BIOCHIMIE MEDICAL

Suport curs pentru studenii Facultilor de Medicin i Asisten Medical

CUPRINS
1. Proteine 2. Enzime 3. Vitamine 4. Energetica biochimic 5. Metabolismul glucidic 6. Metabolismul lipidic 7. Metabolismul proteic 8. Metabolismul nucleotidelor purinice si pirimidinice 9. Metabolismul cromoproteinelor 9.1. Biosinteza hemoglobinei 9.2. Degradarea hemoglobinei (bilirubinogenez Abrevieri folosite n text

1. PROTEINE

Proteinele sunt componeni de baz ai celulei, reprezentnd aproximativ 50% din greutatea ei uscat. Proteinele se gsesc n toate compartimentele celulare, fiind substane fundamentale din toate punctele de vedere pentru structura i funcia celulei. Prin hidroliza proteinelor se obin compui cu greutate moleculara mica, aminoacizi. n organism proteinele ndeplinesc funcii multiple (plastic, energetic, catalitic etc.) care le difereniaz de lipide sau glucide. n alctuirea moleculelor proteice, aminoacizii se unesc prin legturi amidice numite legturi peptidice, care se realizeaz prin eliminarea unei molecule de ap ntre gruparea carboxil a unui aminoacid i gruparea amino a aminoacidului urmtor.

1.1.AMINOACIZII Prin hidroliza proteinelor se formeaz 20 de -aminoacizi. Acetia sunt compui cu greutate molecular mic care conin dou grupri funcionale, carboxil i amino, legate de acelai atom de carbon ( C ). Formula general a unui aminoacid este:
R CH COOH NH2

la care corespund toi aminoacizii cu excepia prolinei si hidroxiprolinei. Dup structura radicalului R, aminoacizii se clasific n funcie de natura radicalului R:

Tabel 1 - Clasificarea -aminoacizilor din structura proteinelor Formula structural R CH COOH Numele uzual Numele tiinific
NH2

I. Radical alifatic (acizi monoaminomonocarboxilici)

Glicina (Glicocol) Gly (G) Alanina Ala (A) Valina Val (V) Leucina Leu (L) Izoleucina Ile (I)

Acid aminoacetic Acid amino-propionic Acid amino-izovalerianic

H CH COOH NH2 CH3 CH COOH NH2 CH3 CH CH COOH CH3 NH2 CH3 CH CH2 CH COOH CH3 CH3 NH2

Acid -amino-izocaproic Acid -amino--metilvalerianic

CH2 CH CH COOH CH3 NH2

II. Radical cu grupare acida (acizi monoaminodicarboxilici) Acid aspartic Acid amino-succinic Asp (D) HOOC CH2 CH COOH
NH2

Asparagina Asn (N)

-amida acidului amino-succinic

H2N OC CH2 CH COOH NH2

Acid glutamic Glu (E)

Acid -amino-glutaric
HOOC CH2 CH2 CH COOH NH2

Glutamina Gln (Q)

-amida acidului -aminoglutaric

H2N OC CH2 CH2 CH COOH NH2

III. Radical cu grupare bazica (acizi diaminomonocarboxilici) Arginina Acid -amino--guanidinoNH CH2 Arg (R) n-valerianic HN C
H2N

(CH2)2 CH COOH NH2

CH2 H2N

(CH2)3 CH COOH NH2

Lizina Lys (L) Hidroxilizina Hyl Histidina Hys (H)

Acid ,-diamino-carpoic Acid --diamino-hidroxi-n-carpoic Acid -amino--imidazolilpropionic

HN N

CH2 H2N

CH OH

(CH2)2 CH COOH NH2

CH2 CH COOH NH2

IV.Radical cu grupare hidroxil (Hidroxiaminoacid) Serina Acid -amino--hidroxiSer (S) propionic Treonina Thr (T) Acid -amino--hidroxi-nbutiric

CH2 CH COOH OH NH2 CH3 CH CH COOH OH NH2 CH2 CH COOH SH

S

V. Radical cu grupare tiolic (Tioaminoacizi) Cisteina Acid -amino--mercaptoCys C propionic Cistina Acid --ditio-(-aminopropionic)

NH2
CH2 CH COOH NH2

S CH2 CH COOH NH2

Metionina Met (M)

Acid -amino--metil-tio-nbutiric

CH2 CH2 CH COOH S CH3 NH2

VI. Radical aromatic (aminoacizi aromatici) Histidina (grupa III) Acid -amino--imidazolil clasificat n categoria aminopropionic acizilor bazici (III) Fenilalanina Phe (F) Acid -amino--fenilpropionic

CH2 CH COOH NH2

Tirozina Tyr (Y)

Acid -amino--(phidroxifenil) propionic

HO

CH2 CH COOH NH2

Triptofan Trp (W)

Acid -amino--(3) indolil-propionic

N

CH2 CH COOH NH2

VII. Iminoacizi Prolina Pro (P) Hidroxiprolina Hyp

Acid pirolidin-2-carboxilic
N H

COOH

Acid 4-hidroxi-pirolidin-2carboxilic

HO N H COOH

Dintre cei 20 de aminoacizi care intr n structura proteinelor animale opt aminoacizi nu pot fi sintetizai n organism: provin din alimente aminoacizii eseniali: Val, Phe, Leu, Ile, Thr, Trp, Met, Lys. 1.1.1. Proprieti fizice a) Cu excepia glicinei, toi aminoacizii conin atomi de carbon asimetric, motiv pentru care prezint activitate optic: la pH = 7 unii sunt dextrogiri (+), iar alii sunt levogiri (-). Cu toate acestea ei aparin seriei L deoarece au configuraia L- glicerinaldehidei.
CHO HO C H CH2 OH COOH H2N C H R

L glicerinaldehida

L aminoacid

n organismele animalelor superioare apar i sunt metabolizai numai L aminoacizii, n timp ce D-aminoacizii se gsesc n peretele celular al unor microorganisme sau n lanul polipeptidic din structura unor antibiotice (gramicidina, actinomicina D). Izomerii dextro i levo ai aminoacizilor formeaz perechi de enantiomeri care au proprieti chimice asemntoare. Amestecul lor echimolecular se numete amestec racemic i este lipsit de activitate optic. Sinteza enzimatic, fiind stereospecific,

conduce la unul sau cellalt enantiomer. Sinteza n laborator conduce la amestecuri racemice de aminoacizi. Acest tip de amestec se poate obine numai pe cale sintetic. b) Aminoacizii sunt substane cristaline, solubile n ap, puin solubile n solveni organici, cu puncte de topire de peste 200o C. n soluii apoase ei se gsesc sub forma de ioni dipolari sau zwiterioni:
COO _

+ H3N C H R

Cnd un astfel de ion se dizolv n ap, el poate aciona fie ca un acid (donor de protoni), fie ca o baz (acceptor de protoni): Ca un acid: H3N+-CH(R)-COOH+ + H2N-CH(R)- COO+ + Ca o baza: H3N -CH(R)-COO + H H3N+-CH(R)-COOH Substanele care au astfel de proprieti se numesc amfotere sau amfolii. Existenta ionului bipolar explic utilizarea soluiilor de aminoacizi drept soluii tampon. Dac la soluia unui aminoacid se adaug un acid tare, protonii si vor fi neutralizai de gruprile carboxil ale aminoacidului, iar dac se adaug o baza tare, gruprile hidroxil vor fi neutralizate de gruprile NH3+, astfel nct pH-ul soluiei nu se modific. c) Toi aminoacizii izolai din proteine absorb slab radiaiile din domeniul ultraviolet (220 nm). Triptofanul, tirozina i fenilalanina, datorit nucleului aromatic, dau absorbie specific la 280 nm, proprietate ce st la baza unei metode de dozare a proteinelor. 1.1.2. Proprieti chimice Proprietile chimice ale aminoacizilor sunt datorate att celor doua grupri funcionale ct i prezenei radicalului R. Unele din aceste reacii se petrec i n organism, altele sunt utilizate n studiul proteinelor (identificarea aminoacizilor din hidrolizatele proteice, stabilirea secvenei de aminoacizi n proteine, identificarea aminoacizilor specifici pentru funcia proteinelor, modificarea chimic a resturilor de aminoacizi din moleculele proteice n vederea modificrii activitii lor biologice), precum i pentru sinteza lanurilor polipeptidice n laborator. 1-Reacia cu acidul azotos, din care rezulta hidroxiacizi (reacie utilizat pentru dozarea aminoacizilor prin metoda van Slyke).
R CH COOH + HNO 2 NH2 HCl R CH COOH + H2O + N2 OH

2-Reacia de alchilare atomii de H de la gruparea amino pot fi nlocuii cu radicali alchil (de obicei metil), cu formare de betaine (compui n care atomul de azot este cuaternar)
R CH NH2 COOH + 3 CH3I R CH COO +N(CH ) 3 3 _

Betaina glicocolului este un important donor de grupare metil n organism. 3- Reacia de acilare n prezenta acizilor carboxilici, a anhidridelor sau a clorurilor acide gruparea amino poate fi acilat. De la glicocol, prin acilare la nivel hepatic se obine acidul hipuric, compus ce reprezint forma de eliminare a acidului benzoic din organism. H2H-CH2-COOH + C6H5 CO~SCoA C6H5-CO-NH-CH2-COOH + CoA-SH Acid hipuric 4- Reacia cu formaldehida gruparea amino poate reaciona reversibil cu aldehidele, formnd compui denumii baze Schiff. Aceasta reacie s la baza metodei de dozare a aminoacizilor prin metoda Srensen (formol titrarea). Bazele Schiff apar i n organism sub forma de compui intermediari n unele procese (transaminare, decarboxilare etc.).
R CH NH2 COOH + HCHO R CH COOH + H2O N CH2

5- Reacia cu ninhidrina ninhidrina este un agent oxidant care produce decarboxilarea -aminoacizilor cu eliberare de CO2, NH3 i o aldehida cu un atom de C mai puin. Ninhidrina redus reacioneaz cu amoniacul eliberat, formnd un complex colorat n albastru, ce prezint absorbie specific la 570 nm; aceasta reacie st la baza uneia din cele mai utilizate metode de dozare a aminoacizilor. 6- Reaciile specifice radicalului R sunt utilizate pentru identificarea calitativ a aminoacizilor: - reacia Sakaguchi specific pentru arginina care n prezena -naftolului d o coloraie roie; - reacia cu nitroprusiat specific cisteinei cu care d o coloraie roie; - reacia Pauli (soluie alcalin de acid sulfanilic diazotat) reactivul d o coloraie roie cu histidina i tirozina; - reacia Ehrlich este specific pentru triptofan care d o coloraie albastr; - reacia Folin Cioclteu (acid fosfomolibdowolframic) specific pentru tirozina care d o culoare roie; - reacia xantoproteic prin fierbere cu acid azotic concentrat, aminoacizii ciclici dau o coloraie galben care trece n portocaliu la adugarea de baze. 1.2. PEPTIDE Peptidele sunt compui rezultai din unirea a mai multor molecule de aminoacizi prin legaturi peptidice (-HN-CO-) i pot fi obinute din proteine prin hidroliz parial (chimic sau enzimatic). n funcie de numrul de aminoacizi din molecul peptidele se mpart n: - oligopeptide conin pn la 10 aminoacizi n molecul;

- polipeptide conin ntre 10 i 100 aminoacizi. Polipeptidele care conin mai mult de 100 de resturi de aminoacizi n molecul poart numele de proteine. Nomenclatura peptidelor se face indicnd numele aminoacizilor n ordinea n care se gsesc n molecul, ncepnd cu aminoacidul care conine gruparea aminoterminal liber. Denumirile aminoacizilor vor cpta terminaia il, cu excepia ultimului care conine gruparea carboxil-terminal liber: de exemplu peptidul cu secvena Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu-Cys se va citi Seril-Glicil-Tirozil-Alanil-LeucilCistein. Proprietile peptidelor Peptidele, n special cele cu greutate moleculara mic, sunt solubile n ap, insolubile n alcool absolut i au caracter amfoter ca i aminoacizii din care sunt constituite. Gruprile amino-terminale precum i gruprile R laterale dau aceleai reacii caracteristice ca i cele din aminoacizii liberi. O reacie caracteristic este reacia biuretului, care const n tratarea peptidelor i proteinelor cu soluii alcaline de Cu2+, cu formarea unui complex colorat in violet; aceasta reacie este dat numai de compuii care conin cel puin dou legturi peptidice n molecul. Peptide biologice 1- Tripeptide. Glutationul (-glutamil-cisteinil-glicina) este prezent n toate esuturile vii.
HOOC CH NH2 CH2 CH2 CO NH CH CO CH2 SH NH CH2 COOH

Glutationul se gsete n organism n forma redus (GSH) i sub form oxidat (GSSG). El ndeplinete un important rol fiziologic, fiind socotit un important sistem oxidoreductor celular. 2 - Hormoni peptidici. Exist o serie de hormoni cu structur polipeptidic: unii hormoni hipofizari, insulina, glucagonul, oxitocina, vasopresina i ACTH. 3 Peptide cu aciune antibacterian. Penicilinele, tirocidinele (A,B), gramicidinele (A,B,C), bacitracinele i polimixinele au o structur polipeptidic. Penicilinele sunt polipeptide atipice care conin acid 6-amino-penicilanic pe molecula cruia sunt grefai diveri radicali. Cnd radicalul este C6H5-CH2- compusul se numete benzil-penicilina (penicilina G).

1.3. PROTEINE Proteinele sunt biopolimeri macromoleculari care conin n molecul peste 100 de resturi de aminoacizi unii prin legturi peptidice. Numrul, natura i modul de

10

aranjare al aminoacizilor n molecul variaz de la o proteina la alta. Moleculele proteice pot adopta diverse conformaii n spaiu, fiind descrise astfel mai multe niveluri de organizare: primar, secundar, teriar i cuaternar. 1.3.1. Nivele de organizare structural Structura primar Structura primar reprezint numrul i ordinea aminoacizilor n molecul.
(CO CH R NH) n ;
H3N
+

R1 CH C O

H NH CH R2

O C N H

R3 CH C O

H N CH .............CH R4 COO

Structura secundar Structura secundar reprezint cel de-al doilea nivel de organizare structural a proteinelor, reprezentnd aranjarea spaial a moleculei proteice pe o singur\ ax\. Acest lucru este posibil datorit legturilor de hidrogen formate ntre resturile carboxil i amino aparinnd legturilor peptidice. Cea mai mare contribuie la elucidarea structurii secundare a proteinelor au avut-o lucrrile lui Pauling si Corey care au elaborat dou modele teoretice: modelul helicoidal (spiralat) i modelul straturilor pliate, modele care explic destul de bine proprietile fizico-chimice i biologice ale moleculelor proteice. Structura sau modelul helicoidal rezult prin spiralarea catenei polipeptidice n jurul unui cilindru imaginar. n funcie de orientarea aminoacizilor, elicea poate fi de tip -dreapta, care are sensul de rotaie al unui urub cu filetul spre dreapta i de tip -stnga cu sensul de rotaie spre stnga. n ambele forme radicalii R ai aminoacizilor sunt proiectai spre exteriorul elicei; n elicea dreapta radicalul R se afl n poziie trans fa de oxigen, motiv pentru care aceasta forma este mai stabil. Helixul de tip are forma unei scri n spiral. nalimea fiecrei trepte este de 1,5 , iar o spir conine 3,6 resturi de aminoacizi, ceea ce face ca distana dintre spire s fie de 5,6 .

11

Aceast structur este meninut n spaiu datorit legturilor de hidrogen n care sunt implicate toate legturile peptidice. Legturile de hidrogen sunt paralele cu axul elicei i se realizeaz ntre gruparea carboxil a unui aminoacid i gruparea amino a celui de-al patrulea aminoacid. Prezena anumitor aminoacizi provoac ndoirea lanului polipeptidic. Din aceast categorie fac parte prolina i hidroxiprolina (din cauza azotului iminic), aminoacizi care conin grupri R ncrcate electric sau cu volum mare (arginina, acidul glutamic, lizina, leucina, izoleucina). Configuraia de tip -helix este ntlnit la multe proteine, dar nu nglobeaz totalitatea lanului polipeptidic. Astfel, n molecula de paramiozina peste 90% din aminoacizi sunt implicai n formarea -helixului, n timp ce n alte proteine spiralarea nu depete 50%. Structura sau modelul straturilor pliate se bazeaz pe formarea legaturilor de hidrogen intercatenare i poate apare n doua variante: modelul paralel al straturilor pliate (caracteristic -keratinei) i modelul antiparalel (ce poate fi ntlnit n cazul fibroinei din mtase).

n modelul paralel (a) toate lanurile polipeptidice sunt aezate paralel, cu gruprile R orientate n acelai sens, n timp ce n straturile antiparalele (b) catenele polipeptidice sunt

12

aezate fa n fa. Spre deosebire de -helix, n structura de tip , legturile de hidrogen sunt aproape perpendiculare pe axa lanului polipeptidic. Structura . Colagenul. n afara celor dou modele caracteristice pentru structura secundar a proteinelor descrise mai sus , mai exist o structur particular ntalnit n colagen, o proteina fibrilar, insolubil i elastic prezent n esuturile animale (esut conjunctiv, tendoane, ligamente, cartilagii, piele, oase etc.) i care reprezint aproximativ 25% din proteinele corpului. Structura secundara a colagenului este un triplu helix de dreapta format din trei lanuri polipeptidice (fiecare fiind un helix de stnga) legate intre ele prin legaturi de hidrogen. Unitatea structural a colagenului este tropocolagenul care este format din trei lanuri: dou lanuri 1 identice, iar al treilea, 2, fiind destul de asemntor cu celelalte dou. Fiecare lan conine aproximativ 1000 de resturi de aminoacizi, dintre care 1/3 sunt resturi de glicin; de asemenea exist un coninut ridicat de prolin, precum i o serie de aminoacizi mai rari: hidroxiprolina i hidroxilizina. Hidroxiprolina se formeaz dup ce lanul polipeptidic a fost sintetizat, prin aciunea prolinhidroxilazei, enzim ce necesit O2, Fe2+, -cetoglutarat i acid ascorbic (vitamina C). n scorbut, lipsa vitaminei C mpiedic hidroxilarea prolinei i colagenul sintetizat n aceste condiii are o structura anormal, ceea ce duce la apariia leziunilor cutanate i la fragilitate vascular. ntre cele trei lanuri polipeptidice se stabilesc legturi de hidrogen ntre gruprile >NH dintr-un lan i gruprile >C=O din alt lan i legturi van der Waals ntre resturile nepolare ale aminoacizilor. Aceste legturi sunt orientate transversal fa de axa helixului. Resturile de glicin ocup ntotdeauna al treilea loc n secvena aminoacizilor ncepnd din poziia 13 a lanului polipeptidic.

13

Coninutul n iminoacid (prolina i hidroxiprolina) este important pentru stabilirea termic a colagenului; colagenul animalelor cu snge cald, cel mai bogat n prolin i hidroxiprolin, este i cel mai stabil termic. Capetele lanurilor polipeptidice sunt nespiralate i datorit flexibilitii pot forma legturi specifice ntlnite numai n aceste tipuri de proteine. Ca i n cazul fibrinei, molecula de colagen este stabilizat prin legturi ncruciate realizate intramolecular i intermolecular ntre resturile de lizin situate n poriunile nespiralate ale moleculei de tropocolagen. Numrul acestor legturi variaz cu funcia fiziologic i vrsta colagenului. Astfel, colagenul din tendonul lui Achile, la obolanii maturi, are un numr foarte mare de astfel de legturi, n timp ce n colagenul din coad care este flexibil, numrul legturilor este mai mic. O caracteristic interesant a structurii colagenului este faptul c ntre capetele moleculelor de colagen se gsesc spaii libere care joac un rol nsemnat n formarea osului, ntruct n aceste spaii se fixeaz calciu, sub form de hidroxiapatit (fosfat bazic de calciu). Elastina, constituentul major al pereilor vaselor sanguine i al ligamentelor, are un coninut ridicat de glicin, prolin i acizi aminai cu grupri nepolare (alanin, valin, leucin i izoleucin), dar conine foarte puin hidroxiprolin i acizi aminai polari i nu conine deloc hidroxilizin. Elastina matur conine multe legturi ncruciate ce o face aproape insolubil i din acest motiv, foarte greu de analizat. Structura teriar reprezint interaciunea spaial ntre segmente care nu sunt vecine n lanul polipeptidic, avnd ca rezultat o structur tridimensional, globular. Ea este caracteristic n special proteinelor globulare, a cror catene macromoleculare sunt strnse sub forma unor cilindri elipsoidali cu o lungime care nu depete de 2-6 ori diametrul lor. Este rezultatul interaciunii dintre radicalii R ai resturilor de aminoacid din lanul polipeptidic. Forele de atracie implicate n formarea structurii teriare sunt datorate urmtoarelor tipuri de legturi: a) Legturi de hidrogen care pot fi stabilite ntre gruparea fenolic a tirozinei i o grupare carboxil de la acidul glutamic sau acidul aspartic, sau ntre radicalul imidazolic al histidinei i gruparea hidroxilic a serinei. b) Legturi ionice ntre grupele carboxil ale acizilor dicarboxilici i grupele amino ale acizilor diaminai. Realizarea acestor legturi este posibil atunci cnd distanele dintre atomi sunt cuprinse ntre 2 i 3,1 . Studii de difracie a razelor X au evideniat c n realitate se formeaz un numr mai mic de legturi ionice, datorit faptului c majoritatea gruprilor care ar putea realiza aceste legturi intr n interaciune cu solventul. ntr-adevr, n soluie, gruprile polare ale proteinelor sunt orientate spre exteriorul moleculei, ceea ce face ca proteinele s fie solubile i s se comporte ca electroliii. c) Legturi nepolare prin fore van der Waals care se stabilesc ntre radicalii hidrocarbonai al alaninei, fenilalaninei, leucinei etc. Distanele dintre

14

atomii care particip la astfel de legturi sunt cuprinse ntre 3,1 i 4,1 . Aceste legturi sunt cele mai importante pentru meninerea proteinei n structura teriar. Resturile nepolare, hidrofobe se gsesc n interiorul ghemului rezultat prin ncolcirea lanului polipeptidic avnd ca efect stabilizarea din punct de vedere termodinamic a moleculei, mai mult dect n cazul n care aceste resturi ar fi orientate spre mediul exterior. Din acest motiv lanurile peptidice introduse n soluie apoas se ncoltcesc spontan aa fel nct resturile nepolare se situeaz n interiorul ghemului, iar gruprile polare rmn pe suprafaa moleculei. d) Legturi disulfidice S-S-, covalente, pot contribuie la meninerea structurii teriare a proteinelor globulare limitnd tendina de depliere a moleculei, ns contribuia lor este mic, deoarece sunt puine.

Structura primar a unei proteine determin aranjarea moleculei proteice n configuraii -helix sau -foi pliate, n funcie de interaciunile radicalilor R. Prima protein a crei structur teriar a fost elucidat este mioglobina (Kendrew i colab. 1957), o protein globular, prezent n cantiti mari n muchi, avnd rolul de a depozita oxigenul la nivel tisular. 75% din lanul polipeptidic (153 aminoacizi) din mioglobin cuprinde opt segmente elicoidale (notate A...........H), coninnd ntre 7 (segmentul D) i 24 de resturi de aminoacizi (segmentul H). Zonele elicoidale sunt ntrerupte de segmente nespiralate, la nivelul crora lanul polipeptidic i schimb direcia. n patru dintre aceste puncte se afl prolina, n celelalte plierea fiind determinat de ali factori. n acest fel, molecula se aranjeaz ntr-o form compact cu dimensiunile 45 x 35 x 25 . n interiorul moleculei se gsesc aminoacizi nepolari cu excepia a dou resturi polare de histidin care particip la legarea hemului, iar n exterior sunt plasate gruprile polare i cele cu ncrcare electric.

15

n general, proteinele intracelulare, solubile, au form sferic sau elipsoidal n funcie de raportul dintre aminoacizii cu radical R polar i aminoacizii cu radical R nepolar. Cnd raportul are valori cuprinse ntre 0,9-1,4, proteina opteaz pentru form alungit, iar cnd raportul este mic (0,3-0,6) proteina adopt forma sferic. n cazul proteinelor membranare, nglobate n dublul strat lipidic, resturile de aminoacizi sunt repartizate invers, radicalii hidrofobi se gsesc pe partea exterioar care vine n contact cu moleculele lipidice membranare, iar resturile polare i ncrcate electric, n interior, cptuind canalele ionice ce strbat membranele. Structura cuaternar Un numr mare de proteine sunt constituite din mai multe lanuri polipeptidice, formnd oligomeri. Lanurile individuale se numesc protomeri sau subuniti, fiecare avnd structur primar, secundar i teriar proprie. Subunitile se asambleaz n structura cuaternar prin fore asemntoare celor din structura teriar, cu deosebirea, c n acest caz, legturile se stabilesc ntre subuniti. n general, proteinele cu greutate molecular mai mare de 50.000 sunt formate din mai multe subuniti polipeptidice i sunt active sub form de oligomeri, protomerii fiind inactivi. n multe proteine subunitile sunt identice: chimotripsina, fosfataza alcalin (dou subuniti), aldolaza (trei subuniti), glutamat dehidrogenaza (patru subuniti), catalaza (optsprezece subuniti), iar n altele, subunitile sunt

16

diferite: hemoglobina (dou lanuri i dou ), lactat dehidrogenaza tetramer format din dou tipuri de subuniti notate H (heart) i M (muscle). Asamblarea subunitilor n structura cuaternar este posibil datorit existenei unor zone complementare spaial si electric pe suprafeele subunitilor. Interaciunile dintre subuniti prin suprafeele complementare sunt caracterizate prin fenomenul de cooperare, adic primele contacte odat realizate, favorizeaz formarea celorlalte. Modificarea unui dintre protomeri (combinarea cu un compus oarecare) se resimte la nivelul ntregii molecule oligomere, fiind deranjat structura cuaternar i deci, funcia biologic a proteinei. Acest fenomen st la baza mecanismului de reglare alosteric a activitii enzimelor. Formarea proteinelor complexe confer proteinelor proprieti noi, fiecare subunitate catalizeaz o etap dintr-o cale metabolic. Eficiena crete mult deoarece intermediarii nu sunt pierdui n reacii colaterale, procesul desfurndu-se n flux continuu. De exemplu, piruvat dehidrogenaza este format din patru subuniti: trei subuniti catalitice (trei enzime distincte) i a patra este subunitate reglatoare. O protein oligomer important este hemoglobina, responsabil de transportul oxigenului la vertebrate. Structura hemoglobinei a fost elucidat de Perutz prin difracia razelor X i spectre ORD (dispersia rotaiei optice). Dou lanuri polipeptidice din hemoglobin sunt foarte asemntoare cu cel al mioglobinei att n privina structurii primare ct i teriare. Lanul din hemoglobin conine 141 resturi de aminoacizi, iar lanul conine 146 resturi de aminoacizi. ntre lanurile identice se realizeaz legturi polare ntre gruprile terminale -+NH3 i COO-, iar ntre lanurile diferite, legturi de hidrogen i Van der Waals pe poriuni mai mari.

17

1.3.2. Proprietile proteinelor Proteinele izolate din diverse surse sunt n general substane solide, amorfe, care prin purificare avansat pot fi obinute n stare cristalizat. Solubilitatea proteinelor depinde de forma moleculei, natura solventului, structura chimic, temperatur, pH. Ea se datoreaz prezenei pe suprafaa moleculei a gruprilor polare, hidrofile (-COOH, -NH2, -OH) ce se orienteaz spre ap cu care interacioneaz electrostatic. n acest mod, molecula proteic se izoleaz de celelalte molecule i se dizolv. Proteinele globulare, avnd molecule ovoidale, se asociaz greu i de aceea sunt solubile. Proteinele fibrilare au o suprafa mic de contact cu solventul i ca atare sunt puin solubile sau chiar insolubile n ap. Modificarea pH-ului mediului influeneaz solubilitatea proteinelor prin modificare ncrcrii electrice. La pHi (pH izoelecteric), solubilitatea proteinelor este minim deoarece numrul sarcinilor pozitive fiind egal cu numrul sarcinilor negative, moleculele proteice nu mai interacioneaz cu moleculele polare ale apei. Soluiile diluate de electrolii (sruri ale metalelor uoare, NaCl, MgCl2, Na2SO4, (NH4)2SO4) mresc solubilitatea proteinelor n timp ce soluiile concentrate scad solubilitatea, pn la precipitare. Astfel, globulinele sunt greu solubile n ap pur, uor solubile n soluii saline diluate i insolubile n soluii saline de concentraie mare. Aceast comportare st la baza uneia dintre cele mai simple i rspndite metode de separare a proteinelor plasmatice. Cel mai adesea se folosesc soluii de sulfat de amoniu cu grad de saturare diferit: globulinele precipit cu soluii semisaturate de (NH4)2SO4, iar albuminele, la concentraii mai mari de 75% saturaie. Solvenii organici (eter, aceton, alcool), adugai la o soluie de protein, mpiedic interaciunea moleculelor proteice cu moleculele apei i n consecin, proteina va precipita. Caracterul amfoter al proteinelor este dat de gruprile carboxil i amino care nu sunt angajate n formarea legturilor peptidice. Ele vor imprima proteinei caracter acid (cationi) sau bazic (anioni) n funcie de numrul gruprilor COOH i NH2 libere provenite de la acid glutamic, acid aspartic, lizin, arginin i nucleului imidazolic din histidin. Grupele carboxil i amino terminale au o contribuie mai redus n determinarea caracterului amfoter cu ct lanul polipeptidic este mai lung. La pH fiziologic toate gruprile acide sau bazice sunt complet ionizate. Fiecare protein este caracterizat prin pH-ul izoelectric (pHi), care reprezint valoare pH-ului la care ncrcarea electric a proteinei este nul, numrul gruprilor ncrcate pozitiv fiind egal cu numrul gruprilor ncrcate negativ. La pHi solubilitatea i mobilitatea n cmp electric a proteinei este minim. La valori de pH mult diferite de pHi proteina va fi ncrcat (+) sau (-) i va migra n cmp electric, proprietate ce st la baza metodelor electroforetice de separare a proteinelor din amestecuri. Proprieti optice proteinele ca i aminoacizii, prezint activitate optic determinat de prezena atomilor de carbon asimetrici. La asimetria moleculei prin

18

carbon asimetric se adaug i asimetria creat de -helix. Puterea rotatorie a proteinelor este o msur a strii de integritate sau degradare a moleculei. Denaturarea proteinelor Conformaiile native ale proteinelor globulare realizate prin interaciunile specifice dintre lanurile polipeptidice sunt fragile, fiind uor deranjate de aciunea aa numiilor ageni denaturani. Aceti ageni acioneaz prin ruperea legturilor necovalente din structurile secundar, teriar i cuaternar, dar nu afecteaz legturile covalente, legturile peptidice rmn intacte (nu se elibereaz aminoacizi). Agenii denaturani sunt foarte diferii: temperatur ntre 50-60oC; valori extreme de pH; ureea i guanidina n concentraii mari; ageni tensioactivi; solveni organici. Deranjarea structurii teriare a moleculelor proteice duce la modificarea proprietilor biologice a acestora. Forma moleculei proteice este determinat att de structura primar, ct i de factorii de mediu. ntr-adevr, aa cum arat White i Anfinsen, tratarea ribonucleazei cu uree 8M n prezena unui agent reductor, mercaptoetanolul, cauzeaz deplierea complet a moleculei prin ruperea celor patru legturi disulfidice dintre resturile de cistein i n consecin pierderea activitii acestei enzime. ndeprtarea prin dializ a agenilor denaturani duce la refacerea activitii enzimei, ceea ce indic revenirea proteinei la structura teriar iniial.

Prin denaturare, proteinele i pierd proprietile chimice i fiziologice (hormonii devin inactivi, anticorpii pierd capacitatea de a precipita antigenii etc.); n aceast stare, proteinele sunt mai uor atacate de enzime dect n stare nativ. Hidroliza proteinelor. Sub aciunea acizilor sau bazelor la cald i a enzimelor proteolitice, proteinele sunt hidrolizate prin ruperea legturilor peptidice pn la stadiul de aminoacizi. Reacii de culoare. Proteinele dau aceleai reacii de culoare ca i aminoacizii din care sunt constituite i pot fi identificate printr-una din acestea. Reacia xantoproteic. Prin tratarea unei soluii de protein cu acid azotic, la rece sau la cald, apare o coloraie galben datorit formrii unor nitroderivai; Reacia biuretului. Tratarea unei soluii de protein cu reactiv biuret (o soluie alcalin de sulfat de cupru) se formeaz un complex de culoare violet caracteristic. Reacia este utilizat n practic pentru dozarea proteinelor din snge.

19

Proprietile biochimice i imunologice. Proteinele ndeplinesc n organism diferite roluri cum ar fi, rol catalitic, de rezerv, transportor, protector, structural etc. 1.3.3. Clasificarea proteinelor Proteinele se clasific n general dup forma moleculelor i dup compoziia lor chimic. n clasificarea proteinelor dup forma molecular deosebim: proteine globulare (sferoproteine) care au form aproape sferic (ovoidal) i sunt, n general, solubile n ap, n soluii diluate de acizi, baze i sruri. Din aceast clas fac parte albuminele, globulinele, histonele, protaminele i prolaminele; proteine fibrilare (scleroproteine), caracterizate prin structur fibroas, de forma unui elipsoid ntins cu raportul dintre axe de cel puin 1 : 100, sunt foarte greu solubile n ap, au vscozitate mare i putere de difuzie mic. Aceste proprieti explic prezena lor n esuturile de susinere. Din aceast clas fac parte colagenul, elastina, fibrinogenul, miozina, actina, keratina etc. Dup compoziia chimic, proteinele se pot clasifica n: proteine simple (holoproteine), constituite din aminoacizi; proteine conjugate (heteroproteine), conin pe lng aminoacizi i o grupare prostetic. n funcie de natura acestei grupri, heteroproteinele se mpart n fosfoproteine, glicoproteine, lipoproteine, metaloproteine, nucleoproteine i cromoproteine. 1.3.3.1. Holoproteine Albuminele (serumalbumina, lactalbumina, ovalbumina etc.) sunt solubile n ap, coaguleaz la nclzire, au pHi mai mare dect 7 i pot fi precipitate cu o soluie saturat de sulfat de amoniu. Greutatea molecular a albuminelor este cuprins ntre 35.000 i 75.000. Albuminele intr n constituia proteinelor plasmatice (55%), participnd la transportul glucidelor, lipidelor, hormonilor, srurilor biliare, medicamentelor i ionilor (HCO3-, NO3-, citrat, Ca2+, Mg2+, Zn2+ etc.). Datorit masei moleculare mici i concentraiei mari, albuminele serice asigur 80% din presiunea coloidosmotic a plasmei. Globulinele sunt proteine globulare insolubile n ap, solubile n soluii de NaCl 5%. Prin nclzire coaguleaz. Sunt rspndite att n regnul vegetal ct i animal. Dintre globulinele de origine animal amintim globulinele din snge cu greutate molecular de aproximativ 500.000. Din totalul proteinelor plasmatice, 35-45% sunt globuline. Prin electroforez au fost separate trei fraciuni (, i ), iar prin imunoelectroforez au fost puse n eviden peste 30 fraciuni proteice. Fiecare fraciune ndeplinete un rol bine definit; toate particip la transportul glucidelor, -, globulinelelor, la transportul lipidelor, iar -globulinele au rol n imunitate, motiv pentru care se numesc i imunoglobuline. Imunoglobulinele sau anticorpii apar n serul sanguin sau n alte celule ca rspuns la ptrunderea n organism a unei proteine sau a unei macromolecule provenit de la alt specie, compus care poart numele de antigen. Structura de baz a anticorpilor a fost elucidat de Porter n 1960. Anticorpii sunt formai din dou lanuri polipeptidice grele (H), cu greutate molecular 53.000-75.000 i

20

dou lanuri uoare (L), cu greutate molecular 23.000, unite prin legturi disulfidice. Lanurile grele au o regiune flexibil care permite rotirea capetelor amino-terminale cu un unghi variabil, ceea ce permite legarea antigenului. Prin digestia cu papain molecula de imunoglobulin (IgG) poate fi divizat n trei fragmente active cu greutate molecular 50.000. Papaina cliveaz lanurile H n partea constant (C). Dou dintre fragmentele obinute pot lega anticorpul i din acest motiv au fost notate Fab (F de la fragment i ab de la antigen binding), iar al treilea fragment, care leag complementul, Fc.
IgG (150.000) Papaina 2 Fab (50.000) + Fc (50.000)

Fragmentul Fab este format dintr-un lan L i o poriune a captului N-terminal al lanului H. Fragmentul Fc este format din cele dou capete C-terminale ale lanurilor H (Poriunea lanului H incorporat n Fab este notat Fd).

Au fost descrise mai multe tipuri de lanuri L i H. La om au fost evideniate numai dou tipuri majore la lan L, notate K i , difereniabile serologic sau prin analiza secvenei aminoacizilor. La om aproximativ 70% din lanurile L din Ig sunt de tip K i numai 30% de tip . O imunoglobulin conine fie dou lanuri uoare K, fie dou , dar niciodat unul K

21

i unul . Lanul H este unic pentru o clas de Ig, dar au fost identificate cinci tipuri notate: , , , , . Fiecare tip de lan H se poate asocia cu lanuri L de tip K sau genernd cele cinci clase de imunoglobuline: IgG (), IgA (), IgM (), IgD () i IgE (). Pe lanurile polipeptidice ale Ig sunt ataate resturi glucidice (IgG conine dou resturi monozaharidice i IgM trei resturi). Scleroproteinele sunt proteine fibrilare, de consisten solid, ntlnite numai n regnul animal, avnd rol de susinere i protecie, au un coninut mai sczut de azot fa de alte proteine, dar au un coninut crescut de sulf. Scleroproteinele sunt total insolubile n ap, n soluii acide i bazice i sunt stabile fa de aciunea enzimelor proteolitice. Dup rolul pe care l ndeplinesc i dup esutul n care au fost identificate scleroproteinele se mpart n: Keratine se gsesc n epiderm, pr, unghii, pene, coarne etc. i au rol de protecie. Au un coninut mare de sulf (2-5,7%) datorit proporiei mari de cistein. Graie prezenei legturii disulfidice keratinele au o rezisten mecanic mare, elasticitate i rezisten la aciunea enzimelor proteolitice i sunt insolubile. Colagenele au coninut mare de glicocol, prolin, hidroxiprolin i hidroxilizin, avnd o structur cu totul caracteristic, adaptat funciei esuturilor din care fac parte: tendoane, ligamente, oase, cartilagii, piele. Ele reprezint 25% din proteinele corpului omenesc. Colagenele sunt insolubile n ap, dar prin fierbere ndelungat se transform n gelatin solubil, n care o parte din legturile peptidice au fost hidrolizate. Colagenele sunt rezistente la aciunea enzimelor proteolitice (cu excepia colagenazei), n timp de gelatina poate fi hidrolizat cu pepsin i tripsin. Elastinele se aseamn cu colagenul, ntlnindu-se alturi de acestea n esutul conjunctiv, dar ele nu pot fi gelificate. Coninutul ridicat de glicocol, alanin i valin imprim acestei proteine o elasticitate comparabil cu a cauciucului. Elastinele sunt hidrolizate specific de elastaza pancreatic. Fibrinogenul este o protein fibrilar format din ase lanuri polipeptidice unite prin puni disulfidice. Din cauza dimensiunilor mari ale moleculei, n condiii fiziologice, fibrinogenul trece n cantiti foarte mici prin peretele capilarelor n lichidul interstiial. n inflamaii, din cauza alterrii permeabilitii capilarelor, trecere fibrinogenului este mult facilitat. Fibrinogenul este sintetizat n ficat i este degradat n macrofage i are timpul de njumtire de 3-5 zile. Sub aciunea enzimatic a trombinei i a ionilor de calciu, fibrinogenul se transform ntr-o protein fibrilar insolubil, denumit fibrin. Fibrina formeaz o reea spaial n care sunt nglobate elementele figurate ale sngelui, formnd cheagul sanguin. Miozina se gsete n cantitate de 40-60% n miofibrele esutului muscular. Miozina este insolubil n ap, dar solubil n soluii alcaline diluate. n structura miozinei intr aminoacizi diaminici i dicarboxilici ceea ce explic prezena a numeroase grupri polare ce i confer capacitatea de a fixa ioni metalici. Prin combinare cu actina n proporie de 3/1, formeaz actomiozina.

22

Actina reprezint 15% din proteinele musculare. Att miozina ct i actina au activitate ATP-azic i joac rol esenial n contracia muscular. Tropomiozina reprezint 2,5% din totalul proteinelor musculare, avnd rol n contracia muscular.

1.3.3.2. Heteroproteine Fosfoproteinele sunt proteine conjugate care au drept grupare prostetic acidul fosforic legat prin legtur esteric de gruparea hidroxil a unui rest de serin din molecula proteic. Acidul fosforic se gsete sub forma srii sale de Ca sau K.
NH CO CH NH CO CH2 O_ O P O Ca2+ _ O NH CO CH NH CO _ CH2 O K+ O P O _ O K+

Dintre fosfoproteine fac parte: caseina , principala protein din lapte (80%). ovovitelina prezent n glbenuul de ou alturi de lecitine. Ea furnizeaz embrionului aminoacizii i fosforul necesar dezvoltrii. Glicoproteinele formeaz o categorie de heteroproteine care au drept grupare prostetic o component glucidic; partea proteic imprim caracterul ei chimic ntregii molecule, ceea ce le deosebete de mucopolizaharide unde componenta glucidic predomin i imprim moleculei caracter glucidic. Lipoproteinele sunt complexe ale proteinelor cu lipidele. Dup rolul pe care l ndeplinesc, lipoproteinele se mpart n dou categorii: lipoproteine de transport i sistemele de membran. Plasma uman conine patru clase principale de particule lipoproteice care difer ntre ele prin densitate, constant de sedimentare i mrimea particulelor, prin tipurile de proteine i proporia de lipide coninute. Sunt particule sferice de mrimi diferite, formate dintr-un miez nepolar (trigliceride i esteri de colesterol) nvelit cu un strat de 2 nm constituit din colesterol liber, fosfolipide i apoproteine. Aceste particule sunt solubile n plasm i servesc la transportul lipidelor ntre diverse esuturi. Metaloproteinele sunt combinaii complexe ale proteinelor cu ionii metalici: Fe, Cu, Zn, Mg, Mn etc. i particip n organism fie n transportul acestor metale, fie n cataliza enzimatic. Feritina conine 20-25% fier trivalent (aproape cte un atom de Fe pentru fiecare legtur peptidic) legat de o protein numit apoferitina. Feritina constituie rezerva de fier pentru sinteza hemoglobinei i citocromilor. Se gsete n special n ficat i splin. Siderofilina (transferina) este un transportor al Fe pentru sinteza hemoproteinelor (fixeaz doi atomi de Fe/molecul). Ea este sczut n anemia feripriv;

23

Ceruloplasmina conine aproximativ 0,34% Cu (opt atomi/molecul). Este o

glicoprotein care migreaz cu fraciunea 2-globulinic, are o greutate molecular de 150.000. Ceruloplasmina nu transport ionii de cupru, dar are rol n absorbia Fe, putnd oxida fierul bivalent la fier trivalent i funcioneaz ca o polifenoloxidaz. Concentraia plasmatic de ceruloplasmin crete n inflamaii. Hemocianinele sunt pigmeni respiratori din sngele molutelor. Ele conin Cu i au greutate molecular de aproape 10 milioane. Metaloproteinele cu Zn sunt n general enzime: alcool-dehidrogenaza, carbonic-anhidraza, uricaza etc. Cromoproteine Cromoproteinele sunt proteine conjugate care au drept grupare prostetic, o grupare cromofor. Dup natura acestei grupri, se disting dou mari clase de cromoproteine: porfirinice care conin un nucleu tetrapirolic i neporfirinice, conin drept grupare prostetic derivai de izoaloxazin sau carotene (vezi vit. B2 i A). Dintre cromoproteinele neporfirinice deosebit de importante sunt flavoproteinele care au drept grupare prostetic o flavin (derivat de izoaloxazin) i care ndeplinesc n organism rol catalitic, precum i carotenoproteinele, a cror grupare prostetic este un derivat terpenic (carotenii). Acestea din urm, sunt importante n procesul vederii.
Cromoproteinele porfirinice conin n molecul un nucleu substituit de

porfirin. Ele ndeplinesc diverse funcii biologice, cum ar fi: transportul de oxigen, transportul de electroni, cataliza enzimatic. Specificitatea de funcie a acestor proteine se datoreaz apoproteinei legate de nucleul porfirinic. Sunt reprezentate de mioglobin, hemoglobin, citocromi, hemenzime. Porfirinele sunt derivai de porfirin, un compus ciclic format din patru nuclee pirolice unite prin grupri metinice (-CH=).

Prin substituirea atomilor de hidrogen din poziiile 1-8 cu diferii radicali se obin porfirinele, care se denumesc i se clasific n funcie de aceti substitueni n: etioporfirine, mezoporfirine, protoporfirine i coproporfirine. Dintre acestea cel mai des ntlnite sunt protoporfirinele care conin patru grupri metilice, dou grupri vinil i dou resturi de acid propionic. Datorit celor trei tipuri de substitueni din molecul, pot exista 15 forme izomere

24

de protoporfirine. Cea mai nsemnat dintre ele este protoporfirina IX (1,3,5,8-tetrametil2,4-divinil-6,7-dipropionil-porfirina). Porfirinele posed un sistem de duble legturi conjugate ce confer acestor compui stabilitate, culoare roie-violet, absorbia caracteristic i fluorescen. Reducerea gruprilor metinice duce la formarea de compui necolorai, numii porfirinogeni. Prin intermediul azotului pirolic, porfirinele pot fixa ioni metalici cum sunt: Fe, Mg, Zn, Cd, Co, Cu, Mn, V sub form de compleci chelatici. Un astfel de complex al protoporfirinei IX cu Fe2+ se numete protohem sau hem, un complex similar cu Fe3+ poart numele de hemin sau hematin.

Protoporfirina IX

Hem

Fierul are ase poziii de coordinare care sunt ndreptate spre vrfurile unui octoedru regulat. n hem, atomul de Fe se leag de inelele II i IV prin legturi ionice, realizate prin ndeprtarea celor doi atomi de H de la azot sub form de H+ i de dou legturi coordinative cu atomii de azot din ciclurile I i III. Celelalte dou poziii, 5 i 6, sunt perpendiculare pe planul determinat de cele patru legturi ale fierului cu nucleele pirolice i sunt libere. Dac aceste poziii sunt ocupate, compusul rezultat se numete hemocrom sau hemocromogen. Hemul este situat ntr-o cavitate a moleculei proteice. Cele dou resturi propionat, ionizate la pH fiziologic, sunt orientate spre suprafa, iar restul hemului n interiorul cavitii, nconjurat de aminoacizi nepolari, cu excepia a dou resturi de histidin prin care se face legtura cu partea proteic. Un rest de histidin situat n segmentul F (HisF 8) numit histidin proximal se fixeaz pe poziia 5 de coordinare a Fe 2+. Cellalt rest HisE7, numit histidin distal se leag de hem prin intermediul unei molecule de ap (formele neoxigenate de mioglobin i hemoglobin). Legtura este labil i se desface uor n procesul de fixare a oxigenului, acesta nlocuind molecule de ap (formele oxigenate ale mioglobinei i hemoglobinei).

25

Mioglobina este pigmentul rou din muchi, similar hemoglobinei ca structur i rol; diferena dintre ele const n structura globinei. Globina mioglobinei este alctuit dintr-un singur lan polipeptidic, format din 150 aminoacizi, cu o greutate molecular de aproximativ 17.200, pliat sub forma unui ghem cu dimensiunile 45/35/25 . Mioglobina are o afinitate fa de oxigen de aproximativ 6 ori mai mare dect hemoglobina. Cantiti mari de mioglobin se gsesc n muchiul inimii i muchii pectorali ai psrilor care efectueaz micri ritmice de lung durat. Hemoglobinele reprezint pigmentul rou al sngelui. Ele au aceeai grupare prostetic (hemul), dar difer n privina prii proteice, globina. Globina imprim specificitatea diferit a hemoglobinelor. Structura hemoglobinei a fost elucidat de Perutz prin difracia razelor X i spectre ORD (dispersia rotaiei optice). Lanurile i au o structur asemntoare, aproximativ 70% din molecul formnd poriuni de -helix ntrerupte de poriuni ndoite ca n molecula de mioglobin. Conformaia tridimensional a lanurilor este asigurat prin legturi van der Waals ce se stabilesc ntre resturile nepolare ale aminoacizilor. Legturile polare sunt orientate spre mediul apos ceea ce explic solubilitatea hemoglobinei. Catenele polipeptidice sunt orientate aa fel, nct, formeaz ntre ele o cavitate n care este inclus molecula de hem. Legarea hemului de globin se face prin intermediul a dou resturi de histidin. Cele patru lanuri din Hb sunt asamblate ntr-un tetramer compact (structur cuaternar), rezultnd o molecul cu dimensiunile 64/55/52 . ntre lanurile identice se realizeaz legturi polare stabilite ntre grupele terminale NH3+ i COO- , iar ntre lanurile diferite ( i ) se stabilesc legturi de hidrogen i Van der Waals pe poriuni mari ale acestor lanuri. Citocromii sunt pigmeni respiratori care au drept grupare prostetic tot hemul, dar poziiile 5 i 6 de coordinare ale Fe sunt ocupate de resturi de aminoacizi din molecula proteic. Din acest motiv, citocromii nu pot participa la transportul O2, dar particip la transportul electronilor prin modificarea reversibil a valenei atomului de fier:

26

Se cunosc mai multe grupe de citocromi notate a, b i c. n forma lor redus, citocromii dau benzi de absorbie caracteristice (, i ) n spectrul vizibil. Marea majoritate a citocromilor sunt puternic legai de membrana mitocondrial i nu pot fi separai cu uurin. Hemenzimele sunt reprezentate de catalaze i peroxidaze care catalizeaz reacia de descompunere a apei oxigenate dup ecuaia: AH2 + H2O2 2 H2O + A
Cloroplastele sunt pigmeni fr funcie respiratorie care conin

drept grupare prostetic clorofila. Clorofila are o structur porfirinic avnd n centrul ei ionul de Mg legat prin dou covalene de dou nuclee pirolice. Nucleoproteine Nucleoproteinele sunt o clas de heteroproteine care au drept grupare prostetic un acid nucleic ataat la o histon sau o protamin. Ele se gsesc n toate esuturile animale i vegetale i pot fi izolate cu uurin din drojdii i unele esuturi ale cror celule au nuclee mari, cum este glanda timus. Nucleoproteinele sunt constituenii principali ai nucleului celular (de unde vine i numele lor), dar pot fi gsite i n citoplasm asociate cu ribozomii. Virusurile sunt constituite aproape numai din nucleoproteine.

Nucleoproteine Proteine sim ple (Histone, protam ine) Acizi nucleici (Polinucleotide) Nucleaze Mononucleotide Mononucleotidaze

Nucleozide Nucleozidaze

Acid fosforic

Baze azotate (Purinice, pirim idinice)

Pentoze (Riboz\, Deoxiriboz\)

Nucleoproteinele pot fi izolate din esuturi prin extracie (cu ap, soluii alcaline diluate, soluii de clorur de sodiu i soluii tampon cu pH = 4,0-11,0),

27

urmat de precipitarea cu acizi, soluie saturat de sulfat de amoniu sau soluie diluat de CaCl2. Prin hidroliz acid sau bazic, nucleoproteinele se descompun n baze azotate, pentoze, acid fosforic i proteine. Nucleotide. Un nucleotid, unitatea structural a acizilor nucleici, este format dintr-un nucleozid fosforilat la una din gruprile OH din riboz sau deoxiriboz.
Baza azotat\ ^ pentoz\ ^ acid fosforic Nucleozid Nucleotid

De exemplu: Adenina + Riboza Guanina + Riboza Citozina + Riboza Uracil + Riboza Timina + d-Riboza

+ + + + +

Acid fosforic Acid adenilic (AMP) Acid fosforic Acid guanilic (GMP) Acid fosforic Acid citidilic (CMP) Acid fosforic Acid uridilic (UMP) Acid fosforic Acid timidilic (TMP)

Exist dou tipuri generale de nucleotide: ribonucleotide, care conin riboz i intr n structura acizilor ribonucleici i deoxiribonucleotide, care conin deoxiriboz i intr n structura acizilor deoxiribonucleici. Radicalul fosfat se ataeaz n poziia 5 sau 3 (notaia atomilor din ciclul pentozei se face de la 1 la 5, acesta fiind ciclul secundar n molecula acestor compui).
NH2 N N N H H OH N O
3'

NH2 N CH2OH H H O
5'

N N N H H H O
3'

CH2OH H H O

5'

HO P OH O

HO P OH O

NH2 N O N H H OH

Acid adenilic 3'-AMP

O HN O N

Acid deoxiadenilic 3'-dAMP CH3

CH2OH H H O

CH2OH H H

H H

HO P OH O Acid citidilic 3'-CMP

O H HO P OH O Acid timidilic 3'-dTMP

28

Nucleozidele purinice i pirimidinice pot fi esterificate cu o singur molecul de acid fosforic, formnd nucleozid-monofosfai (MP), cu dou molecule de acid fosforic, nucleozid-difosfai (DP) i cu trei molecule de acid fosforic, nucleozid-trifosfai (TP). De exemplu, adenina formeaz adenozin-5-monofosfat (AMP), adenozin-5-difosfat (ADP) i adenozin-5-trifosfat (ATP).
NH2 N

N H2C H H OH OH O

O P OO

O P OO

O P OO-

O H H

AMP ADP ATP

Nucleozid-trifosfaii ndeplinesc n organism funcii importante. Astfel, ATP poate transporta i ceda resturi de fosfat i pirofosfat n acele reacii enzimatice care necesit energie. Cedarea energiei se face prin hidroliza legturilor fosforice cu energie mare din molecula acestui compus, legturile

29

dintre gruprile fosforice sunt macroergice deoarece sunt legturi de anhidrid. Refacerea moleculei de ATP se realizeaz prin refosforilarea ADP-ului n procesul de fosforilare oxidativ. De asemenea, GPT, UTP i CTP pot furniza energie pentru unele ci de biosintez (UTP n sinteza polizaharidelor, GTP n sinteza proteinelor, iar CTP n sinteza lipidelor). n unele reacii de fosforilare particip IDP i ITP n structura crora intr hipoxantina.

2. ENZIME Organismele vii, mono- i pluricelulare sunt caracterizate prin unele activiti ca: micare, producere de energie, lumin etc., activiti care au la baz reacii chimice. Organismele vii sunt supuse primului principiu al termodinamicii, adic legii conservrii masei i energiei. Energia pentru sinteza moleculelor complexe din elemente sau molecule mai mici este furnizat prin degradarea moleculelor complexe n intermediari i compui mai simpli. n consecin este necesar cuplarea celor dou aspecte ale metabolismului (anabolism i catabolism) printr-un transfer de energie. O reacie chimic de forma A+B C+D poate avea loc cnd o parte din moleculele A i B se gsesc ntr-o stare de energie ridicat, stare activat (stare de tranziie) n care exist o mai mare probabilitate ca legturilor din compuii A i B s se rup i s se formeze produii C i D. starea de tranziie este o barier nalt de energie care delimiteaz reactanii de produii de reacie. Viteza unei astfel de reacie este proporional cu moleculele aflate n stare de tranziie (activat). Exist dou posibiliti de accelerare a reaciei chimice: - creterea temperaturii ce favorizeaz agitaia molecular, creterea numrului de molecule activate i accelerarea vitezei de reacie care n cele mai multe reacii este aproximativ dubl pentru o cretere a temperaturii cu 10oC; - utilizarea catalizatorilor. Catalizatorul se combin temporar cu reactanii determinnd scderea energiei de activare. Cu ct energia de activare va fi mai mic cu att catalizatorul va fi mai eficace. De exemplu, descompunerea apei oxigenate: 2 H2O2 2 H2O + O2 Necatalitic, are loc cu un consum de energie, G = 18 Kcal/mol; n prezena catalizatorului de Pt coloidal, G = 13 Kcal/mol; iar n prezena enzimei, catalaza, numai 2 kcal/mol. O reacie chimic este endergonic (endoterm) dac variaia energiei libere este pozitive, deci necesit un aport de energie i exergonic (exoterm) cnd variaia energiei libere va fi negativ, deci va rezulta energie.

30

n timpul unei reacii, catalizatorul sufer o serie de modificri, dar odat reacia terminat, acesta revine la starea iniial. Enzimele sunt catalizatori proteici pentru reaciile chimice care se petrec n sistemele biologice. n absena enzimelor, majoritatea reaciilor din celula vie sar petrece cu viteze foarte mici. Spre deosebire de catalizatorii neproteici (ioni metalici, H+, OH-) fiecare enzim catalizeaz un numr mic de reacii, de cele mai multe ori, una singur. Exist un numr foarte mare de enzime; pentru fiecare compus organic, ct i pentru muli compui anorganici, exist mcar o enzim capabil s reacioneze cu acesta i s catalizeze o anumit modificare chimic. 2.1 Nomenclatura i clasificarea enzimelor Numele tiinific al unei enzime se formeaz astfel: Donor: Acceptor reacia catalizat. De exemplu: enzima responsabil de oxidarea alcoolului etilic se numete Alcool: NAD+-oxireductaz. Pe lng denumirea tiinific, se utilizeaz acea denumire uzual, care este n acord cu numele tiinific. Denumirea uzual este format din dou pri: prima parte indic substratul sau substratelor asupra crora acioneaz enzima, iar partea a doua indic reacia catalizat. De exemplu, alcool: NAD+-oxireductaza se numete curent alcool-dehidrogenaza (ADH). innd seama de reacia catalizat, enzimele se clasific n ase clase: 1. Oxidoreductaze catalizeaz reaciile de oxido-reducere; n funcie de acceptorul de electroni se pot distinge: oxidaze transfer electronii de la un substrat direct la oxigen; dehidrogenaze transfer electronii de la un substrat la alt substrat (altul dect oxigenul); oxigenaze ncorporeaz direct oxigenul n substrat; peroxidaze transfer electronii de la substrat la H2O2 ca acceptor. 2. Transferaze catalizeaz transferul de grupri de pe un substrat (donor) pe alt substrat (acceptor). C1-transferaze transfer uniti de un atom de carbon ntre substrate (exemplu: metil-transferaze); amino-transferaze transfer gruparea amino de pe un aminoacid pe un cetoacid (transaminazele); kinaze transfer un radical fosfat din ATP pe un substrat; fosforilaze transfer radicalul fosfat din fosfat anorganic (Pa) pe un substrat. 3. Hidrolaze catalizeaz scindarea legturilor chimice cu ajutorul apei: fosfataze ndeprteaz radicalul PO3H2- de pe un substrat; fosfodiesteraze cliveaz legturile fosfatdiesterice, cum ar fi cele din acizii nucleici; proteaze scindeaz legturile peptidice din proteine.

31

4. Liaze catalizeaz scindarea nehidrolitic a unei grupri de pe un substrat cu formarea unei duble legturi sau fixeaz o grupare la o dubl legtur: decarboxilaze ndeprteaz CO2 de pe substrat; aldolaze formeaz aldehide n reacii de eliminare; sintaze leag dou molecule fr implicarea ATP-ului. 5. Izomeraze catalizeaz reaciile de interconversiune a izomerilor optici, geometrici i de caten: racemaze i epimeraze catalizeaz interconversiunea stereoizomerilor L i D; mutaze transfer grupri ntre atomii aceleiai molecule; cis-trans-izomeraze interconversiunea izomerilor geometrici; izomeraze care catalizeaz reacia aldoz cetoz. 6. Ligaze sau sintetaze unirea a doi compui utiliznd energia eliberat prin hidroliza unei molecule de ATP. 2.2. Structura enzimelor Specificitatea mare a unei enzime este strns legat de structura ei fizic i chimic specific. Din punct de vedere chimic, o enzim este format dintr-o parte proteic apoenzima i o parte neproteic coenzima sau cofactor. Partea proteic este termolabil i este responsabil de specificitatea enzimei, de aciune, dar mai ales de substrat, iar coenzima este termostabil i dializabil. Apoenzima. Enzimele simple i apoproteinele enzimelor complexe sunt formate din catene lungi polipeptidice, avnd aceleai nivele de organizare structural ca i alte proteine: primar, secundar, teriar i cuaternar. Dei toate enzimele au structuri primare, secundare i teriare, structura cuaternar nu este obligatorie. Coenzime. Coenzima este partea neproteic, care particip efectiv la reacia catalitic (se modific temporar n timpul reaciei). Frecvent, coenzimele conin n structura lor vitamine din grupul B. 2.3. Izoenzime forme moleculare multiple ale aceleai enzime. Ele catalizeaz aceeai reacie enzimatic, dar difer ntre ele n privina proprietilor fizice, chimice i imunologice. Interesul medical pentru izoenzime a fost stimulat prin descoperirea n 1957, n serul uman, a mai multor izoenzime LDH, a cror proporii relative se modific semnificativ n anumite stri patologice. Cele 5 izoenzime LDH difer ntre ele n ceea ce privete structura cuaternar. Molecula activ de LDH este un tetramer (130.000) format din dou tipuri de subuniti H i M luate cte patru (fiecare subunitate are 34.000). Subunitatea H (heart) este caracteristic muchiului inimii i n general esuturilor cu metabolism aerob, iar subunitatea M (muscle) este caracteristic muchiului scheletic i n general organelor i esuturilor cu metabolism anaerob. Excepie fac ficatul i eritrocitul.

32

Structura celor 5 izoenzime LDH este: LDH1 - H4 LDH2 - H3M1 LDH3 - H2M2 LDH4 - HM3 LDH5 - M4 Sinteza celor dou tipuri este coordonat de dou gene diferite. Ulterior au fost evideniate izoenzime i pentru alte enzime creatin-kinaza CK1(BB); CK2(MB) i CK3 (MM), hexo-kinaza, fosfataza alcalin etc. 2.4. Specificitatea enzimelor Dup specificitate de aciune enzimele pot fi grupate n: enzime cu specificitate absolut, enzime cu specificitate relativ i enzime cu specificitate optic sau stereochimic. Specificitatea absolut. Unele enzime acioneaz numai asupra unui singur substrat, cataliznd o singur reacie, de exemplu ureaza:
H2N C NH2 + H2O O ureaza 2 NH3 + CO2

Aceast enzim este total inactiv fa de compui foarte asemntori structural tioureea H2N-CS-NH2. De asemenea, arginaza enzima care catalizeaz hidroliza L-argininei la uree i ornitin nu poate cataliza hidroliza esterul metilic al argininei sau scindarea agmatinei, amina rezultat prin decarboxilarea argininei. Specificitatea relativ. Multe enzime sunt specifice numai pentru anumite tipuri de legturi chimice indiferent de structura moleculelor respective. Din acest grup fac parte esterazele care fac posibil scindarea mono-, ditrigliceridelor i chiar ali esteri cu structur chimic mult mai complicat. De exemplu, acetilcolinesteraza, specific pentru acetil-colin, poate scinda i ali esteri ai colinei cu acizii propionic, butiric etc. Butiril-colina pare a fi substratul de elecie, fiind hidrolizat mai rapid dect ali esteri ai colinei. Enzimele proteolitice care hidrolizeaz legturile peptidice din proteine i din ali compui neproteici, fac parte tot din acest grup. Specificitatea optic. Enzimele catalizeaz transformarea numai a unui stereoizomer; specificitatea optic este de obicei absolut, cellalt antipod optic rmnnd neschimbat. Excepie fac racemazele care catalizeaz interconversiunea antipozilor optici. Enzimele care recunosc substrate cu izomeri geometrici au o specificitate geometric. Fumaraza, de exemplu, permite hidratarea acidului fumaric (izomer trans) i nu a acidului maleic (izomer cis) cu formarea acidului malic ca produs final:
H HOOC C C COOH H Fumaraza H2O HOOC CH CH2 COOH OH

33

2.5. Centrul catalitic al enzimei Structura binar a enzimelor este indispensabil aciunii catalitice. Luate separat, att coenzima ct i apoenzima nu au activitate catalitic. Centrul catalitic a fost conceput mult vreme ca un tipar rigid, preformat, substratul potrivindu-se n enzim ca i cheia n broasc (lock and key) sau template (modelul Fischer). Dei n acest model centrul activ este rigid, el se mai folosete nc pentru explicarea unor proprieti enzimatice, cum ar fi legarea ntr-o anumit ordine a substratelor sau curba de saturare cu substrat.

Un model mai perfecionat este cel imaginat de Koshland, numit induced fit (fixare indus), modelul cu cel mai puternic suport experimental. Principala caracteristic a acestui model este flexibilitatea centrului activ. n absena substratului gruprile catalitice i de legare a substratului sunt deprtate unele de altele, separate de mai multe resturi de aminoacizi. Apropierea substratului induce o modificare conformaional a enzimei nct gruprile care particip la legarea substratului sau la reacia catalitic se apropie spaial.

34

Situsul (centrul) activ dintr-o enzim poate fi pus n eviden prin tratarea cu anumite substane ce au capacitatea de a se combina specific cu aminoacizii centrului catalitic, inactivnd enzima. 2.6. Factori care influeneaz activitatea enzimatic Influena concentraiei enzimei Dac se utilizeaz concentraii crescnde de enzim cantitatea de substrat transformat n unitatea de timp crete proporional cu concentraia enzimei. Influena concentraiei substratului asupra vitezei de reacie Dac se menine constant concentraia de enzim i se mrete concentraia de substrat S, se constat o cretere rapid a vitezei de reacie pn la o valoare limit (vmax). Dac [S] continu s creasc, curba capt o inflexiune i pentru valori mari de S, viteza nu mai crete, curba tinde asimptotic ctre o valoare maxim (vmax).

Crescnd n continuare concentraia substratului viteza reaciei rmne constant deoarece nu mai exist enzim liber. Transformarea substratului n produs (produi) de reacie are loc cu formarea, pentru scurt timp, a unui complex enzim-substrat.

35

Ipoteza formrii complexului ES a fost emis prima dat de Michaelis. Existena acestui complex a fost demonstrat practic prin analiza spectrelor de absorbie n ultraviolet, vizibil, rezonan magnetic nuclear, fluorescen sau prin dializ.
E + S K1

Cantitatea de produs P format depinde direct de concentraia complexului ES, care depinde de viteza de descompunere a compusului ES n E + S. Aplicnd legea aciunii maselor pentru reaciile de echilibru se obine relaia: Cnd toat enzima a fost [E] [S] fixat sub form de complex ES, se K 2= (2) [ES] atinge viteza maxim a reaciei. KM = [S] (3) care a primit numele de constanta Michaelis, definit drept concentraia substratului pentru care se atinge jumtate din viteza maxim. Cnd numai jumtate din enzim este trecut n form [ES] i [E] =[ES] se atinge jumtate din viteza maxim vmax i relaia (2) devine: Influena temperaturii asupra activitii enzimatice Viteza de reacie crete cu creterea temperaturii, dar n anumite limite. Studiul vitezei iniiale a unei reacii enzimatice n funcie de temperatur determin apariia a dou faze distincte care corespuns la dou fenomene diferite:

K2

ES

K3

E ^ P (1)

- n zona de temperaturi mai mici (0 i 40oC) viteza reaciei crete cnd temperatura crete. Aceast cretere a vitezei cu temperatura se explic printr-o cretere a concentraiei complexului activat (intermediar) atunci cnd se furnizeaz mai mult energie sub form termic sistemului n reacie. - la o temperatur ce depete 45oC se asist la o denaturarea a proteinei.

36

Temperatura optim pentru cele mai multe enzime este de 30oC 40oC. Exist microorganisme termofile care triesc n ap la 70oC 80oC i a cror enzime sunt active la aceast temperatur. La 0oC unele enzime i nceteaz reversibil activitatea, aceast temperatur constituind temperatura de conservare pentru unele enzime. Influena pH-ului Variaiile de pH pot avea efecte att la nivelul enzimei, ct i la nivelul substratului. Astfel, se poate modifica gradul de ionizare a unor grupri funcionale de pe enzim a cror sarcin pozitiv sau negativ este necesar fie formrii complexului enzim-substrat, fie meninerii conformaiei tridimensionale native a protein-enzimei. De asemenea, la nivelul substratului poate fi modificat gradul de ionizare mpiedicnd sau favoriznd formarea complexului enzim-substrat. Valoarea pH-ului la care reacia enzimatic se desfoar cu vitez maxim se numete pH optim.

pH-ul optim pentru cele mai multe enzime are valori cuprinse ntre 6 i 8. Excepie fac enzimele digestive, pepsina (pH=1,5-2), arginaza (pH= 9,5-10). Influena efectorilor asupra activitii enzimelor Efectorii sunt substane care mresc sau scad aciunea catalitic a enzimelor. Acetia pot fi activatori sau inhibitori. Activatorii sunt compui de natur organic sau anorganic care n concentraii mici mresc viteza unei reacii enzimatice atunci cnd se gsesc n mediul de reacie. O serie de ioni metalici, cum ar fi K, Cu, Fe, Mg, Mn, Co, Mo, au efecte pozitive asupra unor reacii enzimatice. Fe, Mo, Cu particip n reaciile de oxido-reducere, Mg este necesar n reaciile de transfer ale gruprii fosfat, iar Ca este necesar n reaciile enzimatice ce intervin n coagularea sngelui. Inhibitorii enzimatici sunt compui care diminueaz sau anihileaz activitatea enzimelor. Ei au compoziie chimic i mod de aciune diferit. Printre substanele capabile s se fixeze pe diferite grupri din proteine (hidroxil, sulfhidril, carboxil) i s modifice proprietile catalitice, fie prin modificarea conformaiei, fie prin blocarea centrului activ al

37

enzimei, se gsesc ionii metalelor grele, sau compui cum sunt acidul monoiodacetic sau acidul paraclormercuri-benzoic care reacioneaz cu gruprile -SH din enzime. - Inhibitorii competitivi sunt compui care prezint o analogie structural cu substratul enzimei i pot intra n competiie cu acesta pentru a se fixa pe locul activ al enzimei. Enzima se poate combina fie cu substratul, fie cu inhibitorul formnd complexele ES i EI:
ES E EI X P E + P

Este clar c enzima angajat n complexul EI nu poate funciona ca un catalizator, numai complexul ES va permite formarea produilor de reacie. Inhibiia depinde de concentraia substratului, inhibitorului, de afinitatea enzimei pentru substrat i pentru inhibitor. La adugarea de cantiti mari de substrat inhibitorul este deplasat din centrul catalitic al enzimei, care va fi ocupat de substrat, iar viteza de reacie va reveni la valoare maxim ca i n absena inhibitorului. Inhibiia competitiv are numeroase aplicaii practice, n special n terapeutic. Exemplul clasic este cel al sulfamidelor, analogi structurali ai acidului para-aminobenzoic:

H2N

COOH

H2N

SO2 NH2 sulfonam id\

acid para aminobenzoic

Sulfamidele intr n competiie cu acidul p-aminobenzoic i inhib producerea de acid folic necesar creterii bacteriilor. Chimioterapia anticanceroas face apel la numeroi antimetabolii, n general analogi structurali ai bazelor purinice sau pirimidinice, permind inhibiia biosintezei acizilor nucleici i blocarea diviziunii celulare. - Inhibitorii necompetitivi se fixeaz fie pe enzim (dar ntr-un loc diferit de locul activ), fie pe complexul ES pentru a forma un complex ESI, fie pe amndou. Locul activ ale enzimei i pierd capacitatea de a reaciona cu substratul datorit unui fenomen de mpiedicare steric. Gradul de inhibiie depinde de concentraia inhibitorului i de afinitatea enzimei pentru inhibitor. Exemple de inhibitori necompetitivi sunt cianurile, care se combin cu unele metale necesare activitii enzimei (Fe2+, Fe3+) cu care formeaz complexe inactive asemntoare cu fero- sau fericianurile. Unele metale grele (Hg, Pb, Cu, Ag) sunt inhibitori deoarece se combin cu gruprile SH ale enzimei formnd mercaptide Enzim-SH + Ag+ Enzim-S-Ag + H+ Agenii chelatani de tipul acidului etilendiaminotetraacetic (EDTA) leag Mg2+ sau Ca2+.

38

Efectori alosterici Activitatea catalitic a enzimelor poate fi alterat i de compui care se fixeaz pe enzim n locuri ndeprtate de centrul activ (loc alosteric). Aceti compui pot crete activitatea catalitic i se numesc efectori pozitivi, sau pot reduce activitatea catalitic i se numesc efectori negativi. Enzimele alosterice au o structur cuaternar, oligomer, formate dintr-un numr variabil de monomeri legai prin legturi necovalente. n afara situsului catalitic unde se fixeaz substratul, aceste enzime posed unul sau mai multe situsuri alosterice, care pot fi situate pe acelai lan polipeptidic unde se afl i centrul activ dar n zone diferite. - Activatorii alosterici se fixeaz la locul alosteric determinnd o modificare a conformaiei enzimei, numit tranziie alosteric, care antreneaz o modificare a conformaiei la nivelul situsului catalitic. Acest situs determin o conformaie mai propice pentru fixarea substratului, crescnd afinitatea enzimei pentru substrat. Legarea unui inhibitor alosteric produce o modificare conformaional care mpiedic legarea substratului la locul activ (locul activ este deformat) i enzima este inhibat. 2.7. Reglarea metabolismului Reaciile catalizate de enzime au loc cu viteze anumite, determinate de concentraia enzimei, a substratului, pH-ului, temperaturii etc. Aceste reacii nu sunt independente unele de altele, ele sunt grupate i se succed formnd ci metabolice care funcioneaz simultan i n mod coordonat calitativ i cantitativ. Principalele mecanisme prin care se moduleaz activitatea enzimelor dintr-o cale metabolic sunt reprezentate de: reglarea alosteric, transformarea pre-enzimelor inactive n enzime active i sinteza de noi molecule de enzime. Reglarea alosteric este mecanismul cel mai complex al coordonrii metabolice. Enzimele implicate n aceast reglare sunt enzime alosterice. n unele ci metabolice, unul din produii de reacie poate inhiba prima enzim din calea respectiv:
X activator alosteric A E1 B E2 C E3 D F G inhibitor alosteric

Activare

Inhibi]ie

Transformarea substratului A n produsul final G are loc printr-o succesiune de reacii catalizate de diferite enzime. Acumularea de produs G n exces, n celule, determinnd inhibiia enzimei E1 care catalizeaz transformarea substratului A n produsul B, considerat etap limitant a succesiunii de reacii enzimatice. Acest tip de inhibiie se numete inhibiie prin produs final, inhibiie feed-back sau retroinhibiie Reglarea covalent

39

Un grup mare de enzime i regleaz activitatea prin adiia sau ndeprtarea unei grupri fosfat la un rezidiu de serin, treonin, tirozin. Fosforilarea se face pe baza ATPului, n prezena unei familii de enzime, denumite kinaze, iar defosforilarea se face n prezena apei i a unor fosfataze.
ATP Kinaz\ ADP

Enzim \ ser OH

Enzim \ ser O O P O _ O

_ HPO4

fosfataze

H2O

Rspunsul la fosforilare este diferit funcie de enzima fosforilat. Astfel, n urma fosforilrii, unele enzime se activeaz (glicogen fosforilaza), iar altele sunt inhibate (glicogen sintetaza). n metabolismul glicogenului, n momentul fosforilrii, sunt fosforilate simultan dou enzime: - glicogen fosforilaza, care este activat i declaneaz scindarea glicogenului; - glicogen sintetaza, care este inhibat i mpiedic reformarea glicogenului. Transformarea pre-enzimelor n enzime active are loc printr-un proces de proteoliz limitat catalizat fie de enzime proteolitice, fie de H+, ca de exemplu:
pepsinogen tripsinogen H^ sau pepsin\ tripsin\ sau enterokinaz\ tripsin\ pepsin\ tripsin\ chim otripsin\

chim otripsinogen

Transformarea pepsinogenului i tripsinogenului poate fi catalizat de nsi forma activ a enzimei, printr-un proces de autocataliz. Alte procese de transformare n forme active se ntlnesc la enzimele implicate n coagularea sngelui i fibrinoliz.
protrom bin\ plasm inogen
^ Xa, Ca^ , fosfolipide

trom bin\ plasm in\

activatori

40

Procesul de activare prin proteoliz limitat implic hidroliza unor legturi peptidice, ndeprtarea unor peptide de clivare i demascarea centrului activ al enzimei. Fenomenul se ntlnete i la unii hormoni proteici. Reglarea sintezei de enzime reprezint un aspect particular al sintezei de proteine i se afl sub controlul aparatului genetic al celulelor, realizndu-se prin procese de inducie sau represie. Inducia se refer la sinteza de novo a unei proteine ca rspuns la semnalul transmis de o molecul de inductor care, de multe ori, este chiar substratul enzimei (de exemplu lactoza induce sinteza de beta-galactozidaz). Represia reprezint reprimarea sintezei de novo a unei proteine ca rspuns la prezena din mediu a unui represor. De multe ori produii reaciei catalizate de o anumit enzim acioneaz n calitate de represori limitnd sinteza respectivei enzime. 2.8. Importana biomedical a enzimelor rezid n utilizarea acestora n diagnosticul unor boli i instituirea unei terapii corecte, precum i folosirea unora n scop terapeutic. Majoritatea proceselor enzimatice se petrec la nivel celular iar determinarea enzimelor se face n unele lichide biologice (snge total, urin, lichid cefalorahidian, plasm etc.). Este important de cunoscut locul de producere al diverselor enzime, mecanismele prin care ajung aceste enzime din celule n snge. Din acest punct de vedere se deosebesc: enzime secretate activ n plasm, mai ales de ficat, care acioneaz asupra unor substrate din plasm ndeplinind aici un rol fiziologic. Astfel de enzime specifice plasmei se numesc enzime plasmatice funcionale. Enzimele coagulrii, pseudocolinesteraza, sunt enzime plasmatice. Lezarea organului care produce aceste enzime determin scderea activitii enzimelor n plasm; enzime ale secreiilor exocrine care pot difuza pasiv n snge, fr a avea rol specific la acest nivel. Astfel de enzime sunt: amilaza, lipaza, tripsina pancreatic, pepsinogenul gastric, precum i fosfataza alcalin biliar i fosfataza acid prostatic. Enzimele din aceast categorie vor scdea n snge n cazul atrofiei organului care le sintetizeaz sau vor crete cnd apar creteri ale permeabilitii membranei celulelor ce le sintetizeaz; enzimele celulare acioneaz exclusiv intracelular, se mai numesc i enzimele plasmatice nefuncionale deoarece substratele i cofactorii lor specifici nu se gsesc n plasm. Concentraia lor n spaiul intracelular este mult mai mare dect n plasm. Ptrunderea enzimelor celulare n snge, n condiii patologice, are loc prin creterea permeabilitii membranei celulare sub aciunea unor factori infecioi, toxici. n leziunile distructive, att enzimele citoplasmatice ct i cele legate de organitele celulare, trec n snge. O alt cale de ptrundere a enzimelor celulare n snge o constituie blocarea cilor de eliminare normal a enzimelor (unele enzime hepatice, pancreatice) sau o cretere a concentraiei de enzime ca urmare a unei inducii enzimatice.

41

Scderea activitii enzimelor n plasm poate fi datorat scderii sintezei de enzime, consumului unor medicamente (cortizon, morfin, atropin) sau unor erori genetice.

3. VITAMINE Vitaminele sunt substane organice cu greutate molecular mic, cu structuri chimice, proprieti fizice, chimice i biologice diferite. Ele sunt aduse din exterior i nu constituie pentru organism surs energetic sau plastic, dar sunt absolut indispensabile pentru funcionarea normal a organismului. Din acest motiv, organismul are nevoie de un aport zilnic de vitamine (cteva mg/zi) asigurat de raia alimentar. Lipsa unor vitamine din alimentaie duce la declanarea unor stri patologice specifice, numite avitaminoze, care, dac nu sunt de lung durat, pot fi ndeprtate prin administrarea de vitamine. Antivitaminele sunt substane cu structur chimic asemntoare cu a vitaminelor dar cu aciune antagonist, deoarece avnd structur asemntoare cu vitaminele adevrate, pot intra n competiie cu acestea din urm. Clasificarea vitaminelor se bazeaz pe criterii de solubilitate: vitamine liposolubile (solubile n grsimi) A, D, E, K; vitamine hidrosolubile (solubile n ap) B1, B2 B6, PP, biotina, acidul pantotenic, acidul folic, B12, vitamina C. 3.1. Vitaminele hidrosolubile Vitaminele hidrosolubile aparin complexului vitaminic B (B1, B2, B6, B12, PP, acid pantotenic, acid folic) i vitamina C. Fiind solubile n ap nu se acumuleaz n organism n concentraii toxice i se elimin n principal pe cale renal. Vitaminele hidrosolubile ndeplinesc n general rolul de coenzime. 3.1.1. Vitamina B1 (tiamina, aneurina, vitamina anti beri-beri, vitamina antinevritic) Structural, este alctuit dintr-un nucleu pirimidinic i un nucleu tiazolic, substituite i unite printr-o grupare metilenic.
6' 1' N 5' 4'

CH2

CH3

H3C

3'

NH2.HCl 2 S 5 CH2 CH2 OH

1

42

Tiamina Absorbia tiaminei se realizeaz la nivelul intestinului subire, prin procese active i pasive; absorbia activ presupune formarea TPP (tiamin-PP). n organism tiamina se gsete liber (plasm, LCR) i esterificat ca TPP (80%), form sub care se stocheaz pentru scurt timp i sub care este activ biologic.
Tiam in pirofosforilazkinaza ATP H3C AMP N N CH2 NH2 TPP N
^

Tiam in\

CH3 S CH2 CH2 O

O P OH

O O P OH OH

Rol metabolic. Sub form de TPP particip n calitate de coenzim la unele procese metabolice, decarboxilarea oxidativ a -ceto-acizilor (piruvic i cetoglutarat). De asemenea, TPP constituie coenzima transcetolazelor, enzime din calea pentozo-fosforic. Tulburri de aport vitaminic Simptomele deficienei pot fi cauzate de malnutriie, defecte de absorbie, pierderi vitaminice datorate terapiei cu diuretice, hemodializ, diaree. Deficitul vitaminic poate conduce la boala numit beri-beri, ce se caracterizeaz prin: - simptome neurologice (somnolen, dureri de cap, nevrit periferic); - simptome gastro-intestinale; - simptome la nivelul aparatului locomotor. Simptomele moderate ale deficienei tiaminice includ: confuzie mintal, ataxie (inabilitatea de a realiza un control fin al funciilor motorii) i oftalmoplegie (pierderea coordonrii micrii ochilor). Aceste simptome se ntlnesc i n sindromul Wernicke-Korsakoff. La animale, deficiena tiaminic conduce la pierderea coordonrii musculare, ca retracia capului (opistotonus), caracteristic porumbeilor cu hipovitaminoz B1. Hipervitaminoza tiaminic nu apare n mod obinuit. Cu totul excepional pot apare fenomene de intoleran (lein, dispnee, tahicardie). 3.1.2. Vitamina B2 (riboflavina) Aparine clasei pigmenilor galbeni sau flavinelor naturale. Este constituit dintr-un nucleu triciclic, derivat de izoaloxazin i o caten lateral de ribitol:
OH OH OH H3C 7 H3C 6
8

CH2 CH CH CH CH2 OH
9 10

N N

12 4 NH

43

n organism, riboflavina se gsete sub form liber (plasm, lapte, urin i retin), ct i legat (FMN, FAD, enzime flavinice) n diferite esuturi ca rinichi, ficat, inim, muchi. Rol metabolic Riboflavina intr n structura formelor sale coenzimatice, flavinmononucleotid (FMN) i flavinadenindinucleotid (FAD). Transformarea sa n ester monofosforic (FMN) are loc n toate celulele organismului, sub aciunea unei flavokinaze:
Riboflavin\ Flavokinaz\ ATP ADP FMN Flavin-adeninpirofosforilaza ATP PPa FAD

Prin unirea FMN cu acidul adenozin-5-P (AMP), sub influena flavin-adeninpirofosforilazei, se formeaz FAD-ul. Dup nomenclatura strict, FMN-ul nu este un mononucleotid, iar FAD-ul nu este un dinucleotid, deoarece n loc de pentoz au un alcool polihidroxilic, ribitolul, iar flavina nu este o baz azotat adevrat.
NH2 O H H H H H3C H3C P O CH2 C OH OH C OH C OH C H N N O N O FMN FAD AMP NH O O P OH H H OH CH2 O H H OH N N N N

Flavinenzimele particip la reacii de oxidoreducere deoarece ciclul izoaloxazinic poate suferi reduceri reversibile, prin fixarea temporar la N1 i N10, a doi atomi de hidrogen, cu mutarea dublei legturi. Hidrogenii sunt preluai de la diferite substrate reduse (SH2), cu care intr n reacie i care se oxideaz (Sox):
R H3C H3C N
10

R N
1

O NH

^ ^ 2H ^ 2e -2H^ -2e-

H3C H3C

N N H

H N

O NH

N O FMN sau FAD

FMNH2 sau FADH2

44

FMN i FAD se gsesc n celul sub form de combinaii cu proteinele, constituind sisteme enzimatice de mare importan n oxidrile celulare flavinenzimele (peste 60). Riboflavina intervine i n mecanismul vederii (transform lungimile de und mici n lungimi de und mai mari, perceptibile), n fiziologia glandelor lacrimale, n mecanismul de producere a HCl n mucoasa gastric, n activitatea altor vitamine i hormoni (conserv activitatea vitaminei B1 i este legat de activitatea hormonilor corticosuprarenali i a insulinei). Tulburri de aport vitaminic Hipovitaminoza se manifest prin apariia unor leziuni ale mucoasei gastrice, buco-faringiene, leziuni cutanate. La om, carena este cunoscut sub denumirea de pelagr fr pelagr, cu simptomele: stomatit angular, leziuni umede la colurile gurii i nasului, conjunctivit, cataract, blefarit, creterea n volum a limbii. Hipervitaminoza. Megadozele administrate timp ndelungat determin: crampe musculare, poliurie, utilizarea i metabolizarea defectuoas a altor vitamine, datorit competiiei pentru compui de fosforilare. 3.1.3. Vitamina B6 (piridoxina, adermina, factor antidermatitic) Vitamina B6 include trei compui naturali, derivai de piridin, care se deosebesc prin natura radicalului din poziia 4:
4

CH2OH
5

CHO OH H3C N Piridoxal CH2OH OH H3C

CH2NH2 CH2OH N Piridoxam in\

OH H3C

CH2OH

1N

Piridoxol

Rolul metabolic Piridoxalul i piridoxamina intervin n metabolism sub form fosforilat la gruparea de alcool primar din poziia 5 (piridoxal-5-P, respectiv piridoxamin-5-P) care se obin n reacia cu ATP.
CHO (CH2 OH H3C
4 5 6

NH2) Piridoxal-kinaza ATP OH H3C ADP

CHO (CH2
4 5

NH2)

CH2OH

CH2 O PO3H2

1N

N Piridoxal fosfat

Piridoxal

45

Vitamina B6 intervine n multe reacii metabolice la care particip aminoacizii: transaminare, decarboxilare (tirozina, arginina, acid glutamic), dezaminare (serina, treonina), transsulfurare (transferul sulfului de la metionin la serin pentru sinteza cisteinei), desulfurare (cistein i homocistein), activitatea kinureninei din calea de degradare a triptofanului, n absorbia din intestin i intrarea aminoacizilor n celul.
Transaminare H R Treoninaldolaza OH H3C N H
+

C N C

COOH Decarboxilaza H Enz

Tulburri de aport vitaminic Ca semne ale deficienei se pot meniona: strile de nervozitate, insomnie, tulburri de mers, afeciuni cutanate n jurul nasului, ochilor, gurii, limfocitopenie. Carena vitaminei B6 favorizeaz apariia cariilor dentare, conduce la modificri n OH CH3 metabolismul triptofanului, caracterizat printr-o excreie excesiv de acid xanturenic. Medicamentul ISONIAZID (hidrazida acidului izonicotinic), uzual utilizat n N CO NH NH + O a N tratamentul tuberculozei, reacioneaz cu B26 pentru CHforma un derivat hidrazonic, care inhib enzimele ce conin piridoxal-5-P. Pacienii tratai mult timp cu isoniazid dezvolt o CH2 6. Izoniazid neutropenie periferic, care rspunde foarte bine la terapia cu BOH
Vitamina B6

HOH

spontan

OH CH3 N CO NH N CH N CH2OH Piridoxal hidrazona

46

De asemenea, penicilinamina (beta-dimetil-cisteina) uzual utilizat n tratamentul pacienilor cu boala Wilson, cistinurie i artrit reumatoid, reacioneaz cu B6, pentru a forma un derivat tiazolidinic inactiv. Pacienii tratai cu penicilamin dezvolt ocazional convulsii, care pot fi prevenite prin tratament cu vitamin B6. 3.1.4. Biotina (vitamina H) Molecula biotinei este constituit din dou nuclee condensate, un nucleu tetrahidro-imidazolic (A) i unul tetrahidro-tiofenic (B) la care este grefat o caten lateral de acid n-valerianic. Se cunosc doi izomeri naturali, alfa i beta-biotina, izolai din ficat i lapte, respectiv din glbenuul de ou:
O 2' C 3' N H A 3 C H B C H (CH2)4 COOH 1S 2 O C H N N H A H C CH3 C H B H2C C H CH CH CH3 S COOH Alfa-biotina

H N H C H2C
4

1'

Beta-biotina

n produsele naturale apare combinat cu lizina, compus numit biocitin:

Biotin\-CO-NH-(CH2)4-CH-COOH NH2

Biocitinaza, enzim evideniat n plasm, ficat, pancreas, hidrolizeaz compusul, elibernd biotin. Enzimele care conin biotin au n centrul catalitic, resturi de lizin, prin care se fixeaz vitamina. Cu avidina, glicoprotein termolabil din albuul de ou

47

crud, formeaz biotin-avidina, compus stabil, rezistent la aciunea enzimelor proteolitice, nedisociabil prin dializ. Sub aceast form, vitamina nu se absoarbe n tractul digestiv. Rol metabolic Biotina transport grupri CO2 active, n calitate de grupare prostetic a unor sisteme enzimatice de carboxilare (carboxilaze) care catalizeaz fixarea CO 2 pe diferite substrate. n reaciile de carboxilare, CO2 activat de ctre ATP, particip sub form de carboxi-biotin-enzim:
OH _ HCO3 ^ ATP Mg2^ ADP O P OH _ O C O Anhidrid\-Pcarbonic\ O ^ O C HN NH A HC CH NH Enz. B H2C C H (CH2)4 CO S Biotin-Enz. COO CH3 O O C O C N NH A HC CH NH Enz. B H2C C H (CH2)4 CO S C O _ COO C _

Pa

CH2 COOH Biotin-enzim a

Piruvat-carboxilaza

Tulburri de aport vitaminic Carena afecteaz aproape toate compartimentele metabolismului intermediar, sinteza de novo a enzimelor, metabolismul glucidic, lipidic etc. Hipovitaminoza se manifest prin tulburri nervoase, dermatit, oboseal muscular, anemie, scderea apetitului. Dup un consum mare de albu de ou crud, la obolani apare un sindrom deficitar biotinic, numit boala albuului de ou, ce se manifest prin dermatit, alopecie n jurul ochilor i paralizia membrelor posterioare. 3.1.5. Vitamina PP (niacina, factorul pelagro-preventiv) Ca vitamin PP sunt desemnai doi compui, derivai de piridin, acidul nicotinic (niacina) i amida acidului nicotinic (niacinamida):

48

n snge se gsete sub form de coenzim (80% n globulele roii) i sub form de amid liber, n plasm. Vitamina PP se sintetizeaz n organism din triptofan; din 60 mg triptofan rezult 1 mg acid nicotinic. Rol metabolic Nicotinamida acioneaz n organism sub forma a dou coenzime, nicotinamidadenindinucleotid (NAD+) i nicotinamidadenindinucleotidfosfat (NADP+), n reaciile de oxido-reducere.
NH2 CO NH2 N H O H
+

O P OH O

O P OH H H O H2C O

N N H N

CH2 O

OH

OH

OH

OH (PO3H2)

NAD+ (NADP+) Acestea sunt formele oxidate ce pot fi reduse n NADH i NADPH, reducere ce are loc la nucleul piridinic al nicotinamidei:
H C N
^

O NH2

^ ^ 2H 2e ^ ^ 2H 2e

H C N R

O NH2

R NAD^

Aceste dou forme intervin n procesele de oxidoreducere celular, constituind coenzima multor dehidrogenaze. Spre deosebire de coenzimele flavinice (FMN i FAD), coenzimele piridinice (NAD+ i NADP+) pot exista liber n celul; pot fi disociate de partea proteic. NAD+ particip n special n lanul transportorilor de H, iar NADPH n special n reaciile de sinteze reductive (acizi grai, proteine etc.).

NADH^ ^ H

49

Tulburri de aport vitaminic La om carena de vitamin PP se manifest prin pelagr (pella-agra piele aspr, brun). Pelagra se instaleaz cnd dieta este constituit n exclusivitate din porumb, srac n triptofan i vitamin B6 (regim pelagrogen). Semne ale pelagrei oboseal, slbiciune, indigestie, anorexie, urmat dup cteva luni de o dermatit (mai ales pe pielea expus la soare), diaree i demen (boala celor trei D). Dereglrile metabolice din pelagr sunt greu de definit deoarece carena de vitamin PP poate fi indus de carena altor vitamine, n special B6 n lipsa creia nu se mai sintetizeaz vitamin PP din triptofan. Pelagra poate nsoi i alte boli specifice unor defecte metabolice din metabolismul triptofanului: boala Hartnup (defect de absorbie a triptofanului) sau sindromul carcinoid (proliferarea malign a celulelor care sintetizeaz serotonina). 3.1.6. Acidul pantotenic (vitamina Bx, factor hepatic, factor antidermatitic al ginilor) Acidul pantotenic este format din acidul pantoic i -alanin.
O H3C OH O HO CH2 C CH C NH CH2 CH2 C OH H3C Acid pantoic Acid pantotenic -alanin\

Poate fi sintetizat de plante i microorganisme. Se absoarbe la nivelul intestinului i imediat, tot n aceste celule, este fosforilat la gruparea de alcool primar, formnd acidul 4-fosfopantotenic.O H3C Formele active ale acidului OH O pantotenic sunt 4-fosfopanteteina i coenzima A CH2 C CH C NH CH2 CH2 C NH CH2 CH2 SH (CoASH).
4'-fosfopantetein\ H3C Acid pantoic O O CoASH P O O O P O _ O _ O -alanin\ tioetanolam ina

Acid pantotenic _ O N N CH2 O O H P O O H OH NH2 N N Adenina

Riboza

50

Rol metabolic CoA are rol deosebit n metabolismul glucidic, lipidic i proteic fiind transportor de grupri acil R-CO-. Legtura dintre CoA i restul acil se realizeaz prin intermediul gruprii SH rezultnd un tioester (R-CO~S-CoA) n care legtura tioesteric este echivalent ca energie cu o legtur macroergic din ATP. 4-fosfopanteteina legat prin legtur fosfo-diesteric de un rest de serin din proteina acil transportoare ACP-(Acyl Carrier Protein), din multienzim-complexul numit acid gras-sintetaza care catalizeaz sinteza acizilor grai. Tulburrile de aport vitaminic la om sunt cunoscute numai experimental dup administrarea de antagoniti. Scderea concentraiei acidului pantotenic se caracterizeaz prin; stare de oboseal, ameeli, hipotonie muscular, tulburri gastrointestinale (gastrite), scderea rezistenei la infecii. 3.1.7. Acidul folic (acidul pteroilglutamic, vit.M, factorul U, factorul R, coenzima C) Acidul pteroilglutamic, derivaii nrudii i formele conjugate constituie grupul acidul folic. Este constituit dintr-un heterociclu numit pteridin, acid p-amino-benzoic i acid glutamic:
H2N N OH Pirim idin\ Pteridin\ Pirazin\ Acid p-NH2benzoic (PABA) Acid glutam ic N N N CH2 HN O C HN COOH CH (CH2)2 COOH

Acid pteroic Acid pteroilglutam ic

Rol metabolic H Acidul tetrahidrofolic (FH4), forma activ a acidului folic servete la transferul i utilizarea fragmentelor de un singur carbon n diferite stri de oxidare: -CH3, -CH2-, H N N
H2N N OH N H
5

H 10 CH2 NH R H

51

-CH=, -CHO, -CH=NH, care se pot fixa la N5, N10 sau ca o punte metilenic ntre N5 i N10.

Metabolismul folatului este complex. Sursa de un atom de carbon este serina, care transfer gruparea sa hidroximetil la FH4 formnd N5, N10-metilen-FH4 din care se pot forma i alte forme active: N5-CH3-FH4, N10-CH3-FH4, N5,N10-metenil-FH4, N5-formil-FH4. Coenzimele acidului folic particip la sinteza metioninei din homoserin (N5CH3-FH4), sinteza acidului timidilic din acid uridilic (N 5, N10-metilen-FH4), n sinteza nucleului de purin (N5, N10-metenil-FH4 i N10-formil-FH4) etc. Tulburri de aport vitaminic Deficiena de acid folic apare din cauza unui aport alimentar sczut, stres (sarcin), tulburri de absorbie, deficit de enzime implicate n sistemul de transport sau terapia cu unele medicamente. Carena se manifest exclusiv prin perturbarea hematopoezei, simptomul fiind anemia megaloblastic (cu eritrocite mari i rare). Datorit relaiei strnse dintre activitatea metabolismului acidului folic i cea a vitaminei B12, este destul de greu de a diferenia simptomele clinice dintre cele dou stri de caren. 3.1.8 Vitamina B12 (cobalamina, ciancobalamina, factor antipernicios, factor extrinsec Castle) Vitamina B12 este un complex organo-metalic, cu inel corinic (tetrapirolic), similar nucleului porfirinic, la care se adaug ionul de cobalt. Nucleul corinic are substituite grupe CH3, acetamidice i propion-amidice. n centrul acestui macrociclu se gsete ionul Co3+, cu numrul de coordinaie 6: 4 legturi se realizeaz cu atomii de N pirolici, o legtur cu gruparea CN, iar a 6-a legtur se realizeaz cu cea de a doua parte a moleculei. ntregul complex, fr gruparea CN, se numete cobalamin. Radicalul R poate fi diferit, pentru a da variate forme ale vitaminei. De exemplu: RCN n ciancobalamin (ciancobalamina se formeaz n procesul de purificare i NH2COCH2CH2 CH a vitaminei); ROH n hidroxicobalamin; R5reprezint forma comercial3 CH3 CH CONH 2 2 NH2 deoxiadenozil COCH2 n 5-deoxiadenozilcobalamin; RCH3 n metilcobalamin. CH CH CONH
CH3 CH3 H NH2COCH2 H CH3 N N CN Co
2 2 2

N + N CH3

CH3 CH3

CH3 CH3 CH2CH2CONH2 H C CH3 O

CH2CH2CONHCH2

O HO O P O

H H O H CH2OH

52

Absorbia intestinal a vitaminei B12 este mediat prin receptori, n ileon, necesitnd legarea vitaminei de o glicoprotein foarte specific, numit factor intrinsec, secretat de celulele parietale ale mucoasei gastrice. Dup absorbie, vitamina se leag de o protein plasmatic, transcobalamina II, n vederea transportului la esuturi. n ficat, excesul de vitamin se depoziteaz sub form de 5-deoxiadenozilcobalamin (70%), OH-cobalamin (27%) sau metil-cobalamin (3%), fixate pe proteine celulare. Rol metabolic Vitamina B12 ptrunde n celul, prin endocitoz, sub form de OH-cobalamin, metilndu-se apoi la CH3-cobalamin. O cantitate important intr n mitocondrii i se transform n 5-deoxiadenozil-cobalamin. Cele dou forme coenzimatice, metabolic active, ale cobalaminei sunt implicate n fucnionarea a dou sisteme enzimatice: metilmalonil-CoA-izomeraza i respectiv homocistein-CH3-transferaza (sau metionin-sintaza), care catalizeaz urmtoarele reacii:
N5-CH3-FH4 FH4

Hom ocistein\

HomocisteinCH3-transferaza (CH3-cobalamina)

Metionin\

Reac]ie de m etilare (citoplasm \)

OH-cobalam ina

L-m etilm alonil-CoA

5'-deoxiadenozilcobalam ina)

Succinil-CoA

Reac]ie de rearanjam ent intram olecular (m itocondrie)

53

n absena cobalaminei, prima reacie se blocheaz, se acumuleaz N5-CH3-FH4, deturnnd folatul de la rolul su de transportor al grupelor de 1 C, constituind aa numita capcan a folatului sau ipoteza capcanei metilului. Astfel, n primul caz, homocisteina rmne nemetilat i se poate elimina prin urin (homocistinurie), iar n al doilea caz, se poate acumula i elimina prin urin acidul L-metil-malonic (acidurie metilmalonic). Cobalamina i folatul sunt implicate n metilarea histonelor, n timpul replicrii ADN-ului. Tulburri de aport vitaminic Sindromul tipic al carenei l constituie anemia pernicioas sau anemia Biermer, caracterizat prin eritropoez megaloblastic, cu modificri ale leucopoezei i formrii de trombocite. Alterrile hematologice, caracteristice, pot fi nsoite de astenie, paloare, dispnee, atrofia mucoaselor digestive, tulburri nervoase (scderea rspunsurilor reflexe i a perceperii senzoriale, greutate n vorbire i mers), ct i tulburri gastro-intestinale. Anemia rezult din perturbarea sintezei ADN, care afecteaz formarea nucleului noilor eritrocite. n aceste cazuri globulele roii circulante sunt, n mare parte, forme primitive i cu via scurt. Carena de cobalamin este adesea corelat cu cea de folat i din aceast cauz diferenierea celor dou este dificil. 3.1.9. Vitamina C (acidul ascorbic, factor antiscorbutic) La nceput, a fost denumit acid hexuronic, avnd o structur asemntoare monozaharidelor. Forma L este cea mai activ.
O C HO C HO C H C HO C H CH2OH Form redus\ a (Acid ascorbic)) O O C O C O C H C HO C H CH2OH Form oxidat\ a (Acid dehidroascorbic) O

Este sintetizat de toate plantele, de unele microorganisme i de majoritatea animalelor, cu excepia omului, primatelor i cobaiului, care sunt tributare aportului exogen. n snge, durata de via a vitaminei C este de aproximativ 16 zile, la animalele care o sintetizeaz. Rol metabolic

54

Nu are rol coenzimatic tipic, dar este necesar pentru buna funcionare a creierului, ficatului, glandelor endocrine, n hematopoez, hemoglobino-genez etc., participnd la numeroase reacii de oxido-reducere. Principalele reacii la care particip vitamina C sunt: hidroxilarea prolinei i lizinei pentru sinteza colagenului, hidroxilarea fenilalaninei, sinteza catecolaminelor, hidroxilarea steroizilor, desaturarea acizilor grai, absorbia fierului, metabolizarea xenobioticelor etc. Tulburri de aport vitaminic Carena vitaminei sau aportul alimentar redus poate conduce la tulburri gastrointestinale, boli infecioase, neoplazii, afeciuni metabolice caectizante i la apariia scorbutului. Apariia scorbutului este precedat de anemie, inapeten, scderea rezistenei la efort, infecii, dureri articulare, uscciunea tegumentelor. ntr-un stadiu mai avansat apar hemoragii subcutane, musculare, gingivale. Apar leziuni ale esutului osos i cartilagiilor, ca urmare a perturbrii biosintezei colagenului. Stocajul normal al vitaminei C este suficient pentru cel puin 3-4 luni naintea apariiei semnelor de scorbut. Nu sunt cunoscute efecte toxice, dar supradozarea poate conduce la litiaz renal, datorit formrii oxalatului de Ca insolubil, ct i datorit efectului nefavorabil asupra absorbiei vitaminei B1. 3.2. Vitamine liposolubile Din punct de vedere chimic vitaminele liposolubile fac parte din clasa terpenelor, compui polienici, constituii din resturi de izopren, unite cap la coad. Vitaminele liposolubile se gsesc n mod obinuit asociate cu lipidele din alimentele naturale. Absorbia lor se face n aceleai condiii ca i a lipidelor, adic n prezena grsimilor, a bilei i a sucului pancreatic. Dup absorbie, vitaminele liposolubile sunt transportate de chilomicroni pe cale limfatic n snge i apoi depozitate n ficat (vitamina A, D, K), sau n esutul adipos (vitamina E) pentru diferite perioade de timp. Supradozarea vitaminelor liposolubile conduce la instalarea unor stri toxice (hipervitaminoz) mai ales n cazul vitaminelor A i D. n snge vitaminele liposolubile sunt transportate de lipoproteine specifice, nefiind solubile n plasm. Nu sunt excretate n urin; n cea mai mare parte sunt eliminate pe cale biliar n fecale. 3.2.1. Vitamina A (Retinol, axeroftol, vitamina antixeroftalmic, vitamina liposolubil de cretere) De fapt sunt dou vitamine, A1 i A2, care pot fi oxidate la aldehide sau acizi fr pierderea activitii biologice.
H3C
2 3 16 17 19

CH2OH 1 6 7 9 11 13 15 10 12 8 14 5 CH3 4 18

CH3

CH3

20

CH3

H3C

CH3 CH3

CH3

CH3

CH2OH

Retinol (Vitamina A1)

3-dehidroretinol (Vitamina A2)

55

Vitamina A1 este un alcool polienic cu 20 atomi de carbon, cu duble legturi conjugate, coninnd la un capt un ciclu de -ionon. Vitamina A2 este 3-dehidroretinol, ce conine o legtur dubl suplimentar ntre C3 i C4. Gruparea de alcool primar din poziia 15 se poate oxida n organism reversibil la aldehid (retinal) sau chiar la acid retinoic (-COOH), dar ireversibil.
15 15 15

CH2OH Retinol

CHO Retinal

COOH Acid retinoic

n organism, vitamina A se formeaz n special la nivelul mucoasei intestinale i mai puin n ficat, muchi i plmn, prin transformarea provitaminelor A (, i carotenii) prin oxidare la C15.
18' 7 6 5 18 8 9 10 11 12 13 14 15 14' 15' 12' 13' 11' 10' 8' 9' 7' 5' 6' 17' 4' 3'

17 2 3 4 1

16

1' 2' 16'

ionon\

caroten

ionon\

Ingerarea ndelungat de alimente bogate n caroten duce la depozitarea acestora n esuturi, aprnd xantodermia nglbenirea pielii, n special a palmelor i tlpilor, cu excepia sclerelor care, rmnnd albe, poate face diferena de icter. Hipercarotenemia nu atrage i hipervitaminoz A. Vitamina A se gsete n produsele de origine animal n cantitate mai mare dect n cele vegetale: ficatul unor peti de ap dulce, glbenu de ou, lapte. Depozitul de vitamin A din ficat poate asigura necesarul organismului pentru o perioad lung de timp (chiar peste 1 an). Rolurile vitaminei A Vitamina A (retinol sau acid retinoic) este indispensabil vieii i creterii normale (n privina staturii i greutii). n absena vitaminei, creterea animalelor mici este oprit i cu timpul acestea mor.

56

Exercit aciune protectoare asupra epiteliilor, asupra mucoaselor, mpiedicnd ptrunderea microorganismelor (aciune antiinfecioas). Retinolul (-CH2OH) are rol n funcionarea aparatului genital i de reproducere (spermatogenez). n acest caz acioneaz n calitate de hormon, printr-un mecanism asemntor cu al hormonilor steroizi. Deficiena de vitamin A scade gluconeogeneza (probabil ca rezultat al represiei de cortizol), scade sinteza de glicoproteine membranare, mucopolizaharide i colesterol. Acidul retinoic poate nlocui retinolul n creterea i diferenierea epiteliilor, fiind considerat chiar mai activ, dar nu poate substitui retinolul sau retinalul n procesul vederii. Cel mai nsemnat rol al vitaminei A este n procesul vederii n care este implicat direct 11-cis-retinal (-CHO) n calitate de grupare prostetic a tuturor pigmenilor fotosensibili din retin. Deficiena de vitamin A la copii i animale tinere afecteaz sistemul osos (oprirea creterii oaselor, erupii dentare ntrziate, rdcini ru implantate, alterarea emailului dentar) i apoi a esuturilor moi. - Oprirea diviziunii celulare i atrofia celulelor deja formate, ntrzierea sever a creterii inclusiv a sistemului nervos. - Epiteliile, indiferent de originea lor, apar keratinizate, ceea ce conduce la tulburri ale glandelor exocrine, lacrimale, piele, tractusul digestiv, respirator, urogenital (se produce keratinizarea celulelor vaginale kolpokeratoz). - Carena poate fi nsoit de infecii spontane. - Carena vitaminic se manifest n principal la nivelul ochilor: scderea capacitii de adaptare de la lumin la ntuneric (nictalopie) i hemeralopie scderea acuitii vizuale i ngustarea spectrului vizual pentru albastru-galben, oboseal la citit. Dac avitaminoza se accentueaz i este de lung durat apar leziuni ale epiteliului conjunctiv xeroftalmie manifestat prin uscarea epiteliilor (xeroz), atrofia glandelor lacrimale (cu scderea lacrimilor i deci umectarea insuficient) i lipsa de lizozim (factor de protecie antimicrobian), corneea se opacifiaz, continund cu keratomalacie (perforarea purulent a ochiului) proces care duce la cecitate (orbire). Hipervitaminoza A - Dozele excesive de vitamin A produc fenomene de intoxicaie acut, manifestat prin ameeli, cefalee, somnolen sau intoxicare cronic (anorexie, tegumente usacte, buze uscate, ragade comisurale). - Megadozele de vitamin A produc reabsorbia oaselor prin stimularea activitii proteolitice lizozomale, stimularea secreiei de parathormon (PTH) i efecte teratogene la femeile gravide. - Consumul exagerat de caroteni produce icterul carotenic. Cnd se depete capacitatea de fixare a proteinei de legare a retinolului (RBC) are efecte litice asupra membranelor biologice. Lezarea membranelor eritrocitare de ctre retinol este inhibat de vitamina E (tocoferol).

57

3.2.2. Vitamina D (colecalciferol, vitamina antirahitic) Grupul vitaminelor D este reprezentat de cinci vitamine cu structur chimic i aciune asemntoare notate de la 2 la 6. Provitaminele D sunt derivai sterolici cu structura urmtoare: ciclopentanoperhidrofenantren. Ele se difereniaz dup structura radicalului R.
CH3 CH3 CH CH CH3 CH
3

R
18 19 11 12 13 17 16

CH CH

CH

HO

1 9 10 2 B 8 A 3 5 7 4 6

C 14 D 15 R

Ergosterol, provitamina D2 (ergocalciferol)

CH3 CH CH2 CH2 CH2 CH3 CH CH3

7-dehidrocolesterol, provitamina D3, (colecalciferol)

Precursorii nu prezint activitate vitaminic. Activitatea vitaminic se dobndete prin activare, proces care cuprinde dou etape: activarea primar i activare secundar.

ar\ Provitamine D activarea prim (U.V.` piele) n

vitamine D 1-a activare secundar\ (ficat) a 2 -a activare secundar\ 1,25-(OH)2-D

25-OH-D

Activarea primar. Transformarea provitaminei n vitamina D se realizeaz prin deschiderea inelului B ntre C9 i C10 cu apariia unei duble legturi ntre C10 i C19 sub aciunea razelor ultraviolete, rezultnd o trien care constituie structura de baz ce confer activitate biologic comun (anhirahitic) iar catenele laterale le imprim intensitatea activitii vitaminice. Suprairadierea duce la compui toxici. Deoarece prin expunere la soare se formeaz suficient vitamin D3, aceasta este privit astzi mai mult ca un hormon dect ca o vitamin. Activarea secundar const din dou procese de hidroxilare succesive ce au loc n ficat i rinichi. - Prima hidroxilare a vitaminei D3 are loc n ficat, n poziia 25 a catenei laterale, formndu-se 25-hidroxi-D3.

58

7-Dehidrocolesterol U.V. (piele)

R CH2

Colecalciferol (Vitam D3) ina ficat

HO

CH2

25

OH

25-OH-D3

HO

Rinichi

HO

CH2

25

OH CH2 HO 25 OH

OH

HO

1,25-Dihidroxi-D3 (calcitriol)

24,25-Dihidroxi-D3 (inactiv)

- Forma hidroxilat n poziia 25 sufer o nou hidroxilare la nivelul rinichiului printr-un proces asemntor celor din sinteza sterolilor n glandele suprarenale. Sistemul enzimatic este localizat n membrana intern a mitocondriei i necesit pe lng NADPH, O2 i citocromul P450. Rezult 1,25-dihidroxi-colecalciferolul sau 1,25-dihidroxi-D3 care este transportat de o protein specific la intestin unde declaneaz procesele implicate n absorbia calciului.

59

Derivatul monohidroxilat (25-OH-D3) este de 4-5 ori mai activ dect vitamina D3, n prevenirea rahitismului, iar 1,25-(OH)2-D3 este de 20-30 ori mai eficient dect D3 n transportul intestinal de Ca++ i respectiv, n prevenirea rahitismului, i de de zece ori mai activ n meninerea concentraiei sanguine de fosfor la animalele cu regim srac n fosfai. La nivelul rinichiului alturi de 1,25-(OH)2-D3 se poate forma i 24,25-(OH)2-D3 mai puin activ n transportul intestinal al Ca++ i n procesul de mineralizare, dar capabil s creasc Ca++ seric la obolanii cu depleie de fosfai dependent de vitamina D. Rolul metabolic al vitaminei D 1,25-(OH)2-D3 sau calcitriolul (C) regleaz metabolismul fosfo-calcic prin aciunile exercitate asupra esuturilor int: intestin, os, rinichi. La nivelul intestinului calcitriolul (C) este transportat la locul de aciune unde se fixeaz pe proteine receptoare citoplasmatice i apoi este translocat la nucleu unde printr-un mecanism puin cunoscut induce sinteza unei proteine transportoare de calciu (Calcium Binding Protein CBP) care favorizeaz absorbia de Ca++ contra gradientului de concentraie, mecanism de aciune similar aciunii unui hormon steroid. La nivelul tubilor renali 1,25-(OH)2-D3 stimuleaz sinteza CaBP renale i deci reabsorbia, prentmpinnd excreia de Ca++. n condiii fiziologice sau n doze terapeutice 1,25-(OH)2-D3 stimuleaz reabsorbia de fosfat, mai mult dect pe cea de Ca++, diminund excreia, economisind fosfaii. La nivelul osului aciunea 1,25-(OH)2-D3 este mai complicat i mai puin clar. Vitamina asigur fixarea Ca++ i PO43- n spaiile libere dintre capetele nespiralate ale moleculelor de colagen i stimuleaz sinteza unei proteine specifice care leag Ca++, osteocalcina. Calciul se fixeaz n faza mineral a osului, sub form de hidroxiapatit, Ca10(PO4)6(OH)2, alturi de cantiti mici de citrat, Na+, Mg++ i CO32-. Tulburri de aport vitaminic Hipovitaminoza D Formarea defectoas n piele a vitaminei D3, aportul alimentar sczut i/sau defecte intestinale de absorbie a vitaminei pot duce la stri de hipovitaminoz D. Hipovitaminozele D conduc la stri de boal care se manifest prin: - perturbri n metabolismul mineral (Ca++ i PO43-) i a secreiei de parathormon (PTH); - defecte n mineralizarea osului. n deficiena de vitamin D absorbia de Ca2+ fiind perturbat apare hipocalcemia, nsoit secundar i compensatoriu de creterea secreiei de PTH, iar PTH determin mobilizarea Ca2+ din oase pentru normalizarea calcemiei. Se instaleaz o hipofosfatemie accentuat mai ales n stadiile timpurii din cauza scderii absorbiei intestinale i n principal eliminrilor renale (PTH scade pragul renal de eliminare pentru fosfai). Din punct de vedre biochimic hipovitaminoza D este caracterizat prin hipocalcemie moderat sau normocalcemie, hipofosfatemie, activitate crescut a fosfatazei alcaline, nivele crescute de parathormon i sczute de 25-(OH)2-D3. Glucocorticoizii inhib absorbia intestinal de calciu i mineralizarea osului.

60

Hipovitaminoza D la copii se numete rahitism iar la adult osteomalacie. Clinic, rahitismul este caracterizat prin scderea rezistenei mecanice a oaselor (nmuierea oaselor). La adult, rezerva de calciu fiind mai mare, hipovitaminoza se instaleaz mai greu. Hipocalcemia dezvolt la adult osteoporoza (reducerea masei osoase pe unitate de volum la un nivel situat sub cel necesar funciei normale). Osteoporoza apare la femei postpartum ceea ce dovedete dependena hormonal a acesteia. Tratamentul cu estrogeni previne instalarea osteoporozei (se pare c estrogenii protejeaz osul mpotriva agenilor care determin resorbia osului, n special PTH). Sunt descrise boli genetice datorate unui defect n sinteza renal de 1,25-(OH)2-D3 care produc rahitismul dependent de vitamina D (tip I) i mai rar lipsei sau deficienei de receptor citoplasmatic pentru 1,25-(OH)2-D3 rahitism vitamina D rezistent (tip II). De asemenea, a fost descris rahitismul hipofosfatemic indus de iradierea cu raze X. Hipervitaminoza D Dup ingestia cronic, oral, a unor doze mari de vitamin D pot apare intoxicaii cu vitamin D caracterizate prin anorexie, vrsturi, diaree, astenie, mialgie, pierderi n greutate, hipercalcemie, hipercalciurie. Patologic are loc calcifierea esuturilor moi i n special la nivel renal (nefrocalcinoza), cornee, aort, plmni, inim. Prin suprimarea administrrii de vitamin D, prin aplicarea unui regim srac n Ca i fosfat n lichide, se produce o mobilizare lent a Ca din esuturile moi i revenirea la normal a calcemiei. Atunci cnd nu este compromis grav, funcia renal se normalizeaz. 3.2.3. Vitaminele E (tocoferolii, vitaminele antisterilitii, vitaminele de reproducere) Numele de tocoferol provine de la funcia biologic de a favoriza fertilitatea (tokos natere; phesein a purta). Vitaminele E sunt un grup de vitamine tocoferoli formai dintr-un nucleu de croman substituit i o caten lateral ramificat fitil.
HO H3C
6 7

CH3
5 8 4 3 2 1

CH3 CH3 CH3 CH3 (CH2)3 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH CH3 - Tocoferol

CH3

Sunt patru tocoferoli importani: , , , - care se difereniaz ntre ei prin numrul de grupri metil din nucleul cromanic; proprietile vitaminice sunt proporionale cu numrul grupelor CH3, deci -tocoferolul va fi cel mai activ biologic avnd trei grupri metil, 5, 7, 8-trimetil tocol. Absorbia vitaminelor E din alimentaie are loc la nivelul intestinului subire, n aceleai condiii ca i celelalte vitamine liposolubile.

61

De la intestin, pe cale limfatic, tocoferolii trec n snge unde sunt vehiculai de lipoproteinele plasmatice, apoi sunt repartizai n toate organele, depozitele fcndu-se n esutul adipos. Intracelular, vitaminele E se acumuleaz n fosfolipidele membranare citoplasmatice i mitocondriale i n reticulul endoplasmatic. Concentraia vitaminelor E n aceste organite este n funcie de aportul vitaminic, de peroxidani, antioxidani, de seleniu alimentar i de aportul de aminoacizi cu sulf. n procesele metabolice, tocoferolii sunt transformai n compui chinonici, hidrochinonici care se elimin prin bil, 80%, iar restul prin urin, sub form conjugatp cu acidul glicuronic. Rol biochimic. Vitamina E nu are o funcie biologic specific pentru a explica numeroasele consecine care apar n carena de vitamin E la animalele de experien (este vitamina n cutarea unei boli). Aciunea antioxidant. Vitamina E este considerat cel mai eficace antioxidant liposolubil natural. Substanele cele mai sensibile la peroxidare sunt lipidele celulare i lipidele din membranele organitelor subcelulare, i dintre acestea n special, lipidele nesaturate. Sub aciunea oxigenului molecular, acizii polinesaturai formeaz peroxizi lipidici prin peroxidare, proces autocatalitic, care se desfoar dup un mecanism radicalic, prin reacii nlnuite:
Ini]iere: R-H (Cu, Fe, U.V.) R. ^ H . R-OO. R-OOH ^ R. R-OOH ^ A.

R. ^ O2 Propagare: ~ ntrerupere:

R-H ^ R-OO. AH ^R-OO.

A este un radical stabil (de exemplu, provenit din tocoferol), capabil s inhibe propagarea reaciilor radicalice n lan din peroxidarea lipidic.
.O
- Tocoferol H3C CH3 Radical tocoferil pu]in reactiv O CH3 CH3 R O H3C CH3 Tocoferil-chinon\ stabil\ CH3 C CH3 R

Aciunea antioxidant a vitaminei E are o importan mare pentru viaa celulei, ntruct mpreun cu vitamina C i ali antioxidani alimentari ar fi implicai n protejarea cilor respiratorii i mai ales a esutului pulmonar de aciunea nociv a aerului poluat (O3, N2O). Efectele nocive ale oxidanilor pot fi ilustrate prin schema urmtoare:

62

Acizii gra[i polinesatura]i din fosofolipidele m branare em _ Antioxidan]i Fe, Cu (vitam E) ina O2 Peroxizi lipidici

Degradarea acizilor gra[i din fosfolipidele m branare em

Distrugerea m branelor em

Eritrocit (fragilitate crescut\ [i hem oliz\)

Lizozom i (perm eabilitate crescut\)

Re ticul e ndoplas atic m (dezintegrarea structurilor necesare ac]iunii enzim elor care m etabolizeaz\ m edicam ente [i transport\ electronii)

Eliberarea enzim elor hidrolitice Inactivarea enzim elor Perturb\ri tisulare (distrofie)

Peroxidarea lipidelor se evideniaz chiar n prezena concentraiei fiziologice de vitamin E. Organismul dispune de alt sistem antioxidant reprezentat de o enzim cu seleniu, glutation peroxidaz, care catalizeaz reacia: 2 GSH + H2O2 G-S-S-G + 2 H2O Aceast reacie explic relaia dintre vitamina E, seleniu i aminoacizii cu sulf. Tocoferolii scad necesarul de seleniu (la animalele de experien) prevenind pierderea seleniului sau transformndu-l ntr-o form biologic activ (forma selenit din centrul activ al enzimei). Tocoferolii reduc i cantitatea de GSH-peroxidaz necesar descompunerii peroxizilor formai. Pe de alt parte seleniul scade necesarul de vitamin E prin asigurarea funciei normale a pancreasului i astfel a digestiei i absorbiei lipidelor, implicit a vitaminei E.

63

Vitamina E i seleniul au aciune sinergic n meninerea nivelului ridicat de CoQ (component al lanului respirator). Vitamina E are rol n hematopoez i stabilitatea eritrocitelor; prematurii i sugarii alimentai artificial, dezvolt anemie, prin deficit alimentar. Necesar depinde n principal de aportul de acizi grai polinesaturai din diet. Se gsete n plante, dar i n ficat, lapte, glbenu de ou. Tulburti de aport vitaminic Hipovitaminoza E Efectele carenei de vitamin E sau hipovitaminozei E se manifest gradat i progresiv n funcie de perioada de deficit vitaminic. Semnele deficienei de vitamin E la om se manifest paralel cu perturbrile absorbiei de grsimi i constau n: slbiciune muscular, fragilitate eritrocitar, fenomene care dispar prin administrarea vitaminei E. Independent de gradul de alterare a lipidelor, la animale, s-au evideniat tulburri ale aparatului genital i a capacitii de reproducere la ambele sexe. Nu sunt dovezi care s ateste c vitamina E, la om, este necesar pentru fertilitate. Totui, sunt unele date conform crora concentraia sanguin de tocoferoli crete progresiv n sarcin pn la 50-100% sau chiar mai mult n ultima lun fa de primul trimestru de sarcin. Aceasta constituie o condiie pentru evoluia i dezvoltarea ftului. Revenirea la valori normale se face n primele 2-5 luni de la natere i crete n lapte. La femeile cu avort habitual, concentraia tocoferolului n snge este de 2-4 ori mai sczut dect la femeile cu sarcin normal. Hipervitaminoza E Administrarea ndelungat i abuziv de vitamin E, la om, duce la involuia ovarelor, tulburri nervoase i dureri ale membrelor inferioare. Dozele de pn la 100 mg/zi nu sunt toxice. 3.2.4. Vitaminele K (Filochinona, vitamina coagulrii, vitamina antihemoragic, factor protrombinic) Grupul vitaminelor K sunt derivai de naftochinon care la C3 conin sau nu un radical variabil de atomi de carbon. Vitamina K1 (filochinona) are la C3 un lan lateral de fitil (20 atomi de carbon): O
8 7 6 5 4 1 2 3

CH3 R

CH3

CH3

CH2 CH C CH2 (CH2 CH2 CH CH2)3 H

Vitamina K2 (farnochinona) conine un radical difernesil (30 atomi de carbon):

CH3
2 26 Vitamina K3 (menadiona) n care radicalul R este H. Este sintetic i este solubil n ap spre deosebire de K1 i K2. Vitaminele din tractusul gastro-intestinal sunt de natur exogen (diet) i endogen sintetizate de flora intestinal; din acest motiv, organismul este permanent aprovizionat cu vitamin K. Absorbia vitaminelor K1 i K2 (naturale) se face mpreun cu lipidele, apoi pe cale limfatic trec n snge i de aici n ficat. Vitaminele K sintetice fiind solubile se absorb n absena srurilor biliare. Cea mai mare cantitate a vitaminelor K naturale se depoziteaz temporar n ficat; vitamina K3 nu se acumuleaz, excesul este eliminat pein glucurono- sau sulfoconjugare. Medadiona (K3) pentru a putea s-i exercite funciile metabolice este alchilat trecnd n vitamin K2. Rolul metabolic al vitaminei K Vitamina K este un component al sistemului microzomial de transport de electroni cuplat cu -carboxilarea post transcripional a restului glutamil din unele proteine din plasm, os (osteocalcina), rinichi, splin, inclusiv a proteinelor precursoare pentru factorii coagulrii: protrombina (factorul II), proconvertina (factorul VII), factorul Christmas (factorul IX), factorul Stuart (factorul X). Proteinele coagulrii sunt sintetizate n ficat sub form de precursori inactivi (zimogeni). Vitamina K este esenial pentru sinteza protrombinei normale i factorilor VII, IX, X. Pentru ca aceti factori s fie transformai n formele biologic active este necesar carboxilarea posttranscripional a resturilor glutamil din precursori la acid carboxi glutamic. Vitamina K prin structura 1,4 naftochinonic joac rol de transportor de hidrogen avnd rol de coenzim n procesul carboxilrii.

( CH CH C CH )

OH CH3 R ^2H - 2H OH

CH3 R

Carboxilarea restului de acid glutamic la acid -carboxil-glutamic este catalizat de vitamina K.

65

COO CH2 CH2

_ CO2 Vitam K ina

OOC

COO CH CH2

C CH NH O Glu Acid glutam ic

C CH NH O Gla Acid -carboxi-glutam ic

Resturile carboxil au o mare afinitate de chelatare a ionilor de Ca2+ care servesc la legarea fosfolipidelor cu protrombina, interaciune specific pentru activarea protrombinei la trombin (factorul activ al coagulrii).
O _ O _ Ca2^ O CH CH2 C CH NH O O C

Reaciile de carboxilare au loc n microzomii multor esuturi n prezena O2, CO2 i formei de hicrochinon a vitaminei K. Antivitaminele K, dicumarolul i warfarina (derivai cumarinici) inhib reacia de carboxilare a acidului glutamic i sunt folosii ca ageni anticoagulani atunci cnd exist primejdia coagulrii sngelui la nivelul vaselor sanguine (tromboze). Tulburri de aport vitaminic Carena de vitamin K se instaleaz cnd exist tulburri n absorbia de lipide (deficit de bil), afeciuni intestinale, alterarea florei intestinale, afeciuni hepatice, boli infecioase. Carena de vitamin K duce la scderea protrombinei, prelungirea timpului de coagulare i apariia de fenomene hemoragice spontane. n perioada imediat postnatal, nou nscuii sunt predispui la hemoragii deoarece se nasc fr rezerve de vitamin K, avnd intestinul steril. Menadiona administrat n concentraie mare poate determina hemoliz i deci poate agrava hiperbilirubinemia.

66

3.2.5. Acidul lipoic (acid tioctic) este un factor necesar unor sisteme enzimatice (piruvat dehidrogenaza, -cetoglutarat dehidrogenaza). Este derivat din acidul octanoic care prezint o punte disulfidic ntre C6 i C8.
H2C S CH2 C H (CH2)4 S S S COOH +H -H CH2 SH SH SH CH2 CH SH (CH2)4 COOH

( L

Se gsete n dou forme, oxidat i redus, constituind un sistem redox, participnd la reacii de oxidoreducere i transfer de grupri acil.

67

4. ENERGETICA BIOCHIMIC Celula vie este considerat o main care transform continuu energia coninut n structura moleculelor substanelor nutritive din mediu nconjurtor n energie chimic pe care apoi o folosete n diverse scopuri cum ar fi procesele de biosintez, contracia muscular, transportul prin membran, excitaie nervoas. Utilizarea substanelor nutritive de ctre celul se face prin transformri metabolice, transformri care au loc cu participarea unui numr mare de enzime. Degradarea enzimatic a substanelor nutritive, cum sunt polizaharidele, lipidele i proteinele, se petrece printr-un ir de reacii chimice care pot fi schematizate, n trei stadii principale: I. - n primul stadiu, macromoleculele substanelor nutritive sunt degradate pn la substana simpl de baz din care sunt constituite. Astfel, polizaharidele sunt degradate la hexoze i pentoze, lipidele n acizi grai i glicerol, iar proteinele la aminoacizii din care provin; II n al doilea stadiu, produii formai n primul stadiu sunt transformai ntr-un numr mic de produi intermediari, n principal ntr-un compus cu doi atomi de carbon, acetil-CoA; III n al treilea stadiu aceti compui sunt metabolizai pe o cale comun la CO2 i H2O.
Proteine I Polizaharide Pentoze Hexoze Lipide Macromolecule

Aminoacizi

Glucoza

Glicerol Acizi grasi

monomeri

Piruvat II Acetil-CoA Compus de degradare comun

III

Ciclul Krebs Produs final de metabolism

NH3

H2O

CO2

68

Biosinteza macromoleculelor de polizaharide, lipide i proteine specifice celulei se realizeaz de asemenea n trei stadii, plecnd de la moleculele de precursor din cel de al treilea stadiu care sunt convertii la moleculele de baz: aminoacizi, hexoze, acizi grai i glicerol. n final, compuii simpli rezultai sunt asamblai n macromolecule specifice organismului. Aceste dou ci metabolice sunt strns legate ntre ele din punct de vedere energetic, deoarece calea de degradare (catabolism) furnizeaz energia necesar cii de biosintez (anabolism). n calea catabolic, energia eliberat prin degradarea diverilor compui organici nutritivi este recuperat n bun parte sub form de ATP (n special n stadiul III, prin procesul de fosforilare oxidativ). Calea anabolic sau de biosintez necesit energie pe care o obine prin hidroliza legturii macroergice din ATP.
NH2 N N N N O OH H H O OH O

OH O ~P O OH

CH2 O P O ~P OH

OH HO

Molecula de ATP cedeaz energia sa prin transferarea restului fosfat unei molecule de acceptor specific care sub aceast form este capabil s ndeplineasc unele funcii specifice celulei: de exemplu biosinteza macromoleculelor (lucru chimic), transportul activ prin membran a unor ioni anorganici i substane nutritive (lucru osmotic) i contracia muscular (lucru mecanic). n timpul acestor procese ATP se desface n ADP i Pa. ADP este apoi refosforilat pe seama energiei produs n transferul de electroni nchiznd astfel ciclul energetic al celulei. Procesul de fosforilare oxidativ const n transportul electronilor de la diferii intermediari metabolici (aa numitele substrate respiratorii) pn la O2 i captarea energiei eliberat n acest proces sub forma unor legturi bogate n energie, n molecula de ATP. Reacia de fosforilare oxidativ poate fi reprezentat prin ecuaia:
AH2 + B + ADP + Pa A + BH2 + ATP + H2O

care reprezint suma a dou reacii ireversibile : (1) AH2 + B A + BH2 - reactii de oxido-reducere (2) ADP + Pa ATP + H2O - reactie de fosforilare

69

Att transportul de electroni ct i reacia de fosforilare sunt prezente i caracteristice celulelor aerobe, adic acele celule care utilizeaz drept ultim acceptor de electroni oxigenul molecular. Enzimele participante la acest proces sunt localizate n membrana intern a mitocondriei, au structur complex i sunt greu de izolat i studiat. Transportul de electroni este efectuat de trei clase principale de oxidoreductaze: dehidrogenaze piridinice, dehidrogenaze flavinice i citocromi. Dehidrogenazele piridinice au drept coenzim NAD+ i NADP+ (formele active ale vitaminei PP). Ele catalizeaz reacii de tipul:
Substrat redus + NAD+ (NADP+ ) Substrat oxidat + NADH+ + H (NADPH+ + H)

(vezi rolul metabolic al vitaminei PP, p. 61) Participarea celor dou coenzime piridinice la transferul de electroni este diferit. NAD+ particip n special la procesele de transport de electroni de la un substrat la oxigen (n cile de degradare, de eliberare de energie), n timp ce NADP+ particip la transportul de electroni n reacii reductive din procesele de sintez. Concentraia celular de NAD+ este mult mai mare dect a NADP+. Peste 60% din NAD+ se gsete n mitocondrie i restul n citoplasm, n timp ce aproape tot NADP+ se gsete n citoplasm, acolo unde au loc procesele de sintez. Dehidrogenazele flavinice conin drept grupare prostetic unul din cele dou flavin-nucleotide FMN i FAD, formele active ale vitaminei B2. Reaciile generale catalizate de flavin-enzime sunt:
Su bstrat redus + Enz.-FMN(En z.-FAD) Substrat oxidat + Enz.-FMNH2(Enz.-FADH2)

(vezi rolul metabolic al vitaminei B2, p. 57)

Citocromii sunt proteine transportoare de electroni care conin fier porfirinic. Se gsesc numai n celulele animale. Gruparea prostetic a citocromilor este hemul (asemntor hemului din hemoglobin). Unii citocromi sunt localizai n membrana intern a mitocondriei i particip la transferul electronilor de la diverse sisteme dehidrogenazice la oxigen. Ali citocromi (ex. cit.P450) se gsesc n microzomi i sunt specializai n reaciile de hidroxilare, implicate i n metabolismul medicamentelor (vezi structura cromoproteinelor porfirinice, p.26-28). Participarea citocromilor la transferul de electroni se realizeaz prin modificarea reversibil a valenei fierului: _ cit.Fe2+ -e _ + e cit.Fe3+

n mitocondriile animalelor superioare au fost identificai cinci citocromi (b, c1, c, a i a3) care particip la transferul de electroni. Complexul cit.a+a3 se mai numete i citocrom-oxidaza.

70

Ulterior au mai fost identificai i ali transportori de electroni, printre care ubichinona sau CoQ, compus asemntor structural cu vitamina K. Lanul transportatorilor de electroni poate fi prezentat ntr-o form simplificat astfel:
SH2 S H+ NAD+ Piridine NADH H+ FMNH2 Flavine FMN 2H+ 2 Fe3+ Citocromi 2 Fe2+ H2O 1/2O2 2H+

Substratele respiratorii provin n principal din ciclul Krebs, dar i din alte reacii metabolice. O serie de substrate, cum ar fi izocitratul, -cetoglutaratul, malatul, piruvatul, -hidroxi- butiratul, -hidroxi-acil CoA, prolina etc. cedeaz electronii NAD+-ului. Electronii provenii de la succinat, acil-CoA, -glicerol-fosfat sunt cedai CoQ prin intermediul unor flavoproteine (enzime flavinice).
Piruvat Succinat

Izocitrat a-cetoglutarat Malat -hidroxibutirat -hidroxiacil-CoA

FAD

FAD

NADH

FMN

CoQ FAD

cit.b FAD Acil-CoA

cit.c

cit.a+a3

O2

-glicerol-P

Concomitent cu trecerea electronilor prin lanul respirator are loc scderea energiei libere a sistemului. S-a stabilit c prin trecerea unei perechi de electroni de la NADH la oxigen se elibereaz 52,5 Kcal, iar pentru sinteza unei molecule de ATP se consum 7,3 Kcal, ceea ce nseamn c din energia eliberat pot fi sintetizate mai multe molecule de ATP. Experimental s-a dovedit c prin parcurgerea ntregului lan (NADH O2) se sintetizeaz 3 molecule de ATP. Au fost identificate cele trei locuri n care diferena de potenial ntre componenii lanului este mai mare de 0,2 V i scderea energiei libere de 9 Kcal suficient pentru sinteza a trei molecule de ATP (3 x 7,3 = 21,9 Kcal) ceea ce nseamn c 42% din energia eliberat a fost nmagazinat sub form de ATP. Diferena de energie servete la termoreglare.

71

-0,4 NADH -0,2 0 +0,2 +0,4 +0,6 +0,8 2e _ Enz.-FMN 2e _ ADP+Pa ATP CoQ cit.b 2e _ ADP+Pa ATP cit.c cit.a 2e _ ADP+Pa ATP O2 Direc]ia fluxului de electroni CO _ CN

Se nelege acum de ce prin oxidarea mitocondrial a substratelor care cedeaz electronii NAD-ului se sintetizeaz trei molecule de ATP, iar prin oxidarea substratelor care cedeaz electronii prin intermediul FAD-ului la CoQ (deci ocolete primul loc de fosforilare) se sintetizeaz numai dou molecule de ATP. Transportul de electroni i fosforilarea oxidativ poate fi inhibat de o serie de compui cum ar fi monoxidul de carbon, cianura, hidrogenul sulfurat, unele antibiotice (oligomicina), malatul etc. Inhalarea acidului cianhidric (HCN) sau ingerarea cianurii de K (KCN) cauzeaz o rapid i puternic inhibare a lanului respirator la etapa citocrom-oxidazei (cit.a+a3). Ionul CN- se fixeaz la Fe3+ din cit.a3 oprind respiraia mitocondrial i ca urmare celula moare rapid. Moartea prin cianur survine rapid prin asfixie la SNC. Dac intoxicaia cu CN- este diagnosticat rapid, se administreaz nitrii care oxideaz oxihemoglobina la Met-hemoglobin, reacie ce implic trecerea Fe2+ din hemoglobin n Fe3+ din methemoglobin. Methemoglobina concureaz cu cit.a+a3 (Fe3+) pentru ionul CN- formnd un complex MetHb-CN. De asemenea, administrarea de tiosulfat (Na2S2O3) produce inactivarea ionului cian la ion sulfocian, netoxic.

72

5. METABOLISMUL GLUCIDIC 5.1. Digestia i absorbia glucidelor Aproximativ 50% din caloriile preluate zilnic de organism sunt furnizate de glucide: amidon (160 g), zaharoz (120 g), lactoz (30 g) glucoz i fructoz libere (10 g) i urme de maltoz i trehaloz (dou molecule -glucoz unite prin legturi (11). Prin digestia glucidelor rezult trei monozaharide: glucoza, fructoza i galactoza.
CH2OH
6

H H HO OH
3 4

H
1

HO H H OH
3 4

CH2OH

H
1

HOH2C
5 4

O
3

CH2OH
2

H OH
2

H OH
2

H H HO OH OH H

OH

OH

-Glucoza

-Galactoza

-Fructoza

CH2OH H H HO OH H

CH2OH O OH HO H H OH H

OH

HOH2C

OH

H H OH

H H OH

H H HO CH2OH OH H

-Glucoza

-Galactoza

-Fructoza

Amidonul este format din amiloz (20%) i amilopectin (80%).

CH2OH O OH H H 1 OH O
4

CH2OH O OH H H OH O

CH2OH O OH H H OH O

CH2OH O OH H H OH

Structura amilozei

73

O H HO OH H O O CH2OH O OH H H 1 OH O
4

CH2OH

CH2OH O OH H H OH O

6 CH2

O OH H H OH O

Structura amilopectinei n amiloz, moleculele de -glucoz sunt unite prin legturi (1 4) glicozidice, formnd lanuri lungi, spiralate. Amilopectina are o structur ramificat, n care unitile de -glucoz sunt unite prin legturi (1 4) i (1 6) glicozidice. Digestia glucidelor ncepe n cavitatea bucal i este completat n duoden. Asupra amidonului pot aciona dou tipuri de enzime hidrolitice: -amilaza i oligozaharidazele (dextrinaze) n care sunt incluse i dizaharidazele. Amilaza salivar (n cavitatea bucal) i amilaza pancreatic (n intestinul subire) hidrolizeaz amidonul ncepnd de la periferia moleculei spre centru, scindnd numai legturile (1 4), cu excepia legturilor (1 6) i (1 4) din vecintatea ramificaiilor. Prin aciunea acestor amilaze, amiloza este transformat n maltoz i cantiti mici de maltotrioz, iar amilopectina n maltoz i oligozaharide mici, de aproximativ opt resturi de glucoz, cu una sau mai multe ramificaii (dextrine limit). Oligozaharidazele completeaz hidroliza oligozaharidelor i dizaharidelor. Aceste enzime, situate pe suprafaa celulelor epiteliale, ndeprteaz succesiv unitile glicozidice din captul nereductor (captul C4 liber). Legturile (1 6) din dextrine sunt scindate de amilo-1,6-glucozidaza. Dizaharidele provenite direct din alimente, precum i cele rezultate prin digestia amidonului sunt hidrolizate n intestinul subire sub aciunea dizaharidazelor. Aceste enzime au specificitate diferit n funcie de structura dizaharidului i de legtura glicozidic; -glucozidaza din intestinul subire este n exces i n consecin zaharoza este rapid hidrolizat, n timp ce -galactozidaza, care acioneaz asupra lactozei, este mai redus cantitativ. Deficitul de oligozaharidaze sau dizaharidaze, n mucoasa intestinal, determin trecerea glucidelor nedigerate n fecale.

74

Lactoz\ L actaz\

Intestin sub]ire

Lactoz\ Galactoz\ ^ Glucoz\ Lactoz\ Bacterii CO2 H2 Com pu[i Co2, C2 H2O

Intestin sub]ire

Vena port\

Galactoz\ ^ Glucoz\

}esut

Balonare, diaree, deshidratare a. Norm al b. Deficit de lactaz\

Prezena acestor compui osmotic activi determin scoaterea apei din esuturi i trecerea ei n intestinul gros, cauznd diaree. La acestea se adaug aciunea bacteriilor intestinale asupra glucidelor nedigerate rezultnd CO2 + H2 (gaze) i compui cu doi sau trei atomi de C ce irit mucoasa intestinal (acid lactic). Mucoasa intestinal poate deveni permeabil pentru dizaharide, care se vor elimina prin urin. Defecte ereditare de lactaz, zaharaz i dextrinaz au fost descrise la copiii cu intoleran la dizaharide. Un defect generalizat n degradarea dizaharidelor poate fi cauzat i de o varietate de boli intestinale, malnutriie sau de medicamente ce lezeaz mucoasa intestinului subire. O serie de polizaharide i ali polimeri coninui n diet sunt foarte puin sau deloc hidrolizai n intestin. Aceti compui sunt desemnai drept fibre, reprezentate de celuloz, hemiceluloz, lignin, pectine, gume i mucilagii. Sunt abundente n cereale, fin integral de gru, amidon de cartofi, vegetale (varz), unele fructe. Fibrele mresc peristaltismul intestinal reducnd timpul de stagnare a coninutului intestinal. Absorbia monozaharidelor se realizeaz prin sistemul port hepatic i implic dou mecanisme: transportul activ (contra gradientului de concentraie) i difuzia facilitat.

75

Sistemul de transport activ, dependent de Na + , este specific pentru absorbia D-glucozei i D-galactozei (piranoze cu aceiai configuraie la C2 ). 5.2. Metabolismul intermediar al glucidelor n organismele vii, metabolismul glucidelor se realizeaz prin mai multe ci:

Cile metabolice ale glucidelor

- Glicoliza oxidarea glucozei sau glicogenului pn la piruvat (prin calea Embden-Meyerhof) i lactat; - Glicogenogeneza sinteza glicogenului din glucoz;

76

- Glicogenoliza degradarea glicogenului, rezultnd glucoz; - Ciclul acidului citric (ciclul Krebs sau ciclul acizilor tricarboxilici) n care acetil-CoA (provenit din piruvat, acizi grai i aminoacizi) este oxidat la CO2 i H2 O; - untul hexozomonofosfat (calea oxidativ direct, calea oxidativ a fosfogluconatului sau ciclul pentozo-fosforic) este o cale alternativ pentru calea Embden-Meyerhof, avnd ca funcie principal sinteza unor intermediari cum ar fi NADPH i riboze; - Gluconeogeneza sinteza glucozei sau a glicogenului din compui neglucidici aminoacizii glucogenici, lactatul, glicerolul i propionatul. Cile implicate n gluconeogenez sunt n principal ciclul Krebs i glicoliza. Pe lng aceste ci principale n organism se desfoar i urmtoarele ci - Calea acizilor uronic prin care se sintetizeaz acidul glucuronic utilizat pentru sinteza polizaharidelor complexe (mucopolizaharide) i pentru reaciile de conjugare (detoxifiere); - Sinteza mucopolizaharidelor (metabolismul aminozaharurilor); - Metabolismul fructozei; - Metabolismul galactozei. Dup examinarea schemei generale de metabolizare a glucidelor se evideniaz faptul c G6P joac un rol central, fiind punct de intersecie pentru toate cile metabolice. 5.2.1. Glicoliza Glicoliza este degradarea anaerob a glucozei la acid lactic. Acest proces se poate petrece i n aerobioz, ns cantitatea de glucoz degradat n anaerobioz este mult mai mare. Caracteristic pentru calea glicolitic este generarea unei cantiti mici de energie (2 ATP) i faptul c NADH este reoxidat prin cuplarea reaciilor de oxidoreducere, spre deosebire de degradarea glucozei la CO2 i H2O cnd NADH este reoxidat n lanul respirator cu formarea de energie. Toate enzimele care catalizeaz reaciile acestui proces se gsesc n faza solubil a celulei, n citoplasm. Prin glicoliz este degradat glucoza alimentar, glucoza provenit din glicogen, precum i din celelalte hexoze, galactoza, fructoza i manoza. Procesul glicolitic se desfoar n dou faze. Prima faz este consumatoare de energie, iar faza a doua, n care au loc reacii de oxido-reducere, este faza generatoare de energie. Procesul cuprinde un ansamblu de 11 etape principale.
1. - Glucoza Hexokinaza(HK) Mg2+ ATP ADP CH2 O P OH H HO OH H H OH OH

1 ATP

Glucozo-6-fosfat (G6P)

77

Prima etap a glicolizei este catalizat de hexokinaz (HK) cu formarea G6P, pe seama energiei furnizat de ATP n prezena Mg++. HK este o enzim puin specific, ea fiind capabil s fosforileze toate hexozele ( i glucoze, fructoza, manoza, galactoza). Glucoza poate fi fosforilat i de glucokinaz (GK), enzim specific pentru glucoz, activ n celulele parenchimului hepatic. HK este o enzim a crei aciune poate fi inhibat alosteric de ctre produsul de reacie G6P.
Fosfohexoizom eraza (PHI) P O H2C O CH2OH H HO OH H OH H

2.

G6P

Fructozo-6-fosfat (F6P)

Numai anomerul - al G6P este activ pentru aceast reacie.

Fosfo-fructokinaza (FFK) Mg2+ ATP ADP P O H2C O CH2 O H HO OH H OH H P - 1 ATP

3.

F6P

Fructozo-1,6-difosfat (F1,6DP)

Fosfofructokinaza (FFK) - este exemplu de enzim inductibil a crei activitate joac un rol major n reglarea glicolizei. Reacia este ireversibil n condiii fiziologice.CH2 O P FFK- este inhibat de citrat i de ATP i este activat de AMP i F2,6-DP. C O
HO C H 4. H C OH H C OH CH2 O F1,6DP P Aldolaza CHO CH2 OH C O CH2 O P H C OH CH2 O P +

Glicerinaldehid-3-fosfat (GA 3P) (3%)

Dihidroxiaceton-fosfat (DHAP) (97%)

78

Au fost descrise cteva aldolaze, toate coninnd cte patru subuniti. Aldolaza A se gsete n cea mai mare parte dintre esuturi.
5. GA 3 P Trioz-P-izom eraza DHAP

GA3P este produsul activ care se transform mai departe. Cu aceast reacie de izomerizare se ncheie prima faz a glicolizei, faz consumatoare de energie (-2 ATP). 6. Prima reacie a celei de a doua faze este reacia de oxidare a GA3P la acidul 1,3-difosfogliceric (1,3-DPG), reacie catalizat de GA3PDH. n aceast reacie are loc un proces de fosforilare cu Pa care urmeaz unui proces de oxidare.
CHO H C OH CH2 O GA 3P P Gliceraldehid-3-Pdehidrogenaza (GA-3-PDH) Pa NAD^ O O~ P H C OH CH2 O P C

NADH^ ^ H

1,3-Difosfoglicerat (1,3-DPG)

Enzima poate lega i arsenitul care, n felul acesta, poate decupla oxidarea de fosforilare deoarece compusul rezultat cu arsen n loc de P nu este macroergic; nu se sintetizeaz ATP. 7. Energia nmagazinat la C1 a acidului 1,3-DPG este transferat pe ADP cu formarea ATP n reacia catalizat de fosfogliceratkinaz (PGK).
O O~ P H C OH CH2 O 1,3-DPG P C Fosfogliceratkinaz\ (PGK) Mg2^ ADP ATP O OH H C OH CH2 O P C

3-Fosfoglicerat (3-PG)

79

8. Reacia fosfogliceratmutazei.
O OH H C OH CH2 O 3-PG P C O Fosfogliceratm utaz\ (PGM) OH H C O P CH2 OH 2-fosfoglicerat (2-PG) C C O OH ; H C O~ P CH2 O P

2,3-fosfoglicerat (2,3-DPG)

Se pare c n aceast reacie intermediar este 2,3-DPG, sintetizat printr-o deviaie a cii principale. Acest produs se acumuleaz n eritrocite i intervine n reglarea afinitii hemoglobinei pentru oxigen. 9. Reacia enolazei

Fosfoenolpiruvatul are energie deoarece P esterific a grupare enolic. Enolaza este inhibat de NaF, proprietate utilizat pentru recoltarea sngelui n vederea dozrii glicemiei (se oprete degradarea glucozei). 10. Energia din PEP este nmagazinat n ATP prin reacia cu ADP catalizat de piruvatkinaz (PK). Reacia este ireversibil deoarece se petrece cu pierdere nsemnat de energie.

11. n condiii anaerobe, piruvatul este redus la lactat de ctre lactat-DH cu hidrogenii de la NADH.

80

COOH C O CH3 Piruvat

Lactat dehidrogenaza (LDH) NADH+H+ NAD+

COOH H C OH CH3 Lactat

Aceast ultim reacie asigur reoxidarea NADH i regenerarea NAD+ necesar reaciei GA3PDH. Deci n condiii fiziologice n celulele cu metabolism anaerob, aceste dou reacii sunt cuplate prin sistemul NAD+/NADH. n muchi, procesul glicolitic duce la lactat (n general n condiii de hipoxie) dar i n eritrocit unde, dei exist aport de O2, produsul final al procesului este tot acid lactic deoarece eritrocitul nu conine enzimele necesare oxidrii piruvatului. Eritrocitul este celula care i asigur energia necesar numai prin glicoliz. Acidul lactic din muchi servete pentru resinteza glucozei prin gluconeogenez dup ce el este transportat pe cale sanguin n ficat, esut capabil s resintetizeze glucoza. Dintre cele 11 reacii ale glicolizei, trei sunt ireversibile: reacia catalizat de (1) HK, (3) FFK i (10) PK. n celulele capabile de gluconeogenez, aceste reacii sunt catalizate de alte enzime (piruvatcarboxilaza, PEP-carboxikinaza, F-1,6-DP-aza i G-6-P-aza). Bilan energetic: n reaciile (1) i (3) se consum 2 molecule de ATP, iar n reaciile (7) i (10) din faza a doua a glicolizei se genereaz 4 molecule de ATP. Bilanul energetic al procesului va fi: 4-2=2 moli ATP, dac se degradeaz glucoza i 41=3 moli ATP dac se degradeaz glicogenul. 5.2.2. Degradarea aerob a glucozei la CO2 i H2O n celulele cu metabolism aerob piruvatul format din glucoz, pe calea Embden-Meyerhof, este oxidat la CO2 i H2O, cu eliberarea integral a energiei coninut n molecula de glucoz. Piruvatul este transferat n mitocondrie de un transportor special, implicnd un mecanism simport, prin care este cotransportat un proton. Pentru a intra n ciclul Krebs, piruvatul este decarboxilat oxidativ la acetilCoA, prin aciunea piruvat-DH (PDH), care asigur astfel legtura ntre calea EmbdenMeyerhof i ciclul Krebs.
_ COO C O + NAD+ + CoASH PDH CH3 O C ~S CH3 CoA + NADH+H+ + CO2

81

Complexul PDH este localizat n matricea mitocondrial i este format din trei enzime i cinci coenzime: TPP (vit.B1), acid lipoic; CoA(acid pantotenic), FAD (vit.B2) i NAD+ (vit.PP). Enzimele sunt: piruvat dehidrogenaza (E1), transacetilaza (E2) i dihidrolipoil dehidrogenaza (E3).
O CH3 C _ COO 1 OH E1-TPP 2 E1-TPP CH CH3 CO2

E2-L

SH O S C CH3 3 E2-L O SH SH 4

E2-L

S S E3-FADH2 5 E3-FAD NADH+H+ NAD+

CoASH

CoA-S-C-CH3

Acetil-CoA se formeaz prin decarboxilarea acidului piruvic provenit din glucoz, dar i prin degradarea acizilor grai sau unor aminoacizi. ntr-o cale alternativ, piruvatul este carboxilat la acid oxalacetic, necesar pentru iniierea ciclului Krebs, sub aciunea piruvat carboxilazei.
COOH C O CH3 Piruvat COOH Piruvat carboxilaza HCO3 , Biotina, Mg2+ ATP ADP+Pa _ C O CH2 COOH Oxalacetat

Ciclul acizilor tricarboxilici Cea mai mare parte a substratelor supuse oxidrii n procesul respiraiei celulare provine din ciclul acizilor tricarboxilici (ciclul Krebs), etap metabolic final,

82

comun, n care moleculele simple provenite de la toate compartimentele metabolice (glucidic, lipidic i protidic) sunt degradate la CO2 i ap. Din punct de vedere energetic, respiraia celular este un proces nou care a aprut n organismele superioare, odat cu dezvoltarea aerobiozei pe planet. Respiraia celular a nlocuit glicoliza ntlnit la organismele inferioare, dar care persist ca proces metabolic i la organismele superioare, alturi de respiraia celular. n esen, ciclul Krebs reprezint combinarea unei molecule de acetil-CoA cu acidul oxalacetic formnd un compus cu 6 atomi de C, acidul citric. Urmeaz o serie de reacii prin care cei doi atomi de C din restul acetil sunt eliminai ca CO 2, iar din cele patru reacii de oxidoreducere, opt atomi de H vor parcurge lanul transportorilor de H i vor genera o mare cantitate de energie (ATP). Acidul oxalacetic este regenerat, de aceea este necesar o mic cantitate din acest acid pentru a transforma o mare cantitate de acetil-CoA. Oxalacetatul poate fi considerat a fi catalizator. n acest ciclu sunt patru reacii de oxidoreducere n care se elibereaz cei opt atomi de H care sunt preluai de lanul transportor de electroni i transportai la O 2, generndu-se o cantitate de energie de 18-19 ori mai mare dect n glicoliz. Reaciile ciclului Krebs 1. Condensarea acetil-CoA cu acidul oxalacetic

Citrat-sintaza este capabil s catalizeze i reacia de condensare a monofluoracetil-CoA cu acidul oxalacetic, cu formarea monofluorcitratului, compus care este un inhibitor puternic al ciclului Krebs deoarece este inhibitor pentru enzima care catalizeaz urmtoarea reacie aconitaza. Citrat-sintaza este o enzim limitant; este inhibat de ATP i NADH. Reacia aconitazei sau aconitat hidraza catalizeaz trecerea reversibil a citratului n izocitrat prin intermediul acidului cisaconitic.

83

Dei izocitratul este ntr-o proporie mic, el este rapid oxidat mai departe n ciclul Krebs. 2. Reacia izocitrat dehidrogenazei (ICDH) catalizeaz dou procese procesul de dehidrogenare a izocitratului i de decarboxilare a acestuia cu formarea unui compus cu 5 atomi de carbon, acidul -cetoglutaric (-KG).
CH2 COOH CH COOH HO CH COOH Acid izocitric Izocitrat dehidrogenaza (ICDH) NAD+ CH2 COOH CH2 COOH CH2 C O CO2 COOH -cetoglutaric

CH COOH O C COOH NADH+H+ Acidul oxal-succinic

3. Reacia -cetoglutarat DH catalizeaz decarboxilarea oxidativ a acidului -cetoglutaric cu transformarea lui ntr-un compus cu 4 atomi de carbon succinilCoA.

Reacia necesit acelai echipament enzimatic ca i decarboxilarea acidului piruvic: CoASH, NAD, FAD, acidul lipoic, TPP. 4. Reacia succinil-tiokinazei catalizeaz transferul energiei din legtura tioesteric a succinil CoA pe un acceptor specific guanozin-difosfat (GDP).

84

Succinil CoA + Pa + GDP acid succinic + GTP + CoASH GPT este un compus cu energie mare ca i ATP. Deoarece ATP este compusul care nmagazineaz energia, are loc n continuare o reacie catalizat de o nucleoziddifosfat-kinaz care transfer energia din GTP pe ATP. GTP + ADP GDP + ATP Acest tip de fosforilare n afara lanului respirator se numete fosforilare la nivelul substratului. 5. Reacia succin-dehidrogenazei catalizeaz dehidrogenarea succinatului la fumarat. Enzima este dependent de FAD.
COOH CH2 CH2 COOH Acid succinic Succindehidrogenaza (Succ.DH) FAD FADH2 COOH CH CH COOH Acid fumaric

6. Reacia fumarazei catalizeaz adiionarea unei molecule de ap la acidul fumaric cu formarea acidului malic.
COOH CH CH COOH Acid fumaric H2O Fumaraza COOH CH2 CH OH COOH Acid L-malic

7. Reacia malat dehidrogenazei catalizeaz de dehidrogenare a L-malatului n oxalacetat nchiznd astfel ciclul. Malat dehidrogenaza este NAD dependent i se gsete sub dou forme: MDH citoplasmatic i MDH mitocondrial ceea ce face posibil reoxidarea NADH extramitocondrial n lanul respirator.
COOH CH2 CH OH COOH Acid m alic Malat dehidrogenaza MDH NAD^ NADH^ ^ H COOH CH2 C O COOH Acid oxalacetic

85

Bilanul energetic al metabolismului oxidativ al glucozei

I. Glucoz\ (Glicogen) Piruvat CO2 ^ H2O F1,6DP F1,6DP -2 ATP (-1 ATP)

II. Piruvat I.1. Glucoz\ (Glicogen) 2. 2 GA3P 2NAD+ 3. 4. 2NADH+H+

2.Ac.: 1,3-DPG(NAD) 2x3=6 ATP

2.Ac.: 1,3-DPG(NAD) 2PEP

2 Ac. 3PG 2 Piruvat Total

+2ATP +2 ATP + 8 ATP (+9 ATP)

II. Piruvat 1. 2 Piruvat 2NAD+ 2. 2 Izocitrat 2NAD+ 3. 2 -KG 2NAD+ 4. 2 Succinil-CoA 2 GDP 2 ATP 5. 2 Acid succinic 2 FAD 6. 2 Acid malic 2NAD+ 2 GTP 2 ADP 2NADH+H+ 2NADH+H+

CO2 ^ H2O 2 CH3CO-SCoA +6 ATP

2 Oxal-succininat

+6 ATP

2 Succinil-CoA 2NADH+H+ 2 Acid succinic

+6 ATP

+2 ATP

Acid fumaric 2 FADH2 2 Acid oxalacetic 2NADH+H+ Total

+4 ATP

+6 ATP

30 ATP

Total general: Glucoz\ Glicogen

CO 2 + H2O (calea malat) CO 2 + H2O

38 ATP 39 ATP

86

5.2.3. Metabolismul glicogenului Glicogenoliza Principala rezerv de glucide din organism este glicogenul depozitat n ficat (1/3) i muchi (2/3). Glicogenul este un polimer nalt, asemntor amilopectinei dar mai ramificat, realizat prin condensarea a numeroase molecule de -glucoz, unite n principal prin legturi -14 glicozidice i legturi -16 glicozidice, la punctele de ramificaie. Glicogenul din ficat va fi degradat pentru reechilibrarea glicemiei, n timp ce glicogenul din muchi, pentru obinerea de energie. Degradarea glicogenului este catalizat de enzime specifice: fosforilaza rupe fosforolitic (cu fosfat anorganic) legturile -(14) glicozidice din lanurile laterale ale moleculei de glicogen cu eliberarea G1P.
CH2 OH O O CH2 OH O O CH2 OH O O CH2 Fosfarilaza a O O n G1P + CH2 OH O O P

Enzima acioneaz pn cnd rmne un lan format numai din patru resturi de glucoz pn la ramificaie. n acest punct intervine enzima de deramifiere, care va transfera mai nti un trizaharid din captul rmas pe un alt lan, iar restul rmas legat prin legturi -(16) glicozidice este ndeprtat hidrolitic, sub form de glucoz liber. Procesul este reluat prin aciunea fosforilazei. Unii autori susin existena unei enzime cu funciie dubl: att de transferaz ct i de 1,6-glicozidaz. Aceast enzim se mai numete i enzim de deramifiere.

87

Prin aciunea celor dou enzime (fosforilaza i enzima de deramifiere) are loc degradarea aproape total a glicogenului. O mic poriune din molecul (minim patru resturi de glucoz) rmne nedegradat, fragment ce va servi drept primer n resinteza glicogenului. G1P sub aciunea fosfoglucomutazei (PGM) trece reversibil n G6P. n ficat i rinichi (nu i n muchi) exist o fosfataz specific G6P-aza, care va ndeprta acidul fosforic din G6P cu formarea glucozei libere. Acesta va strbate peretele celular trecnd n snge pentru reechilibrarea glucozei sanguine. n muchi, G6P intr direct n glicoliz pentru eliberarea de energie. Etapa limitant, reglatoare, a glicogenolizei este reacia fosforilazei, enzim controlat hormonal (adrenalin i glucagon), la nivelul ficatului. Fosforilaza se gsete sub dou forme: fosforilaza a - activ i fosforilaza b inactiv. Activarea enzimei se realizeaz prin intermediul AMPc, al doilea mesager care preia mesajul adus de hormon (primul mesager), c n snge a sczut glicemia.
Adrenalin\, Glucagon Adenilat ciclaz\ inactiv\

Adenilat ciclaza activ\

ATP Protein-kinaza inactiv\

AMPc Protein-kinaza activ\ 4 ATP Fosforilaza b inactiv\ 4 ADP

Fosforilaza a activ\ 4 H2O n G1P

4 Pa Glicogen + Pa

n acest proces nu se consum energie, deoarece fosforilarea glucozei se face cu fosfat anorganic. Glicogenogeneza Glicogenul se sintetizeaz din glucoz, dar i din fructoz, galactoz i manoz dup convertirea lor la glucoz. n sinteza glicogenului, glucoza este mai nti

88

fosforilat la G6P i apoi izomerizat la G1P. G1P reacioneaz cu UTP i sub aciunea UDP-pirofosforilazei se formeaz UDP-glucoz.

UDP-G va transfera restul glicozil, sub aciunea glicogen sintazei, pe un rest preformat de glicogen (minim patru resturi). Sub aciunea acestei enzime se realizeaz o legtur -(14) glicozidic la captul nereductor al primerului de glicogen. Pentru realizarea legturilor -(16) glicozidice, la ramificaii, se detaeaz 6-7 resturi de glucoz dintr-un lan i sunt ataate n alt regiune a lanului prin legtur 16. Enzima se numete enzim de ramificare. Cele dou lanuri vor fi alungite prin aciunea glicogen sintazei i aa mai departe nct molecula de glicogen care rezult are aspectul unei crengi din ce n ce mai ramificat.

89

Sinteza glicogenului este consumatoare de energie. Pentru ncorporarea unei molecule de glucoz n glicogen se consum dou legturi macroergice: una la formarea G6P (ATP) i alta la obinerea UDP-G (UTP) 2 ATP. Sinteza glicogenului este reglat de aceiai hormoni care i regleaz i degradarea (adrenalina i glucagonul). Prin intermediul protein kinazei intermediare, glicogen sintaza este inactivat prin fosforilare. Coordonarea celor dou procese implicate n metabolismul glicogenului este asigurat n primul rnd prin faptul c ambele sunt sensibile la concentraia celular de AMPc i n al doilea rnd, prin aceea c ambele ci sunt dependente de aceeai enzim, protein kinaza. Activitatea fosforilazei i inactivarea glicogen-sintazei se petrece n acelai timp, ceea ce nseamn c procesele nu se petrec n acelai timp.

Insulina favorizeaz glicogenogeneza prin activarea glicogen sintazei, enzima limitant a procesului. Absena unor enzime din metabolismul glicogenului, determinat genetic, conduce la maladii foarte grave, glicogenoze, caracterizate prin acumularea n esuturi de glicogen cu structur normal sau anormal. Aceste afeciuni se manifest n primele zile sau sptmni de via i n cele mai multe cazuri subiecii nu ating vrsta adult. 5.3. Reglarea glicemiei Glucoza din snge provine din: a. alimente dup digestie, glucoza, galactoza sau fructoza sunt absorbite i pe calea venei porte ajung la ficat; b. gluconeogenez din aminoacizi, propionat, glicerol i lactat; c. din glicogen prin glicogenoliz. n condiii fiziologice, concentraia glucozei n snge este de 4,5-5,5 mmol/L, adic 0,8-1 g/L. n meninerea nivelului normal al glicemiei intervin mecanisme homeostatice; ficatul i esuturile extrahepatice avnd un rol important. Nivelul glicemiei este un parametru care determin utilizarea glucozei de ctre esuturile extrahepatice.

90

Celulele esuturilor extrahepatice nu sunt liber-permeabile pentru glucoz, fapt ce constituie principalul factor care regleaz ptrunderea glucozei n aceste celule. n schimb membrana celulei hepatice este permeabil pentru glucoz. Intrarea glucozei n celulele extrahepatice este dependent de insulin care activeaz hexokinaza, responsabil de fosforilarea glucozei la G6P. Activitatea hexokinazei este inhibat de produsul de reacie, G6P, care, n acest fel, exercit un control feed-back asupra utilizrii glucozei de ctre esuturile extrahepatice.
Mem barna celulei m usculare, adipocit Glc Glc Glicogen HK (enzim \ _ G1P constitutiv\) G6P _ Glicoliz\

Stim ulare a activit\]ii HK ^ Insulina ^ Induc]ia de novo GK (enzim \ inductibil\)

Glc

Glc

HK (enzim \ constitutiv\)

Intrarea Membrana celulei nu este supus acestui control deoarece n ficat este glucozei n ficat activ glucokinaza hepatice care lucreaz la concentraii mai mari de glucoz (KM = 2.10-2M) dect hexokinaza (KM = 1.10-5M). Mai mult, enzima nu este inhibat de G6P i poate fi indus de insulin. La o concentraie normal a glucozei n snge (1 g), ficatul apare ca un productor de glucoz, dar atunci cnd glicemia crete, producia de glucoz n ficat scade i crete consumul de glucoz. Cnd glicemia atinge o valoare ridicat, intervine rinichiul care i exercit rolul reglator. Glucoza este continuu filtrat de ctre glomeruli i este reabsorbit la nivelul tubilor renali. Procesul de reabsorbie este similar cu absorbia glucozei la intestin, adic prin fosforilare. Procesul fiind enzimatic, consumator de ATP, capacitatea de reabsorbie este limitat de concentraia enzimei din celulele tubulare la 350 mg/min. Cnd concentraia glucozei n snge crete, filtratul glomerular conine mai mult glucoz dect poate fi absorbit i ca urmare, excesul trece n urin. Eliminarea glucozei prin urin, glicozuria, se produce atunci cnd glicemia atinge valoarea de 9,5-10 mmoli/L (1,7-1,8 g/L). Aceast valoare a glicemiei se numete prag

91

renal de eliminare pentru glucoz i este dependent att de capacitatea de reabsorbie ct i de viteza de filtrare glomerular. Glicozuria apare n diabetul zaharat. Sunt situaii cnd eliminarea glucozei prin urin se poate produce la valori mai mici ale glicemiei. n acest caz este vorba fie de unele defecte nnscute n mecanismul de reabsorbie, fie ca rezultat al unor afeciuni la nivelul tubilor renali glicozuria renal (diabet renal). O reducere a filtratului glomerular, n insuficiena cardiac sau n deshidratare, permite reabsorbia unei cantiti mai mari de glucoz. n aceste situaii, dei glicemia este mare, glicozuria este mic. Reglarea hormonal a glicemiei Ptrunderea glucozei n celule i eliberarea ei din glicogenul hepatic sunt supuse aciunii hormonilor care pot avea aciune hipoglicemiant (insulina) sau hiperglicemiant (adrenalina, glucagonul, hormonul corticotrop (ACTH), hormonul de cretere). Insulina este secretat de celulele din insulele Langerhans din pancreas, stimulat de valoarea glicemiei (hiperglicemie), de unii aminoacizi (leucina, arginina), ageni -adrenergici (adrenalina), factori intestinali (gastrina, pancreozimina, secretina), hormoni hiperglicemiani (ACTH, glucagon, hormoni steroizi, hormon de cretere). Aceti factori determin o cretere a secreiei de insulin att prin hiperglicemia pe care o produc ct i prin aciunea direct asupra celulelor din pancreas. - Prin creterea secreiei de insulin sau prin administrarea ei se produce o scdere a glicemiei, creterea glicogenului hepatic, scderea coeficientului respirator (numr moli CO2 format/ numr moli O2 consumat), scderea fosforului anorganic din snge, scderea K seric, scderea concentraiei aminoacizilor liberi din snge, creterea sintezei de NADPH. - La nivelul muchiului i esutului adipos, insulina favorizeaz ptrunderea glucozei prin membrana celular, stimulnd toate cile de utilizare a glucozei (sinteza glicogenului, untul HMP, deci creterea produciei de NADPH, glicoliza, creterea sintezei de acizi grai). - Ptrunderea crescut a glucozei n esutul adipos, favorizat de insulin, duce i la o producie accelerat de - glicerol-P ceea ce faciliteaz esterificarea acizilor grai i depunerea de trigliceride n celulele adipoase; ca urmare, nivelul acizilor grai liberi (AGL) din snge va scdea. Efectul este foarte important deoarece acumularea de AGL favorizeaz sinteza corpilor cetonici, stimularea gluconeogenezei i blocarea glicolizei. - Insulina produce scderea mobilizrii AGL i prin scderea concentraiei AMPc n celulele adipoase, compus care stimuleaz lipoliza. Scindarea legturii acid gras glicerol din poziia din trigliceride se realizeaz prin intervenia triglicerid-lipazei a crei activitate este controlat de hormoni. AMPc, prin intermediul proteinkinazei, convertete lipaza inactiv n forma

92

sa activ. La rndul ei, proteinkinaza activ scindeaz primul rest de acid gras i posibil i pe al doilea.
Glucoz\ GK G6P _ F6P F1,6DP-aza _ _ PEP PEP-carboxi kinaza Oxalacetat Piruvat carboxilaza Piruvat F1,6DP Glucoz\ G6P-aza G6P +

F6P FFK F1,6DP

+ +

INSULINA

PEP PK Piruvat

Insulina poate interveni la nivelul esutului adipos i prin aciunea direct asupra unor enzime, printre care activarea hexokinazei care catalizeaz fosforilarea glucozei. - n ficat, i exercit aciunea prin inducerea sintezei de enzime cu rol n degradarea glucidelor (GK, FFK, PK) i represia simultan a enzimelor cu rol n gluconeogenez (piruvat-carboxilaza, PEP-carboxikinaza, F1,6DP-aza i G6P-aza). Hormonul de cretere secretat de hipofiza anterioar are aciune antagonist insulinei. Secreia acestui hormon este stimulat de hipoglicemie. Mecanismul su de aciune const n scderea utilizrii periferice a glucozei i stimularea gluconeogenezei. Hormonii glucocorticoizi sunt secretai n urma stimulrii cu ACTH, a crui secreie este declanat de hipoglicemie. Adrenalina secretat de medulosuprarenal acioneaz prin activarea glicogenolizei n ficat i muchi. Glucagonul, produs de celulele din pancreas, are aciune asemntoare cu a adrenalinei, la nivelul ficatului. Adrenalina i glucagonul acioneaz prin intermediul sistemului adenilatciclaz AMPc asupra fosforilazei.

93

5.4. Tulburrile metabolismului glucidic Orice dezechilibru n mecanismele de reglare a metabolismului glucidic poate avea drept consecin instalarea unei hipo- sau hiperglicemii. Scderea glucozei sanguine sub 0,70 g/L indic o hipoglicemie care poate fi cauzat de: a) foame, inaniie; b)perturbarea secreiei hormonilor implicai n metabolismul glucozei; - secreie crescut de insulin (hiperinsulinemism) care duce la un consum exagerat de glucoz la nivel celular; - secreie sczut de adrenalin i glucagon, n hipopituitarism (hipofiz); - defecte enzimatice G6P-az, fosforilaza hepatic, piruvat-carboxilaz, PEP-carboxikinaz, F1,6DP-az; - boli hepatice severe; - administrarea unor medicamente propranolol, salicilai; - consum de alcool. Creterea glicemiei peste 1,10 g/L este un indicator al unei stri de hiperglicemie. Exist o multitudine de sindroame hiperglicemice, dintre care importan deosebit prezint diabetul zaharat, definit ca o maladie cauzat de lipsa total sau relativ de insulin i care este caracterizat prin hiperglicemie, frecvent nsoit de glicozurie. Diabetul zaharat, considerat prin tradiie o maladie a metabolismului glucidic, implic de fapt i tulburri ale metabolismului lipidic i proteic. Exist dou tipuri majore de diabet: I. Diabetul insulino-dependent (tip I), denumit i diabet juvenil. Este cauzat de incapacitatea organismului de a produce insulin din cauza lezrii celulelor din pancreas. Se manifest de timpuriu, nainte de 40 de ani, cu simptome mai severe; II. Diabetul insulino-independent (tip II), diabetul adultului cauzat de deficitul sau defecte ale receptorilor pentru insulin. Se manifest dup vrsta de 40 de ani, pacienii fiind de obicei hiperponderali i avnd n familie ascendeni diabetici. Modificrile metabolice n diabetul insulino-dependent Deoarece producia de insulin este perturbat, nivelul insulinei este foarte sczut comparativ cu al glucagonului, indiferent de nivelul glucozei din snge. Modificrile sunt foarte asemntoare cu cele observate n inaniie, n ciuda abundenei compuilor nutritivi.Acestea sunt: 1. Captarea glucozei de ctre esuturi este perturbat dei ficatul elibereaz glucoz; 2. Glicoliza este diminuat prin scderea activitii enzimelor cheie hexokinaz, fosfofructo-kinaz i piruvat-kinaz dependente de insulin; 3. Depozitele de glicogen sunt sczute din cauza inactivrii glicogen sintazei n deficit de insulin. n mod fiziologic, raportul glucagon/insulin este mai important dect nivelele fiecrui hormon n parte, deoarece metabolismul glicogenului este

94

puternic influenat de hormonul predominant. Cnd predomin insulina (post prandial) este favorizat depunerea glicogenului, iar cnd glucagonul este predominant (cnd glucoza scade n snge) este favorizat mobilizarea glicogenului din depozite. 4. Gluconeogeneza din aminoacizi este stimulat prin activitatea crescut a enzimelor specifice (piruvat-carboxilaza, PEP-carboxi-kinaza, F1,6DP-aza, F6P-aza induse de glucagon) rezultnd eliminare crescut de uree; 5. Hidroliza trigliceridelor este stimulat (diabet slab); 6. Degradarea acizilor grai prin -oxidare este activat; 7. Sinteza acizilor grai i a trigliceridelor din glucoz pe calea acetil CoA este reprimat (la animalele sntoase 1/3 din glucidele ingerate sunt transformate n acizi grai i trigliceride i depozitate n esutul adipos); 8. La nivel hepatic din excesul de acetil CoA se sintetizeaz n exces corpi cetonici (cetonemie cetonurie acidoz prin scderea capacitii de tamponare); 9. Proteinele organismului sunt degradate i aminoacizii sunt utilizai drept combustibil; 10. Excesul de glucoz glicozileaz hemoglobina i posibil i alte proteine eritrocitare. Manifestrile clinice i paraclinice n diabetul netratat includ: 1. hiperglicemie; 2. glicozurie; 3. creterea acizilor grai liberi; 4. deshidratare i dereglarea balanei electrolitice (poliurie i polidipsie); 5. acidoz prin creterea nivelelor corpilor cetonici. Acetoacetatul, hidroxibutiratul sunt acizi ce conduc la modificarea echilibrului acido-bazic, cu scderea pH-ului sanguin. Aceasta conduce la com i deces, dac nu este corectat (vezi metabolismul corpilor cetonici, p. 124). 6. neuropatii, datorit acumulrii de sorbitol n celulele Schwann ce duce la lezarea celulelor sistemului nervos; 7. retinopatii i orbire (cataract) acumulare de sorbitol n cristalin; 8. defecte renale. Pentru diagnostic se practic proba de toleran la glucoz sau proba hiperglicemiei provocate: - la subiectul sntos revenirea la valoarea normal a glucozei n snge se realizeaz n aproximativ 2 ore i nu este nsoit de glicozurie; - la subiectul diabetic, revenirea la valoare iniial se realizeaz n 5-7 ore i este nsoit de glicozurie.

95

6. METABOLISMUL LIPIDIC 6.1. Digestia i absorbia lipidelor Lipidele reprezint un grup eterogen de molecule organice insolubile n ap, care pot fi separate prin extracie cu solveni organici. Lipidele sunt alctuite din urmtoarele clase de compui: acizi grai liberi (neesterificai); triacilgliceroli (trigliceride); fosfolipide; sfingolipide; glicolipide; steroizi. Funciile pe care lipidele le ndeplinesc n organism sunt urmtoarele: - reprezint sursa major de energie;

96

- procur componentele necesare formarii barierelor hidrofobe ce separ coninutul apos al celulelor i structurilor celulare; -prezint activitate reglatorie sau coenzimatic (hormoni steroizi, vitamine). Un adult consuma ntre 60-150 g de lipide zilnic din care 90% sunt trigliceride, restul fiind colesterol liber, colesterol esterificat, fosfolipide i acizi grai liberi. Digestia lipidelor este un proces care consta n hidroliza (n prezena unor enzime specifice fiecrei clase de lipide) i emulsionarea lor adic meninerea n stare solubilizat a unor componente hidrofobe ntr-un mediu apos (n prezena bilei i a srurilor biliare). Hidroliza este realizat de enzime specifice. Astfel, lipazele acioneaz asupra trigliceridelor, fosfolipazele (PL) asupra fosfatidelor, colesterolesteraza asupra esterilor de colesterol. De exemplu:

Hidroliza lecitinei (fosfolipid) sub aciunea fosfolipazelor specifice

b. Emulsionarea nseamn solubilizarea componentelor hidrofobe.

Lipidele sunt prezente n mediul apos sub forma unor picturi i hidroliza enzimatic se petrece la interfaa picturii lipid-ap. Agenii emulsionani interacioneaz deopotriv cu aceste picturi i cu apa, aciune ce are ca urmare ruperea picturilor n altele mai mici, stabilizarea acestora din urma i mpiedicarea reunirii lor. Ca urmare are loc o mrire a suprafeei picturii astfel ca enzimele s poat aciona ct mai eficient. Emulsionarea este realizat prin dou mecanisme: folosirea proprietilor srurilor biliare care au rol detergent i amestecarea mecanic dat de peristaltism. Digestia lipidelor ncepe n stomac i este catalizat de o lipaz (care se crede c este de origine lingual) i de o lipaz gastric, care hidrolizeaz n special trigliceridele ce conin acizi grai cu caten scurt i medie (prezente n special n lapte). Viteza cu care are loc hidroliza este excesiv de mic deoarece lipidele sunt

97

neemulsionate i enzimele pot hidroliza doar trigliceridele situate la interfaa. De aceea se poate spune c lipidele trec n intestin aproape intacte. Digestia masiv a lipidelor are loc n intestin unde trigliceridele, esterii de colesterol i fosfolipidele sunt degradate la produi primari. Trigliceridele avnd molecule mari nu pot trece prin peretele celulelor mucoasei intestinale. De aceea asupra lor acioneaz lipaza pancreatic care hidrolizeaz preferenial acizii grai din poziia 1 i 3 rezultnd n principal 2monoacilglicerol i acizi grai liberi. Hidroliza esterilor de colesterol este realizat de colesterolaza pancreatic cnd se produc colesterol liber i acizi grai liberi. Hidroliza fosfolipidelor este realizat de fosfolipaza A2 (prezent n concentraie mare n sucul pancreatic), enzim activat n intestin de tripsin. Fosfolipaza A2 ndeprteaz acidul gras din poziia 2 rezultnd lysofosfolipid i bineneles acidul gras. Acidul gras rmas n poziia 1 poate fi ndeprtat de ctre lysofosfolipase obinndu-se n final glicerilfosforilcolina i acid gras liber. Absorbia lipidelor Acizii grai liberi, colesterolul liber i 2-monoacilglicerolul sunt produii primari de degradare in jejun. Acetia mpreun cu srurile biliare formeaz micelii de lipide amfipatice care sunt orientate cu poriunea hidrofob n interior i cu poriunea hidrofil spre exterior, fiind astfel solubile n mediul apos din lumenul intestinal. Miceliile se apropie de marginea n perie a celulelor mucoasei intestinale (care constituie locul primar de absorbie a lipidelor) i sunt absorbite. n enterocite aceti produi sunt supui unui proces invers, de reconstituire a produilor iniiali i anume trigliceride, colesterol esterificat, fosfatide, care mpreun cu cantiti mici de proteine formeaz particule lipoproteice denumite chilomicroni. Chilomicronii sunt secretai de enterocite i prin sistemul limfatic ajung n circulaia sanguin; reprezint forma de distribuire a lipidelor exogene. Resinteza trigliceridelor, a esterilor colesterolului i a fosfolipidelor se realizeaz n dou trepte, activarea acizilor grai (despre care se va vorbi la metabolismul acizilor grai) realizat de tiokinaze urmat de esterificarea realizat de aciltransferaze specifice.

98

Trebuie notat c acizii grai cu lanuri mici i medii parcurg un traseu diferit de cel al celorlalte lipide. Astfel ei sunt absorbii direct de mucoasa intestinal (nu necesit formarea miceliilor pentru absorbie), i sunt distribuii prin sistemul portal hepatic (nu prin cel limfatic). Acest considerent trebuie avut n vedere n dieta persoanelor care prezint malabsorbie pentru alte tipuri de lipide. 6.2. Metabolismul acizilor grai Acizii grai exist n organism n form liber (neesterificat) sau sub form de esteri n molecule complexe cum sunt trigliceridele. Acizii grai au un numr par de atomi de carbon, saturai sau nesaturai, cu 4-24 atomi de carbon. Acizii grai liberi pot fi oxidai n multe esuturi (ficat, muchi) pentru a furniza energie. Trigliceridele reprezint forma de stocare a rezervelor energetice ale organismului i de aceea funcia lor principal este aceea energogen. Aceste rezerve se formeaz pe baza excesului de glucide care este convertit n acizi grai, ce sunt ncorporai n trigliceride i depozitai n esutul adipos.

99

6.2.1. Biosinteza acizilor grai (acidul palmitic). Acizii grai din organism provin din urmtoarele procese: sinteza de novo a acidului palmitic; elongarea acidului palmitic nou sintetizat sau a unor acizi grai endogeni; biosinteza acizilor grai nesaturai. Acizii grai ncorporai n trigliceride sunt sintetizai din acetil-CoA format din glucoz. Biosinteza acizilor grai este un proces de ncorporare a unitii acetil din malonil-CoA ntr-un lan crescnd de acid gras, utiliznd ATP i NADPH. Pentru a putea ajunge n citosol acetil-CoA trebuie s traverseze membrana mitocondrial. Poriunea coenzima A din acetil-CoA nu poate traversa membrana mitocondrial ci doar poriunea acetil este transferat (sub forma de citrat) n citosol. Aici din citrat este refcut acetil-CoA care va pune la dispoziie gruparea acetil pentru sinteza acizilor grai superiori.

Acid gras sintaza: a, b subuniti structurale; 1, 2 subuniti funcionale Sinteza acestora are loc n prezena unui complex multienzimatic denumit acid-gras sintetaz care este un dimer. Fiecare monomer prezint 7 proteine care catalizeaz fiecare cte o etap (reacie) n procesul de sintez i un domeniu denumit ACP (acyl carrier protein) care are rol n transportul unitii acil. Poriunea ACP a

100

monomerului cuprinde fosfopanteteina (una din formele coenzimatice ale acidului pantotenic) de a crei grupare SH se fixeaz ca tioesteri acili intermediari. La celalalt capt monomerul conine o grupare SH furnizat de un rest cisteinil din cetoacilsintetaza. Complexul enzimatic este alctuit din cei doi monomeri structurali (a i b) aezai fa n fa aa fel nct gruparea ACP-SH a unui monomer s conlucreze cu gruparea Cis-SH a celuilalt, formnd dou subuniti funcionale (1 i 2), ntruct se sintetizeaz concomitent dou molecule de acid palmitic. Acizii cu caten mai lung de 16 atomi de carbon se sintetizeaz din acid palmitic printr-un proces de elongare (ataarea fragmentelor de doi atomi de carbon, provenii de la malonil-CoA). Acizii grai nesaturai sunt sintetizai prin introducerea n molecula acidului gras saturat corespunztor a dublelor legturi prin intervenia unor enzime specifice, numite desaturaze. n organism poate fi sintetizat pe aceast cale numai acidul oleic (cu o singur dubl legtur), din acidul stearic (18 atomi de C). Organismul are nevoie i de ali acizi grai nesaturai, cu dou, trei i patru legturi. Acetia nu pot fi sintetizai din acidul gras saturat corespunztor deoarece lipsesc desaturazele respective. Din acest motiv, grupul acizilor grai nesaturai cu dou, trei i patru duble legturi, cunoscui drept acizi grai eseniali; trebuie adui prin aport exogen.

Totui, dac n organism se introduce acidul linoleic se poate sintetiza acidul arahidonic prin combinarea procesului de elongare cu procesul de desaturare. 6.2.2. Degradarea acizilor grai acizii grai eliberai prin hidroliza trigliceridelor n esutul adipos trec n plasm unde se fixeaz pe albumine, sunt transportate la esuturile capabile s-i oxideze, ficat, rinichi, inim, muchi, plmn, creier, esut adipos (majoritatea esuturilor au capacitatea de a oxida lanul lung de acid gras). Catabolismul acizilor grai se desfoar n trei etape:

101

Activarea acizilor grai are loc n microzomi sau pe membrana extern a mitocondriei i este catalizat de enzime specifice tiokinaze.

Transferul acil-CoA n mitocondrie se realizeaz prin transferul gruprii

acil pe carnitin n ficat i muchi. Acil-CoA cu lan lung de atomi de carbon reacioneaz cu carnitina, avnd loc transferul gruprii acil pe gruparea OH a carnitinei, sub activarea carnitil-acil-transferazei I prezent n membrana extern a mitocondriei.

Complexul acil-carnitin este transferat n mitocondrie prin intervenia unei translocaze. n mitocondrie, restul acil este trecut pe o CoA din mitocondrie cu eliminarea carnitinei care, transferat n exterior de aceiai translocaz, va participa la transferul altui rest acil. n mitocondrie, acil-CoA particip la procesul de -oxidare, un ansamblu de patru reacii prin care se ndeprteaz fragmente de doi atomi de carbon sub form de acetil-CoA. 1. Dehidrogenarea const n ndeprtarea a doi atomi de hidrogen de la C i C, sub aciunea acil-CoA-DH, rezultnd o acil-CoA nesaturat; cei doi hidrogeni sunt preluai de FAD i cedai lanului respirator cu generarea final a 2 ATP.
-oxidarea

O R CH2 CH2 C ~S FAD Acil-CoA Acil-CoA dehidrogenaza H R C

3

102

CoA

FADH2 O C ~S CoA

2 ATP

H 2-trans-enoil-CoA

2. Hidratarea. n reacia a doua are loc adiia unei molecule de ap la dubla legtur, adiie mediat de enoil-CoAhidrataza (crotonaza), cu formarea -hidroxi-acilCoA.

3. Dehidrogenarea la C sub aciunea -hidroxi-acil-CoA-DH pentru a forma -ceto-acil-CoA. n acest caz acceptorul de H este NAD+.
-hidroxiacil-CoA dehidrogenaza NAD+ NADH+H+ O R CO CH2 C ~S CoA -cetoacil-CoA 3 ATP

4. Scindarea tiolitic este realizat de -cetotiolaz cu participarea altei molecule de CoA-SH. Ca rezultat, din lanul lung se desprinde un fragment de doi atomi de carbon sub form de acetil-CoA, iar restul de acid gras rmas este deja

103

activat (acil-CoA cu doi atomi de carbon mai puin) care poate participa la un nou proces de -oxidare.
Acil-CoA: aciltransferaza (tiolaza) CoA CH3 O C ~S CoA

O C ~S Acil-CoA

CoA

(n-2) atomi de carbon

Procesul continu pn tot lanul hidrocarbonat al acidului gras este fragmentat n molecule de acetil-CoA. Acetil-CoA format este degradat la CO2 i H2O n ciclul Krebs. Prin degradarea acizilor grai se formeaz o mare cantitate de energie. Considernd acidul palmitic, cu 16 atomi de carbon, pentru degradarea sunt necesare apte -oxidri, cu eliberarea a 7 x 5 = 35 moli ATP. Din cei 16 atomi de carbon ai acidului palmitic rezult 8 moli de acetilCoA, care degradate n ciclul Krebs, vor genera 8 x 12 = 96 moli de ATP. total 35 + 96 = 131 moli de ATP. din care se scade un mol ATP consumat la activare (sau dou legturi macroergice de ATP) ceea ce nseamn c prin degradarea acidului palmitic la CO2 i H2O se formeaz 130 moli ATP sau 129 legturi macroergice=656 KJ. 6.3. Metabolismul trigliceridelor Trigliceridele sunt esteri ai acizilor grai cu glicerina. Ele reprezint forma de depozitare a excesului energetic al organismului. Energia potenial a trigliceridelor rezid n catenele bogate n hidrogen ale resturilor acil (R-CO-). I. Sinteza trigliceridelor Pentru sinteza trigliceridelor organismul utilizeaz glicerolul i acizii grai superiori, care sunt mai nti activai la acil-CoA. Biosintaza trigliceridelor (TG) are loc prin dou mecanisme: Calea monogliceridelor, activ n celula intestinal: Funcioneaz n enterocit i reprezint o cale de resintez a trigliceridelor din produii de digestie, conform reaciei:

104

Aceste trigliceride mpreun cu colesterolul liber i esterificat, fosfolipide i proteine sunt ncorporate n particule lipoproteice denumite chilomicroni care trec n circulaie prin sistemul limfatic. Calea glicerol fosfatului, activa in ficat si alte tesuturi, capabile de sinteza:

Cu toate c majoritatea esuturilor sintetizeaz trigliceride, cele sintetizate n ficat i n esutul adipos au mare importan n balana energetic a organismului. Acizii grai necesari sintezei trigliceridelor provin fie din sinteza de novo din acetil-CoA (rezultat n urma oxidrii glucozei), fie din acizii grai liberi circulani. Trebuie notat c ficatul nu este un organ de depozitare a trigliceridelor aa cum este esutul adipos. Trigliceridele sintetizate n ficat sunt exportate la esuturile extrahepatice sub forma de lipoproteine de densitate foarte mic (VLDL). Ajunse acolo trigliceride cuprinse n VLDL sunt hidrolizate (sub aciunea lipoprotein lipazei) i acizii grai sunt reinui. Acetia din urma sunt rencorporai n trigliceride i depozitai (n special n esutul adipos). esutul adipos reprezint locul de stocare a excesului caloric sub form de lipide.

105

Glicerol-fosfatul necesar sintezei provine din dihidroxiaceton-fosfatul provenit din glucoz i din glicerolul eliberat prin hidroliza trigliceridelor. Acest fapt evideniaz dependena sintezei trigliceridelor de nivelele glicemiei i indirect al insulinemiei. II. Degradarea trigliceridelor Degradarea tisular a trigliceridelor are loc prin hidroliz cnd se pun n libertate acizi grai i glicerol sub aciunea unei lipaze hormon-sensibile, conform schemei:

Glicerolul rezultat difuzeaz n plasm i constituie un indicator al vitezei de hidroliz a trigliceridelor. Acizii grai rezultai sunt utilizai n principal ca surs de energie. Trebuie notat faptul c n organism exist dou mari fluxuri plasmatice de trigliceride: - circulaia trigliceridelor exogene de la intestin n restul organismului sub form de chilomicroni; - circulaia trigliceridelor endogene de la ficat spre restul organismului sub form de VLDL. 6.4. Metabolismul glicerolului. Sinteza fosfolipidelor Glicerolul provine din hidroliza trigliceridelor fiind un produs al metabolismului esutului adipos. El poate fi utilizat doar de esuturile ce posed glicerol-kinaza care l poate fosforila i reintroduce n fluxul metabolic. De aceea el difuzeaz din esutul adipos care nu conine aceast enzim i pe cale plasmatic ajunge n ficat i rinichi (esuturi ce posed glicerol-kinaz) unde este fosforilat la glicerol-3-fosfat. Glicerolul este un punct de plecare spre sinteza de trigliceride i/sau fosfogliceride.

106

CH2

OH

CH OH CH2 OH Glicerol

Glicerol kinaza ATP ADP

CH2

OH

CH OH CH2 O P Glicerol-3-fosfat

Glicerol-3-fosfat aciltransferaza Acil-CoA CoA

CH2

O CO

R1

CH OH CH2 O P 1-Acilglicerol-3-fosfat Acil-CoA 1 Acil glicerol-3-fosfat aciltransferaza CoA CH2 O CO R1 R2

Difosfatidil glicerol (cardiolipina) CH2 O CO R1 R2 P inozitol CH2

CH2

O CO

R1 R2 P Citidina

PPa

CTP

CH O CO CH2 O P CH O CO CH2 O CO

CH O CO

CDP-Diacilglicerol

Fosfatidil-inozitol

O CO

R1 R2

CH O CO

CMP

+ CH2 O P O CH2 CH2 N(CH3)3 Lecitina (Fosfatidil-colina) CH2 O CO R1 R2 R3

CH2 O P 1,2 Diacil glicerol fosfat (fosfatidat) H2O Fosfatidat CDP-colina fosfohidrolaza Pi CH2 O CO R1 CH O CO CH2 OH 1,2 Diacilglicerol R2

CH O CO CH2 O CO Trigliceride

Aciltransferaza R3-COOH

Glicerofosfolipidele reprezint o clasa de lipide foarte importante ele fiind componente principale ale membranelor biologice. Cea mai important caracteristic a lor este caracterul amfipatic. Aceasta nseamn c fosfolipidele prezint o poriune (un cap) hidrofil, care conine gruparea fosfat cu diferii substitueni ca serina, etanolamina, colina i o poriune (o coad) hidrofob alctuit din lanurile a doi acizi grai. Aceast configuraie este ideal deoarece partea hidrofob le permite asocierea cu ali constitueni ai membranei celulare cum ar fi proteine, colesterol, glicolipide, n timp ce parte hidrofil permite asocierea cu moleculele de ap asigurndu-se solubilizarea lor. 6.5. Corpii cetonici Prin corpi cetonici se neleg urmtorii trei compui aceto-acetatul, 3hidroxibutiratul i acetona:

107

Sinteza acetoacetatului (cetogeneza) are loc n mitocondriile hepatice din acetil-CoA rezultat din -oxidarea acizilor grai. Corpii cetonici reprezint o important surs de energie pentru esuturile extrahepatice deoarece: - sunt solubili deci nu necesit un sistem de transport (ncorporare n lipoproteine, cuplare cu albumina); - sunt sintetizai n ficat atunci cnd cantitatea de acetil-CoA prezent depete posibilitile ficatului de a o metaboliza, pe alte ci; - pot fi utilizai ca surs de energie n esuturi extrahepatice (muchi scheletic i cardiac, cortex renal, creier). Dei ficatul produce n mod constant corpi cetonici, cantiti semnificative apar n special n perioadele de inaniie ndelungat. Ficatul ns nu poate reconverti aceto-acetatul la acetoacetil-CoA deci nu poate folosi acest compus drept surs de energie. esuturile extrahepatice pot ns obine energie prin conversia corpilor cetonici la acetil-CoA via acetoacetil-CoA. Cnd rata formrii corpilor cetonici depete rata metabolizrii lor, nivelele acestora cresc n snge (cetonemia) i n urin (cetonuria). Aceti doi parametri sunt de obicei ntlnii n inaniie i n diabetul zaharat (mellitus). Acidul aceto-acetic i hidroxibutiratul sunt eliminai ca sruri, ei epuiznd rezerva alcalin din snge i n consecin, duc la scderea pH-ului. Pe de alta parte fiind substane osmotice antreneaz pierderi mari de ap (poliurie) i deshidratarea organismului. Cuplarea celor dou efecte duce la instalarea acidozei (cetoacidoza). 6.6. Metabolismul colesterolului Colesterolul este sintetizat de aproape toate esuturile umane: ficat, cortexul adrenalei, ovare, testicule, placent. El prezint o serie de funcii eseniale n organism: este component al membranelor celulare, precursor al acizilor biliari, al hormonilor steroizi, i al vitaminei D. Colesterolul se prezint sub dou forme: colesterolul liber i colesterolul esterificat. Biosinteza colesterolului Toi atomii constitueni ai colesterolului provin din acetil-CoA. Sinteza sa are loc n citoplasm i cuprinde mai multe etape: a) formarea hidroxi, metil - glutaril CoA (HMG-CoA) din acetil-CoA; b) transformarea (HMG-CoA) n izopren biologic activ c) condensarea a 6 uniti izoprenice cu formarea squalen-ului (hidrocarbur cu 30 atomi de carbon) d) ciclizarea squalen-ului cu formarea colesterolului.
a. HMG-CoA, intermediar n sinteza steroizilor, se sintetizeaz la fel ca

precursorul sintezei corpilor cetonici dar n citoplasm. Acetil CoA necesar sintezei

108

provine din metabolizarea glucozei, a acizilor grai (n cea mai mare parte) i a unor aminoacizi.

b. Transformarea HMG-CoA n acid mevalonic este etapa reglatorie a

procesului i reprezint prima etap specific a colesterologenezei i este un proces dependent de NADPH.

109

c. Prin condensarea cap-coad a dou uniti izoprenice se obine geranil-PP un compus C10, la care se adaug o nou molecul de izopren activ cu formare de farnesil-pirofosfat (C15). Apoi dou molecule de farnesil prin condensare coad-coad formeaz squalen-ul (C30).

Sub aciunea unui sistem enzimatic complex squalenul este transformat n lanosterol. Acesta, prin pierderea a 3 grupri CH3 (legturile punctate) prin oxidare la COOH i decarboxilare, hidrogenarea unei duble legturi si migrarea alteia, conduce la colesterol:
d.

110

Reglarea sintezei de colesterol are loc la nivelul HMG-CoA-reductazei, etapa limitant a procesului. Factorii reglatori sunt: a. colesterolul alimetar. Cnd dieta este srac n colesterol, este activat sinteza n ficat, intestin i suprarenale. O diet bogat n colesterol diminueaz sinteza endogen; b. valoarea caloric a dietei. O diet bogat n glucide sau lipide crete sinteza hepatic de colesterol; c. hormonii - insulina stimuleaz sinteza de colesterol prin stimularea HMG-CoA-reductazei; - glucagonul reduce sinteza de colesterol prin scderea activitii HMG-CoAreductazei. n plasma uman colesterolul se gsete ntr-o concentraie de 120-220 mg/dL; crete cu vrsta i prezint variaii de la individ la individ. La adulii tineri sntoi colesterolul plasmatic este de 175 mg/dL. Degradarea colesterolului. Biosinteza acizilor biliari Colesterolul din organism este utilizat astfel: 1. n cea mai mare parte este transformat la nivelul ficatului n acizi biliari; 2. n piele, este trecut n vitamin D3; 3. n glandele endocrine, la nivelul corpului galben din placent i capsulele suprarenale, se sintetizeaz hormoni steroizi; 4. este utilizat pentru sinteza de membrane. Colesterol nu poate fi degradat la CO2 i H2O i de aceea inelul sterolic este eliminat din organism ca atare sau mai corect foarte puin modificat. Calea principal de excreie este bila care cuprinde att colesterolul ct i acizii biliari, catabolii ai acestuia. inndu-se cont de cele spuse mai sus rezult c trecerea colesterolului prin ficat este obligatorie n vederea eliminrii. Bila contine colesterol n majoritate neesterificat care este meninut n soluie apoas de ctre substane amfipatice cum sunt lecitina (fosfatidilcolina) i srurile biliare. Solubilitatea colesterolului depinde de un raport bine determinat ntre colesterol-lecitina-sruri biliare. Modificarea acestui raport duce la cristalizarea colesterolului n jurul unor nuclee de proteine i bilirubin formnd calculii biliari (pietre) care pot bloca total sau parial fluxul bilei. Calea urmat de colesterol pentru eliminare este urmtoarea: colesterolul biliar mpreun cu cel rezultat din descuamarea intestinal i cel exogen se amestec n intestin. Din acest amestec colesterolul biliar fiind n form micelar este absorbit preferenial fa de cel exogen. Colesterolul neabsorbit se elimin prin fecale sub forma a doi compui rezultai n urma aciunii bacteriilor intestinale i anume colestanol i coprostanol. Colesterolul absorbit ajunge n ficat unde este transformat n acizi biliari i anume acidul colic i chenodezoxicolic.

111

nainte ca ei s prseasc ficatul, sunt conjugai cu glicolul sau cu taurina rezultnd acizii glicocolic, taurocolic, glicochenodezoxicolic i taurochenodezoxicolic. Acetia sunt total ionizai la pH-ul fiziologic i se prezint sub form de sruri. Srurile biliare au caracter detergent mai puternic dect acizii. Acizi biliari i srurile biliare sunt secretai n caniculele biliare i dup un tranzit prin vezica biliar sunt deversai mpreun cu bila n duoden.

112

n segmentul distal al ileonului acizi biliari sunt reabsorbii printr-un mecanism activ i prin sistemul port ajung din nou la ficat unde refac circuitul anterior, realizndu-se aa-numitul circuit enterohepatic al acizilor biliari. n intestin, dup ce particip la emulsionarea lipidelor alimentare, acizii biliari formai sunt supui aciunii bacteriilor rezultnd acizi biliari secundari, prin dehidroxilare n poziia 7 i deconjugare, acidul dezoxicolic din acidul colic i acidul litocolic din acidul chenodezoxicolic. Dup efectuarea a mai multor circuite enterohepatice ei sunt total eliminai. Trecerea colesterolului din ficat n bil este nsoit de secreia simultan a fosfolipidelor i srurilor biliare. Dac acest fenomen cuplat este viciat i intr n bil mai mult colesterol dect poate fi solubilizat de srurile i lecitina prezente, atunci colesterolul precipit formnd calculii biliari i declannd litiaza biliar.

6.7. Lipoproteine plasmatice Lipidele plasmatice (5-8 g/L) reprezint un amestec complex de fosfolipide (PL) 35%, trigliceride (TG) 10-25%, colesterol liber (C) 7,5%, colesterol esterificat (CE) 39% i acizi grai liberi (AGL) 2,5%. Deoarece sunt insolubile n ap, lipidele sunt transportate sub forma unor complexe lipoproteice, particule globulare cu greutate mare, cu miez nepolar constituit din lipide neutre (TG i CE) nconjurat de o pelicul polar de PL care stabilizeaz particula i asigur solubilitatea ei n ap. Pe lng fosfolipide, suprafaa polar mai conine colesterol liber i cantiti mici de proteine specifice, numite apolipoproteine sau apoproteine (A, B, C, E).

113

Deoarece particulele lipoproteice conin toate componentele lipidice n proporii diferite i diferite apoproteine, aceste particule vor prezenta i proprieti fizicochimice diferite: mrimea particulei, densitate, mobilitate n cmp electric. Lipoproteinele cu coninut ridicat de TG au densitatea mai mic i molecula mai mare dect cele cu coninut mare de PL i proteine. ncrcarea electric este conferit de partea proteic. Pe baza acestor proprieti au fost perfectate dou metode de separare a lipoproteinelor plasmatice: ultracentrifugarea i electroforeza. Ultracentrifugarea se bazeaz pe viteza de sedimentare a particulelor n cmp gravitaional ntr-o soluie de NaCl cu greutate specific 1,063 n funcie de densitatea i mrimea particulei. Electroforeza se bazeaz pe capacitatea de migrare n cmp electric n funcie de ncrcarea electric i greutatea particulei. Prin aceste metode s-au separat, din plasma subiecilor sntoi, patru clase de lipoproteine: - CM chilomicroni; - LDL lipoproteine cu densitate joas sau -lipoproteine; - VLDL lipoproteine cu densitate foarte joas sau pre--lipoproteine; - HDL lipoproteine cu densitate nalt sau -lipoproteine;

114

Trigliceridele predomin n chilomicroni i VLDL n timp ce colesterolul n LDL i HDL. Apoproteinele reprezint aproape 60% din particulele HDL i mai puin de 1% n chilomicroni. Asamblarea lipidelor sub forma particulelor lipoproteice asigur pstrarea lipidelor n soluie i un mecanism eficient pentru aprovizionarea esuturilor cu lipide. Metabolismul chilomicronilor (CM) Chilomicronii sunt particulele lipoproteice cele mai mari (75-1200 nm) sunt sintetizai n celulele mucoasei intestinale din lipidele alimentare Apo B48 i secretate n limfa mesenteric. n circulaie primesc de la particulele HDL, Apo C i Apo E. n timpul circulaiei, trigliceridele din chilomicroni sunt hidrolizate de lipoprotein-lipaze (LPL) din endoteliul capilarelor esuturilor extrahepatice (muchi scheletic, muchi cardiac, esut adipos). Acizii grai eliberai prin aciunea LPL activat de apo CII, servesc drept surs de energie pentru diverse celule, sau sunt preluai de adipocite i stocai sub form de trigliceride. Particulele rmase sunt chilomicroni remaneni sau deeuri, bogai n apo E dar lipsii de apo C care a fost pierdut (preluat de HDL) aproape n ntregime. Deeurile de chilomicroni sunt rapid captai de ficat fiind recunoscute de receptorii specifici prin combinaia apo B i apo E. n celulele parenchimale sunt degradai. Metabolismul fraciunii VLDL Particulele VLDL ( 30-90 nm) sunt secretate de ficat pe seama trigliceridelor sintetizate n celula hepatic. n circulaie particulele VLDL sunt modificate prin degradarea trigliceridelor de ctre lipoprotein-lipaz. Particulele devin mai dense, pierd fosfolipidele, colesterolul i apo E, care sunt transferate pe HDL i primesc n schimb colesterol esterificat. Prin aceste modificri,

115

particulele VLDL devin particule LDL, trecnd prin faza intermediar de particule IDL (lipoproteine cu densitate intermediar). n condiii patologice (hepatit, diabet necontrolat sau n ingestia excesiv de alcool) cnd este deranjat raportul ntre sinteza hepatic de trigliceride i secreia VLDL, apare ficatul gras. Metabolismul fraciunii LDL Particulele LDL (20 nm) rezultate prin metabolizarea VLDL sunt bogate n colesterol i colesterol esterificat, n special cu acidul oleic. Funcia primar a fraciunii LDL este de a furniza colesterol celulelor periferice. Colesterolul liber adus n celul particip la: sinteza de membrane celulare; sinteza altor steroli; reglarea sintezei de colesterol n celula respectiv prin inhibarea activitii HMGCoAreductazei. Colesterolul n exces (care depete necesarul imediat al celulei) este esterificat cu acizi grai de ctre ACAT (acilCoA:colesterol-acil transferaza) i stocat n celul pentru nevoile viitoare. Activitatea ACAT crete cnd concentraia colesterolului intracelular este crescut. Particulele LDL ptrund n celul prin recunoaterea combinaiei apo B i apo E de ctre receptori specifici. Afinitatea receptorilor pentru LDL este foarte mare; se consider c ei funcioneaz la capacitate maxim la o concentraie a colesterolului-LDL de 25 mg/dL. Nivelul LDL-colesterolului plasmatic este de 120 mg/dL; diferena dintre aceste dou valori reprezentnd valoarea LDL-colesterolului preluat de ctre receptorii scavenger de pe macrofage. Rezult aa numitele celule spumoase. Fraciunea LDL este considerat fraciune de risc aterogen. Metabolismul fraciunii HDL HDL ( 8-12 nm) sunt particule foarte heterogene n ceea ce privete compoziia i originea. Sunt sintetizate n ficat i intestin din nveliul excedentar din chilomicroni i VLDL dup ce miezul lor nepolar de trigliceride a fost degradat de ctre lipoprotein-lipaz. HDL nascente au o form bidiscoidal (dou straturi suprapuse formate din colesterol, fosfolipide (n special lecitin), apo AI, apo E i apo C. Sunt rapid convertite la particule sferice prin colectarea colesterolului de pe suprafaa celulelor esuturilor periferice i de la alte particule lipoproteice, trecnd n particule HDL3, sferice, apoi HDL2 care sunt captate de celulele hepatice i degradate.

116

Fraciunea HDL ndeplinete un numr de funcii importante: constituie rezerv circulant de apo CII care este transferat pe chilomicroni i VLDL pentru activarea LPL; - ndeprteaz colesterolul liber din esuturile extrahepatice i l esterific n plasm cu LCAT (lecitin:colesterol-aciltransferaz), enzim ataat de particulele HDL. -

transport colesterolul esterificat la ficat unde este metabolizat la acizi biliari n celulele parenchimale. Studii epidemiologice au evideniat c spre deosebire de LDL, colesterolul din HDL este corelat negativ cu prevalena aterosclerozei, HDL fiind considerat fraciunea cu rol protector, antiaterogen. Aceasta deoarece ndeprteaz colesterolul din esuturi i chiar din intima vascular i l cedeaz -

117

ficatului care l transform n acizi biliari, principala form de eliminare a colesterolului din organism. Tulburrile metabolismului lipidic. Dislipidemii Termenul general de dislipidemie semnific modificrile calitative i cantitative ale lipidelor din plasm. Unii indivizi prezint defecte nnscute n metabolismul lipoproteinelor plasmatice, defecte ce conduc la hipo- sau hiperlipoproteinemii. Ali indivizi, cu diverse afeciuni, cum ar fi diabet zaharat, hipotiroidism sau ateroscleroz, prezint modele lipoproteice anormale, foarte asemntoare cu una sau alta dintre afeciunile primare nnscute. Numeroase cercetri au evideniat corelaia dintre creterea concentraiei lipidelor serice i incidena bolilor coronare i a aterosclerozei. Pacienii cu boli coronare pot prezenta cel puin una din urmtoarele anomalii: 1) creterea concentraiei VLDL (n principal trigliceride), cu concentraii normale a LDL (n principal colesterol); 2) creterea concentraiei LDL (colesterol) cu VLDL normale (trigliceride); 3) creterea ambelor fraciuni lipoproteice (colesterol + trigliceride). Exist o relaie invers ntre HDL i bolile coronare i se consider c cele mai bune indicaii n aprecierea acestei situaii pot fi obinute din valorile raportului LDL/HDL, innd seama de rolul celor dou fraciuni.

7. METABOLISMUL PROTEIC n organism are loc un permanent transfer proteic intertisular. La fondul comun de aminoacizi contribuie att aminoacizii de origine alimentar, ct i cei provenii din degradarea proteinelor tisulare. Fondul comun de aminoacizi va fi utilizat pentru sinteza de proteine, pentru sinteza de produi specializai (serotonina, adrenalina, tiroxina), sau pentru degradare n scopuri energetice. Cantitatea minim de proteine necesar organismului este de aproximativ 30 g/zi. Cnd consumul de proteine este inadecvat, ficatul nu poate sintetiza suficiente proteine plasmatice pentru meninerea balanei ntre fluide i esuturi, favoriznd apariia edemelor.

118

Valoarea biologic a unei proteine alimentare depinde de compoziia sa n aminoacizi. Valoarea este cu att mai mare cu ct coninutul n aminoacizi este mai bogat, mai variat i mai apropiat de compoziia proteinelor proprii organismului. Msura acestei valori este dat de coeficientul de utilizare a proteinelor care se exprim prin raportul: N ingerat N urinar N ingerat Coeficientul indic n ce msur o protein ingerat este ncorporat n proteinele proprii. Atunci cnd, dup administrarea unei proteine, eliminarea urinar de azot este crescut, nseamn c aminoacizii din proteina respectiv au fost n principal degradai i nu ncorporai n proteinele proprii organismului. Proteinele de origine vegetal, n special fina de porumb, care este lipsit de triptofan, tirozin i lizin, au valoare biologic redus. Proteinele de origine animal au valoare biologic ridicat. Balana azotat nu poate fi meninut dac din alimentaie lipsesc urmtorii aminoacizi: fenilalanina, valina, triptofanul, treonina, lizina, leucina, histidina, arginina, izoleucina i metionina, aa numii aminoacizi eseniali. Arginina i histidina sunt considerai aminoacizi semieseniali deoarece n perioada de cretere, necesarul pentru arginin i histidin este crescut i sinteza endogen nu asigur ntreaga cantitate necesar. Cnd unul dintre aminoacizii eseniali lipsete, sinteza proteinelor n componena crora intr aceti aminoacizi nu mai are loc, iar ceilali aminoacizi sunt dezaminai i degradai; bilanul azotat devine negativ. Valoarea biologic a unei proteine depinde i de digestibilitatea ei; proteinele din plante, fiind protejate de un nveli de celuloz, sunt mai greu digestibile. Un caz aparte l constituie albuul de ou crud i fasolea soia, care conin factorii antitriptici ce se opun digestiei. 7.1.Digestia i absorbia proteinelor n tubul digestiv, proteinele nu pot fi absorbite ca atare i de aceea sunt supuse aciunii unor enzime numite peptidaze sau proteaze, care le scindeaz pn la aminoacizi. Dup specificitate, peptidazele se mpart n endopeptidaze i exopeptidaze. Ele sunt capabile s scindeze legturile peptidice situate fie n mijlocul unui lan polipeptidic (endopeptidaze), fie la capetele acestuia (exopeptidaze). La rndul lor, exopeptidazele sunt aminopeptidaze i carboxipeptidaze dup cum detaeaz un aminoacid din captul N-terminal sau C-terminal:
R1 H2N CH CO NH CH R2 CO NH R3 CH CO NH CH R4 CO R5 NH CH CO OH

Aminopeptidaza

Endopeptidaza

Carboxipeptidaza

119

Peptidazele digestive sunt elaborate sub form inactiv n scopul de a proteja celulele i canalele secretoare de aciunea lor proteolitic. Aceti precursori (proenzime sau zimogeni) devin activi n lumenul tubului digestiv. Activarea lor se realizeaz prin hidroliza unor legturi peptidice care fie c detaeaz anumite peptide sau aminoacizi, fie c modific plierea lanului polipeptidic, demascnd centrul activ al enzimei. De multe ori acest proces se petrece autocatalitic.
Tripsinogen Enteropeptidaza Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys

Tripsina Chim otripsinogen Proelastaza Elastaza Procarboxipeptidaza Chimotripsina Carboxipeptidaza

Digestia proteinelor alimentare ncepe n stomac. Principala enzim proteolitic gastric este pepsina. Pepsina, o endopeptidaz, este secretat de celulele mucoasei gastrice sub form de pepsinogen. Activarea are loc sub aciunea acidului clorhidric din stomac, sau autocatalitic. Pepsina acioneaz optim la pH 1-2 i prezint specificitate pentru legturile peptidice a cror grupare NH- provine de la tirozin i fenilalanin. Enzimele pancreatice (tripsina, chimotripsina, elastaza, carboxipeptidaza) acioneaz asupra proteinelor neatacate de pepsina gastric ct i asupra produilor de digestie ale acesteia. Sub aciunea combinat a proteazelor pancreatice rezult di- sau oligopeptide. Tripsina endopeptidaz pancreatic, rezult din tripsinogenul activat de enterokinaz sau autocatalitic. Activarea implic detaarea unui hexapeptid din captul N-terminal. Are pH optim la 7-8 i specificitate pentru legturile peptidice a cror grupare carboxil provine de la un aminoacid bazic, cum ar fi arginina. Chimotripsina endopeptidaz pancreatic secretat sub forma inactiv de chimotripsinogen i activat de tripsin care detaeaz patru aminoacizi sub forma a dou dipeptide. Chimotripsina are specificitate pentru

120

legturile peptidice n care sunt implicate gruprile carboxil ale fenilalaninei, tirozinei i triptofanului. Absorbia aminoacizilor prin mucoasa intestinal este n parte o difuzie pasiv, dar n cea mai mare msur este un transport intermediat de proteinele transportoare specifice (translocaze). Translocazele seamn cu enzimele: prezint fenomenul de saturare cu substrat, sunt specifice, sunt susceptibile la aciunea unor inhibitori. Proteinele transportoare de aminoacizi sunt determinate genetic i defecte genetice ale acestor proteine altereaz capacitatea de absorbie a mucoasei intestinale pentru unul sau mai muli aminoacizi. Erorile ereditare de absorbie a aminoacizilor determin tulburri grave de nutriie i metabolism (boala Hartnup, cistinuria, glicinuria). Peptidele mici absorbite, sunt rapid hidrolizate de ctre peptidazele localizate chiar n celulele care fac absorbia, nct n circulaia portal sunt eliberai numai aminoacizi. 7.2. Metabolismul aminoacizilor Metabolismul aminoacizilor se desfoar n strns legtur cu ciclul acizilor tricarboxilici. Astfel, scheletul de atomi de carbon pentru biosinteza celor mai muli aminoacizi este furnizat de ciclul Krebs, care fiind un proces amfibolic, va asigura i degradarea scheletului de carbon din aminoacizi. Biosinteza aminoacizilor Digestia proteinelor nu asigur ntreaga cantitate de aminoacizi necesar organismului. n consecin, proporia de aminoacizi trebuie reechilibrat prin sintez. Organismul uman nu poate realiza acest lucru deoarece nu poate sintetiza toi cei 20 aminoacizi, nedispunnd de unele enzime necesare. De exemplu aminoacizii aromatici (Phe, Trp) nu pot fi sintetizai, iar alii, cum ar fi arginina poate fi sintetizat n ciclul ureei, dar nu n cantiti suficiente. Totui, un numr de 12 aminoacizi neeseniali pot fi sintetizai din intermediari metabolici, iar trei (Cys, Tyr,Hys) se sintetizeaz din aminoacizi eseniali. n biosinteza aminoacizilor, un rol central l ocup glutamatdehidrogenaza, glutamin-sintetaza i transaminazele; prin aciunea lor combinat, amoniacul anorganic este transformat n grupare amino din aminoacizi. 7.2.2. Catabolismul aminoacizilor Spre deosebire de acizii grai i glucoz, aminoacizii nu pot fi stocai n organism. Surplusul de aminoacizi care depete necesarul pentru sinteza de proteine i alte biomolecule, este supus degradrii.

121

Catabolismul gruprii amino Animalele superioare, printre care i omul, , excret azotul proteic sub form de uree, compus solubil n ap i netoxic. Prin catabolizarea aminoacizilor, gruparea -amino eliberat sub form de ion NH4+, este convertit la uree, iar scheletul de C rmas este transformat n acetil CoA, piruvat sau alt intermediar din ciclul acizilor tricarboxilici. Aceti din urm compui sunt utilizai drept surs de energie i pentru sinteza de acizi grai, corpi cetonici i glucoz. ndeprtarea gruprii -amino se realizeaz prin dou procese: 1. transaminarea, n care gruprile amino de la diveri aminoacizi sunt colectate sub form de glutamat; + 2. desaminarea oxidativ a glutamatului, prin care se elibereaz NH4, convertit ulterior n uree.

Transaminarea const n transferul gruprii amino de la un aminoacid la un cetoacid fr formarea amoniacului liber; aminoacidul devine cetoacid, iar cetoacidul (-KA) devine aminoacid. Reacia general a acestui proces este:
R1 CH COO + R2 C COO + NH3 O R1 C O COO- + R2 CH COO + NH3

122

Enzimele care catalizeaz transaminarea se numesc aminotransferaze i au drept coenzim piridoxal-5-fosfatul (P-5-P), forma activ a vitaminei B6. Transaminazele acioneaz reversibil i prezint specificitate pentru una sau ambele perechi de aminoacid-cetoacid. Acceptor principal de grupri amino este acidul -cetoglutaric, care se transform n acid glutamic. Ca donor de grupare amino pot funciona majoritatea aminoacizilor, nct procesul de transaminare poate fi ilustrat prin reacia:
R CH COO- + NH3 -AA
+

COOC O CH2 CH2 COOR C O -KA COO

COO+ CH NH3 CH2 CH2 COO+

Transaminarea are loc cu viteze diferite dup natura aminoacidului. Cel mai Glutamat -cetoglutarat activ donor de grupare amino este acidul aspartic, dup care urmeaz alanina, valina, leucina, izoleucina, tirozina, fenilalanina, metionina, triptofanul, arginina cisteina. Glicocolul, serina, histidina reacioneaz mai greu, iar lizina, treonina i iminoacizii (prolina i hidroxiprolina) nu particip la transaminare. Dintre cele 13 aminotransferaze identificate, cele mai importante sunt: aspartat transaminaza (AST sau GOT) care are afinitate pentru perechea oxalacetat-glutamat:
COO CH2 C O COO oxalacetat + COO CH2 CH2 HC NH3
+

COO CH2 HC NH2 COO aspartat +

COO CH2 CH2 C O COOH -cetoglutarat

COOH glutam at

alanin transaminaza (ALT sau GPT), care catalizeaz selectiv reacia: COO COO C O CH3 piruvat + CH2 CH2 HC NH3
+

COO COO CH NH2 CH3 alanin\ + CH2 CH2 C O COO -cetoglutarat

COO glutamat

123

Ambele transaminaze sunt eliberate n snge n urma lezrii esuturilor sau prin moartea celulelor. n consecin dozarea activitii lor n plasm este utilizat n diagnosticul bolilor de inim i ficat, cum ar fi infarctul miocardic i hepatita, respectiv. Prin transaminare se acumuleaz gruprile amino de la majoritatea aminoacizilor pe acidul glutamic care, prin desaminare oxidativ va elibera NH4+ i acidul -cetoglutaric necesar unui nou proces de transaminare. Dezaminarea oxidativ - pierderea gruprii amino sub form de amoniac cu formarea unui cetoacid. Reacia este catalizat de D- sau L-aminoacidoxidaze, active n ficatul i rinichiul animalelor superioare, a altor animale i n microorganisme. n acest proces, aminoacidul este dehidrogenat la iminoacid de ctre o flavoprotein (Fp), apoi iminoacidul format, spontan, n prezena apei, pierde amoniacul i trece n cetoacid. Singura aminoacid-oxidaz cu activitate destul de mare este glutamat dehidrogenaza (Glu-DH) distribuit n toate esuturile i n special n ficat. Enzima din ficat este modificat alosteric de ATP, GTP, NADP+ care o inhib i de ADP care o activeaz. Poate lucra fie cu NAD+ fie cu NADP+. L-glutamat-DH catalizeaz reacia:

L-Glutamat Glu-DH

-cetoglutarat

H2O

NH4 NAD(P)H+H+

NAD(P)+

Reacia este reversibil i poate lucra fie spre formarea de amoniac din glutamat (catabolism), fie fixarea lui pe alfa-cetoglutarat (biosinteza), funcie cu importan n plante i bacterii, care sintetizeaz aminoacizi din glucoz i amoniac.

COO CH2 CH2

COOGl-DH NAD(P)++H+ C CH2 CH2 H2O COO Iminoacid

+ NH4

COOC O CH2 CH2 COO -cetoglutarat

CH NH3

NH

NAD+(P)

COO Glutamat

124

n lezarea funciei hepatice sau n ciroz cnd se dezvolt o comunicare colateral ntre vena port i circulaia sistemic, sngele portal poate ocoli ficatul. Amoniacul din intestin va trece n sngele sistemic unde va atinge nivele toxice.. La nivel renal, se fabric amoniac fie pentru meninerea echilibrului acidobazic, fie pentru conservarea cationilor. Aceast producie este crescut mult n acidoz i sczut n alcaloz. Amoniacul se formeaz pe seama aminoacizilor intracelulari, n particular glutamin, sub aciunea glutaminazei, conform reaciei:

O C NH2 H2O NH3 COOH (CH2)2 CH + NH3 _ COO glutam at (CH2)2

+ CH NH3 _ COO

glutam in\

Pe lng amoniacul format prin transaminare desaminare, cantiti apreciabile de amoniac se formeaz sub aciunea bacteriilor intestinale, fie din proteinele alimentare, fie din ureea prezent n fluidele secretate n tractul gastrointestinal. Din intestin, amoniacul este absorbit de sngele venos portal care conine cantiti mai mari de amoniac dect sngele sistemic. Amoniacul produs constant n esuturi este continuu transformat n glutamat, glutamin i uree, nct sngele care prsete ficatul este practic lipsit de amoniac (1020 g%). Acest lucru este esenial deoarece amoniacul este toxic pentru SNC. Glutamin-sintetaza este o enzim mitocondrial prezent n cantiti mari n esutul renal. Sinteza legturilor amidice se realizeaz cu consum de ATP, ceea ce face ca echilibrul acestei reacii s fie deplasat spre sintez.
O COO (CH2)2
-

CH NH3 COO Glutamat

+ NH3

Glutamin-sintetaza Mg++ ADP+Pa

NH2
+

(CH2)2
-

ATP

CH NH3 COO Glutamin\

125

Acest mecanism este preponderent n creier. n ficat, calea principal de ndeprtare a amoniacului este formarea ureei. Glutamina se formeaz n creier i pe seama amoniacului din sngele arterial. Cum sinteza glutaminei se realizeaz pe seama acidului glutamic sintetizat prin transaminare din KG, atunci cnd concentraia amoniacului n creier crete, cantitatea de glutamat necesar detoxifierii este insuficient i n aceste condiii se sintetizeaz cantiti suplimentare de glutamat din cetoglutaratul format n ciclul Krebs, propriu creierului, ceea ce poate conduce la scderea concentraiei intermediarilor din ciclu. Pentru reechilibrare, se apeleaz la reacia de carboxilare a piruvatului la oxalacetat care, intrat n ciclul Krebs va genera cantiti suplimentare de -cetoglutarat. Calea principal de ndeprtare a amoniacului din organism este convertirea acestuia la uree. 7.2.2.1.1. Ureogeneza Un adult ce presteaz o activitate moderat consum zilnic aproximativ 300 g glucide, 100 g grsimi i 100 g proteine i excret 16,5 g azot; 95% azot este eliminat la nivelul rinichiului, iar 5% prin materiile fecale. Calea major de eliminare a azotului la om este ureea. Ureea este sintetizat n ficat, trecut n snge i filtrat la rinichi. Pentru sinteza unui mol de uree dintr-un mol de amoniac sunt necesari 3 moli de ATP (2 moli sunt trecui n ADP, iar un mol n AMP) i participarea a 5 enzime. Etapele sintezei ureei: 1. Sinteza carbamoil-fosfatului Condensarea amoniacului, bioxidului de carbon i fosfatului (din ATP) cu formarea carbamoil-P este catalizat de carbamoil-P-sintetaz, prezent n mitocondriile din ficatul tuturor animalelor ureolitice. n aceast reacie se consum 2 moli de ATP pentru realizarea legturii amidice dintre NH3 i CO2 i a legturii anhidridice mixte ntre gruparea carboxil i gruparea fosforic din carbamoil-P. n plus este necesar prezena Mg++ i a unui acid dicarboxilic, i anume, N-acetilglutamic. Rolul exact al acestui aminoacid nu este cunoscut. Se pare c prin legarea lui, se produc modificri comformaionale profunde n molecula enzimei, prin care sunt demascate unele grupri sulfhidrilice i este modificat afinitatea enzimei pentru ATP. 2. Sinteza citrulinei Transferul restului carbamoil de pe carbamoil-P la ornitin, cu formarea citrulinei este catalizat de ornitil-carbamoil-P-transferaza (OCT), o enzim care

126

se gsete n mitocondriile hepatice. Enzima este foarte specific pentru ornitin i echilibrul este deplasat spre formarea citrulinei. 3. Sinteza argininosuccinatului catalizat de arginino-succinatsintetaza, utilizeaz energia furnizat de ATP, echilibrul reaciei fiind deplasat spre sinteza argininosuccinatului. 4. Clivarea argininosuccinatului la arginin i fumarat. Clivarea reversibil este catalizat de argininosuccinaz, o enzim stereospecific identificat n mitocondriile de ficat i rinichi. Fumaratul format poate fi convertit la oxalacetat prin aciunea fumarazei i malatdehidrogenazei din ciclul Krebs, iar oxalacetatul prin transaminare regenereaz aspartatul. 5. Clivarea argininei la ornitin i uree este reacia ce nchide ciclul ureei regenernd ornitina, substratul pentru reacia 2.

CO2

+ + NH 4

1 sintetaza
2ATP

Carbamoil-PMg ++

O H2 N C O

O P O O

2
CH2 (CH2 )2 CH COO
+

OCT

2 ADP+Pa

carbamoil-P

NH3 NH3 +

Pa

Ornitin\
NH2 C CH2 NH (CH2 )2 CH COO NH3 COO CH CH2 COO +

NH O

COO CH2 COO

Argininosuccinat-sintetaza Mg ++ +

C NH CH CH2 NH (CH2 )2 CH COO NH2 -

4 succinaza
COO CH CH -OOC

Arginino-

ATP AMP+PPa

Citrulin\

NH3

Argininosuccinat

Fumarat

Aspartat
NH2 C CH2 NH (CH2 )2 CH COONH3
+

NH

5
H2 O

Arginaz\

NH2 C O NH2

Ornitin\

Arginin\

Uree

127

Clivarea hidrolitic a restului de guanidin din arginin este catalizat de arginaz, care este prezent n ficatul tuturor animalelor ureotelice. Cantiti foarte mici de arginaz se ntlnesc i n alte esuturi rinichi, creier, glanda mamar, piele. Arginaza nalt purificat (din ficat) este activat de Ca++ sau Mg++. Ornitina i lisina sunt inhibitori competitivi pentru arginin.
Reglarea sintezei ureei

Sinteza carbamil-fosfatului asigur fluxul continuu de amoniac ntre aminoacizi i uree. Cu toate c echilibrul reaciei Glu-DH este deplasat spre formarea glutamatului, datorit faptului c ndeprtarea amoniacului se face prin carbamoil-P i -cetoglutaratul rezultat este degradat de enzimele ciclului Krebs situate n matricea mitocondrial, echilibrul este de fapt deplasat spre degradarea glutamatului.

128

Dintre cele 5 enzime care particip la acest proces, reacia arginazei este specific acestei ci metabolice i deci specific animalelor ureotelice. Ea se gsete numai n ficat, organ unde are loc sinteza ureei. OCT este, de asemenea, o enzim strict hepatic i apariia ei n plasm va constitui un indicator de lezare a parenchimului hepatic. Cantiti mici de uree se pot forma i n creier i rinichi, dar fr semnificaie pentru metabolismul amoniacului. Anomalii genetice n ciclul ureei Au fost descrise defecte pentru toate cele 5 enzime implicate n sinteza ureei: 1. Defectul de carbamil-fosfat-sintetaz, hiperamonemia tip I; 2. Defectul de OCT , hiperamonemia tip II; 3. Defectul de argininosuccinat-sintetaz , citrulinemie; 4. Defectul de argininosuccinaz, argininosuccinaturie; 5. Defectul de arginaz, hiperargininemie. Oricare dintre aceste defecte se manifest prin simptome specifice intoxicaiei cu amoniac a crui concentraie seric poate crete de la 10-20 g% la 500 g%. Subiecii cu astfel de defecte genetice au o intoleran i o repulsie fa de alimentele bogate n proteine. Intoxicaia cu amoniac se manifest prin tremurturi ale membrelor, dificulti n vorbire, tulburri de vedere, iar n cazuri severe, coma i moartea. Simptomele se instaleaz atunci cnd nivelurile hepatice i cerebrale de amoniac sunt crescute. Intoxicaia cu amoniac este considerat factor important n etiologia comei hepatice, motiv pentru care tratamentul, n asemenea situaii, este orientat spre scderea amoniacului sanguin. 7.2.2.2. Catabolismul scheletului de carbon al aminoacizilor n funcie de compuii ce pot fi sintetizai din produii finali ai cilor de degradare, aminoacizii pot fi grupai n trei categorii: 1. aminoacizii glucogenici care sunt degradai la piruvat sau la intermediari din ciclul Krebs, compui ce vor fi convertii la glucoz, via fosfoenolpiruvat (alanina, arginina, acidul aspartic, cisteina, acidul glutamic, glicina, histidina, Ala hidroxiprolina, metionina, prolina, serina, treonina i valina); Gly 2. aminoacizi cetogenici care sunt catabolizai fie Phe la acetil-CoA, fie la acetoacetilLys Cys vor rezulta corpi cetonici (leucina); CoA, din care Ser Ile Trp glucogenici Leu Trp i cetogenici careLeu genera att glucoz ct i corpi pot Tyr Glucoz\ 3. aminoaciziThr cetonici (izoleucina, lisina, fenilalanina, triptofanul i tirozina). Punctele Krebs sunt Acetoacetil-CoA Fosfoenol piruvat de intrare n ciclulAcetil-CoA acetil-CoA, -cetoglutarat, succinil-CoA, Piruvat fumarat i oxalacetat:
Glucogenici Asp Asn Phe Tyr Asp Oxalacetat Citrat Fumarat Succinil-CoA Ile Met Val Alfa-Cetoglutarat Glu Gln His Pro Arg
Cetogenici

Gluco-, cetogenici

129

7.2.2.3. Metabolismul individual al unor aminoacizi 7.2.2.3.1. Metabolismul glicocolului Glicocolul este un aminoacid neesenial care poate participa la numeroase sinteze n organism: - transformarea reversibil n serin prin intervenia serin, hidroximetiltransferazei, reacie la care particip n calitate de coenzim acidul folic sub forma N5-N10-metilen-FH4. Reacia poate continua cu formarea final a acidului piruvic; - sinteza hemului, mpreun cu succinil-CoA; - sinteza glutationului; - sinteza creatinei; - sinteza purinelor; - sinteza hemului. 7.2.2.3.1.1. Creatinogeneza Creatina se gsete n special n muchi i creier, att liber ct i fosforilat (fosfocreatin). Sinteza ei se realizeaz cu participarea a trei aminoacizi, glicocolul, arginina i metionina prin urmtoarele etape: transamidinarea transferul gruprii amidinice din arginin pe glicocol cu formarea glicociaminei (acid guanidin-acetic). Reacia are loc n rinichi dar nu n ficat i muchi.
NH2 HN C NH CH2 (CH2 )2 CH COO + NH3 _ + NH3 CH2 COO Arginin-glicintransamidinaza (rinichi) Ornitin\ NH2 HN C NH CH2 _ COO

Glicocol

Glicociamin\ (Guanidinacetat)

Arginin\

130

transmetilarea transferul gruprii metil de pe metionina activat (S-

adenozil-metionina, SAM) pe glicociamin. Reacia are loc n ficat concomitent cu fosforilarea:

ATP Guanidin acetatm etil-transferaza (ficat) S-Adenozilm etionin\ ADP NH C O neenzim atic HN C (m u[chi) N H2C Pa + H2O CH3

HN C

NH P N _ CH2 COO

S-Adenozilhom ocistein\

CH3

creatin- P

creatinin\

n muchi, creatin-fosfatul previne depleia rapid de ATP, fiind un compus macroergic ce asigur regenerarea ATP i creatinei atunci cnd muchiul este relaxat i necesarul de ATP nu este prea mare. Fosforilarea creatinei este catalizat de creatinfosfo-kinaz (CPK), o enzim specific muscular, cu utilizare clinic n detectarea afeciunilor musculare acute sau cronice. Forma de excreie a creatinei este creatinina (anhidrida creatinei) care rezult prin eliminarea neenzimatic a apei i fosfatului anorganic din creatin-fosfat. Cantitatea de creatinin excretat prin urin n 24 de ore este constant pentru un subiect dat, depinznd de masa muscular i nu de alimentaie. Creterea creatinei n snge i eliminarea ei crescut prin urin se constat n urmtoarele situaii: - creterea produciei de creatin; - distrugerea celulelor musculare; - perturbarea captrii de ctre muchi a creatinei sintetizat n ficat. Ultimele dou mecanisme se ntlnesc n miastenia grav, miotonia congenital, miotonia atrofic, poliomielit, diverse miozite (inclusiv dermatomiozite). 7.2.2.3.1.2. Biosinteza glutationului Glutationul, un tripeptid cu grupare sulfhidric, este un important derivat al aminoacizilor, avnd funcii fiziologice nsemnate.
O CH NH3
+

_ OOC

O HN CH CH2 SH C NH CH2 COO

CH2

CH2 C

-Glutamil-cisteinil-Glicin\ Glutation (GSH)

131

Glutationul, prezent n celulele animale n concentraii nalte (aproximativ 5 mM) reprezint un important sistem redox, trecnd reversibil din forma redus (GSH) n forma oxidat (GSSG), n care dou molecule de tripeptid se leag prin legtur disulfidic.
-Glu-Cys-Gly S S -Glu-Cys-Gly

GSSG este redus la GSH prin glutation-reductaz, o flavoprotein ce utilizeaz NADPH ca surs de electroni. n cele mai multe celule raportul GSH/GSSG este mai mare ca 500. Glutationul ndeplinete unele funcii importante: - Glutationul protejeaz proteinele celulare (enzime, hemoglobin) mpotriva agenilor oxidani, jucnd rol cheie n degradarea peroxidului de hidrogen i peroxizilor organici, compui toxici pentru organism. Glutation peroxidaza (GSH-PX), enzima ce catalizeaz reacia, conine un atom de seleniu. n centrul activ al enzimei se gsete un analog al cisteinei ce conine seleniu n locul sulfului. - Particip la transportul aminoacizilor n celule ; - La nivelul ficatului GSH, compus nucleofil, particip la reacia de conjugare prin care unele toxice electrofile (cum ar fi ageni cancerigeni) sunt neutralizai prin aciunea unor glutation-S-transferaze conform reaciei:
RH + GSH GS-R + 2 H

Particip la biosinteza leucotrienelor.

Reacia de conjugare Muli metabolii i medicamente hidrofobe sunt conjugate, n ficat, cu glicocolul, fiind transformate n compui hidrosolubili care se pot elimina din organism. De exemplu, benzoatul, compus ce este utilizat pentru conservarea alimentelor, n ficat se conjug cu glicocolul rezultnd acid hipuric.

132

Capacitatea ficatului de a converti benzoatul la acid hipuric este utlizat pentru evaluarea funciei hepatice. Acizii biliari n reacia cu glicina se transform n acizi biliari conjugai (acizi biliari primari)caresub form de sruri biliare (ageni tensioactivi) intervin n absorbia lipidelor. 7.2.2.3.3. Metabolismul metioninei Metionina, aminoacid esenial, este metabolizat n organism pe calea succinatului printr-o secven de reacii ce includ activarea metioninei la S-adenozil metionin, urmat de formarea n faz intermediar a homocisteinei.
COO CH (CH2)2 S CH3 _ NH3
+

Metionin-adenoziltransferaza ATP Pa+PPa

NH2 N N

N N O + CH2 S

COO

Metionina

CH2 CH2 CH + CH3 NH3

Hipermetioninuria

HO OH

S-Adenozilm etionin\ ("m etionin\ activat\";SAM)

COO _ + NH3

Transmetilaz\ Acceptor Acceptor-CH3

CH CH2 CH2 SH

Succinil-CoA

Homocistein\

Acceptorii de grupri metil din reacia 2 pot fi etanolamina pentru sinteza colinei, noradrenalinei pentru sunteza adrenalinei, glicociamina pentru sinteza creatinei etc. Anomalii n metabolismul metioninei Homocistinuria apare n cazul unor defecte motenite, din calea de degradare a metioninei. Zilnic se excret pn la 300 mg homocistein uneori nsoit de S-adenozilmetionin i nivele crescute de metionin n plasm. Simptomele clinice includ: tromboze, osteoporoz, dezlipire de retin i frecvent, ntrziere mintal.

133

Unele forme ale bolii rspund la tratamentul cu vitamina B6, altele nu. Utilizarea unei diete srac n metionin i bogat n cistin, din primele luni de via, previne instalarea modificrilor patologice. 7.2.2.3.4. Metabolismul fenilalaninei Fenilalanina, aminoacid esenial, este convertit la tirozin prin aciunea fenilalaninhidroxilazei, o oxidaz cu funcie mixt, prezent n ficat i absent n alte esuturi.
NADP+ II Tetrahidrobiopterin\ O2 I Dihidrobiopterin\ H2O NADPH+H+

CH2 CH COO NH3 Fenilalanina Fenilcetonuria (PKU)

+

HO

CH2 CH COO NH3 Tirozina

+

Reacia implic ncorporarea unui atom de oxigen n poziia para a fenilalaninei, iar cel de al doilea atom de oxigen, n ap. Agentul reductor este NADPH care cedeaz hidrogenii prin intermediul tetrahidroxibiopterinei, compus asemntor acidului folic. 7.2.2.3.4.1. Anomalii n metabolismul fenilalaninei: Fenilcetonuria prin defect de fenilalanin-hidroxilaz: Fenilalanina ce nu poate fi hidroxilat la tirozin este desaminat la acid fenilpiruvic i acesta prin reducere formeaz acid fenillactic, iar prin oxidare i decarboxilare, acid fenilacetic. Acidul fenilacetic se elimin prin urin n principal sub form conjugat cu glutamina. Consecina major n fenilcetonurie este retardarea mintal. Fenilcetonuria (PKU) este cea mai frecvent boal metabolic, avnd o inciden de 1/10.000 nateri. 7.2.2.3.5. Metabolismul tirozinei Degradarea tirozinei se face pe calea acetoacetil-CoA i acidului fumaric.

134

OH

Alfa-KG 1

Glu 6 5

OH 7

O2 8 9 2

vit.C, Cu2+

CO2

OH 7 2 9 3 CH2 COO

CH2
+ CH NH3 COO

Tirozintransaminaz\

4 3CH2

Hidroxilaz\ (dioxigenaz\)

4 OH

Tirozina

Ti rozi nemi a ti p II

2CH O 1COO

Hom ogentizinc (dihidroxifenilacetat)

Ti rozi nemi a neonatal \

p-hidroxifenil-piruvat

O 3 Hom ogentizat oxidaz\ Fe2+ O 6 5

C 8 Fumaril-acetoacetat C 8 7 CH2 7 CH2 Izomeraz\ 6 2 - 4 hidrolaz\ 2 3 3 9 9 C CH2 COO O C CH2 COO 5 - 4 COO O OOC 4

Maleilacetoacetat
Al captonuri a 4 5 -OOC C H +

Fum arilacetoacetat
2 8 9 3 CH3 C CH2 COOH O
Ti rozi Beta-cetotiolaz\ nemi a ti p I CH3 CO SCoA (ti rozi nosi s)

6 H C

7 COO

Fum arat Glucoz\

Acetilacetat

CoASH

CH3COO-

7.2.2.3.5.1.Anomalii n catabolismul tirozinei - Alcaptonuria Cea mai important etap n calea metabolic de degradare a tirozinei este deschiderea nucleului aromatic catalizat de homogentisinatoxidaza (reacia 3). Absenta ei conduce la acumularea acidului homogentisinic n esuturi i eliminarea lui prin urin. Urina care conine homogentisinat se nnegrete n prezena aerului prin transformare n acid benzochinonacetic i polimerizarea acestuia la pigmentul brun alcapton. Alcaptonuria a fost descris nc din 1649 i definit ca defect enzimatic de Archibald Garrod n 1902.

135

Depunerea de alcapton n cartilagii duce la colorarea acestora n brun (ocronoz) asociat clinic cu simptome de artroz. Tirozina servete drept precursor pentru civa compui biologic activi: catecolamine, melanine, hormoni tiroidieni.
L-Dopa Tirozina L-Dopa

Dopamina

Dopamina Tiroxina

Norepinefrina

Melanina

Epinefrina

7.2.2.3.5.2.Biosinteza catecolaminelor Celulele neuronale convertesc tirozina la norepinefrin i epinefrin prin urmtoarea succesiune de reacii:
OH 1 CH2 Tirozinhidroxilaza OH OH CH2 DOPA2 decarboxilaza (PLP) CO 2 OH OH CH2 CH2 NH2 Dopamina

+ CH NH3 _ COO Tirozina

Tetrahidrobiopterin\ Dihidrobiopterin\

+ CH NH3 _ COO DOPA

Dopamin3 beta-oxidaza (Cu2+ , O 2 ) O2

OH OH 4 CH OH CH2 NH2 Norepinefrina

Fenol-etanolaminaN-metil-transferaz\

OH OH CH OH CH2 NH Epinefrina CH3

S-Adenozilmetionina S-Adenozilhomocisteina

n medulosuprarenal, noradrenalina este metilat la azot cu S-adenozilmetionin ca donor de grupri metil. Sinteza transmetilazei este indus de glucocorticoizi i inhibat de epinefrin. 7.2.2.3.5.3.Sinteza melaninei are loc n melanocite pe calea DOPA, reacia de hidroxilare fiind catalizat de o tirozin-hidroxilaz dependent de

136

cupru.Dopa este apoi oxidat la Dopa-chinon i n final prin polimerizare trece n melanin. - Albinismul reprezint un grup de sindroame clinice caracterizate prin deficit de melanin, localizate la ochi i piele. Semnele clinice comune pentru toate cele zece forme de albinism uman oculocutanat includ scderea pigmentrii pielii i ochilor; diferenierea se bazeaz pe caracteristicile lor clinice, biochimice, ultrastructurale sau genetice. Enzima defectiv n albinism este tirozin-hidroxilaza din melatocite. 7.2.2.3.5.4.Biosinteza hormonilor tiroidieni Glanda tiroid secret doi derivai derivai ai tirozinei: tiroxina sau T 4 (3,3,5,5-tetraiodtironin) i T 3 (3,35-triiodtironin). Hormonii se formeaz n celulele foliculare din glanda tiroid prin iodurarea resturilor de tirozin din tiroglobulin. Monoiodtirozina (MIT) i diiodtirozina (DIT) formai reacioneaz pentru a forma T 3 i T 4 .
I HO CH2 CH + NH3 _ COO

DIT
HO

I O

I CH2 CH COO + NH3 _

MIT Tirozina
I HO

T3

DIT
CH2 CH + NH3 _ COO HO

I O

I CH2 CH COO + NH3 _

I DIT

I T4

Tiroglobulina iodurat este pstrat n lumenul foliculilor tiroidieni i hidrolizat pentru eliberarea T 3 i T 4 care trec n circulaie. T 3 este forma activ fiind apt s se fixeze pe receptorii din nucleii celulari. Aproximativ 2/3 din T 3 plasmatic rezult prin deiodurarea T 4 n esuturile periferice. 7.2.2.3.6. Metabolismul triptofanului

137

Triptofanul se degradeaz pe calea kinurenin - acid antranilic, prin care patru atomi de carbon sunt convertii la acetoacetil-CoA i doi, la acetilCoA. Calea este important deoarece servete att pentru degradare ct i pentru convertirea triptofanului la nicotinamid.

O CH2 N H CH COO + NH3

Triptofan oxigenaza Fe O2

CH2 CH NH3
+

COO

NHCHO

Triptofan
O Kinureninformilaza H2 O _ HCOO C NH2 CH2 CH NH3
+

N-Formil-kinurenina _
Kinureninhidroxilaza NADPH O2

COO

Kinurenina
O C NH2 OH CH2 CH
+ NH3

COO

Kinureninaza P5 P H2 O Alanin\ OH

COO NH2

3-Hidroxi-kinurenin\
_ COO

3-Hidroxi-antranilat Vit.PP (NAD^ ) 3% 97%

CO2

3-Hidroxi-antranilatoxidaza O2

OHC

CH C HC _ OOC NH3

Acetoacetil-CoA

2-Acroleil-3-aminofumarat

Sub aciunea triptofan oxigenazei (triptofan-pirolaz) are loc clivarea nucleului indolic prin oxidare rezultnd N-formil-kinurenina, care prin hidroliz pierde radicalul formil i trece n kinurenin. Aceasta prin hidroxilare formeaz 3-hidroxi-kinurenin. Kinureninaza care ndeprteaz hidrolitic alanina din 3-hidroxi-kinurenin este dependent de piridoxal-5-fosfat (P-5-P). n deficit de vitamina B6, kinurenina nu se mai degradeaz pe cale normal, ci este convertit la acid xanturenic, compus identificat n urin.
O C NH2 OH CH2 CH _ COO + NH3 OH _

+ NH4

N OH

COO

3-Hidroxi-kinurenin\

Acid xanturenic

138

Triptofanul este precursor pentru NAD , serotonin i melatonin. 7.2.2.3.6.1.Biosinteza nicotinamidei (vitamina PP) Biosinteza vitaminei PP este comun cu calea de degradare pn la acidul 2acroleil-3-amino fumaric. Mai departe 97% din compus se degradeaz la acetil-CoA i numai 3% este convertit la acid nicotinic. Din 60 mg triptofan se sintetizeaz 1 mg acid nicotinic. Deficitul de vitamin B6 afecteaz biosinteza biosinteza vitaminei PP prin blocarea aciunii kinureninazei, condiie ce favorizeaz pelagra. 7.2.2.3.6.2.Biosinteza serotoninei Serotonina este sintetizat n neuroni, n glanda epifiz i n celulele cromafine din tractul gastrointestinal.
Triptofanhidroxilaza O

CH2 N H

CH NH2

COOH

HO N H

CH2

CH NH2

COOH

NADPH+H+

Triptofan
HO CH2 N H

NADP+
CH2 NH2

5-Hidroxi-triptofan

CO2

Serotonin\

Triptofan-hidroxilaza este etapa limitant a sintezei necesitnd tetrahidrobiopterin. Decarboxilarea este realizat de aceeai enzim care decarboxileaz Dopa la dopamin. Serotonina este stocat n granule asociat cu ATP. Serotonina (enteramina sau trombocitina) este vasoconstrictor i stimulator al musculaturii netede. Ea particip la reglarea activitii nervoase superioare. Catabolismul serotoninei duce la formarea de derivai indolici care sunt excretai prin urin sub form de sulfo i glucuronoconjugai.

139

Serotonina

Monoam inoxidaz\ (MAO)

O2 NH3

HO N H

CH2 COOH

Acid 5-OH-indol-acetic

CH3

H3CO N H

CH2 COOH

Acid 5-Metoxi-indolacetic

7.2.2.3.6.3.Biosinteza melatoninei Melatonina este un hormon produs de glanda epifiz care are efecte asupra sistemului hipotalamus-hipofiz. Se formeaz prin acetilarea la azot a serotoninei, urmat de metilarea la gruparea OH din poziia 5.
HO CO2 N H serotonin\ CH2 CH2 NH2 Acetil CoA CoA HO N H CH2 NH C O CH3 5-HO,N-acetiltriptamin\ SAM SAH H3CO N H CH2 NH C O CH3 Melatonin\

Trp

7.2.2.3.6.4.Anomalii n metabolismul triptofanului - Sindromul carcinoid (argenta carcinoma) este produs de o proliferare benign sau malign a celulelor argentofine (care produc serotonin) din intestin i se caracterizeaz prin producerea de cantiti mari de serotonin. Sindromul este considerat ca o anomalie n metabolismul triptofanului deoarece o cantitate mai mare de triptofan este metabolizat pe calea hidroxiindolului.

140

8. METABOLISMUL NUCLEOTIDELOR PURINICE SI PIRIMIDINICE Nucleoproteinele sunt heteroproteine formate din acizi nucleici (polinucleotide) ataai la histone sau protamine. Nucleotidele sunt componeni eseniali ai celulei, fcnd parte din componena multor biomolecule fundamentale i participnd la numeroase procese metabolice. Astfel, nucleotidele intr n structura acizilor nucleici ARN i ADN, n componena unor coenzime (NAD(P) +, FAD, CoASH), particip ca donori de energie n reaciile metabolice (ATP), ca transportori de intermediari n reaciile de biosintez (CDP, UDP) etc. Fondul metabolic de nucleotide necesar celulei poate fi asigurat prin dou procese: sinteza de novo a nucleotidelor i reutilizarea bazelor azotate i a nucleotidelor ce rezult prin degradarea celular a acizilor nucleici. 8.1. Metabolismul purinnucleotidelor 8.1.1. Biosinteza purinnucleotidelor 8.1.1.1 Biosinteza de novo a purinnucleotidelor Pentru biosinteza nucleului purinic, doi atomi de azot, N3 i N9, provin din gruparea amidic ai glutaminei, N1, din aspartat, azotul N7 mpreun cu C4 i C5, din glicin, C2 i C8 din formiat, sub form de N10-formil-FH4 i respectiv N5, N10-metenil-FH4, iar C6 din CO2.
CO2 C N1 6 5 C C N10-Formil-FH
4

Glicin\ N
7 8C

Aspartat

N H

N5-N10-Metenil-FH4 N

Glutamin\

Cile de sintez ale acizilor adenilic (AMP) i guanilic (GMP) sunt PRPPAmidocomune pn la O inozinic. transferaza PO H2C O NH2 3 P O H2Cde la riboz-5-P (R-5P)PO H2C acid H O H 1 sintetaza 2
H H OH R5P O .......................... 11 HN N N N R5P Acid inozinic AMP GMP ADP ATP GTP H OH OH Mg2+ ATP AMP H H OH H O OH P P Gln H PPa Glu H OH H H OH

PRPP

5'-FosfoRibozil-Amino

GDP

141

n calea de sintez a nucleotidelor, mai multe etape pot fi inhibate specific de unii ageni terapeutici: azaserina, un antagonist al glutaminei, diazonorleucina, 6mercaptopurinele i acidul micofenolic. Reglarea sintezei purinnucleotidelor se exercit n principal la nivelul primei reacii, catalizat de PRPP-fosforibozil-pirofosfat a crei activitate depinde att de capacitatea de utilizare a ribozei-5P (R-5P) (ce depinde de concentraia R-5P) ct i de concentraia purin-nucleotidelor care acioneaz ca reglatori alosterici. Activitatea ei este reglat prin mecanism feed-back de ctre produii finali: AMP, ADP, GMP i GDP. Sinteza de novo a purinnucleotidelor are loc n ficat, organ care reprezint furnizorul de baze purinice i nucleozide pentru esuturile ce nu au capacitatea de sintez sau au numai calea de reutilizare a lor. 8.1.1.2. Reutilizarea purinelor (Purine Salvage Pathways) se petrece prin dou mecanisme generale: Mecanismul principal const n fosforilarea bazelor purinice libere, ce necesit PRPP, proces realizat de dou enzime: prima, adeninfosforibozil-transferaza (APRT), fosforileaz adenina cu PRPP pentru a forma AMP.
APRT PRPP PPa

Adenina

AMP

A doua enzim, hipoxantin-guanin-fosforibozil-transferaza (HGPRT), mult mai activ, catalizeaz fosforilarea hipoxantinei i guaninei:

PRPP Hipoxantina HGPRT Guanina PRPP

PPa IMP

GMP PPa

142

Absena total sau aproape total a HGPRT determin sindromul LESCHNYHAN, care se manifest prin tulburri neurologice foarte grave, deficien mental, agresivitate, hiperuricemie, tendin la automutilare. Reutilizarea ribonucleozidelor este realizat la om numai de adenozinkinaz, enzim ce nu este capabil s fosforileze guanozina i inozima.

Adenozina

Adenozin-kinaza ATP ADP

AMP

Spre deosebire de aceasta, deoxicitidinkinaza fosforileaz att deoxicitidina, ct i deoxiadenozina i deoxiguanozina la dCMP, dAMP i dGMP. 8.1.1.3. Biosinteza deoxiribonucleotidelor se poate realiza prin reducerea direct la C2 al ribozei. Reacia se petrece dup ce au fost sintetizai nucleoziddifosfaii O O NH2 purinici sau pirimidinici, numai atunci cnd are Purin-ribonucleotid- ADN pentru diviziunea loc sinteza de AdenozinN N fosforilaza HN HN N celular. deam inaz\ N 8.1.2. Catabolismul purinnucleotidelor 5' HOH2C HOH final Hipoxantina O Produsul 2C O al catabolismului purinnucleotidelor, n organismul uman, este 1' acidul uric. Peste 99% din acidul uric se formeaz din inozina i guanozina ce nu sunt HO OH HO OH fosforilate de purinnucleotid fosforilaz din calea de reutilizare. xantinO2 Inozina oxidaza Guanina Adenozina i hipoxantina ce rezult din nucleozidele respective prin pierderea gruprii amino i a ribozei-1-P (R-1-P) sunt convertite la acid uric (Mo,Fe) pe calea xantinei prin reacii catalizate de guanaz i xantinoxidaz.
O HN H2N N O N N Pa R1P Purinnucleotidfosforilaza O HN H2N N N N H Guanaza NH3 HN O N O N N H N N NH3 N N Pa R1P N N H

HOH2C

Guanina

Xantina

HO OH Guanozina

143

O mic cantitate de acid uric se formeaz prin degradarea acizilor nucleici sub aciunea florei microbiene intestinale de unde este absorbit i trecut n snge. Primatele inferioare i alte animale posed o enzim, numit uricaz, care hidrolizeaz acidul uric la alantoin, compus mult mai solubil. Aciunea antioxidant a acidului uric la om se exercit prin trecerea neenzimatic la alantoin. Se consider c uratul ar nlocui acidul ascorbic pe care primatele i omul nu-l pot sintetiza, el fiind aproximativ la fel de eficace ca i vitamina C. Acidul uric este un acid destul de tare care la pH fiziologic se gsete sub form de monourat de Na.

Acidul uric este foarte puin solubil la pH acid. Sarea sa de Na este mai solubil (7 mg% dl ser la 37 0C). Concentraia plasmatic de acid uric este de aproximativ 6 mg% dL.

144

La nivelul tubilor renali, acidul uric este iniial reabsorbit din filtratul glomerular, fiind apoi eliminat prin secreie tubular. Afeciunea caracteristic dereglrii metabolismului purinnucleotidelor este guta, o maladie destul de rspndit, caracterizat prin hiperuricemie 7 mg % dL ser. Creterea concentraiei de acid uric duce la depunerea de cristale de acid uric n articulaii (artrita gutoas), n rinichi (nefrolitiaza uratic) i n alte esuturi sub form de tofi. Hiperuricemia poate fi cauzat de un consum exagerat de carne sau de o tulburare genetic n sinteza ribonucleotidelor. Guta metabolic primar. Cauza poate fi activitatea crescut a PRPPsintetazei, fie insuficiena mecanismelor de reglare a sintezei (datorit rezistenei PRPP-amino transferazei la inhibiia feed-back), fie perturbrii reutilizrii purinelor. n unele cazuri, producia de urai este normal dar exist un defect nnscut n mecanismele de secreie tubular a acidului uric guta primar renal. Guta metabolic secundar este asociat unor boli ca urmare a unui metabolism intens al acizilor nucleici cum ar fi leucemii, iradierea cu raze X, defect de glucoz-6-fosfataz (glicogenoza de tip I sau boala von Gierke). Cele mai bune rezultate n tratarea gutei se obin prin administrarea allopurinolului, inhibitor competitiv pentru xantin-oxidaz (XO).
O HN N N H N

Allopurinol

8.2. Metabolismul pirimidinnucleotidelor 8.2.1. Biosinteza de novo a pirimidin nucleotidelor Calea de sintez a pirimidinnucleotidelor se deosebete de a purinnucleotidelor prin faptul c D-riboza se ataeaz dup ce inelul de pirimidin a fost sintetizat.

Gln N1 C2 CO2

C
6 5C 4

Asp

145

pirimidinice sunt utilizai ca ageni Sinteza este iniiat prin terapeutici n tratamentul formarea carbamoil-P-ului din neoplasmului, avnd n vedere glutamin, ATP i CO2, reacie ce are turnoverul ridicat al nucleotidelor n loc n citoplasm. esuturile canceroase. O serie de compui ce pot inhiba sinteza nucleotidelor Astfel, 5-fluoruracilul, analog structural al uracilului, reacioneaz direct cu PRPP, formnd 5-fluoruridin-5-monofosfat (F-UMP) sau poate fi mai nti convertit la fluoruridin i apoi fosforilat la F-UMP. Reglarea biosintezei pirimidinnucleotidelor. Primele dou enzime implicate n biosinteza pirimidinnucleotidelor sunt modulate alosteric de UTP, nucleotide purinice, fosforibozil-pirofosfat (PRP) i CTP. Calea de reutilizare a pirimidinnucleotidelor Reutilizarea pirimidinelor libere este puin important n celulele animale. n schimb au fost identificate enzime active ce pot converti pirimidinribonucleozidele la nucleotidele respective. Deoarece produii de catabolism ai pirimidinelor sunt foarte solubili n ap, n foarte puine situaii poate fi evideniat o hiperproducie de pirimidine. Tulburri n biosinteza pirimidinnucleotidelor Aciduria orotic ereditar tip I este determinat de deficiena a dou enzime: orotidil-fosforibozil-transferaza i orotidil-decarboxilaza. Aciduria orotic ereditar tip II este determinat numai de defectul de orotidil-decarboxilaz Manifestrile clinice constau ntr-o anemie sever, rezistent la vitamina B12, acid folic, vitamin B6 i vitamin C. Ca urmare a dublului blocaj are loc o acumulare masiv de acid orotic care poate ajunge n urin pn la 1000 ori valoarea normal. Ambele tipuri rspund la tratamentul oral cu uridin sau UMP i CMP. 8.2.2. Catabolismul pirimidinnucleotidelor are loc n principal n ficat, rezultnd o serie de produi foarte solubili: CO2 i NH3, -alanin i acid aminoizobutiric (BAIB). Excreia de acid BAIB crete n leucemie i dup iradierea cu raze X, datorit distruciei de ADN.

9. METABOLISMUL CROMOPROTEINELOR Cromoproteinele porfirinice sunt formate dintr-o protein i o grupare prostetic, reprezentat de o structur porfirinic. Porfirinele sunt compui ciclici, formai din patru nuclee pirolice unite prin legturi metenil (-C= ). O proprietate caracteristic a porfirinelor este

146

formarea de complexe cu ionii metalici, care se leag de atomii de azot din nucleele pirolice. Printre porfirinele naturale care ndeplinesc funcii biologice importante se numr: hemoglobina, mioglobina, citocromii, catalaza, peroxidazele, triptofanpirolaza, clorofila etc., hemoglobina fiind porfirina major din organism. 9.1. Biosinteza hemoglobinei Sinteza hemoglobinei are loc n celulele eritropoietice din mduva osoas, ficat i splin. Biosinteza hemului se realizeaz din succinil-CoA i glicocol. ntr-o prim reacie, n mitocondrie, are loc condensarea succinil-CoA cu glicocolul sub aciunea -aminolevulinat-sintazei (ALA-sintaza) concomitent cu eliminarea CO2 i formarea acidului -aminolevulinic (ALA). Reacia necesit vitamina B6 pentru activarea glicinei (este posibil ca glicina s se fixeze la piridoxal-5-fosfat (P-5-P) prin legtur de baz Schiff). Activitatea -ALA controleaz ntreaga sintez. n continuare, prin condensarea a dou molecule de acid -amino-levulinic (reacia 2), se formeaz un nucleu pirolic, porfobilinogen (PBG). Din patru molecule de porfobilinogen (reacia 3) se formeaz un tetrapirol linear care rmne legat de enzim. _ _ COO Tetrapirolul linear se ciclizeaz, prin pierderea gruprii amino la COO + uroporfirinogen III, n3N este H care aranjamentul lanului CH2 asimetric (reacia 4). 1 -ALA-sintaz\ CH2 Reacia se petrece prin CH cooperarea a (P P) enzime, uroporfirinogen sintaza i dou + ; 5 CH2 2 CH2 _ cosintaza. COO CO2 nucleele pirolice pentru a se CRolul cosintazei este de a izomeriza unul din C CH2 NH2 SCoA HSCoA forma O uroporfirinogen III. n aceast reacie se formeaz i mici cantiti de O izomer simetric, uroporfirinogen I, biologic inactiv.
Succinil-CoA Glicocol Acid-Am inolevulinic (ALA) _ COO CH2 CH2 C CH

_ COO CH2 C H2 C O CH2 NH2 -ALA +

_ COO (CH2)2 O C H CH H N H -ALA 2 ALA-dehidrataz\ 2 H2O

_ COO CH2 C C CH2 N H NH2

Porfobilinogen (PBG)

4PBG

Uroporfibilinogen 3 sintaz\ 3NH3

A H2N CH2 N H

P CH2

A N H

P CH2

A N H

P CH2

A N H

Tetrapirol liniar

147

A P Uroporfirinogen sintaz\ C H2 H2C ^ A N A H 4 cosintaz\ N H HN H N P C H2 P NH3 H2C P A

M Uroporfirinogen- M 5 decarboxilaza 4 CO 2 P P N H H N

P M HN P M

NH

Uroporfirinogen III

Coproporfirinogen III
V M M Protoporfirinogen- M 7 oxidaza V M 6H P P N NH N M HN V V M

M Coproporfirinogen- M 6 oxidaza 2 CO2 4 H2 P P N NH N

HN

Protoporfirinogen IX M M 8 Ferochelataz\ Fe2^ P P Hem N N Fe2+ N N M V V M

Protoporfirina IX

A - acid acetic P - acid propionic M - metil V - vi

148

Prin decarboxilarea resturilor de acid acetic din uroporfirinogen III se ajunge la coproporfirinogen III (reacia 5), apoi prin decarboxilarea i dehidrogenarea a dou resturi de acid propionic (reacia 6) protoporfirinogenul IX, sub aciunea porfirinogen-oxidazei (reacia 7) se formeaz protoporfirina IX care + fixeaz Fe2 sub aciunea hem-sintetazei (ferochelatazei) (reacia 8) se ajunge la hem. Ultimele dou reacii, formarea protoporfirinei IX i a hemului, au loc n + mitocondrie, ionul de Fe2 necesar activitii ferochelatazei este transportat n plasm de transferin, o protein care leag doi ioni ferici. Reglarea sintezei hemoglobinei Activitatea -ALA-sintetazei este reglat n principal prin inhibiia feedSuccinil-CoA ^ back exercitat de hem Glicocol care represeaz sinteza enzimei.
1

ALA-sintaza

9.1.1.Tulburrile metabolismului hemului. Porfirii ALA Porfiriile constituie un grup heterogen de afeciuni, caracterizate prin ALA-dehidrataza 2 excreia de porfirine sau precursori porfirinici. Unele dintre porfirii sunt motenite, altele dobndite. Porfobilinog n (PBG) e Porfiriile se clasific n porfirii eritropoietice, hepatice, eritropoietice i urin\: PBG^ 3 Uroporfirinogen I - I Porfiria acut\ interm itent\, PAI hepatice,sintaza n funcie dedureri abdominale, simptome neuropsihice organul cel mai afectat. (hepatic\) uroporfirinogen^ Au fost descrise ase tipuri de porfirii datorate defectelor enzimelor de la Te trapirol liniar etapa 3-8.
4

Uroporfirinogen IIIcosintaza Uroporfirinogendecarboxilaza

II Porfiria eritropoietic\ congenital\ (eritropoietic\) urin\: PBGuroporfirinogen^ f\r\ fotosensibilitate urin\: uroporfirin\^ PBGurin\: uroporfirinogen^ PBG^ fecale: coproporfirinogen^

Uroporfirinog n III e
5

III Porfiria cutanat\ tardiv\ (hepatic\) Fotosensibilitate

Coproporfirinog n III e
6

Coproporfirinogenoxidaza

IV Coproporfiria ereditar\ (hepatic\) Fotosensibilitate, dureri abdom inale, deregl\ri neuropsihice

Protoporfirinog n III e V Porfiria m (hepatic\) ixt\ 7 ProtoporfirinogenFotosensibilitate, dureri abdom inale, oxidaza deregl\ri neuropsihice Protoporfirina III (IX)
8

urin\: PBG^ uroporfirinogen^ fecale: protoporfirinogen^

Ferochelataza Fe2^ He m Protein\

VI Protoporfiria (eritropoietic\) Fotosensibilitate

fecale: protoporfirin\^ eritrocite: protoporfirin\^

He oprote m in\

149

9.2. Degradarea hemoglobinei (Bilirubinogenez) Bilirubina se formeaz n organism prin desfacerea oxidativ a inelului porfirinic din Hb i alte hemoproteine. Locul de formare al bilirubinei este reprezentat de celulele sitemului reticuloendotelial din splin, ficat (celulele Kupfer), ganglioni limfatici i macrofagele din diverse esuturi. Sursa principal de bilirubin este Hb hematiilor mbtrnite. Mecanismul enzimatic al formrii bilirubinei implic mai nti aciunea unui sistem enzimatic microsomal hemoxigenaza microsomal, care n prezena oxigenului molecular i a NADPH desface nucleul porfirinic din hem cu eliberarea Fe, C sub form de CO i biliverdin. n activarea O2 intervine citocromul P450, iar pentru transferul H de pe NADPH intervine o flavoprotein. Fe este preluat de feritin n vederea reutilizrii lui n resinteza hemoproteinelor. Feritina poate stoca pn la 4.500 Fe3+/molecul. Biliverdina, compus colorat intens n verde, este n continuare redus sub aciunea biliverdin-reductazei la bilirubin. Alturi de bilirubin se formeaz i mici cantiti de compui mono- i dipirolici bilifuxina i mezobilifuxina. Viteza de formare a bilirubinei depinde de activitatea hemoxigenazei microsomale, care este etapa limitant a procesului. Biliverdin-reductaza este totdeauna n exces, de aceea nu se acumuleaz biliverdin (pigment verde).

150

Bilirubina format n celulele sitemului reticulo-endotelial este un pigment galben, insolubil n ap. Fiind liposolubil, poate ptrunde cu uurin prin membranele celulare de natur lipoproteic. Bilirubina difuzeaz din celule n snge unde se fixeaz pe albumin, formnd fracia plasmatic a bilirubinei cunoscut sub denumirea de bilirubin indirect sau neconjugat. Prin fixarea pe albuminele serice, bilirubina este reinut n lumenul vaselor i transportat la ficat. Aici, datorit fenestraiilor largi ale capilarelor sinusoidale, bilirubina este preluat de pe albumin de ctre celulele hepatice. Procesul de captare este facilitat de existena unor proteine transportoare ligandine proteina I i proteina Z. Datorit faptului c bilirubina este liposolubil, ea ar putea difuza prin membrana hepatocitului i s se rentoarc n plasm. Acest proces este blocat n momentul n care bilirubina este conjugat cu acidul glicuronic. Conjugarea este catalizat de bilirubin-glucurono-transferaza, enzim care particip la reacie sub form activ, localizat la nivelul microzomilor din hepatocit. Acidul glucuronic, sintetizat din glucoz se activeaz la acid UDP-glucuronic (UDPGA).

151

Formarea bilirubin-diglucuronidului poate avea loc i n regiunea canalicular biliar a membranei hepatocitare printr-o UDP-glucuronil-transferaz similar. O mic parte din bilirubin rmne sub form de monoglucuronid. Prin conjugare bilirubina devine hidrosolubil, fapt ce favorizeaz eliminarea ei prin bil i meninerea ei n soluie pe cile biliare intra- i extrahepatice. Secreia bilei n canaliculele biliare este un proces biologic activ, energodependent i saturabil. Preluarea bilirubinei conjugate se realizeaz tot prin participarea unei proteine acceptoare specifice. Eliminarea bilirubinei n bil, mai ales curgerea ei prin cile biliare, depinde i de fluxul apos al bilei. Un adult sntos elimin zilnic prin bil 200 300 mg bilirubin (1,0-1,2 mg/dL ser). n poriunea final a ileonului i mai ales n colon are loc un proces de hidroliz a bilirubinei conjugate sub aciunea unei -glicuronidaze bacteriene i n acelai timp are loc o reducere a bilirubinei rezultnd o serie de compui tetrapirolici incolori urobilinogeni (stercobilinogeni). Urobilinogenul este forma de eliminare care n contact cu aerul este oxidat la urobilin (stercobilin), colorat.

152

La nivelul colonului, o mic cantitate de urobilinogen se reabsoarbe, este trecut n circulaie, ajunge la ficat i excretat n bil, proces dependent de energie (circuit enterohepatic). O mic parte (0-4 mg/24h) scap n vena suprahepatic i apare n urin, unde prin oxidare trece n urobilin. Cantitile acestea de urobilinogen nu pot fi decelate cu reactiv Erlich. n cazul formrii de bilirubin n exces (icter hemolitic) i a eliminrii crescute de pigmeni biliari n intestin se formeaz cantiti mari de urobilinogen care pot depi capacitatea de captare i excreie a hepatocitelor i n consecin, apar n urin cantiti detectabile. Urobilinogenuria apare i n caz de afeciuni hepatocelulare, cnd mecanismul activ de captare i transport a urobilinogenului de ctre hepatocite este perturbat. Creteri ale eliminrilor urinare de urobilinogen au loc i n cazuri de proliferare microbian intestinal, n unele cazuri de constipaie, cnd prin stagnarea coninutului intestinal, crete posibilitatea de absorbie a urobilinogenului din colon. Cantitatea maxim de urobilinogen urinar se depisteaz ntre orele 14-16 probabil datorit faptului c dup masa de prnz se ajunge la concentraia cea mai mare de bil n intestin. Eliminarea urinar de urobilinogen se face prin filtrare glomerular i secreie tubular. Se poate spune deci c urobilinogenuria depinde de cantitatea absorbit n intestin, de funcia hepatic i de funcia renal. Bilirubina direct i indirect Msurarea bilirubinei directe i indirecte servete pentru stabilirea naturii icterului. - Icter prehepatic (icter hemolitic) - n unele boli sau n intoxicaii se produce degradarea unor cantiti mai mari de eritrocite i deci eliberarea unei cantiti mai mari de hemoglobin. Bilirubina indirect care se formeaz n exces, transportat la ficat depete capacitatea de conjugare a celulei hepatice. Rezultatul este creterea concentraiei de

153

bilirubin n plasm, nsoit de creterea produciei de urobilinogen, ce apare n cantiti mari n urin. Astfel de situaii se ntlnesc i la nounscuii cu incompatibilitate de Rh. De obicei aceti copii sunt prematuri i pe lng problemele hemolitice de cele mai multe ori prezint i deficit de enzime necesare pentru glucuronoconjugare. Creterea bilirubinei poate depi de 16-20 ori valoarea normal i este n principal indirect. - Icter hepatic. n bolile difuze ale ficatului, cum ar fi hepatitele i cirozele, celulele hepatice pierd capacitatea de captare a bilirubinei din snge i capacitatea de conjugare i de aceea nivelele bilirubinei sunt de obicei crescute, cu creterea fraciunii indirecte, dar uneori poate crete i bilirubina direct deoarece lezarea celulei hepatice permite totui trecerea glucuronidului n circulaie. Urobilinogenul este crescut. - Icter posthepatic (icter prin obstrucie) Blocarea cilor biliare mpiedic bilirubina de a prsi celula hepatic. Consecina primar este diminuarea formrii urobilinogenului i astfel absena lui n urin. Fecalele sunt decolorate din cauza lipsei stercobilinei. Formarea continu a bilirubinei duce la creterea bilirubinei totale n ser (la nceput, bilirubina direct, care apare i n urin), ducnd la apariia unui pigment brun n urin. n snge se va gsi att bilirubin direct ct i indirect. Bilirubina care apare n urin este n cea mai mare parte direct, probabil din cauza faptului c n urin se excret numai bilirubin conjugat, mai solubil. De subliniat c bilirubina n urin apare atunci cnd exist o cretere a bilirubinei directe n ser. Dozarea bilirubinei totale este considerat util i n detectarea unui icter latent, cnd valorile sunt cuprinse ntre 1,5-2 mg/dL ser. Hiperbilirubinemia poate fi ntlnit i n alte stri de boal care implic hemoliza, cum ar fi bolile infecioase, anemia pernicioas, sau hemoragiile. Evoluia unui icter manifest poate fi urmrit prin dozri repetate ale bilirubinei n ser: - creterea concentraiei bilirubinei n ser este semn nefavorabil, - scderea progresiv a bilirubinei serice indic o ameliorare a bolii hepatice sau a obstruciei cilor biliare.

154

Abrevieri folosite in text

A = Adenin -AA = Amino acid ACAT = Acil-CoA: Colesterol-acil-transferaza ACP = Proteina transportoare de acil (Acyl carrier protein) ACTH = Corticotropin ADN = Acizi deoxiribonulcleic ADH = Alcool dehidrogenaz ADP = Acid adenozin difosforic AGL = Acizi grai liberi Ala = Alanin ALT (GPT) = Alanin transaminaz AMP = Acid adenozin monofosforic AMPC = Adenozin monofosfatul ciclic (35-AMP)

155

APRT = Adenozin-fosforibozil transferaz Arg = Arginin ARN = Acizi ribonulcleic ARNm = ARN mesager ARNr = ARN ribozomal ARNt = ARN de transfer AST (GOT ) = Aspartat transaminaz Asn = Asparagin Asp = Acid aspartic ATP = Acid adenozin trifosforic BAIB = Acid aminoizobutiric C = Citozin CBP = Proteina care leag calciul (Calcium binding protein ) CDP = Citidin difosfat Cit. = Citocrom CoA (CoASH) = Coenzima A CoQ = Coenzima Q (ubichinon) CPK (CK) = Creatin fosfo kinaz CTP = Citidin trifosfat Cys = Cistein 1,25-(OH)2-D3 = Calcitriol (1,25 dihidroxi D3) DIT = Diiodotirozin DOPA = Dihidroxifenilalanin 1,3 DPG = 1,3 Difosfoglicerat DHAP = Dihidroxiaceton fosfat F1,6 DP = Fructoz 1,6 difosfat F1,6 DP-aza = Fructoz 1,6 difosfataz F6P = Fructoz-6-fosfat F6P-aza = Fructoza-6-fosfataz FAD = Flavin adenin dinucleotidul FADH2 = Flavin adenin dinucleotidul forma redus FFK = Fosfo-fructo kinaz FH4 = Acid tetrahidrofolic FMN = Flavin adenin mononucleotid G = Guanin GA3P = Gliceraldehid-3 fosfat GA3-PDH = Gliceraldehid-3 fosfat dihidrogenaz G6P = Glocoza-6-fosfat G6P aza = Glocoz-6-fosfataz GDP = Guanozin difosfat Glu-DH = Glutamat dehidrogenaz

156

Gln = Glutamin Glu = Acid glutamic Gla = Acid -carboxi glutamic Gly = glicin GK = glucokinaz GOT (AST) = Glutamic oxalacetic transaminaz GPT (ALT) = Glutamic piruvic transaminaz GSH = Glutation (forma redus) GSSG = Glutation (forma oxidat) GSH -Px= Glutation peroxidaz GTP = Guanozin trifosfat Hb = Hemoglobin HDL = Lipoproteine cu densitate mare HGPRT = Hipoxantin-fosforibozil-transferaz HK = Hexokinaz HMG-CoA = Hidroxi-metil-glutaril-CoA Hyl = Hidroxilizin Hyp = Hidroxiprolin Hys = Histidin ICDH = Izocitrat dehidrogenaz Ile = Izoleucin IgA = Imunoglobulina A IgD = Imunoglobulina D IgE = Imunoglobulina E IgG = Imunoglobulina G IgM = Imunoglobulina M -KA = Ceto acid -KG = Acid ceto glutaric -KGDH = Cetoglutarat dehidrogenaz LCAT = Lecitin:Colesterol- acil-transferaza Leu = Leucin LDL = lipoproteine cu densitate scazut LDH = Lactat dehidrogenaz Lys = Lizin MAO = Monoamin-oxidaz MDH = Malat dehidrogenaz Met = Metionin MIT = Monoiod tirozin N5-CH3-FH4 = N5-CH3-tetrahidrofolat N5-formil-FH4 = N5-formil-FH4-tetrahidrofolat

157

N10-CH3-FH4 = N10-CH3-FH4 -tetrahidrofolat N10-metenil-FH4 = N10-metenil-FH4 tetrahidrofolat NAD (NAD+) = Nicotin adenin dinucleotid(forma oxidat) NADH (NADH + H+) = Nicotin adenin dinucleotid (forma redus) NADP (NADP+) = Nicotin adenin dinucleotid fosfat (forma oxidat) NADPH (NADPH + H+) = Nicotin adenin dinucleotid fosfat (forma redus) Pa = Fosfat anorganic PDH = Piruvat dehidrogenaz PEP = Fosfoenol piruvat PEP-carboxikinaza = Fosfoenol piruvat-carboxikinaza 3-PG = Acid 3-fosfogliceric PGK = Fosfoglicerat kinaz PGM = Fosfogliceratmutaz Phe = Fenilalanin PHI = Fosfohexo-izomeraz PK = Piruvat-kinaz PKU = Fenilcetonurie Pro = Prolin PRPP= Fosforibozil-pirofosfat PTH = Parathormon OCT = Ornitin carbamoil-transferaz QPRT = Chinoleat-fosforibozil-transferaz RBP = Proteina de legare a retinolului(Retinol binding protein) R-1-P = Riboz-1-fosfat SAM = Sulf-adenozil-metionin SAH = Sulf-adenozil-homocistein Ser = Serin SHMP = untul hexoz-monofosfatilor SNC = Sistem nervos central Succ.DH = Succinil dehidrogenaz T = Timin Thr = Treonin Trp = Triptofan TPP = Tiamin pirofosfat Tyr = Tirozin U = Uracil UDP = Uridin difosfat

158

UDP-G = Uridin difosfat-glucoza UTP = Uridin trifosfat U.V. = Radiaii ultraviolete Val = Valin VLDL = lipoproteine cu densitate foarte scazut XO = Xantin oxidaz