LP 14

DOZAREA BILIRUBINEI: principiul metodei, valori normale, variaii

patologice

Bilirubina este produs n macrofage prin catabolismul enzimatic al fraciunii hem

din diverse hemoproteine.

Aproximativ 80 % din bilirubina circulant deriv din eritrocitele imbtrnite. Cnd

eritrocitele circulante ating sfritul vieii lor normale de aproximativ 120 zile, ele
sunt distruse de celulele reticuloendoteliale.

Oxidarea hemului genereaz biliverdina, care este metabolizat la rndul su in

bilirubin. Restul de 15-20 % din bilirubina circulant provine din alte surse
(distrugerea eritrocitelor mature din maduva osoas hematogen sau metabolismul
altor proteine ce conin hem citocromii hepatici, mioglobina muscular, enzime).

n snge, bilirubina se gsete sub form liber, neconjugat, insolubil. Bilirubina

indirect, la nivelul fluxului sangvin din ficat, se transform intr-o form solubil
(direct sau conjugat).

Bilirubina este o substan galben-maronie, care se gsete in bil.

Bilirubina este eliminat prin fecale dndu-i culoarea maronie specific.

Principiul metodei

Bilirubina poate fi:

- Bilirubina direct sau bilirubina conjugat, solubil BC
- Bilirubina indirect sau bilirubina neconjugat, liber, insolubil - BI
- Bilirubina total BT (Bilirubina total = Bilirubina neconjugat
(indirect) + Bilirubina direct)

Bilirubina total i direct sunt determinate prin analize iar bilirubina indirect
rezult prin calcul.

Bilirubina direct, conjugat reacioneaz direct cu acidul sulfanilic diazotat formnd

un azopigment colorat (azobilirubina).

Bilirubina indirect, neconjugat, liber reacioneaz indirect cu acidul sulfanilic

diazotat.

Deci, prin tratarea serului direct cu acidul sulfanilic diazotat, complexul colorat
format se datoreaz numai BC (directe) iar prin tratarea prelungit a serului cu un
1
accelerator (cofeina, benzoat) apoi cu acid sulfanilic diazotat complexul colorat
format se datoreaz bilirubinei totale BT.

Se msoar extincia azopigmentului de culoare roie (in mediu neutru) pentru

bilirubina direct si extincia azopigmentului verde-albastru (in mediu alcalin) pentru
bilirubina total.

Intensitatea coloraiei este proporional cu concentraia bilirubinei din ser.

Tehnica de lucru

Dozarea bilirubinei totale

In doua eprubete, martor si prob se pipeteaz dup cum urmeaz:

Reactivi Martor Proba

Ser 0,25 ml 0,25 ml
Solutie acid sulfanilic 0,25 ml 0,25 ml
Solutie azotit de sodiu - 0,1 ml
Accelerator 1 ml 1 ml
Agitare si repaus la temperatura camerei 20 min.
Tartrat alcalin 1 ml 1 ml

Eprubetele se agita si dupa 5 min se citeste extinctia probei Ep fata de martor, la

lungimea de unde de 600nm in cuve de 1 cm.

Calcul
mg BT/100 ml ser = Ep x Vf / a x Vi
mg BT/100 ml ser = Ep x 2,6 / 1,15 x 0,25
mg BT/100 ml ser = Ep x 9,04
unde:
a = 1,15 coeficient de extinctie pentru pigmentul azoic la lungimea de unda de
600nm;
Vf = 2,6 ml volumul final al solutiei
Vi = 0,25 ml volumul initial al probei

2
Dozarea bilirubinei directe

In doua eprubete - martor si proba - se pipeteaz dup cum urmeaz:

Reactivi Martor Proba

Ser 0,5 ml 0,5 ml
Ser fiziologic 2 ml 2 ml
Solutie acid sulfanilic 0,3 ml 0,3 ml
Solutie azotit de sodiu - 0,1 ml

Se agit coninutul eprubetelor si dupa 5 min. se citete extincia probei fa de

martor la lungimea de unde de 530nm in cuve de 1 cm.

Calcul
mg BD/100 ml ser = Ep x Vf / a x Vi
mg BD/100 ml ser = Ep x 2,9 / 0,943 x 0,5
mg BD/100 ml ser = Ep x 6,1

unde:

a = 0,943 coeficient de extinctie pentru pigmentul azoic la lungimea de unda de

600nm;
Vf = 2,9 ml volumul final al solutiei
Vi = 0,5 ml volumul initial al probei

Valori normale

Bilirubina total (adulti, copii) < 1 (0,11,0 mg/dL)

(nou nscui ) < 6
Bilirubina directa maxim 0,25 0,30 mg/dL
Bilirubina indirecta < 1

La nou nascutul normal valoarea bilirubinei creste pana la 8 mg/dl deoarece enzima
care catalizeaza sinteza bilirubinei conjugate are activitate mica.
La nou nascutii prematuri valoarea bilirubinei creste pana la 12 15 mg/dl ser.
Aceasta valoare se regaseste in icterul fiziologic al nou nascutului.

Variatii patologice

Cnd bilirubinemia crete peste limita superioar a valorilor normale, bilirubina trece
din snge in esuturi i coloreaz in galben tegumentele si mucoasele (sindrom
icteric). Icterul se manifest la o concentraie de bilirubin de 2 2,5 mg/dl.

3
Valori crescute bilirubina totala in:
- Anemie hemolitica
- Afectiuni hepatocelulare
- Colestaza intra sau extrahepatic

Valori crescute de bilirubina libera, neconjugata, indirecta, in:

- ictere hemolitice
- hepatite cronice
- ciroze
- colestaza
- defecte enzimatice in procesul de transformare a bilirubinei libere in
bilirubina conjugata (sindrom Gilbert, sindrom Crigler-Najjar)

Valori crescute de bilirubina conjugata

- ictere mecanice
- hepatite
- ciroze
- colestaza
- sindrom Dubin-Johnson

Valorile scazute ale bilirubinei nu au semnificatie clinica.