Trombocitopoieza si

Patologia trombocitara
Dr. Emilia Balint
 Trombocitopoieza şi linia celulară trombocitopoietică

Trombocitopoieza este asigurată de măduva hematoformatoare care deversează

permanent trombocite în torentul circulator sangvin.
Trombocitele ocupă locul doi ca număr în cadrul celulelor circulante din sânge şi
sunt esenţiale pentru coagulare, menţinerea integrităţii vasculare şi controlul hemostazei. La
câine, pisică şi mamifere în general, aceste mici celule anucleate îşi au originea în măduva
osoasă din megacariocite.
Măduvă osoasă câine - Megacariocite
• Linia celulară trombocitopoietică ia naştere din celula Stem de gradul II, unipotentă orientată
trombocitoformator.
Filiaţia celulară începe cu hemocitoblastul trombocitopoietic, care prin diviziune si
citodiferentiere genereaza megacarioblastul “seful liniei” celulă de talie mare de 30-35µ, cu
nucleu relativ ovoidal, având cromatina nucleară laxă, lăsând să se întrevadă prezenţa unei
structuri nucleolare. Citoplasma este bazofilă şi agranulată.
În interiorul acestei celule are loc un proces de endoreplicare, în urma căruia va lua
naştere megacariocitul bazofil, celulă de 40µ cu nucleul brăzdat de multiple eşancruri (având
tendinţă de lobulare), cromatina acestuia este tahicromă, densificată fără nucleol.
Citoplasma bazofilă poate conţine inconstant granulaţii azurofile.
Procesul de endoreplicare continuă rezultând megacariocitul granular, celulă cu o
talie >150µ, cu nucleu polilobat cu cromatina nucleară densificată, anucleolată.
Citoplasma este largă şi plină de granulaţii oxifile cu o tinctorialitate de la slab bazofilă (fum de
ţigară) până la acidofilă .
 Megacariocitul granular prin maturare dă naştere megacariocitului
trombocitogen, celulă de talie mare de circa 100µ cu nucleul înmugurit uşor,
împins spre periferia celulei cu o cromatină nucleară puternic densificată.
Nucleul nu prezintă nucleoli, citoplasma este acidofilă, foarte largă,
având un număr de granulaţii oxifile cu tendinţă de aglutinare .
 Când maturaţia granulaţiilor este completa, masa de trombocite formată de
fiecare megacariocit (aproximativ 4000) se eliberează în circuitul sangvin în urma
lizei celulare (rexa). Nucleii liberi sunt fagocitaţi de macrofage.
Aproximativ 150 de milioane de plachete sunt eliberate în fiecare zi pentru
a menţine numărul de 150 pana la 400 mii de celule/ml sânge .
Producţia megacariocitelor şi plachetelor este reglată de trombopoietină.
Aceasta este secretată în cea mai mare parte de ficat şi într-o mai mică măsură de
rinichi. Pe lângă trombopoietină mai există şi alţi factori de creştere şi citokine ce
reglează producţia de plachete.
Mulţi dintre aceşti factori afecteaza hematopoieza în general sau acţionează
sinergic cu trombopoietina.
Deci: in procesul de producere a trombocitelor, megacariocitele trec prin cinci
faze de dezvoltare:

1. formarea megacariocitelor din precursori medulari;

2. proliferarea nucleară (endoreplicarea) în fiecare celulă;
3. maturarea citoplasmei şi demarcarea în subunităţi trombocitare;
4. eliberarea trombocitelor în circulaţie prin rexa celulara,
5. fagocitarea materialului nuclear de catre macrofage.
 Celula Stem I multipotenta

Celula Stem II orientata trombocitopoietic

Hemocitoblast trombocitogen

Megacarioblast

Megacariocit bazofil

Megacariocit granular

Megacariocit trombocitogen

Trombocite

Linia celulara trombocitopoietica

 Morfologia şi fiziologia trombocitului

Trombocitele au o durată de viaţă de 5-10 zile la majoritatea animalelor domestice.

Splina înmagazinează aproximativ 30% din totalul de trombocite,dar contracţia splinei în
urma stimulării α-adrenergice (cum se întâmplă în timpul efortului) nu duce la trombocitoză la
câine.
Plachetele la câine şi pisică apar ovale sau rotunde în frotiurile de sânge periferic.
Plachetele variază în dimensiuni în mod normal de la 2 pana la 4 microni.
Trombocitele parţial activate au o formă asemănătoare unui păianjen cu procese
citoplasmatice subţiri ce provin dintr-un corp celular sferic, putand ajunge pana la forme de
megatrombocite. Acestea nu au intotdeuna semnificatie patologica.
Plachetele pot să apară agregate sau aglutinate într-o masă amorfă in frotiurile de sânge
(o caracteristica mai des întâlnită în frotiurile de sânge la feline).
Sânge periferic – MGG x 2000 - Aspectul trombocitelor de volum mic - aspectul quasi
normal (cantitativ şi calitativ)
 Structura electronoptică a trombocitului
cuprinde numai membrane şi citoplasmă, lipsind nucleul.
Membrana, de natură lipoproteică, este acoperită de un strat de
glicoproteine care permite absorbţia unor proteine plasmatice (în
special fibrinogen şi factorul 8 al coagulării), jucând un rol deosebit în
agregarea trombocitară.
Membrana trombocitului prezintă mici văluri ondulante, rare
prelungiri digitiforme şi frecvente invaginări de pinocitoză.
 Citoplasma trombocitului, examinată la microscopul electronic, prezintă două zone:
1. Zonă externă numită hialomer ce conţtine: microtubule, microfilamente şi diferite proteine
implicate în procesul de coagulare sangvină.
2. Zonă centrală denumită granulomer ce cuprinde un ansamblu de granule purpurii şi
vacuole de mărimi diferite.

In structura trombocitului se evidentiaza mai multe sisteme canaliculare.

Exista un sistem canalicular deschis ce are contact cu invaginatiile membrane celulare pe unde
se elibereaza molecule functionale.

Un al doilea sistem canalicular format din microtubule denumit fascicul marginal se

gaseste la marginea structurii celulare.
 In hialomer exista deasemenea un sistem tubular dens. Acesta reprezinta suportul atat al
motilitatii trombocitului, cat si proprietatea de agregare a acestuia, deoarece contine multiple molecule
de actina si miozina, realizand sistemul contractil al trombocitului.

Granulomerul la randul sau prezinta 3 tipuri de granulatii:

- Granulatii mari: alfa, avand o marime cuprinsa intre 300-500 nm, care contin aproape in
exclusivitate fibrinogen;

- Granulatii medii: teta, cu un diamentru cuprins intre 250-300 nm, care contin ioni de calciu,
serotonina, pirofosfat, adenozin difosfat, adenozin trifosfat (ATP)

- Granulatii mici: lamnda, contin enzime lizozomale.

Fenomen de agregare trombocitara; SEMx5000

Trombocite cu intensa multiplicare a prelungirilor

citoplasmatice; SEMx15000
SEM color x 10000 – prezenta
unui agregat trombocitar pe
cale de necrobioza.
SEM color x 5000 – fagocitarea de catre
o celula macrofagica a doua trombocite
agregate in stare de pre-necrobioza
 În citoplasma plachetelor sangvine există factori activi cum ar fi:
molecule contractile de acto-miozină, resturi de reticul endoplasmic şi
aparat Golgi care sintetizează diverse enzime şi stochează cantitaţi
importante de calciu, mitocondrii capabile să sintetizeze adenozin
trifosfat şi adenozin difosfat, sisteme enzimatice care sintetizează
prostaglandine cu rol în diferite reacţii vasculare şi tisulare, factorul
stabilizator al fibrinei cu rol în coagularea sângelui.
Structura trombocitului
 Funcţiile trombocitului

- asigurarea hemostazei :- proprietatea de a adera la peretele vascular lezat unde formează plăci hemostatice şi
apoi trombi plachetari;
- adezivitate, agregabilitate şi metamorfoza vâscoasă finală;
- eliberarea a 4 factori coagulotropi mai importanţi.
- factorul 1 trombocitar – transformarea protrombinei în trombină;
- factorul 2 trombocitar – transformarea fibrinogenului în fibrină (accelerator);
- factorul 3 trombocitar – acţiune de tip tromboplastic;
- factorul 4 trombocitar – neutralizează excesul de heparină;
- organizează reţeaua de fibrină;
- conduce la procesul de retracţie al cheagului prin secreţia de
trombostenină (retractozim);
- mai secretă şi factori vasotropi – unii asigură troficitatea capilarelor
– alţii au acţiune vasocontrictoare identică cu
a serotoninei
Trombocitele:
- conţin 8 din cei 12 factori ai coagulării;
- eliberează factori care cresc permeabilitatea peretelui vascular (serotonină,
prostaglandina E2);
- pot endocita particule foarte mici prin agregarea lor în jurul acestora;
- intervin în vindecarea rănilor, eliberând factori stimulatori cu acţiune
asupra creşterii fibrelor musculare netede de la nivel arterial sau asupra
fibroblaştilor din piele.
 Deci etapele care sunt parcurse pentru realizarea hemostazei sunt:

1. Agregare primara- realizeaza dopul trombocitar necesar opririi hemoragiei

2. Agregare secundara- realizeaza marirea in volum a dopului trombocitar primar
3. Coagularea sangelui- realizeaza debutul cascadei coagularii avand drept finalizare dopul
de fibrină care este sub forma de trombus.
4. Retractia trombusului se realizeaza prin sistemul contractil al trombocitului pe relatia
miozina plus actina plus ATP.
5. Dizolvarea trombusului se realizeaza prin interventia enzimei “plasmina”.
 S.P.MGG x 3000 - Agregat trombocitar circulant
de tip monomorf antrenând în exclusivitate
trombocite de talie mică quasinormale, se
observă lipsa microvililor de la nivelul
membranei celulare

S.P.MGG x 3000 - Agregat trombocitar circulant de

tip monomorf antrenând în exclusivitate trombocite
de talie mică quasinormale, se observă lipsa
microvililor de la nivelul membranei celulare
 S.P.MGG x 800-3000 - Agregat trombocitar circulant
de tip polimorf. Se observă prezenţa trombocitelor
quasi normale de talie mică

S.P.MGG x 800-3000 Agregat trombocitar circulant de

tip polimorf. Se observă prezenţa trombocitelor quasi
normale de talie mică alaturi de megatrombocite şi
prezenţa microvililor la nivelul memebranei celulare
 Leziune celulară
Aderenţa şi Activarea
agregarea sistemului de
trombocitelor coagulare

Trombus Trombus
trombocitar de fibrină

Obturarea leziunii

Regenerare celulară
endotelială,
epitelială şi
conjunctivală

Vindecare

Participarea trombocitelor şi a sistemului de coagulare la hemostază

 Patologia trombocitară la câine şi pisică
Morfologia anormală a plachetelor

1. Trombocitele mari atât la câine cât şi la pisică sunt considerate cele ce au

diametrul aproximativ egal cu al eritrocitelor. Trombocitele de această mărime nu se
intâlnesc în sângele normal la câine, iar la pisică constituie un procentaj mic.
Plachetele gigantice sunt mai mari decât eritrocitele şi nu se întâlnesc în mod
normal în sângele animalelor sănătoase.
Prezenţa plachetelor gigante (macroplachete sau megaplachete) la un animal cu
trombocitopenie sugerează o trombopoieză crescută, dar megaplachetele pot fi prezente
şi la animalele cu trombocitopenie şi cu tulburări mielodisplastice sau mieloproliferative.
2. Trombocitele de dimensiuni mici au o incidenţa crescută la câinii cu
trombocitopenie mediată imun sau cu diferite afecţiuni cronice.
3. Plachete cu forme iregulate sau granulate atipic pot fi întâlnite în sângele
animalelor cu tulburări ale măduvei osoase, mai ales la acele animale care prezintă
tulburări mieloproliferative şi la pisicile ce au infecţie cu Felv(virusul leucemiei
feline) .
4. Când plachetele sunt activate granulele din interiorul acestora sunt aduse
împreună de reţeaua ce le înconjoară formată de microtubuli şi microfilamente.
Această agregare centrală a granulaţiilor plachetelor poate fi confundată cu un
nucleu.
5. Plachetele hipogranulare pot rezulta în urma activării şi secreţiei dar au fost
întâlnite şi la animale cu tulburări mieloproliferative.
 S.P.MGG x 4000 - Megatrombocit agregat cu
trombocit de talie mică (stare normală). Se observa
multiple structuri microvilare foarte scurte

S.P.MGG x 3000 - Megatrombocit cu multiple

prelungiri microvilare. Se observă într-o hematie
prezenţa unei Haemobartonelle
 S.P.MGG x 3000 - Debut al unei agregari
trombocitare. Participă un trombocit cu rare structuri
microvilare şi un alt trombocit cu numeroase structuri
lungi (aspect nespecific quasinormal al trombocitelor)

S.P.MGG x 4000 - Megatrombocit cu numeroase

structuri microvilare lungi (aspect stufos)
Trombocitopenii si trombocitoze
 Trombocitopenia

Trombocitopenia reprezinta scăderea numărului de plachete în sângele

periferic sub 15000. Aceasta conduce la un deficit de coagulare care determina
aparitia sindromului hemoragic de diferite dimensiuni si localizari.
Cauzele trombocitopeniei sunt fie de deficit de formare a trombocitelor, fie
de ritm exagerat de citoliza trombocitara prin anticorpi antitrombocitari.
Clinic trombocitopenia se clasifica in:
-Primara (idiopatica)
-Secundara consecutiv unor maladii sau intoxicatii medicamentoase
 Forma primara cunoscuta clinic sub denumirea de purpura idiopatica trombocitopenica
sau boala Werlhof.
Aceasta se caracterizeaza prin aparitia purpurei hemoragice pe fondul unui titru foarte inalt de auto
anticorpi antitrombocitari.
Forma secundara are o larga etiologie. Intre acestea citam:
- boli de colagen
- boli infectioase
- boli anafilactice
- arsuri
- medicamente
- radiatii
- neoplasme in sfera tubului digestiv
- limfoame maligne sau leucemii
 Cauze raportate ale trombocitopeniei la câine şi pisică
Specia Categoria generală Exemple
Câine infecţioase Virusuri: maladia Carre, herpes, hepatitei
infecţioase, parvovirozei;
Bacterii: Anaplasma phagocytophilum,
A.platys, Ehrlichia canis, Rickettsia rickettssi,
leptospira, salmonella, bartonella, borelia,
haemobartonella;
Fungi: histoplasmoza, candidoza;
Protozoare: babesia, leishmania
Nematode: dirofilaria

neoplazii Hemangiosarcom, neoplazii limfo- si

mieloproliferative, diverse neoplasme tisulare
solide
medicamente/toxine Antibiotice(sulfonamide,cefalosporine),
chimioterapice(ciclofosfamida,
Doxorubicina),
antiiinflamatoare(fenilbutazona,carprofen),
fenobarbital, tiace-tarsamida, estrogen, venin
de sarpe
diverse Trombocitopenia mediată imun(TMI),
Coagularea intravasculară diseminată(CID)
Pisică infecţioase Virusuri: FelV, FIV (virusul
imunodeficienţei feline),PIF (virusul
peritonotei infecţioase feline),parvovirus,
coronavirus
Bacterii: A.phagocytophilum, micoplasma,
salmonella, bartonela
Fungi: histoplasmoza
Protozoare: toxoplasmoza
Nematode: dirofilaria

neoplazii Neoplazii limfo- si mieloproliferative,diverse

neoplasme tisulare solide

medicamente/toxine Chimioterapeutice,griseofulvina,methimazol,
propiltiouracil

diverse TMI,CID
 Medicamente cu efect antiplachetar
Clasa medicamentului Denumirea substanţei active Efectul asupra liniei trombocitare
Antibiotice şi antifungice Carbenicilina Acţiune necunoscută
Cefalosporina Trombopatii-interferează sau interacţionează cu
receptorii membranari
Trompocitopenie
Cloramfenicol Trombocitopenie
Penicilina Trombocitopenie
Sulfonamide
Antiinflamatoare Aspirina Trombopatii-inhibarea prostaglandinelor
Trombopatii-inhibarea prostaglandinelor
Ibuprofen Trombopatii-inhibarea prostaglandinelor
Trombopatii-inhibarea prostaglandinelor plus
Naproxen trombocitopenie

Fenilbutazona

Medicamente cu acţiune la nivelul cordului şi Aminofilina Trombopatii-inhibarea diesterazei

aparatului respirator Trombopatii-blocarea calciului
Deltiazim Trombocitopenie
Trombopatii-acţiune la nivel membranar
Procainamide Trombopatii-acţiune la nivel membranar plus
Propranolol blocarea calciului

Verapamil
Citotoxice Azationina Trombocitopenie
Clorambucil Trombocitopenie
Doxorubicina Trombocitopenie
Hormoni Estrogeni Trombocitopenie
 Semnele clinice ale trombocitopeniei şi riscul de hemoragie

Semnele clinice care pot conduce la o suspiciune de trombocitopenie sunt:

-peteşiile sau echimozele la nivelul ţesuturilor sau la nivel de mucoase,
-epistaxis,
-melenă,
-hematemeza,
-hematurie,
-sângerare prelungită după venisectie,
-hemoragii retiniene (hipema).
 Totuşi, semnele clinice de hemoragie sunt rar întâlnite. Mai frecvent,
trombocitopenia este de obicei identificată la o hemoleucogramă de rutină.
Animalele care au un număr scăzut de plachete pot să nu manifeste nici
un semn clinic sau prezintă letargie, slăbiciune, febră sau alte semne legate de
un proces morbid subiacent.
În ciuda observării că hemoragia nu este o trăsătură consecventă,
animalele trombocitopenice prezintă un risc crescut de hemoragie .
Hemoragia cauzată exclusiv de trombocitopenie nu apare de obicei până
când numărul plachetelor nu este scăzut drastic(<50.000plachete/microL).
 Diagnosticul trombocitopeniilor

Ca si in cazul anemiilor si pentru aceasta linie celulara va trebui sa stabilim

daca trombocitopenia se datoreaza unui deficit de producţie de la nivelul maduvei
hematoformatoare, sau de o distructie la nivel periferic,( fie prin consum crescut fie
datorita sechestrarii celulelor in unele organe).
Deci diagnosticul se poate pune pe baza coroborari anamnezei cu examenelor de
laborator (exm cantitativ al tuturor liniilor celulare si in special al trombocitelor, exm
calitativ in frotiu privind morfologia celulara, examinarea medulogramei, teste de
masurare a timpului de sangerare, a timpului de coagulare cum ar fi timpul de
trombina, tromboplastina, determinarea fibrinogenului etc.
 S.P.MGG x 2000-3000 - Aspect de tip relaţional
între trombocitele de talie mică cu un monocit
sub formă de agregat trombocitar monomorf.

S.P.MGG x 2000-3000 - Aspect de tip relaţional între

trombocitele de talie mică şi magatrombocite cu un
limfocit sub formă de macroagregat polimorf.
 S.P.MGG x 1000 - Aspect de agregareliză al
macroagregatelor trombocitare. Nu se mai pot
distinge participanţii individuali la procesul de
agregare trombocitară

S.P.MGG x 1000 - Aspect de agregareliză al

macroagregatelor trombocitare. Nu se mai pot
distinge participanţii individuali la procesul de
agregare trombocitară
 Trombocitoze

Clasificare

Din punc de vedere fiziopatologic si clinic trombocitozele se clasifica in:

- Primare sub forma leucemiei cu megacariocite, in care numarul de trombocite pe ml de sange

depaseste 2-3 milioane.

- Secundare care evolueaza in diferite situatii patologice cum ar fi:

-fracturi

-intoxicatii

-reactii alergice la medicamente

-TBC

In aceste cazuri valorile trombocitelor pe ml sange sunt cuprinse cu valori de peste 500000 pana la
1million. In toate aceste cazuri pericolul clinic cel mai mare este generat de aparitia trombozelor.
Trombocitemia primara (esentiala) este cea mai rar intalnita dintre mieloproliferarile cronice (LMA,
LMC,LMMoA,LMMoC,LMoA,LMoC), in care proliferarea celulara vizeaza seria
megacariotrombocitara.
CLINIC:
- fara adenopatii, splenomegalii sau hepatomegalii semnificative;
- semne de tromboze si hemoragii precedate de catre manifestari hemoragipare superficiale sau
profunde care pot duce la emboli;
- microtromboze in circulatia cerebrala determina ischemie cu semne neurologice;
- pot aparea hemoragii spontane la traumatisme minore la nivel cutanat, sub forma de echimoze
sau pe mucoase.

Diagnostic de Laborator: cresterea numerica a trombocitelor, peste 1.000.000/mm3

Examen calitativ: plaje de trombocite gigante cu dimorfism trombocitar, cu framente de nuclei liberi
de megacariocite
Maduva: este hipercelulara, cu hiperplazie pe seria megacariocitara, cu celule gigante si anomalii
nucleare.
 Cauzele şi mecanismele asociate trombocitozei
Cauze Mecanisme
Pseudotrombocitoza fragmentele celulare non-plachetare sunt numărate ca şi
fragmente de celule roşii,leucocite fragile plachete

Fiziologică
epinefrina(trauma,efort) contracţie splenică
post-splenectomie lipsa sechestrării

Indusă de medicamente
epinefrina Contracţie splenică
vincristina Magacariopoieză crescută

Reactivă
inflamaţie,infecţie,neoplazie(hematopoietica şi non-
hematopoietică),trauma,ca recul al trombocitopeniei
legata de deficienţa în fier
mediat citokinic(direct sau indirect prin producţia de
trombopoietină),megacariopoieză crescută
necunoscut

Neoplazii ce implică megacariocitele

boli cronice mieloproliferative:trombocitemia
esenţiala,leucemia mieloidă cronică,leucemia bazofilică
cronică,policitemia vera,mielofibroza cronică idiopatică
leucemia cronică magacariocitară
mutaţii genetice moştenite sau dobândite ce determină
proliferarea trombopoietin-independentă
mutaţii genetice moştenite sau dobândite
 Trombocitopatii functionale

Acest capitol este atribuit tuturor modificarilor de citoarhitectonica a membranei

celulare a trombocitului care vor antrena modificari in functiile de aderenta si de agregare a
trombocitului.

Aceste modificari cu toate ca nu influenteaza numarul total de trombocite vor

conduce la modificari atat de fragilitate vasculara cat si de prelungire a timpului de
sangerare.

Clinic, aceste modificari vor genera leziuni hemoragice, tegumentare, pe mucoase,la

nivelul articulatiilor,in diferite viscere, cat si la nivelul encefalului.

Leziunile hemoragice se pot prezenta fie sub forma de purpura ( diametrul acestora
fiind mai mare de 3 µm sau sub forma de petesii care au in diametru de pana la 2µm.
SEM color x 10000 – puternica fagocitoza a unor agregate trombocitare cu suferinta a citoarhitectonicei a acestora de
catre un macrofag secretor
SEM color x 5000 – doua
trombocite (dreapta) in deficit de
citoarhitectonica.
Stanga – macrofag in faza de
repaus.
SEM color x 10000 – trombocit in
faza de agregare cu multiple
elemente de deficit citoarhitectonic
in partea inferioara amembranei
celulare