG, glucoza fiind apoi trimis muchiului pe cale sanguin; - gruparea amino a alaninei va fi transformat, n cele din urm, n uree. Astfel, se formeaz un ciclu alanin-glucoz ntre muchi i ficat: muchiul furnizeaz ficatului alanin, ca substrat pentru gluconeogenez, iar ficatul trimite o parte din glucoza format napoi la muchi, ca surs de energie. (#18) REGLAREA GLUCONEOGENEZEI Viteza de desfurare a gluconeogenezei este reglat prin dou tipuri de mecanisme, care acioneaz la nivelul enzimelor cheie ale acestui proces: este vorba de cele patru enzime specifice gluconeogenezei, care catalizeaz reaciile ce corespund etapelor ireversibile din glicoliz. (#25) 1. Reglarea activitii unor enzime-cheie prin modulare alosteric: piruvat carboxilaza: este activat de acetil-CoA; fructozo-1,6-difosfataza: este inhibat de fructoz-2,6-difosfat i AMP. 2. Controlul sintezei celor patru enzime-cheie, n special a PEPCK (deci modificarea cantitii lor n celul): Glucagonul, adrenalina i cortizolul: determin inducia enzimelor. Glucagonul i adrenalina acioneaz prin creterea concentraiei AMPc n celul, iar acesta activeaz protein kinaza A. Subunitile catalitice ale PKA intr n nucleu i fosforileaz o protein numit CREB (CRE-binding protein). Aceasta reprezint un factor de transcripie, care se leag la o secven reglatorie localizat n vecintatea unor gene (cum este PEPCK), numit CRE (cAMP response element) i activeaz transcripia genelor respective. (#26) Cortizolul acioneaz prin mecanismul caracteristic hormonilor liposolubili. Pe lng activarea transcripiei genelor care codific enzimele cheie ale GNG, cortizolul stimuleaz i catabolismul proteinelor musculare, aminoacizii rezultai fiind utilizai apoi n ficat ca substrate pentru gluconeogenez. Insulina: determin represia enzimelor cheie ale gluconeogenezei, avnd astfel o aciune inhibitorie asupra acestui proces. REGLAREA COORDONAT A GLICOLIZEI I GLUCONEOGENEZEI

Cele dou procese cu caracter opus sunt reglate ntr-o manier coordonat, reciproc: creterea vitezei unui dintre ele are loc simultan cu scderea vitezei celuilalt i viceversa, astfel nct ele s nu funcioneze concomitent cu viteze egale. (#25) O asemenea situaie ar duce la irosirea substratelor celor dou ci metabolice i la consum de ATP fr realizarea de travaliu metabolic (n glicoliz se genereaz 2 moli ATP per mol de glucoz degradat, iar gluconeogeneza din lactat consum 6 moli de ATP per mol de glucoz sintetizat). S-ar realiza, deci, un ciclu inutil (futile cycle). Pentru a evita formarea unui asemenea ciclu inutil, reglarea coordonat a celor dou procese este asigurat la nivelul a dou puncte de control: 1. Primul punct de control determin soarta piruvatului din mitocondrie: (#27) sub aciunea piruvat dehidrogenazei, piruvatul este degradat la acetil-CoA, care apoi va fi degradat total n ciclul Krebs; sub aciunea piruvat carboxilazei, piruvatul este transformat n oxalacetat, care se va angaja n procesul gluconeogenezei. n condiii de depleie glucidic, n ficat are loc o intensificare a degradrii acizilor grai (ficatul i obine energia pe aceast cale) crete formarea de acetil-CoA acest metabolit influeneaz, prin modulare alosteric, activitatea celor dou enzime de mai sus: - inhib piruvat dehidrogenaza scade degradarea piruvatului (n felul acesta are loc i diminuarea degradrii glucozei ca surs de energie); - activeaz piruvat carboxilaza determin orientarea piruvatului spre GNG. ntre procesul degradrii acizilor grai i gluconeogenez exist o relaie concretizat n faptul c degradarea acizilor grai favorizeaz gluconeogeneza: - acetil-CoA rezultat din acizii grai activeaz piruvat carboxilaza; - degradarea acizilor grai furnizeaz ATP-ul necesar n gluconeogenez. 2. Al doilea punct de control este situat la nivelul etapei de: transformare a fructozo-6-P n fructoz-1,6-P2 sub aciunea fosfofructokinazei-1 (n glicoliz); transformare a fructozo-1,6-P2 n fructoz-6-P sub aciunea fructozo-1,6-difosfatazei (n gluconeogenez). (#27) Aceste dou reacii opuse sunt reglate ntr-o manier coordonat i reciproc; acelai modulator alosteric (fructoz-2,6-disfosfat) influeneaz activitatea ambelor enzime, dar n sensuri opuse: - activeaz fosfofructokinaza-1 crete viteza glicolizei; - inhib fructozo-1,6-difosfataza scade viteza gluconeogenezei. Cantitatea de fructoz-2,6-difosfat n hepatocit este modulat de insulin i glucagon, acesta fiind un al doilea mecanism prin care se realizeaz reglarea hormonal a gluconeogenezei (pe lng fenomenul de inducie/represie a enzimelor cheie): - n condiii de abunden glucidic (post-prandial): crete secreia de insulin aceasta crete cantitatea de fructoz-2,6-disfosfat accelerarea glicolizei i ncetinirea GNG; - n condiii de depleie glucidic (inter-prandial): crete secreia de glucagon acesta scade cantitatea de fructoz-2,6-disfosfat ncetinirea glicolizei i accelerarea GNG.

10