Procesarea si prezentarea antigenului

Celulele prezentatoare de antigen

Limfocitele T nu pot recunoaste antigene native

Limfocitele T recunosc fragmente de antigene procesate si prezentate de celulele prezentatoare de antigen

Limfocitele T nu recunosc antigene (Ag) native

Legare directa prin intermediul imunoglobulinelor de suprafata (BCR B cell receptor)

T
Receptorul pentru Ag al limfocitului T nu leaga direct Ag-ul (TCR T cell receptor)

YYY Y Y Y Y Y
Y

B B B B BB B B

Y Y Y Y Y Y
Proliferare si producere de anticorpi specifici (raspuns imun umoral)

Nu se declanseaza raspuns imun celular. Limfocitele T nu prolifereaza. Nu se produc citokine.

Pentru a putea fi recunoscute de limfocitele T antigenele trebuie sa fie procesate

Ag solubil, Ag nativ nativ atasat de suprafata celulara

Peptide solubile derivate din Ag

Nu se genereaza raspuns celular T

Nu se genereaza raspuns celular T

Nu se genereaza raspuns celular T

TCR

Peptide antigenice prezentate de celule prin intermediul moleculelor MHC

Peptide antigenice la suprafata celulara

PROCESAREA ANTIGENULUI
Nu se genereaza raspuns celular T

Raspuns celular T!!!

Pentru a putea fi recunoscute de limfocitele T antigenele trebuie v sa fie procesate Procesarea are loc -in citosol (antigenele endogene) sau -in veziculele caii endocitice (antigenele exogene)
Activarea limfocitelor T necesita interactiunea dintre receptorul pentru antigen al celulei T (TCR) si un complex format dintr-o molecula MHC self si un peptid antigenic (complex Ag/MHC). Peptidele antigenice pot proveni fie din antigene endogene, fie din antigene exogene. In interiorul celulelor exista doua compartimente majore separate de membrane. - citoplasma, care comunica cu nucleul prin porii din membrana nucleara - sistemul vezicular, care include reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi, endozomii, lizozomii, etc. Acest sistem este in contact cu fluidul extracelular (ex. endozomii preiau material extracelular si il introduc in sistemul vezicular).

Celulele prezentatoare de antigen APC (Antigen Presenting Cells)

Dat fiind faptul ca majoritatea celulelor din organism au pe suprafata fie molecule MHC I, fie MHC II, care pot prezenta peptide limfocitelor T, toate ar trebui denumite celule prezentatoare de antigen.
Prin conventie, insa, aceasta denumire revine doar celulelor care exprima molecule MHC de clasa II si prezinta antigenul limfocitului T CD4+ (APC profesionale), in timp ce acele celule care prezinta un antigen in cupa MHC I limfocitelor T CD8+ sunt denumite celule tinta.

Celulele prezentatoare de antigen APC (Antigen Presenting Cells)

Celulele prezentatoare de antigen profesionale

Exprima molecule MHC de clasa II Prezinta antigene exogene Limfocitului T helper CD4+

Limfocitele B Macrofagele Celule dendritice

Celulele prezentatoare de antigen Celulele prezentatoare de antigen

APC (Antigen Presenting Cells)

Celulele tinta Exprima molecule MHC de clasa I Prezinta antigene endogene limfocitului T citotoxic CD8+ Majoritatea celulelor nucleate + trombocitele

Generarea liganzilor pentru limfocitele T Procesarea are loc -in citosol (antigenele endogene) sau -in veziculele caii endocitice (antigenele exogene)
Agentii infectiosi se pot replica in unul din cele doua compartimente intracelulare: -virusurile si chiar unele bacterii se replica in citoplasma -cea mai mare parte a bacteriilor patogene si unii paraziti eucarioti se replica in sistemul vezicular. Pentru a dezvolta un raspuns imun eficient fata de microorganismele patogene este necesar ca limfocitele T sa detecteze prezenta structurilor straine in ambele compartimente intracelulare si, totodata, este necesar ca limfocitele T sa poata discrimina intre cele doua compartimente.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T

Generarea peptidelor presupune modificarea proteinei native, proces numit procesarea antigenului, iar expunerea peptidelor pe suprafata celulara, in contextul moleculelor MHC self se numeste prezentarea antigenului.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T

Moleculele MHC clasa I transporta pe suprafata celulelor peptide provenite din patogeni endogeni, prezenti in citosol; complexul peptid/MHC I exprimat pe membrana celulara va fi recunoscut de catre limfocitul T CD8+ (limfocit citotoxic CTL = cytotoxic T lymphocyte). Moleculele MHC clasa II transporta peptide derivate din patogeni exogeni, ajunsi in sistemul vezicular; complexul peptid/MHC II de pe suprafata celulei va fi recunoscut de un limfocit T CD4+ (limfocit helper).

Generarea liganzilor pentru limfocitele T

Moleculele MHC clasa I transporta pe suprafata celulelor peptide provenite din patogeni endogeni, prezenti in citosol; complexul peptid/MHC I exprimat pe membrana celulara va fi recunoscut de catre limfocitul T CD8+ (limfocit citotoxic CTL = cytotoxic T lymphocyte). Moleculele MHC clasa II transporta peptide derivate din patogeni exogeni, ajunsi in sistemul vezicular; complexul peptid/MHC II de pe suprafata celulei va fi recunoscut de un limfocit T CD4+ (limfocit helper).

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+

PRELUARE
Antigenele/ patogenii sunt deja in interiorul celulei (virusuri, proteine virale sintetizate in celula gazda, bacterii intracelulare)

DEGRADARE
Antigenele sintetizate in citopasma sunt degradate proteolitic in interiorul unei structuri denumite PROTEAZOM

FORMAREA COMPLEXULUI Ag-MHC

Incarcarea peptidelor antigenice in cupa MHC I

PREZENTARE
Complexele Ag-MHC sunt transportate la suprafata pentru a fi recunoscute de limfocitele T CD8+

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+

PRELUARE Antigenele/ patogenii sunt deja in interiorul celulei (virusuri, proteine virale sintetizate in celula gazda, bacterii intracelulare)
Antigenele endogene pot proveni de la virusuri care paraziteaza o celula, folosindu-i astfel masinaria de sinteza, pentru a-si fabrica propriile proteine. Odata cu proteinele proprii, celula infectata viral sintetizeaza si proteine virale. Sinteza proteinelor self si non-self, inclusiv a moleculelor MHC I si II se realizeaza pe fata citosolica a reticulului endoplasmatic (RE), de unde sunt translocate in lumenul RE.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Degradarea antigenului DEGRADAREA

Proteinele citoplasmatice sunt degradate prin intermediul unui complex proteazic multicatalitic, denumit proteazom. La nivelul acestui compex proteazic proteinele sunt degradate, iar peptidele rezultate sunt eliberate in citoplasma.

Proteazomul are o structura cilindrica, fiind format din 28 de subunitati, grupate in 4 inele. Nu se cunoaste modul in care proteazomul degradeaza proteinele citoplasmatice. Este posibil ca proteina sa treaca prin centrul structurii cilindrice, dar nu exista dovezi directe in acest sens.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Formarea complexului Ag-MHC

Reticul endoplasmic

MHC clasa I

CITOSOL

Peptidele antigenice produse in citoplasma vor trebui transportate in lumenul reticulului endoplasmic (RE) pentru a fi incarcate in cupa MHC I

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Formarea complexului Ag-MHC

Lumenul RE Lumen of ER
Peptide

Membrana RE ER membrane Cytosol Citosol

Antigene peptidice degradate in proteazom Peptid Peptide

Dupa degradarea enzimatica de la nivelul proteazomului, peptidele generate, sunt transportate activ in lumenul RE, de catre niste molecule transportoare, numite TAP-1 si TAP-2 (Transporters associated with Antigen Processing), prezente ca heterodimer la nivelul membranei reticulului.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Formarea complexului Ag-MHC

Lumenul RE Lumen of ER
Peptid Peptide

Membrana RE ER membrane Cytosol Citosol

Peptide

Dupa degradarea enzimatica de la nivelul proteazomului, peptidele generate, sunt transportate activ in lumenul RE, de catre niste molecule transportoare, numite TAP-1 si TAP-2 (Transporters associated with Antigen Processing), prezente ca heterodimer la nivelul membranei reticulului.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Formarea complexului Ag-MHC

Lumenul RE Lumen of ER
Peptide

Membrana RE ER membrane Cytosol Citosol

Peptid Peptide

Dupa degradarea enzimatica de la nivelul proteazomului, peptidele generate, sunt transportate activ in lumenul RE, de catre niste molecule transportoare, numite TAP-1 si TAP-2 (Transporters associated with Antigen Processing), prezente ca heterodimer la nivelul membranei reticulului.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Formarea complexului Ag-MHC

Lumenul RE Lumen of ER
Peptid Peptide

Membrana RE ER membrane Cytosol Citosol

Peptide

Dupa degradarea enzimatica de la nivelul proteazomului, peptidele generate, sunt transportate activ in lumenul RE, de catre niste molecule transportoare, numite TAP-1 si TAP-2 (Transporters associated with Antigen Processing), prezente ca heterodimer la nivelul membranei reticulului.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Formarea complexului Ag-MHC

RE

Peptide Peptid

Peptide

Calnexina se leaga de lantul al moleculei de MHC clasa I, pentru o stabiliza, pana la legarea 2microglobulinei

2-microglobulina se leaga si stabilizeaza molecula de MHC de clasa I

Peptidele citoplasmatice sunt incarcate in cupa MHC I, iar complexul devine compact, stabil Tapasina, calreticulina, TAP 1 si 2 participa la formarea si stabilizarea complexului

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD8+ Prezentarea la suprafata celulara

Complexul Ag-MHC I este exportat la suprafata membranara pentru a fi prezentat limfocitelor T CD8+

Complexul MHC care are cupa goala este trimis in lizozomi pentru a fi degradat Ajunse in lumenul RE, peptidele sunt preluate de catre moleculele MHC I care asteapta intr-o forma partial pliata. In absenta peptidelor, moleculele MHC I sunt instabile si suceptibile la degradare in RE. Complexele formate prin asocierea moleculelor MHC I si peptide sunt eliminate din RE intr-o vezicula si transportate la suprafata celulei, unde vor interactiona cu limfocitele T CD8+.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD4+

PRELUARE
Preluarea antigenului in interiorul veziculelor citoplasmatice: mediata de imunoglobuline membranare (limfocitele B), fagocitoza (macrofage), pinocitoza (celule dendritice)

DEGRADARE
Antigenele exogene sunt degradate in interiorul endozomilor si lizozomilor prin intermediul enzimelor proteolitice

FORMAREA COMPLEXULUI Ag-MHC II

Incarcarea peptidelor antigenice in cupa MHC II

PREZENTARE
Complexele Ag-MHC II sunt transportate la suprafata pentru a fi recunoscute de limfocitele T CD4+

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD4+ Preluarea antigenului

Preluarea antigenului mediata de imunoglobuline membranare

Fagocitoza

Pinocitoza

Fagocitoza mediata de receptorii pentru complement

Fagocitoza mediata de receptori Fc

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD4+ Degradarea antigenului

Suprafata celulara
Preluare

Endozomi

Cresterea aciditatii (scaderea pH-lui)

Scaderea pH-lui duce la activarea enzimelor proteolitice: catepsina B, D si L

Enzimele proteolitice (proteazele) degradeaza antigenele in peptide de cca 24 aminoacizi

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD4+ Lantul invariant

RE

Este necesar ca proteinele self nou-sintetizate sa fie impiedicate sa se lege in cupa moleculelor imature de MHC II.

Pentru ca exista riscul asocierii moleculelor MHC II cu peptide self sau cu cele derivate din antigene citoplasmatice (destinate asocierii cu MHC I), cupele MHC II vor fi ocupate, temporar, de o molecula, numita lantul Ii (lantul invariant).

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD4+ Formarea complexului MHC II-Ag

Suprafata celulara
Preluare

Endozomi

Complexele MHC II-lant Ii sunt preluate in vezicule transportoare (complex Golgi). In drumul lor spre suprafata celulei, veziculele ce contin complexele MHC II-lant Ii fuzioneaza cu veziculele ce contin peptidele generate prin procesarea antigenului exogen.

Generarea liganzilor pentru limfocitele T CD4+ Formarea complexului MHC II-Ag

Suprafata celulara
Preluare

Endozomi

Peptidul care se potriveste cel mai bine va inlocui lantul Ii din cupa MHC II. Noul complex, format din peptid antigenic/MHC II este exprimat pe membrana celulei si va fi recunoscut de un limfocit T CD4+. Moleculele MHC II care nu reusesc sa lege peptide sunt rapid degradate in compartimentul endozomal.

Consecintele biologice ale recunoasterii complexului peptid-MHC de catre celula T

TCR CD8 Complex Ag-MHC I Celula infectata viral proceseaza antigenul derivat din peptide virale endogene si il prezinta la suprafata celulara in cupa MHC de clasa I

Antigenele astfel prezentate sunt recunoscute prin intermediul receptorului TCR al limfocitelor T CD8+

Consecintele biologice ale recunoasterii complexului peptid-MHC de catre celula T

Recunoasterea complexului peptid endogen-MHC de clasa I de catre celula T CD8+ duce la uciderea celulei tinta (ex. infectata viral)

Consecintele biologice ale recunoasterii complexului peptid-MHC de catre celula T

TCR CD4

Complex Ag-MHC II

Antigenele astfel prezentate sunt recunoscute prin intermediul receptorului TCR al limfocitelor T CD4+

Macrofagele (APC profesionale) preiau antigenele exogene prin fagocitoza, le proceseaza si le prezinta la suprafata celulara in cupa MHC de clasa II

Consecintele biologice ale recunoasterii complexului peptid-MHC de catre celula T

Recunoasterea complexului peptid exogen-MHC de clasa II de catre celula T CD4+ de tip helper 1 (Th1) duce la secretia unui set particular (Th1) de citokine responsabile de activarea macrofagelor si uciderea patogenului extracelular

Consecintele biologice ale recunoasterii complexului peptid-MHC de catre celula T

TCR CD4 Complex Ag-MHC II

Antigenele astfel prezentate sunt recunoscute prin intermediul receptorului TCR al limfocitelor T CD4+
Limfocitele B (APC profesionale) preiau antigenele exogene prin intermediul imunoglobulinelor de suprafata, le proceseaza si le prezinta la suprafata celulara in cupa MHC de clasa II

Consecintele biologice ale recunoasterii complexului peptid-MHC de catre celula T

Recunoasterea complexului peptid exogen-MHC de clasa II de catre celula T CD4+ de tip helper 2 (Th2) duce la secretia unui set particular (Th2) de citokine responsabile de activarea limfocitelor B care secreta anticorpi ce elimina patogenul extracelular

Concluziile cursului
Limfocitele T nu pot recunoaste antigene native

Limfocitele T recunosc fragmente de antigene procesate si prezentate de celulele prezentatoare de antigen Procesarea are loc -in citosol (antigenele endogene) sau -in veziculele caii endocitice (antigenele exogene)

Prezentarea -peptidelor derivate din antigene endogene limfocitelor T CD8+ are loc in cupa MHC I -peptidelor derivate din antigene exogene limfocitelor T CD4+ are loc in cupa MHC II

Concluziile cursului
Recunoasterea complexului peptid endogen-MHC de clasa I de catre celula T CD8+ duce la uciderea celulei tinta (ex. infectata viral)

Recunoasterea complexului peptid exogen-MHC de clasa II de catre celula T CD4+ de tip helper 1 (Th1) duce la secretia unui set particular (Th1) de citokine responsabile de activarea macrofagelor si uciderea patogenului extracelular

Recunoasterea complexului peptid exogen-MHC de clasa II de catre celula T CD4+ de tip helper 2 (Th2) duce la secretia unui set particular (Th2) de citokine responsabile de activarea limfocitelor B care secreta anticorpi ce elimina patogenul extracelular