Tehnologii ADN

recombinant
 Analiza genelor

ADN ARN
Proteine
Secvenţiere Northern-blot Western-blot

PCR RT–PCR Secvenţiere

Southern-blot Hibridare in situ Analiza funcţiei

Hibridare in situ Analiza

histochimică
 Utilizarea tehnicilor de
analiză a acizilor nucleici
 Analiza ADN:

 depistarea mutaţiilor genice → diagnostic precis al

bolilor genetice (prenatal, postnatal precoce);
 identificarea polimorfismului individual →
dactiloscopie genomică (analiza filiaţiei);
 depistarea ADN străin (bacterian, viral) → diagnosticul
bolilor infecţioase şi gradului de infectare.
 Analiza ARNm:

 analiza expresiei genice ţesut-specifică;

 evaluarea gradului de expresie a genei normale /

patologice.
 Izolarea acizilor nucleici
Izolarea ADN
• Colectarea materialului biologic (celule nucleate din
orice ţesut)
• Izolarea nucleilor (opţional) prin lezarea celulelor în
soluţii hipotonice
• Lezarea celulelor (nucleilor) prin acţiunea detergenţilor

• Deproteinizarea: prin acţiunea proteazelor, urmată de

prelucrarea cu solvenţi organici (fenol, cloroform)

• Precipitarea acizilor nucleici în prezenţa alcoolilor şi a

sărurilor (70% etanol)
Izolarea ARNm
• Colectarea materialului din ţesutul de interes la stadia de
interes

• Lezarea celulelor în prezenţa detergenţilor şi a inhibitorilor de

ARN-aze

• Deproteinizarea cu utilizarea solvenţilor organici

• Precipitarea selectivă a ARN în prezenţa sărurilor (LiCl,

CH3COONa)

• Precipitarea ARN în prezenţa alcoolului.

 ADN
ADN recombinant – recombinant
moleculă de ADN obţinută
din segmente de origine
diferită, capabilă să
funcţioneze