CURS 2

Microbiologie clinica

ef lucrri Dr. Liliana Dragomirescu

FACTORI DE PATOGENITATE EFECTORII IMUNITARI I RSPUNSUL IMUN

 NATURAL:

asigur rezistena natural, nespecific, fa de agenii infecioi, comun tuturor indivizilor unei specii, necondiionat de un contact anterior cu un agent infecios DOBNDIT: se dezvolt pe parcursul vieii, ca urmare a contaminrii continue cu diveri ageni infecioi i depinde de experiena individual a fiecruia

 Factorii

genetici Barierele anatomice (pielea intact, mucoasele) Factorii umorali (sistemul complement, lizozimul, citokinele, rspunsul de faz acut, opsoninele, interferonii) Inflamaia Factorii celulari nespecifici

PMN, macrofage (fagocitoza) Limfocitele NK (natural killer)

Ptrunderea microbilor n esuturi -liza bacteriilor - declanarea rspunsului inflamator infecios eliberarea unor mediatori chimici (citokine, proteinele de faz acut, mediatori rezultai din degranularea mastocitelor etc.) care particip direct n procesul inflamator atrag n focarul infecios fagocitele. Acestea vor nltura microorganismele invadatoare prin fagocitoz.

activarea complementului

Cascada de activare a complementului

 rezultatul schimbrilor ce se petrec ntr-un esut ca rspuns la o agresiune mecanic, chimic sau infecioas.
mecanism de aprare antiifecios rapid, care tinde s localizeze infecia i s previn diseminarea ei. manifestrile locale ale inflamaiei

eritemul (rubor) cldura (calor) durerea (dolor) edemul (tumor)

Monocite

PMN

Sistemul fagocitar mononuclear. Macrofage tisulare derivate din monocite sanguine

Fagocitoza este un mecanism important de ndeprtare a microorganismelor i a celulelor lezate fiind proprietatea unor celule (PMN i macrofage) de a ngloba i digera particule strine organismului.

Fagocite:
PMN apar primele ca rspuns ntr-o inflamaie acut monocitele (care dup ce migreaz n esuturi se numesc macrofage).

Fagocitoza prin PMN poate fi considerat principalul mecanism de aprare fa de bacteriile piogene.

Fagocitoza prin macrofage are rolul : -de a ndeprta bacteriile, - proprietatea de a elimina bacteriile cu habitat intracelular unele bacterii, protozare sau fungi sunt capabile s supravieuiasc i s se multiplice n macrofagul neactivat (micobacterii, brucelle, criptococi, listerii etc.) dup activare unele dintre ele pot fi distruse. Uneori, ns, microorganismele nu sunt distruse i supravieuiesc pe durat lung n macrofag, rezultatul fiind inflamaia cronic.

Macrofagul are rolul cel de a iniia rspunsul imun. Macrofagele sunt celule prezentatoare de antigen (CPA) care dup prelucrarea acestuia l prezint limfocitelor Th.

Limfocitele NK Celulele NK sunt limfocite citotoxice naturale care exist deja la natere. Ele nu sunt fagocite, dar pot ataca i distruge n mod nespecific celule infectate cu virusuri sau chiar celule tumorale. n contact cu celulele infectate, celulele NK secret o perforin nrudit cu C9 a complementului. Aceasta polimerizeaz pe membrana celulei int i formeaz aici canale ce distrug integritatea acesteia.

Rezistena dobndit

Apariia unor substane strine organismului este recepionat de sistemul imun care: discrimineaz selful de non-self; rspunde prin efectori umorali i celulari care vor elimina ceea ce este strin organismului, meninnd astfel individualitatea i integritatea acestuia; memoreaz acest rspuns.

Funcionalitatea sistemului imun se bazeaz pe complementaritatea steric dintre doi parteneri.

Primul partener, perceput de sistemul imun ca non-self, se numete antigen i are capacitatea de a induce modificri biologice ale sistemului imun, care constau, n esen, n apariia efectorilor imuni: umorali = anticorpii celulari = limfocite sensibilizate
Partenerul reaciei imune care provine din partea organismului se numete: anticorp n ser i secreii receptor pentru antigen cnd se constituie ca parte component a membranei celulare a limfocitelor (BCR pentru limfocitul B i TCR pentru limfocitul T).

Substane pe care organismul le percepe ca non self, care produc un rspuns imunitar i sunt capabile s reaioneze cu receptorii specifici. Antigenele complete
Imunogenitate

= capacitatea unui antigen de a induce un rspuns imunitar (umoral sau/i celular) Antigenicitatea = proprietatea antigenelor de a reaciona n mod specific cu efectorii imuni (anticorpi sau limfocite sensibilizate) a cror producere au indus-o. Antigene incomplete - Haptene Lipsite de imunogenitate Antigenicitate Sunt imunogene numai n asociere cu un carrier.

 Microorganismele

sunt mozaicuri de antigene. Acestea sunt: corpusculare legate de structura microorganismului (bacterii, virusuri fungi etc.), - eliberate n mediu dup distrugerea microorganismului (endotoxinele); solubile, secretate de microorganism n mediul nconjurtor (enzime, exotoxine).

Antigenele care sunt implicate n patogenitatea agenilor infecioi se numesc antigene de patogenitate.
antigenele capsulare (Streptococcus pneumoniae, Klebsiella, Bacillus anthracis, antigenul de nveli Vi al bacilului tific, antigenul K al E. coli enteropatogen), antigenele de perete (antigenul O din peretele bacteriilor gram-negative, proteina M a streptococului de grup A), exoenzimele (coagulaza, hemolizinele secretate de Staphylococcus aureus, fibrinolizinele streptococului beta-hemolitic de grup A), exotoxinele (difteric, tetanic, diferitele enterotoxine)

Factori de ptrundere i aderen - fimbrii - adezine nefimbriale Factori de invazie microbian - exoenzime: hialuronidaza, coagulaza, fibrinolizina, enzimele hidrolitice (proteaze, lipaze, nucleaze), enzimele citolitice (hemolizine, leucocidine) - endocitoza i translocarea Toxine bacteriene - exotoxine: toxina difteric, tetanic, botulinic, holeric, enterotoxina E. coli (EPEC). - endotoxine: lipopolizahardul (LPZ) din membrana extern a peretelui celular al bacteriilor gram-negative

 Spaiile

extracelulare: snge, LCR, umori, secreii, excreii ale organismului. Se detecteaz: - componente ale virusului (n ser AgHBs sau AgHBe, proteina P24), - particule virale ntregi n snge (togav., picornav.), n materii fecale (rotav., enterov.), urin (v. urlian), saliv (v. citomegalic), secr. nazale (rhinov.), secr. vaginale (HIV), LCR (arbovirusuri), leziuni specifice (v. vaccinia-n pustule, v. herpetic n vezicule) Celule i esuturi, LB (v. EB), LT (HIV, v. rujeolic), neuroni (v. rabic), es. reticuloendotelial (arenav.), epiteliile muc. intest. (enterov.), epitelii scuamoase (papillomav.)

 a)

v. nvelite nveli GP: HA (v. gripale, v. paragripale, v.rujeolic), N (v. gripale, v. paragripale), GP (gp120, gp41-HIV), proteine, AgHBs al VHB, factori de fuziune (v. paragripale), AgLYDMA (v. Epstein-Barr). b) v. nenvelite ce expun Ag la ext. capsidei virale (v. polio- proteinele VP1, VP2, VP3; v. polyoma-AgVP1; adenov.proteinele structurale ale hexonilor i proieciilor fibroase).

 a)

asociate nucleocapsidei: AgHBc al VHB; AgNP, NC i N ale paramyxov.; AgNP al v. gripal; Ag p24, p17, p41 ale HIV, etc. b) asociate cu proteina M: (proteina M a v. gripale, a v. rujeolic, etc.) Ag interne sunt mai stabile i mai puin expuse dect cele ale nveliului. n general induc apariia Ac fixatori de complement.

 Ag

virale exprimate pe suprafaa membraneisunt prezente n infecia cu v. nvelite (orthomyxo-, paramyxo-, rhabdo-, arena-, herpes- i poxv.) Ag virale intracelulere: AgHBc, AgEBNA Ag heterofile: Ag Paul-Bunell (n mononucleoz) Ag tumorale induse de virusuri-n celulele transformate malign, datorit perturbrilor induse de virus, apar neoantigene tumorale (AgTATA, AgCEA, AgT induse de papovav., AgEBNA, AgLYDMa, AgEA n limfomul Burkitt i carcinomul nazofaringian induse de v. EpsteinBarr)

 Nematodele

au la suprafa o cuticul cu rol

de antigen Larvele mici sunt distruse de granulocite i macrofage Antigene solubile prezente n secreiile i excreiile nematodelor

 Dup

diferenierea lor n organele limfoide primare, limfocitele B i T migreaz pe calea vaselor sanguine i limfatice n organele limfoide secundare, care sunt ganglioni limfatici, splina, amigdalele i esutul limfoid ataat mucoaselor (MALT). Limfocitele imunocompetente care populeaz organele limfoide secundare sunt celule antigen-reactive. Deci spre deosebire de organele limfoide primare, unde instruirea se face n absena antigenului, n organele limfoide secundare prezena acestuia este obligatorie.

Pentru a produce un rspuns imunitar, un antigen trebuie s interacioneze cu o serie de celule prezente n snge i diferite esuturi. Acestea sunt: celulele prezentatoare de antigen (CPA) limfocitele T i B. pe suprafaa acestor celule - antigenele de histocompatibilitate (MHC)

proceseaz i prezint Ag limfocitelor Th macrofage profesioniste: celulele Langerhans din piele celulele dendritice din ganglionii limfatici i splin monocite macrofage alveolare n plmn celulele Kupfer n ficat

microglia n esutul nervos

osteoclaste n schelet celule mezangiale renale Prezint la suprafa MHC II

au

pe suprafaa lor receptori pentru C3b a complementului i pentru Fc a imunoglobulinelor intervin n aprarea antiinfecioas prin fagocitoz, dar rolul lor esenial const n relaiile pe care le stabilesc cu limfocitele Th, crora le prezint antigenul

Limfocitele B reprezint 2-12% din limfocitele circulante. Ele au pe suprafaa lor markerul CD19 i antigene MHC de clasa II.
Cnd limfocitul B este stimulat corespunztor prin limfocitul T-helper el ncepe s se divid transformndu-se n limfoblati plasmoblati, apoi la: - plasmocite anticorpi -limfocite B cu memorie = celule cu via lung responsabile de un RI rapid la o stimulare ulterioar cu acelai Ag Toate celulele provenite dintr-un singur limfocit B aparin unei singure clone celulare, productoare a milioane de anticorpi identici care vor fi eliberai n mediul intern. Pe suprafaa limfocitelor B se gsete BCR care permite celulelor B s recunoasc antigenele specifice.

Limfocitele T helper (Th) - dup interaciunea cu antigenul stimuleaz

limfocitele B n elaborarea unui rspuns imun umoral n anticorpi limfocitele Tc pentru obinerea unui rspuns celular activeaz macrofagele. Markerul de suprafa a limfocitului Th este molecula CD4+.

Limfocitele T supresoare (Ts)

limiteaz expansiunea clonal a limfocitelor B i T stimulate antigenic participnd la reglarea intensitii rspunsului imun (CD8). Limfocitele T citotoxice (Tc) - stimulate prin antigene care sunt exprimate la suprafaa celulei gazd ca, de pild, celule infectate cu virusuri, cu microbi cu habitat intracelular sau celule tumorale pe care sistemul imun nu le mai recunote ca self. Markerul de suprafaa este tot CD8+. Limfocitele Tdh - au pe suprafaa lor marker CD4+ fiind responsabile de producerea hipersensibilitii de tip ntrziat . Ele secret dup stimulare antigenic limfokine care activeaz macrofagele ce adpostesc bacterii cu habitat facultativ sau obligator intracelular.

 sunt proteine serice care migreaz n cmpul electric cu gama globulinele prezeni i n alte umori sau secreii cu o structur capabil s le asigure legarea ferm i specific de antigen

paratop

Antigen

Macrofag Limfocitul T helper

Limfocitele T c
Distrug celulele infectate Limfocitele T c cu memorie

Limfocitele B
Plasmocite Anticorpi Complexe Ag - Ac Limfocitele B cu memorie

Rspunsul imun umoral - Interaciunea dintre LTh

i LB
Preluarea antigenului
Bacterie- Antigene

CPA = Macrofag

CD4 MHC II TCR

Limfocit B

Cytokine Limfocit T helper

Antigen Macrofag Limfocit Thelper Limfocit B

Plasmocit Anticorpi Complexe Ag-Ac

Limfocit B cu memorie

Imunitatea mediat celular cuprinde n esen dou procese:

distrugerea de ctre limfocitele T citotoxice CD8+ (ajutate de limfocitele Th) a celulelor care conin un microorganism n faz replicativ (de obicei un virus) i activarea prin IFN i alte citokine a macrofagelor pentru a le face capabile s distrug microorganismul care se dezvolt chiar n interiorul lor (bacilul tuberculos, bacilul leprei, toxoplasma, legionella etc.)

1. Rspunsul

2.

organismul vine n contact pentru prima oar cu un antigen timodependent LT i LB de memorie. Rspuns imunologic secundar rentlnirea cu acelai antigen receptorii pentru antigen se gsesc n concentraie mai mare dect la prima ntlnire probabilitatea ntlnirii partenerilor de reacie potrivii crete, reacia imunogenetic decurgnd mai rapid.

imunologic

primar

n urma stimulrii antigenice, producerea de anticorpi parcurge 4 faze: o perioad de laten, a crei durat depinde de natura antigenului i care dureaz n general 2 sptmni, o faz de cretere, n cursul creia apar anticorpii, titrul lor crescnd n progresie geometric, o faz n platou, n care anticorpii se menin la un nivel costant pentru cteva sptmni i, o faz de descretere, n care anticorpii sunt metabolizai i dispar.

Rspunsul secundar
Se deosebete de cel primar prin:
1.

cinetica rspunsului. Faza de laten n rspunsul secundar este mai scurt (3-5 zile), faza de platou prelungit (luni) i descreterea mai lent (luni, ani, uneori pe toat viaa). 2. nivelul de anticorpi. Titrul maxim de anticorpi este n general de 10 ori mai mare dect n rspunsul primar. 3. clasa de anticorpi. Anticorpii din rspunsul primar sunt IgM, iar cei din rspunsul secundar IgG. 4. afinitatea anticorpilor. n rspunsul secundar, afinitatea anticorpilor fa de antigen este mai mare dect n rspunsul primar.

Clasificarea (Gell i Coombs)

tipul I - reacii anafilactice mediate de anticorpi IgE (reagine), tipul II - reacii citolitic-citotoxice, mediate de anticorpi formai fa de antigenele de pe suprafaa celulelor, cu participarea complementului, celulelor K i macrofagelor, tipul III - reacii mediate de complexe imune cu participarea complementului, tipul IV - reacii mediate de limfocitele T sensibilizate.

Reaciile de hipersensibilitate

Hipersensibilitatea de tip I (de tip anafilactic)

Contactul cu alergenul (respirator,digestiv, etc.) polenul sporii de mucegai (Aspergillus spp.) praful de cas prul animalelor alimente (ou, lapte, cpuni, ciocolat etc.) seruri terapeutice medicamente (penicilina) veninul unor insecte (viespi)

1. Rspunsul anafilactic la veninul de albine; IgE fa de prot. veninului - fosfolipaza A. Reacia imediat apare n 20 min. i este mediat de eliberarea de histamin i ali mediatori. Pacientul-nepat la nivelul feei; reacia poate fi generalizat cu scderea TA, urticarie generalizat i bronhospasm. 2. Urticarie cronic. Leziunile apar n minute sau ore, au margini proeminente; leziunile dispar dup 12 h fr a lsa urme pe tegumente.

Hipersensibilitatea de tip II
se datoreaz anticorpilor Ig G, mai rar IgM, care se formeaz n organism fa de antigene situate la suprafaa unor celule sau esuturi mecanismul: legarea anticorpilor de celula int cu activarea pe cale clasic a complementului cu citoliz consecutiv

reaciile posttransfuzionale: IgM reacioneaz cu antigene de grup ABO ale eritrocitelor, fiind responsabile de aglutinare, activarea complementului seric i hemoliza intravascular.

anemia hemolitic a nou-nscutului: datorit incompatibilitii Rh, este produs de anticorpi materni de tip IgG care recunosc antigene specifice Rh (factorul D) de pe suprafaa eritrocitelor nou-nscutului.

Reacia de tip II apare i n unele infecii cum sunt infeciile streptococice (cardita reumatismal), n care se sintetizeaz anticorpi fa de unele antigene streptococice asemntoare cu un antigen al fibrei miocardice. Hipersensibilitatea citotoxic-citolitic se mai ntlnete n infecii cu: mycoplasme, virusuri (hepatit B), protozoare (malarie).

Reacia de tip II poate fi indus medicamente anemia hemolitic

de

Md+membr. eritrocitar Ag complet

Eritrocitul = nonself Ac antieritrocitari + Md de pe supraf. eritr. activarea C liza eritrocitar

Hipersensibilitatea de tip III a complexelor imune

sunt iniiate de complexe imune antigenanticorp (IgM i IgG) care, formate n cantitate mare, sau persistente n circulaie, activeaz complementul i determin leziuni la locul depunerii lor Antigenele care induc aceast reacie
Streptococcus pyogenes, Mycobacterium leprae, Treponema pallidum, Plasmodium spp., virusul hepatitei B, virusul Epstein Barr , etc

Reacii locale de tip III se produc i prin eliberarea persistent local de antigen de ctre un agent infecios. Astfel, infecia cu o filarie (Wucheriria bancrofti) este relativ benign, dar parazitul mort care se afl n vasele limfatice iniiaz o reacie inflamatorie responsabil de obstrucia vaselor limfatice cu edeme limfatice gigante : elefantiaza. Chimioterapia antiinfecioas poate determina o eliberare masiv de antigene microbiene prin omorrea microbilor, ceea ce va determina reacii mediate de complexe imune grave, ca, de pild, eritemul nodos lepros ce apare la pacienii bolnavi de lepr tratai cu dapson.

Boala serului reacie de tip III generalizat la pacieni crora li s-au administrat, n scop terapeutic, doze mari de ser imun: antidifteric sau antitetanic preparat .
febra rash urticarian adenit generalizat splenomegalie tumefieri i dureri articulare leucocitoz cu neutrofilie i eozinofilie, scderea complementului seric albuminurie

Reacia de tip Arthus

reacie local a complexelor imune, declanat dup inocularea de antigene la nivel tegumentar plmnul de fermier prin inhalarea prafului provenit de la fn mucegit personalul care particip la fabricarea brnzei fermentate de mucegaiuri (Penicillium casei)

Hipersensibilitatea de tip IV mediat celular

Tipul Timp de reacie 48-72 h Semne clinice eczem Antigen

dependente de limfocitele T rezultatul unei interaciuni exagerate dintre un antigen i mecanismele imunitii celulare

Dermatita de contact

Pe teg. Nichel cauciuc

R. la tuberculin Granulom

48-72 h

Induraie local Id. tuberuclina Consisten fibroas Complexe ag-ac persistente

21-28 h

Alergia de contact (eczema de contact) Fenomenul a fost descris att la om ct i la animale, apariia eczemei fiind determinat de contactul direct al antigenului (nichel, cauciuc) cu tegumentele, dnd o reacie cu un maximum de intensitate n 2-3 zile.

HS tip IV-imunitatea mediat celular distrucii celulare care pot fi permanente

Hipersensibilitatea ntrziat mediat de limfocitele Tc- citotoxice. Limfocitele Tc (CD8) sunt ele nsele citotoxice dup stimulare antigenic i interaciunea cu Th (CD4). Aceste celule au efect citotoxic direct asupra celulelor int prin limfokinele pe care le secret. LTc sunt stimulate de antigene prezente pe suprafaa celulelor pe care organismul nu le recunoate ca self, cum sunt celulele virus infectate, celule tumorale sau esuturile transplantate.

MECANISME IMUNOPATOLOGICE N INFECII PARAZITARE

Fenomene de tip anafilacic: - hidatidoza, schistosomiaza, ascarioza, lambliaza Fenomene mediate de complexe imune (IgG i IgM): - malarie (P. falciparumsdr. nefrotic) - schistosomiaz (S.japonicumsdr.Katayama: febr, splenomegalie, urticare, eozinofilie)

MECANISME IMUNOPATOLOGICE N INFECII PARAZITARE

Fenomene induse de apariia de autoanticorpi (reacii de tip citotoxic):

- tripanosomiaz i malarie (Ac. antihelmini, Ac. antilimfocitari) - malaria P. falciparum (Ac. cross-reactani anemie

Fenomene mediate celular:

- la persoanele hiperactive la 24-48h de la contactul cu Ag. specific (HS tip IV) cu intervenia LT sensibilizate (LT CD4+)limfokine specifice care atrag la locul inflamaiei: L, PMN, neutrofile, eozinofile, bazofile, macrofage Ulterior LT elibereaz factori care stimuleaz migrarea fibroblatilor cu producerea de fibronectin i colagen fibroz:- hidatidoz