ENZIMELE

OBIECTIVELE:
Natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Dovezile naturii
proteice a enzimelor. Diferena dintre aciunea enzimelor i
catalizatorilor nebiologici.
Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune despre
centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.
Izoenzimele i rolul lor.
Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici. Funciile de
coenzime a vitaminelor i microelementelor.
Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i rolul lor
ca coenzime.
Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i
rolul lui n formarea i transformarea complecilor intermediari
dintre enzim i substrat. Rolul modificrilor conformaionale
reciproce ale moleculei enzimei i substratului la favorizarea
catalizei (reaciei).
Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica
general a claselor i subclaselor principale de enzime. Numrul de
cod al enzimei.
 ENZIM de la grec.Eu
ZYMOS- n drojdie

Enzime catalizatori biologici de natur

proteic, ce mresc viteza reaciilor chimice
E- acioneaz strict ntr-o anumit
consecutivitate i cu o anumit specificitate
 Enzimologie-
tiina,
ce se ocup
cu studierea enzimelor

Enzimodiagnostica
- este determinarea
activittii enzimelor,
care se pot modifica n
diferite patologii cu
scop de diagnoz.
Enzimoterapia
- este utilizarea enzimelor,
extrase i purificate sau
sintetizate n laborator,
n tratamentul
diferitor patologii.
 Natura chimic a E
E- sunt proteine i posed toate proprietile fizico-chimice
specifice acestor molecule (solubilitate, proprieti osmotice,
sarcin electric net, denaturare termic)
Dovezile experimentale:
1. Sunt alctuite din AA
2. Prezint macromolecule
3. n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale specifice
4. Prezint electrolii amfolii
5. Se supun denaturrii
6. Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA (ribonucleaza,
lizozima)
 Asemnrile E cu catalizatorii
neorganici
1. catalizeaz numai reaciile posibile din punct
de vedere energetic
2. nu modific echilibrul reaciilor reversibile
3. nu modific direcia reaciei
4. nu se consum n procesul reaciilor.
 Deosebirile E de catalizatorii
neorganici
1. Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai mare dect a celei
nebiologice (1 mg de Fe n componena catalazei poate nlocui
o ton de Fe metalic).
2. Enzima posed specificitate nalt.
3. Enzimele catalizeaz reaciile chimice n condiii blnde
(presiunea obinuit, temperatura 37C, pH aproape neutru).
4. E catalizeaz reaciile fr formarea produselor intermediare
randamentul este de 100%
5. Activitatea E, de aici i reaciile enzimatice se regleaz.
6. Viteza reaciilor este direct proporional cu cantitatea enzimei.
 Structura enzimelor
Masa molecular a E e de mii de ori mai mare dect
masa molecular a substratului (S)
S - substana asupra creia acioneaz E
E acioneaz nu cu toat molecula dar cu un anumit
sector denumit centrul activ (CA)
CA - locul care asigur interaciunea E cu S i
transformarea ulterioar a acestuia.
 Particularitile CA
1. Este o combinare unical n spaiu i n timp a anumitor
resturi de AA
2. E o structur tridimensional (AA aflai n locuri diferite)
3. Are form de adncitur sau cavitate, cptuit cu AA
hidrofobi, unde nu-i acces de ap (ex. cnd apa este un
reagent al reaciei)
4. Ocup o parte relativ mic din volumul E i majoritatea
resturilor de AA n molecula E nu contacteaz cu S
5. S relativ slab se leag cu E
6. CA este alctuit din 2 sectoare:
Sectorul de contact (de legare)
Sectorul catalitic
 Centrul alosteric
Unele E posed i un alt centru (sau alte centre) dect
cel activ centru alosteric (allo stereos alt loc)
C alos - are o poziie spaial pentru fixarea
metabolitului reglator, numit efector sau modulator
Modulatorii se fixeaz necovalent i pot fi: activatori sau
inhibitori
E cu centrul alos se numesc E alosterice sau
reglatoare
La fixarea modulatorului, E alos i modific
conformaia. Modulatorii accelereaz sau inhib
utilizarea S de enzima respectiv.
 Enzime alosterice
Moleculele enzimelor alosterice sunt mai mari, mai complexe i
sunt oligomere pare
Au cinetica lor viteza reaciilor n dependen de c% S are
form sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat de urmrile
interaciunii ntre protomerii ce leag S n mod cooperativ
Sunt 2 tipuri de E alosterice
1. Homotrope - modulatorul i S constituie aceeai substan
Acumularea S activeaz v reaciei catalizate de aceast E (ex:
alcoolul activeaz alcoolDH, E ce l scindeaz)
2. Heterotrope - modulatorul se deosebete dup structur de S.
 Cofactorii enzimelor
Deosebim:
1. E simple alctuite numai din AA
2. E conjugate - snt formate din:
a. partea proteic - apoenzim
b. partea neproteic - cofactor.
Cofactori molecule (sau ioni) mici, mai stabili la aciune
dect apoenzimele
Cofactorul strns legat n structura E grupare
prostetic
Cofactorul slab legat, uor disociabil coenzim
n calitate de cofactori apar frecvent cationii unor
metale i, foarte rar, unii anioni
 Rolul Co
1. stabilizeaz conformaia activ a moleculei
2. Prezint veriga de legtur ntre S i CA prin
leg. coordinative
3. Co pot ndeplini actul de cataliz

Ex. transportul electronilor

 Clasificarea Co
Co vitaminice
1. Tiaminice
2. Flavinice
3. Nicotinamidice
4. Piridoxinice
5. Folice
6. Cobamidice
7. Biotinice
8. lipoice
Co nevitaminice
(nucleotidice; metaloporfirinice,peptidice)
 Coenzimele tiaminice
Derivaii vitaminei B1
TMP, TDP (TPP),
TTP
Rolul:
1. Decarboxilarea
oxidativ a piruvatului
2. Decarboxilarea
oxidativ a
cetoglutaratului
3. Reacii de transcetolare
 Coenzimele flavinice
Derivai ai vitaminei B2
FMN i FAD
Rolul:
1. Particip n reaciile de
oxido-reducere:
2. Dezaminarea AA
(aminoacidoxidaza)
3. Degradarea aldehidelor
(aldehidDH)
4. Degradarea purinelor
(xantinoxidaza)
5. Ciclul Krebs (succinatDH)
6. Oxidarea AG
7. DOP (dihidrolipoilDH)
 Coenzimele nicotinamidice
Sunt derivai ai vitaminei PP
niacina, niacinamida, B5
se include n structura a 2
Co- NAD i NADP
Rolul
Particip n reaciile de oxido-
reducere (dehidrogenarea S
transferul unui hibrid ion
(H+ i 2 e). Alt proton
rmne n soluie H+
Coenzimele nicotinamidice
 Coenzimele piridoxinice
Derivai a vitaminei B6
Co piridoxalfosfat i
piridoxaminfosfat
Rolul:
1. Transaminarea AA
2. Decarboxilarea AA
3. Transsulfurarea
 Ionii de metale cofactori ai E
E care n calitate de cofactori conin metale
metaloenzime
Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi
electrostatice la care particip resturile de AA acizi
(Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His)
Exemple:
1. citocromii, catalaza (Fe)
2. Citocromoxidaza (Cu)
3. Amilaza salivar (Cl)
4. alcoolDH (Zn)
 Metalele ce intr n componena
metaloenzimelor ndeplinesc urmtoarele
funcii:
1. Stabilizeaz structura E
2. Particip la legarea S
3. Particip nemijlocit la cataliz
4. Fixarea cofactorului la apoE (ex: Zn leag
NAD la alcoolDH)
 Co pantotenice (B3)- HS-CoA
1. biosinteza AG
2. biosinteza Col
3. sinteza corpilor cetonici
4. Oxidarea AG
5. Ciclul Krebs
6. Sinteza aminolevulinatului
7. DOP
8. DO a alfa cetoglutaratului
Transferul grupelor acil
 Co biotinice vitamina H
Gluconeogenez (I cale piruvatdecarboxilaza)
Sinteza AG (formarea lui malonil CoA)
Transformarea propionil-CoA n succinil CoA
(oxidarea AG cu numr impar)
Intervine n catabolismul Leu
 Co cobamidice B12 -
ciancobalamina
Vitamin antipernicioas pentru om i factor
de cretere pentru microorganisme
n ficat sunt 3 compui cobalaminici: meti-;
hidroxo- i deoxiadenozil-cobalamin
Rolul:
1. Co pentru unele transmetilaze (homocistein
metionin)
2. Co pentru anumite mutaze (izomeraze)-
metilmalonil Co A---- succinil CoA
 Co folice sau pteridinice
Bc-acidul folic
Forma activ- acidul tetrahidrofolic
Rol: transferul gruprilor cu un C: metil (CH3),
metilen(-CH2), formil (COH), formimino
(CH=NH)
 Mecanismul de aciune al enzimelor.
Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat convenional
n trei stadii:
1. Difuzia S spre E i legarea cu CA al E - formarea
complexului ES. Prima etap de scurt durat depinde
de concentraia substratului i de viteza lui de difuzie
spre centrul activ al enzimei.
 Mecanismul de aciune al E
2. Transformarea complexului primar ES n unul sau cteva complexe
activate, indicate n ecuaie prin ES* i ES**. Aceast etap este
cea mai lent i depinde de energia de activare a reaciei chimice
respective. La aceast etap are loc dereglarea legturilor S, ruperea
lor sau formarea noilor legturi n urma interaciunii grupelor
catalitice ale enzimei.
3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i difuzia lor n mediul
ambiant (complexul EP disociaz n E i P).
Ipoteza lact-cheie (Fischer) i coincidena forat
(Kochland)

Modelul clasic (Emil Fischer) consider c

potrivirea substratului cu centrul activ al enzimei
este analog cu potrivirea lact-cheie. Acest
model presupune o rigiditate a structurii enzimei
n zona centrului activ.
modelul Kochland, numit centrul activ indus,
presupune o flexibilitate a CA. n enzima liber
CA este preformat ntr-o configuraie spaial
uor diferit de cea necesar fixrii S.
S induce o modificare conformaional a CA, care
favorizeaz fixarea lui
 Conceptul clasic "lact- cheie
- elaborat n 1890 de ctre Emil Fier
- consider c potrivirea substratului cu centrul activ al enzimei
este analog cu potrivirea lact-cheie. Acest model presupune o
rigiditate a CA.
la prima etap a formrii acestui complex n rezultat se modif
structura S cptnd starea de tranziie dup care se transform n P

E+S-- ES- E+P

Conceptul coencidenei inductive
coincidena forat (Kochland)
 Mecanismul de aciune al E
La nivel molecular aciunea E poate fi lmurit prin urmtoarele
efecte:
1. Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz S i le
orienteaz ntr-un mod convenabil pentru aciunea gr. catalitice)
2. Efectul de deformare a S (dup unirea n CA molecula S se
ntinde, se deformeaz favoriznd scindarea ei)
3. Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA asupra lui
acioneaz grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc
redistribuirea densitii electronice n S i ruperea legturilor din
S
4. Cataliza covalent formarea legturilor covalente ntre CA i
S, complexul ES e foarte instabil, uor disociaz elibernd P
reaciei
 Mecanismul de aciune al E
Pentru decurgerea unei reacii este necesar ca molecula
de S i E s contacteze ntre ele, pentru aceasta e
necesar de contientizarea unei noiuni ca:
Energia de activare este energia necesar tuturor
moleculelor unui mol de substan, care la o anumit t
pot s ating starea de tranziie corespunztoare
apixului barierii energetice (KJ/mol; kcal/mol)
E - micoreaz energia de activare ale reaciilor chimice.
Cu ct mai mult scade energie de activare, cu att mai
eficient acioneaz catalizatorul, i cu att mai mult se
accelereaz reacia.
Enzymes
Lower a
Reactions
Activation
Energy
 Clasificarea actual a enzimelor.

Toate enzimele se mpart n ase clase, clasele n subclase,

subclasele n subsubclase, iar aici E i are numrul su de
ordin. Clasele, subclasele, sub-subclasele i enzimele
individuale se noteaz prin cifre desprite de puncte. Ex:
LDH - 1.1.1.27
Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de enzime
Subclasa precizeaz aciunea E, deoarece indic natura
gruprii chimice a S, atacat de E
Subsubclasa precizeaz natura legturii S atacat sau natura
acceptorului care particip la reacii
Denumirea E denumirea S +tipul reaciei catalizate +aza
 Clasificarea actual a enzimelor
1. Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-reducere;
2. Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor funcionale de la
un S la altul (metil, amino, acil,);
3. Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente cu
adiionarea apei ;
4. Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble i reaciile inverse.
5. Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri n cadrul
uneia i aceleai molecul ;
6. Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi ntre carbon
i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).
 Clasificarea enzimelor.

- catalizeaz reaciii de oxido-

reducere;
-catalizeaz transferuri
grupelor funcionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);

-catalizeaz scindri de
legturi covalente cu
adiionarea apei ;

-catalizeaz ruperea leg. C-C,

C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble
i reaciile inverse.

-catalizeaz toate tipurile de

transformri n cadrul uneia
i aceleai molecul ;
- catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).
 Izoenzimele
forme moleculare multiple ale E (la aceeai specie, n acelai esut, n
aceeai celul), ce catalizeaz aceeai reacie chimic, dar se deosebesc
prin structur, proprieti fizice, chimice i cinetice
Diferite forme de izoenzime se pot gsi fie mpreun; fie n esuturi
diferite (fosfotaza acid n prostat i hematii); sau chiar n diferite
pri ale aceleiai celule (MDH mitocondrial i citoplasmatic)
Sunt E cu structur cuaternar, alctuite din cel puin 2 protomeri
diferii
Ex. LDH (lactat piruvat)
Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri de subuniti (H inim; M-
muchi) n diferite raporturi; codificate de gene diferite.
HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM; MMMM muchi
Izoenzimele difer ntre ele prin:
1. V max de cataliz,
2. prin sensibilitatea fa de modulatorii alosterici,
3. prin sarcina electric (ce permite separarea lor prin electroforez);
4. pH-optim de aciune;
5. termolabilitate, au afinitate diferit fa de S.
 Rolul:
1. Rol nsemnat n controlul metabolic ( faciliteaza
adaptarea metabolismului in diferite esuturi.)
Ex: in miocard predomina HHHH aceasta
izoenzima este inhibata de ctre piruvat deaceea
orienteaz oxidarea piruvatului pe cale aeroba. Pe
cind fracia M4 este activat de catre piruvat i
orienteaz transformarea piruvatului pe cale
anaerob spre lactat.
2. Variaia diferitor forme de izoenzime are o
semnificaie diagnostic deosebit n unele stri
patologice.
Exemple de izoenzime:
1. creatinkinaza (2 tipuri de monomeri: M-Muscle i
B brain
2. MDH
3. Aldolaza
4. Fosfataza alcalin
5. Fosfataza acid
Proprietile generale
ale enzimelor
 Obiectivele:
1. Proprietile generale ale E (termolabilitatea, specificitatea), aciunea pH-ului
asupra activitii enzimatice.
2. Activarea i inhibarea enzimelor:
a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea alosteric,
autostructurarea cuaternar, fosforilarea i defosforilarea, reactivarea).
b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific, reversibil i ireversibil,
alosteric i competitiv).
3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n celul
importana principiului de retroinhibitie.
4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele
organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).
5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor. Cromatografia de afinitate.
6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor imobilizate
n medicin.
7. Unitile de activitate ale enzimelor.
8. Metodele de determinare a activitii enzimelor.
 Factorii care influieniaz activitatea E

Temperatura
PH
Concentraia S
Concentraia E
electroliii
 Termolabilitatea (t)
E sunt termolabile
t optim a majoritii E se afl n
limitele 20 - 40 C
odat cu creterea t cu 10C (dac
lum punctul de plecare 0 ) - V
reaciei enzimatice sporete de 1,5
ori, atingnd max la t 40C.
Majorarea de mai departe duce la
micorarea activitii enzimatice
ceea ce mrturisete despre
denaturarea proteinei. La 100C
toate E organismului sunt inactive.
Unele E a microorganismelor
termofile sunt active la t de 80C
La t joase E se inactiveaz
(excepii: catalaza: activitate max la
t=0 C)
 Termolabilitatea (t)
Creterea vitezei reaciei odat
cu creterea t este nterpretat prin
prisma "energiei de activare".
Pentru fiecare E se poate stabili o
t optim la care V atinge valoarea
max, mai departe V scade din
cauza denaturrii.
 Aciunea pH asupra activitii enzimatice

Fiecare E are un pH optim

propriu la care i manifest
activitatea maximal.
Majoritatea E celulare au pH-
ul optim- 7,4 (excepii:
hidrolazele acide lizozomale
pH= 5; MAO din membrana
mitocondrial externa pH=
10).
La E digestive pH-lui optim
este cel al sediului lor de
aciune:
1. Pepsina pH 1,5 2,
2. Amilaza pancreatic - pH
6,4-7,2,
3. Tripsina - pH 7,8-8,0
4. Arginaza- pH 9,5-10 etc.
 Dependena activitii E de
variaia pH-ului este deseori
descris de o curb n forma de
clopot.
In CA al E se afl grupri
ionizabile, acide sau bazice.
Acestea interacioneaz direct cu
ionii H+ si OH-, rezultatul fiind
creterea sau scderea gradului
lor de disociere
Deci mrind sau micornd pH-ul
mediului, se poate regla
activitatea catalitic a E.
pH optim e dependent de:
1. gradul de ionizare a grupelor
funcionale,
2. afinitii E fa de S,
3. stabilitii E.
 [E]
n condiii standard 2 mol de E ntr-o anumit
perioad de timp vor transforma de 2 ori mai
multe molecule de S dect 1 mol de E (relaie
direct proporional).
 [S]
Grafic se reprezint sub
form de o curb de tip
hiperbolic.
n perioada iniial a reaciei
V crete pe msur ce crete
[S]. La un moment dat cnd
CA al E se ocup de S V
nu mai crete. Ea rmne
constant i corespunde V
max a reaciei.
n cazul E alosterice curba
reprezint un aspect sigmoid
 Analiza curbei hiperbolice arat c ea reprezint 3 zone:
a. V de reacie crete proporional cu c% S
b. Creterea este mai ncet
c. V de reacie nu mai crete
Aceast curb este numit curba lui Michaelis-Menten i
se exprim prin ecuaia:
[S] unde: V-Vreaciei la un moment
dat
V=Vmax x _________ Vmax- viteza max

Km +[S] Km-constanta lui

Michaelis Menten
[S] C% molar a S
Km- este acea concentraie de S pentru care v de reacie este jumtate din Vmax.
Km reflect afinitatea E pentru S i anume cu ct Km este mai mic cu att
afinitatea este mai mare i invers.
 Specificitatea

este capacitatea unei E de a selecta dintr-un

numr de compui S particular.
este o proprietate a E, care instituie eficien i
ordine n metabolism, prevenind desfurarea lui
haotic.
este condiionata de complimentaritatea
conformaional i electrostatic ntre CA al E i
S.
 Specificitatea
- este capacitatea unei enzime de a selecta dintr-un
numr mare de S unul particular,
-

-este condiionat de complimentaritatea conformaional

i electrostatic ntre CA al E i S.

S4

S2
Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de reactii
sau transformarea unui anumit S.
 Specificitatea:
Specificitatea de reacie: E-
catalizeaz un anumit tip de reacie ce st la baza
clasificrii enzimelor: o hidroliza, o reacie redox,
formarea unei legturi, etc.
Specificitatede substrat:
stereochimic, absolut i
relativ :
Specificitate stereochimic - E
catalizeaz transformarea numai a unuia din
stereoizomerii posibili. Ex: Amilaza scindeaz
legturile 1-4 glucozidice din amidon sau
glicogen i nu influenteaz asupra legturilor din
celuloza.
 specificitate de S absolut - E catalizeaz
transformarea doar a unui S (anhidraza carbonica, ureaza).
specificitate de S relativ
E acioneaz nu asupra unor grupe din mol S ci asupra
anumitor legturi a anumitei grupe de S (proteazele:
chimotripsina - legatura peptidica, formata de COOH a
Phe, Tyr, Trp; tripsina - de COOH a Lyz si Arg).
E catalizeaz transformarea grupei de substane
asemntoare (alcoolDH)
E catalizeaz transformarea substanelor care aparin
diferitor grupe de compui organici (cit. P450)
 Mecanismele de activare a E
Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea
2. specifice
- Se activeaz la:
1. majorarea concentraiei S cnd este insuficient
2. majorarea cantitii E
3. introducerea coenzimelor cnd sunt insuficiente
4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu
- Se cunosc urmtoarele tipuri de reglare a activitii enzimatice:
1. proteoliza limitata
2. Reglare covalent fosforilare/ defosforilare
3. Autostructurarea cuaternar
4. Alosteric
5. Reactivare
 Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma neactiv de
precursor proenzime (zimogeni)
Exemplu:
1) enzimele digestiei: pepsinogenul, himotripsinogenul, tripsinogenul,
proelastaza, procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in stomac i
duoden.
2) coagularea singelui e determinat de cascada de reacii cu activitate
proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul).
Mecanismele de activare a proenzimelor este proteoliza limitata.
Proteoliza limitata - este scindarea (nlturarea) unui sector al catenei
n rezultat enzima se restructureaz i se formeaz CA.
H+
Pepsinogen ------pepsin
-42AA
Importanla biologic a prezenei
formelor neactive .

1. Protejaz de proteoliz proteinele celulelor

productoare de E.
2. Este o forma de rezerv a E, care rapid pot fi
activate i interven n reacie.
 Reglarea covalent
(fosforilare-defosforilare)
Activitatea unor E se modific
prin fosforilare. Reaciile de
fosforilare sunt catalizate de
kinaze specifice.
E-OH + ATP -------- E-O-P
+ADP
Defosforilarea are loc sub
aciunea fosfotazei specifice
E-OP +H2O------- E-OH
+H3PO4

unele enzime snt active n forma

fosforilat, iar altele n forma
defosforilat.
Ex.: glicogen fosforilaza activ n
forma fosforilat; glicogen sintaza
este activ n forma defosforilat
 Autostructurarea cuaternar
Este caracteristic E ce posed structur cuaternar
Fiecare protomer n parte nu posed activitate
enzimatic
La asamblarea lor se modific conformaia fiecrui
protomer i corespunztor se modific i conformaia
CA, devenind astfel favorabil pentru fixarea i
transformarea S
 E
S CA
 Inhibiia activitii enzimelor
Deosebim:
1. inhibiie nespecific (T, pH, agenii denaturrii )
2. inhibiie specific
Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil.
La inhibiiia ireversibil inhibitorul covalent se fixeaz de
enzim sau se leag att de puternic nct disociaia are loc foarte
incet.
Exemple: cianurile se fixeaz cu Fe 3+ din citocromoxidaz ---se
ntrerupe LR; ionii metalelor grele (mercur, plumb) inhib gruparea
SH a multor E
La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza slab, necovalent
de E
Deosebim:
1. Inhibiie competitiv
2. Inhibiie necompetitiv
3. Inhibiie prin exces de S
4. Inhibiie alosteric
 Inhibitorul se aseamn dup structur cu S i se fixeaz n CA al E,
mpedicnd fixarea i transformarea S.
Nu e posibil fixarea simultan a S i a I. E va fixa pe acel competitor care se afla intr-o
concentraie mai mare.
inhibiia enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza succinatul in fumarat)
Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S.
Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie este c poate fi nlturat cu
adugarea n exes a S(succinat).
 Inhibiia competitiv
I se aseamn dup structur
cu S. Apare o competiie dintre
I i S pentru CA. Nu e posibil
simultan fixarea S i a I. E va
fixa pe acel competitor care se
afl intr-o concentraie mai
mare.
E+I ---- EI
Inhibiia competitiv
diminueaz v catalizei,
micornd cota moleculelor de
E fixatoare a S.
Exemplu: inhibiia SDH cu
malonat (SDH -oxideaza
succinatul in fumarat).
Malonatul inhib aceasta E
datorit asemnrii cu S.
 Inhibiia necompetitiv

inhibitorul nu se aseamn ca structura cu S

I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint diferite
E+S+I--------- ESI
Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces de
substrat.
Activitatea I const n micorarea numrului turnover al E,
dar nu i numrul de molecule de S.
Cei mai de vaza inhibitori de acest tip n celulele vii sint
produsele intermediare ale metabolismului, care reversibil se
fixeaza cu locusuri specifice pe suprafata unor enzime
reglatoare i modific activitatea lor.
I poate fi nlturat de substane care l leag numite
reactivatori
 I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite

Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.

Cei mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint produsele intermediare
ale metabolismului, care reversibil se fixeaz la unele E reglatoare i modific
activitatea lor.
 Inhibiia noncompetetiv I se leag la
complexul ES, inhib activitatea E
E+S----ES +I-----ESI
inhibiia prin modificarea covalent a
moleculei enzimei - prin fosforilare pe baza ATP-ului.
Unele enzime fosforilate pierd activitatea de exemplu
enzima glicogensintetaza
Inhibiia prin exces de S n CA se fixeaz
simultan surplus de S ce nu poate fi transformat. Este
o inhibiie reversibil nlturarea S.
Retroinhibiie -
Inhibiie alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n centrul
alosteric al enzimei, modificnd conformaia moleculei (structura teriar)
ce are ca consecin deformarea centrului activ.

E
S CA
CA
Retroinhibiie
 Sistemele polienzimatice Tipurile de
organizare a sistemelor polienzimatice
Fiecare celul a organismului conine setul su specific de E.
Unele se gsesc n toate celulele, altele sunt prezente doar n
anumite celule sau anumite compartimente celulare. Funcia
fiecrei E, nu este izolat, ci strins legat de funcia altor
enzime. Astiel din E aparte se formeaza sisteme
polienzimatice sau conveiere.
Funcia sistemelor polienzimatice depinde de particularitile
de organizare a lor in celule.
Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a sistemelor
polienzimatice:
1. - funcional,
2. - structural-funcional
3. - mixt.
 Organizarea funcional

enzimele sunt asociate n sistemul polienzimatic

cu ajutorul metaboliilor, care difuzeaz de la o
enzim la alta.
produsul reaciei primei enzime servete drept
substrat pentru enzima urmtoare etc.
Ex.: glicoliza. Toate enzimele participante la
glicoliza sunt n stare solubil, legtura se face
doar prin intermediarii metabolici.
E1 E2 E3 E4
A---------------- B------------- C---------- D---------- P
 Organizarea structural-funcional
E sunt fixate prin legturi slabe, ntr-o ordine corespunztoare ntrrii lor n aciune, pe
o protein central, care poate fi chiar una din enzime.
Proteina central dispune de un bra care fixeaz S i l duce la E1, care l transform
n P1;
P1devine n acest caz S2 , braul l preia i l duce la E2, care l transform n P2.
La nivelul fiecrei E braul ndeplinete rol similar asigurnd formarea produsului unic al
tuturor enzimelor complexului.
Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la E corespunztoare, potrivindu-l cu
mare exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o vitez mai mare dect cea
corespunztoare aciunii enzimelor neasociate.
Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E i 5 Co
sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n
ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a acizilor grasi.
Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare
structural-funcional. Astfel E se pot aranja n lan, fixndu-se de membrana biologic.
Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la transferul de electroni i
protoni i la generarea de energie.
 Tipul mixt de organizare
reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare,
adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare
structurala, iar cealalta parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate
n complex structural (complexul 2-
oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag
funcional prin metaboliii de legtur.
 Unitile de activitate ale
enzimelor
Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E
care catalizeaz transformarea 1mol de S ntr-
un minut n condiii standard
Katal (kat) cantitatea de E care asigur
transformarea unui mol de S ntr-o secund n
condiii standard (1U.I.=16,67 nkat)
 Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor.
Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite
afeciuni (enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular:

n citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza),
n mitocondrii glutamatdehidrogenaza),
n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin).
Acestea enzime n norm n plasm se gsesc n
concentraii foarte mici. La afeciunile celulare
activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit.
 Terapia cu enzime
Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie e natura
protC:IC6:legat de natura proteic:
- distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de
fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de
receptori i fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i
reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar
proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de
hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva enzima.
 Tehnici propuse pentru optimizarea
proprietilor terapeutice ale enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici
ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi
alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol
(PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect
antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul
ureogenetic pe un suport de fibrina.
S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi -
microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome
eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un potenial de ntire
tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune
o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.
 Tipurile de organizare a sistemelor
polienzimatice:
Organizarea funcional - enzimele sunt asociate n sisteme polienzimatice, care ndeplinesc o anumit funcie.
Produsul reaciei prirmei enzime a lanului servete drept substrat pentru enzima urmtoare etc.
Ex.de organizare funcional - enzimele glicolizei, unde toate E participante se gsesc n stare solubil; Fiecare
reacie este catalizat de enzime aparte. Drept verig de legtura aici servesc metaboliii.
Organizarea structural-funcional consta n faptul ca enzimele formeaz sisteme structurale cu o anumit funcie.
Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din cteva enzime, care particip la oxidarea
acidului piruvic, sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n ansamblu
ndeplinesc funcia de sinteza a acizilor grasi.
Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare structural-funcional. Astfel
enzimele se pot aranja n lan, fixindu-se de membrana biologic. Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial,
care particip la transferul de electroni i protoni i la generarea de energie.
Tipul mixt de organizare a sistemelor polienzimatice reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare, adic o
parte din sistemul polienzimatic are organizare structurala, iar cealalt parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural (complexul 2-
oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin metaboliii de legtur.
 Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor.
Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite
afeciuni (enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular: n

citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza), n mitocondrii
glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (-glucoronidaza,
fosfataza alcalin). Acestea enzime n norm n plasm se
gsesc n concentraii foarte mici. La afeciunile celulare
activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit.
 Unitile de activitate ale
enzimelor.
Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E
care catalizeaz transformarea 1mol de S ntr-
un minut n condiii standard
Katal (kat) cantitatea de E care asigur
transformarea unui mol de S ntr-o secund n
condiii standard (1U.I.=16,67 nkat)
 Terapia cu enzime
Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie sunt legate de
natura proteic:
- distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de
fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de
receptori i fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i
reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar
proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de
hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva enzima.
 Tehnici propuse pentru optimizarea
proprietilor terapeutice ale enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici
ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi
alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol
(PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect
antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul
ureogenetic pe un suport de fibrina.
S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi -
microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome
eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un potenial de ntire
tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune
o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.
Metodele de determinare a activitii
enzimelor.
Metodele de determinare a
activitii enzimelor.