Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Omul a folosit fermentaţiile din timpurile străvechi, când el nu avea nici un fel de
cunoştinţe despre ceea ce le producea, căci capacitatea lui de a cunoaşte şi înţelege lumea
înconjurătoare era atât de redusă.
Omul cavernelor a descoperit repede că o bucată de carne ce a stat câteva zile înainte de a
fi consumată este mai plăcută la gust decât cea mâncată după uciderea animalului. El a devenit
conştient că din grăunţe şi fructe se pot prepara băuturi cu efecte euforice asupra stării de spirit.
Maturarea cărnii şi prepararea băuturilor alcoolice au fost primele fermentaţii utilizate de omul
primitiv. În acele timpuri bineînţeles că fermentaţiile erau considerate ca un anumit fel de proces
mistic. Avea să mai treacă mult timp până când se va şti că de fapt se profita de acţiunea prea
puţin vizibilelor microorganisme.
Deci ignorând existenţa lor, numai pe baza observaţiei şi experienţei, omul vechi învaţă
să pună la lucru micile creaturi. Vechea meserie şi chiar arta fabricării brânzeturilor implică
fermentarea laptelui sau a smântânii. Vreme de mii de ani, sosurile de soia din China şi Japonia
(încă folosite) se făceau prin fermentarea păstăilor de soia. Timp de secole popoarele balcanice
au îndrăgit pe lângă războaie, şi laptele fermentat sub formă de iaurt, în timp ce membrii
triburilor din Asia Centrală consumau cu plăcere lapte acru de cămilă (kumiss). Pâinea, a cărei
obţinere este la fel de străveche ca agricultura însăşi, implică dospirea - o fermentaţie a unei
drojdii. Felii de pâine au fost descoperite în piramidele egiptene construite acum 6000 de ani.
Descoperirea fermentaţiei alcoolice pornind de la sucul dulce al fructelor (în special din
struguri) este atât de străveche, încât vechii greci credeau că vinul a fost inventat de zeul
Dionisos, care l-a dăruit oamenilor spre veşnica lor bucurie. Prepararea berii este numai cu puţin
„mai tânără” decât obţinerea vinului. O tablă babiloniană de argilă datând din anul 6000 î. Cr.,
descoperită în anul 1981, descrie modul de obţinere a berii, iar o altă tablă asiriană din anul 2000
î. Cr. listează berea printre produsele pe care Noe le-a luat cu sine la potop în Arca sa.
Documente egiptene din timpul celei de-a 4-a dinastii (cca. 2500 î.Cr.) descriu de asemenea
fermentarea berii; în timp ce chinezii făceau “kui”-bere de orez, indienii din America îl
întimpinau pe Columb cu bere de porumb. Acum mai bine de 3000 de ani chinezii tratau infecţii
ale pielii cu preparate din ciuperci microscopice crescute pe sos închegat de soia, iar indienii din
America Centrală tratau din timpuri străvechi rănile infectate cu preparate fungice.
În timpul Evului Mediu, în special în marile mănăstiri creştine ale Occidentului,
experimentatori pasionaţi au învăţat cum să perfecţioneze tehnicile şi să îmbunătăţească gustul
pâinii, berii, vinului, şampaniei şi al altor băuturi alcoolice tari, sau au preparat brânzeturi
fermentate. Omul continua însă să ignore existenţa harnicelor şi utilelor microorganisme.
De-abia olandezul Van Leeuwenhoek descoperă în 1680 existenţa lumii microbilor,
utilizând microscoape simple, de fapt un fel de lupe mai perfecţionate, dar de o calitate mai bună
decât cea a microscoapelor compuse existând de la sfârşitul secolului al XVI-lea. El a descris la
Academia Regală din Londra existenţa unor animale minuscule în formă de sfere, bastoane sau
spiralate în apa de râu, în decocturile de fân, în salivă, şi chiar prezintă “globulele”, ce se mişcau
în mustul de la fabricarea berii.
Legată mai întâi de progresele tehnice ale aparaturii de observaţie, apoi pregătită de
progresele din chimia organică şi fiziologie, avântul „biologiei microorganismelor”- al
disciplinei actuale cunoscute sub numele de microbiologie, s-a produs în a 2-a jumătate a
secolului al XIX-lea, dominată de geniul lui Pasteur, ale cărui lucrări vor revoluţiona medicina,
chirurgia, industria, agricultura.
În 1857 Pasteur dovedeşte că fermentaţia alcoolică este realizată de către drojdii, care
sunt descrise ca celule vii. În plus Pasteur demonstrează că anumite maladii sunt cauzate de
aceste minuscule fiinţe vii. El defineşte fermentaţia ca „viaţa fără aer” şi descoperirile lui
marchează concomitent apariţia microbiologiei medicale şi a microbiologiei industriale.
Microbiologia industrială (tehnică) reprezintă un compartiment al biotehnologiei care are
ca scop obținerea pe cale industrială a diferitor produse necesare, cu participarea nemijlocită a
diferitor microorganisme. Astfel, în industria alimentară pentru obținerea produselor alimentare
se folosesc organisme de tip procariot – bacteriile și organisme de tip eucariot – drojdiile și
mucegaiurile.
BACTERIILE
Tabelu
l1
Structura Funcţia
Perete celular Conferă forma bacteriei şi are rol de protecţie
Membrană plasmatică Barieră permeabilă selectivă, rol în transport, situs
al unor procese metabolice (respiraţie, fotosinteză)
Spaţiu periplasmic Conţine enzime hidrolitice şi proteine implicate în
procesele de nutriţie şi consum
Nucleoid Localizarea materialului genetic (ADN)
Ribozomi Sinteza proteinelor
Incluziuni Depozitarea rezervelor de carbon, fosfat şi alte
substanţe
Vacuole de gaz Flotare în medii acvatice
Capsulă şi strat mucos Rezistenţă la fagocitoză, aderenţă la substrat
Pili şi fimbrii Aderenţă la substrat, conjugare între bacterii
Flagel Motilitate
Endospor Supravieţuire în condiţii nefavorabile
Peretele celular este una din cele mai importante structuri ale celulei
procariote. Cu excepţia mycoplasmelor şi a unor archaebacterii, cele mai
multe bacterii au pereţi celulari groşi, care le conferă forma şi le protejează
de liza osmotică şi de diferiţi compuşi toxici.. Peretele celular al unor bacterii
patogene conţine substanţe care contribuie la patogenitate şi este de
asemenea sediul acţiunii unor antibiotice.
În urma stabilirii metodei de colorare prin tehnica Gram, în 1884,
bacteriile au fost clasificate în doua grupe majore : bacterii Gram pozitive,
care se colorează in violet şi bacterii Gram negative care au culoarea roz prin
aplicarea acestei tehnici. Diferenţele structurale ale pereţilor celulari pentru
aceste grupe de bacterii au fost demonstrate şi prin microscopia electronică.
Astfel, peretele celular al bacteriilor Gram (+) constă dintr-un strat omogen
de peptidoglican (sau mureină), cu grosime între 20-80 nm, avậnd spre
interior membrana plasmatica.(fig ). Spre deosebire de acesta, peretele
celular al bacteriilor G (-) este mai complex, fiind alcătuit dintr-un strat de
peptidoglican de 1-3 nm înconjurat la exterior de o membrană externă de 7-
8 nm grosime. (fig ). Între membrana plasmatică şi stratul de peptidoglican
există un spaţiu periplasmic, mult mai gros în cazul bacteriilor G (-). Acest
spaţiu conţine proteine implicate în metabolizarea şi transportul nutrienţilor.
Structura peptidoglicanului. Peptidoglicanul sau mureina este un polimer
enorm compus din mai multe subunităţi identice, conţinậnd doi derivaţi ai
glucozei : N-acetilglucozamina şi acidul N-acetilmuramic (eterul lactic al N-
acetilglucozaminei) precum şi câţiva aminoacizi diferiţi, trei dintre ei - acidul
D-glutamic, D-alanina şi acidul mezo-diaminopimelic, de natură neproteică.
Reţeaua acestui polimer este constituită din resturi de N-acetilglucozamină şi
acid N-acetilmuramic ; grupările carboxil ale acidului N-acetilmuramic sunt
legate printr-un lanţ peptidic format din patru D- şi L-aminoacizi : L-alanina,
D-alanina, acidul D-glutamic, D-glutamina sau acidul mezo-diaminopimelic.
În unele bacterii se întậlneşte L-lizina în locul acidului mezo-diaminopimelic.
Lanţurile subunităţilor de peptidoglican sunt unite prin punţi polipeptidice ce
conţin aceşti aminoacizi fie în mod direct, fie prin intermediul unor punţi
peptidice, formate de exemplu din resturi de glicină. Rezultă astfel un enorm
sac de natură peptidoglicanică, ca o retea.
Fig.2 Structura peptidoglicanului
C OLORAŢIA G RAM
P ILII ŞI FIMBRIILE
Multe bacterii G(-) prezintă apendici scurţi, mai subţiri decật flagelii şi
neimplicaţi în motilitate, numiţi în mod uzual fimbrii. Aceştia pot fi în număr
de 1000, vizibili doar la microscopul electronic.Fimbriile sunt structuri
tubulare cu lungime variabilă(1-20μm), alcătuite dintr-un număr variabil de
subunităţi reprezentate de moleculele de fimbrilină, asamblate după o
simetrie helicală. Fimbriile au rol în creşterea suprafeţei active pentru
absorbţia de substanţe nutritive, în aderenţa bacteriilor la substratu; solid şi
în virulenţă, în cazul germenilor patogeni.
Pilii sunt apendici filamentoşi flexibili prezenţi pe suprafaţa celulelor în
număr mai mic (max. 10/celulă), implicaţi în procesele de conjugare
bacteriană. Au o lungime de pậnă la 20 μm şi un diametru mai mare decật al
fimbriilor, fiind formaţi dintr-o fosfoglicoproteină numită pilină, aşezată
helical. Pilii asigură legătura directă dintre celulele bacteriene de sex opus
acţionậnd ca o ‘conductă’ în transferul de material genetic – ADN
cromozomal.
F LAGELUL
Multe bacterii mobile prezintă unul sau mai mulţi apendici cu rol în
locomoţie, reprezentaţi de structuri subţiri, rigide, cu o lungime de 15-20 m
şi 20 nm grosime. Bacteriile diferă din punct de vedere al modului de
distribuţie a flagelilor, putậnd fi: monotriche (cu un singur flagel), amfitriche
(cu cậte un singur flagel la cei doi poli), lofotriche (cu un mănunchi de flageli
la unul sau la ambele capete) şi peritriche (flageli repartizaţi uniform pe
toată suprafaţa).
Tehnicile de microscopie electronică au demonstrat că flagelul este
alcătuit din trei părţi principale: filament, corp bazal şi cậrlig. Filamentul este
un cilindru rigid format dintr-o proteină numită flagelină. Cậrligul, puţin mai
gros decật filamentul, este alcătuit din mai multe tipuri de subunităţi
proteice şi leagă filamentul de corpul bazal. Acesta este partea cea mai
complexă a flagelului. În cazul celor mai multe bacterii G(-), corpul bazal are
patru inele conectate la un cilindru central sau ax în timp ce bacteriile G(+)
au doar două inele ale corpului bazal, unul conectat la membrana plasmatică
şi altul la peptidoglican.
Fig.6 Flagelul
Sinteza flagelului este un proces complex care implică cel puţin 20-30
de gene.
Direcţia de rotaţie a flagelului determină natura mişcării bacteriei.
Filamentul flagelului, pus în mişcare de motorul rotativ se roteşte rapid,
învậrtindu-se în jurul propriului ax, propulsậnd în felul acesta celula. Rotaţia
în sens « antiorar » a flagelului asigură deplasarea celulei în linie dreaptă, iar
cea în sens « antiorar », rostogolirea.
M EMBRANA PLASMATICĂ A BACTERIILOR
Fig. 7
E NDOSPORUL BACTERIAN
Tabelul 2
Deosebiri privind caracteristicile endosporului şi celulei vegetative
Zarnea
Caracteristici Celula vegetativă Spor
Structură celulă bacteriană core, cortex, înveliş
sporal
Colorabilitate Gram Gram pozitivă numai prin tehnici
speciale
Refringenţă absentă foarte mare
Rezistenţă la căldură mică de aprox. 10.000 ori mai
mare
Rezistenţă la radiaţii mică de aprox. 100 ori mai
mare
Rezistenţă la acizi şi mică mare
alte substanţe
chimice
Rezistenţă la sensibilă rezistent
acţiunea lizozimului
Concentraţia în ioni scăzută mare
Ca+
Acid dipicolinic absent prezent constant
Incluziuni de poli-β- prezente absente
hidroxibutirat
Aminoacizi cu sulf cantitate mică cantitate mare
Polizaharide cantitate mare cantitate foarte mică
Activitate enzimatică intensă slabă
Metabolism (consum ridicat foarte slab sau absent
de O2)
Sinteză de prezentă absentă
macromolecule
ARNm prezent constant absent sau în cantitate
mică
Tabelul 3
Caractere Gram pozitive Gram negative
Perete celular Gros, aspect neted Subţire, cutat
Componenţa în Număr mic Număr mare
aminoacizi în
peretele celular
Prezenţa toxinelor Absente Prezente constant
Necesar în nutrienţi Complex la majoritatea Mai puţin complex, cu
speciilor unele excepţii
Sensibilitatea la Relativ ridicată Relativ scăzută
antibiotice
Efectul detergenţilor Creştere oprită, celule Creştere încetinită, liză
anionici lizate moderată
Liză cu lizozim Uşor lizate Mai rezistente la liză
Dizolvare în 1% KOH Nu se dizolvă Se dizolvă
Cristal-violet- Mai sensibile Puţin sensibile
bacteriostatic
Fig.10 Pseudomonas
o Genul Acetobacter cuprinde bacterii care produc
fermentaţia acetică, prin care alcolul etilic este
transformat în acid acetic ; sunt utilizate la obţinerea
industrială a oţetului (A. Aceti, pasteurianum); unele
tulpini (A. xylinum) pot sintetiza polizaharide (glucan).
Fig.11 Acetobacter
Fig.12 Xanthomonas
Zymomonas
Fig.13 Halobacterium
Fig.14 Cellulomonas
Fig.15 Streptococcus
Fig.16 Lactobacillus
o Bacteriile din genul Pediococcus sunt utilizate la
obţinerea de produse din carne fermentate.
Fig.17 Pediococcus
Fig.18 Leuconostoc
2. Familia Propionbacteriaceae este reprezentată de bacterii care
produc fermentaţia propionică.
o Genul Propionbacterium este utilizat la fabricarea
brânzeturilor tip Schweitzer şi Ementhal, în panificaţie şi
în biosinteza vitaminei B12.
Fig.19 Propionbacterium
DROJDII
I MPORTANŢA DROJDIILOR
M EDIUL DE VIAŢĂ
Învelişurile celulare
Peretele celular şi membrana plasmatică sunt învelişurile celulei de
drojdie, având rol de delimitare, protecţie şi participând la toate procesele
fiziologice fundamentale care se desfăşoară la nivel celular.
Peretele celular
Peretele celular al levurilor, denumit de fiziologi regiunea metabolică
externă a celulei, reprezintă circa 1/10 din volumul celulei şi aproximativ 15%
din substanţa uscată a acesteia. Este un înveliş tare, flexibil, elastic, rezistent
la acţiunea unor factori fizici, chimici şi biologici, cu următoarele funcţii:
înveleşte şi protejează protoplastul, participă la schimburile de substanţe cu
mediul ambiant, controlează rata de creştere a celulei.
Peretele celular al drojdiilor are o structură fizico-chimică şi o
arhitectură specifice, care pot varia în funcţie de specie, stadiul ontogenetic
sau factorii de mediu.
Peretele celular este un complex biochimic format din polizaharide şi
alte tipuri de substanţe (proteine, lipide, fosfaţi). Glucanul, manoproteinele şi
chitina reprezintă peste 90% din substanţa uscată a peretelui celular, alături
de care sunt prezente cantităţi mici de lipide, enzime, cationi divalenţi şi apă.
Dintre polizaharide, cele mai importante sunt glucanul şi mananul.
Glucanul este principalul polizaharid al peretelui celular la drojdii, având o
structură ramificată, ce prezintă legături glucozidice -(1-3) şi -(1-6).
Molecula de glucan din peretele de S. cerevisiae este ramificată şi formată
dintr-un lanţ axial în care resturile de D-glucopiranoză sunt legate -(1-6) şi
din catene laterale cu legături -(1-3). Moleculele de glucan se asociază în
subunităţi microfibrilare, care, la rậndul lor sunt organizate sub forma unei
reţele, fapt ce sugerează principalul rol al glucanului, acela de schelet.
Mananul este un alt component major al peretelui celular, fiind un
polimer al manozei, care conţine câteva resturi de N-glucozamină şi o
anumită cantitate de fosfat constant legat la o peptidă.. Molecula sa, foarte
ramificată, este formată dintr-un ax central, constituit dintr-o catenă lungă,
în care resturile de manoză sunt legate -(1-6) şi din lanţuri laterale cu
legături -(1-2) şi -(1-3). Acest polizaharid mare este ataşat la o peptidă.
Mare parte din glucan şi manan este asociată cu proteinele, formând
complexe macromoleculare glicoproteice.
Alături de polizaharide, prezenţa proteinelor parietale a fost de multă
vreme dovedită, ca parte integrantă a peretilor celulari, cu rol structural,
catalitic, morfogenetic, de receptori. Proteinele structurale ale peretelui se
pare că au rol în conexiunea diferitelor polizaharide parietale. Aceste
proteine au un conţinut crescut de sulf, sub formă de punţi disulfurice -S-S- şi
de grupări sulfhidrilice -SH. Tot la nivelul peretelui celular sunt localizate
unele enzime ca de ex.: invertaza, fosfataza acidă, aminopeptidaza,
proteaze, precum şi unele enzime implicate în transportul substanţelor în
celulă.
În pereții celulari de drojdii există şi o cantitate relativ mică de chitină,
care este o aminopolizaharidă cu molecule liniare constituite în exclusivitate
din resturi de N-acetilglucozamină legate -(1-4). La drojdiile care
înmuguresc, chitina este localizată în cea mai mare parte sau chiar în
exclusivitate la nivelul cicatricei mugurale. Chitina are rol structural, fiind
implicată în rezistenţa peretelui la acţiunea factorilor fizici, chimici şi
biologici.
Lipidele, cu rol de stabilizare a edificiului peretelui celular, sunt
reprezentate de mono-, di- şi trigliceride, esteri sterolici, acizi graşi liberi şi
fosfolipide.
Pe lângă apă, peretele celular mai conţine unii cationi divalenţi (de
ex.emplu Ca2+ şi Mg2+) şi ionul fosfat, care se leagă de diferite componente
organice parietale, realizând punţi complexante.
Peretele celular de drojdie are o grosime cuprinsă între 150 şi 250 nm,
iar în imaginile electrono-microscopice ale ultrasecţiunilor apare bi- sau
tristratificat, mai rar multistratificat. Stratul extern are o suprafaţă rugoasă,
în compoziţia sa predominând -mananul legat de proteine. Stratul intern are
suprafaţa ornamentată cu numeroase riduri ce urmăresc invaginările
plasmalemei şi a căror mărime este dependentă de stadiul de maturare a
celulei şi de compozi¡ia mediului de cultură. Acest strat este format din -
glucan, formând complexe cu proteine.
Prin îndepărtarea pe cale enzimatică a peretelui celular, rezultă
protoplaştii care, datorită totipotenţei, a capacităţii lor de a fuziona, au putut
fi utilizaţi în manipulările genetice şi în obţinerea prin fuziune a hibrizilor cu
importanţă teoretică şi practică.
Membrana plasmatică reprezintă cel de al doilea înveliş al celulei de
drojdie, ce aderă strâns pe toată suprafaţa sa la peretele celular, cu care
cooperează funcţional. Plasmalema poate fi vizualizată la microscopul
electronic sub forma unui strat trilamelar lipoproteic, fiind descrisă de Singer
şi Nicolson în modelul mozaicului fluid (1972). Membrana plasmatică
(plasmalema) are o grosime de 8-9 nm, prezentând, la drojdiile mature,
invaginări şanţiforme, care se modifică cu vârsta. Alte formaţiuni
plasmalemale sunt câmpurile paracristaline de particule intramembranare,
reliefate pe imaginile electrono-microscopice.
Membrana plasmatică este o structură de natură lipoproteică: lipidele
reprezintă 23-30%, iar proteinele 30-33%, raportul proteine/lipide variind în
funcţie de specie. Dintre lipide predomină monogliceridele, digliceridele,
trigliceridele, sterolii, acizii graşi liberi, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina,
fosfatidilserina şi fosfatidilinozitolul. Acestea formează matricea membranei
şi au rol în procesele de permeabilitate. Proteinele plasmatice pot fi
clasificate, din punct de vedere funcţional în trei categorii: proteine
structurale (cu implicaţii în organizarea edificiului arhitectural al
plasmalemei), informaţionale (receptori) şi cu rol de biocatalizatori (enzime).
În cadrul membranei plasmatice există o serie de enzime specifice: ATP-aze
Mg2+ dependente, fosfokinaze, hidrolaze etc. Plasmalema este sediul unor
enzime implicate în biosinteza polizaharidelor parietale (glucansintetaze,
chitinsintetaze), în glicoliză şi în fosforilarea oxidativă (oxidoreductaze,
citocromi). Glucidele, legate covalent de lipide şi proteine, au rol de anticorpi
de suprafaţă (receptori imunologici), receptori pentru diferiţi stimuli fizici şi
chimici etc. Dintre glucidele izolate din membrana levurilor fac parte
manoza, glucoza, fructoza, N-acetilglucozamina.
Alături de aceste componente majore - lipide, proteine şi glucide –
există şi apă în procent de aproximativ 30%, ioni minerali, unele nucleotide
etc., de obicei cu rol structural.
Membrana plasmatică a drojdiilor are rol în transportul substanţelor
între celulă şi mediul ambiant, în reacţiile imunologice de suprafaţă, în
reglarea procesului de creştere celular şi în sinteza unor componenţi chimici
din structura peretelui celular. Membrana este implicată atât în asimilarea
nutrienţilor din mediul extern cât şi în eliminarea în mediu a produşilor de
metabolism cumeste etanolul, prin diferite procedee de transport, cu sau
fără consum de energie, uneori în prezenţa unor sisteme enzimatice cu
funcţii transportoare.
Matricea citoplasmatică (hialoplasma sau citosolul) reprezintă
substanţa fundamentală a celulei de drojdie, în care sunt înglobate
organitele celulare, împreună cu care formează citoplasma. Citosolul este
un mediu preponderent apos, apa reprezentând între 70 şi 85% (în celulele
aflate în faza exponenţială de creştere), în care substanţele componente se
află în stare de sol sau gel, formând micele coloidale. Dintre substanţele
organice predomină proteinele cu rol plastic sau de catalizatori, lipidele
simple şi complexe (mai ales cu rol plastic) şi glucidele (mai adesea
substanţe de rezervă cu rol energetic), macromolecule de ARN (mesager, de
transfer şi ribozomal), ARN killer, ADN extracromozomial din plasmide.
Prezenţa plasmidelor citoplasmatice a fost evidenţiată la unele specii de
Saccharomyces, sub forma unor minimolecule de ADN. Sărurile minerale (2-
3%) se găsesc sub formă de ioni (Mg2+, Ca2+, Na+, K+, SO42-, NO3-, PO43-) sau
combinate cu diferite molecule organice. În interiorul citoplasmei se află un
citoschelet, alcătuit din trei tipuri de filamente: microtubuli, microfilamente şi
filamente intermediare, cu rol de susţinere a organitelor celulare şi în
controlul formei celulei.
Celulele de drojdie pot sintetiza, în anumite faze ale creşterii lor,
anumite substanţe în cantităţi ce depăşesc cu mult necesităţile plastice şi
energetice. Aceste substanţe se vor acumula în matricea citoplasmatică sub
formă de incluziuni de rezervă de mai multe tipuri, dintre care cele mai
des întâlnite sunt granulele de glicogen şi globulele lipidice.
Granulele de glicogen se prezintă sub forma unor corpusculi sferici,
cu diametrul de circa 40 nm, electrono-denşi, reprezentând principala
substanţă de rezervă a celulei. Pot fi puse în evidenţă cu soluţie Lugol
(iod/iodură de potasiu), care colorează glicogenul în brun-roşcat.
Sferozomii (oleiozomii) sunt globule lipidice, delimitate de o
membrană simplă, mai abundente în celulele aflate în faza staţionară de
creştere. Sferozomii au dimensiuni mai mari (100-800 nm) şi conţin
fosfolipide, acizi graşi liberi şi gliceride ce pot fi metabolizaţi în condiţii de
înfometare a celulei.
Citoplasma prezintă aspecte diferite în funcţie de vậrsta celulei : la
celulele tinere are aspect omogen şi ocupă întreg conţinutul celulei ca o
matrice uniform structurată, în timp ce la celulele bătrậne este neomogenă
şi refringentă din cauza vacuolelor şi incluziunilor, care pot apărea ca nişte
grămezi de unităţi globulare cu diametrul de cậteva sute de Å.
Nucleul
Celulele normale de drojdie sunt uninucleate, având un nucleu de
formă sferică sau ovală, cu o poziţie de obicei excentrică datorită
vacuomului. Nucleul are dimensiuni de 1-2 m şi reprezintă spaţiul genetic în
care are loc stocarea, replicarea şi transcrierea informaţiei genetice celulare.
Nucleul este format din următoarele părţi: înveliş, nucleoplasmă,
cromonemată, nucleol şi aparat mitotic.
Învelişul nucleului este format din două membrane cu traiect paralel,
separate printr-un spaţiu perinuclear, prezentând mai mulţi pori, care asigură
legătura dintre nucleu şi citosol. La exterior, membrana este în continuitate
structurală cu membrana reticulului endoplasmic rugos şi, asemănător
acestuia, suprafaţa sa este acoperită cu ribozomi.
Nucleoplasma nucleulului de drojdii reprezintă mediul în care sunt
înglobate cromonemata, nucleolul şi fusul intranuclear, reprezentând un
complex chimic în care apa este predominantă.
Cromonemata (cromozomii) este reprezentată de macromoleculele de
ADN dublu catenar, libere sau aflate în interacţiune cu proteinele bazice
numite histone. În faza de reproducere, cromozomii sunt formaţi din două
cromatide surori, care sunt separate de-a lungul lor, cu excepţia unui punct
de ataşare numit centromer; capetele cromatidelor sunt denumite telomeri.
Nucleolul este o formaţiune cupiformă sau semilunară, cu poziţie
excentrică, ataşată învelişului nuclear, cu conţinut ridicat de ARN şi ADN, cu
rol în biosinteza ribozomilor.
Fusul intranuclear de diviziune este o formaţiune implicată în
segregarea cromatidelor (în mitoză) sau a omologilor (în meioză) şi
deplasarea celor două seturi de cromozomi omologi spre polii celulei. Este
alcătuit din microtubuli ataşaţi de corpii polari ai fusului (SPB), care
controlează funcţionarea sa.
Reticulul endoplasmic a fost evidenţiat la toate tipurile de drojdii,
sub forma unor cisterne şi tubuli răspậndiţi în spaţiul celular, uneori în
continuitate cu membrana externă a învelişului nuclear şi cu tonoplasma
vacuolei centrale, putậnd fi rugos sau neted (după cum are sau nu ribozomi
ataşaţi de suprafaţa sa). Reticulul endoplasmic este sediul unor complexe
enzimatice (citocromoxidaza, enzime ale lanţului transportor de electroni) şi
are rol în biogeneza sferozomilor, vacuolelor, corpilor Golgi; participă la
expansiunea învelişului nuclear şi a plasmalemei în diferite etape de
dezvoltare a celulei, este implicat în extensia peretelui celular. Reticulul
endoplasmic este o parte componentă a sistemului de endomembrane şi
contribuie la procesul de geneză a lizozomilor, sferozomilor, vacuolelor şi
corpilor Golgi. De asemenea, RE are rol în expansiunea învelişului nuclear şi
a membranei plasmatice.
Aparatul Golgi este un sistem de endomembrane, cu un pronunţat
polimorfism structural, avậnd funcţii de sinteză, acumulare, transport şi
secreţie. Aparatul Golgi constituie locul de sinteză a unora dintre polimerii
glucidici parietali, de ex. mananul, avậnd totodată funcţia de sortare şi
dirijare a proteinelor şi componentelor învelişurilor celulare spre locul lor de
destinaţie, asigurậnd creşterea peretelui de drojdie. De asemenea, prezenţa
glicoziltransferazelor demonstrează rolul AG în reacţiile de glicozilare a unor
proteine şi lipide produse în citosol. Aparatul Golgi este implicat în formarea
lizozomilor şi a vacuolelor, contribuie la espansiunea plasmalemei şi la
reciclarea unor complexe funcţionale ale acesteia.
Ribozomii sunt caracteristici celulelor eucariote, avậnd coeficientul de
sedimentare 80S, alcătuiţi din ARN ribozomal şi proteine, cu o organizare
relativ simplă (o subunitate 40S şi o subunitate 60S). Ribozomii joacă un rol
cheie în traducerea mesajului genetic conţinut în ARNm, fiind implicaţi în
procesul de biosinteză a proteinelor celulare. Ribozomii, distribuiţi în toată
masa citoplasmatică, sunt liberi sau ataşaţi membranei reticulului
endoplasmic ca şi membranei externe a învelişului nuclear. În celulele cu
creştere rapidă, mai mult de 90% din ribozomi se află sub formă de asociaţii
numite polizomi. Există, de asemenea, ribozomi 70S în mitocondrii
(mitoribozomi), diseminaţi în condrioplasmă sau ataşaţi de membrana
internă a acestor organite. Densitatea ribozomilor pare a fi corelată cu rata
de creştere şi poate fi modificată de influenţa unor factori ai mediului
ambiant.
Lizozomii sunt structuri veziculare, înconjurate de o membrană
simplă, bogate în hidrolaze (peste 40 tipuri de enzime) cu pH optim acid.
Complexul enzimatic lizozomal poate degrada orice componentă chimică
celulară, compartimentarea enzimelor litice fiind neapărat necesară pentru
limitarea şi controlul proceselor litice. În stare normală, enzimele lizozomale
sunt inactive, ele acţionậnd doar în situaţii limită, care determină alterarea
intrgrităţii membranei lizozomale. Astfel, acest complex enzimatic litic se
activează sub influenţa unor factori fizici (îngheţ, dezgheţ, şoc osmotic),
chimici (toxine bacteriene) sau biologici (agenţi patogeni), şi catalizează
hidroliza substraturilor corespunzatoare.
Enzima marker a lizozomilor este fosfataza acidă, alături de care au
mai fost identificate: glicozidaze, ribonucleaza acidă, dezoxiribonucleaza
acidă, trehalaza etc. Lizozomii specifici drojdiilor ce conţin trehalază sunt
numiţi trehalozomi şi au rol în degradarea acestui glucid.
Lizozomii drojdiilor, asemănător cu cei ai altor grupe de organisme
fungale, au rol de degradare a materialelor exogene (heterofagie) sau a
diverselor componente celulare (autofagie). În condiţii optime de viaţă, ca şi
în perioada de creştere exponentială a culturilor, predomină funcţia
heterofagică, iar autofagia se intensifică pe o dată cu maturizarea celulelor,
manifestậndu-se în celulele bătrậne sau în lipsa nutrienţilor. În acest ultim
caz celula moare prin autoliză.
Sistemul vacuolar, uşor de vizualizat la microscopul optic, este
alcătuit din una sau mai multe vacuole de diferite dimensiuni., cu un
diametru cuprins între 0,1 şi 3 μm. în strậnsă corelaţie cu stadiul celular.
Celulele din culturile fazei exponenţiale de creştere şi mugurii nou formaţi
conţin numeroase vacuole mici (0,1-0,2 μm ), sferice sau ovoidale. În faza
stationară în celule se observă vacuole mai mari şi în număr mai redus. La
începutul ciclului celular procesul se desfăşoară în sens invers: unica vacuolă
centrală se fragmentează în numeroase vacuole mici.
Vacuolele sunt delimitate de o membrană simplă - tonoplasma - şi
conţin o mare cantitate de apă, aminoacizi bazici (lizină, arginină, histidină),
proteine, lipide, glucide, purine, acid uric, polifosfaţi, ioni (K+, Na+) etc.
Vacuolele mai conţin enzime cum sunt: fosfataza acidă, glicozidaze,
proteaze, ribonucleaze şi esteraze. Vacuolele joacă un rol esenţial în reglarea
presiunii osmotice intracelulare, în hidroliza enzimatică a unor proteine şi
lipide, în depozitarea unor substanţe, în asigurarea stabilităţii chimice a
citoplasmei.
Peroxizomii sunt structuri sferice sau ovale, cu diametrul de 0,1-0,8
m, delimitate de o membrana simplă. Peroxizomii conţin enzime din clasa
oxidoreductazelor implicate în reacţii de formare sau descompunere a H2O2.
Apa oxigenată rezultată în urma rectiilor catalizate de enzimele lizozomale
este utilizată pentru oxidarea unor substanţe (alcooli, fenoli, acid formic,
formaldehidă) în prezenţa catalazei, enzimă caracteristică a lizozomilor.
Peroxizomii au rol în detoxificare, în adaptarea celulei de drojdie la condiţii de
aerobioză, în degradarea acizilor graşi şi a apei oxigenate, în ciclul
glioxilatului.
Mitocondria (condriomul)
Studiile de microscopie fotonică şi electronică au demonstrat marea
mobilitate, plasticitate şi flexibilitate a condriomului drojdiilor. Numărul
mitocondriilor variază de la mai puţin de 10 în celulele cu creştere rapidă la
peste 50 în celulele din faza stationară, în timp ce ascosporii prezintă o
singură mitocondrie puternic ramificată. Mitocondriile suferă o permanente
fuziuni şi fisiuni, fiind în permanenţă redistribuite în cadrul unui sistem
mitocondrial fluid, în funcţie de factorii de mediu şi vậrsta celulei. Astfel,
celulele din faza stationară de creştere prezintă mitocondrii de obicei mici,
sferice sau ovale, în timp ce celulele din celelalte stadii de creştere conţin
mitocondrii elongate, sinuoase, adesea ramificate. La majoritatea celulelor
de drojdii s-a constatat prezenţa unei mitocondrii mult mai voluminoase şi cu
o organizare mai complexă decật restul, numită mitocondrie gigantică,
puternic ramificată. De asemenea, în timpul înmuguririi s-a constatat o
deplasare a mitocondriilor către mugure, pậnă la formarea deplină a septului.
Mitocondria este alcatuită dintr-o membrană dublă care înconjoară
substanţa fundamentală, condrioplasma. Stratul intern al membranei
invaginează şi formează un sistem de criste cu o organizare extrem de
labilă, în funcţie de capacitatea respiratorie a celulei: mitocondriile celulelor
aflate în faza exponenţială, în condiţii aerobe, posedă un număr mare de
criste, bine dezvoltate. La nivelul membranei interne mitocondriale sunt
localizate enzime de catabolism implicate în ciclul Krebs, în -oxidarea
acizilor graşi, în fosforilarea oxidativă, în sinteza de ATP . Condrioplasma
conţine un număr mare de ribozomi de dimensiuni mai mici decat cei
citoplasmatici (70S), macromolecule de ADN mitocondrial, alături de o
cantitate relativ mare de apă (aprox. 70%), proteine, lipide şi o gamă largă
de molecule mici ce reprezintă substraturi sau cofactori enzimatici.
Mitocondriile reprezintă « uzina energetică » a celulei, în interiorul lor
desfăşurậndu-se reacţii generatoare de ATP în timpul respiraţiei celulare.
R EPRODUCEREA DROJDIILOR
R EPRODUCEREA ASEXUATĂ
Fig.20 Mitoza
Reproducerea drojdiilor prin sporulare
Tabelul 4
Diviziune Familie / subfamilie Gen Specii
clasa / ordin importante
Ascomycotin Saccharomycetacea
a/ e
Hemiascomyc
etes
Schizosaccharomycet Schizosaccharom Schiz. pombe
oidae yces Schiz.
acidovorax
Saccharomycetoidae Debaryomyces D. hansenii
Hansenula H. anomala
Kluyveromyces K. lactis
K. fragilis
Pichia P.
membranefacie
ns
P. fermentans
Saccharomyces S. cerevisiae
S.
carlsbergensis
S. bayanus
Saccharomycopsi S. fibuligera
s
Torulaspora T. delbrueki
Zigosaccharomyc Z. rouxii
es
Nadsonioideae Hanseniaspora H. apiculata
Saccharomycode S. ludwigii
s
Lipomycetoideae Lipomyces
Basidiomycot Filobasidiaceae Fillobasidiella
ina
Ustilaginales
Deuteromyco Cryptococcaceae Brettanomyces B. intermedius
tina
Candida C. utilis
C. tropicalis
C. mycoderma
C. robusta
Cryptococcus C. neoformans
Kloeckera K. apiculata
K. magna
Phaffia P. rhodosima
Rhodotorula R. rubra
R. glutinis
Trichosporon T. cutaneum
Sporobolomycetace Sporobolomyces Sp. roseus
ae
Fig. 24
Fig.33
Kluyveromyces
Fig.35 S. fibuligera
Genul Schizosaccharomyces cuprinde specii de drojdie care se
reproduc prin sciziune, produc 4 – 8 ascospori per ască. Au formă cilindrică
sau ovală. Dintre acestea, S. pombe este xerofită, rezistă la conservanţi,
producând alterarea siropurilor de zahăr. Este utilizată pentru obţinerea
romului şi a băuturii numită arak.
Fig.36
S. pombe
Fig.37 Z. rouxii
MUCEGAIURI
R ĂSPÂNDIREA MUCEGAIURILOR
I MPORTANŢA MUCEGAIURILOR
Reticul
endoplasmatic Perete celular
Membrană
Septum plasmatică
Mitocondrie
Aparat Golgi
Spaţiu Nucleu
periplasmic Nucleol
Vaucolă Ribozomi
Fig. 38
R EPRODUCEREA MUCEGAIURILOR
R EPRODUCEREA ASEXUATĂ
R EPRODUCEREA SEXUATĂ
Fig.39 M. miehei
Genul Rhizopus (11 specii) se caracterizează prin formarea de
sporangi mari, cu columelă semisferică (numită apofiză), fără
collar după ruperea membranei. Spre deosebire de aspectul
coloniilor de Mucor care sunt mai fine, mai mici, coloniile de
Rhizopus au un aspect mai viguros, cu hife groase şi organe de
fructificaţie observabile uneori cu ochiul liber, sub forma unor
puncte negre. Pe preparatele microscopice, la speciile de
Rhizopus se pot observa hife speciale numite rizoizi cu rol de
susţinere şi absorbţie a nutrienţilor, precum şi hife asemănătoare
unor lăstari micelieni, numite stoloni. Stolonii, la început cu o
poziţie erectă, se arcuiesc şi ajung din nou pe substrat şi
formează rizoizii. Stolonii au rol în extinderea rapidă a coloniilor
acestui mucegai. Specia Rhizopus stolonifer (R. nigricans) este
răspậndită pe alimente, pe fructe şi legume, pe pâine, pe toate
produsele bogate în zaharuri. Unele specii de Rhizopus pot fi
utilizate în biotehnologiile de obţinere a acidului fumaric, a
enzimelor amilolitice, în prepararea unor alimente tradiţionale
asiatice (tempeh, sufu).
Fig.40 Rhizopus
Din această clasă mai fac parte următoarele genuri : Zygorhynchus,
Absidia, Cunninghamella, Mortierella, Blackeslea, Syncephalastrum,
Pilobolus, Phycomyces.
Diviziunea Ascomycota cuprinde fungi din clasa Ascomycetes sau
fungi producători de ască (sac fungi), care se reproduc asexuat şi sexuat prin
ascospori. Multe specii din acest grup prezintă importanţă pentru activitatea
umană ; cele mai multe mucegaiuri de diferite culori (roşii, brune, albastre-
verzui) ce pot determina alterarea produselor alimentare fac parte din
Ascomycetes. De asemenea, acestei clase îi aparţin unele drojdii, unele
ciuperci cu pălărie (Morchella esculenta, Tuber brumale) şi trufele.
Neurospora crassa (mucegaiul roz al pâinii) face parte din Ascomycetes şi
reprezintă unul dintre cei mai utilizaţi fungi pentru studiile genetice şi
biochimice. Din clasa Ascomycetes genul cel mai des întâlnit în producția de
alimente este :
Genul Monascus cuprinde specii de mucegai capabile să
sintetizeze pigmenţi alimentari de culoare roşie
(monascorubramina, rubropunctamina), oranj
(monascorubrina, rubropunctatina) şi galbeni (monascina,
ankaflavina), unele enzime cu activitate în special amilolitică,
să producă fermentaţia alcoolică a substraturilor dulci (specii
folosite în ţari asiatice la prepararea vinului de orez – ang-
kak).
Fig.42 A. oryzae
Genul Penicillium cuprinde aproximativ 450 specii caracterizate
prin reproducere exclusiv asexuată, realizată printr-un aparat
reproducător format din ram, metule, fialide şi conidiospori, în
formă de pensulă. În cadrul genului există specii producătoare de
antibiotice – penicilinele – P. chrysogenum, P. notatum, de
enzime hidrolitice sau utilizate drept culturi starter în industria
brânzeturilor cu mucegai – P. camemberti, P. roqueforti şi în
industria salamurilor maturate crude – P. nalgiovense.