1.

METABOLISM- NOIUNI INTRODUCTIVE

1.1.Introducere n studiul metabolismului intermediar

Organismele vii i asigur structura complex- care presupune meninerea unor
echilibre biochimice i funcionale - printr-un aport continuu de energie din exterior.
Aceast energie este preluat o dat cu alimentele din mediul nconjurtor iar
organismele vii au posibilitatea ca prin procese colective s elibereze i s stocheze
aceast energie chimic i s sintetizeze biomolecule complexe pornind de la cele
simple.
Totalitatea transformrilor compuilor chimici i a energiei din organismul viu
poart denumirea de metabolism iar prin metabolism intermediar se nelege ansamblul
proceselor biochimice care au loc dup absorbia intestinal a substanelor nutritive
provenite din alimente. Aceste procese biochimice presupun conversia materiei i
energiei prin secvene de reacii catalizate de enzime n care produsul unei reacii
enzimatice devine substrat pentru reacia urmtoare. Produii care rezult n aceste
reacii succesive pot fi metabolizai sau devin intermediari metabolici.
Cele dou direcii principale ale metabolismului intermediar sunt:
1.Catabolismul care cuprinde procesele prin care molecule complexe-glucide, lipide,
proteine- de natur endogen sau exogen sunt scindate treptat la molecule simple :
monoglucide, glicerol, acizi grai, aminoacizi. Acestea la rndul lor sunt degradate
oxidativ pn la bioxid de carbon i ap. n aceast etap energia liber care rezult este
captat sub form de adenozintrifosfat ( ATP) sau ali compui macroergici. Energia
chimic care se formeaz n procesele catabolice mai poate fi folosit n susinerea unor
procese fiziologice sau fizico- chimice cum ar fi contracia muscular, transportul activ
prin membrane, excitaia nervoas sau pentru unele procese anaerobe iar o mic parte
din energie este convertit n cldur. Etapele finale ale cii metabolice sunt
reprezentate de a. ciclul acizilor tricarboxilici b. catena de respiraie c.fosforilarea
oxidativ. n aceste etape acetilcoenzima A este degradat oxidativ la dioxid de carbon
i ap iar energia este stocat sub form de ATP.
2.Anabolismul cuprinde procesele de biosintez ale complexelor macromoleculare
(glucide, lipide, proteine, acizi nucleici etc) , pornind de la componeni mai simpli care
provin n primul rnd din alimente. Energia necesar proceselor anabolice este furnizat
de compui macroergici cum ar fi ATP sau indirect prin hidrogenul cu energie ridicat
din nicotinamid - adenindinucleotid fosfat (NADPH).
ntre procesele catabolice i cele anabolice exist un echilibru dinamic la nivel celular,
compoziia chimic a celulelor fiind meninut pe toat durata de via a acestora ntre
anumite limite ceea ce nseamn c viteza de sintez a biomoleculelor este egal cu
viteza de degradare a lor. Economisirea de metabolii i de energie reprezint condiii de
desfurare a proceselor biochimice componente ale metabolismului intermediar.
Unele ci anabolice i catabolice cuprind etape comune formate din reacii reversibile
care sunt catabolizate de enzime comune i la care particip metabolii comuni aa cum
este cazul gluconeogenezei i glicolizei din metabolismul glucidic.Aceste ci cuprind i
etape distincte formate din reacii ireversibile i care sunt catalizate de enzime
reglatoare.

1
 Echipamentul enzimatic care catalizeaz o anumit cale metabolic- anabolic sau
catabolic - are o localizare intracelular distinct. Astfel ,citosolul conine enzime
specifice urmtoarelor seturi de reacii: glicoliza, calea pentozofosfailor, biosinteza
acizilor grai. Echipamentul enzimatic care catalizeaz setul de reacii din ciclul acizilor
tricarboxilici ( ATC), fosforilarea oxidativ, -oxidarea acizilor grai ,formarea corpilor
cetonici este localizat n matricea mitocondrial.
Metabolismul se clasific n funcie de natura biomoleculei sau compusului
metabolizat:
a. metabolismul glucidic;
b. metabolismul lipidelor;
c. metabolismul proteinelor (incluznd aici i metabolismul nucleotidelor i acizilor
nucleici) ;
d.metabolismul hidromineral.
Reglarea metabolismului se realizeaz la mai multe nivele i cuprinde anumite
sisteme de reglare ,unele prin mecanisme specifice iar altele prin mecanisme
nespecifice.n molecula enzimei care controleaz o anumit reacie biochimic exist n
afara centrului activ al moleculei i centri alosterici unde se pot lega specii moleculare
care nu prezint analogie structural cu substratul ( numii efectori alosterici). Legarea
acestor efectori determin modificri conformaionale n macromolecula de enzim care
se transmit la distan , la centrul activ al enzimei i acioneaz n sensul activrii sau
inhibrii formrii complexului enzim-substrat. Aceti efectori alosterici joac un rol
important n reglarea i controlul proceselor biochimice.
Astfel ntr-un proces biochimic care decurge n mai multe etape (proces multi-
secvenial) , unul dintre produii finali poate aciona ca inhibitor alosteric pentru una
dintre enzime ( n schema de mai jos: S= substrat, P=produs de reacie, E=enzima ):

E1 E2 E3 En
S P1 P2 .... Pn

(-)

Reglarea proceselor metabolice se poate face i prin controlul genetic al vitezei

de biosintez al enzimei care catalizeaz o reacie biochimic sau prin controlul
vitezelor de intrare a biomoleculelor n celul datorit permeabilitii selective a
membranelor celulare pentru acetia.
Procesele metabolice n organismele animale sunt reglate prin intermediul
hormonilor. Astfel ,hormonii hipotalamici pot stimula sau inhiba secreia tropinelor
hipofizare. Eliberarea hormonilor hipotalamici i a tropinelor hipofizare este reglat prin
mecanism feed back de ctre concentraia plasmatic a hormonilor periferici Activitatea
unor glande endocrine cum este paratiroida sau pancreasul endocrin este reglat de
parametrul biologic pe care-l controleaz. Astfel ,eliberarea de insulin cu aciune
hipoglicemiant este declanat de creterea glicemiei.
Hormonii sunt activatori ai biosintezei la nivel celular, ndeplinind funcia de
efectori ai biosintezei enzimelor. n metabolismul lipidic , unii hormoni cum ar fi

2
catecolaminele stimuleaz lipoliza (mesagerul secundar este n acest caz AMP ciclic) n
timp ce alii (cum ar fi insulina) stimuleaz lipogeneza. n metabolismul glucidic
hormonii glucocorticosterozi faciliteaz conversia aminoacizilor n glucoz iar insulina
induce conversia glucozei n glicogen.

1.2.Oxidarea biologic a glucidelor, lipidelor i proteinelor

Biomoleculele cu structur complex de natur exogen cum ar fi poliglucidele,

proteinele sau lipidele nu pot fi utilizate de ctre organism dect dup o prealabil
conversie a lor n aparatul digestiv.Scindarea hidrolitic a acestor biomolecule este
realizat cu ajutorul echipamentului enzimatic prezent n sucul gastric, sucul duodenal,
intestinul subire i flora bacterian. n urma acestor transformri metabolice se obin
unitile componente ale acestor biomolecule complexe:monoglucide, glicerol,acizi
grai, aminoacizi. Aceste uniti componente sunt catabolizate la nivel celular prin
desfacerea treptat a legturilor C-C din fiecare compus cu formarea n final a unui
metabolit comun, acetilcoenzima A, care reprezint punctul de legtur catabolic i
anabolic din organism. Pornind de la acetilcoenzima A se pot sintetiza mai multe clase
de biomolecule. Degradarea aminoacizilor presupune obligatoriu i o etap de
ndeprtare a gruprii amino realizat prin transaminare sau deaminare
oxidativ.Catabolizarea unitilor structurale ( monoglucide, aminoacizi etc.) rezultate
prin hidroliz se face pe cale oxidativ , cu consum de oxigen iar acest proces este
denumit impropriu oxidare biologic.Din oxidarea acizilor grai rezult cele mai
importante cantiti de energie dar oxidarea glucidelor decurge mai rapid, fiind utilizat
deseori de ctre organismul animal pentru nevoile imediate de energie. Dioxidul de
carbon i apa reprezint produii finali ai oxidrii acetilcoenzimei A n ciclul ATC
cuplat cu catena de respiraie i fosforilare oxidativ. Dioxidul de carbon rezult prin
decarboxilarea unor acizi ( de exemplu acidul -cetoglutaric) n ciclul ATC. Apa rezult
n catena de respiraie pornind de la hidrogenul preluat de pe diferite substrate sub
form de coenzime n stare redus ( NADH , FADH 2) i oxigenul molecular. Prin
cuplarea catenei de respiraie cu fosforilarea oxidativ, energia care rezult n procesul
de formare al apei este nmagazinat n legturile macroergice ale ATP.
n schema de mai jos se red principalele etape n degradarea oxidativ a glucidelor,
lipidelor i proteinelor:

3
 Proteine Poliglucide Lipide

Aminoacizi Glucoza Acizi grasi

Piruvat

Acetil-CoA

Ciclul ATC 2 CO2

+
NAD+
NADH+H

O2 H2 O

ADP+Pi ATP
Degradarea oxidativ a glucidelor, lipidelor i proteinelor

1.3. Biomolecule macroergice

n organismele animale exist un grup de biomolecule specializate denumite compui
macroergici care sunt implicai n schimbul de energie, bilanul energetic n orice tip de
celule vii. Compuii macroergici i ndeplinesc aceast funcie prin susceptibilitatea lor
la hidroliz cnd se elibereaz o cantitate mare de energie (egal sau mai mare de 7
kcal/mol).
Un rol important ca furnizor de energie pentru multe procese biochimice i revine
sistemului adenilat ce cuprinde adenozintrifosfatul-ATP, adenozindifosfatul-ADP i
adenozinmonofosfatul-AMP i care funcioneaz n prezena ionilor de magneziu
(Mg2+) i fosfatului anorganic Pi (a se vedea i schema de mai jos):
NH2
N
N
O O O
_ N N
O P~O P~O P O CH2
- -
O O O- O

HO OH

AMP

ADP
Schema 1.3.1. Structura funcional a sistemului adenilat, ATP/ADP/AMP
4
 Fosforilarea la nivelul substratului i fosforilarea oxidativ reprezint cele mai
importante ci de sintez a ATP-ului.
Fosforilarea la nivelul substratului implic utilizarea imediat n scopul sintezei de ATP
a energiei eliberate n cursul unei reacii exergonice care face parte dintr-o secven
catabolic. Fosforilarea la nivelul substratului implic preluarea de Pi i asigur 10-12%
din necesarul de ATP al organismului animal.
Se cunosc trei reacii de fosforilare la nivelul substratului care opereaz n organismul
animal i anume:
a. n glicoliz, aldehida 3-fosfogliceric este convertit la acid 1,3-difosfogliceric
sub aciunea gliceraldehid-fosfat-dehidrogenazei (cu preluare de Pi). ntr-o etap
ulterioar, acidul 1,3-difosfogliceric este transformat sub aciunea
fosfogliceratkinazei n acid 3-fosfogliceric cu sinteza concomitent de ATP:
O NAD+ O
ADP
Pi COOH
C C~O P
H
HC OH HC OH HC OH
H2C O P NADH+H+ H2C O P ATP
H2C O P
Aldehid-3- Acid 1,3-difosfo- Acid 3-fosfo-
fosfo-gliceric gliceric gliceric

b. Tot n glicoliz, 2-fosfoenolpiruvatul este convertit la piruvat cu formarea unei

molecule de ATP. Aceast etap este precedat de obinerea 2-fosfoenolpiruvatului din
2-fosfoglicerat:

ADP
COOH COOH COOH
HC O P C O~ P C O
H2C OH H2O CH2 CH3
ATP
Acid 2-fosfo- Fosfoenol- Piruvat
gliceric piruvat
c.n ciclul ATC, prin decarboxilarea oxidativ a -cetoglutaratului la succinat se
sintetizeaz ATP. Aceast conversie se realizeaz prin dou reacii catalizate de -
cetoglutarat dehidrogenaza i respectiv succinil~CoA sintetaza:
COO- O
NAD+ CoA-SH GDP Pi
C O C ~ SCoA COOH
CH2 CH2 CH2
CH2 CO2 CH2 CoA-SH CH2
NADH+H+ GTP
COOH COOH COOH
Acid -ceto- Succinil ~ CoA Acid
glutaric succinic
Aceast fosforilare la nivel de substrat duce la sinteza de GTP pornind de la GDP i Pi.
Sistemul GDP/GTP este n corelaie cu sistemul ADP/ATP aa cum rezult i din
reacia de transfosforilare prezentat mai jos:

5
 GTP + ADP GDP + ATP
Fosforilarea oxidativ asigur aproximativ 80-90% din necesarul de ATP al
organismului animal. Oxidarea coenzimelor reduse (NADH, FADH 2) n catena de
respiraie este cuplat cu fixarea direct de fosfat anorganic (P i) la ADP, acest
mecanism de cuplare fiind prezentat mai departe.
n cursul diverselor procese biochimice, ATP-ul este scindat la ADP+ Pi sau la AMP i
acid pirofosforic care este hidrolizat mai departe la acid fosforic ,aa cum se exemplific
n reaciile de mai jos:

a.
HO CH2 P O CH2
O O

OH + ATP OH + ADP
HO OH HO OH
OH OH
Glucoza Glucozo-6-fosfat

Deoarece fosforilarea glucozei necesit mai puin de 7,3 kcal/mol, este suficient
scindarea hidrolitic a ATP-ului la ADP+ PI.
b. R-COOH + ATP + COA-SH R-CO~SCOA + AMP + PPi
Acid gras Acil~CoA
Sinteza acetil~CoA (forma activat a acizilor grai) necesit mai mult de 7,3 kcal/mol,
iar n acest caz scindarea hidrolitic a ATP-ului se face la AMP+PPi, acesta din urm
fiind hidrolizat rapid la dou resturi de fosfat anorganic (P i) sub aciunea unor
pirofosfataze specifice existente n toate tipurile de celule:
PPi + H2O 2 Pi
Adenilatkinaza este o enzim activ, prezent n toate celulele, care catalizeaz
conversia AMP la ADP printr-o reacie de transfosforilare:
AMP + ATP 2 ADP
Dac ATP-ul poate fi sintetizat din ADP i Pi , nu acelai lucru se poate spune despre
sinteza din AMP i PPi pentru care nu exist o enzim care s catalizeze aceast reacie.
Ali compui macroergici sunt cei din clasa guanidinfosfailor i anume creatinfosfatul
i argininfosfatul:
HN PO3H2
HN PO3H2 C NH
C NH NH
N CH3 CH2
CH2 CH2
COOH HC NH2
COOH
Creatinfosfat Argininfosfat

6
Pentru mamifere, creatinfosfatul are un rol important ca rezervor de grupri fosfat
macroergic la nivelul muchilor ,pentru a putea fi utilizat n timpul contraciei prin
intermediul ATP. Creatinfosfokinaza (CPK) este o enzim care catalizeaz sinteza
ATP-ului pornind de la creatinfosfat i ADP ntr-o reacie reversibil:

NH ~ P NH2
HN C + ADP HN C + ATP
N CH2 COOH N CH2 COOH
CH3 CH3
Creatinfosfat Creatin

n repaus, reacia merge de la dreapta la stnga i reprezint modalitatea de sintez a

creatinfosfatului. n muchii nevertebratelor, rolul de fosfagen al creatinfosfatului este
preluat de argininfosfat.Astfel de compui macroergici reprezint un rspuns la
asigurarea de durat a rezervei de energie n celule cu un consum foarte ridicat de ATP,
cum este cazul muchilor n contracie.
Sinteza de ATP este n funcie de necesitile energetice la nivel celular iar
controlul acestui proces se face cu ajutorul unor enzime alosterice a cror activitate este
dependent de concentraiile unor efectori ca AMP, ADP i ATP.
Mononucleotidele trifosforilate, altele dect ATP, au un rol important ndeosebi
n procese de biosintez. Astfel, guanozintrifosfatul (GTP) este implicat n biosinteza
proteinelor, citozintrifosfatul (CTP) n biosinteza fosfolipidelor, uridintrifosfatul (UTP)
n biosinteza glicogenului, glicosfingolipidelor etc.
Unele mecanisme de transmitere a informaiilor chimice, ndeosebi provenind de
la hormoni, presupun existena la nivelul membranelor plasmatice a unor proteine G
care au ca i componente GDP i GTP.
n tabelul de mai jos se d coninutul n energie liber (kcal/mol) corespunztoare
hidrolizei unor compui macroergici sau ale unor biomolecule fosforilate care nu sunt
macroergice.
Tabelul 1.3.1. Coninutul n energie liber (kcal/mol) corespunztoare
hidrolizei unor compui macroergici sau ale unor biomolecule fosforilate care nu
sunt macroergice
Biomolecule Tipul de legtur Energie

Acid fosfoenolpiruvic enol-fosfoesteric 14,8

Creatinfosfat fosfoamidic 10,3
Acetil~CoA tioesteric 7,5
ATP ( ADP + Pi) anhidridic 7,3
Glucozo-1-fosfat esteric 5,0
Glucozo-6-fosfat esteric 3,3
Glicerol-3-fosfat esteric 2,2

7
 Orice biomolecul macroergic fosforilat avnd o energie liber corespunztoare
hidrolizei sale mai mare de 7,3 kcal/mol este capabil ca printr-o reacie de
transfosforilare s converteasc ADP la ATP.
1.4.Ciclul acizilor tricarboxilici
1.4.1. Etapele ciclului ATC
Ciclul acizilor tricarboxilici sau ciclul lui Krebs este o cale amfibolic (se
implic att n procesele catabolice ct i n cele anabolice):
a. acetatul activat care rezult ca metabolit al diferitelor ci de utilizare a substanelor
nutritive (glucide, acizi grai i aminoacizi) este degradat printr-un ciclu de reacii n
scop energetic.
b. ciclul acizilor tricarboxilici furnizeaz intermediarii si pentru biosinteza multor
compui.
1. Introducerea acetatului sub form de acetilcoenzim A n ciclul Krebs se face prin
reacia de condensare cu acidul oxalilacetic n urma creia rezult acidul citric:
H3C CO ~ SCoA H2O H2C COOH
Acetil ~ CoA HO C COOH
+
O H2C COOH
HOOC C CH2 COOH CoA-SH
Acid oxalilacetic Acid citric
Reacia de mai sus este catalizat de citratsintetaz i este o condensare aldolic
ntre o component carbonilic (oxalilacetat) i una metilenic (acetil~CoA).
Labilizarea hidrogenului din poziia a acetil~CoA se datoreaz lipsei fenomenului de
mezomerie n tioesteri care conduce la efectul atrgtor de electroni al grupei CO-.
Succinil~CoA, un intermediar al ciclului Krebs i ATP-ul sunt inhibitori alosterici ai
citratsintetazei. n acest fel, o stare energetic ridicat n esuturi ,semnalat de
concentraii mari de ATP, duce la ncetinirea ritmului reaciilor incluse n ciclul ATC
prin inhibarea citratsintetazei.
2. Citratul este izomerizat n continuare la izocitrat sub aciunea cis-aconitazei i avnd
ca intermediar cis-aconitatul:
H2 C COOH HC COOH HO CH COOH
- H2 O - H2 O
HO C COOH C COOH HC COOH
+ H2 O + H2O
H2C COOH H2 C COOH H2C COOH
acidul citric acidul acidul
cis-aconitic izocitric
Izomerizarea acidului citric se realizeaz printr-o deshidratare urmat de o etap de
hidratare.
3.Acidul izocitric este decarboxilat oxidativ cu formarea acidului -cetoglutaric i CO2
sub aciunea izocitratdehidrogenazei, enzim reglatoare alosteric:

8
 NAD+ COOH
HO CH COOH C O
HC COOH CH2
H2 C COOH CO2 CH2
NADH+H+
COOH
Acidul izocitric Acidul -cetoglutaric
4. Acidul -cetoglutaric este decarboxilat oxidativ la succinil~coenzima A:
COOH COOH
NAD+ CoASH
C O CH2
CH2
CH2
CH2 CO2
NADH+H+ CO SCoA
COOH
Acid Succinil ~ CoA
-cetoglutaric

Decarboxilarea oxidativ a acidului -cetoglutaric este catalizat de complexul -

cetoglutarat dehidrogenaza care depinde de tiaminpirofosfat (TPP), acid lipoic,FAD i
NAD+. Produsul de reacie, succinil~CoA, este un compus macroergic, iar scindarea
legturii tioesterice este cuplat cu fosforilarea guanozin-difosfatului (GDP) care trece
n GTP (reacie de fosforilare a substratului):
COOH GDP COOH
CH2
CH2
+ CoASH
CH2 CH2
Pi
GTP COOH
CO SCoA
Acid succinic
Succinil-CoA

Conversia GTP la ATP se face sub aciunea enzimei nucleozid difosfatkinaza:

GTP + ADP GDP + ATP
-Cetoglutaratdehidrogenaza este inhibat de ATP, NADH i succinil~CoA.
5. Acidul succinic obinut n reacia precedent este convertit la acidul fumaric sub
aciunea succinatdehidrogenazei, o flavin-dehidrogenaz:

COOH FAD
CH2 HOOC CH
CH2 HC COOH
COOH FADH2
Acid succinic Acid fumaric

9
Aceast reacie este inhibat competitiv de concentraii mari de acid oxalilacetic, dar i
de acid malonic, un fals substrat.
6. Sub aciunea fumarazei, o enzim stereospecific, acidul fumaric este hidratat la acid
L-malic:
H2O COOH
HOOC CH HC OH
HC COOH CH2
H2O COOH
Acid fumaric Acid L-malic
7. Ciclul catabolizrii unei molecule de acetil~CoA se ncheie prin reacia de oxidare a
acidului L-malic la acid oxalilacetic:
COOH NAD+ COOH
HC OH C O
CH2 CH2
COOH NADH+H+ COOH
Acid L-malic Acid oxalilacetic
Reacia este catalizat de L-malatdehidrogenaza.
Ecuaia global a ciclului ATC este:
CH3CO~SCoA + 3 NAD + + FAD + GDP + 2H2O + Pi 2 CO2 + FADH 2 + 3 NADH
+ GTP + CoASH + 2 H+
Deci prin oxidarea acetil~CoA rezult 2 molecule de bioxid de carbon i patru
perechi de echivaleni reductori (3 NADH + 3 H + + FADH2) care sunt oxidai n lanul
respirator i care permite reluarea ciclului ATC. Condiia obligatorie n acest caz este
desfurarea acestui proces n condiii de aerobioz. Ciclul Krebs reprezint o cale
major de degradare a glucidelor, lipidelor i proteinelor cu scopul generrii de ATP,
dar poate furniza intermediari pentru diferite ci metabolice.
Intrarea n ciclul Krebs a aa-numiilor aminoacizi cetoformatori (fenilalanin,
leucin) se face prin acetil~CoA, la fel ca i pentru acizii grai care sunt degradai prin
-oxidare. Glucidele dar i unii aminoacizi furnizeaz i componenta oxalilacetat care
permite reluarea ciclului ATC. Disponibilitatea oxalilacetatului permite utilizarea
lipidelor n ciclul ATC.
Calea major de sintez a oxalilacetatului o reprezint carboxilarea piruvatului sub
aciunea piruvatcarboxiligazei:
CH3COCOOH + CO2 + ATP HOOCCH2COCOOH + ADP + Pi
Reacia se desfoar n mitocondrii, iar biotina este gruparea prostetic a
piruvatcarboxiligazei.
Aminoacizii glucoformatori se degradeaz pe ci proprii cu formarea unor
intermediari ai ciclului ATC.
La pH-ul celular, toi acizii formai n stare liber n ciclul ATC (citric, cis-aconitic,
izocitric, -cetoglutaric, etc.) se gsesc sub form de anioni.
Cele dou decarboxilri oxidative din ciclul Krebs catalizate de izocitratdehidrogenaz
respectiv -cetoglutaratdehidrogenaza sunt responsabile pentru cea mai mare parte din

10
bioxidul de carbon expirat de animale (volumul de CO 2 n litri/zi este de 30003500 n
cazul vacilor n perioada de lactaie i demonstreaz intensitatea acestei ci metabolice).
1.4.2.Bilanul energetic al ciclului Krebs. Cuplarea ciclului Krebs cu lanul respirator
i fosforilarea oxidativ permite oxidarea coenzimelor reduse (NADH, FADH 2) prin
care se genereaz ATP i este facilitat de localizarea intramitocondrial a
echipamentelor enzimatice specifice acestor procese.
Prin conversia izocitratului la -cetoglutarat sub aciunea NAD +
izocitratdehidrogenazei rezult un mol de NADH care duce n final la formarea a 3 moli
de ATP.
Prin decarboxilarea oxidativ a -cetoglutaratului la succinil~CoA sub aciunea -
cetoglutaratdehidrogenazei se formeaz un mol de NADH (=3 moli de ATP).
Dehidrogenarea malatului la oxalilacetat sub aciunea malatdehidrogenazei
genereaz un nou mol de NADH (= 3 moli de ATP).
Conversia succinatului la fumarat sub aciunea succinatdehidrogenazei genereaz
un mol de FADH2 (= 2 moli de ATP).
n conversia succinil~CoA la succinat se formeaz o legtur fosfat macroergic prin
fosforilare la nivelul substratului. Prin transfosforilare, molecula de GTP astfel format
este convertit la ATP.
Deci nsumnd numrul de moli de ATP formai prin catabolizarea unui mol de
acetil~CoA prin ciclul ATC continuat cu catena de respiraie cuplat cu fosforilarea
oxidativ se obine un total de 12 moli ATP.
1.4.3.Caracterul amfibolic al ciclului ATC.
Numeroase biomolecule i sintetizeaz scheletul hidrocarbonat pe seama unor
intermediari ai ciclului Krebs, ceea ce consacr acest ciclu ca pe o cale amfibolic
(catabolic i anabolic).Succinatul, intermediar al ciclului ATC, este antrenat n
biosinteza hemului, mioglobinei, citocromilor prin ciclul succinat-glicocol. Succinatul
este intermediar i n gluconeogeneza la rumegtoare.
Oxalilacetatul i -cetoglutaratul, cetoacizii formai n ciclul ATC, pot forma prin
transaminare sau aminare reductiv aminoacizii corespunztori, aspartatul i glutamatul.
Aspartatul este de asemenea un precursor n biosinteza pirimidinelor.
Prin reacii anaplerotice se neleg reaciile care permit furnizarea de intermediari
metabolici ai ciclului Krebs. Carboxilarea piruvatului este un exemplu de reacie
anaplerotic prin care se furnizeaz ciclului Krebs oxalilacetat n condiiile n care
mamiferelor le lipsete echipamentul enzimatic de conversie direct a acetil~CoA n
oxalilacetat. Reacii anaplerotice sunt considerate i transaminrile aspartatului i
glutamatului la oxalilacetat i respectiv -cetoglutarat:

Aspartat + piruvat oxalilacetat + alanin

Glutamat + piruvat -cetoglutarat + alanin

Glutamatdehidrogenaza catalizeaz urmtoarea reacie anaplerotic care furnizeaz -

cetoglutarat:

11
Glutamat + NAD + + H2O -cetoglutarat + NADH + H2O + NH 3
Reglarea ciclului ATC. Oxidarea acetatului activat n acest ciclu, dar i ritmul
oxidrilor n ciclul ATC sunt sensibile la ncrcarea energetic a celulei, la concentraia
de ATP. Sunt importante i semnalele FAD i NAD+ atunci cnd schimbul energetic
este mic. Controlul ciclului ATC este realizat prin mai multe mecanisme ce acioneaz
n cteva puncte de control care includ citratsintetaza, izocitratdehidrogenaza i -
cetoglutaratdehidrogenaza i au fost menionate la trecerea n revist a reaciilor acestui
ciclu.
1.4.4.Dereglri ale ciclului ATC. Unele otrvuri de membrane cum ar fi CCl4 pot s
afecteze randamentul de sintez al coenzimelor reduse (NADH, FADH2) cu consecine
imediate n sinteza de ATP (prin cuplarea cu lanul respirator i fosforilarea oxidativ)
i implicit instalarea unor tulburri funcionale inclusiv modificri structurale
degenerative.
n cetoza rumegtoarelor, insuficiena oxalilacetatului face ca s nu se mai
asigure raportul echimolar necesar reaciei cu acetil~CoA ,instalndu-se astfel o
disfuncie a mitocondriilor.
O privire de ansamblu asupra ciclului ATC este redat n schema 1.4.1.
NAD+ Acetil-CoA
8 Oxalil acetat
1
Malat NADH+H+ Citrat

7 2a
Fumarat
Cis-aconitat
FADH2
FAD 6 2b
Succinat

5 Izocitrat
GTP GDP +
NAD
Succinil ~ CoA 4
NAD+ 3
NADH+H+
CO2 -Cetoglutarat
CO2
NADH+H+
Schema 1.4.1.Principalele etape ale ciclului ATC (1-citratsintetaza, 2-aconitaza, 3-
izocitratdehidrogenaza, 4--cetoglutaratdehidrogenaza, 5-succinil-CoA tiokinaza,
6-succinatdehidrogenaza, 7-fumaraza, 8-malatdehidrogenaza).

1.5.Catena de respiraie i fosforilare oxidativ

Ciclul acizilor tricarboxilici i lanul respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ
reprezint ci comune de degradare a glucidelor, lipidelor i proteinelor. Coenzimele
reduse NADH i FADH 2 formate n glicoliz, oxidarea acizilor grai i ciclul ATC sunt

12
molecule bogate n energie iar hidrogenul pe care-l conin se gsete la un potenial
ridicat cuantificabil prin potenialul redox standard.
Prin transferul hidrogenului pe oxigen cu formarea apei se elibereaz o cantitate
mare de energie care poate fi utilizat la generarea de ATP. Reoxidarea coenzimelor
asigur continuitatea reaciilor din ciclul ATC dar i din alte ci metabolice care implic
dehidrogenri specifice.
Lanul respirator este etapa ultim a degradrii aerobe la organismele eucariote
prin care atomii de hidrogen i electronii (aa numiii echivaleni reductori) de la
coenzimele reduse sunt transferai la oxigen prin intermediul unor sisteme redox i a
unui echipament enzimatic specific:
NADH + H+ + 1/2 O 2 NAD + + H2O
FADH2 + 1/2 O 2 FAD + H2O
Fiecare sistem redox implicat n lanul respirator este caracterizat printr-o anumit
cdere de potenial.
Fosforilarea oxidativ este procesul prin care se genereaz ATP din transferul
echivalenilor reductori de la NADH sau FADH2 la oxigen i reprezint sursa major
de ATP n organismele aerobe.
Localizarea lanului respirator i fosforilrii oxidative. Ansamblul componentelor
lanului respirator i fosforilrii oxidative este localizat n membrana intern a
mitocondriei. Transferul de electroni de la coenzimele reduse (NADH, FADH 2) la
oxigenul molecular are loc prin intermediul componentelor lanului respirator (cum ar fi
citocromii)
1.5.1.Organizarea catenei de respiraie
Catena de respiraie este format din 4 complexe enzimatice legate prin doi
transportori de electroni mobili: coenzima Q i citocromul C.
Complexul I mai este denumit i complexul NADH-coenzima Q reductaza
cunoscut i sub numele de NADH-dehidrogenaza, Subunitile complexului I conin i
cteva heteroproteine cu fier neheminic i sulf notate cu FeS1, FeS2 etc, aceast ordine
corespunznd descreterii lui E0. Flavoproteina FPN ,avnd ca i coenzim
flavinmononucleotidul (FMN), este de asemenea o component a complexului I, fiind
implicat n preluarea hidrogenului de la coenzimele NADH.
Acceptorul de electroni pentru complexul I este coenzima Q numit i ubichinon
i notat Q.
Coenzima Q face legtura cu complexul III (complexul citocrom C reductaz). Tot
coenzima Q este implicat n transferul de electroni de la complexul II la complexul
III.
Complexul II mai este denumit i succinat-coenzima Q-reductaza i reprezint
punctul de intrare n catena de respiraie a hidrogenului de la succinat. Complexul II
include flavoproteina succinatdehidrogenaza (fiind aceeai enzim care particip i n
ciclul Krebs) cu coenzim de tip FAD. Tot n complexul II se mai gsesc cel puin trei
proteine cu fier i sulf.
Funcionarea catenei de respiraie se poate face prin ramura lung, adic atunci cnd
echivalenii de reducere intr n lanul respirator prin complexul I sau prin ramura
scurt, cnd intrarea echivalenilor se poate face prin complexul II.

13
 Complexul III este denumit i coenzima Q-citocrom c-reductaz. Electronii
primii de la complexele I i II sunt cedai complexului III prin intermediul coenzimei
Q. Ca grupri prostetice ale complexului III menionm citocromii de tip b i c precum
i o protein cu Fe i S.
Citocromii sunt heteroproteide avnd ca grupare prostetic Fe-porfirina IX, asemntor
hemului din mioglobin i hemoglobin. Citocromul C, de exemplu, este o
heteroproteid solubil, legat de membran pentru a ndeplini rolul de transportor de
electroni.

CH3
H3C CH S P
R
O
H 3C N CH3 T
E
N Fe2+ N I
N
N
H2C CH S
H2 C CH3
H3 C C H2 CH3
CH2
CH3
Schema 1.5.1. Structura citocromului C

n esen, rolul citocromilor n catena de respiraie este de acceptor al electronilor de la

partenerul aflat n amonte i cedarea acestora partenerului din dreapta:

e- Cit (Fe3+) e-

Cit (Fe2+)

Complexul IV numit i citocromoxidaz este acceptorul de electroni de la

citocromul C n stare redus pe care-i transfer la oxigenul molecular ca acceptor final.

14
Gruprile prostetice ale acestui complex sunt cuprul (Cu2+) i citocromii a i a3. O
imagine de ansamblu a lanului respirator este redat n schema 1.5.2:

NADH+H+ Succinat
Complex I Complex II
FPN (FMN) FPS (FAD)
Fe S Fe S
cit b 560
Fumarat
NAD+
(-0,32 V) Rotenon, amital,
pericidin

Coenzima Q (+0,04 V)
ATP

Complex III
F cit b 562
A
C
T ATP cit b 566
O Antimicin
R
Fe - S
D
E
cit C1
C
U
P citocrom C (+0,25 V)
L
A
R Complex IV
E Cu2+
ATP
1
cit a
(F1)

cit a 3
CN-, azide,
CO, H2S

1/2 O2 H2O (+0,32 V)

Schema 1.5.2. Complexele lanului respirator i fosforilrii oxidative

1.5.2.Calea transferului de electroni

Complexul I NADH-CoQ-reductaza (prin cuplare cu fosforilarea oxidativ)
catalizeaz urmtoarea reacie:

15
 ADP+Pi

NADH+H+ + CoQ NAD+ + CoQH2

ATP
Cuplarea lanului respirator cu fosforilarea oxidativ necesit eliberarea protonilor n
primele etape.
Inhibitorii transferului de electroni din complexul I sunt unele insecticide (rotenona),
antibiotice (antimicina A) sau barbiturice (amitalul).
Complexul II reprezint punctul de intrare n lanul respirator pentru electronii de la
succinat care sunt transferai la coenzima Q:
Succinat FPS(FAD) CoQH2

Fumarat FPS(FADH2) CoQ

Complexul III este acceptorul de electroni de la CoQ pe care-i transfer citocromului
C:
ADP+Pi

CoQH2 + 2 cit C (Fe3+) CoQ + 2 cit C (Fe2+) + 2 H+

ATP
Complexul IV (citocromoxidaza) este acceptorul de electroni de la citocromul c
i catalizeaz transferul acestora la oxigenul molecular pentru a forma n final ap:
ADP+Pi

O2 + 4 cit C(+2) + 4 H+ 4 cit C(+3) + 2 H2O

ATP
Sinteza de ATP este realizat de o protein cu structur complex format din 12-
13 subuniti i denumit factor de cuplare F1 care este localizat n membrana intern
mitocondrial. Principala component a complexului ATP-sintetaza este format din
cinci subuniti. Celelalte componente ale factorului de cuplare F1 au roluri n fixarea
de membrana mitocondrial sau de reglare ale unor procese.
Citocrom-oxidaza este inhibat de azide, oxidul de carbon i ionii CN-.
Ecuaia global a lanului respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ este:
NADH + H+ + 1/2 O 2 + 3 ADP + 3 Pi NAD+ + 3 ATP + 4 H2O
Dac ns introducerea echivalenilor de reducere n catena de respiraie se face
prin ramura scurt atunci ecuaia global a celor dou procese este:
FADH2 + 1/2 O 2 + 2 ADP + 2 Pi FAD + 2 ATP + 3 H2O
Din oxidarea n lanul respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ rezult
echivalena n ATP pentru formele reduse ale dehidrogenazelor:
1 mol NADH + H+ = 3 moli ATP
1 mol FADH2 = 2 moli ATP

16
 Oxidarea dehidrogenazelor depinde de concentraia substratelor, a ADP-ului i Pi
dar i de integritatea membranei mitocondriale i de aportul de oxigen.
-Oxidarea acizilor grai i ciclul Krebs reprezint surse importante de coenzime
reduse (NADH+H +, FADH 2, FMNH 2), dar numeroase alte substrate pot fi
dehidrogenate sub aciunea unor dehidrogenaze specifice.
Prin ct de fosforilare notat cu P/O se nelege raportul ntre numrul de moli
de ATP sintetizai i oxigenul consumat n lanul respirator i el este de 3/1 pentru
ramura lung i de 2/1 pentru ramura scurt.

1.5.3.Decuplani ai fosforilrii oxidative de catena de respiraie

Agenii capabili s stopeze utilizarea energiei eliberate n catena de respiraie

pentru fosforilarea ADP se numesc decuplani. Ca decuplani naturali amintim tiroxina
n concentraii peste limitele normale, care face ca energia n catena de respiraie s fie
disipat sub form de cldur. Animalele care hiberneaz au esuturi brune n care
catena de respiraie este decuplat de fosforilarea oxidativ (astfel de esuturi se gsesc
i la animalele nou nscute sau la ft). Un alt decuplant este 2,4-dinitrofenolul care,
fiind un transportor de protoni prin membran, duce la anularea gradientului de pH
implicat n cuplarea catenei de respiraie cu fosforilarea oxidativ.

1.5.4.Specii reactive de oxigen

n catena de oxidaie cuplat cu fosforilarea oxidativ apar alturi de oxigenul redus la

O2- i forme intermediare de oxigen activat datorit unor reduceri incomplete, aa
numitele specii reactive de oxigen (SRO). n peroxizomi i citosol exist de asemenea
sisteme care genereaz specii reactive de oxigen. Un exemplu de generare de anion
radical superoxid (O2- .) este oxidarea xantinei sub aciunea xantinoxidazei la acid uric:
Xantin +2 O2 + H2O Acid uric + 2 O2-. + 2 H+
Speciile reactive de oxigen (SRO) au o citotoxicitate deosebit ,interacionnd cu
acizii nucleici, lipide membranare, proteine etc. Aceast interaciune se concretizeaz
prin promovarea formrii de peroxizi ai bazelor nucleice sau acizilor grai constitueni
ai lipidelor din membranele celulare, cu efecte asupra permeabilitii membranelor,
activitii unor enzime etc.
Radicalul superoxid este transformat sub aciunea unei enzime denumit
superoxiddismutaz (SOD) n ap oxigenat, H2O2. (reacia a, vezi mai jos). Anionul
superoxid genereaz i un radical liber cu toxicitate mare, radicalul hidroxil (-OH,
reacia b):
(a) O2- . + O2- . +2 H+ H2O2 + O2
(b) O2- . + H2O 1/2 O2 + OH- + OH.
Catalaza i peroxidazele (inclusiv glutation-peroxidaza) sunt enzime prezente n
peroxizomi capabile s ndeprteze rapid H2O2 din celule:

17
 Catalaza

H2O2 H2O + 1/2 O2

Glutation peroxidaza

GSH G S S G

Glutation reductaza

Sistemul de aprare celular utilizeaz i sisteme antioxidante neenzimatice care

cuprind vitamine (A, E, C), provitamine (-carotin), peptide cum ar fi glutationul sau
metabolii ca acidul uric.
O serie de stri patologice cum ar fi tendina la hemoliz datorit deteriorrii
membranelor eritrocitelor, ischemia, malignizarea, afeciuni legate de vrsta naintat
etc se interpreteaz n prezent i prin aciunea speciilor reactive de oxigen care produc
efecte de autooxidare sau peroxidare.

18