Cuprins

1.Micotoxinele.................................................................................................................................2
1.2 Factorii care influenteaza dezvoltarea micotoxinelor...........................................................3
2.Aflatoxina.....................................................................................................................................3
2.1.Particularitati..........................................................................................................................3
2.2.Clasificare..............................................................................................................................5
2.3.Proprietatile fizico-chimice ale aflatoxinelor........................................................................5
2.4.Aflatoxinele in alimente........................................................................................................6
3.Metode pentru decelarea aflatoxinelor........................................................................................11
3.1. Generalitati..........................................................................................................................11
3.2.Surse de contaminare...........................................................................................................11
3.3.Procedee pentru decelarea aflatoxinelor..............................................................................13
3.4.Metode de combatere...........................................................................................................17
4.Efecte asupra animalelor i omului.............................................................................................17
5.Concluzii.....................................................................................................................................20
Bibliografie:...................................................................................................................................22

1.Micotoxinele

Termenul de micotoxin vine de la cuvntul grecesc mycos care inseamn ciuperc i

de la cuvntul latin toxicum care nseamn otrav. Ele desemneaz metabolii secundari
secretai de mucegaiurile care aparin n principal genurilor Aspergillus, Penicillium i Fusarium,
prezente n mod natural n aerul ambient, pe pmnt i pe culturi.
Micotoxinele sunt considerate ca fiind parte din contaminani alimentari cei mai
semnificativi n ceea ce privete impactul asupra sntii publice, securitii alimentare i asupra
economiei a numeroaselor ri. Ele se gsesc pe o mare varietate de produse alimentare nainte,
n timpul i dup recolt. Afecteaz numeroase produse agricole, anume cereale, fructele, nucile,
boabele de cafea, orezul i plantele oleaginoase, care sunt substraturi foarte sensibile la
contaminarea cu mucegaiuri i la producerea de micotoxine.
Contaminarea produselor de ctre micotoxine se realizeaz n cazul cnd ntrunesc
condiiile de mediu pe cmp pentru apariia lor, precum i procedee neadecvate de recoltare, de
stocare i de transformare atunci cnd sunt cumulate. Prin diversitatea efectelor lor toxice i a
propietilor lor sinergice, micotoxinele prezint un risc pentru consumatorul alimentelor
contaminate
Micotoxinele sunt metabolii ai mucegaiurilor cu o structur chimic mai mult sau mai
puin cunoscut care au capacitatea de a modifica structuri biologice anormale, cu efecte
degradante att la om,ct i la animale. Ele pot fi puse n eviden i n sporii acestora sau n
substratul pe care cresc fungii. Exist o varietate foarte mare de micotoxine dar nu toate sunt
importante din punctul de vedere al siguranei alimentaiei umane.
Micotoxinele cele mai importante, cu riscuri seminificative pentru sigurana alimentaiei
umane sunt aflatoxinele, fumonisinele, ocratoxinele, patulina, trichotecina i ergotoxina.

1.2 Factorii care influenteaza dezvoltarea micotoxinelor

Creterea microbian i producia de toxine este influenat de numeroi factori. Este

important s cunoatem modul n care aceti factori influeneaz calitativ i cantitativ,
dezvoltarea microorganismelor i producia de toxine pentru a putea stabili condiiile optime de
depozitare a alimentelor.
Pentru a ntelege modul n care celula microbian reacioneaz la condiiile mediului
ambient, diferii factori au fost mparii arbitrar n trei mari grupe, cu precizia c n condiiile
naturale, bioefectul acestora poate fi cumulativ sau sinergic:
Factori extrinseci-sunt factorii exogeni, ai mediului natural/industrial: temperatura,
umezeala relativ a aerului, concentraia de oxigen, radiaii, factori mecanici, factori chimici, .a.
Factori intrinseci-sunt factori dependeni de natura alimentului care influeneaz creterea
i activitatea culturilor starter dar i de natura alterrii specifice a produselor alimentarecompoziia chimic i concentraia n nutrieni, pH, rH, structura anatomic, substane chimice.
Factori implicii-sunt factori biologici determinai de relaiile ce se pot stabili ntre diferitele
grupe de microorganisme care alctuiesc microbiota alimentului respectiv.

2.Aflatoxina
2.1.Particularitati
Aflatoxina este o substan toxic cu potenial cancerigen mutant i imunorepresiv ,
produs de anumite tipuri de mucegaiuri. Prima dat aflatoxina a fost identificat la Aspergillus
flavus, mucegai de la care i s-a dat i denumirea (A.flavus - aflatoxina). A fost descoperita n
1960, moment ce a marcat aa-numita "revoluie a micotoxinelor". Aflatoxinele sunt produi de
metabolizare ai mai multor specii de mucegaiuri avnd ca structur de baz nucleul cumarinic
condensat cu unul furanic.Se cunosc 17 aflatoxine: B1, B2 ,B2a ,G1, G2, G1a , M1 ,M2 , GM1,
3

GM2 ,P1, P2, Q1, Q2, aflatoxicolul, aspertoxina. Au fost notate iniial n ordinea descresctoare
a activitii biologice i toxicitii, dup cum urmeaz: aflatoxina B1, aflatoxinele G1, G2,
aflatoxina B2 (produse n spe de Aspergillus parasiticus, extrem de toxigen, urmat de
Aspergillus flavus).

2.2.Clasificare
Aflatoxinele sunt grupate n trei categorii:

aflatoxine majore
aflatoxine monohidroxilate
aflatoxine dihidroxilate.

2.3.Proprietatile fizico-chimice ale aflatoxinelor

Structura chimic a aflatoxinelor (difuronocumarine) a fost stabilit simultan de mai
muli autori citai de Bosenberg (1970). Greutile moleculare ale aflatoxinelor variaz ntre 312
(aflatoxina B1) i 316 (aflatoxina G2). Greutile moleculare mici explic lipsa proprietilor
antigenice ale acestor substane.
ntre proprietile cu importan practic ale aflatoxinelor se citeaz termostabilitatea, o
inactivare prin cldur fiind de ateptat, numai la temperatura de peste 100C ntr-un mediu
umed i dup un timp ndelungat.
Sunt solubile n alcool etilic, alcool metilic, amestec de aceton cu ap i, cel mai bine, n
cloroform. Sunt insolubile n hexan, heptan, dietileter i eter de petrol. n soluie, n special
apoase, sunt sensibile fa de aer, lumin, inclusiv cea ultraviolet.

2.4.Aflatoxinele in alimente
Cercetriile ulterioare au identificat ali 13 metabolii toxici precum: parasiticolul,
aflatoxicolul, aflatoxinele GM1, GM2, aflatoxina P1, aflatoxina M2A i altele. Aflatoxinele
prezint fluorescen n UV. De altfel, primii patru compui izolai au fost denumii n funcie de
culoarea fluorescenei la 254 nm i 366 nm, albastr sau verde, respectiv B (blue) i G (green).
Aflatoxinele sunt prezente n multe locuri i sunt puin exigente la cretere: temperatura cuprins
ntre 6 si 50C, sursa de carbon i azot i o valoare a aw mai mare de 80%. Din acest motiv,
numeroase produse alimentare destinate consumului pot conine aflatoxine n cantiti uneori
importante: alune, porumb, gru, fistic, cacao, cafea, manioc, soia.
Aflatoxinele au de asemenea un efect puternic teratogen i pot provoca moartea n cteva
ore sau cteva zile , n funcie de cantitatea de micotoxin i sensibiltatea animalului.
Intoxicaia acut cu aflatoxin se traduce prin moarte i n general cu simptome de
depresie, anorexie, diaree, icter sau anemie. Mai presus de orice, leziunile hepatice (necrozele i
cirozele) evolueaz n final cu hepatome sau carcinome. Formele cronice ale aflatoxicozelor se
traduc printr-o scdere a performanelor de cretere a animalelor, anemie, icter lejer i o evoluie
canceroas n final. O doz de 0.2g/kg timp de 470 zile declaneaz un hematom la oareci.
Din cauza efectelor negative asupra organismului animal i uman, limitele maxime
admise de aflatoxine n produsele alimentare sunt cuprinse ntre 0.05-15 (g/kg) (tabel 1).
Aceste substane produc afeciuni grave organismelor superioare, mai ales la nivelul
ficatului i al vezicii biliare, dar nu par a avea efecte toxigene asupra bacteriilor. Dimpotriv,
bacteriile lactice precum: Lactobacillus delbrueckii (ssp. bulgaricus) i Lactococcus lactis pot
degrada aflatoxina B1. Detoxifierea i degradarea acesor toxine poate avea loc n special n
stomacul ierbivorelor (n special ovine), sub influena florei microbiene.

Aflatoxine

Nivelul maxim de aflatoxina

6

(g/kg)
B1

B1+B2+G1+G2

M1

2.0

4.0

8.0

15.0

5.0

10.0

2.0

4.0

2.0

4.0

Arahide, nuci i fructe uscate

Arahidele, nucile i fructele uscate i produsele
procesate din
acestea, destinate consumului direct sau folosite ca
ingredient alimentar
Arahidele supuse sortrii sau altui tratament
fizic,naintede a fi consumate de ctre om sau de a fi
folosite ca ingredient alimentar
Nucile i fructele uscate supuse sortrii sau altui
tratament
fizic, nainte de a fi consumate de catre om sau de a fi
folosite ca ingredient alimentar
Cereale (inclusiv hrica, Fagopyrum sp)
Cereale (inclusiv hrica) i produsele procesate din
acestea
destinate consumului uman direct sau folosite ca
ingredient alimentar
Cereale (inclusiv hrica) cu excepia porumbului,
destinate
sortrii sau altui tratament fizic, nainte de consumul de
ctre

om sau de a fi folosite ca ingredient alimentar

Porumbul destinat sortrii sau altui tratament fizic,

5.0

10.0

0.05

5.0

10.0

0.10

0.025

0.10

0.025

nainte
de a fi consumat de ctre om sau de a fi folosit ca
ingredient alimentar
Lapte (lapte batut, lapte pentru fabricarea produselor pe
baz de lapte i laptele tratat prin cldura, aa cum este
definit prin legislatia sanitara veterinara in vigoare
Urmatoarele specii de condimente:
- Capsicum spp. (fructele uscate ale acestuia, intregi sau
macinate, inclusiv chilli, pudra de chilli, cayennesi
paprika)
- Piper spp.(fructele acestuia, inclusiv piper alb sau
negru)
- Myristica fragrans (nucoara)
- Zingiber officinale (ghimbir)
- Curcuma longa (turmeric)
Alimentele pentru copii i alimentele pe baz de cereale
procesate, pentru sugari i copii de vrst mic
Formulele pentru sugari i formulele n continuare
inclusiv laptele pentru sugari i laptele n continuare
Alimente cu destinaie nutriional special destinate n
special sugarilor
Tabel 1. Aflatoxine - limitele maxime admise
8

Aflatoxinele sunt secretate de Aspergillus flavus, i un numar mare de alte mucegaiuri,

diferit penicilinii i chiar Rizopus i au ca principal producator A. flavus. Acestea se dezvolt n
semine de oleoginoase, produsele secundare de la fabricarea uleiului (srot, tre), arahide,
cereale, produse de origine animal (brnzeturi fermentate, preparate de carne). S-au constatat
hepatite acute la copiii care au fost alimentai cu nlocuitori de lapte obinui din semine
oleaginoase atacate de fungi.
Tipurile de mucegaiuri Aspergillus se dezvolta in gramezile de balegar, in fan, in cereale,
in plantele aflate in descompunere, in alimentele depozitate, transportate, stocate si prelucrate
necorespunzator. Conditiile de stocare ale cerealelor si plantelor pentru alimentatie influenteaza
dezvoltarea acestor mucegaiuri, care cresc foarte bine in medii cu umiditate si temperatura
ridicate, in lipsa ventilatiei.
Aflatoxina a fost detectata ocazional in anumite alimente:
Laptele, branzeturile ,ouale si carnea pot contine aflatoxina deoarece animalele si pasarile
au consumat furaje contaminate.
Cereale, alune, nuci, migdale, smochine, paprika, piper, condimente, seminte de bumbac,
alte tipuri de alimente si furaje. Multe alimente vechi si, mai ales, fructele pot sa dezvolte
mucegaiuri. Fructele prelucrate sub forma de sucuri pot imprastia aceste aflatoxine.
Prima dat problemele provocate de aflatoxine au fost depistate n Anglia, unde n anul
1960 au murit n cteva luni peste 2.000 de curcani. S-au fcut cercetri i rezultatele au scos la
iveal c psrile fuseser infectate cu o ciuperc microscopic ce provenea de la hrana
animalelor: nite turte de arahide care fuseser aduse de la un singur depozit care, se pare, nu
respecta condiiile de igien impuse. Ce este mai ru este faptul c, odat ce un animal a mncat
hran infectat (porumb sau alte cereale) el poate transmite toxina mai departe la omul care
consum carnea animalului respectiv. De la acel incident, n toat Europa de vest s-au impus
msuri clare pentru depozitarea alimentelor, tocmai pentru a preveni astfel de cazuri dramatice.

Conform cercetatorilor americani, cel mai inalt risc de contaminare cu aflatoxina il au

cerealele, alunele si seminele de bumbac. i frunzele de tutun stocate i prelucrate
necorespunztor ar putea conine aflatoxin, sporind n acest fel gradul de toxicitate pentru
fumtori, i aa expusi multiplelor riscuri ale viciului lor.
mbolnviri acute la oameni (aflatoxicoze) au fost raportate n ri ca Taiwan, India,
Kenya. Simptomele sunt : dureri abdominale, vom, edem pulmonar, convulsii, com i uneori
chiar moartea prin edem cerebral. Apar leziuni la nivelul ficatului, rinichilor i inmii. Expunerile
prelungite chiar la doze mici de aflatoxin pot favoriza apariia cancerelor. Unele studii apreciaz
c potenialul cancarigen al aflatoxinei este foarte mare.
Aflatoxinele sunt specifice rilor cu clim cald deoarece ele incubeaz i au o producie
maxim la temperaturi ridicate. Aflatoxina B1 prezint cea mai mare toxicitate. n laptele vacilor
care consum furaje contaminate cu aflatoxine , apar aflatoxine M n dou fraciuni M1 si M2. n
general aflatoxinele au greuti moleculare mici, sunt termostabile, dar sensibile la aer i lumin.
Ele pot fi considerate hepatotoxice, hepatocancerigene i mutagene; animalele tinere sunt mai
sensibile dect cele vrstnice, cea mai mare sensibilitate o prezint nsa bobocii de ra.
Aflatoxinele sunt distruse de ctre radiaiile UV, acizi, baze tari, de hipoclorii, de
permanganatul de potasiu, de apa oxigenat, de clor, de ozon, de alcali i sunt uor oxidabile.
Nu sunt solubile n ap,ci n solveni organici, dar acetia nu pot fi folosii pentru
ndeprtarea micotoxinelor, deoarece prin extracie se pierde valoarea alimentar a produsului.
Efectele cancerigene sunt nu numai la nivelul hepatic, ci i la stomac, plmni.
Aflatoxina B1 se poate cupla n vitro cu ADN-ul, provocnd mutaii inreversibile. Intoxicaiile
cu aflatoxine se manifest prin stare hemoragipar, dizenterie, uneori icter; mediul cel mai
favorabil pentru formarea acestora il constituie porumbul si arahidele. Aflatoxinele se gsesc i
n carne, ou, pete, crevei, cu predilecie n diferite organe (la porc n ficat).

10

3.Metode pentru decelarea aflatoxinelor

3.1. Generalitati
Pentru decelarea aflatoxinelor n furaje i n alimente sau n culturi de micete se folosesc
metode fizico-chimice i metode biologice. Primele au avantajul rapiditii de executare i al
sensibilitii ns i dezavantajul unor eventuale confuzii n cazul nerespectrii ntocmai a
tehnicilor de lucru. Metodele biologice sunt mai lente, mai puin selective relevarea uneia sau
alteia dintre aflatoxine, dar mai sigure n ceea ce privete punerea n eviden a efectelor toxice,
chiar dac necesit cantiti mai mari de aflatoxin i o perioad de observaie mai lung.
Metodele fizico-chimice includ pregtirea probei, extragerea, purificarea, separarea
cromatografic a aflatoxinelor, identificarea i interpretarea.
n principiu, prelucrarea o oricrei probe ncepe cu mrunirea i amestecarea uniform a
materialului de cercetat. Mai departe, se face extragerea n aparatul Soxhlet - sau n vase agitate
mecanic (la rece) cu diferite substane extractante: cloroform, alcool etilic, aceton etc.
Purificarea extractului obinut la cald sau la rece se face prin diferite procedee chimice sau pe
coloana cromatografic.
Aflatoxinele aplicate pe plcile cromatografice se separ ntre ele, ct i fa de alte
substane: n cauza vitezei diferite de difuziune n chiselgel. Dupa developarea plcilor, se
observ n lumina ultraviolet nite pete fluorescente la diferite distane Rf. Determinarea
semicantitativ se face prin aprecierea intensitii fluorescenei aflatoxinei standard aplicat pe
aceeai plac ntr-o concentraie cunoscut.

3.2.Surse de contaminare
Micotoxinele pot ptrunde n alimente pe dou ci:

prin contaminare direct

prin contaminare indirect.

Contaminarea direct este atunci cnd mucegaiul crete direct pe substrat i micotoxina se
produce chiar pe substrat. Multe substraturi sunt susceptibile la creterea mucegaiurilor pe durata
11

unor etape de producie, procesare, depozitare sau transport de aceea au potenial de contaminare
direct. Mucegaiurile cresc pe alimente n timpul depozitrii ca de exemplu pe: brnzeturi
maturate.
Contaminarea direct a produselor lactate cu micotoxine poate rezulta din creterea
mucegaiului utilizat n scopul fermentrii sau din creterea accidental a acestuia. Matrie care
sunt cultivate n mod intenionat pe brnzeturi ca i culturi starter, precum specii de Penicillum
pe brnzeturile franceze Roquefort i Camenbert chiar i n condiii sigure de cultivare aceti
fungi sunt capabili s produc micotoxine (i asta datorit contaminrii n mod accidental din
mediul inconjurator).
Contaminarea indirect a alimentelor apare atunci cnd se folosesc ingrediente deja
contaminate n obinerea alimentelor, de exemplu obinerea brnzei, iaurtului, smntnii din
lapte. Acestea pot fi folosite mai departe ca ingrediente petru alte alimente ex: brnz topit,
cacaval, unt.
Produsele procesate sunt cele mai implicate n contaminarea indirect i expunerea la
micotoxine. Expunerea indirect la micotoxine poate rezulta i din consumul de produse de
origine animal ca laptele. Laptele poate fi contaminat cu aflatoxina M1 i M2 ca rezultat al
hrnirii animalelor cu hran contaminat.
Contaminarea indirect cu micotoxine se realizeaz i prin consumul de furaje contaminate
cu mucegaiuri, care produc astfel de substane toxice (mai ales Aspergillus). Cea mai periculoas
micotoxin este aflatoxina, care se elimin n lapte chiar n primele zile dup consumarea
furajelor mucegite. Brnza produs din lapte contaminat poate fi la rndul ei contaminat.
Expunerea la micotoxine ca rezultat al unei contaminri directe poate fi o problem serioas
n arealele tropicale i n regiunile n care conservarea alimentelor se face inadecvat.
Contaminarea indirect, pe de alt parte, este mai mult o problem n arealele unde alimentele
sunt mult procesate, cum este Canada, Europa, Japonia, SUA.

12

3.3.Procedee pentru decelarea aflatoxinelor

a) Pentru decelarea aflatoxinei n alimente i furaje, Frank (1998) amestec (timp de 1
minut) o cantitate de 5-10 g prob uscat i bine mcinat cu 50 ml aceton-ap (30/15 v/v) ntrun aparat de omogenizare. Dup aceea, se adaug 5 ml acetat de plumb 20%, se omogenizeaz
din nou i centrifugheaz. Apoi se preia supernatantul, iar depozitul este supus unei noi
omogenizri cu 50 ml aceton-ap, tot timp de 1 minut. Dup o nou centrifugare, se colecteaz
supernatantul, se amestec cu primul supernatant i se toarn ntr-un filtru printr-o plnie de
separare n care se agit bine cu 20 ml cloroform. Aceast operaie se repet de trei ori. Fazele
cloroformice se colecteaz prin manevrarea robinetului plniei i se trec printr-un filtru cu sulfat
de sodiu. n lichidul astfel filtrat, se introduc perle de sticla i se supune distilrii la o baie de ap
clocotit. Produsul rmas se preia cu puin cloroform i se usuc la o baie de nisip cu temperatura
de 90-100C. nainte de a se ncepe extragerea aflatoxinelor, produsele care conin grsimi se
degreseaz cu eter de petrol n aparatul Soxhlet. ntruct n produsele granulate (cereale, furaje
grosiere etc.) aflatoxinele nu sunt repartizate uniform, se macin circa 1 kg din acestea, se
amestec foarte bine i din acest amestec se preia proba de 5-10 g din care se extrage aflatoxina.
Produselor lichide li se adaug acetona, n aa fel nct volumul final de aceton-ap (35/15) s
includ i apa iniial. Urmeaz cromatografia n strat subire de plci de chiselgel cu grosimea
de 0,25 mm, pregtite dup Stahl (1967) sau gata cumprate (DC-Fertigplatten Merck, Kieselgel
- 0,25 mm). Proba se cerceteaz n prezena a dou standarde (unul intern i altul extern) la
lumina ultraviolet de 366 nm, folosindu-se pentru o proba 8 metode pentru developare. Proba
care n toate cele 8 cazuri a dat un rezultat asemntor cu standardul se consider pozitiv pentru aflatoxin
b) Pentru examinarea laptelui-praf n ce privete coninutul de aflatoxin M1, se
procedeaz, dupa Neumann-Kleinpaul (1972) astfel: se introduc 50 g produs ntr-un balon
Erlenmmeyer cu slif, se adaug 25ml ap distilat, 25 g chiselgur i 250 ml cloroform i se agit
mecanic timp de 30 minute.Dup aceea se filtreaz amestecul (la nevoie cu ajutorul pompei de
vid) n plnie Buchner prin hrtie de filtru acoperit cu un strat de chiselgur cu grosime de 5 mm.
Urmeaz cromatografierea unei cantiti de 30 ml filtrat printr-o coloan cu dimensiunile de
22x300 mm, prevzut jos cu un robinet. Iniial, se introduc n coloan 5 g sulfat de sodiu
anhidru i se umple pe jumtate cu cloroform. Apoi se introduc 10 g chiselgel inactivat 2 ore la

13

1050C cldur uscat i cu granulele de 0,05-0,2 mm i se spal pereii coloanei cu cloroform. Se

amestec cu o baghet de sticl i se las s se depun. Dup aceea se adaug nc 15 g sulfat de
sodiu anhidru i se scurge cloroformul pn ce nc mai acoper coninutul superior al coloanei.
n acest moment, se d drumul extractului cloroformic s se scurg repede. Aflatoxinele nu se
extrag cu acest cloroform, ci rmn nc pe coloan. Mai departe, se face o splare cu 150 ml nhexan, i cu 150 ml dietileter nc o splare. n timpul acestor operaiuni, este necesar s rmn
nc acoperit coninutul superior al coloanei. n cele din urm, se elueaz aflatoxinele cu 150 ml
metanol-cloroform (3/97), lasndu-se s se scurg complet ntr-un vas cu capacitatea de 250 ml.
Eluatul se evapor aproape complet pe o baie de ap, apoi se preia cu cloroform, ntr-un vas de
100 ml i se supune evaporrii pn la uscare. Rezidul se preia cu 1 ml benzol acetonitril 98/2
prin agitare puternic. Din aceast ultim soluie, se iau 25 ml cu o sering Hamilton i se aplic
ntr-un punct pe o plac de sticl acoperit cu un strat de chiselgel cu grosimea de 25 microni i
inactivat timp de 1 or la 1050C. Placa se developeaz ntr-un vas de sticl cu cloroform-aceton
90/10. Pentru o extincie de 12 cm este necesar un timp de expunere de 30 minute. Dup aceea se
evapora lichidul i placa se examineaz n lumina ultraviolet. Fluorescena se apreciaz
comparativ un standard extern de aflatoxin pur i cu un standard intern din aflatoxin pur i
extractul de cercetat. Pentru relevarea culorii, placa se stropete cu acid sulfuric semiconcentrat.
c) Pentru examinarea laptelui proaspt, Jacobson i col. (1971) ndeprteaz n prealabil
caseina cu metanol. Filtratul prin chiselgur se aduce cu soluie 4% de clorur de sodiu la o
concentraie de 5% metanol i se degreseaz cu hexan. Aflatoxinele se pot, dup aceea, extrage
cu cloroform. Extractul se usuc, se dizolv n benzol-hexan 1/1 i prin cromatografie pe coloan
se separ aflatoxina M1 de B1 cu o soluie apoas de clorur de calciu. Mai departe, aflatoxina
B1 se elueaz cu benzol-aceton 98/2, iar M1 cu benzol-cloroform 70/30. n cele din urm,
eluatele se usuc, se supun cromatografiei, iar plcile se apreciaz semnificativ (vizual) n
ultraviolete comparativ cu standarde.
d) Pentru analiza aflatoxinei din produsele de origine vegetal sau animal, Preda (1972)
propune dou variante tehnice n funcie de gradul de dotare a laboratorului destinat.
1) Se introduc 50 g proba, bine mrunit, ntr-un flacon conic mpreun cu 5 g
chiselgur i cu 150 eter de petrol. Dup o agitare, de 15-30 minute, se filtreaz la tromp

14

printr-un filtru G5 i se spal de dou ori, cu cte 50 ml eter de petrol. Se aspir la uscare
complet. Rezidul se trece ntr-un cilindru, cu slif de 250 ml i se extrage prin filtrare
puternic timp de 15 minute cu un amestec de cloroform/metanol 1:1. Extracia se face la
temperatura camerei sau dup nclzirea cilindrului, pn la 400 C. Extractul metanolcloroformic se filtreaz i se reia cu 100 ml dintr-un amestec de eter de petrol-metanol
(1:1) i se introduce ntr-o plnie de separaie, n care se pun n prealabil 5 ml ap
distilat, care este necesar separrii fazelor. Mai departe, faza etanolic se trece ntr-o
alt plnie de separaie, n care se face o nou extracie cu 50 ml eter de petrol. Faza
metanolic se trece ntr-o a treia plnie de separaie i se adaug 70 ml ap i circa 2 g
clorur de sodiu (sprgtor de emulsie), soluia obinut este tratat cu cloroform i se
extrage, de 4 ori, cu cte 25 ml de fiecare dat. Extractul cloroformic conine aflatoxinele
care, n faza urmtoare, se concentreaz sec, iar pentru cromatografiere se dizolv rezidul
n 1 ml cloroform.
2) Se mrunete bine o cantitate de 50 g de material de analizat, se introduce ntrun flacon conic cu dop lefuit sau ntr-un cilindru gradat de 250 ml, peste care se adaug
un amestec compus din 30% aceton i 70% ap i se agit foarte bine 30 de minute. Se
filtreaz diluia acetonic i se supune purificrii i extraciei. n filtrat, se adaug 10-15 g
chiselgur sau celit 545 i se agit bine pentru dispersare pe o coloan cromatografic,
prevazut la partea inferioar cu un robinet, se introduce un fragment de vat, peste care
se las filtratul. Vasul n care a fost filtratul se spal cu hexan, i se adaug lichidul de
splare peste fraciunea filtrat, fr a se lsa s se usuce chiselgurul.n continuare, se
adaug circa 200 ml hexan pentru ndeprtarea impuritilor. Dup eluarea celor 200 ml
hexan, se adaug un amestec de hexan-cloroform (1:1) care antreneaz aflatoxinele. n tot
timpul lucrului, se are grij ca chiselgurul sau celita s nu se usuce, iar fraciunea hexancloroform s fie culeas imediat dup adugarea solventului. Eluarea se face cu 150-200
ml solvent care, n cele din urm, se concentreaz pn la obinerea unui rezidu.Acesta se
dizolv n 1 sau 2 ml cloroform i este folosit pentru cromatografiere, n vederea creia se
folosesc plci cu strat de silicagel "G" n grosime de 250 microni i activate timp de 30
minute la 1100C. Din rezidul dizolvat n cloroform (n cazul ambelor metode) se aplic
spoturi sub forma circular sau liniar la 4 cm de baza plcii i n cantiti bine

15

determinate. Alturi, se aplic soluiile standard de comparare. Developarea se face cu

unul dintre sistemele:
- cloroform - metanol (9:1);
- cloroform - metanol (9:2);
- cloroform - acetona (9:1).
Este de recomandat ca placa s fie de peste 12 cm nlime pentru nivelul de irigare s fie
peste 10 cm. n timpul cromatografierii, placa trebuie s fie expus luminii ct mai puin, la
temperatura camerei fie de 23-250C. Relevarea spoturilor se face cu ajutorul luminii ultraviolete,
filtrat prin filtru Wodd. Dup aspectul fluorescenei i al Rf-ului, se face interpretarea
cromatografic n funcie de cantitatea aplicat de standard i de cantitatea de material luat n
lucru. Metodele biologice pentru decelarea aflatoxinelor folosesc embrionul de gin, bobocul de
ra, culturile celulare, unele animale inferioare, bacterii, ciuperci, alge, etc. Utilizarea bobocului
de ra const n punerea n eviden a gradului de proliferare a canaliculelor biliare, dup
administrarea materialului suspect de a conine aflatoxine la bobocii de ra n vrst de o zi. n
cea de a 8-a zi, se sacrific bobocii de ra rmai n via i se noteaz gradul de proliferare a
celulelor canaliculelor biliare n preparatele histologice din ficat. Tot pe bobocul de ra se poate
cerceta gradul de toxicitate al aflatoxinelor prin administrarea oral a materialului suspect i
stabilirea numrului de mori dup 7 zile. Printr-o alt metod, materialul de cercetat se apreciaz
ca foarte toxic dac bobocii de ra, care au consumat 80 grame furaj suspect, mor n interval de
7 zile cu leziuni caracteristice. Dac bobocii de ra supravieuiesc dup 7 zile, ns prezint la
autopsie leziuni hepatice, produsul furajer testat este apreciat ca uor toxic. n felul acesta,
aflatoxina B1 poate fi decelat pn la o concentratie de 1/1 000 000.

3.4.Metode de combatere
Controlul creterii mucegaiurilor i al producerii micotoxinelor n produsele alimentare i furaje
se poate realiza prin:

16

conditionarea mediului de depozitare;

folosirea agenilor antifungici;
utilizarea unor factori naturali de rezisten.
nclzirea laptelui, de exemplu pasteurizarea sau sterilizarea nu distruge aflatoxina M1
termorezistent din lapte. Datele potrivit crora aflatoxina M1 s- ar distruge n cazul laptelui rece
sau ngheat nu sunt relevante i nici concluzive. Existena aflatoxinei M1 n lapte denot faptul
c laptele este contaminat cu aflatoxina B1.
Ct privete ndepartarea micotoxinelor din cereale, aceastea pot fi parial ndeprtate prin trierea
la decorticare sau dup decorticare, dar cel mai bine este s se efectueze prevenirea contaminrii
alimentelor i depozitarea lor n condiii igienice.

4.Efecte asupra animalelor i omului

Consecinele consumului de alimente contaminate cu aflatoxin asupra sntii omului
sunt estimate indirect pe baza efectului observat la animale. Ingestia n timp scurt a unei cantiti
mari de aflatoxine duce la apariia unei intoxicaii acute. Aflatoxicoza acut se poate manifesta
prin hemoragii, insuficien hepatic acut i chiar moartea. Doza mortal difer de la animal la
animal i depinde de muli factori cum ar fi cantitatea de aflatoxin ingerat, vrsta animalului,
starea de sntate i starea de nutriie.
Consumul unei cantiti mai mici, dar timp mai ndelungat, duce la apariia intoxicaiei
cronice. Efectele i simptomele sunt n general greu de pus n eviden att din cauza intensitii
reduse, dar mai ales din cauza caracterului lor nespecific. Aflatoxicoza cronic trebuie suspectat
cnd n lipsa altor cauze evidente, animalele au tulburri digestive persistente nsoite de cretere
anevoioas n greutate. Consumul de alimente contaminate cu micotoxine poate avea urmri
severe, cum ar fi ciroza i carcinomul hepatic o form particular de boal canceroas a ficatului.
Studiile epidemiologice efectuate n India i n unele ri din Africa au artat o asociere ntre
consumul de alimente contaminate cu aflatoxine i creterea incidenei cancerului de ficat.
Micotoxinele pot ajunge n organismul uman nu numai prin consumul de cereale sau
17

produse alimentare preparate din cereale sau semine contaminate ci i prin consumul de lapte,
carne sau ou provenite de la animale hrnite cu furaje contaminate. De la descoperirea
aflatoxinelor, s-a stabilit o gam ntreag de efecte nocive ale acestor toxine asupra celor mai
diferii reprezentani, mai mult sau mai puin evoluai, ai faunei i florei din natura.
Asemenea efecte, care au legtur cu patologia animalelor domestice, depind de
fraciunea toxic, specia, ras, vrsta animalelor, calea de ptrundere n organism i ali factori.
Bosenberg, (1992) relateaz c aciunea nociv asupra organismelor evaluate filogenetic se
manifest prin modificri hepatice de tip acut, ciroz i carcinoame hepatice, efecte teratogene i
genetice.
Gedek (1970) a cercetat pe cobai aciunea nociv a aflatoxinei asupra ficatului. n acest
scop, a administrat per os (cu sonda stomacal) diferite cantiti de aflatoxin B1, B2, G1 i G2
ct i rubratoxina i diacetoxiscirpenol la cobai cu greutatea de 400 grame. Fiecare dintre dozele
de micotoxin pur a fost dizolvat, iniial n cte 0,1 ml dimetilformamid, la care s-a adugat
ap distilat pn la 1 ml. Dozele au fost micorate (pe diferite serii de animale de experien)
pn ce n ficatul cobailor sacrificai dup 24 ore nu s-au mai observat modificri necrotice.
Aceste doze minime au fost: 6,25 g pentru aflatoxina B1, 25 pentru G1 i pentru
diacetoxiscirpenol, 100 g pentru aflatoxina B1 i 800 g pentru aflatoxina G1 i rubratoxina B.
n felul acesta, ntre diferitele micotoxine studiate s-au stabilit urmtorii coeficieni de
hepatotoxicitate: 11 pentru aflatoxina B1; 16 pentru aflatoxina B2; 4 pentru aflatoxina G1 i
diacetoxiscirpenol i 128 pentru aflatoxina G2 i rubratoxina B. Se remarc diferene ntre aceti
coeficieni de toxicitate i cei stabilii de ali autori pentru ficatul bobocilor de ra i anume: 1
pentru aflatoxina B1; 4,7 pentru aflatoxina B2; 2,2 pentru aflatoxina G1 i 9,5 pentru aflatoxina
G2.Pe ambele teste (bobocii de ra i cobai) este evident o mai mare hepatotoxicitate a
aflatoxinei B1 n raport cu alte micotoxine.
ntruct n practic, micotoxicozele cronice au o mare nsemntate, s-a cercetat i efectul
hepatotoxic al aflatoxinei administrat la cobai timp de 56 zile la rnd. n acest scop, 4 grupe de
cte 10 cobai au primit zilnic 6,25-50 g aflatoxina B1. Cercetrile histologice i hematologice,
efectuate la cobaii mori ntre timp sau sacrificai dup cele 56 zile, au relevat grave modificri
ale ficatului i creterea bilirubinei n serul sanguin.
18

Shoental (1967) stabilete urmtoarea clasificare a animalelor n funcie de doza de

aflatoxina care conduce la o intoxicare acut:
- specii de animale foarte sensibile (DL50 1 mg/kg greutate corporal sau mai puin) bobocul de ra, pstrvul, cobaiul, iepurele, cinele, obolanul nou-nscut, puiul de
curc;
- specii sensibile (DL50 de 10 ori mai mare) - porcul, obolanul, maimua, vielul, fazanul,
dihorul alb domestic, hamsterul auriu, bovinele adulte; nurca, prepelia, somnul argintiu;
- specii rezistente (suporta doze relativ, mari fr semne clinice) - oarecele, oaia. Dup
date sintetizate de Behringer (1972), la animalele domestice au fost puse n eviden
urmtoarele tipuri de modificri hepatice:
- modificri de tip acut la taurine, porcine, ovine, cine, obolan, cobai, psri, pstrv,
maimu;
- ciroza hepatic la taurine, obolan, psri, maimua;
- tumori cronice la obolan, psri i maimua.
Aciunea de ncetinire a creterii animalelor tinere se explic prin aceea c toxina
ptrunde n celul i mai departe n nucleu, unde se combin cu ADN-ul i inhib sinteza ARNpolimerazei. n felul acesta, este diminuat sinteza ADN-ului i activitatea ARN-ului mesager.
Urmarea este o puternic reducere a ratei sintezei proteice.
Trebuie subliniat faptul c efectele nocive ale aflatoxinelor se datoresc moleculei de
aflatoxin care, fiind ea nsi toxic, acioneaz direct asupra organismului i nu ca o consecin
a blocrii enzimelor, cum se ntmpl n cazul altor substane toxice (Reiss, 1969).
Dup date sintetizate de Jacquet 1972, ncetinirea creterii consecutive a intoxicaiei
aflatoxinice a fost dovedit pentru bobocii de ra, puii de curc, bobocii de gsc, purcei, viei i
unele animale de laborator.
Efectul cancerigen al aflatoxinelor a fost demonstrat pentru pstrv, hamster, obolan,
ra, pui de gin, porci, etc. Autorul remarc asemenea efecte ale aflatoxinelor n contrast cu
19

alte substane elaborate de micete i care stimuleaz creterea (antibioticele) sau care au,
dimpotriv, aciune anticanceroas (mitomicia C i actinomicina). De remarcat c aceste dou
antibiotice, la care se adaug cloramfenicolul, au, ca i aflatoxina, efecte imunosupresive. La
celulele animale, aflatoxinele provoac fragmentarea nucleilor, diminuarea frecvenei mitozelor
i anomalii cromozomiale. Asupra unor bacterii (B. subtilis, B. brevis) aflatoxinele au efecte
inhibante n ce privete multiplicarea, n timp ce alte bacterii (Flavobacterium aurantaceum) au
capacitatea de a neutraliza aflatoxina.

5.Concluzii
Laptele i produsele lactate pot fi contaminate cu aflatoxine. Aflatoxinele sunt un grup de
compui chimici similari metaboliilor toxici fungici (micotoxine) produi de anumite
mucegaiuri din genul Aspergillus, n cretere n materiile prime alimentare.
Aflatoxinele sunt alctuite din aproximativ 20 compui chimici aparinnd unui grup numit
difurano-cumarine dar numai 4 se gsesc n mod natural n alimente. Acestea sunt aflatoxinele B1
B2, G1 i G2. Aflatoxina B1 este cea mai frecvent ntlnit n alimente i cea mai toxic. Atunci
cnd bovinele i alte animale aflate n perioada de lactaie ingereaz furaje contaminate se pot
forma metabolii toxici care pot fi prezeni n lapte. Aceti metabolii hidroxilai sunt denumii
aflatoxina M1 i M2 i sunt cei mai importani contaminani n produsele lactate.
Aflatoxinele sunt compui destul de stabili i pot supravieui la temperaturi relativ ridicate cu o
mic degradare. Stabilitatea lor termic este influenat de ali factori cum ar fi nivelul de
umiditate i pH-ul , dar procesele de ncalzire sau gtire nu pot fi invocate pentru a distruge
aflatoxinele. Stabilitatea aflatoxinei M1 n procesele de fermentaie a laptelui a fost de asemenea
studiat i, dei apar pierderi semnificative, cantii semnificative de toxine au rmas n brnz
i iaurt.
ncepnd din 1962 s-a constatat c n cazul n care se administreaz vacilor furaje cu coninut
mare n aflatoxine, se determin prezena n lapte a unui metabolit al aflatoxinei B1, cunoscut la
nceput sub denumirea de milktoxin i denumit n prezent aflatoxina M 1.

20

Kiermeier i colaboratorii au analizat 165 de eantioane de lapte i au constatat c 14% din

acestea aveau un coninut n aflatoxina M 1,superioar valorii de 0,05 g/l. n numeroase ri s-a
pus n eviden prezena aflatoxinei M 1 n lapte.
Cercetrile efectuate asupra laptelui praf au decelat un numr mare de mucegaiuri n cazul n
care depozitarea s-a fcut n condiii necorespunztoare. Moreau a pus n eviden urmtoarele
specii:Aspergillus glaucus, Penicillium stoloniferum, Penicillium viridicatum, Cladosporium
cladosporioides.
n cazul brnzeturilor se poate nregistra prezena micotoxinelor datorit att mucegaiurilor din
mediul ambiant, ct i celor utilizate n tehnologia de fabricare a brnzeturilor.Valori maxime sau ntalnit de obicei la sortimentele pstrate timp ndelungat, cu grad avansat de proteoliz.
Aflatoxinele pot fi prezente i n brnzeturile topite, dar cu o frecven mult mai mic dect la
celelalte tipuri.

21

Bibliografie:

http://ro.wikipedia.org/wiki/Cornul_secarei
http://www.safefoodonline.com/Uploads/Aflatoxin_Group.pdf;
http://www.ecomagazin.ro/aflatoxine-si-aflatoxicoze/
http://www.forum.santamia.ro/showthread.php/aflatoxina-un-compus-cancerigen-

alimentatia-noastr-247.html?s=9e3dcf310b79d2aade03c5a78a8edd3a&
http://facultate.regielive.ro/referate/merceologie/referat_expertiza_merceologica_aflatoxi

na-32676.html
http://www.madr.ro/pages/cercetare/contaminare_porumb_cu_aflatoxine
http://www.unitbv.ro/faculties/medicina/
CLEMANSA TOFAN, Microbiologie alimentar, Editura AGIR, Bucureti
http://www.madr.ro/pages/cercetare/contaminare_porumb_cu_aflatoxine.pdf

22