Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Documents - Tips - Beta Caroten Spectrofotometric PDF
Documents - Tips - Beta Caroten Spectrofotometric PDF
A= D= E= lg I0/I = -lg T = L C
n care:
A = absorbana;
D = densitatea optic;
E = extincia;
I0 = intensitatea luminii incidente;
I = intensitatea luminii transmise;
T = transmitana;
L = grosimea stratului de absorbie (cm);
C = concentraia soluiei absorbante (moli/l);
= absorbtivitatea molar (constant caracteristic fiecrei substane absorbante).
Lungimea de und a luminii incidente este cea a culorii complementare a soluiei de analizat.
Legea Lambert- Beer este valabil n ntregul domeniu spectral, pentru orice lungime de und,
pentru orice mediu omogen n care scderea intensitii luminii se datoreaz numai absorbiei,
indiferent dac mediul absorbant este gaz, lichid sau soluie.
Pentru aceeai substan absorbant, ntr-un anumit domeniu de concentraie (C< 0,001 moli/l), i
n aceeai cuv, i L fiind constante se poate scrie:
A=KxC
Unde:
K = constant de proporionalitate K = x L
Se observ c absorbana este funcie de concentraie, fiind direct proporionale.
Prin reprezentarea grafic a absorbanei n funcie de concentraie (folosind diferite concentraii ale
substanei etalon), pentru o anumit lungime de und, la care substana de analizat are concentraie
maxim, se obine curba de calibrare. Cu ajutorul curbei de calibrare se poate afla concentraia
probei de analizat prin msurarea absorbanei la lungimea de und respectiv, absorban creia i
va corespunde o anumit valoare a concentraiei de pe curba de calibrare [74].Spectrofotometrul de
absorbie n ultraviolet i vizibil se compune din urmtoarele pri principale:
sursa de radiaii;
monocromatorul;
suportul pentru cuve;
detectorul;
amplificatorul;
nregistratorul
Sursa de radiaii este constituit dintr-un bec cu filament de wolfram pentrudomeniul vizibil i o
lamp de hidrogen pentru domeniul ultraviolet.
Monocromatorul i cuvele sunt confecionate din sticl, pentru domeniul vizibil, i din
cuar, pentru domeniul ultraviolet.
Dozarea beta-carotenului total se bazeaz pe msurarea spectrofotometric a intensitii culorii
galbene caracteristice soluiilor sale, n intervalul lungimilor de und 300- 540 nm.
Sunt doua metode de dozare:
1. Beta- carotenul se izoleaz prin extracie, dup saponificarea prealabil a substanelor lipidice.
Carotenoizii se separ prin cromatografie pe coloan, iar coninutul n beta- caroten se stabilete
prin msurarea extinciei soluiei respective.
2. Extractia carotenoizilor totali in benzen si determinarea concentratiei prin citirea extinctiei
probei si folosirea curbei de etalonare pentru sol de beta caroten in benzen. Se determina de fapt
total carotenoizi exprimati in beta caroten
Tehnic de lucru:
Se cntresc 0,15-0,3 g prob de ulei catina se introduce ntr-un balon cu fund rotund. Peste proba
se introduc 100 ml benzen i se refluxeaz pe baia de ap timp de 30-60 min.
Se rcete i se filtreaz proba apoi se aduce la semn la balon cotat de 100 ml cu benzen.
Se msoar absorbana la spectrofotometru la de 460 nm fata de benzen
Concentraia n -caroten se determin prin raportarea la curba etalon a -caroten-ului,
Curba de etalonare se realizeaza astfel:
In trei baloane cotate de 25 ml se pipeteaz 0,1; 0,2 i 0,3 ml soluie de -caroten (s.r.) 0,01% n
benzen . Se completeaz volumul baloanelor la semn cu benzen i se agit puternic. Absorbanele
obinute se msoar la spectrofotometru, la =460 nm, n cuva de l cm, fa de benzen. Coninutul
n -caroten din ulei se calculeaz dup formula:
unde:
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
concentratia absorbanta
0,5 0,1367
1 0,2435
1,5 0,3722
2 0,4807
2,5 0,6068
3 0,7316
Iti propun sa luam 5 grame de suc (omogenizat in prealabil) facem refluxarea in balon cu benzen,
filtram si citim extinctia care trebuie sa se inscrie in intervalul curbei etalon.
Metoda 1
Calcul:
Pentru calculul concentraiei de beta-caroten s-a folosit formula:
-caroten = ; mg/100g
Unde:
A = absorbana extractului de beta-caroten la lungimea de und de 430 nm;
F = factorul de pant care este media factorilor de pant pentru fiecare concentraie din scara
etalon i se calculeaz cu formula:
F=
Unde:
F1 = A1 / c1; F2 = A2 / c2; F3= a3 / c3; F4 = A4 / c4; F5 = A5 / c5; F6 = A6 / C6;
A1, A2, A3, A4, A5, A6 sunt absorbanele corespunztoare celor 6 concentraii (c1-c6) cu care
s-a realizat scara etalon;
V = volumul la care s-a adus extractul (50 ml);F= 4,77
M = masa de ulei luat n lucru (g);
Dup extracie, spectrofotometrare i efectuarea calculelor s-au obinut rezultatele 23,3 mg/100 g