MICROBIOLOGIA CLINIC Disciplin a medicinei de laborator, care trebuie s ofere ct mai rapid i precis informaii necesare pentru decizia clinic la un pacient cu boal infecioas AGENI INFECIOI N ETIOLOGIA BOLILOR INFECIOASE
Microorganismele difer n mod fundamental unele de altele, fiind ncadrate n 3 regnuri:
protista procariotae vira Regnul Procariotae cuprinde microorganisme cu celule primitive, de tip procariot, lipsite de nucleu adevrat (au un cromozom haploid format dintr-o molecul circular de ADN) i de organite celulare nespecifice (cu excepia ribozomilor), dar cu un nveli suplimentar (perete celular rigid). Eubacteriile cuprind un numr mare de bacterii, cele de interes medical fiind: bacteriile clasice - cu forme variate i cu perete celular; chlamydiile bacterii cu parazitism obligatoriu intracelular; rickettsiile bacterii cu habitat intracelular, dar cu diviziune direct; mycoplasmele bacterii lipsite de perete celular. Structura bacteriilor Structuri obligatorii: material nuclear, citoplasma, membrana citoplasmatic, perete celular Informaia genetic se afl n interiorul unei molecule dublu-catenare lungi de ADN circular. Nu exist membran nuclear, iar citoplasma nu conine alte organite celulare, cu excepia ribozomilor (70 S). Pe baza structurii peretelui celular, bacteriile sunt clasificate n bacterii Gram pozitive i Gram negative.Peretele celular al bacteriilor acido-alcoolo rezistente (bacilul tuberculos i bacilul leprei) se aseamn cu cel al bacteriilor gram-pozitive. Peretele celular d forma final a bacteriei, care are rol important n identificare. n general, bacteriile sunt sferice (cocii), alungite (bacilii) sau spiralate. Structurile speciale conin o varietate de lipide complexe (acizi micolici) care confer acestor bacterii caractere tinctoriale deosebite i rezisten crescut la uscciune i decolorarea cu alcool i acid motiv pentru care se coloreaz Ziehl-Nielsen. Structuri neobligatorii: capsula, pilii, flagelii, sporul bacterian Capsula poate fi de natur polizaharidic (Streptococcus pneumoniae, Klebsiella sp.) sau de natur polipeptidic (bacilul crbunos). Aceasta are rol n rezistena bacteriilor fa de fagocitoz, fiind un factor de virulen. Pilii (fimbrii) se mpart n pili sexuali (codificai de plasmide cu rol n transferul de material genetic ntre bacterii) i pili comuni (codificai cromozomial, fiind un important factor de virulen). Ambele categorii de pili prezint antigene specifice i pot fi receptori pentru bacteriofagi. Sporogeneza se ntlnete la 3 genuri de bacterii gram-pozitive, Clostridium, Bacillus i Sporosarcina. Flagelii sunt filamente helicoidale care asigur mobilitatea bacteriei. Acetia pot fi unici, situai la un pol al celulei (monotriche), n mnunchiuri (lofotriche) sau dispui pe ntreaga suprafa celular (peritrichi). Flagelii sunt constituii din componente proteice (flageline), cu proprieti antigenice. Aceste antigene flagelare (H) sunt importante n identificarea bacteriilor. MORFOLOGIA i aezarea BACTERIILOR Dimensiunea bacteriilor se exprim n micrometrii (1=10 -3 mm), fiind cuprins ntre 1-10 . Clasificare: Bacteriile gram pozitive aerobe i facultative anaerobe: COCI cu dispoziie n grmezi (Staphylococcus sp.), lanuri (streptococi), in diplo i lanuri (Streptococcus pneumoniae, Enterococcus sp.); BACILI cu dispoziie n lanuri (Bacillus sp.), litere chinezeti sau majuscule (Corynebacterium sp., Listeria sp.); Bacteriile gram negative aerobe i facultative anaerobe: COCI: Moraxella catarrhalis, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitides (dispui ca dou boabe de cafea care se privesc fa n fa), Haemophilus influenzae; BACILI: familia Enterobacteriaceae (Escherichia coli, Enterobacter sp., Citrobacter sp., Klebsiella sp., Proteus sp., Serratia sp., Salmonella sp., Shigella sp., Yersinia sp.); bacili Gram negativi non- fermentativi: Pseudomonas sp., Acinetobacter sp., Helicobacter sp.); Germeni anaerobi: deasupra diafragmului: Peptococcus sp., Peptostreptococcus sp., Prevotella sp., Veillonella sp., Actinomyces sp.; sub diafragm: Clostridium perfringens, Cl. tetani, Cl. difficile, Bacteroides sp., Fusobacterium sp.; Alte bacterii: - cocobacili (forme intermediare ntre coci i bacilli): Yersinia pestis, Bordetella pertussis, Haemophilus influenzae; - bacterii atipice: Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumonia, M. hominis, Chlamydia pneumoniae, C. psittaci, C. trachomatis, Rickettsia sp.; - vibrioni - bacterii ncurbate, n form de virgul (Vibrio cholerae); - spirochete: bacterii spiralate, cu corpul flexibil i 12-20 de spire (Treponema pallidum), foarte multe spire strnse (Leptospira sp.) sau 2-3 spire (Borrelia sp.); - spirili - bacterii spiralate cu 1-2 spire rigide (Spirillum volutans); - fuzobacterii: bacterii fuzospirilare (Fusobacterium sp., Treponema vincenti); - actinomycete - bacterii foarte asemntoare fungilor, au hife lungi i ramificate care se rup, rezultnd forme bacilare (Actinomyces sp.). Regnul Vira cuprinde entiti infecioase de natur subcelular (acelular): virusurile i viroizii. Virusurile sunt entiti infecioase acelulare, cu parazitism obligatoriu intracelular, au un singur acid nucleic (ADN sau ARN), sunt inerte n afara celulei gazd i paraziteaz celula la nivel genetic (deviaz metabolismul acesteia n scopul propriei replicri). Viroizii au o structur i mai simpl, fiind alctuii doar dintr-un acid nucleic cu greutate molecular mic. Unii dintre ei produc boli transmisibile la plante. Prionii sunt entiti infecioase de dimensiuni foarte mici (5 nm), de natur proteic, lipsite de acid nucleic Caractere difereniale ntre virusuri i bacterii Caracter Bacterii Virusuri Dimensiuni 110 MO 2030 nm ME Structur Celular tip procariot Subcelular (acelular) Coninutul n acizi nucleici ADN i ARN ADN sau ARN Multiplicare / cultivare Diviziune direct / pe medii de cultur inerte Replicate de ctre cel. gazd / animale de laborator, CC, OE Prezena enzimelor metabolice Sensibilitate la antibiotice Da
Da Nu
Nu NMULIREA BACTERIILOR Diviziune binar Gram pozitive - formarea unui sept Gram negative - strangulare direct
NUTRIIA BACTERIILOR Sursa de energie fotosintetizante - energia luminoas chimiosintetizante - reacii de oxido-reducere a unor substane lithotrofe - oxideaz substanele anorganice chemoorganotrofe - oxideaz subst.organice Sursa de carbon autotrofe - substane anorganice, CO 2 mixotrofe - substane organice ct i CO 2
heterotrofe - substane organice Sursa de azot aminoacizii, sruri de amoniu (Escherichia coli, Salmonella etc.). RESPIRAIA BACTERIILOR Bacterii strict aerobe, care se dezvolt numai n prezena oxigenului atmosferic,(Pseudomonas aeruginosa, Corynebacterium diphteriae, Mycobacterium tuberculosis etc.) Bacterii strict anaerobe folosesc fermentaia (Clostridium, Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium etc.) Bcaterii facultativ anaerobe utilizeaz respiraia aerob, fermentaia sau respiraia anerob (majoritatea speciilor de interes medical exemplu enterobacteriile) Bacteriile anaerobe aerotolerante folosesc fermentaia n prezena aerului atmosferic fr participarea oxigenului (Streptococcus Bacterii microaerofile folosesc fermentaia i respiraia dar n prezena unei concentraii crescute de CO2 Infecii produse de bacterii Infeciile exogene rezult n urma contactului cu bacterii din mediul nconjurtor. Bacteriile pot contamina organismul pe cale: alimentar, respiratorie, contact sexual, manevre medicale, promiscuitatea cu animalele, mucturile de insecte etc. Infeciile endogene rezult n urma contaminrii cu bacterii de pe suprafaa mucoaselor i a pielii. Aceste microorgansime produc infecii dac traverseaz barierele anatomice i ptrund n esuturi (ex. bacilul coli face parte din flora normal a intestinului, dar dac ptrunde n cile urinare, va determina apariia unei infecii la acest nivel, str. viridans, stafilococi coagulazo-negativi, etc.). Diagnosticul de laborator n Bacteriologie Dg. BACTERIOLOGIC- Izolarea i identificarea bacteriilor din produsele patologice - recoltarea i transportul la laborator al produselor patologice - izolarea bacteriilor pe medii de cultur - identificarea bacteriilor pe baza caracterelor: - morfologice i tinctoriale - culturale - biochimice - antigenice (IF, aglutinare, precipitare) - toxinogenezei - testarea sensibilitii la antibiotice ANTIBIOGRAMA / ANTIFUNGIGRAMA Dg. SEROLOGIC detectarea i titrarea Ac n serul de cercetat - reacii antigen-anticorp (IF, RFC, aglutinare, precipitare, ELIZA, RIA) VIRUSURI: structura de baz, obligatorie, a virionului o reprezint Nucleocapsida constituit din: - miez (core) de acid nucleic care este, de fapt, genomul viral, protejat de un nveli proteic numit capsid Virusurile formate numai din nucleocapsid se numesc virusuri neanvelopate. Virusurile care prezint pe lng nucleocapsid i un nveli extern lipoproteic derivat din sistemul membranar al celulei gazd (peplos sau anvelop), se numesc virusuri anvelopate. Genomul viral Este constituit dintr-un singur tip de acid nucleic: fie ADN, fie ARN (niciodat ambii), care conine ntreaga informaie genetic necesar replicrii virusului i care reprezint suportul infeciozitii acestuia. Molecula acidului nucleic poate fi: simplu spiralat (ss) sau dublu spiralat (ds), liniar sau circular, continu sau segmentat. Capsida viral Este un nveli format din numeroase uniti proteice numite capsomere = proteine de dimensiuni mici care se autoasambleaz n structuri capsomerice mari, iar n final se asambleaz sub forma capsidei virale. Exist dou tipuri de simetrie a capsidelor: helicoidal, cu aspect tubular sunt caracteristice ARN virusurilor icosaiedric, cu aspect sferic sunt caracteristice ADN virusurilor Peplosul 1. Spiculi de natur glicoproteic : -hemaglutinina (HA), cu rol n ataarea virusului de celula gazd -neuraminidaza (N), care faciliteaz ptrunderea virusului n celul. 2. Factori de fuziune cu funcie de iniiere a infeciei 3. Proteina M (matrix) care cptuete faa intern a anvelopei Producerea infeciei virale Replicarea viral parcurge etapele: 1. Recunoaterea celulei gazd 2. Adsorbia (ataarea) virusului de celula gazd 3. Penetrarea virusului n celula gazd 4. Decapsidarea virusului 5. Sinteza macromolecular 6. Eliberarea virionilor progeni din celula gazd Ci de transmitere a virusurilor i ruta infeciilor Tractul respirator (ex. virusurile gripale i paragripale) Tractul gastro-intestinal (ex. virusul poliomelitic, virusul hepatitei A) Tractul genito-urinar (ex. virusul hepatitei B, HIV) Calea cutaneo-mucoas (virusul herpes simplex) Calea iatrogen (virusul hepatitei B, HIV, virus citomegalic) Infecii produse de virusuri ADN Virusuri de tip ADN Familia Anvelopa Simetria capsidei Dimensiune (nm) Structura ADN Virusuri de importan medical Parvoviridae Absent Icosaedric 18-26 ss liniar Virus B 19 Papovaviridae Absent Icosaedric 45-55 ds circular Papiloma v. Polioma v. Adenoviridae Absent Icosaedric 70-90 ds liniar Adenovirus Hepadnavirida e Prezent Icosaedric 42 ds circular incomplet HVB Herpesviridae Prezent Icosaedric 100 ds liniar VHS, VZV, citomegaloviru s, v. Epstein- Barr, HHV-6, HHV-7, HHV-8 Poxviridae Prezent Complex 250x300 ds liniar Poxvirusuri, v. vaccinia, smallpox v. Infecii produse de virusuri ARN Virusuri de tip ARN Familia Anvelopa Simetria capsidei Dimens. (nm) Structura ARN Virusuri de importan medical Picornaviridae Absent Icosaedric 25-30 ss liniar nesegmentat + Poliovirus, rhinovirus, HAV Reoviridae Absent Icosaedric 75 ds liniar, ogaviridae 10 segmente Reovirus, Rotavirus, Febra de Colorado Togaviridae Prezent Icosaedric 60-70 ss liniar nesegmentat + v. rubeolic, v. encefalitei equine Western Flaviviridae Prezent ? 40-60 ss ARN+ v. febrei galbene, VHC, v. West Nile, Retroviridae Prezent Icosaedric 80-120 ss liniar 2 segmente + HIV 1 i HIV 2 Coronaviridae Prezent Helical 120-160 ss liniar nesegmentat + Coronavirus, SARS Caliciviridae Absent Icosaedric 35-40 ss ARN+ Norovirus Orthomyxovirida e Prezent Helical 80-120 ss liniar 8 segmente + v. gripale Paramyxoviridae Prezent Helical 120-250 ss liniar nesegmentat + v. rujeolic, v. urlian, v. paragripale, v. sinciial respirator Rhabdoviridae Prezent Helical 70x180 ss liniar nesegmentat - v. rabic Arenaviridae Prezent Helical 75x180 ss liniar nesegmentat - v. Lassa, v. coriomeningitei limfocitare Bunyaviridae Prezent Helical 80-120 Ss circular, 3 segmente, - v. encefalitei de Clifornia, v. febrei hemoragice Crimea-Congo Filoviridae Prezent Complex 80x1400 0 ssARN, - v. Marburg, v. Ebola Diagnosticul de laborator n Virusologie Dg. Virusologic - recoltarea produselor patologice -ex. ME, IF - cultivarea: - ou embrionate de gin - culturi celulare - animale de experien - identificarea: RFC, r. de neutralizare, r.HAI, PCR Dg. Imunologic: evidenierea i titrarea anticorpilor specifici antivirali n serul pacientului (ELISA, RIA, IF, RFC, HAI, r. de neutralizare) Regnul PROTISTE
ALGE - microorganisme eucariote, acvatice, fotosintetizante , nu prezint interes medical cu excepia agarului MYCETE ciuperci microscopice, sunt grupate n 4 clase. Din cele 12.000 de specii, doar 100 de specii sunt de interes medical
PROTOZOARE Flagelata Rhisopoda Ciliata Sporozoa FUNGI Definiie: microorganisme eucariote rspndite n natur, o parte dintre acetia fac parte din flora normal a ganismului Clasificare: - dermatofii - levuri - mucegaiuri FUNGI i infecii cauzate de fungi Micoze superficiale n care ciupercile cresc la suprafaa organismului, pe piele sau pr Micoze cutanate sau subcutanate cu implicarea unghiilor i a straturilor profunde ale pielii Micoze profunde sau sistemice n care sunt implicate organele profunde. Aceast categorie cuprinde fungii oportuniti la organisme imunocompromise
Reproducerea asexuat spori inhalai Cryptococcus o singur celul reproducerea prin diviziune Histoplasma formeaz hife la tmediului dar n organismul gazdei se gsete ca celule levurice Candida (excepie) formeaz hife n organism Micozele superficiale se transmit prin contact direct Micozele profunde (m.a. la imunocompromii) toxine (ex. aflatoxine la Aspergillus flavus spori inhalai) Cndida sp. aparine florei normale afeciuni la gazda imunocompromis Formele filamentoase cresc extracelular Formele levurice supravieuiesc i se multiplic n macrofage i PMN Infecii fungice la om Infecii fungice de interes medical Tip Localizare Denumirea infeciei Microorganis m Cretere Superficial Pr, strat mort cutanat Ptiriasis versicolor, tinea nigra, pedra Trichosporon, Malassezia, Exophiala Y (ciuperci) /F(filamente) Cutanat Epiderm, pr, unghii Tinea Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton F Subcutanat Derm, subcutan Spirotrichosis, micetoma Sporothrix Y, F Sistemic Organismul integral Coccidioidomicoze, histoplasmoze, blastomicoze, paracoccioidomicoze Coccidioides, Histoplasma, Blastomices, Paracoccidioides Endospori Y Y Y oprortunistic Organismul integral Cryptococcosis, candidoze, aspergiloze, pn. pneumocistic Cryptococcus Candida, Aspergillus, P. jirovecii Y Y F Diagnosticul de laborator n Micologie Diagnosticul micologic presupune izolarea i identificarea fungilor din produsul patologic. Etapele diagnosticului micologic: recoltarea produsului patologic; examenul microscopic (preparat nativ ntre lam i lamel, cu utilizarea soluiilor disociante KOH, NaOH, n concentraie de 10-30%); examenul microscopic pe frotiuri colorate (albastru de metilen, Gram); cultivarea pe medii speciale selective (Sabouraud simplu, Sabouraud cu adaus de gentamicin i cloramfenicol, Sabouraud cu actidion i rou fenol mediul Mycoline; medii cromogene - Chromagar); identificarea, prin utilizarea testelor de identificare (galerii API 20 C AUX, Candifast 2 n 1, sau automat, n sistemul Vitek 32, folosind cardurile YBC- Yeast Biochemical Card); testarea sensibilitii la antifungice (antifungigrama difuzimetric, ATB Fungus 2 INT, Candifast 2 n 1, Mycofast, carduri YST analizorul automat Vitek 32, teste E). Testele serologice au specificitate n infeciile invazive. PROTOZOARE Protozoarele infecteaz esuturile organismului i diferite organe ca: - parazii intracelulari n variate celule ale oraganismului (hematii, macrofage, celule epiteliale, creier, muchi) - parazii extracelulari n snge, intestine i tract uro-genital CLASA FAMILIA GENUL SPECIA
RIZOPODA
Entamoibidae
Entamoeba E. histolytica E. coli E.gingivalis E. hartmanni
FLAGELATA
Trypanosomidae
Trypanosoma T. gambiense T. rhodesiense T. mexicana
Leishmania L. donovani L. tropica L.brasiliensis L. mexicana
Trichomonadidae
Thricomonas T. gambiense T. tenax T. hominis Hexamitidae Giardia G. duodenalis (G. lamblia) CILIATA Trichostomatina Balantidium B. coli
Plasmodium P. vivax, P. malariae P. falciparum P. ovale Incert Pneumocystis carinii Blastocystis hominis CLASIFICAREA PROTOZOARELOR SUBNCRENGTURA CLASA FAMILIA GENUL SPECIA
PLATHELMINTHES
TREMATODA Echinostomatidae Fasciola F. hepatica Dicrocoelidae Dicrocelium D dendriticum
Schistosomatidae
Schistosoma S. mansoni S. japonicum S. intercalatum S. haematobium
CESTOIDAE Taeniidae Taenia T. solium T. saginata Echinococcus E. granulosus E. multilocularis Hymenolepididae Hymenolepis H. nana H. diminuta
NEMATHELMINTHES
SECERNENTEA
Ascarididae Ascaris A. lumbricoides Toxocara T. canis T. cati Oxyuridae Enterobius E. vermicularis Trichuris T. trichiura Trichinellidae Trichinella T. spiralis Ancylostomatidae Ancylostoma A.duodenale Rhabditidae Strongyloides S. stercoralis CLASIFICAREA PROTOZOARELOR Protozoare de interes medical: cale de transmitere i infecie Protozoare de importan medical Localizare Specie Transmitere Afeciune Tract intestinal Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Cryptosoridium sp., Cyclospora cayetanensis, Microsporidia Ingestia alimentelor ce conin chiti Amoebiaz, Lambliaz, Criptosporidiaz, Ciclosporiaz, Microsporiaz Tract uro-genital Trichomonas vaginalis Sexual Tricomoniaz Snge i esuturi Trypanosoma sp. T. cruzi T. gambiense Cpua Musca tsetse Tripanosomiaz, Boala somnului Leishmania sp. L. donovanii L. tropica, L. mexicana, L. braziliensis
Purice de nisip Purice de nisip leishmanioza visceral leishmanioza cutanat leishmanioza mucoas Plasmodium sp. P. vivax, P. ovale, P. malariae P. falciparum nar anophele nar anophele Malaria Malaria Toxoplasma gondii Ingestia chistelor din carne crud, Contact cu solul contaminat cu fecale de pisic Toxoplasmoza Nutriia: - speciile intracelulare se hrnesc cu citoplasma celulei gazde - speciile extracelulare se hrnesc: direct ingestia celulei gazde Reproducerea: - ciclul asexuat n organismul gazd (diviziune binar sau multipl parcurgnd mai multe stadii) - ciclul sexuat e prezent n artropodul vector (excepie: Cryptosporidium reproducerea n gazda uman att ciclul asexuat ct i cel sexuat) HELMINI Transmiterea viermilor la om se face n 4 moduri: - prin ou sau larve infectate pe cale fecal-oral, - larve infectate n esutul unei alte gazde; - penetrarea tegumenului de ctre larve, - prin muctura unei insecte vectoare Infecii umane cu helmini, cale de transmitere, localizare Infecii umane cu CESTODE Specie Transmitere Alte gazde Localizare la om Viermi aduli Taenia saginata Taenia solium Diphyliobothrium latum Larve n carne de vit Larve n carne de porc Larve n carne de pete - - mamifere ce se hrnesc cu pete Intestin Intestin Intestin Hymenolepsis nana Ou sau larve n gndaci roztoare intestin Hymenolepsis diminuta Dipylidium caninum Larve n insecte Larve n mute obolani, oareci Cini, pisici Intestin Intestin Larve Taenia solium (cisticercoz) Ou n alimente sau apa contaminate cu fecale umane Porci Creier, ochi Echinococcus granulosus (chist hidatic) Ou transmise de cini Oi Ficat, plmni, creier Echinococcus multilocularis Ou transmise de carnivore Roztoare Ficat Taenia multiceps Ou transmise de cini Oi Creier, ochi, esut sc Transmiterea cestodelor
Infecii umane cu TREMATODE Specie Transmitere Localizare la om Schistosoma haematobium Schistosoma japonicum Schistosoma mansoni Larvele care penetreaz tegumentul vase sanguine ale vezicii vase sanguine ale intestinului vase sanguine ale intestinului Clonorchis sinensis Ingestia de pete infestat cu larve Ficat Fasciola hepatica Ingestia de legume contaminate cu larve Ficat Paragonimus westermani Ingestia de crabi infestai cu larve plmni Transmiterea trematodelor Infecii umane cu NEMATODE Specie Transmitere Localizare la om Transmitere interpersonal (om om) Ascaris lumbricoides Ingestie de ou Intestin subire Enterobius vermicularis Ingestia de ou Intestin gros Ancylostoma duodenale Necator americanus Larvele penetreaz pielea Intestin subire Intestin subire Strongyloides stercoralis Larvele penetreaz pielea, autoinfectare Intestin subire (adult) esuturi (larve) Trichuris trichiura Ingestia de ou Intestin gros Transmiterea interpersonal prin artropode Brugia malayi Muctura nar purttor de larve Limf (adult) Snge (larve) Onchocerca volvului Muctura mutei Simulium purttoare de larve Piele (larve, adult) Snge (larve) Zoonoze transmise de animale Trichinella spiralis Ingestia larvelor de porc, animale slbatice Intestin subire (adult) Larve (muchi) Toxocara canis Ingestia oulor tranmise de cine esuturi, SNC (larve) Transmiterea nematodelor:
- forme mature n tractul gastro- intestinal (ex. Ascaris, Trichinella, Strongyloides, Trichuris) - forme mature n esuturi profunde (ex. filaria) ARTROPODE Cauzeaz infecii la om: - direct prin neptur - indirect ca vector transmind infecia Exemple: pureci, pduchi, cpue, nari, mute. Infecii transmise de artropode Infecii transmise prin artropode Agentul infecios Infecie Artropod vector Virusuri: Arbovirusuri Febra galben Encefalit Febra hemoragic nar nar, cpu Cpu, nar Bacterii: Yersinia pestis Borrelia recurrentis Borrelia burgdorrferi
........... nar ........ Viermi: Wuchereria and Brugia Onchocera
Filarioza limfatic Onchocerciaza
nari Musca Simulium Diagnosticul de laborator n Parazitologie Examenul coproparazitologic presupune: - examenul macroscopic; - examenul microscopic: - preparat direct n ser fiziologic i colorat cu lugol; - preparat n strat gras (metoda Kato-Miura); - preparat dup concentrarea elementelor parazitare; - preparat permanent colorat (hematoxilin feric i Ziehl Neelsen); - metode speciale (tehnica amprentei anale: N.I.H.); - metode larvoscopice (Baermann, Harada i Mori, cultura cu crbune); - examinarea microscopic a materiilor fecale n vederea identificrii paraziilor (chiti de protozoare, ou de helmini); - cultivare: mediul Loeffler, mediul Simici, mediul TTY-SB, TTP-S, NNN, etc. Microscopie optic pentru toate produsele n care se pot vizualiza ou larve de parazii: sput, LCR, lichid pleural, urin, Microscopia electronic. Examenul histopatologic - biopsia cutanat, muscular, cerebral, intestinal, medular, hepatic, splenic, prin coloraia May-Grnwald-Giemsa. Pictura groas din probe de snge sau frotiuri colorate Giemsa din snge venos (mai multe probe de snge prelevate din 8 n 8 ore, timp de 2-3 zile n malarie). Biologia molecular utilizarea sondelor ADN prin tehnica recombinrii (PCR). Hemograma leucocitoz cu eozinofilie (n majoritatea bolilor parazitare). Diagnosticul imunologic: decelarea anticorpilor circulani (IF indirect, latex-aglutinare, RFC, hemaglutinare indirect, imunodifuzie, Elisa, RIF, HAP, Western-Blot), teste de hipersensibilizare (IDR). Xenodiagnosticul- hrnirea pe bolnav a glossinelor de cresctorie. Dup 3 zile se evideniaz tripanosomele n intestinul insectelor. Explorri imagistice examen radiologic, ecografie, CT, RMN, permit localizarea parazitului i talia acesuia.